автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.10, диссертация на тему:Свойства природных компонентов пчеловодства в процессах бактерицидной реакционности пчел, в технологиях косметического производства

1 .Введение 2. Обзор литературы.

2. 1. Общие представления по этологии пчел. 2.2. Развитие пчеловодства в Пермской области. 2.3 . Некоторые аспекты микробиологического состояния пчелиной семьи.

2.4. Несколько слов о наиболее часто встречающихся бактериальных болезнях медоносных пчел.

2.5. Микрофлора здоровой пчелиной семьи . (видовые названия микроорганизмов даны согласно оригиналам)

2.6. Почему болеют пчелы.

2.7. Хитозан и его значение

2.8. Источники и способы получения хитозана

2.9. Основные этапы получения хитозана

2.10. Основные источники хитозана

2.11. Пчела как потенциальный источник хитозана

З.Экспериментальная часть

3.1 .Объекты и методы исследования.

3.1.1. Объекты исследования.

3.1.2. Методы исследования.

3.1.2.1. Отбор проб и смывов для микробиологического анализа.

3.1.2.2. Подготовка к анализу.

3.1.2.3. Идентификация микрофлоры. 3.1.2.3.1. Питательные диагностические среды. 3.1.2.3 ^.Идентификация микроорганизмов.

3.1.2.4. Определение чувствительности микроорганизмов к бактерицидным веществам.

3.1.2.5.Получение хитозана из пчел 3.1.2.5.1. Сырье

3.1.2.5.2 Методы получения хитозана.

3.1.2.6. Определение влажности

3.1.2.7. Определение массовой доли золы

3.1.2.9. Определение динамической вязкости

3.1.2.10. Кондуктометрическое определение степени деацетилирования хитозана

3.1.2.11. Лиофильная сушка хитозана

3.1.2.12. Статистическая обработка результатов 3.2. Результаты и обсуждение.

3.2.1. Изучение особенности годичного цикла жизни пчелиной семьи.

3.2.2. Происхождение и роль микрофлоры здоровой пчелиной семьи.

3.2.3. Микрофлора ульев здоровой пчелиной семьи.

3.2.4. Влияние гигиенических условий жилища и концентрации углекислого газа в гнезде на семьи пчел.

3.2.5. Защитные свойства внешних покровов пчел от патогенной микрофлоры.

3.2.6. Получение хитозана из подмора пчел.

3.2.6.1 .Характеристика подмора пчел.

3.2.6.2 Депротеинирование 3.2.6.3. Деацетилирование

3.2.7.Технология переработки подмора пчел.

3.2.8.Технология введения пчелозана (хитозана) в зубные пасты.

3.2.9.Клинические испытания зубной пасты «Пчелка».

4.Выводы

Удовлетворение потребительского спроса на косметическую продукцию в условиях рыночной экономики во многом зависит от лечебно-профилактических свойств , качества , внешнего вида и оформления предлагаемых изделий.

Неотъемлемой частью косметической продукции являются биологически активные вещества (БАВ) ,основным источником которых являются продукты сельского хозяйства и животноводства, различные природные соединения. Задача технолога при разработке новых косметических изделий состоит в правильном выборе спектра действия БАВ , способа получения последних, всесторонней оценки действия биологически активных веществ на здоровье человека и подбора необходимого состава компонентов изделия , обладающих заданными свойствами.

Вопросы получения натуральных БАВ в нашей стране и за рубежом занимаются давно , однако и на сегоднишний день остается очень много спорных вопросов. В частности , при создании лечебно-профилактической косметики введение в рецептуры последних БАВ , обладающих бактерицидным действием. Создание косметики этого направления на таких лечебных ,синтетических препаратах как низорал , триклозан и др. вызывает негативную реакцию как со стороны медиков , так и со стороны физиологов. Поиск натуральных БАВ, обладающих бактерицидным и бактериостатическим действием в настоящее время вопрос не терпящий отлагательств.

О бактерицидных и бактериостатических свойствах продуктов пчеловодства известно многое : в пищевой , косметической и медицинской промышленности широко используются в качестве компонентов и пищевых добавок такие составляющие как мед, прополис , маточное молочко , перга и.т.д. Поиск принципиально новых природных компонентов пчеловодства предотвращающих развитие микрофлоры , в частности патогенной , необходим и актуален.

Невозможно выделение и идентификация новых составляющих пчеловодства с полезными свойствами , без всестороннего изучения последних на бактерицидную реакционность пчелиной семей.

