автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.07, диссертация на тему:Совершенствование технологии получения растительного белка из нетрадиционных видов сырья на основе использования протеаз и ксиланаз микроорганизмов

МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ПРИКЛАДНОЙ БИОТЕХНОЛОГИИ

На правах рукописи

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТИТЕЛЬНОГО БЕЛКА ИЗ НЕТРАДИЦИОННЫХ ВИДОВ СЫРЬЯ НА ОСНОВЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРОТЕАЗ И КСИЛАНАЗ МИКРООРГАНИЗМОВ

Специальность 05.18.07 - Биотехнология пищевых продуктов

Евсеичева Мария Николаевна

(перерабатывающие отрасли АПК)

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата технических наук

Москва 2006

Работа выполнена на кафедре «Химия пищи и биотехнология» Московского государственного университета прикладной биотехнологии (МГУПБ).

Научный руководитель: кандидат технических наук, доцент

Румянцева Г.Н.

Официальные оппоненты: доктор технических наук, профессор

Бирюков В.В.

кандидат технических наук, доцент

Бердутина A.B.

Ведущая организация: ГНУ ВНИИ пищевой биотехнологии РАСХН

Защита диссертации состоится « 20 » декабря 2006 г в 14 часов на

заседании диссертационного совета Д 212.149.01 при Московском

государственном университете прикладной биотехнологии по адресу: 109316, Москва, ул. Талалихина, д. 33, Конференц-зал.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МГУПБ.

Автореферат разослан « /6» ноября 2006 г.

Учёный секретарь диссертационного совета Д 212.149.01, к.т.н., проф.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы: Одним из перспективных направлений в технологии получения белковых продуктов на сегодняшний день является рациональное использование вторичных продуктов переработки растительного сырья и создание на его основе различных форм пищевого белка.

Безусловный интерес в качестве дополнительного сырьевого ресурса для производства пищевых продуктов представляют белоксодержащие отходы мукомольного и пивоваренного производств — пшеничные отруби и солодовая дробина, образующиеся в большом количестве на предприятиях мукомольной и пивоваренной промышленности и недостаточно используемые для пищевых целей.

Учитывая высокое содержание белка в солодовой дробине (21,5 %), пшеничных отрубях (17 %) и семенах горчицы (35 %), актуальными являются исследования, направленные на разработку способа извлечения данных видов белка и использование их при производстве продуктов питания.

Как правило, в традиционных технологиях выделения белка из растительного сырья в качестве гидролизующего агента применяют неорганические реагенты (щелочь). Наиболее современным способом выделения белка является биотехнологический, основанный на действии ферментов микробного происхождения, имеющий ряд преимуществ: увеличение выхода; улучшение экологических условий производства; снижение энергозатрат на получение единицы продукции.

Исследования в области биокатализа, основанные на использовании ферментов с избирательным действием на субстраты белоксодержащего сырья, позволят предложить промышленности наиболее эффективные режимы гидролиза растительного сырья, в том числе отходов пищевых производств и получить белок, отвечающий требованиям пищевых производств.

Цели и задачи исследования

Основная цель диссертационной работы — совершенствование технологии получения белка из нетрадиционных видов растительного сырья: солодовой дробины, пшеничных отрубей и семян горчицы на основе использования наиболее эффективных ферментных препаратов микробного происхождения, содержащих протеазы и ксиланазы.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

• исследовать физико-химические характеристики белоксодержащего сырья; выбрать в качестве биокатализаторов наиболее эффективные ферментные препараты, гидролизующие структурные полимеры растительной клетки;

• провести анализ и исследовать гидролитическую способность ферментных препаратов различного спектра действия и выбрать наиболее активный препарат по действию на белоксодержащие субстраты различных видов сырья;

• определить оптимальные условия действия выбранных ферментных препаратов на субстраты сырья;

• изучить влияние индивидуальных ферментных препаратов на выход и качество белка из различных видов сырья, и учитывая это, выбрать наиболее эффективные ферментные препараты для интенсификации процесса;

• подобрать оптимальные режимы ферментативной обработки сырья;

• изучить продукты гидролиза компонентов белоксодержащего сырья, полученные с использованием препаратов протеаз микроорганизмов;

• исследовать основные характеристики полученных белковых препаратов по функционально-технологическим свойствам и аминокислотному составу белковых препаратов;

• разработать и испытать в опытно-промышленных условиях биотехнологический процесс ферментативной обработки сырья при получении растительных белков.

