автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.07, диссертация на тему:Разработка технологии пищевой добавки с пробиотическими свойствами

ВВЕДЕНИЕ.

1. АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР.

1.1. Производство продукции «здорового питания» - перспективное направление 21 века.

1.1.1. Классификация, роль и значение на рынке добавок к пище.

1.1.2. Пробиотики- как особая форма добавок к пище.

1.1.3. Свойства бифидобактерий и лактобактерий и механизм их воздействия на здоровье человека.

1.2. Аспекты разработки добавок к пище.

1.2.1. Обоснование требований к подбору состава микрофлоры в пищевых добавках с пробиотическими свойствами.

1.2.2. Идентификация пробиотических культур с использованием молеку-лярно-генетических характеристик.

1.2.3. Конструирование питательных сред для развития пробиотических культур микроорганизмов.

1.2.4. Основы периодического и непрерывного культивирования.

1.3. Обоснование перспективности выбранного направления, формулирование цели и задач работы.

2. ОРГАНИЗАЦИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА, ИЗУЧАЕМЫЕ ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Организация эксперимента.

2.2. Объекты исследований.

2.3. Материалы и питательные среды.

2.4. Методы исследований.

2.4.1. Биохимические методы исследований.

2.4.2. Микробиологические методы исследований.

2.4.3. Генетические методы исследований.

2.4.4. Математические методы.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

3. ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО СОСТАВА ПРОБИОТИЧЕСКОЙ ДОБАВКИ.

3.1. Изучение комплекса свойств и подбор ацидофильных бактерий.

3.2. Определение способности штаммов Streptococcus salivarius subsp. thermophilus к продуцированию биологически активных веществ.

3.3. Исследование генетических характеристик стартовых культур микроорганизмов.

3.4. Исследование взаимодействия бактерий, входящих в микробиальный состав добавки.

4. РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПИЩЕВОЙ ДОБАВКИ.

4.1. Исследование влияния состава синтетических питательных сред на накопление биомассы бифидобактерий.

4.2. Исследование развития пробиотических культур в условиях полунепрерывного культивирования.ВО

4.3. Разработка технологии пробиотической добавки на основе органических питательных сред.

4.3.1. Исследование влияния биологического фактора на развитие пробиотических культур в ходе технологического процесса.

4.3.2. Изучение влияния рН среды на скорость роста ацидофильных бактерий.

4.3.3. Исследование развития бифидобактерий на органической питательной среде различного состава.

4.4. Аппроксимация результатов исследований.

4.5. Сравнительный расчет себестоимости комплексной органической питательной среды.

5. ИЗУЧЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА В ПРОЦЕССЕ ХРАНЕНИЯ ПРОБИОТИЧЕСКОЙ ДОБАВКИ К ПИЩЕ.

5.1. Исследование состава микрофлоры добавки в процессе хранения.

5.2. Изучение антагонистического действия пищевой добавки в процессе хранения.

5.3. Исследование перевариваемости пищевой добавки.

ВЫВОДЫ.

Актуальность работы. Сохранение здоровья населения и увеличение продолжительности жизни человека продолжает оставаться одной из самых актуальных проблем. Организм здорового человека обладает высоко эффективными биохимическими системами адаптации к условиям окружающей среды. Однако возможности организма, определенные генетическим кодом, не беспредельны, а его адаптационные возможности ограничены. Существенное изменение характера питания населения, несбалансированность и отход от традиционного питания, уменьшение количества потребляемой пищи, значительная доля в ней техногенно-трансформированных пищевых ингредиентов создает дефицит эссенциальных алиментарных факторов и, в конечном счете, приводит к истощению эндокринной системы организма и проявляется в болезнях цивилизации. О важности этой проблемы говорится в одобренной правительством РФ «Концепции государственной политики в области здорового питания населения России на период до 2005 года», где одним из приоритетных направлений деятельности выделено: «ликвидация дефицита микронутриентов (восстановление отечественного производства витаминов-субстанций; создание индустрии биологически активных добавок к пище и технологий обогащения пищевых продуктов)» [60].

По данным экспертов Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ) многие из «заболеваний цивилизации»: рак, болезни сердца и сосудов, мочекаменная и желчекаменная болезни, астма, остеохондроз, диабет и другие приводят к потере трудоспособности, инвалидности и смерти в самом работоспособном возрасте. Медики заметили, что эти заболевания имеют тенденцию к неуклонному росту их числа. К сожалению, население нашей страны не является исключением. Сердечно-сосудистыми заболеваниями в настоящее время страдают до 40% россиян, у более 80% они предопределяются функциональными расстройствами [126,128].

