автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.07, диссертация на тему:Разработка технологии биологически активной добавки к пище для коррекции нарушений, происходящих при гепатитах

МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ПРИКЛАДНОЙ БИОТЕХНОЛОГИИ

На правах рукописи

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ ДОБАВКИ К ПИЩЕ ДЛЯ КОРРЕКЦИИ НАРУШЕНИЙ, ПРОИСХОДЯЩИХ ПРИ ГЕПАТИТАХ

Специальности 05.18.07 - Биотехнология пищевых продуктов

(перерабатывающие отрасли АПК)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

ÜG3453035

Москва 2008

003453035

Работа выполнена на кафедре технологии продуктов детского и функционального питания ГОУ ВПО Московского государственного университета прикладной биотехнологии (МГУПБ)

Научный руководитель

Доктор технических наук, профессор Токаев Энвер Саидович

Официальные оппоненты:

Доктор технических наук, профессор Бобренева Ирина Владнмировна

Кандидат медицинских наук, ст.н.с. Журавель Сергей Владимирович

Ведущая организация ООО «Нутритек»

Защита диссертации состоится «10» декабря 2008 г. в часов на

заседании Диссертационного совета Д 212.149.01. при Московском государственном университете прикладной биотехнологии по адресу: 109316, г. Москва, ул. Талалихина, 33, конференц-зал.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского государственного университета прикладной биотехнологии по адресу: 109316, г. Москва, ул. Талалихина, 33.

Автореферат разослан

Ученый секретарь Диссертационного совета, Л^, кандидат технических наук, профессор А/-. Забашта

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Изучение вопросов, связанных с лечением и профилактикой заболеваний печени, имеет огромную социальную значимость. По статистике ВОЗ, среди причин нетрудоспособности и смертности существенное место занимают такие заболевания печени, как циррозы, печеночная недостаточность, гепатоциллюлярный рак и др. Приводят к перечисленным серьезным патологическим состояниям в большинстве своем заболевания гепатитом различной этиологии (вирусный, лекарственный, алкогольный, аутоиммунный и др.). Важное значение имеют лечебно-профилактические мероприятия для коррекции заболеваний на ранних стадиях, чтобы не допустить хронизации патологического состояния и необратимых последствий.

Поддержание на постоянном уровне основных компонентов жизнедеятельности организма и обезвреживающая функция - два главных направления деятельности печени, тесно между собой связанных. Патологические изменения структуры печени, ее функций вследствие заболевания, вызывает серьезные нарушения метаболизма, иммунного статуса, детоксикации и антимикробной защиты всего организма.

Современные знания о негативных изменениях в организме, происходящих при заболеваниях печени представлены работами, основанными на многочисленных исследованиях отечественных и зарубежных ученых: Подымовой С.Д., Ивашкина В.И., Блохиной Н.П., Хазанова А.И., L.H. Blumgart, М. Feldman, С.М. Leevy, S. Sherlock, и др.

В последнее время в медицинской практике интенсивно развивается направление, связанное с применением биологически активных веществ (БАВ), их комплексов, в производстве биологически активных добавок (БАД) к пище или для обогащения пищевых продуктов лечебного и профилактического питания. БАВ способны влиять на определенные функции организма, оказывая выраженное лечебно-профилактическое действие. Выпускаемые в настоящее время пищевой и фармацевтической промышленностью БАД к пище гепатотропного действия не учитывают комплекс нарушений, происходящих в организме при воспалительных заболеваниях печени и в основном направлены на коррекцию отдельных механизмов развития и прогрессирования заболевания.

Теоретическое обоснование и практическая реализация технологии создания БАД к пище, предполагающей синергетическое воздействие входящих в нее компонентов на комплекс основных негативных механизмов протекания гепатитов, является актуальной задачей, как в России, так и во всем мире.

Научные представления и практические основы в применении БАВ для создания функциональных продуктов питания, БАД к пище заложены в трудах Покровского A.A., Б.А. Шендерова, Рогова И.А., Титова Е.И., Токаева Э.С., Пилат T.JL, Тутельяна В.А., Богатырева А.Н., Волгарева М.Н., Певзнера М.И., Уголева А.М. и др.

Цель диссертационной работы. Цель настоящей работы состоит в разработке БАД к пище для больных с воспалительными заболеваниями печени (гепатитами) и технологии ее производства.

В соответствии с поставленной целью в работе решались следующие задачи:

1. Проанализировать, систематизировать, обобщить данные об основных нарушениях в организме, происходящих при воспалительных заболеваниях печени различного генеза и на их основе сформулировать медико-биологические (МБ) и технологические рекомендации к разрабатываемой БАД к пище.

2. Определить основные классы БАВ, положительно влияющих на функционирование органов и систем организма при воспалительных заболеваниях печени. Провести клиническое исследование аминокислотного спектра плазмы крови с целью определения места аминокислот с разветвленной боковой цепочкой (АРЦ) в проектировании композиции для больных с воспалительными заболеваниями печени. Сформулировать компонентный состав БАД.

3. Обосновать форму выпуска БАД и оценить применение методов гранулирования для получения готовой формы. Провести сравнительный анализ качественных характеристик образцов, полученных различными методами грануляции и с помощью методов математического моделирования определить рациональные технологические параметры производства.

4. Исследовать динамику изменения перекисного числа, микробиологических показателей БАД в процессе производства и хранения. Обосновать сроки годности.

5. Разработать технологию производства БАД к пище, рекомендации по применению.

6. Оценить гепатопротекторную эффективность разрабатываемого продукта на лабораторных животных. Исследовать изменение микробиценоза кишечника при воспалительных заболеваниях печени.

7. Разработать проект научно-технической документации на продукт.

Научная новизна. Проанализированы и систематизированы данные об

основных нарушениях, происходящих в организме при воспалительных заболеваниях печени (гепатитах), сформулированы МБ и технологические рекомендации к разрабатываемой БАД к пище.

В результате клинического эксперимента получены данные об аминокислотном спектре плазмы крови больных хроническим гепатитом.

Установлено влияние количества добавляемой гранулирующей жидкости на качественные характеристики готовой формы БАД. С помощью методов математического моделирования определены рациональные режимы производства БАД к пище для коррекции нарушений, происходящих в организме при воспалительных заболеваниях печени.

Определено влияние процесса производства и хранения на содержание перекисных соединений в БАД.

Выявлены гепатопротекторные свойства разработанной БАД в результате исследований на лабораторных животных.

Обнаружены негативные изменения в составе микрофлоры кишечника при исследовании модели повреждения печени у крыс. Установлено, что применение БАД поддерживало количественное равновесие представителей всех исследуемых групп микроорганизмов.

Практическая значимость работы. В результате проведенных исследований создана БАД к пище для больных с воспалительными заболеваниями печени (гепатитами), разработана технология ее производства. На основании проведенных клинических исследований предложены рекомендации по использованию АРЦ в качестве компонента специализированных продуктов и БАД к пище при гепатитах. Проведенные испытания разработанной БАД на лабораторных животных показали высокую его эффективность при алкогольном повреждении печени.

На разработанную БАД создан проект научно-технической документации.

Техническая новизна предложенных решений отражена в заявке на патент № 2007145176 (049494) от 06.12.2007 «Биологически активная композиция для лечения и профилактики заболеваний печени».

Апробация работы. Результаты диссертационной работы доложены и обсуждены в период 2004 - 2007 г.г. на Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва, 2004), Восьмом Международном Конгрессе «Парентеральное и энтеральное питание» (Москва, 2004), Восьмом Международном семинаре-презентации инновационных научно-технических проектов «Биотехнология - 2005» (Пущино, 2005), Всероссийской научной молодежной конференции с международным участием «Основные направления функционального питания и безопасность пищевых продуктов» (Улан-Удэ, 2006), Международном форуме «Фундаментальные и прикладные проблемы питания» (Санкт-Петербург, 2007), Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва, 2007), Одиннадцатом Международном Конгрессе «Парентеральное и энтеральное питание» (Москва, 2007).

Публикации. По результатам проведенных исследований опубликовано 11 печатных работ и подана одна заявка на патент.

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, списка литературы, содержащегоисточников,^ приложений.

Основная часть работы изложена на страницах машинописного

текста, содержит ¿У таблиц,рисунков.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность темы и определены основные направления исследований диссертационной работы.

Глава 1. Обзор литературы. Проанализированы и систематизированы данные

об основных механизмах развития и прогрессирования заболеваний вирусным, токсическим, лекарственным, алкогольным, аутоиммунным гепатитами, неалкогольным стеатогепатитом. Рассмотрено действие ряда классов БАВ на функционирование органов и систем организма при воспалительных заболеваниях печени. Исследован рынок БАД к пище, функциональных продуктов, применяемых для лечения и профилактики гепатитов.

Рассмотрены основные формы выпуска БАД к пище. Освещены современные способы гранулирования (принципы, аппаратурное оформление).

На основании анализа и обобщения информации литературного обзора сформулированы цель и задачи диссертационной работы. Глава 2. Организация эксперимента, объекты и методы исследований. Исследование проводили на кафедре Технология продуктов детского, функционального и спортивного питания», ПНИЛЭФМОПП, испытательном центре «Биотест» Московского государственного университета прикладной биотехнологии. Исследование аминокислотного спектра плазмы крови больных гепатитом в Гепатологическом центре, базирующемся в Городской клинической инфекционной больнице №1. Количественное определение аминокислот проводили в отделе хроматографического анализа НИИ физико-химической биологии им А.Н. Белозерского МГУ. Исследование на лабораторных животных по изучению эффективности БАД проводили в отделении экспериментальной патологии Московского городского НИИ скорой помощи им. Н.В. Склифосовского. Биохимические исследования проводили в биохимической лаборатории Клиники питания Института питания РАМН. Исследование морфологии печени в морфологической лаборатории Института питания РАМН.

Схема проведения исследований представлена на рис.1.

В работе использовали аминокислоты: валин, лейцин, изолейцин, аргинин производства компании «Ajinomoto» (Япония), фосфатидилхолин производства компании «Degussa» (Германия) и «Phospholipid» (Германия), гуммиарабик производства компании «CNI» (Франция), двунатриевая соль глицирризиновой кислоты производства компании «Shanghai Healthwell Chemical Co., ltd» (Китай).

Объектами исследований являлись вышеперечисленные вещества, экспериментальные образцы гранулята, полученные на лабораторном миксере-грануляторе Collette MicroGral, оборудованном системой, позволяющей осуществлять контроль за процессом по уровню потребления мощности (2), производства компании «Niro Pharma Systems» (США), а также диапазон вводимой гранулирующей жидкости.