Научная новизна работы состоит в том, что: установлена возможность и целесообразность использования нетрадиционных источников: солодовой дробины, пшеничных отрубей и семян горчицы в производстве белковых препаратов;

- показана роль протеаз микроорганизмов Bacillus subtilis, Pénicillium emersonii и ферментов, разрушающих структурные полимеры растительной клетки: ксиланазы, целлюлазы, глюканазы (продуценты Trichoderma viride и Trichoderma reesei) в процессе выделения белка;

- показана возможность совместного действия новых ферментных препаратов протеазы из смешанных культур Bacillus subtilis и Pénicillium emersonii, а также ксиланазы Trichoderma viride, обеспечивающих максимальный выход белка при сохранении его.свойств;

- изучены продукты ферментативного гидролиза сырья (пшеничные отруби, солодовая дробина, семена горчицы) и экспериментально выделенные белки методом электрофореза в полйакриламидном" геле, идентифицированы белковые фракции, относящиеся в основном к альбуминам с определением их молекулярных масс; изучен их аминокислотный состав, свидетельствующий о повышенном в сравнении с эталоном ФАО/ВОЗ содержании фенилаланина и тирозина в белковом препарате из солодовой дробины и семян горчицы;

установлены функционально-технологические свойства

экспериментальных белков солодового, пшеничного и горчичного белков, полученных методом ферментативного катализа.

Практическая ценность работы:

- установлена возможность замены химических реагентов на стадии экстракции белоксодержащего сырья на ферменты микробного происхождения;

показана возможность интенсификации технологии получения пищевого белка из отходов мукомольного и пивоваренного производств за счет действия ферментных препаратов микробного происхождения;

- экспериментально обоснованы и разработаны рациональные режимы ферментативной обработки белоксодержащего сырья, позволяющие достичь максимального выхода белка;

- в технологии использован новый отечественный препарат Ксилозим (разработка НТЦ «Лекбиотех»)

- метод получения белка из солодовой дробины апробирован в опытно-промышленных условиях ООО «Гелла-ТЭКО».

Апробация работы. Результаты выполненного исследования были представлены на:

- III Московском Международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2005);

- IV Международной научной конференции «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва, 2005);

- Научно-практической конференции «Значение биотехнологии для здорового питания и решения медико-социальных проблем» (Калининград, 2005);

- 8-й Международном семинаре-презентации инновационных научно-технических проектов «Биотехнология-2005» (Пущино, 2005);

- Всероссийской выставке научно-технического творчества молодежи (Москва, 2006).

Публикации. По материалам работы опубликовано 7 работ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, включающей описание методов и объектов исследования, результатов экспериментов и их обсуждения, выводов, списка используемой литературы и патентов, а также приложений.

Работа изложена на /5^ страницах машинописного текста, содержит обзор литературы и патентов, включающий 13 таблиц, экспериментальный материал представлен в // таблицах и рисунках. Библиография включает 192 наименования работ отечественных и зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность темы диссертационной работы, показана значимость работы для пищевой биотехнологии.

В первой главе «Обзор научно-технической и патентной литературы» систематизированы сведения в области получения пищевого белка; приведена классификация растительных источников для его получения, свойства белковых продуктов, цель использования в составе пищевых продуктов.

Работы отечественных и зарубежных ученых (Браудо Е.Е., Траубенберг, Антипова JI.B., C.E.Underkoffler L.A., Hernandes J.) свидетельствуют о перспективности использования ферментных препаратов для гидролиза растительного сырья с целью получения белка.

Проблема безотходной переработки растительного сырья и как перспективное направление — биотехнологические способы его переработки, в том числе в производстве белка, освещена в работах Сницаря А.И., Колпаковой В.В.

Проведена сравнительная оценка используемых в настоящее время ферментных препаратов, показана перспектива их использования в пищевой промышленности. Основные работы в этой области представлены крупными учеными: Фениксовой Р.В., Грачевой И.М., Калунянцем К.А., Римаревой J1.B., Гернет М.В., Бравовой Г.Б. В заключение первой главы сформулированы цель и задачи исследования.

Во второй главе приведены схема постановки эксперимента, характеристики объектов исследования, описаны условия и методы определения изучаемых показателей.

Объектами исследования являлись: солодовая дробина, полученная после отделения сусла с влажностью 86 %, пшеничные отруби с влажностью 9 % и семена горчицы в виде порошка.

В качестве ферментных препаратов микробного происхождения использовали: протеазы Bacillus subtilis, комплексный препарат из смешанных культур Bacillus subtilis и Pénicillium emersonii, целлюлазы: Trichoderma viride и Trichoderma reesei, ксиланазу (продуцент- микроскопический гриб Trichoderma viride).

Каталитические активности ферментов: целлюлазы, р-глюканазы, ксиланазы, протеазы, амилазы, оценивали по стандартным методикам (ГОСТ 20264.3-81, ТУ 11249895-43-13-92).

Определение содержания белка осуществляли на полуавтоматическом приборе Кьельтек фирмы "Текатор" (Швеция) МГУПБ, а растворимого белка в экстрактах и концентратах — по методу Лоури в модификации НТЦ «Лекбиотех» (Ларина Л.Н., 2005).