В сложившейся ситуации и государство, и общество понимают необходимость в увеличении спектра пищевых продуктов, обладающих функциональными свойствами, которые не только обеспечивают энергетические и структурные потребности, но и оказывают благотворное регулирующее действие на организм человека в целом или на его отдельные органы и их системы.

Особая роль в функциональном питании отводится продуктам и пищевым добавкам с пробиотическими свойствами. В последние годы получили распространение новые подходы к производству продуктов питания, связанные с восстановлением естественной экологии организма и основанные на использовании биологически активных веществ. Основы решения данной проблемы заложены в трудах Банниковой JI.A., Гавриловой Н.Б., Ганиной В.И., Гончаровой Г.С., Королевой Н.С., Рогова И.А., Семенихиной В.Ф., Хорольского В.В., Шамановой Г.П., Fuller R., Rasic Y.L., Sanders М.Е. Одним из аспектов такого подхода является нормализация микрофлоры желудочно-кишечного тракта путем потребления кисломолочных продуктов и пищевых добавок, полученных на основе про-биотических микроорганизмов.

В настоящее время в литературе имеются данные по получению кисломолочных пробиотических продуктов, эубиотиков, однако ограниченность сведений о создании пробиотических пищевых добавок, потребность в которых существует, затрудняет производство подобной продукции.

В этой связи разработка технологии пищевой добавки с пробиотическими свойствами является актуальной.

Работа выполнялась в рамках Федеральной научно-технической программы «Научные исследования высшей школы по приоритетным направлениям науки и техники» в подпрограмме «Технологии живых систем».

Цель исследований. Цель настоящей работы - разработка технологии пищевой пробиотической добавки путем направленного подбора пробиотических культур микроорганизмов и обоснования рациональных параметров технологического процесса.

Тема диссертационной работы утверждена на заседании кафедры «Технология молока и молочных продуктов» МГУПБ.

Научная новизна работы. Изучены физиолого-биохимические, генетические, технологические и пробиотические свойства шести новых штаммов термофильного молочнокислого стрептококка и четырех штаммов ацидофильных бактерий. Впервые проведена диагностика отечественных штаммов бифи-добактерий В. adolescentis В-1, В. longum ВГБ-21, В. bifidum ГСБ-15 и двух штаммов ацидофильных бактерий с применением полимеразной цепной реакции (ПЦР), что позволило определить ДНК-фингерпринт. Использование ПЦР-диагностики для пробиотических штаммов позволит более жестко вести контроль за культурами, применяемыми на производстве. Научно обоснован принцип создания консорциума бифидобактерий и штаммов термофильного стрептококка, обладающих выраженной В-галактозидазной активностью. Получены новые данные о влиянии активной кислотности и состава питательных сред на накопление клеток пробиотических штаммов в условиях полунепрерывного глубинного культивирования. Обоснован состав новой комплексной органической питательной среды для получения биомассы пробиотических культур.

Установлено влияние технологических факторов на сроки хранения получаемой пищевой добавки. Исследованы пробиотические, органолептические, физико-химические и микробиологические показатели пищевой добавки.

Практическая ценность работы. Генетически охарактеризованы два штамма ацидофильных палочек и три штамма бифидобактерий. Получен консорциум, состоящий из штаммов термофильного стрептококка с повышенной В-галактозидазной активностью и бифидобактерий, а также из штаммов термофильного стрептококка и лактобактерий. Разработан состав комплексной органической питательной среды для наращивания пробиотических микроорганизмов. Определены параметры получения биомассы и разработана технология пищевой добавки с пробиотическими свойствами в стационарных условиях и в аппаратах полунепрерывного глубинного культивирования АК-203, АК-210. Во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов проведено депонирование Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штаммов CT-9, СТ-95, СТ-161, обладающих повышенной В-галактозидазной активностью, а также Lactobacillus acidophilus штаммов AE-5 и АД-3 с присвоением коллекционных номеров ВКПМ В-7984, ВКПМ В-7985, ВКПМ В-7989, ВКПМ В-8153, ВКПМ В-8152 соответственно. Разработан проект нормативно-технической документации на производство пищевой добавки с пробиотическими свойствами. Разработана методика накопления биомассы пробиотических культур в ферментере, которая внедрена в учебный процесс для студентов, обучающихся по специальности 271100 и специализации «Техническая микробиология». На способ получения пробиотика, штамм Streptococcus salivarius subsp. thermophilus ВКПМ 7984, штамм Streptococcus salivarius subsp. thermophilus ВКПМ 7985, используемые для получения пробиотика, подана заявка на патент № 2002107874 и получено уведомление о положительном результате формальной экспертизы (приоритет от 28.03.2002г.).