Определяемые качественные характеристики исследуемых образцов гранулята: а) гранулометрический анализ с использованием системы анализа изображений «Leitz Tas Plus» (Германия) (3); б) насыпные характеристики (объемная насыпная плотность (4), насыпная плотность (5), сжимаемость (6) на лабораторной установке, согласно ГОСТ Р 51462-99; в) сыпучесть продукта с помощью специальной воронки, согласно ГОСТ Р 22567.12-82 (7); г) прочность

гранул с использованием устройства ИПГ-1М по методике согласно ГОСТ 2156.2-82 (8); д) распадаемость согласно методике, описанной п Государственной фармакопее СССР (9). Определение суммарного количества перекисных соединений с использованием методики, описанной в ГОСТ Р 51487-99 (10), микробиологические показатели (11) - по ГОСТ 10444-94, ГОСТ 30518-97, ГОСТ Р 50480-93, ГОСТ 30726, ГОСТ 28805. Органолептические показатели (12) - по ГОСТ 29245, массовую долю влаги (13) - по ГОСТ 2924691, Ь-аминокислот (14) - по ГОСТ 23327-98, фосфолипидов (15), пищевых волокон (16), глицирризина (17) - по Р 4.1.1672-03.

Рис. I. Схема проведения исследований

Аминокислотный анализ проводили хроматографическим методом (1) на аминокислотном анализаторе модели 835 производства компании «Hitachi» (Япония). При изучении эффективности БАД к пище были проведены эксперименты на белых лабораторных крысах-самцах линии «Вистар». Биохимический анализ сыворотки крови проводили на установке Konelab 30i производства компании «Thermo electron» (США) с использованием стандартных наборов химических реагентов для определения биохимических показателей (аланиновой аминотрансферазы - АлТ (18), аспарагиновой аминотрансферазы - АсТ (19); щелочной фосфатазы - ЩФ (20), билирубина (21), общего белка (22), альбумина (23)).

Морфологическую оценку тканей печени проводили методом электронной микроскопии (24). Исследование микрофлоры кишечника определяли бактериологическим методом: бифидобактерии (25), лакшбаккрии (26), энтерококки (27), стафилококки (28), энтеробактерии (29), цитрат ассимилирующие бактерии (30), клостридии (31), гемолитические бактерии (32).

Исследования проводили в трехкратной повторности. Результаты исследований обрабатывали с помощью методов статистического анализа с определением среднего арифметического значения и средней квадратичной ошибки.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ Глава 3. Обоснование состава продукта и подбор исходных компонентов.

Изучение литературных данных, описывающих процесс развития и прогрессирования воспалительных заболеваний печени различного генеза (алкогольных, лекарственных, аутоиммунных, вирусных гепатитов, стеатогепатитов) позволило выявить основные негативные изменения, происходящие в организме и сформулировать МБ рекомендации к продукту:

- антивирусное действие;

- стимулирование иммунитета;

- противовоспалительное действие;

- восстановление мембран гепатоцитов;

- купирование «оксидантного стресса»;

- инактивация процессов фиброгенеза и коллагенеза;

- уменьшение риска развития канцерогенеза;

- усиление дезинтоксикационной функции печени;

- устранение неблагоприятных последствий гепатитов -дисбиоза.

Обоснование выбора компонентов. Изучение эффективности

применяемых в настоящее время продуктов для лечения и профилактики заболеваний печени, терапевтических свойств БАВ, а также сформулированные медико-биологические рекомендации, позволили определить основные классы БАВ, а также представителей этих классов имеющих лечебно-профилактический потенциал (рис. 2).

Анализ исследований, проводимых в мире по оценке эффективности перечисленных БАВ, позволил определить оптимальный компонентный

1 11 ¡5 гепатитами,

- 1 »

исследование

Рис. 2. Категории БАВ гепатотропного действия

состав БАД. В состав композиции решено включить следующие БАВ: глицирризин, аргинин, фосфатидилхолин, гуммиарабик (рис. 3). Также исходя из-за недостаточности данных по изменению спектра аминокислот крови пациентов с решено провести

по изучению данного

вопроса.

Исследование спектра свободных аминокислот в плазме крови больных хроническими гепатитами. В рамках исследования по обоснованию компонентного состава БАД был проведен клинический эксперимент по определению количественного

содержания АРЦ и ароматических аминокислот (ААК) в сыворотке крови пациентов с вирусными гепатитами В и С с целью включения АРЦ в композиционный состав БАД. По имеющимся данным при некоторых заболеваниях печени, прежде всего циррозе, происходит снижение активности окисления основных субстратов — источников энергии, и организм на 30-40% может удовлетворить потребности в энергии за счет окисления АРЦ в скелетных мышцах и в гладкомышечных клетках внутренних органов, что приводит к снижению их уровня в плазме крови. С другой стороны, на фоне заболевания печени, которая является основным местом метаболизма АА, в плазме крови увеличивается концентрация последних. Увеличение потока ААК в мозг приводит к угнетению центральной нервной системы и развитию печеночной энцефалопатии. Устранение дисбаланса АРЦ и ААК, способствует улучшению состояния больных с симптомами печеночной энцефалопатии, а также предотвращает ее развитие. АРЦ способны увеличить синтез белка в мышцах и печени, сократить его катаболизм, тем самым уменьшить отрицательный азотистый баланс. Для оценки соотношения АРЦ и ААК используют индекс Фишера (Иф) - отношение суммы АРЦ к сумме ААК. В норме Иф обычно составляет 2,8 - 3,5. При циррозах, после обширных резекций и трансплантации печени, по данным проведенных исследованияй, Иф может падать до 1, а применение комплекса АРЦ поднимает Иф до нормального уровня.

Исследование показало, что Иф практически всех пациентов находится в пределах границ нормы и при хронических гепатитах, не приведших к серьезным патологическим изменениям структуры печени, как фиброз, цирроз, включение комплекса АРЦ в состав продукта не является обязательным.

Рис. 3. Схема действия компонентов продукта при воспалительных заболеваниях печени 1 - включение в цикл образования мочевины, усиление детоксикационной функции печени; 2 - встраивание в структуру мембран поврежденных гепатоцитов, антиоксидантное действие, нормализация обмена липидов, белков и детоксикационной функции печени; замедление разрастания соединительной ткани в печени при развитии ее цирроза; 3 - блокирование первых фаз ретикации вируса, усиление выработки интерферона, увеличение активности Т-лимфоцитов и интерлейкина, противовоспалительный эффект, антиоксидантный эффект и антитоксическое действие, снижение риска развития фиброза и цирроза; 4 - пребиотическое действие, нормализация липидного обмена

Определение суточной дозировки компонентов. Основываясь на исследованиях, связанных с изучением эффективности применения компонентов, входящих в состав разрабатываемой БАД, а также опираясь на уровни суточного потребления БАВ, рекомендуемые Институтом питания РАМН, позволили определить границы суточной дозировки для каждого компонента (табл. 1).

Наименование компонента Суточная дозировка компонента, мг

Глицирризин 210

Аргинин 6990

Фосфатидилхолин 1800

Гуммиарабик 6000

Итого 15000

Обоснование формы выпуска БАД. Суточная дозировка предложенной композиции БАД составляет 15 грамм. Форма выпуска в виде таблеток или капсул не является удобной, т.к. суточное их количество для приема, исходя из максимальной массы таблеток или капсул (1 грамм), составляет 15 штук.

Оптимальной является форма выпуска продукта в виде гранул, упакованных в пакетики для разового приема (5 г).

Глава 4. Исследование качественных характеристик полученного граиулята, обоснование рациональных методов и режимов производства БАД. Один из компонентов, входящих в состав предлагаемой БАД имеет сложные для гранулирования физические характеристики -полиненасыщенный фосфатидилхолин представляет собой продукт с мазеобразной консистенцией.

В работе, дня получения готовой формы БАД, использован метод влажной грануляции, а также отталкиваясь от физических свойств фосфатидилхолина - метод горячей грануляции.

Получение БАД методом влажной грануляции.

Принципиальная схема проведения эксперимента:

Влажная грануляция Горячая грануляция

формулирование композиции

измельчение до оптимальных размеров и перемешивание сухих компонентов в ножевой мельнице

грануляция на лабораторном грануляторе внесете фосфатидилхолина в нативном виде в сухую смесь, измельчение и перемешивание на ножевой мельнице

внесете гранулирующей жидкости (спиртового раствора фосфатидилхолина), отработка оптимального увлажнения сухих компонентов смеси грануляция с нагревом на лабораторном грануляторе

сушка гранулята; охлаждение гранулята

определение качественных характеристик гранул

Исходя из суточных дозировок компонентов БАД сформулирована рецептура (табл. 3).

Наименование компонента Количество компонента,

% масс.смеси

Аргинин 46,6

Глщирризин 1,4

Фосфатидилхолин 12

Гушшарабик 40

Исходный размер частиц смеси влияет на качественные характеристики готового грануляга (прочность, насыпная плотность и др.), поэтому перед процессом грануляции сухие компоненты смеси измельчались и перемешивались на ножевой мельнице. По данным исследований оптимальный размер частиц для грануляции лежит в пределах от 20 до 80 мкм - при размерах частиц менее 10 мкм возникают сложности при увлажнении, процесс трудно контролировать, при размерах частиц более 100 мкм полученные гранулы имеют низкую прочность. Размер частиц исходных компонентов для грануляции после измельчения контролировали с помощью системы анализа изображений Leitz Tass Plus.

Оптимальная степень увлажнения сухих компонентов смеси лежит в широких пределах и определяется экспериментально. Если увлажнителя мало - гранулы после сушки рассыпаются, если много — масса будет вязкой, липкой и трудногранулируемой. Вследствие специфических технологических характеристик фосфатидилхолина, в качестве увлажнителя решено использовать спирт и вводить в смесь в виде спиртового раствора фосфатидилхолина различных концентраций, для определения оптимальной степени увлажнения.

Для определения оптимальной степени увлажнения готовили растворы различных концентраций и объемов. Процентное содержание

фосфатидилхолина в смеси определено и раствор готовили с постоянным его содержанием по массе (табл.4).

Грануляцию проводили при скорости импеллера 800 об/мин и скорости чоппера 1500 об/мин.

Контроль за грануляцией осуществляли по кривой потребления мощности (обобщенная схема представлена на рис. 4), которая характеризуется несколькими

принципиальными фазами.

В фазе I происходит увлажнение смеси путем добавления

Табл. 4 .Диапазон добавления гранулирующей жидкости.

Кол-во

спирта, Концентрация

№ п/п % ФХв

масс. растворе, %

смеси

1 10 54,50

2 11 52,17

3 12 50,00

4 13 48,00

5 14 46,15

6 15 44,44

7 16 42,86

гранулирующей жидкости. В этой фазе не наблюдается образование жидких мостиков между частицами и потребление мощности не изменяется. Во второй фазе начинается процесс образования гранул, образуются жидкие мостики между увлажняемыми частицами. Потребление мощности резко возрастает. Третья фаза характеризуется заполнением пустот между сухими частицами гранулирующей жидкостью, большая часть гранул сформирована. Потребление мощности на этой фазе растет незначительно. В четвертой фазе процесс образования гранул завершен, потребление мощности в дальнейшем не изменяется. Данная закономерность применима для диапазона увлажнителя (спирта) от 10 до 16 % масс, смеси. При большем увлажнении потребление мощности резко падает, т.к. вместо гранул образуется суспензия.