Содержание общего количества полисахаридов в сырье, в том числе крахмала, целлюлозы, гемицеллюлозы осуществляли методом, основанным на гидролизе субстратов сырья до простых Сахаров (Ермаков А.И, 1987).

Для определения пектиновых веществ в сырье использовали метод выделения пектина, разработанный в МГУПБ (Румянцева Г.Н., 2004), количественное определение проводили согласно ТУ 10.963.27-91.

Качественные характеристики и функционально-технологические свойства: водо- и жироудерживающую способности, пенообразующую и эмульсионную способности, критическую концентрацию гелеобразования, долю растворимого белка, содержание влаги - проводили по общепринятым методикам.(Рогов И.А,, Гурова Н.В., Жаринов А.И., 2005)

Определение аминокислотного состава проводили по стандартным методикам на автоматическом анализаторе «Хитачи» КЛА-5.

Исследование молекулярной массы и проведение идентификации белка осуществляли методом электрофореза в полиакриламидном геле на приборе Mini Protean ("Bio-Rad", США). '

Обработку экспериментальных данных проводили с использованием методов математической статистики. (Бородин А.В., 2003)

В соответствии с анализом научно-технической литературы и патентов на предмет перспективности использования ферментативной обработки исследуемого растительного сырья, а также в соответствии с поставленной

целью работы и задачами исследования была разработана следующая схема постановки эксперимента (рис. 1).

На первом этапе проведен скрининг отечественных и зарубежных ферментных препаратов с учетом их каталитической активности и свойств. Осуществлен анализ различных видов белоксодержащего сырья по составу и качественным показателям.

На втором этапе осуществлен выбор источника белка и ферментных препаратов, необходимых для оптимизации процесса ферментативной обработки сырья с целью максимального извлечения белка.

На третьем этапе научно обоснованы и разработаны рациональные режимы биокатализа, включая гидромодуль, температуру, рН, дозу ферментного препарата, продолжительность гидролиза.

На следующем этапе апробирован процесс ферментативного получения белка в опытно-промышленных условиях в ООО «Гелла-ТЕКО» с целью наработки экспериментальных образцов, и определены качественные показатели белковых препаратов. Дана характеристика функционально-технологических свойств, фракционного и аминокислотного состава полученных образцов.

Характеристика белоксодержащего растительного сырья

На первом этапе в соответствии со схемой постановки эксперимента изучали химический состав сырья, используемого в дальнейших

исследованиях, и проводили его сравнительную оценку с целью выбора наиболее перспективного источника белка (табл. 1).

Таблица 1. Биохимические показатели используемого сырья

Наименование белоксодержащего сырья Содержание биополимеров в исследуемом сырье, % к массе сырья Влажность, %

Белковые вещества Пектинов ые вещества Гемицел-люлозы Целюло-за Крахмал

Пшеничные отруби 16,94 3,2 23,00 9,6 13,7 8,78

Солодовая дробина 21,49 2,5 32,00 15,00 2,8 7,83

Семена горчицы 35,87 0,5 8,2 4,6 2,0 7,66

Биохимический анализ показал, что сырьё значительно различается по содержанию белка, причем высокое содержание белковых веществ наблюдается в семенах горчицы: 35,87 %.

Исследования показали, что содержание гемицеллюлоз и целлюлозы в солодовой дробине значительно выше, чем в пшеничных отрубях, в то время

Рис. 1. Схема постановки эксперимента

как в отрубях преобладает содержание пектиновых веществ и крахмала.

Различия в химическом составе выбранных источников белка объясняются природой и особенностью используемого сырья: видом и сортом зерновых культур, их анатомическим строением; а также технологией получения основного продукта: солодовая дробина - отход пивоваренного производства, полученный на этапе отделения сусла, куда перешли растворимые вещества; пшеничные отруби — твердые отходы, полученные после помола зерна.

Данные таблицы свидетельствуют о различном количестве и соотношении субстратов для действия ферментов, выбор которого и определит эффективность действия в процессе выделения белка.

Изучение каталитических свойств ферментных препаратов

Анализ ферментных препаратов проводился по основным активностям, присутствие которых необходимо для максимального извлечения белка из сырья.

Одной из основных активностей, определяющей выбор ферментного препарата, являлась протеолитическая (табл. 2). Самой высокой активностью этого фермента обладает препарат нейтральной протеазы Bacillus subtilis, другие активности в препарате следовые. Препарат протеазы BZ из культуры Bacillus subtilis, помимо основного фермента, содержит активную амилазу и р-глюканазу. Комплексный препарат, полученный из смешанных бактериальной и грибной культур Bacillus subtilis и Pénicillium emersonii, обладает протеазной, целлюлазной, глюканазной, ксиланазной и амилазной активностями. Действие указанных ферментов направлено на гидролиз полисахаридов сырья.