Апробация работы. Результаты научной работы доложены и обсуждены на Международной научно-технической конференции «Пищевой белок и экология» (Москва, 2000); 4-ой Международной научно-технической конференции «Пища. Экология. Человек» (Москва, 2001); Международной научно-практической конференции «Пробиотические микроорганизмы - современное состояние вопроса и перспективы использования» (Москва, 2002); Научно-практической конференции «Технологические аспекты комплексной переработки с/х сырья при производстве экологически безопасных пищевых продуктов общего и специального назначения» (Углич, 2002); 1-ом Международном конгрессе «Биотехнология - состояние и перспективы развития» (Москва, 2002); Международной научной конференции «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва, 2002); Научно-технической конференции «Технологии живых систем» (Москва, 2002).

В производственных условиях проведена апробация комплексной органической питательной среды для получения биомассы пробиотических культур и проверка разработанной технологии пищевой добавки.

По материалам диссертации опубликовано 14 работ и подана одна заявка на патент. 9

Диссертационная работа изложена на 123 стр. машинописного текста, со держит 21 таблицу и 25 рисунков. Библиография представлена 157 источниками, в том числе 25 зарубежных авторов, количество приложений 15.

ВЫВОДЫ

1. Разработана технология пищевой добавки с пробиотическими свойствами. На способ получения пробиотика, а также на штаммы Streptococcus salivarius subsp. thermophilus ВКПМ B-7984, Streptococcus salivarius subsp. thermophilus ВКПМ B-7985, используемые для получения пробиотика, сформулирована и подана заявка на патент.

2. В соответствии с Международным стандартом на основании изучения морфологических, физиологических, биохимических и генетических свойств, включая, содержание гуанин-цитозин пар в ДНК хромосом и степень гомологии ДНК с типовыми штаммами идентифицирована группа новых штаммов молочнокислых палочек. Определен ДНК - фингерпринт бифидобактерий и лактобактерий методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), позволяющий осуществлять строгий контроль штаммов в промышленных условиях.

3. Дана подробная характеристика биологических и технологических свойств и проведено депонирование пяти перспективных штаммов пробио-тиков во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов за номерами ВКПМ В-7984, ВКПМ В-7985, ВКПМ В-7989, ВКПМ В-8153, ВКПМ В-8152.

4. Созданы консорциумы микроорганизмов, включающие В. longum, В. adolescentis, В. bifidum с Str. thermophilus, и Lactobacillus acidophilus с Str. thermophilus, обладающие производственно-ценными и пробиотическими свойствами.

5. Экспериментально обоснована, испытана и предложена новая комплексная органическая питательная среда, содержащая молоко с повышенной массовой долей сухих веществ, цитрат натрия, сироп «Лактусан» и витамин С, позволяющая получать микроорганизмы пищевой добавки с более выраженными пробиотическими свойствами.

Коэффициент детерминированности при аппроксимации результатов испытаний среды составил 0,93-0,98, что свидетельствует о достоверном

123 приближении прогнозируемых и фактических данных для каждого вида микроорганизмов, входящящего в состав добавки.

6. Обоснованы и установлены рациональные режимы культивирования исследуемых штаммов пробиотических культур в аппаратах полунепрерывного глубинного культивирования АК-203, АК-210: рН=6,0±0,1; t=(37±l)°C; т=(12±2) ч.

7. Исследованы показатели качества и безопасности, разработанных видов добавки и выявлено, что они отвечают требованиям МУК и НД в течение 30 суток хранения при температуре плюс (4±2)°С. Показано, что степень пере-вариваемости белков молочных продуктов при добавлении к ним 5% добавки повышается на 4,6%. Установлена выраженная антагонистическая активность пищевой добавки, которая позволяет «in vitro» снижать уровень Staph, aureus на 17,2%), Е. coli - 52,1%. Полученные данные позволяют рекомендовать применение разработанной добавки в лечебно-профилактических целях.

8. Проведена апробация питательной среды и технологии получения пищевой добавки в производственных условиях, подтвердившие возможность реализации данных разработок в промышленности. Разработана методика накопления биомассы в ферментере, которая используется в учебном процессе студентов, обучающихся по специальности 271100.

1. Аткинсон Б. Биохимические реакторы. -М: Пищевая промышленность, 1979 -280 с.

2. Бактериальный препарат для сыров с лечебно-профилактическими свойствами Горелова Н.Ф., Эрвольдер Т.М., Остроухова И.Л. и др. // Сыроделие 1999г, №2.- С. 11-12.

3. Банникова Л.А., Королева Н.С., Семенихина В.Ф. Микробиологические основы молочного производства, М. Агропромиздат 1987, 400 с.