Известно, что в пчелином ульи поддерживается постоянная температура , равная 30-34°С (в центре клуба). Несмотря на то , что эта температура чрезвычайно благоприятна для размножения микроорганизмов , улей остается относительно "стерильным" по отношению к пчелиной семье. Наряду с этим в литературе есть сведения свидетельствующие о наличии микроорганизмов в улье. Так , В.Т. Череповым выделено со стенок ульев здоровых пчелиных семей 36 видов микроорганизмов , среди которых обнаружены бактерии, актиномицеты , дрожжи и грибы. Устойчивость пчелиной семьи к данной микрофлоре объясняется авторами резистентностью первых. Однако , резкая смена окружающих условий обитания пчелиной семьи , в частности атмосферных , внутри улья - повышенное содержание влажности , концентрации углекислого газа , температуры , дает основание говорить о более многостороннем механизме защиты. Поиск таких механизмов защиты и адаптация их по отношению к человеку весьма своевременен и актуален. Наше внимание привлекли хитиновые покровы насекомых и те сведения которые имеются в литературе о бактерицидных и бактериостатических свойствах последних.

Выделение хитина из подмора пчел, количество которого составляет десятки тонн в год), сосредотачивающееся на крупных общественных пасеках, и являющимся отходом пчеловодства (в настоящее время утилизирующийся сжиганием) перспективно как сточки зрения экономической , так и с экологической.

Цель и задачи исследования.

Целью исследования являлось: Изучение бактерицидной реакционности пчелиных семей к патогенной микрофлоре улья здоровой пчелиной семьи.

Выделение активных составляющих, обладающих бактерицидными свойствами из подмора пчел.

Разработка технологии косметических изделий с использованием хитозана (пчелозана ) , в частности лечебно-профилактических зубных паст.

Научная новизна.

Проведено изучение микрофлоры здоровых пчелиных семей на пасеках пчеловодческих хозяйств Пермской области. Изучение вопросов роста и развития семей пчел и состояния микробной обсемененности проводили в условиях естественного сбора пчелами нектара и цветочной пыльцы. Установлено , что микробная обсемененность особей носит эпифитный характер , определяющийся местом обитания пчел , медоносами. Показано, что роль водоемов в происхождении микрофлоры пчел второстепенна , с прекращением поступления корма из вне , в течение осени и зимы происходит в пчелиных семьях значительное снижение количественного и видового состава микроорганизмов. Гигиеническое состояние ульев зависит от сезонных периодов жизни пчел. Впервые обнаружена патогенная микрофлора на внутренней поверхности ульев , в которых обитают здоровые пчелиные семьи , как в летний так и в зимний период при зимовке , как в естественных условиях, так и в условиях зимовника. Установолена реакционность пчел к патогенной микрофлоре за счет хитиновых покровов насекомых. Показана бактерицидные свойства хитозана , полученного из подмора пчел , названого пчелозаном, изучены некоторые аспекты применения последнего в промышленности.

Практическая значимость работы.

Проведенные исследования являются основой для оценки бактерицидных и бактериостатических свойств природных компонентов пчеловодства.

Предложен метод получения хитозана (пчелозана ) из подмора пчел.

Показана взаимозаменяемость хитозана ракообразных и пчелозана , полученного из подмора пчел. Дана оценка бактерицидным и бактериостатическим свойствам нового продукта.

Разработана технология введения хитозана (пчелозана) в косметическое производство , в частности в производство зубных паст. Определено лечебно-профилактическое действие зубных паст с пчелозаном , как биологически активной добавки.

Предложена новая сырьевая база производства хитина (хитозана ) из отходов пчеловодства , позволяющая расширить производство хитозана в Российской Федерации.

2.0бзор литературы

4 .Выводы

1. Исследование 70 здоровых пчелиных семей среднерусской породы пчел , Пермской области на микробиологическую обсемененность показало , что микрофлора здоровых семей , за исключением адаптированных бактерий, имеет эпифитное происхождение. Роль водоемов в происхождении микрофлоры пчел второстепенная. С прекращением поступления корма извне , в течение осени и зимы, в пчелиных семьях происходит значительное снижение количественного и видового состава микроорганизмов.