После окончания процесса грануляции влажный гранулят выгружали из установки и сушили слоем в 1 см при температуре 30-35°С 2-3 часа в сушильном шкафу.

Л*! образца Время гранулирования, мин

1 14,5

2 15

3 16

4 17,5

5 19,5

6 22

7 25

Время

Рис. 4. Зависимость потребления мощности гранулятора от времени в ходе процесса влажного гранулирования.

Получение продукта методом горячей грануляции. В данном методе образование гранул происходит за счет включения в состав продукта компонента, изменяющего свои физические характеристики (снижение вязкости) при нагревании. Данный метод позволяет значительно сократить время получения продукта - не требуется сушка влажных гранул. Связующим компонентом в данном методе выступает входящий в композиционный состав продукта фосфатидилхолин, вязкость которого изменяется с повышением температуры. Оптимальное количество связующего компонента в составе смеси составляет 10 - 30 % масс, смеси. В нашем случае количество его составляет 12% масс, смеси, поэтому процентное соотношение компонентов смеси изменять не представлялось необходимым. Измельчение и смешивание сухих компонентов проводили аналогично методу влажной грануляции. Размер частиц фосфатидилхолина изначально составлял 1 — 10 мм, после внесения в смесь и измельчения сопряженного с распределением по объему, размер составил 80- 150 мкм.

Грануляцию проводили в емкости, снабженной тепловой рубашкой при температуре 80°С при скорости импеллера 800 об/мин и скорости чоппера

11

1500 об/мин. Контролировали процесс аналогично методу влажной грануляции (обобщенная схема представлена на рис. 5).

Фаза 1 характеризуется нагревом смеси, потребление мощности постоянно или немного падает. При достижении определенной температуры вязкость связующего компонента начинает снижаться, потребление мощности резко возрастает. Данная фаза характеризуется ростом диаметра гранул, прочности. В начале фазы 2 потребление мощности падает, образование гранул завершено.

После окончания процесса гранулят охлаждали до комнатной температуры.

Образцы, полученные методом влажной и горячей грануляции, в дальнейшем исследовали по ряду качественных показателей.

Ж

Фаза 1 Фаза II

^снижение вязкости связующего компонента

1-^

Время

Рис. 5. Зависимость потребления мощности гранулятора от времени в ходе процесса горячего гранулирования.

Полученные образцы гранулята сравнивали по ряду технологических характеристик: гранулометрический анализ, насыпная плотность, сыпучесть, прочность гранул, распадаемость гранул.

Сравнительный гранулометрический анализ образцов. Размер гранул и процентное распределение их по объему исследовали с помощью системы анализа изображения (рис. 6). Для образцов, полученных методом влажной грануляции, установлена закономерность с увеличением степени увлажнения смеси, увеличивается средний диаметр частиц. Однако эта закономерность лежит в определенных пределах. При увлажнении более 16 % начинается формирование суспензии - гранул не образуется. Также отмечено, что увлажнение до 12 % масс.смеси характеризуется полидисперсностью размеров гранул, при увлажнении от 13 - 14 % замечен небольшой разброс диаметров гранул.

Образец, полученный методом горячей грануляции, характеризовался небольшим разбросом диаметров гранул по объему, средний размер диаметра частиц составлял примерно 1,4 мм.

Определение насыпных характеристик гранулята. Исследование проводили по методике, основанной на измерении объема вещества определенной массы, и изменении объема в результате уплотнения.

№ образца Время гранулирования, мин

Г 26

( О Влажная грануляция 'С'Горячая грануляция [

0123456789 Номер образца

Рис. 6. Сравнительный гранулометрический анализ образцов, полученных методом горячей и влажной грануляции.

Исследование показало (табл. 5), что с увеличением количества добавляемой гранулирующей жидкости в результате использования метода влажной грануляции происходит увеличение компактности гранулята. Также полученные данные свидетельствуют о снижении сжимаемости (индекса Кара). Индекс Кара также используют для прогноза сыпучести- чем меньше сжимаемость, тем лучше сыпучесть.

Табл. 5. Изменение объемной насыпной плотности, насыпной плотности и сжимаемости экспериментальных образцов гранулята

Тип грануляцнн Лг образца Объемная насыпная плотность, Ро, Г/см3 Насыпная ПЛОТНОСТЬ, Рб25, г/см3 Сжимаемость (индекс Kappa), %

Влажная грануляция 1 0,367±0,004 0,568±0,006 35,387

2 0,435±0,004 0,544±0,006 20,037

3 0,490±0,005 0,544±0,006 9,926

4 0,498±0,003 0,536±0,003 7,090

5 0,502±0,003 0,524±0,003 4,198

6 0,444±0,002 0,462±0,002 3,896

7 0,432±0,002 0,439±0,004 1,595

Горячая грануляция 1' 0,497±0,003 0,514±0,003 3,307

Определение сыпучести гранулята. Сыпучесть гранулированной формы БАД проводили по методике, основанной на сравнении времени истечения определенного объема экспериментального образца через специально изготовленную воронку со временем истечения такого же объема стандартного песка.

С увеличением увлажнения в результате использования метода влажной грануляции замечено уменьшение времени истечения образцов гранулята,

13

что говорит об улучшении сыпучести. Полученные данные подтвердили прогноз индекса Кара.

Табл. 6. Изменение сыпучести, прочностных характеристик, распадаемости экспериментальных образцов гранулята.

Тип грануляции № образца Сыпучесть, % Статическая прочность, МПа Распадаемость, с

1 37,892±1,437 0,345±0,020 314,667±26,312

я 2 43,041±1,389 0,605±0,027 381,667±19,218

я я в к 3 56,345±0,794 0,574±0,045 423,333±4,933

4 60,954±1,907 0,751±0,048 483,000±5,292

§ = Я й 5 67,043±0,652 0,857±0,015 554,667±11,240

и 6 71,877±1,473 1,319*0,070 866,000±49,870

7 70,175 1,593±0,094 1043,000*17,692

Горячая грануляция V 67,043±0,652 0,827±0,008 498,333±5,686

Определение прочности гранул. Исследование проводили с помощью устройства ИПГ-1М. Исследование показало прямую зависимость статической прочности гранул от степени увлажнения - с ее увеличением повышалась прочность гранул (табл. 6).

Распадаемость гранул. Одной из важных характеристик готовой формы БАД в форме гранулята является распадаемость. Данная характеристика является одним из показателей дальнейшей усвояемости БАД. Определение распадаемости образцов проводили на лабораторном идентификаторе распадаемости. Лимит времени, установленный Государственной Фармакопеей для гранул составляет 15 мин.

В ходе исследования установлено, что время распадаемости гранул зависит от степени исходного увлажнения при их производстве чем выше степень увлажнения, тем больше время распадаемости. При степени увлажнения более 15% распадаемость гранулята не удовлетворяет лимиту времени. Время распадаемости образца, полученного методом горячей грануляции удовлетворяло лимиту времени и составляло 8,3 мин. (табл. 6).

Определение оптимальных режимов гранулирования методом математического моделирования. С целью отработки технологии и оптимизации режимов производства БАД проведен тщательный анализ различных математических моделей описывающих процесс грануляции: линейной, логарифмическая, степенная, полиномиальной 2-го,3-го и 4-ого порядка. Проведенный анализ показал, что наилучшие модели, наиболее полно описывающие процесс смешивания являются полиномиальные модели 2-го и 3-го порядка, построенные с помощью метода наименьших квадратов:

- уравнение регрессии диаметра частиц гранулята:

/¡(у) = 81.713у2 -1654.8у + 8861.4 Я2 = 0,9645

- уравнение регрессии объемной насыпной плотности:

Л (У) = -0.11(>' -13.378)2 + 0.498

- уравнение регрессии насыпной плотности:

/э(У) = 1-8412-0.3209у + 0.0273у2 -0.0008yJ R1 = 0,9504

- уравнение регрессии сжимаемости:

/4 (у) = 1026.6 -212.63у + 14.799у2 -0.3446у3 R1 =0,9985

- уравнение регрессии сыпучести:

f5(y) = 260.94-71.997у + 6.9774у2 -0.2014у3 Я2 =0,9871

- уравнение регрессии статической прочности:

/6(у) = -11.698 + 2.9505у-0.2442у2 +0.007у3 /?2 =0,9741

- уравнение регрессии распадаемости:

/,(у) = -62.654 +18.119у -1 6528у2 +0.0522yJ ft2 = 0,9796

где у - количество гранулирующей жидкости,

R - достоверность аппроксимации.

Для определения рационального количества гранулирующей жидкости была решена многокритериальная задача с использованием метода нахождения Парето-оптимального решения с помощью наилучшей точки: по каждому из факторов выбиралось наилучшее значение, их совокупность составляла вектор т.н. наилучшую точку.

Вектор наилучших значений: х = (1300,0.498,0.562,1.582,71.396,1.667,10.1222)

Далее была составлена и минимизирована нижеприведенная формула: tf = [1300-(81.713у2-1654.8у + 8861.4)]3+[0.498-(-0 П^-13.378): +0.498)]2 + +[0.562 - 0 8412-0.3209у + 0.0273у2 -0.0008yJ)f +[1.582-(1026 6-212.бЗу + 14 799у3 -0 З446у3)]г + +[71.3996-(260.94-71.997у + 6.9774у2-0.2014у3)]г+[1 667-(-11.698 + 2.9505у-0.2442у:+0.007у3)]г + + [10.122-(-62.654 +18 119у-1.6528у: + 0.0522у')]2

<р,? min у=13.287

Сравнение гранулята, полученного при добавлении 13 % гранулирующей жидкости, и гранулята, полученного горячим гранулированием производилось методом наименьших квадратов: сумма отклонений от «наилучшей точки» для горячего гранулирования численно равна 32880,14, а при 13 % гранулирующей жидкости всего 5286,73. Глава 5. Изучение динамики изменения перекненого числя и микробиологических показателей БАД в процессе производства и хранения. Исследование показало, что в процессе производства БАД происходит незначительное увеличение суммарного количества перекисных соединений в результате окисления фосфатидилхолина. Причем в результате горячего гранулирования это увеличение более заметно.

Для выявления сроков и условий безопасного хранения разработанную БАД расфасовывали в пакетики для разового приема массой 5 г. Хранение осуществляли при температуре 18±3°С и относительной влажности воздуха не более 75%.

БАД, расфасованную в пакетики, хранили в течение 15 месяцев (рис. 7). Показано, что перекисное число липидов, выделенных из БАД, по истечение 15 месяцев хранения, не превышает 5,8 ммоль Vi О/кг в случае

влажного гранулирования и 8,5 ммоль 'Л О/кг в случае горячего гранулирования, что соответствует требованиям СанПин 2.3.2.1078-01.

Рис. 7. Изменение переписного числа липидов, выделенных из разработанного продукта в процессе хранения.