4. Баснакьян И.А. Культивирование микроорганизмов с заданными свойствами. -М. -1992.- 150 с.

5. Безбородое A.M. Биохимические основы микробного синтеза. -М.: Легкая и пищевая промышленность, 1984 -304с.

6. Бекер К. Введение в биотехнологию М.: Пищевая промышленность, 1982. -232 с.

7. Бифидобактерии и использование их в молочной промышленности. Красникова Л.В., Салахова И.В., Шаробайко В.И., Эрвольдер Т.М //Молочная промышленность, обзор информ., АгроНИИТЭИ мясомолпром., М.,1992.

8. Бредихина Н.А., Шапошникова Л.И., Ваулина О.В. Современные пробиотики в лечении больных с синдромом раздраженного кишечника // Материалы IV международного симпозиума. «Биологически активные добавки к пище: XXI век», С-Пб,22-24 мая 2000. С.38-39.

9. Буйволова JI. А. Разработка технологии производства кисломолочного продукта типа «йогурт» из пахты. Автореф. дис. канд. техн. наук Вологда Молочное, 1983.17 с.

10. Васильев Н.Ф., Новотельнов Н.В., Шмелева Л.И. Применение метода графического дифференцинирования для определения общей и удельной скоростей роста молочнокислых стрептококков // Прикладная биохимия и микробиология -1972 -№8. -С.2-5.

11. Васильев Н.Ф., Новотельнов Н.В., Шмелева Л.И. Автоматическая лабораторная установка для непрерывного сквашивания молока. -18 Международный конгресс по молочному делу. -М.: Пищевая промышленность -1972. -С.275-276.

12. Выделение, идентификация и некоторые биологические свойства бифидобактерий из кишечника человека. Карпушина С.Г., Тюрин М.В., Иванов А.А., Левшиц В.А. // Биотехнология,1998, №2.-С.28-36

13. Танина В.И. Пробиотики. Назначение, свойства и основы биотехнологии, Монография. М.:МГУПБ,2001 .-169с.

14. Гончарова Г.И. Бифидофлора человека, ее защитная роль в организме и обоснование сфер применения препарата бифидумбактерина. Автореферат дисс. на соискание уч. степени докт. тех. наук, М.: 1982. -35с.

15. Горбатова К.К. Биохимия молока и молочных продуктов. -СПб.: ГИОРД, 2001. 320 с.

16. Грачева И.М., Кривова А.Ю. Технология ферментных препаратов, -М.: Элевар, 2000.-512 с.

17. Гудков А.В., Эрвольдер Т.М. Разработка биотехнологии бифидосодержащих молочных продуктов // Тезисы докладов науч.техн. конф. «Вклад науки в развитие маслоделия и сыроделия», Углич, 1994. -С.171-172.

18. Данилов М.Б. Активность fi-галактозидазы микроорганизмов, используемых в производстве молочных продуктов. // Хранение и переработка сельхозсырья. 2001, №7. -С.30-31.

19. Дисбактериоз: современные возможности профилактики и лечения Бондаренко В.М., Учайкин В.Ф., Мурашова А.О., Бевз Н.И., Абрамов Н.А., М. 1994.

20. Дисбактериозы и эубиотики. Материалы Всероссийской научно-практической конференции. - М., 26-28 марта 1996г.

21. Доронин А.Ф., Шендеров Б.А. Функциональное питание. -М.: ГРАНТЪ, 2002. 296 с.

22. Доценко В.А. Научные основы использования БАД в лечебно-профилактическом питании// Материалы IV международного симпозиума. «Биологически активные добавки к пище: XXI век», С-Пб, 22-24 мая 2000. -С.79-81.

23. Драчева Л.В. Питание как лекарство, //Пища, вкус и аромат 1999,№4. -С.2-3.

24. Дугэрсурэн Ж. Физиолого-биохимические свойства молочнокислых бактерий, используемых в пробиотике СТХ-1,

25. Блинов Н.П. Химическая микробиология, М: Высшая школа,1989г. -448с.

26. Ефремов В.В. Витамины в питании, М: Медгиз 1949г,91с.

27. Ждан-Пушкина С.М., Хасанова Л.А. Некоторые аспекты роста культур микроорганизмов. -Уфа -1991. -126с.

28. Иерусалимский Н.Д. Принципы регулирования роста микроорганизмов. Управляемый биосинтез. -М.: Наука, 1996. -С.5-18.

29. Иерусалимский Н.Д. Теория и практика непрерывного культивирования микроорганизмов // Микробиология -1961 -Т.30, вып. 5. -С.818-824.