2.Показано,что гигиеническое состояние ульев зависит от сезонного периода жизни пчел. Впервые обнаружена патогенная микрофлора на внутренней поверхности ульев , в которых обитают здоровые пчелиные семьи, как в летний, так и в зимний период при зимовке , как в естественных условиях, так и в условиях зимовника.

З.Установлена реакционность пчел к патогенней микрофлоре за счет хитиновых покровов насекомых. Показаня^бактерицидные и бактериостатические свойства хитозана , полученного из подмора пчел , названого «пчелозаном». Установлена идентичность свойств пчелозана и хитозана, полученного из ракообразных.

4. Разработана технология выделения хитина из подмора пчел и перевода последнего в хитозан-пчелозан.

5.Разработана технология зубных паст на диоксиде кремния с введением в ее состав пчелозана. Обоснована доза введения последнего в количестве 0,3%.

6.На основании исследований проведенных совместно с кафедрой профилактики стоматологических заболеваний Московского медицинского стоматологического института опытно-промышленных образов зубной пасты , было показано , что зубная паста , содержащая пчелозан обладает более выраженными очищающими и противовоспалительными свойствами по сравнению с контрольным образцом и может быть рекомендована к использованию в качестве очищающего и противовоспалительного средства.

Заключение.

Результаты испытаний показали , что образцы экспериментальной зубной пасты представляют собой гомогенную белую массу со сладковатым вкусом и запахом мяты.

При определении очищающих свойств обнаружено , что профилактический образец зубной пасты , содержащий хитозан ( пчелозан) , обладает более выраженным очищающим действием по сравнению с соответствующим контрольным образцом. Очищающий эффект для профилактического образца за два месяца по индексу РНР составил - 42,3% , а для контрольного образца - 24,1%.

Изучение противовоспалительных свойств зубной пасты продемострировало , что при использовании профилактического образца воспалительные явления в тканях пародонта по индексу гингивита снизились на 39,2%, тогда как при использовании контрольного образца этот показатель уменьшился лишь на 17,2 %.

Изменеия показателей индекса CP1TN также выявило положительное влияние исследуемой пасты на состояние тканей пародонта. При использовании профилактического образца зубной пасты наблюдалось увеличение числа здоровых секстантов до 3,04±0,24 , и выраженное уменьшение количества секстантов с кровоточивостью на 22,2%. таким образом ,данное исследование выявило, что зубная паста , содержащая хитозан (пчелозан) , обладает выраженными очищающими и противовоспалительными свойствами по сравнению с контрольным образцом и может быть рекомендована к использованию в качестве очищающего и профилактического средства.

1. Албулов А.И., Симонова Л.И. и др. Перспективы применения хитозана в косметике // Новые перспективы и исследования хитина и хитозана Материалы 5-ой конф. -М,ВНИРО, 1999.-е. 117-118.

2. Албулов А.И. , Комаров Б.А. ,Самуйленко А.Я. Разработка технологии получения натриевой соли сукцината хитозана // Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана. Материалы 5-ой конфер. —, ВНИРО Д999,-с.7-8.

3. Аветисян Г.А. Газовый режим в гнезде медоносных пчел в период зимнего покоя // Доклады АН СССР ,нов. Серия 69 1949 , №5 ,с 687-690.

4. Актуганов Г.Э., Мелентьев А.И., Усанов Н.Г. Особенности продукции комплекса хитинолитических ферментов в периодической культуре Вас. Sp. 739 // Биотехнология, 2001, № 3, стр. 25-33

5. Алексеенко Ф.М. ,Ревенюк В.А.,Черурко М.А. Справочник по болезням и вредителям пчел //К.,Урожай,1991,256с.

6. Алпатов В.В. Породы медоносной пчелы .// М.изд. МОИП, 1948.

7. Антонов Б.И., Борисова В.В. и др. Лабораторные исследования ветеренарии :Бактериальные инфекции справочник //М:Агропромиздат ,1986 ,с.552.

8. Белоусов Ю.Пасека.И гнилецы отступят, //http://www.vsp.ru/178/179-14-l.htm,2000.

9. Билаш Г.Д., Кривцов Н.И. Разводите пчел. Профилактика и борьба с болезнями пчел //http://zooclub.farpost.ru/chlen/nasek/34.htm.,2000.

10. Варламов В.П., Стояченко И.А. Ферментативный гидролиз хитозана // Материалы 3-ей Всесоюз. конфер.,-М,ВНИРО,1992, -с.56-63.