Следует отметить, что в разработанной БАД в процессе хранения бактерии группы кишечной палочки и патогенные микроорганизмы не обнаружены, а содержание мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов значительно ниже допустимой нормы. Глава 6. Разработка технологии производства и рекомендаций к применению БАД к пище для коррекции нарушений, происходящие при гепатитах. На основании проведенных экспериментальных исследований по изучению влияния количества добавляемой гранулирующей жидкости на технологические и качественные свойства готового формы БАД, отработки рациональных режимов грануляции, определения влияния процесса производства и хранения на суммарное содержание перекисных соединений и микробиологических показателей разработана схема технологического процесса производства БАД к пище для коррекции нарушений, происходящих при воспалительных заболеваниях печени (рис. 8).

Основные показатели качества и безопасности БАД. Определены основные микробиологические, физико-химические показатели, показатели окислительной порчи разработанной БАД непосредственно после производства и по истечение 15 месяцев хранения (табл. 7,8).

На основании сформулированных медико-биологических рекомендаций к БАД к пище для коррекции нарушений, происходящих в организме при гепатитах, определения компонентного состава, а также отработанной технологической схемы производства и проведенных исследований был разработан проект технической документации.

Рекомендации к применению. БАД к пище как источник аминокислот, фосфолипидов, пищевых волокон и гликозидов в комплексе лечебно-

профилактических мер при гепатитах различной этиологии (алкогольный, токсический, лекарственный, вирусный, неалкогольный стеатогепатит, аутоиммунный). Применять по одному пакетику (5 г) три раза в день во время еды с небольшим количеством воды.

Приемка и подготовка компонентов

Аминокислота ¡.-аргинин

Глицирризин

Пищевое волокно _"Р<Ьгедит"

Дозирование

Фосфати д и лхол и н

Измельмение и смешивание

Приготовление спиртового раствора С - 44 % т Дозирование

Влажное гранулирование т »17 мин

Сушка

Контроль качества готовой продукции

Фасовка, маркировка, ! упаковывание продукта |

(пакетики Оля р/иовогр при г мл) ]

И- £

Хранение Т - 1В±3 "С, относительная влажность £ 75%

Рнс. 8. Технологическая схема производства

Табл. 7. Показатели микробиологической обсемененности и окислительной порчи.____

Наименование определяемых показателей Гигиенический норматив Результат анализа Результат анализа после 12 месяцев храпения

КМАФАнМ не более 5,0-Ю4 КОЕ/г менее 3,3'Ю; КОЕ/г менее 4,2-102 КОЕ/г

БГКП (колиформы) не допускаются в 0,1 г не обнаружены не обнаружены

Е.соН не допускаются в 1,0 г не обнаружены не обнаружены

Патохенные, в т.ч. сальмонеллы не допускаются в 10,0 г не обнаружены не обнаружены

Дрожжи и плесени не более 100 КОЕ/г Дрожжи-менее 15 КОЕ/г Плесени - менее 5 КОЕ/г Дрожжи - менее 15 КОЕ/г Плесени - менее 5 КОЕ/г

й.аигещ не допускаются в 0,1 г не обнаружены не обнаружены

Перекисное число не более 10 ммоль 'Л О/кг 1 ммоль Уг О/кг 5,8 ммоль У2 О/кг

Показатели Норма по ТУ Результат анализа Результат анализа после 12 месяцев хранения

Массовая доля влаги, %, от 2 до 5 2,89 2,92

Массовая доля Ь-аминокислот, % не менее 45 45,20 45,13

Массовая доля фосфолшгидов, % не менее 11,5 11,60 11,62

Массовая доля глицирризшш, % ие менее 1,2 1,21 1,20

Массовая доля пищевых волокон, % не менее 39 39,10 39,13

Распадаемость, с до 900,0 485 480

Глава 7. Исследование терапевтической эффективности разработанной БАД. Этаноловое повреждение печени у крыс вызывали путем ишрагастралъного зондового введения этанола в дозе 7 мл 40% раствора на 1 кг массы тела 1 раз в сутки в течение 21 дня. Животные были разделены на 2 группы: опытная - на фоне введения алкоголя крысы получали экспериментальный продукт из расчета 215 мг на 1 кг веса в виде 30% раствора через зонд, контрольная получала через зонд физиологический раствор. Сравнительный анализ осуществлялся по отношению к группе здоровых животных на основании изучения биохимических показателей сыворотки крови, морфологического состояния печени, а также анализа микрофлоры слепой кишки. Биологический материал был взят для исследования на 22 день с начала эксперимента в результате забоя животных декапитацией.

Биохимический анализ сыворотки крови. Определяемыми индикаторами цитолитического синдрома (ЦС), при котором наблюдается повреждение клеток печени, в первую очередь цитоплазмы, также органоидов клетки с выраженным нарушением проницаемости мембран, явились аланиновая (АЛТ) и аспарагиновая (АсТ) аминотрансферазы.

По данным исследований АлТ, АсТ (рис. 9) у крыс контрольной группы замечено явное повышение концентрации ферментов в сыворотке крови по отношению к здоровым крысам, что свидетельствует о наличии цитолитического синдрома. На фоне приема продукта повышение концентрации ферментов незначительное.

Замечено снижение концентрации общего белка и альбуминов в сыворотке крови контрольной группы, что свидетельствует о нарушении белковосинтетической функции печени. На фоне приема БАД содержание белка оставалось в пределах нормы (рис. 10).

Биохимическое исследование показало, что показатели ЦС, белковосинтетической функции печени у контрольной группы изменились по сравнению с показателями здоровых крыс. Прием БАД на фоне потребления этанола сдерживал колебания концентрации ферментов и содержания белка.

АсТ

АлТ

Контрольная Опытная Здоровые

Рис. 9. Показатели ЦС.

Белок общий

39 и 38

Контрольная Опытная

Альбумин

Здоровью

Контрольная Опытная

Здоровье

Контрольная Опыгная Здоровые

Рис. 10. Содержание общего белка и альбуминов в сыворотке крови.

Морфологическое исследование печени. Прием раствора этанола у крыс вызывал существенные изменения структуры гепатоцитов. В отличие от гепатоцитов здоровых животных, у крыс, получавших алкоголь, отмечали увеличение объема гепатоцитов, изменение их структуры: увеличивалась площадь эндоплазматического ретикулума, в котором локализованы ферментные системы, участвующие в метаболизме алкоголя; увеличивался объем и форма митохондрий, они становились крупнее и часто приобретали округлую форму; увеличивалась степень вакуолизации цитоплазмы гепатоцитов преимущественно в перипортальной зоне печеночной балки, где находились гепатоциты, завершающие свой жизненный цикл (признаки «баллонной дистрофии»); в печени возрастало число «темных клеток», которые можно отнести к атипичным, не до конца дифференцированным гепатоцитам. На фоне приема экспериментального продукта у крыс опытной группы сохранялась высокая функциональная активность печени на фоне уменьшения повреждения гепатоцитов (набухания плазмы и вакуолизации), нормализации микроциркуляции в печени.

Микробиологическое исследование слепой кишки. После периода приема раствора этанола кишечная микрофлора крыс контрольной группы характеризовалась патологическим состоянием. Прежде всего, это проявлялось в снижении количества бифидобактерий, лактобактерий. Содержание бифидо- и лактобактерий составляло в среднем !§(6,75±0,5) и !§(6,427±0,5984), что на два три порядка ниже, чем у крыс здоровых и

опытных групп (рис. 11). Бифидо- и лактофлора слепой кишки крыс опытной группы слабо реагировали на действия алкоголя.

Количество клеток бифидобактерий Количество клеток лактобактерий

Здороные Контрольная Опытная Здоровые Контрольная Опытнзя

Рис. 11. Количество клеток бифидо- и лактобактерий.

Содержание энтерококков (фекальные стрептококки) снизилось у крыс контрольной группы, а у опытной группы их количество соответствовало физиологической норме. Вероятно, снижение энтерококков связано с увеличением других аэробных представителей микробиоценоза, в частности резким увеличением энтеробактерий. Стафилококковая флора не реагировала на действие алкоголя (рис. 12).

Количество клеток энтерококков Количество клеток стафилококков

Здэрозьж Контрольна* Опыпш Здоровые Контрольная опытная

Рис. 12. Количество клеток энтерококков и стафилококков.

После 22 дня у крыс контрольной группы увеличивалось количество энтеробактерий, цитрат ассимилирующих, гемолитических бактерий и ютостридий (рис. 13). Следует отметить, что качественные изменения микрофлоры при дисбактериозах характеризуются появлением микроорганизмов с измененными биологическими свойствами. Дисбаланс качественного и количественного состава энтеробактерий выражался в увеличении доли лактозонегативных или цитрат ассимилирующих вариантов (60-70% от общего числа), т.е. полноценные бактерии группы кишечной палочки замещались бактериями родов Klebsiella, Citrobacter, Proteus и т.д (остаточная флора). У крыс опытной группы количество энтеробактерий не увеличивалось, а остаточная флора обнаруживалась в незначительных количествах (6-10%).

Гемолитические бактерии у контрольной группы обнаруживались в количестве lg(7,195±l,698), что в сравнении с опытной группой

1£(2,51±2,778) - в несколько десятков раз больше. Также у этой группы крыс наблюдалось повышенное содержание клостридий. Уровень содержания клостридий не изменился в кишечнике крыс опытной группы.

Количество клеток гемолитических бактерий Количество клеток ЦА

Здоровы« Контрольная Опытная

Количество клеток энтеробактерий

Здороэь« Контрольная Опытная

Количество клеток клостридий

Контрольная

ЦА,

Опытная

гемолитических

Здорэеьк Кокгралыш Опытная Здорова

Рис. 13. Количество клеток энтеробактерий, бактерий и клостридий.

Таким образом, результаты бактериологических исследований показали, что введение раствора этанола крысам в течение 22 дней привело к явному негативному сдвигу качественных и количественных показателей микрофлоры кишечника у контрольной группы, также отмечено корригирующее действие исследуемой БАД на микробиоценоз слепой кишки животных, что заключается в поддержании количественного равновесия представителей всех исследуемых групп микроорганизмов, а, прежде всего, содержания лакто- и бифидобактерий.

Основываясь на результатах биохимических, морфологических и бактериологических исследованиях можно сделать вывод о высокой эффективности исследуемого продукта на фоне создания модели алкогольного повреждения печени у крыс. ВЫВОДЫ

1. Проанализированы, систематизированы, обобщены данные об основных патогенетических нарушениях в организме, происходящих при гепатитах различного генеза. Сформулированы медико-биологические и технологические рекомендации к БАД к пище для больных гепатитами.

2. На основании теоретических исследований обоснован компонентный состав БАД, включающей аргинин, фосфатидилхолин, гуммиарабик, глицирризин.

3. Установлено состояние аминокислотного спектра плазмы крови больных хроническими вирусными гепатитами.

4. Проведен сравнительный анализ технологических и качественных характеристик образцов готового продукта, полученных методом влажной грануляции, определено влияние количества добавляемой гранулирующей жидкости на конечные характеристики гранулята. С помощью методов математического моделирования обоснована и определена оптимальная степень увлажнения при влажном гранулировании, равная 13% масс.смеси. Проведен анализ качественных характеристик образцов, полученных методом горячей грануляции в сравнении с методом влажного гранулирования.