30. Иммуномодулирующие свойства некоторых микробов -представителей нормальной микрофлоры кишечника, Мальцева Н.Н., Шкарупета М.М., Пинегин Б.В., Коршунов В.М. //Антибиотики и химиотерапия, 1992г., т.37, №12.-С.41-43.

31. Инструкция по микробиологическому контролю производства на предприятиях молочной промышленности, Москва, 1987. -122с.

32. Калунянц К.А., Голгер Л.И., Балашов В.Е. Оборудование микробиологических производств, М: Агропромиздат, 1987,- 398с.

33. Карих Т.Л., Молокеев А.В., Байбаков В.И. Доклинические исследования БАД «Жидкого концентрата Бифидобактерий» // Материалы IV международного симпозиума. «Биологически активные добавки к пище: XXI век», С-Пб,22-24 мая 2000. С. 101102.

34. Каширская Н.Ю. Значение пробиотиков и пребиотиков в регуляции кишечной микрофлоры; //Русский медицинский журнал, 2000, т.8. -С.120-125.

35. Керимова М.Г. Биологически активные добавки к пище как неотъемлемый элемент оптимального питания //Рынок БАД специализированное информационно-рекламное издание, 2002, №2а. -С.8-13

36. Козлова Э.П. Микрофлора кишечника новорожденных детей в норме и патологии и пути ее восстановления бифидумбактериями. // Автореф. дисс. канд. мед. наук. -М.-1997. -18 с.

37. Колеснов А.Ю., Володина Е.М., Альперович Е.Д. Ферментативный анализ изомеров молочной кислоты в молочных продуктах и сырье; // Пищевая промышленность,№3,1997г. -С. 3234.

38. Королева Н.С., Рожкова И.В., Оленева И.В. Подбор заквасок для детских ацидофильных смесей. -Молочная промышленность -1980 -№3. -С.31-32.

39. Корочкин O.JI. Фармакология и применение препаратов бифидобактерий, автореферат на соискание к. вет.н., Троицк 1997г.

40. Красникова JI.B., Кострова И.Е. Непрерывное культивирование молочнокислых бактерий с целью накопления биомассы и продуктов метаболизма. Обзорная информация ЦНИИТЭИ мясомолпром. -М. -1979. -14с.

41. Критская И.В. Разработка питательных сред и процесса непрерывного культивирования бифидобактерий, автореферат Моск. Мед. акад.им. И.М.Сеченова,1997г. -37с.

42. Курашвили В.А. Опыт разработки и оценки эффективности коллекции БАД // Материалы IV международного симпозиума. «Биологически активные добавки к пище: XXI век», С-Пб,22-24 мая 2000. -С.129-130.

43. Лактулоза: новые перспективы молочной промышленности. Харитонов В.Г., Храмцов А.Г., Липатов Н.Н., Сажинов Г.Ю., Ким

44. B.В., Рябцева С.А. // Молочная промышленность, 2000, №7. -С. 1819.

45. Лебедев С.В. Метод непрерывного спиртового брожения. -М.: Пищепромиздат, 1936. -126с.

46. Липатов Н.Н., Юдина С.Б., Лисицин А.Б. Усовершенствованные прибор и методика определения перевариваемости белка «in vitro» // Вопросы питания, 1994, №4.1. C.43-44.

47. Липатов Н.Н., Лисицин А.Б, Юдина С.Б. Перевариваемость «in vitro» белков некоторых видов пищевого сырья. // Хранение и переработка сельхозсырья. 1996, №2. -С.32-34.

48. Лыкова У.А., Бондаренко В.М., Изачик Ю.А. и др. Коррекция пробиотиками микроэкологических и иммунологических нарушений при гастродуоденальной патологии у детей. // Журнал микробиология -1986, №2. -С.88-91.

49. Маймулов В.Г., Якубова И.Ш., Чернякина Т.С. Применение Бад в лечебно-профилактическом питании детей // Материалы IV международного симпозиума. «Биологически активные добавки к пище: XXI век», С-Пб,22-24 мая 2000. -С.147-148.

50. Максимов В.И. Углеводные стимуляторы бифидобактерий, //Биотехнология, -1998, №5. -С.23-25.

51. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. -М.: Мир, 1984. -479 с.

52. Методические указания МУК 2.3.2.721-98 «Определение безопасности и эффективности БАД к пище». -84с.

53. Методические указания МУК 4.2.577-96 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов». -95с.

54. Микронутриенты (витамины и минеральные элементы) в питании. Региональные аспекты в России; Спиричев В.Б., Книжников В.А., Хотимченко С.А., Шатнюк Л.Н., Голубкина Н.А., Вопросы питания, 2000, №6. -С.6-7.