11. Вихорева Г.А., Горбачева И.Н., Гальбрайх JI.C. Синтез и свойства водорастворимых производных хитина// Химические волокна, 1999, т.4, стр. 25-29

12. Воротченко М.А., Терещенко А.П., Злочевский Ф.А. Биопереработка свиного навоза- основа получения хитина и хитозана // Аграрная Россия, 2000, № 5, стр. 57-59

13. Гайдар В.А., Гинзбург А.А., Пилипенко В.П. Температура клуба пчел зимой., //Пчеловодство ,10,1993 , 4-6.

14. Егоров Н.С. под ред. Руководство к практическим занятиям по микробиологии.,// МГУ , 1983,213с.

15. Блинов Н.П., Ананьева Е.П., Яскович Г.А. Сорбционная активность зкзогликанов по отношению к инам тяжелых металлов // Прикладная биохимия и микробиология , 1999, т. 35, № 2, стр. 190-193

16. Жоголев К.Д., Никитин В.Ю., Цыган В.Н. Перспективы клинического применения иммуномодулирующих препаратов на основе хитозана // Медицинская иммунология, 2001, т.З, № 2, стр. 316-317

17. Зюман Б.В. Почему болеют пчелы? // Пчеловодство ,4,1993 ,24-25.

18. Жеребкин М.В. О некоторых фихзиологических изменениях в организме медоносных пчел при подготовке их к зиме .//Уч.записки ,НИИП ,1979 ,№ 20, с 1-22.

19. Жук Е.Г. Пчелы и их продукты в экологическом мониторинге. //Пчеловодство , 1995 .,№1, 12-15.

20. Ильина А.В., Варламов В.П., Мелентьев А.И., Актуганов Г.Е. Деполимеризация хитозана хитинолитическим комплексом бактерии рода Вас. Sp. 739 // Прикладная биохимия и микроб., 2001, т.2001, № 2, стр. 160163

21. Канаев Г.П. Утепление и вентиляция зимой .// Пчеловодство ,3,1999,45-47.

22. Клочко Р.Т. Аксолицол новый препарат для борьбы с аскосферозом // Пчеловодство, 1993 ,№10 ,с.12.

23. Кочкина З.М., Чирков С.Н. Влияние производных хитозана на развитие фаговой инфекции в культуре В. thuringiensis // Микробиология, 2000, т. 69, №2, стр. 266-269

24. Кожевников Г.А.,Иванов И.К. Морфология медоносных пчел различных регионов./ЯТчеловодство , 1997.,№2,15-18.

25. Коробов Н.В. В Пермской области дела идут хорошо. //Пчеловодство, 1995, № 3, стр. 7-8.

26. Кривцов Н.И. Генетические основы и перспективы селекции пчел .//Пчеловодство,3,1995,10-12.

27. Крюкова Н.,Крюков Б.Лечение европейского гнильца травами // Пчеловодство ,1998 ,№2,с.27-29

28. Клочко Р.Т. Лекарственные растения для лечения пчел // Пчеловодство ,1997 ,№4,с.60-65.

29. Мадебейкин И.Н. Две зимовки .//Пчеловодство, 11,1989,12-13.

30. Мачнев А.Н., Яременко Н.А.,Новое в борьбе с болезнями пчел, http://www.beekeeping.orc.ru/ Articles/ п 199 53.htm, 2000.

31. Навашин С.М.,Фомина И.П. Рациональная антибиотикотерапия. // М,Медицина, 1982,с 345.

32. Назарова Е.И. Почему болеют пчелы? // Пчеловодство , 1991, № 8, стр. 46-49.

33. Немцев С.В., Ильина А.В., Шинкарев С.М., Албулов А.И., Варламов В.П. Получение низкомолекулярного водорастворимого хитозана // Биотехнология, 2001, № 5, стр. 237- 240

34. Нудьга Л.А., Петрова В.А., Бенькович А.Д., Петропавловский Г.А. Сравнительная реакционная способность целлюлозы, хитозана и хитин-глюканового комплекса в реакции сульфоэтилирования // Журнал прикл. Химии, 2001, т. 74, № 1, Стр. 138-142

35. Определитель бактерий Берджи.под ред. Дж. Хоулта , М, Мир,1998,1т.,432с.

36. Определитель бактерий Берджи.под ред. Дж. Хоулта , М, Мир,1998,2т.,362с.

37. Папичев A. (A.Papichev ) Какие пчелы лучше? // http:// pchelovodstvo.boom.ru.,2000.