5. Определено влияние процесса производства и хранения на содержание перекисных соединений в продукте. Установлено, что суммарное количество перекисных соединений в результате хранения в течение 15 мес. для продукта, полученного методом влажной грануляции составляет 5,8 ммоль ХА О/кг и 8,5 ммоль ХА О/кг. Установлено, что в процессе всего срока хранения бактерии группы кишечной палочки и патогенные микроорганизмы не обнаружены, а содержание мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов значительно ниже допустимой нормы.

6. Разработана технология производства БАД к пище для больных с заболеваниями печени методом влажного и горячего гранулирования.

7. Выявлены гепатопротекторные свойства разработанного продукта в результате исследований на лабораторных животных - снижение активности цитолитического синдрома, корригирующее действие на белковосинтетическую функцию печени, защитное действие на ткань печени.

8. В результате исследования модели алкогольного повреждения печени у крыс установлены негативные изменения в составе микрофлоры кишечника. В результате применения продукта поддерживалось количественное равновесие представителей всех исследуемых групп микроорганизмов, а, прежде всего, содержание лакто- и бифидобактерий.

9. По результатам проведенных исследований разработан проект научно-технической документации. На композиционный состав и технологию получения разработанного продукта подана заявка на патент № 2007145176 (049494) от 06.12.2007 «Биологическая композиция для лечения и профилактики заболеваний печени».

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Токаев Э.С. Биологически активные вещества, используемые

для лечения и профилактики заболеваний печени / Э.С. Токаев, НЛ. Блохина, Е.А. Некрасов // Вопросы питания. - 2007. - №.4. - С. 4-9.

2. Некрасов Е.А. Роль фосфолипидов в питании людей с заболеваниями печени / Е.А. Некрасов // Материалы Международного форума

«Фундаментальные и прикладные проблемы питания», - Санкт-Петербург 2007.-С. 45-46.

3. Некрасов Е.А. Исследование влияния комплекса аминокислот с разветвленной боковой цепочкой и аргинина на спектр свободных аминокислот в плазме крови и функциональное состояние печени при хроническом вирусном гепатите / Е.А. Некрасов // Материалы Всероссийской научной молодежной конференции с международным участием «Основные направления функционального питания и безопасность пищевых продуктов», - Улан-Уде 2006. - С. 6-7.

4. Токаев Э.С. Возможность использования глицирризина в терапии гепатитов различной этиологии / Э.С. Токаев, Е.А. Некрасов // Материалы научно-практической конференции восьмого международного семинара-презентации «Биотехнология-2005», Пущино 2005. - С. 50-52.

5. Токаев Э.С. Подходы к метаболической терапии гепатитов / Э.С. Токаев, Е.А. Некрасов // Материалы III Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения», Москва 2004. - С. 65-66.

6. Токаев Э.С. Краткое обобщение использования «Гепамина» в клинической практике / Э.С. Токаев, Е.А. Некрасов / Тезисы докладов восьмого международного конгресса «Парентеральное и энтеральное питание», - Москва 2004. - С. 61.

7. Токаев Э.С. Определение пищевых волокон и консервантов в продуктах питания / Э.С. Токаев, С.Б. Юдина, Е.А. Некрасов // Методические указания к лабораторным работам. - Москва, МГУПБ. -2004. - 17 с.

8. Токаев Э.С. Оценка исследования эффективности гепатопротектора, содержащего гуммиарабик, на функциональные нарушения ЖКТ у крыс в результате алкогольного повреждения печени / Э.С. Токаев, Т.С Попова, Е.А. Некрасов, Ю.А. Лысиков, Г.И. Соловьева, A.C. Багдасарян / Тезисы докладов одиннадцатого международного конгресса «Парентеральное и энтеральное питание», - Москва 2007. - С. 87-88.

9. Токаев Э.С. Оценка эффективности использования гепатопротектора в коррекции алкогольного повреждения печени у крыс / Э.С. Токаев, Т.С Попова, Е.А. Некрасов, Ю.А. Лысиков, Г.И. Соловьева / Тезисы докладов одиннадцатого международного конгресса «Парентеральное и энтеральное питание», - Москва 2007. - С. 88-89.

10. Некрасов Е.А. Применение технологии горячего гранулирования в производстве БАД к пище / Е.А. Некрасов // Материалы VI Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения», Москва 2007. - С. 90-92.

11. Токаев Э.С. Физиологически функциональные ингредиенты гепатопротекторного действия / Э.С. Токаев, Е.А. Некрасов // Пищевые ингредиенты. Сырье и добавки. - 2007. - №.2. - С. 58-59.

12. Заявка на патент № 2007145176 (049494) от 06.12.2007 ФИПС РФ. Биологическая композиция для лечения и профилактики заболеваний печени.

Подписано в печать ^• Усл. печ. л. 1,5.

Тираж 100 экз. Заказ

ООО «Полисувенир». 109316, Москва, ул. Талалихина, 33 Тел. 677-03-86

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Воспалительные заболевания печени — гепатиты, причины возникновения, основные негативные изменения в организме

1.2. Биологически активные вещества гепатотропного действия

1.3. Формы выпуска биологически активных добавок к пище

1.4. Технология гранулирования в производстве биологически активных добавок к пище

1.4.1. Аппаратурное оформление методов влажного и горячего гранулирования

1.4.2. Физико-химические и механические аспекты образования гранул

1.5. Перспективы применения биологически активных добавок к пище в комплексе лечебно-профилактических мероприятий при заболеваниях

Изучение вопросов, связанных с лечением и профилактикой заболеваний печени, имеет огромную социальную значимость. По статистике ВОЗ среди причин нетрудоспособности и смертности существенное место занимают такие заболевания печени, как циррозы, печеночная недостаточность, гепатоциллюлярный рак и др [170]. Приводят к перечисленным серьезным патологическим состояниям в большинстве своем заболевания гепатитом различной этиологии (вирусный, лекарственный, алкогольный, аутоиммунный и др.). Важное значение имеет лечение заболеваний на ранних стадиях, чтобы не допустить хронизации патологического состояния и необратимых последствий.

Печень играет ведущую роль в процессах преобразования, накопления и синтеза белков, жиров, углеводов, пигментов и биологически активных веществ, в том числе гормонов. Питательные вещества, пройдя через стенки кишечника, попадают с кровотоком в печень, где претерпевают определенные изменения. Печень осуществляет барьерную и защитную функции, обезвреживая различного рода токсические и инфекционные вещества. Таким образом, поддержание! на постоянном уровне основных компонентов жизнедеятельности организма и обезвреживающая функция — два главных направления деятельности печени, тесно между собой связанных [22]. Патологические изменения структуры печени, ее функций вследствие заболевания, вызывают серьезные нарушения метаболизма, иммунного статуса, детоксикации и антимикробной защиты всего организма.

Современные знания о негативных изменениях в организме, происходящих при заболеваниях печени представлены работами, основанными на многочисленных исследованиях отечественных и зарубежных ученых: Подымовой С.Д., Ивашкина В.И, Блохиной Н.П., Хазанова А.И., L.H. Blumgart, М. Feldman, С.М. Leevy, S. Sherlock, и др.

В последнее время в медицинской практике интенсивно развивается направление, связанное с применением биологически активных веществ (БАВ), их комплексов, в производстве биологически активных добавок (БАД) к пище или для обогащения пищевых продуктов лечебного и профилактического питания. БАВ способны влиять на определенные функции организма, оказывая выраженное лечебно-профилактическое действие. Выпускаемые в настоящее время пищевой и фармацевтической промышленностью БАД к пище гепатотропного действия не учитывают комплекс нарушений, происходящих в организме при воспалительных заболеваниях печени и в основном направлены на коррекцию отдельных механизмов развития и прогрессирования заболевания [39, 46, 58].

Научные представления и практические основы в применении БАВ для создания функциональных продуктов питания, БАД к пище заложены в трудах Покровского A.A., Б.А. Шендерова, Рогова И.А., Титова Е.И., Токаева Э.С., Пилат T.JL, Тутельяна В.А., Богатырева А.Н., Волгарева М.Н., Певзнера М.И., Уголева A.M. и др.

Теоретическое обоснование и практическая реализация технологии создания БАД к пище, предполагающей синергетическое воздействие входящих в нее компонентов на комплекс основных негативных механизмов протекания гепатитов, является актуальной задачей, как в России, так и во всем мире.

Целью настоящей работы является медико-биологическое обоснование компонентного состава, разработка технологии, исследование терапевтической эффективности БАД к > пище для коррекции нарушений, происходящих в организме при воспалительных заболеваниях печени.

выводы

1. Проанализированы, систематизированы, обобщены данные об основных патогенетических, нарушениях в организме, происходящих при гепатитах различного генеза. Сформулированы медико-биологические и технологические рекомендации к БАД к пище для больных гепатитами.

2. На основании теоретических исследований обоснован компонентный состав БАД, включающей аргинин, фосфатидилхолин, гуммиарабик, глицирризин.

3. Установлено состояние аминокислотного спектра плазмы крови больных хроническими вирусными гепатитами.

4. Проведен сравнительный анализ технологических и качественных характеристик образцов готового продукта, полученных методом влажной грануляции, определено влияние количества добавляемой гранулирующей жидкости на конечные характеристики гранулята. С помощью методов математического моделирования обоснована и определена оптимальная степень увлажнения при влажном гранулировании, равная 13% масс.смеси. Проведен анализ качественных характеристик образцов, полученных методом горячей грануляции в сравнении с методом влажного гранулирования. 1 •

5. Определено влияние процесса производства и хранения на содержание перекисных соединений в продукте. Установлено, что суммарное количество перекисных соединений в результате хранения в течение 15 мес. для продукта, полученного методом влажной грануляции составляет 5,8 ммоль х/г О/кг и 8,5 ммоль '/2 О/кг. Установлено, что в процессе всего срока хранения бактерии группы кишечной палочки и патогенные микроорганизмы не обнаружены, а содержание мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов значительно ниже допустимой нормы.

6. Разработана технология производства БАД к пище для больных с заболеваниями печени методом влажного и горячего гранулирования.

-1277. Выявлены гепатопротекторные свойства разработанного продукта в результате исследований на лабораторных животных - снижение активности цитолитического синдрома, корригирующее действие на белковосинтетическую функцию печени, защитное действие на ткань печени.

8. В результате исследования модели алкогольного повреждения печени у крыс установлены негативные изменения в составе микрофлоры кишечника. В результате применения продукта поддерживалось количественное равновесие представителей всех исследуемых групп микроорганизмов, а, прежде всего, содержание лакто- и бифидобактерий.

9. По результатам проведенных исследований разработан проект научно-технической документации. На композиционный состав и технологию получения разработанного продукта подана заявка на патент № 2007145176 (049494) от 06.12.2007 «Биологическая композиция для лечения и профилактики заболеваний!печени». s - 128

1. Балаян, М.С. Энциклопедический словарь вирусные гепатиты / М.С. Балаян. -М.: Новая слобода, 1994. - 207 с. 1

2. Банникова, Л.А. Микробиологические основы молочного производства / Л.А.