Полученные экспериментальные данные, представленные в табл. 2, свидетельствуют о том, что высокую целлюлитическую активность имеют зарубежные препараты: целлюлаза L (продуцент Trichoderma reesei) - 7600 ед/мл.

Из исследованных препаратов высокой р-глюканазной активностью обладает ферментный препарат глюканаза Bacillus subtilis - 1034 ед/мл. В других препаратах р-глюканаза присутствует в значительно меньшем количестве от 110 до 407 ед/г (мл).

В результате анализа полученных данных установлено, что целесообразно использовать для протеолиза белоксодержащего сырья следующие препараты: протеазы ПВ, BZ (продуцент Bacillus subtilis), целлюлаза L (продуцент Trichoderma reesei), ксиланаза (Trichoderma viride), а также комплексный препарат из смешанных культур Bacillus subtilis и Pénicillium emersonii, обладающий как протеолитической, так и карбогидразной активностью.

На следующем этапе исследовали влияние температуры и рН на активность протеазы.

Оптимальный температурный режим ферментативной обработки белоксодержащего сырья определен для трех наиболее активных препаратов. Температуру варьировали от 30 до 70 °С с интервалом 5 °С. (Рис. 2)

Таблица 2. Сравнительная каталитическая характеристика ферментных

препаратов

Ферментный препарат (продуцент) Активность. ед/г(см3)

Протеоли тическая Амилоли тичес кая Р- глкжана зная Ксиланаз ная Целюлолити ческая

Компл. препарат ПР (Bacillus subtilis, Pénicillium emersonii) 93,33 480,0 148,5 330,0 480,0

Протеаза ПВ (Bacillus Subtilis) 485,0 следы следы 0 0

Протеаза BZ (Bacillus subtilis) 233,33 следы 21,3 0 0

Ксиланаза (Trichoderma viride) 0 0 98,6 1691,5 580,0

Целлюлоза L (Trichoderma reesei) 7,2 0 114,4 480,3 7600,0

Протеаза Чилл (растительного происхождения) 144.0 0 0 0 0

Температура, С Рис. 2. Влияние температуры на протеолитическую активность ферментных препаратов

—♦—Ферментный препарат ПВ —в—Ферментный препарат ПР Ферментный препарат BZ

Полученные зависимости позволяют выбрать оптимум температуры: для протеазы ПВ (Bacillus subtilis) и BZ (Bacillus subtilis) равный 45 + 5 °C, для комплексного препарата ПР (Bacillus subtilis и Pénicillium emersonii) оптимальная активность проявляется при температуре 50+5 °С.

Принимая во внимание тот факт, что активность ферментов существенно зависит от рН среды, было изучено влияние этого параметра на их каталитическую активность. Определение активности ферментных препаратов проводили в зоне рН от 4,5 до 8,0 при оптимальной температуре для каждого ферментного препарата (Рис.3).

•Ь: 600

г

3 500

§ 400

н

§• 300 Ь 200

о

| 100 -

4

рН

Рис. 3. Влияние рН на протеолнтическую активность ферментных препаратов

—♦—Ферментный препарат ПР —•—Ферментный препарат ПВ * Ферментный препарат BZ

Показано, что исследуемые препараты проявляют максимальную активность в зоне рН, равной для препаратов протеазы ПВ и BZ (продуцент Bacillus subtilis) 7,0; а для комплексного препарата ПР (Bacillus subtilis и Pénicillium emersonii) — 6,5.

Определение основных параметров ферментативной обработки

белоксодержащего сырья Так как основными факторами, влияющими на выход и качество белка, являются температура, рН, продолжительность, гидромодуль (соотношение сырьё: вода) и доза ферментного препарата, на следующем этапе провели определение данных параметров ферментативной обработки сырья.

Влияние температуры Ферментативного процесса на выход белка Исследования проводили с использованием наиболее эффективных ферментных препаратов: двух протеаз из культур Bacillus subtilis и комплексного препарата из смешанных культур Bacillus subtilis и Pénicillium emersonii. Режим температуры варьировали от 30 до 80 °С с интервалом 5 °С.

Исследования проводили, используя различные виды сырья: пшеничные отруби (рис. 4), солодовую дробину (рис. 5) и семена горчицы (рис. 6).

Из представленных данных видно, что лучшим ферментным препаратом по действию на пшеничные отруби и солодовую дробину является протеаза BZ, достигается практически полное извлечение белка из пшеничных отрубей, а из солодовой дробины - 77,34 %.

£ £

2. а-

в- ®

£> ч

2 о ш

« о 3

а о о.