38. Побоженский Н.К.Как живут пчелы зимой .,// Пчеловодство, 1991, № 8, стр. 15-18

39. Петропавловский Г.А., Пазухина Г.А., Овчинников И.В., Петрова В.А., Нудьга JI.A. Химический состав и свойства культьивированных дереворазрушающих грибов // Журнал прикладной химии, 2001, т. 74, №1, стр. 135-138

40. Секрет пчелиных ульев. Сообщ. Интернет ,Кирилл и Мефодий , http://www.km.ru.

41. Семененко А.Ф. Терморегуляция зимой. //Пчеловодство ,3,1989,16.20.

42. Семененко А.Ф. Терморегуляция зимой. //Пчеловодство ,2,1989 23-2646 . Н.С.Симаров Н.С.Мой способ зимовки .//Пчеловодство , 8,1986,14-17.

43. Сычев М.М. Грибковые болезни пчел:профилактика и меры борьбы ,3,1999,19-22.

44. Смирнов А.М.,А.Б.Сохликов А.Б.Некоторые особенности биологии возбудителя нозематоза.,Пчеловодство ,3,1995 ,22-25.

45. Смирнов А.М.Дуктаров В.Р. и др. Средства борьбы с бактериозами пчел//Патент РФ №21211789 ,1998 -М,1998-6с.

46. Сотников А.Н.,Гусева J1.H. и др. Бактопол-новый противогнильцовый препарат //Пчеловодство ,1997 ,№1,с 21-26.

47. Суворов А.Н.Движение воздушных потоков в улье , //Пчеловодство ,9,1989,24-25.

48. Туктаров В.Р. Новое в лечении бактериальных болезней пчел // Сб.Актуальные проблемы животноводства РБ Уфа ,2000 ,с. 158-160.

49. Тетюшев В.М. и др. Из кельи восковой // Л.,Лениздат, 1995 ,223с.

50. Шатрова Т.С. Апитол при варроатозе // Ветеринария ,1990 ,№4,с.46-56

51. Шатрова Т.С.ДСлочко Р.Т. Луганский С.Н. Применение пиретроидов в пчеловодстве.//Ветеринария ,1990 ,№11,с31-32.

52. Черепов В.Т. К вопросу о бактериальной микрофлоре здоровых семей // Труды пчеловодства, Московский рабочий ,1966 , с 48-50.

53. Феофилова Е.П., Терешина В.М. Перспективные источники получения хитина из природных объектов, Материалы 5-ой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана», М., Изд-во ВНИРО, 1999, стр. 76-78

54. Хоулт Дж. под редакцией, Краткий определитель бактерий Берги, изд.Мир ,М,1981,с.495.

55. Цыган В.Н., Жоголев К.Д., Никитин В.Ю. Хитозан как компонент парафармацевтиков и иммуноориентированной терапии // Концептуальные вопросы питания населения и военнослужащих. СПб., 2000, т.2, стр. 37-42

56. Шуст К.В. Биоресурсы Антарктики пока еще ждут российских рыбаков // Рыбное хозяйство, 1998, № 4, стр. 37-39.

57. Эрнст JI.K., Злочевский Ф.И., Ерохин В.А., Клецко Н.Г. Энтомологический метод утилизации органических отходовв животноводства, в частности, свиноводства // Аграрная Россия, 2000, № 5, стр.51-57

58. Adelt B.,Kimmrich К.Н. Die wirkung der aveisensaure in die verdeckelte Brut //Imkertfreund ,1987,ig 42,3,s.

59. Boiler I. Chitin in Nature Technol. // NY : Plenum Press,1998 -N9-p.l597.

60. Borneck R.,Merle B.Essais sur. Apistan to 1988/ Abeille Fr. Apiculteur-1989b-736,p.128

61. Blaser M.J. Helicobacter pylori and pathogenesis of gastroduodenal infllamation // J.Infect.Dis., 1990.-V .161 .-p.626-633.

62. Cade J.,Buchanan M. et.al. A comparison of the antithrombotic and hemorhagic effects of low molecular weight heparin fractions // Trombosis Res.,1984 -v.35,-p.613-626.

63. Careras L.O. Thrombosis and thrombocylopenia induced by heparin /VIn.Verstraete M.& Machin S.(Ens) Clinical Usage of Heparin, 1990 -v.25,-p.64-80.