3. Банникова, Н.С. Королева, В.Ф. Семенихина. М.: Агропромиздат, 1987. - 400с.

4. Беляева, Н.М. Вирусные гепатиты — прошлое и будущее. / Н.М. Беляева. // БОП. №12002. - С. 45-48.

5. Березов, Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин // Учебная литература для студентов медицинских вузов. М.: -Медицина - 2002 - 704 с.

6. Блохина, Н.П. Возможности, варианты и перспективы лечения хронического гепатита С после проведения одного курса лечения. / Н.П. Блохина. // Вирусные гепатиты. Достижения и преспективы. 1998. - Т.1, №2- С. 9-12.1.I

7. Блюгер, А.Ф. Основы гепатологии / А.Ф. Блюгер. — Рига: Звайгзне, 1975. — 470 с.i I

8. Богатырев, А.Н. Применение биологически активных добавок в пищевыхпродуктах. / А.Н. Богатырев, В.А. Тутельян, В.А. Макеева. // Ваше питание. -t2000.-№1.

9. Бондарь, З.А. Клиническая гепатология / З.А. Бондарь. М.: Медицина, 1970. -407 с. !

10. Буеверов, А.О. Лекарственные поражения печени. / А.О. Буеверов. // РМЖ. -Том 9.-№13-14.-2001.-С. 12-18.

11. Буеверов, А.О. Место гепатопротекторов в лечении заболеваний печени. / А.О. Буеверов. // БОП. Том 3. - №1. - 2001. - С.34-38.I

12. Вилесов, Н.Г. Процессы гранулирования в промышленности. / Н.Г. Вилесов, В.Я. Скрипко, В.Л. Ломазов, И.М. Танченко. //М.: Техника, 1976. 192 с.

13. Воробьев, A.A. Дисбактериозы актуальная проблема медицины / A.A. Воробьев, H.A. Абрамов, В.М. Бондаренко, Б.А. Шендеров // Вестник РАМН. -1997.-№3.-С. 4-7.

14. Голубев В.Н. Основы пищевой химии. -М: Биоинформсервис, 1997. -408 с.

15. Государственная фармакопея СССР. Общие методы анализа. Лекарственное и растительное сырье / Издание 11, выпуск 2. М.: Медицина. - 1990. - 385 с.1. U 1

16. Гундерманн, К.-И. Новейшие данные о механизмах действия и клинической эффективности эссенциальных фосфолипидов / К.-Й. Гундерманн. // Клин, персп. клин, гастроэнт. и гепат. — 2002 №2 - С. 21-24.

17. Дисбактериозы кишечника, причины возникновения, диагностика, применение бактерийных биологических препаратов: Пособие для врачей и студентов / Н.М. Грачева, Н.Д. Ющук, Р.П. Чупринина, Т.В. Мапулевич, Л.В. Пожалостина. М.: Москва. 1999.-44 с.

18. Дудкин, М.С. Об использовании термина «пищевые волокна» и их классификация / М.С. Дудкин, Л.Ф. Щелкунов // Вопросы питания. 1997. - №3. -С. 42-43.i 1

19. Ивашкин, В.И. Вирусы гепатитов В и С: эпидемиология, роль в патогенезе1.1острых и хронических заболеваний печени / В.И. Ивашкин, А.И. Хазанов, A.C. Васильев и др. // Рос.журн.гастроэнтерол., гепатол. 1994. - №2. - С. 12-15.

20. Ивашкин, В.Т. Аутоиммунные заболевания печени в практике клинициста. / В.Т. Ивашкин, А.О. Буеверов. -М.: Вести, 2001. 102 с.

21. Ивашкин, В.Т. Настоящее и будущее клинической гепатологии. / В.Т. Ивашкин, А.О. Буеверов. // БОП. Том 4. - №1. - 2002. - С.56-59.

22. Ивашкин, В.Т. Неалкогольный стеатогепатит. / В.Т. Ивашкин, Ю.О. Шульпекова. // БОП. Том 2. - №2. - 2000. - с. 76-81.

23. Каренейро де Мура, М. Неалкогольный стеатогепатит. / М. Каренейро де Мура. // Клинич. перспект. в гастроэнтерол., гепатол. 2001. - №3. - С. 12-15.

24. Классен, П.В. Основы техники гранулирования. / П.В. Классен, Г.И. Гришаев. //М.: Химия, 1982.-272 с.-130-i

25. Климова, E.A. Редкий случай гепатита А, осложнившийся внутрисосудистымгемолизом и острой почечной недостаточностью. / Е.А. Климова, A.B. Пивник,

26. А.Е. Литвинов, С .А. Кесельман. // РМЖ. Том 8. - №17. - 2000. С. 46-47.

27. Кричевская, A.A. Аминокислоты и их производные в регуляции метаболизма. / A.A. Кричевская, А.И. Лукаш, B.C. Шугалей и другие. // Ростов: Ростовский университет, - 1983 - 110с.

28. Лифляндский, В.Г. Лечебные свойства пищевых продуктов. / В.Г. Лифляндский, В.В. Закревский, М.Н. Андронова // М.: Терра, 1999. 407 с.

29. Маев И.В. Биологически активные добавки к пище в профилактической и клинической медицине. / И.В. Маев, А.Б. Петухов, В.А. Тутельян и др. // Москва, ВУНМЦ 1999.-243 с.i

30. Маевская, М.В. Алкогольная болезнь печени. / М.В. Маевская. // Cons. medicum. Том 3. - №6, 2001. - С. 256-260.

31. Мансуров, Х.Х. Этанол и печень. / Х.Х. Мансуров, Т.К. Мироджов. // Проблемы гастроэнтерологии. — Душанбе: Донши, 1985. — Вып. 6.

32. Маркетинговый анализ Российского рынка биологически активных добавок в целях организации их производства. / DSM Group, 2004.

33. Методические указания МУК 4.2.999-00 «Определение количества бифидобактерий в кисломолочных продуктах». Утвер. 08-11-00 года; введ. 08— 02-01.-16с.

34. Никитин, И.Г. Состояние кишечной микрофлоры у пациентов с неалкогольным стеатогепатитом,/ И.Г. Никитин, Г.И. Сторожаков, И.Г. Федоров идр. // Рос. журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2002. - № 5.• iс. 40-44.i

35. Никитин, И.Г. Хронический гепатит С: актуальные вопросы диагностики и лечения. / И.Г. Никитин, Г.И. Сторожаков. // Клин, перспект. в гастроэнтер., гепатол. 2001. - №3. - С. 7-11.

36. Нурмухаметова, Е. Эссенциальные фосфолипиды в лечении хронических вирусных гепатитов В и С. / Е. Нурмухаметова. // РМЖ 1999 - Том 7 - №1 - С. 26-28.

37. О санитарно-эпидемиологической обстановке в Российской Федерации в 2006 году. / Государственный доклад. М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2007. - 360 с.

38. Павлов, Ч.С. Гепатит С: естественное течение и подходы к терапии./ Ч.С. Павлов // Клин, перспект. в гастроэнтерол., гепатол. №3. - 2001. - С. 2-11.

39. Петров, А.Н. Геродиетические продукты функционального питания / А.Н. Петров, Ю.Г. Григоров, С.Г. Козловская, В.И. Ганина. -М.: Колос-Пресс, 2001. -96с.

40. Пилат, T.JI. Биологически активные добавки к пище (теория, производство, применение). / Т.Л. Пилат, A.A. Иванов. // М.: Аввалон - 2002 - 710с.

41. Пинегин, Б.В. Дисбактериозы кишечника / Б.В Пинегин, В.Н. Мальцев, В.Н. Коршунов. М. : Медицина, 1984. - 143с.

42. Пинегин, Б.В. Изучение микрофлоры( полости и слизистой оболочки кишечника в норме и после гамма облучения / Б.В Пинегин, В.Н. Коршунов, Т.Б. Иконникова // Микробиология. - 1980. -№9. - С. 50-55.

43. Подколозин A.A. Действие биологически^ активных веществ в малых дозах / A.A. Подколозин, К.Г. Гуревич. М.: КМК, 2002. -170 с.

44. Подымова, С.Д. Болезни печени / Руководство для врачей. // М.: Медицина -1998 - 704с.

45. Рекомендуемые уровни потребления пищевых и биологически активныхвеществ. / МР № 2.3.1. 1915 04.МЗСР РФ, М.: 2004. - 34 с.1

46. Рогов, И.А. Пищевая биотехнология. Основы пищевой биотехнологии. Книга 1/ И.А. Рогов, Л.В. Антипова, Г.П. Шуваева. М.: КолосС, 2004. - 440с.

47. Скворцова, Р.И. Биохимические основы питания: Учебн. пособ. М.: Из-во «МТИПП», 1981.-306 с.

48. Соринсон, С.Н. Вирусные гепатиты. / С.Н. Соринсон. СПб.: Теза, 1998. - 323 с.

49. Соринсон, С.Н. Особенности патогенеза и течения гепатита С. Оптимальные сроки лечения интерфероном. / С.Н. Соринсон. // Вирусные гепатиты. Достиженияи перспективы. — 1998. Т.1, №3. - С.3-8.i

50. Степаненко, П.П. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии молока и молочных продуктов / / П.П. Степаненко. М. 2005. - 653с.

51. Тутельян, В.А. Биологически активные добавки в профессиональном и лечебном питании. Эволюция взглядов и подходов. // Биологически активные1 Iдобавки к пище и проблемы здоровья семьи: Материалы V Международного симпозиума. Красноярск, 2001. - С. 3-5.

52. Тутельян, В.А. Микронутриенты в питании здорового и больного человека / В.А. Тутельян, В.Б. Спиричев и др. М.: Колос, 2002. 423 с.

53. Тутельян, В.А. Эволюционная биохимия как теоретическая база создания новых БАД. / В.А. Тутельян, А.В. Васильев. // Биологически активные добавки к пище: XXI век: Материалы IV Международного симпозиума. М., 2000. - С. 3-4.

54. Чередниченко, Т.В. Позитивное влияние препарата Гепон на клиникоIлабораторные показатели и дисбиоз кишечника при вирусных гепатитах у детей / Т.В. Чередниченко, В.Ф. Учайкин. // РМЖ 2003 - Том 11 - №5 - С. 468-473.

55. Шендеров, Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Микрофлора человека и животных и ее функция. В Зт. Т.1 / Б.А. Шендеров. М.: Грантъ. 1998.-288с.

56. Шендеров, Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Социально экологические и клинические последствия дисбаланса микробной экологии человека и животных. В Зт. Т.2 / Б.А. Шендеров. - М.: Грантъ, 1998. -416с.• I I

57. Шендеров, Б.А. Состояние и перспективы концепции «Функциональное питание» в России: общие и избранные разделы проблемы // Фарматека 20061.I I1(116)-С. 20-23.

58. Широкова Е.Н. Современная терапия хронического вирусного гепатита С. / Е.Н. Широкова, В.Т. Ивашкин. //.РМЖ. Том 10ю - №16. - 2002. - С. 43-47.