55. Молохова Е.И. Биофармацевтические аспекты пробиотиков // Материалы международной научно-практической конференции «Пробиотические микроорганизмы современное состояние вопроса и перспективы использования», 28-29 мая 2002 г., Москва. -С.64-65

56. Мурашева.А.О., Лисицин О.Б., Абрамов Н.А. Бифидогенные факторы как лекарственные препараты // Журнал микробиологический 1999, №5. -С.56-61.

57. Мытник Л.Г. -Молочная промышленность -1975 -№5. -С. 12.

58. Нересков К.М., Мартынов А.В. Тенденции формирования рынка лечебного питания. //Молочная промышленность 1999 №11. -С.20.

59. Нечаев А.П. Пищевая химия, С-Пб., Гиорд, 2001. 592 с.

60. Новые направления использования лактулозы Храмцов А.Г., Рябцева С.А., Евдокимов И.А., Ким В.В., Дыкало Н.Я. // Молочная промышленность .- 1999, №6. -С.23-24.

61. Перт С. Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. -М.: Мир, 1978. -331с.

62. Петров А.Н., Григоров Ю.Г., Козловская С.Г., Ганина В.И. Геродиетические продукты функционального питания. М.гКолос-Пресс,2001.- 96с.

63. Петров Л.Н. Основы конструирования пробиотиков повышенной терапевтической активности // Материалы международной научно-практической конференции

64. Пробиотические микроорганизмы современное состояние вопроса и перспективы использования», 28-29 мая 2002 г., Москва. -С.12.

65. Печуркин Н.С. Популяционная микробиология. -Новосибирск: Наука, 1978. -215с.

66. Пилат Т.Л., Иванов А.А., Егорова Г.К. Классификатор биологически активных добавок к пище // // Материалы IV международного симпозиума. «Биологически активные добавки к пище: XXI век», С-Пб,22-24 мая 2000. -С.191-192.

67. Питательная среда для производства жидкого концентрата бифидобактерий Андреева М.А., Байбаков В.И., Молокеев А.В., Яцентюк P.M., Карих Т.Л., Криницина Э.В., Ильина P.M. //Биотехнология,1998г.,№4. -С.76-80.

68. Пища. Экология. Человек. /Материалы Международной научно-технической конференции. М. -1999. - 190с.

69. Пища. Экология. Человек. /Материалы Международной научно-технической конференции. М.: МГУПБ, 2000. - 260с.

70. Пища. Экология. Человек. /Материалы Международной научно-технической конференции. М. МГУПБ, 2001. -478с.

71. Пищевой белок и экология. /Материалы Международной научно-технической конференции. М.: МГУПБ -2000. - 260с.

72. Плакунов В.К. Промышленная микробиология. -М.: Высшая школа, 1989, гл. 3. -С.29-76.

73. Пробиотики и пробиотические продукты в профилактике и лечении наиболее распространенных заболеваний человека. /Материалы Всероссийской конференции с международным участием, 21-23 апреля 1999года, М.-214 с.

74. Работнова И.Л. Физиология микроорганизмов и управляемое культивирование. // Успехи микробиологии -1990 -Т.24. -С.88-99.

75. Равич Р. Натуропатия и БАД в интегральной медицине XXI века. // Материалы IV международного симпозиума. «Биологически активные добавки к пище: XXI век», С-Пб,22-24 мая 2000. -С.206-207.

76. Санитарные правила и нормы СанПиН 2.3.2.1078-01. «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов», М.: Минздрав России, 2002. 164с.

77. Сборник инструкций по селекции молочнокислых бактерий и бифидобактерий и подбору заквасок для кисломолочных продуктов. Москва, 1986.

78. Сидоров М.А., Субботин В.В. Опыт и перспективы применения молочнокислых бактерий и бифидобактерий // Мясная промышленность, 1997, №4. -С.23-24.

79. Синицын А.П., Зоров И.Н., Калугин В.В., Добриян Е.И., Рыжова С.А. Технологические свойства Р-галактозидазы //Молочная промышленность. -2001. №6. -С.55-56.

80. Синтез и экскреция В-галактозидазы Streptococcus thermophilus Молотов С.А., Данилевич В.Н., Линд P.M., Суходолец

81. B.В. // Биотехнология, 1991, №2. -С.33-37.

82. Смирнов В.В., Рева О.Н., Вьюницкая В.А. Создание и практическое применение математической модели антагонистического действия бацилл при конструировании пробиотиков, И Микробиология, 1995,т.64, №5. -С.661-667.