64. Davie M.,Milosev M. Probltmi otkrivanja rezidua antibiotika u medu mikrobiolosrim metodima .// Veterinarski glasnik-1979,4.s.303-305.

65. Duchausoy P.,Jaurand G. Identification of hexasacccharide sequence able to inhibit thrombin and suitable for polymerization // carbohydrate Res., 1999.-317.-p.63-84.

66. Esaiassen M. ,Overgo K. On design of aminopolysaccharides molecules //Carbohydr. Res.,1995.-v.273.-p.77-81.

67. Ir.Marc Velzeboer. Preventing Salmonella and Campylobackter infection in poultry with the use of organic acids in the drinking water // Int. animal Feeds and Veterinary Drygs Cong. Manila,Philippines,1999,p.46-49.

68. Felton J.C.,Oomen P.A.,Stevenson J.H.Toxicity and hazard of pesticides to honeybts : harmonization offetest method.//Bee world .1986-67,3,114-118.

69. Hiranuma Shin, Fujisaki Mariko, Yamada shigeru. Antagonistic molds for prevention of soilborne diseases // Jpn.Kokai Koho Jp. 0680531/9480531/ (CI.A 01 63/02),22 Mar., 1994.

70. Http://pchelovodstvo.boom.ru.

71. Hurkman W.J.,Tanaka C.K. Germin gene expresion is induced in wheat leaves by powdery mildew infection // Plant Phys. -1996.-111 .-p.735-739.

72. Ilyina A.V., Tatarinova N.Yu., Varlamov V.P. The preparation of LMW-chitosan using chitinolytic complex from Str.kurssanovii // Proc. Biochemistry, 1999,-v.34, p. 875-878

73. Ilyina A.V., Tikhonov V.E., Albulov A.I., Varlamov V.P. Enzymatic preparation of acid-free-water-soluble chitosan // Proc.Biochemistry, 2000,-v.35,-p.563-568

74. Keisuke K.,Joshiyki Chitosan // Chem.Letter .,1989-9-p.l597.

75. Kelton J.G. Heparin-induced thrombocytopenia // Haemostasis , 1986,v. 16.-p.173-186.

76. Krasavtsev V.E. Krill as promising raw material for the production of chitin in Europe // Proceedings of the 3 International Conference of the Chitin Society, Potsdam, Germany.-1999.-p. 1-3.

77. Kren V.,Dvorakova J. Nature chitosan //Carbohyrd. Res.,1998.-v.305.-p.517-523.

78. Lindahl U, Liddhoult K. et.al. Mechanism of anticoagulant action of heparin //Thromb.Res.-1994,-v.75,-p. 1 -32.

79. Linhardt R.J.,Loganathan D. Oligosaccharide maping of low molecular weight heparins // J.Med.Chem.,1990.-v.33.-p.l639-1645.

80. Lodder J.,Dennis M.S. et al.Cooperative study on the value of long term anticoagulation in patients with stroke and non-rheumatic atrial fibrillation // British Medical J.l 998,-v.296.-p.l435-1438.

81. Matzsch T.,Bergqvist D. et.al Heparin-induced osteoporosis in rats // Thrombosis and Haemostasis. 1986,-v.56,-p.293-294.

82. Mauch F.,Mauch-Maniana В., Boiler T. Antifungal hydrolases in pea tisue: 11 .Inhibition of fungal growth by combinations of chitinase and b-l,3-glucanase. // Plant physiol. ,1998-v.88.3-p.936-942.

83. Muzzarelli R.A.A. Depolymerization of chitin and chitosans with hemicell

84. Muzzarelli R.A.A. Chitin // Pergamon Press , 1988, p. 97-102.

85. Muzzarelli R.A.A. Chitin in Nature and Technology. //NY.,1986.-p.67-97.

86. Muzzarelli R.A.A.Colorimetric determination of chitosan // Analytical Biochemistry ,1998.-v.260.-p.255-257.

87. Muzzarelli R.A.A.,Biagini G. Role and fate of exogenous chitosans in human wound tisues // Chitin Enzymology,Eur. Chitin Soc.Ancona ,1993 .-p. 187-196.

88. Nikitin V.Yu.,Zhogolev K.D.,Bulankov Yu.I.Nudga L.A. Immunological activity of chitosan and its derivatives // International Jounal of Immunorehabilitatoon 1994-1 -p,254-255.