59. Шульпекова, Ю.О. Эссенциальные фосфолипиды в лечении заболеваний печени // РМЖ 2003 - Том 11 - №5 - С. 300-302.

60. Яковенко, Э.П., Григорьев П.Я. Хронические заболевания печени: диагностика и лечение. / Э.П. Яковенко, П.Я. Григорьев. // РМЖ. 2003. - Т. 11. - № 5. - С. 2916.I

61. Abberger Т, Seo A, Schaefer Т. The effect of droplet size and powder particle size on the mechanisms of nucleation and growth in fluid bed melt agglomeration. Int J Pharm 2002; 249:185-197.i i

62. Adams M, Thornton C, Lian G. Agglomeration & size enlargement. In: Ennis BJ, ed. Proceedings of the First International Particle Technology Forum. Vol. 1. Denver, CO: AIChE, 1994:155-286.

63. Angulo, P. Independent predictors of Liver fibrosis in patients with non-alcoholicsteatohepatitis. / P. Angulo, J.C. Keach, K.P. Batts, K.D. Lindord. // Hepatologyi <1999;30:1356-62. ! ^

64. Angulo, P. Treatment of nonalcoholic fatty liver disease. / P. Angulo. // Ann Hepatol 2002;1:12-9.

65. Bacon, B.R. Nonalcoholic steatohepatitis: an expanded clinical entity. / B.R. Bacon, M.J. Farahvash et al. // Gastroenterology, 1994; 107: 1103-9.

66. Bauer, A., Harrer T. Alpha lipoic acid is an effective inhibitor of human immunodeficiency virus replication // J. Klin. Wochenschr. 1991 - Vol. 69 - P. 722724.

67. Becker, U., Deis A, Sorensen IT, et al. Prediction of risk of liver disease by alcohol intake, sex, and age: a prospective population study. / U. Becker, A. Deis, T.I. Sorensen et al. IIHepatology. 1996;23:1025-1029.

68. Berger, V. Influence of thioctic acid on the chemotherapeutic efficacy of cytophosphamide and vincristin sulfate // J. Arzneim. Forsch. 1983 - Vol. 33 - P. 1286-1288.i

69. Bergner, P. Glycyrrhiza: Licorice as a liver herb // J. Med. Herb. 1994 - Vol. 6. -№1 - P. 6-7.i

70. Blumgart, L.H. Surgery of the liver and biliary tract. / L.H. Blumgart, Y. Fong. // London: W.B. Saunders, 2000. Vpl. 1. - P. 2-8.

71. Bodenheimer, H.C. Tolerance, and efficacy of oral ribavirin treatment of chronict ihepatitis C: a multicenter trial. / H.C. Bodenheimer, K.L. Lindsay, G.L. Davis et al. // Hepatology. 1997. - vol.26. - N.2. - P.473-477.

72. Brittain HG, Bogdanowich SJ, Bugay DE, DeVincentis J, Lewen G, Newman AW. Physical characterization of pharmaceutical solids. Pharm Res 1991; 8:963.

73. Charlton, M. Branched-chain amino acid enriched supplements as therapy for liver disease // J. Nutr. 2006 January - Vol. 136 - Suppl. 1 - P. 295S-8S.

74. Czaja, A.J. Recurrence of nonalcoholic steatohepatitis after liver transplantation. / A.J. Czaja. //Liver Transpl. Surg. 1997; 3: 185-6.

75. Daul, H.S., Abidi S.A. Branched chain & keto acid in health and disease // J. Basel -1984-P. 182-219. ;-13581. DeLeve, L.D. Mechanisms of drug-induced liver disease. / L.D. DeLeve, N. Kaplowitz. // Gastroenterol Clin N Am 1995; 24: 787-810.

76. Diehl, A.M. Alcohol and liver regeneration. / A.M. Diehl. // Clin Liver Dis. 1998;2:723-738. j

77. Eliasen H, Kristensen HG, Schaefer T. Growth mechanisms in melt agglomeration with a low viscosity binder. Int J Pharm 1999; 186:149-159.

78. Evrard B, Amighi K, Beten D, Delattre L, MoeEs AJ. Influence of melting and7 ' 1rheological properties of fatty binders on the melt granulation process in a high-shear mixer. Drug Dev Ind Pharm 1999; 25(11):1177-1184.

79. Feldmann, G. Liver apoptosis / G. Feldmann. // J. Hepatol.- 1997.- vol. 26, Suppl. 2.- P. 1-11.

80. Fibregum. A bioactive natural soluble fibre from acacia // Colloid Natural International. Bulletin S30 /France, Rouen: D,R&D - October 1998 - 24 p.

81. Fleming, K.A. Alcohol induced liver disease. / K.A. Fleming, JO'D McGee. // J Clin

82. Pathol. 1984; 37: 721-733/* i

83. Fried, M. Therapy of hepatitis C. / M. Fried, J. Hoofiiagle // Semin Liver Dis.-1995,v. 15 (1), P. 82-91.

84. Friedman, S.L. Acetaldehyde and alcoholic fibrogenesis: fuel to the fire, but not the spark. / S.L. Friedman. // Hepatology. 1990;12(3, pt 1):609-612.

85. Friis, H. Drug-induced hepatic injury: an analysis of 1100 cases reported to the Danish Committee on Adverse Drug Reactions between 1978 and 1987. / H. Friis, P.B. Andreasen. // J Intern Med 1992; 232: 133-8.

86. Fuchs, J., Schofer H. Studiesj of lipoate effects on blood redox state in human immunodeficiency virus infected patients // J. Arzneim. Forsch. 1993 - Vol. 43 - P. 1359-1362.

87. Fukui S. Interferon therapy for acute hepatitis C: changes in serum markers associated with HCV and clinical effects. / S. Fukui, H. Tohyama, S. Iwabuchi. // Nippon Rinsho. 1994, v. 52 (7). - j P. 1847-1851.

88. Garson, J. Pilot study of lamivudine in chronic hepatitis C virus infection. / J. Garson, R. Gilson, K. Whitby et.al. //Hepatology. 1998. - Vol.28. - P. 206.on biliary excretion of glutatione and; -136

89. Gougao W., Sidney M. Morris Jr. Arginine metabolism: nitric oxide and beyond // J. Biochem. 1998 - Vol. 336 - P. 1-17.

90. Gregus Z., Stein A. Effects of lipoic acid metals // J. Toxicol. Appl. Pharmacol. 1992 - Vol. 114 - P. 88-96.

91. Grittenden R. A critical review. Prebiotics // In: Tannock G.W. edit. Probiotics.: Norfolk, England: Horizon Scientific Press - 1999 - P. 141-156.

92. Heathcote, J. Peginterferon alfä 2a in patients with chronic hepatitis C and cirrhosis. / J. Heathcote, M. Shiffmann, G. Cooksley et al. // N Engl J Med/ 2000;343:1673-80.

93. Hersey JA. Fluidized bed technology—an overview. Int J Pharm Tech Prod Manuf 1981; 2(3):3-4.

94. Hiestand EN. The determination of some important physical properties of powders. Pharm Tnd 1972; 34:262. :

95. Hikino A. Natural products for liver disease // J. Economic and Medicinal Plant Research 1988 - Vol. 2 - P. 39-67,

96. Holm P, Schaefer T, Kristensen HG. Granulation in high-speed mixers. Part VI. Effects of process conditions on| power consumption and granule growth. Powder Technol 1985;43:225-233. ;

97. Holm P, Schaefer T, Kristensen HG. Powder Technol 1985; 43:213.I

98. Holm P, Schaefer T, Larsen C. End point detection in a wet granulation process. Pharm Dev Technol 2001; 6:181-192.

99. Iqbal K., Khan A., M. Muzaffar Ali Khan Khattak. Biological significance of ascorbic acid (vitamin c) in human health A Review // Pak. J. Nutr. - 2004 - Vol. 3 -№1 - P. 5-13.

100. Jaekel, E. Treatment of acute hepatitis C with interferon alfa-2b. / E. Jaekel, M. Cornberg, H.Wedemeyer et al. //N Engl J Med. 2001;345:1452-1457.

101. James, O. Non-alcoholic steatohepatitis: another disease of affluence. / O. James,

102. C.P. Day. //Lancet 1999;353:1634T6.i

103. James, S.H., Ziparo V., Jeppson B. et all. Hyperammonaemia, plasma amino acid imbalance and blood-brain amino acid transport: a unified theory of portal-systemic encephalopathy // J. Lancet 1979 - P. 772-775.

104. Kidd P.M. Phosphatidylcholine // J. Alt. Med. Rev. 2002 - Vol. 7 - №2 - P. 150154.

105. Kidd P.M. Phosphatidylcholine: a superior protectant against liver damage // J. Alt. Med. Rev. 1996 - Vol. 7 - №4 - P. 258-274. ,

106. Kokubo H, Nakamura S, Sunada H. Effect of several cellulosic binders on particle size distribution of granules prepared by a high-speed mixer. Chem Pharm Bull 1993; 41(12):2151—2155. (

107. Kristensenand HG, Schaefer T. Granulation. A review on pharmaceutical wet-granulation. Drug Dev Ind Pharm 1987; 13:803-872.

108. Kulling W, Simon EJ. Fluid bed technology applied to pharmaceuticals. Pharm Technol 1980; 4(l):79-83.

109. Langley A., Mangas S. Zinc: report of an international meeting 12-13 September 1996, Adelaide // National Environmental Health Forum Monographs. Metal Series, №2.

110. Australia: Department of Human Services - 1997 - 70 p.i 1

111. Lieber, C.S. Alcohol and liver: 1994 Update. / C.S. Lieber. // Gastroenterol. -1994.-Vol. 106.-P. 1085-1105/

112. Lieber, C.S. Alcoholic liver disease: new insights in pathogenesis lead to new treatments./ C.S. Lieber. II J Hepatol. 2000;32(1, suppl):l 13-128.

113. Lieber, C.S. Medical disorders of alcoholism./ C.S. Lieber // N Engl J Med. 1995;333:1058-1065.-138120. Lindros, K.O. Alcoholic liver disease: pathobiological aspects. / K.O. Lindros. // J. Hepatol. 1995.- Vol. 23. - P. 7-15. 25.i

114. Lipps DM, Sakr AM. Characterization of wet granulation process parameters using response surface methodology. I. Top-spray fluidization. J Pharm Sci 1994; 83:937.

115. Losser, M.R. Mechanisms of liver damage. / M.R. Losser, D. Payen. // Seminar in liver disease.-1996.-Vol. 16.- P.357-367.

116. Lumeng, L. Alcoholic liver disease. / L. Lumeng, D.W. Crabb // Curr Opin Gastroenterol 2000;16:208-18.

117. Maddrey W.S. Branched chain amino acid in therapy in liver disease // J. of American College of Nutr. 1985 - Vol. 4 - P. 639-650.

118. Maejima T, Osawa T, Nakajima K, Kobayashi M. Effects of species of non-meltable and meltable materials and their physical properties on granulatability in tumbling melt granulation method. Chem Pharm Bull 1997; 45:1833-1839.