2 § ¡5

5 |

» 5

ч з

о х

к и

¿1

120 | 100 -| во

60 40 20 о

20

30

40

50

60

80

90

Температура, С - ПР^^ПВ^К I

Рис. 4. Влияние температуры на выход белка из пшеничных отрубей

70 80 90

Температура,С

Рис. 5. Влияние температдеы па выход белка III пивной дробины

80 90

Температура.С

-вг •

-пр ■

-пв

Рис. 6. Влияние температуры на выход белка из горчицы

Показано, что действие трех исследуемых ферментных препаратов на семена горчицы проявляется приблизительно одинаково, достигается практически полное извлечение белка — 95 %.

Установлен рациональный температурный режим гидролиза для всех видов белоксодержащего сырья указанными ферментными препаратами, при котором достигается максимальный выход белка в экстракт: 45 + 5 °С для протеазы и BZ (Bacillus subtilis), 50 + 5°С для протеазы ПВ (Bacillus subtilis) и 70 °С для комплексного препарата ПР (Bacillus subtilis и Pénicillium emersonii).

Выбор рационального значения рН для ведения ферментативного гидролиза

Исследовано влияние рН смеси сырья с водой для трех видов белоксодержащего сырья в процессе гидролиза, варьировали показатель рН от 5,0 до 8,0 с шагом 0,5 при оптимальной температуре для каждого ферментного препарата.

Установлено, что в диапазоне значений рН 6,8-7,0 при действии ферментного препарата BZ (Bacillus subtilis) на субстраты пшеничных отрубей достигается максимальный выход белковых веществ (рис. 7), для препарата ПР - рациональным значением можно считать 6,5, для ПВ — 7,0.

Показано, что в случае действия ферментных препаратов на солодовую дробину (рис. 8) ПВ (Bacillus subtilis) проявляет максимальную активность при рН, равном 6,5, a BZ (Bacillus subtilis) и ПР (Bacillus subtilis и Pénicillium emersonii) — при рН — 6,0.

Установлено, что максимальный выход белка из семян горчицы (рис. 9) наблюдается в зоне рН, равной 6,0 для препарата ПР (Bacillus subtilis и Pénicillium emersonii), и рН, равном 6,5 для протеаз BZ и ПВ (Bacillus subtilis), что совпадает с диапазоном рН, в котором препараты проявляют максимальную протеолитическую активность.

На основании полученных данных можно сделать вывод о том, что для обработки белоксодержащего сырья не требуется дополнительной корректировки естественного значения рН. Для пивной дробины этот показатель соответствует 6,2-6,4, для пшеничных отрубей - 6,5-6,7, для горчицы 6,4-6,5.

Определение рациональных доз ферментных препаратов, необходимых для максимального извлечения белка

На следующем этапе проведено исследование влияния доз ферментных препаратов, полученных из культур Bacillus subtilis (BZ, ПВ), а также комплексного препарата из смешанных культур Bacillus subtilis и Pénicillium emersonii (ПР) на выход белка из пшеничных отрубей, солодовой дробины и семян горчицы. Концетрации ферментных препаратов варьировали от 0,01 до 0,25 % к массе сырья.

На основании полученных данных выбрана оптимальная доза для каждого ферментного препарата для трех исследуемых видов сырья (табл. 3).

рН

[—В2Н—П Р —П В~| Рисунок 7. Влияние [Н на выход белка из пиеничных отрубей

рН

[-^вг—»-ПР —пв] Рисунок 8. Влияние рН на выход белка из солодовой дробшы

рн

■ ^^ пв]

Рисунок 9. ВлияниерН на выход белка из семян горчицы

Таблица 3. Рекомендуемые дозы ферментных препаратов для обработки белоксодержащего сырья

Наименование сырья Ферментный препарат (продуцент)

Протеаза BZ (Bacillus subtilis) Протеаза ПВ (Bacillus subtilis) Комплексный препарат ПР (В. subtilis и Pénicillium emersonii)

Доза ферментного прешрата

%к массе сырья Ед/г ПС* %к массе сырья Ед/г ПС % к массе сырья Ед/г ПС

Солодовая дробина 0,15 0,350 0,05 0,2425 0,15 0,140

Пшеничные отруби 0,05 0,117 0,05 0,2425 0,15 0,140

Семена горчицы 0,1 0,233 0,15 0,727 0,05 0,047

*ПС-протеолитическая активность

Изучение динамики накопления белка в экстрактах и определение продолжительности ферментативного процесса

На следующем этапе исследований изучена динамика накопления белковых веществ в процессе гидролиза - экстрагирования белка во временном диапазоне от 0,5 до 6 ч с использованием исследуемых ферментных препаратов в оптимальных дозировках.