89. Gatterman L., Vilaard G. Practical works on organic chemistry // M-L .Chem.Edit. ,1998-V.445.

90. Glinski Z.,Jarosz J.Distribution of protein fractions in the blood of worher blood of Apis mellifera.// Apicultural J.-1985,v 24,2,p.80-85.

91. Guth J.Abeille a tolerance varroa.// Ab.Fr.Apiculteur, 1989,-742,p. 14-17.

92. Reis G.J.,Boucher T.M.,et al.Randomised trial offish oil for prevention of restenosis after coronary angioplasty //Lancet. 1989s-v.2.-p. 177-181

93. Rhoades J.,Roller S. Antimicrobial actions of degraded and native chitosan against spoilage organisms in laboratory media and foods // Applied and Environmental Microbiology Jan.2000.-v.66(4 ).-p.80-86.

94. Rosenberg R.D.,Bauer K.A. Chitosan //Clinical Practice, 1994,-p.837-842.

95. Russell A.I.,Mc.Carty M.F. Glucosamine in osteoarthritis //Lancet, 1999,v.354.-p.l841.

96. Podolski J.S.,Hsu К. //Chitosan induced immunopotentiation. Zonagen,Inc.,Patent US N.5,912,000 Jun. 15,1999.

97. Salyers A.A. Activities of polysaccharide -degrading bacteria in human colon // In: Dietary Fiber: Chemistry,Physiology and Health Effects .London .1990-p.l87-194.

98. Semino C.E.,Specht C.A.,Raimondi A. Yomologs of the lXenopus developmental gene DG42 are present in Nod-like chitin oligosaccharides during early embryogenesis // Proc.Natl. Acad.Sci.US A, 1996.-v.93 .-p.4548-4553.

99. Suzuki S.,Watanabe T.,Mikami T.,Matsumoto T.Chitosan //Anv.in Chitin and Chitosan ,Eds.Brine С.J.et al. ,Elsevier Sci.Publ.,1992.-p.96-105.

100. Taber S. Breeding acarine resistant bees : Second generatio.//Am.bee.J,1990,2,p.l 15-116.

101. Tarchevsky I.A. Interaction of plant cell signal systems /switched/ by oligosaccharides and other elicitors //V all-union Con. ,M-Shchelkovo,1999,p34-38.

102. Tarsi R., Corbin В., Pruzzo C., Muzzarelli R.A.A. Effect of low-molecular-weight chitosan on the adhesive properties of oral streptococci// Oral Microbiology and Immunology, 1998,-v.l3,-p.217-224

103. Taylor I.,Howard A.G. measuremeent of primary amine griups on surface-modified silica and their role in metal binding // Analytica Chimica Acta ,1993.-v.271.-p.77-82.

104. Thomas D.,Merton R. et.al. Effects of heparin oligosaccharides with high . affinity for antithrombin LLL in experimental venous thrombosis // Thrombosisand Haemostasis.-1985,-v47,-p.244-248.

105. Thurnberg L. Further characterization of the antithrombin-binding sequence of heparin // Carbohydrate, 1992,-v. 100,-p.393-410.

106. Treveeljan W.J.,Harrison J.S. The fractionating and microdetermination of carbohydrates of cell //Biochem.J.-1995-v.50-p.303-305.

107. Tytgat G.N.J. Long-term consequences of Helicobacter pylori eradication // Scand.J.Gastroenterol.,1994.-v.29.-p.38-44.

108. Yolpi N., Masscellani G. Low molecular weight heparins: Comparison of structures and physicochemical and biological properties // Anal. Biochem., 1992.-v.200.-p. 100-107.

109. Weil D.A.,Boulton D.R. Electron paramagnetic resonance// N.Y.,1994,456р.

110. Win N.N., Stevens W.F. Enzymatic deacetylation of chitin// Chitin Enzymology 2001, Ed. Muzzarelli R.A.A.,p. 553-564

111. White S.A., Farina P.R., Fulton I. Production and isolation of chitosan from Mucor rouxii // Appl. Environ. Microb. 1979, v. 38, p. 323-328

112. Zopf D., Roth S. Oligosaccharide anti-infective agents // Lancet. 1996, v. 347, p. 1017-1021

113. Zhu H., Aiba S., Muraki E., Miyaoka S. Preparation of N-Ac-glucosamine and N-Ac-chitooligosaccharides by enzymatic hydrolysis// Chitin and Chitosan Res., 2000, v. 6, p. 130-131