83. Смолянский Б.Л., Белова Л.В. Проблема «питание и болезни» и биологически активные добавки (БАД) к пище. // Материалы IV международного симпозиума. «Биологически активные добавки к пище: XXI век», С-Пб,22-24 мая 2000. -С.234-235.

84. Сохранение жизнеспособности и антагонистической активности бифидобактерий при субкультивировании, Новик Г.И., Астапович Н.И., Рябая Н.Е. //Микробиология, 1998, т.67, №5.1. C.631-636.

85. Спиричев В.Б., Шатнюк Л.Н. Обогащение пищевых продуктов микронутриентами: современные медико-биологические аспекты; ж. «Вопросы питания», 2000, №7. -С.98-99.

86. Сравнительное изучение гомологии ДНК у штаммов термофильных и мезофильных молочнокислых стрептококков различного происхождения Аверина О.В., Лысенко A.M., Ермакова

87. Л.М., Огай Д.К., Суходолец В.В. //Микробиология, 1998, №6, (ноябрь-декабрь). -С.729-799.

88. Степаненко П.П. Микробиология молока и молочных продуктов: Учебник для ВУЗов. Сергиев Посад: ООО «Все для Вас - Подмосковье», 1999.- 415с.

89. Степанов К.М. Антагонистическая и адгезивная активность микроорганизмов родов Lactobacillus и Bifidobacterium, используемых в качестве пробиотиков, автореферат МГУПБ.

90. Субботин В.В. Биотехнология пробиотика лактобифадола (бифацидобактерина) и его лечебно-профилактическая эффективность, автореферат дисс. на соискание уч. степени докт. вет. наук М.:- 41с.

91. Тихомирова Н.А. Учебное пособие. Технология продуктов лечебно-профилактического питания. М.: МГУПБ,2001. -242с.

92. Тулемисова К.А., Гаврилова Н.Б. Изучение антагонистических свойств ассоциаций культур, составленных из бифидобактерий и лактобацилл, //Известия Министерства науки АНРК, серия биологическая, г.Алмата, 1996,№4.- С.66-70.

93. Тутелян В.А., Спиричев В.Б., Шатнюк Л.Н. Коррекция микронутриентного дефицита важнейший аспект концепции здорового питания населения России.// Вопросы питания , 1999, №1. -С.23.

94. Фармацевтический вестник ,№30, 15 августа 2001.

95. Хамагаева И.С. Теоретическое обоснование и разработка технологии кисломолочных продуктов на основе использования В-галактозидазы и бифидобактерий. Автореф. дисс. На соиск. уч. степ, доктора техн. наук. -М.: МТИММП, 1989. -34 с.

96. Чернятина Л.Ф., Бережной В.Ф., Тулупова А.А. Методика оценки эффективности применения бифидумбактерина для профилактики гнойновоспалительных заболеваний новорожденных. // Журнал микробиология -1990 -№4. -С.36-39.

97. Шабетник Г.Д., Кузьмин В.М. Новое в производстве сухих бакконцентратов и БАД, // Молочная промышленность, 1999,№8. -С.27-29.

98. Шаманова Г.П. Научное обоснование и разработка технологии сухих молочных продуктов детского и диетического питания, обогащенных защитными факторами. -М, 1993.

99. Шевелева С.А. Пробиотики, пребиотики и пробиотические продукты. Современное состояние вопроса. //Вопросы питания,1999, №2. -С.32-39.

100. Шендеров Б.А. Медицинская и микробная экология и функциональное питание. Том 1. Микрофлора человека и животных и ее функции- М.: Грантъ,1998. 288с.

101. Шендеров Б.А. Медицинская и микробная экология и функциональное питание. Том 2. Социально-экологические и клинические последствия дисбаланса микробной экологии человека и животных. М.: Грантъ,1998. - 416с.

102. Шендеров Б.А. Медицинская и микробная экология и функциональное питание. Том 3. Пробиотики и функциональное питание. М.: Грантъ,2001. - 288с.

103. Шендеров Б.А., Манвелова М.А. Функциональное питание и пробиотики: микроэкологические аспекты. М.: Изд-во Агар, 24с.

104. Экспериментальное обоснование применения лактусана в качестве БАД. Щербакова Э.Г., Щербаков И.Т., Липатов Н.Н., Ким В.В. / Материалы Всероссийского конгресса «Питание детей XXI века», Москва 14-17 марта 2000.- С.85.

105. Эрвольдер Н.Ю. Разработка кисломолочного продукта для питания детей школьного возраста: Автореферат дисс. на соискание уч. степени канд. тех. наук. М.,2000.-21 с.