Установлено, что для пшеничных отрубей при использовании протеазы Bacillus subtilis (BZ) и комплексного препарата из смешанных культур Bacillus subtilis и Pénicillium emersonii (ПР) достаточно двух часов ферментативной обработки; при использовании протеазы Bacillus subtilis (ПВ) время гидролиза увеличивается до 4 ч (рис.10).

Показано, что при действии используемых ферментных препаратов на солодовую дробину максимальный выход белка в экстракт достигается при четырехчасовом гидролизе (рис.11); для горчицы выявлено, что время гидролиза для вышеуказанных ферментов составляет 3 и 4 ч соответственно (рис. 12).

3 4 5 6

Продолжительность гидролиза, ч

-ПР ■

-вг

Рис. 10. Динамика процесса ферментативного гидролиза пшеничных огрубей

100 90 80 70 60 50 40 30

4 5

Продолжительность

гидролиза.ч

I ф—пр —*- пв |

Рис. 11. Динамика процесса ферментативного гидролиза пивной дробины

!»

£ *

и м

га и

е-»

" I

и я

« *

в 8

О й х Я 3 £ ш

120 100 80 60 40 20 о +

4 5 6 7

Продолжительность гидролиза, ч

-ПР

-ПВ

-вг

Рис. 12. Динамика процесса ферментативного гидролиза горчицы

Экспериментальные данные по режимам ферментативного гидролиза были подвергнуты математической обработке. Проведен регрессионный анализ изменения выхода белка в экстракт в зависимости от температуры ферментативного процесса, его продолжительности, гидромодуля, дозы вносимого ферментного препарата и величины рН с использованием трех ферментных препаратов. Проверена адекватность моделей. Отмечена сходимость полученных экспериментальных режимов и расчетных данных. В результате математической обработки данных выявлены оптимальные параметры процесса ферментативной обработки (табл.4). Таблица 4. Оптимизированные параметры выделения белка из различных

источников

Параметры процесса Пшеничные отруби Солодовая дробина Семена горчицы

Ферментные препараты

BZ ПВ ПР BZ ПВ ПР BZ ПВ ПР

Температура, °С 45 55 70 45 50 70 45 50 70

Продолжительность, Ч 2 3 2 4 4 4 3 4 4

Гидромодуль (сырье : вода) 1:9 1:9 1:9 1:9 1:10 1:10 1:9 1:9 1:10

рН 7,0 7,0 6,5 6,5 6,0 6,0 6,5 6,5 6,0

Доза ферментного препарата, % к массе сырья 0,05 0,05 0,15 0,15 0,05 0,15 0,1 0,15 0,05

Выход белка, % от максимального содержания в сырье 92±3 51±3 52±3 80±3 70±3 63±3 94±3 85±3 89±3

В результате использования оптимизированых параметров процесса ферментативного гидролиза достигнут максимальный выход белка с использованием ферментного препарата BZ (Bacillus subtilis) из пшеничных отрубей - 92 ± 3 %, из солодовой дробины - 80 ± 3 %, из горчицы - 94 ± 3%.

Обработка сырья ферментными препаратами ксиланазного и целлюллитического действия Протеазы обладают способностью непосредственно воздействовать на белковые молекулы, однако известно, что ферментные препараты, гидролизующие полисахариды клеточной стенки (гемицеллюлозы, целлюлозы), способствуют увеличению выхода экстрактивных веществ ( Румянцева Г.Н., Даниленко А.Н.).

Исследовали возможность использования микробных препаратов Ксилозима (КС) продуцент ТпсЬос)егта утс1е для улучшения процесса экстракции белка в водный раствор. Причем действие КС изучали при разных значениях рН (рис.13, 14), остальные параметры для процесса гидролиза: температура, продолжительность и гидромодуль были установлены ранее для трех видов сырья.

14

и s 12

& 10

о

1 2 8

s & | è 6

е 4

| 2

S 0

О 0,05 0,1 0,15 0,2

Доза ферментного препарата в % к массе сырья

0,25

-рН ест■

К 1

-рН =5,5

К 2

Рис.13. Выделение белка из пшеничных отрубей при совместном действии ферментных препаратов КС ■■ ПВ при различных pli среды

К1 - контроль только с применением ФП ПВ (0,05 %) при естественном рН смеси;

К2 - контроль только с применением ФП ПВ (0,05 %) при рН 5,5

О 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3

Доза ферментного препарата в %к массе сырья

[ а рН ест. - - - - - К 1 —" Рн =5.5 ------ К 2 ]

Рис. 14. Выделение белка из солодовой дробины при действии ферментных препаратов КС н ПВпри различных pli среды К1 - контроль без фермента при естественном рН; К2 — контроль без фермента при рН 5,5

Максимальное извлечение белка наблюдается при внесении ферментного препарата КС в дозировке, равной 0,05 % к массе сырья при естественном рН.