119. Maejima T, Osawa T, Nakajima K, Kobayashi M. Preparation of spherical beadsiwithout any use of solvents by a novel tumbling melt granulation (TMG) method. Chem Pharm Bull 1997; 45:518-524.

120. Makinoand T, Kitamori N. Effect of starch paste concentration on particle size distribution of fine granules produced by agitation granulation. Chem Pharm Bull (Tokyo) 1995;43:1231-1233.

121. Manns, M.P. Viruses and autoimmune hepatitis. / M.P. Manns.// New trends in hepatology. Falk symposium № 92, Dordrecht, KluwerAcad. Pub. - 1997, P. 32-44.

122. Marshal A.W., Graul R.S., Morgan M.Y. et all. Treatment of alcohol-related liver disease with thioctic acid: A six month randomized double-blind trial // J. Gut 1982 -Vol.23-P. 1088-1093.i

123. Mato J.M., Corrales F., Ortiz P. Impairment of methionine metabolism in liver disordes // Ed. Rodes J., Aroyi V./ Spain, Barcelona: Doyma - 1992 - P. 368-373.

124. McCullough, A.J. Alcoholic liver disease. In: Schiff ER, Son-ell MF, Maddrey WC, eds. Schijf's Diseases of the Liver. Vol 2. 8th ed. Philadelphia, Pa: Lippincott-Raven Publishers; 1999:941-971.

125. Morgan, M.Y. The treatment of alcoholic hepatitis. / M.Y. Morgan. // Alcohol. 1996;31:117-134.- 139133. National Institutes of Health Consensus Development Conference Panel Statement: Management of Hepatitis C. / Hepatology 2002:36: (Suppl I).

126. Nguyen, M.H. Therapeutic advances in the management of hepatitis B and hepatitis C. / M.H. Nguyen, T.L. Wright // Currentopinion in infectious diseases (United States). -2001. -№14 (5).- P. 593-601.

127. Numazaki R. Glycyrrhizin therapy for viral infection // J. African Biotech. 2003 -Vol. 2 -№10 -P. 392-393.

128. Ou P. Tristschler H. Thioctic (lipoic) acid: a therapeutic metal-chelating antioxidant // J. Biochem. Pharm. 1995 - Vol. 50 - P. 123-126.

129. Parikh, Dilip M. Handbook of pharmaceutical granulation technology. / Taylor & Francis Group. 2005. — 624 p.

130. Patel, T. Apoptosis and hepatobiliary disease. / T. Patel, G. Gores // Hepatology.1995.-Vol. 21.-P. 1725-1741. • .i

131. Paul, Angulo. Independent Predictors of Liver Fibrosis in Patients With

132. Nonalcoholic Steatohepatitis. / Angulo Paul, C. Keach Jill et al. // Hepatology,t

133. December 1999; 30 (6): 1356-62.

134. Pessayre, D. Nonalcoholic steatosis and steatohepatitis. Mitochondrial dysfunction in steatohepatitis. / D. Pessayre, A.M. Mansouri, B. Fromenty. // Am J Physiol 2002;282:193-9.

135. Prescott JK, Barnum RA. On powder flowability. Pharm Technol Oct 2000; 60-84.

136. Probiotics: A critical review Chapter Abstracts / Tannock G.W.(ed). Norfolk, England: Horizon Scientific Press. - 1998.-P. 1-3.

137. Rappaport, A.M. Physioanatomical basis to toxic liver injury / in: Toxic injury of the liver, E. Farber, M. Fisher (eds). Marcel Dekker. 1979.-N.-Y.-P. 1-57.

138. Ritala M, Holm P, Schaefer T, Kristensen HG. Influence of liquid bonding strength on power consumption during granulation in a high shear mixer. Drug Dev Ind Pharm 1988; 14:1041-1060.i

139. Rossi, S.J. New developments in the treatment of hepatitis C. / S.J. Rossi, T.L. Wright. // Gut. 2003;52:756-757.

140. Savolainen, V.T. Alcohol consumption and alcoholic liver disease: evidence of ai ithreshold level of effects of ethanol. / V.T. Savolainen, K. Liesto, A. Mannikko, A. Penttila, PJ. Karhunen //Alcohol Clin Exp Res. 1993;17:1112-1117.

141. Schaefer T, Holm P, Kristensen HG. Melt granulation in a laboratoiy scale high shear mixer. Drug Dev Ind Pharm 1990; 16:1249-1277.

142. Schaefer T, Holm P, Kristensen HG. Melt pelletization in a high shear mixer. II. Power consumption and granule growth. Acta Pharm Nordica 1992; 4:141-148.

143. Schaefer T, Holm P, Kristensen HG. Wet granulation in a laboratoiy scale highshear mixer. Pharm Ind 1990; 52:1147-1153.i

144. Schaefer T, Mathiesen C. Melt pelletization in a high shear mixer. VIII. Effects of binder viscosity. Int J Pharm 1996; 139:125-138.

145. Schaefer T, Taagegaard B, Thomsen LJ, Kristensen HG. Melt pelletization in a high shear mixer. V. Effects of apparatus variables. Eur J Pharm Sei 1993; 1:133-141.

146. Schaefer T, Taagegaard B, Thomsen LJ, Kristensen HG. Melt pelletization in ahigh shear mixer. IV. Effects of process variables in a laboratoiy scale mixer. Eur J

147. Pharm Sei 1993; 1:125-131.

148. Schaeferand T, Mathiesen C. Melt pelletization in a high shear mixer. IX. Effects of binder particle size. Int J Pharm J 996; 139:139-148.

149. Schiano, T.D. Drug-induced and toxic liver disease. In: Friedman LS, Keefe EB,i

150. Maddrey WC (ed.). Handbook of Liver Disease. Churcill Livingstone 1998: 103-23.

151. Scholich H., Murphy M.E., Sies H. Antioxidant activity of dihydrolipoate against microsomal lipid peroxidation and its dependence on v -tocopherol // J. Biochem. Biophys. Acta 1989 - Vol. 1001 - P. 256-261.

152. Schuppan D., Jia J.-D., Brinkhaus B. et all. Herbal products for liver disease: a therapeutic challenge for the new millennium // J. Hepatology 1999 - Vol. 30 - №4 - P. 1099-1104.

153. Scott B., Aruoma O. Lipoic acid as antioxidants: A critical evaluation // J. Free Radicals Res. Commun. 1994 - Vol. 20 - P. 119-133.

154. Sherlock, S. Diseases of the'liver and biliary system. 7th.edn. / S. Sherlock. -Oxford: Blackwelt Scientific Publications. - 1985. - 821 p.

155. Sherlock, S. Антивирусная терапия хронического вирусного гепатита С. / S. Sherlock. // Рус.мед.ж. 1996. - Т. 3. - №12. - С. 758-762.

156. Sherlock, S. Заболевания печени и желчных путей. / S. Sherlock, J. Dooley. Пер. с англ.: Под редакцией З.Д. Апросиной, Н.А. Мухина. М.: Геотар Медицина, 1999. - 864 с.

157. Shiftman, M.L. Relationship between biochemical, virological. and histological response during interferon treatment of chronic hepatitis C. / M.L. Shiftman, C.M. Hofmann, L.B. Thompson et al. // Hepatology. 1997. - vol.26. - N.3. - P.780-785.

158. Stanley-Wood NG. Particle characterisation by size, shape and surface for individual particles. Stanley-Wood NG, ed. Enlargement and Compaction of Particulate Solids. London: Butterworths, 1983:18.

159. Stary F., Jindal S. Oxidation of alpha-lipoic acid // J. Organ. Chem. 1975 - Vol.i40 P. 58-62.

160. Strakle, V. The medical treatment of acute hepatitis С viral infection by interferon alpha. / V. Strakle, J. Konig, A. Pokorny at al. // J. Viral Hep., 1999, № 4, P. 273-278.

161. Suzuki Y., Tsuchiya M., Packer L. Thioctic acid and dihydrolipoic acid are novel antioxidants which interact with reactive oxygen species // J. Free Radicals Res. Commun. 1991 - Vol. 15 - P. 225-263.

162. Svarosky L. Characterization of powders. Rhodes MJ, ed. Principles of Powder Technology. Chichester: John Wiley, 1990:35.

163. Tamiya Т., Inoue Y., Yanase M., et all. Leucine stimulates the secretion of hepatocyte growth factor by hepatic stellate cells // J. Biochem. Biophys. Res. Commun. -2002-Vol. 297-P. 1108-1111.

164. The World health report: 2004: changing history // Switzerland, Geneva: World Health Organization - 2004 - 170 p.

165. Thiel WJ. The theory of fluidization and application to the industrial processing of pharmaceutical products. Int J Pharm Tech Prod Manuf 1981; 2(5):5-8.

166. Thorne Research, Inc. L-Arginine // J. Alt. Med. Rev. 2005 - Vol. 10 ^ №2 - P. 139-147.-142173. Thome Research, Inc. Quercetin // J. Alt. Med. Rev. 1998 - Vol. 3 - №2 - P. 140143.

167. Thome Research, Inc. Selenium // J. Alt. Med. Rev. 2003 - Vol. 8 - №1 - P. 6371.

168. Thome Research, Inc. Silybum marianum // J. Alt. Med. Rev. 1999 - Vol. 4 - №4 - P. 272-274.

169. Tribble, D.L. The pathophysiological significance of lipid peroxidation in oxidative cell injury. / D.L. Tribble, T.K. Aw, D.P. Jones // Hepatology. 1987. - Vol. 7. - P. 377387.

170. Varshosaz J, Kennedy RA, Gipps EM. Effect of binder level and granulating liquid on phenylbutazone pellets prepared by extrusion-spheronization. Drug Dev Ind Pharm 1997; 23(6):611—618. ' ,

171. Vogel, W. Treatment of acute hepatitis C virus infection. / W. Vogel. // J.of Hepatology-1999,v.31,Suppl. 1. - P.189-193.

172. Vojnovic D, Selenati P, Rubessa F, Moneghini M. Wet granulation in a small scale high shear mixer. Drug Dev Ind Phpn 1992; 18(9):961-972.

173. Weltman, Martin D. Hepatic Cytochrome P450 2E1 Is Increased in Patients With Nonalcoholic Steatohepatitis. / Martin D. Weltman, Geoffrey C. Farrell et al. // Hepatology, January 1998; 27: 1128-33.

174. Wilmore D. Enteral and parenteral arginine supplementation to improve medical outcomes in hospitalized patients // J. Nutr. 2004 - Vol. 134 - P. 2863S-2867S.

175. Wright, M.F. Treatment of chronic viral hepatitis. / M.F. Wright, J. H.C. Main Thomas. // Antiviral chemistry & chemotherapy (England). 2001. - №12 (4). - P. 1-12.

176. Zimmerman, H.J. Acetaminophen (paracetamol) hepatotoxicity with regular intake of alcohol: analysis of instances of therapeutic misadventure. / H.J. Zimmerman. // Hepatology. 1995; 22: 767-73. ,