106. Янковский Д.С., Дымент Г.С., Потребчук Е.П., и др. Способ получения пробиотика «Симбитер-2» и способ производства с его использованием кисломолочного продукта // РЖ «Химия и технология пищевых продуктов», 2000, №7. -С. 12.

107. Chaitow L., N. Trener. Probiotics.Thorsons, London, 1990.

108. Collins J.К., Thornton G., Sullivan G.O. Selection of probiotic strains for yuman applications // Internetional dairy journal. -1998,8. .p. 487-490.

109. Cusick S.M., O'Sullivan D.J. 2000/ Use of singl, triplicate arbitrary primed-PCR procedure for molecular fingerprinting of lactis acid bacteria // Applied and Environmental Microbiology, v. 66 (5). -P.324-328.

110. Fooks Laura J., Roy Fuller, Glenn R. Gibson Prebiotics, probiotics and human gut microbiology // Internetional dairy journal. -1999,9.-P. 53-61.

111. Hoofvendahl Karin, Barbel Hahn-Hagerdal Factors affecting the fermentative lactis acid production from renewabl recources // J. Enzyme and Microbial Technology.-26 (2000). -P.87-107.

112. Kailasapathy K., Chin J. Survival and therapeutic potential of probiotic organisms with reference to Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium spp. //Immunol.Cell Biol.-2000.- Vol.78.- №1. -P.80-88.

113. Kotz C.M.,Furne J.K., Savaiano D.A., Levitt M.D. Factors affecting the ability of a high 13-galactosidase yogurt to anhance lactose absorption // J. of Dairy Sci. 1994.- Vol.77.- №12. -P. 35383544.

114. Liao W., Cui X.Y., C.H. Floren. Lfctulose-a potential drug for the treatment of inflammatory bowel disease // Mtd. Hypotheses, 1994, v. 43, №4. -P.234-238.

115. Margarida Baleiras Couto, Bob Eijsma, Harmen Hofstra. Evalution of molecular typing techniques to assign genetic diversity among Saccharomyces cerevisiae strains // Applied and Environmental Microbiology, Jan. 1996. -P. 41-46.

116. Mizota Т., Tamura Y., Tomita M. / Lactulose as a sugar with physiological significance // Bull. Int. Dairy Ecol.,'1987 -№212. -P.69- 76.

117. Mitsuoka T.,Hidaka H., Eida T. Effect of FOS on intestinal microflora. //Die Nahring 1987; 31. -P.427-436.

118. Nemcova R. Selection criteria of lactobacilli for probiotic use // Vet. Med.- Czech, 42, 1997 (1). -P.19-27.

119. Orrhage K., Nord C.E. Bifidobacteria and Lactobacilli in human health //Drugs Exp. Clin. Res.-2000.-vol.26.- №3.-P.95-111.

120. Probiotics: mechanisms and established effects, C. Ouwehand, Pirkka V. Kirjavainen, Colette Shortt, Seppo Salminen //Internetional dairy journal.-1999,9.-P. 43-52.

121. Rasic Y.L., Kurmann I.A. Bifidobacteria and their role. Microbiogical, nutritional-physiologal, medical and technological aspects and bibliographi/ Borknauseur Verlag, Rasel. Boston. Stuttgart, 1983. -1225 p.

122. Roberfroid M.B., Prebiotics and probiotics: are they functional foods? //Am. J. Clin. Nutr., 2000, 71 (Suppl.6). -P.1682S-1987S.

123. Sanders Mary Ellen Ovirview of functional foods: emphasis on probiotic bacteria // Internetional dairy journal. -1998,8 ,p.341-347.

124. Sanders Mary Ellen Probiotics // Food Technology.-1999. vol.53.-№11.-P.69-76.

125. Terada A., Hara H.,Shou-Tou Li et al Lecithinase positive Clostridia isolated from human feces on consamption of lactose and lactosucrous // Jap. J. Food Microbiology, 1994,v.l 1, №2. -P.l 19-123.

126. Vinderola C.G., Reinheimer J.A. Culture media for the enumeration of Bifidobacterium bifidum and Lactobacillus acidophilus in the presence of yoghurt bacteria // Internetional dairy journal. -1999,9. -P. 497-505.

127. Woese C. Bacterial evolution. Microbial. Rev. 1987. v.51., n.2. -P.221-271.

128. Yun J.W. Fructooligosaccharides Occurrence, preparation and Applications. Enzyme a Microbial Technol - 1996; 19. -P. 107-117.

129. Zeimer C.J., Gibson G.R. An overview of probiotics, prebiotics and simbiotics in the functional foods concept: perspectives and future strategies // Inter. Dairy J. 1998. -Vol.8. - № 5/6. -P.437-479.