В результате совместного применения ПВ и КС было выделено 12,56 % белка в пересчете на сухое вещество. В результате этого опыта было выделено 73,8 % белка от его содержания в сырье, что больше, чем при применении только ферментного препарата ПВ.

При внесении ферментного препарата КС в дозировке, равной 0,1 % к массе сырья, при рН, равном 5,5 наблюдается максимальное извлечение белка в экстракт.

Показано, что совместное применения протеазы ПВ и ферментного препарата КС позволяет достичь извлечения 14,1 % белка в пересчете на сухое вещество, В результате этого опыта было выделено 75,61 % белка от его содержания в сырье, что больше, чем при применении только ферментного препарата ПВ.

В результате проведённых исследований установлено, что из всех исследуемых ферментативных препаратов наиболее эффективным для выделения белка из растительного сырья являются протеазы Bacillus subtilis, ксиланаза Trichoderma viride.

Исследование состава и свойств экспериментальных образцов белковых препаратов

Изучение продуктов ферментативного гидролиза методом электрофореза в полиакриламидном геле На данном этапе исследований целесообразным считали изучить фракционный состав как сырьевых источников, не подвергнутых гидролизу, так и белковых продуктов, полученных в процессе ферментативного гидролиза препаратами BZ (продуцент Bacillus subtilis) и ПМ из культур Bacillus subtilis и Pénicillium emersonii. Режимы протеолиза соответствовали установленным раннее для всех видов сырья. Основными критериями оценки являлись изменение молекулярной массы полипептидов и идентификация продуктов ферментативного гидролиза.

Данные, представленные на электрофореграмме, свидетельствуют о различии в действии ферментных препаратов на изучаемые сырьевые источники белка (рис.15).

Так, в случае использования пшеничных отрубей (рис.15 образцы 1,2) в полученном образце белкового продукта выделены фракции, с молекулярной массой от 20 и 29 кДа, - это соответствует альбуминовой фракции. Из данных , представленных на рис. 15 видно, что полипептиды с молекулярной массой от 36 и до 66 кДа подверглись гидролитическим изменениям в результате действия микробных протеаз.

Белковый продукт, полученный из горчицы, (рис.15 образцы 3, 4, 7, 8) имеет несколько фракций с молекулярной массой 20, 22, 29 и 36 кДа. Фракционный состав практически не отличается от исходного состава полипептидов в сырье. Исходя из этого, можно сделать вывод о том, что в процессе воздействия на сырье ферментных препаратов белковые фракции не

претерпели гидролитических изменений. Установлено, что гидролизу были подвергнуты только низкомолекулярные продукты с молекулярной массой ниже 14 кДа.

Из электрофореграммы видно также, что исходное сырье — солодовая дробина имеет очень много не только белковых компонентов, но и примесей небелковой природы (рис.15, образец 5). В процессе ферментативного гидролиза сырья происходит очистка белковых фракций от небелковых компонентов и гидролиз полипептидов с молекулярной массой менее 45 кДа. В полученном белковом препарате из солодовой дробины отмечено наличие двух полипептидных фракций, имеющих молекулярную массу от 45 до 66 кДа. (Рис.25 образец 6).

Отсутствие других полипептидных фракций в образце солодового белка свидетельствует о высокой чистоте ферментативно полученного белкового препарата.

В коммерческих препаратах пшеничного белка (фирма «Геметик», Голландия) (рис.15, образец 7, 8) четкого разделения на фракции не произошло из-за высокого содержания примесей.

кДа кДа

М 1 2 3 4 56 7 в М

Рис.15. Анализ фракционногосостава полученных образцов белков:

1 - отруби пшеничные, 2 - белковый препарат из отрубей; 3 - горчичный порошок, 4 - белковый препарат из горчицы; 5 - дробина солодовая, 6 -белковый препарат из солодовой дробины; 7,8 - коммерческие препараты пшеничного белка, М - белки-маркеры

Из представленных данных можно сделать вывод, что наибольшей молекулярной массой — более 45 кДа — из всех экспериментальных белковых препаратов обладает белковый препарат, полученный из солодовой дробины. Тогда как из пшеничных отрубей выделены фракции, с молекулярной массой от 20 и 29 кДа, а белковый продукт, полученный из горчицы, имеет несколько

фракций с молекулярной массой 20, 22, 29 и 36 кДа. Очевидно, что все выделенные фракции имеют альбуминовую природу.

Изучение аминокислотного состава экспериментальных образцов исследуемых белковых препаратов, полученных методом ферментативного гидролиза белоксодержащего сырья показало присутствие дефицитных аминокислот: в препарате из пшеничных отрубей и горчичном - изолейцин, в солодовом — лизин, а также свидетельствует о повышенном в сравнении с эталоном ФАО/ВОЗ содержании фенилаланина и тирозина в белковом препарате из солодовой дробины и семян горчицы (табл. 5).

Таблица 5. Сравнительная оценка аминокислотного состава белковых препаратов, полученных методом ферментативного гидролиза

Белковые препараты Содержание незаменимыхаминокислот, г/ 100 г белка

Изолейцин Лейцин Лизин Метионин + цистин Фенилала-нин + тирозин Треонин Триптофан Валин

Эталон ФАО/ВОЗ г/100 г 4,0 7,0 5,5 3,5 6,0 4,0 1,0 5,0

из пшеничных отрубей 1,5 2,6 1,27 1,45 2,2 1,16 - 1,82

из солодовой дробины 4,1 7,6 4,9 2,5 13,2 4,2 1,1 4,4

из семян горчицы 3,62 6,43 2,82 2,51 7,16 3,09 - 3,78

Изучение функционально - технологических свойств белковых препаратов

С целью изучения возможности использования полученных белковых препаратов в пищевых продуктах представлялось целесообразным провести оценку их основных функционально-технологических характеристик (табл.6). Таблица 6. Функционально - технологические свойства белковых

препаратов

Объект рН 10%-суспензии Доля растворимого белка, % ККГ, % ВУС, г/г ЖУС, г/г Устойчивость эмульсии, % ПОС, %

20°С 74°С

Экспериментальные образцы

Белковый продукт из пшеничных отрубей 6,44 57,98 90,1 60 1 :2,5 1 : 1 58 140

Белковый продукт из солодовой дробины 6,39 72,58 40,59 Геля не образует 1 :1,5 1 : 1,5 45 Д 80

Белковый продукт из горчицы 6,56 71,0 7437 Геля не образует 1:1,7 1 : 1,5 85 -

Контроль

Мука соевая обезжиренная 6,8 18,5 77,0 25 1:2,9 1: 1,07 - -

Пшеничный коммерческий препарат 6,4 26,8 81,2 20 1:2,5 1:0,95 - 150

При изучении функционально-технологических свойств полученных белковых препаратов установлено, что препараты из пшеничных отрубей и солодовой дробины обладают высокой пенообразующей способностью (ПОС).

По показателям водоудерживающей и жироудерживающей способностей (ВУС и ЖУС) препарат из пшеничных отрубей, полученный экспериментально, не уступает коммерческому аналогу. У препарата из семян горчицы выявлена высокая эмульсионная способность (85 %), что позволит использовать данные препараты в производстве молочных, мясных и некоторых других продуктов.

ВЫВОДЫ

1. При изучении химического состава нетрадиционного сырья установлено количественное содержание белков — субстратов для действия протеолитических ферментов: в пшеничных отрубях — 17 %, в солодовой дробине -21,5 %, в семенах горчицы — 35,87 %.

2. На основании исследования семи ферментных препаратов по составу и каталитической активности основных ферментов выявлены две группы ферментов: первая — обладающие протеолитической активностью, вторая

- разрушающие полисахариды сырья.

3. Оптимальными условиями действия ферментных препаратов является:

- температура для протеаз ПВ и BZ (продуцент Bacillus subtilis) 45 + 5°С, для комплексного препарата ПР(продуцент Bacillus subtilis и Pénicillium emersonii)-50+5oC;

- рН для протеаз ПВ и BZ (Bacillus subtilis) — 7,0, для комплексного препарата ПР (Bacillus subtilis и Pénicillium emersonii) — 6,5.

4. Наиболее активными препаратами по действию на пшеничные отруби и семена горчицы являются протеаза BZ, на солодовую дробину — протеазы ПВ и BZ.

5. Оптимальными параметрами процесса ферментативной обработки являются:

- для пшеничных отрубей продолжительность гидролиза 2 часа, pH 7,0, гидромодуль — 1 : 9;

- для солодовой дробины — продолжительность гидролиза 4 часа; pH 6,5, гидромодуль 1:9;

- для горчицы продолжительность гидролиза 3 часа; pH 6,5, гидромодуль 1:9.

6. Показано, что совместное действие протеазы Bacillus subtilis и ксиланазы Trichoderma viride дает дополнительное увеличение выхода белка из пшеничных отрубей на 10 %, из солодовой дробины - на 15%.

7. Изучение белковых продуктов, полученных в процессе ферментативного гидролиза, позволило идентифицировать основные альбуминовые фракции с молекулярной массой от 20 до 29 кДа в препарате из пшеничных отрубей, от 45 до 66 кДа в препарате из солодовой дробины, и 29-36 кДа в препарате из семян горчицы

8. Данные аминокислотного состава экспериментально полученных белков свидетельствуют о повышенном в сравнении с эталоном ФАО/ВОЗ содержании фенилаланина и тирозина в белковом препарате из солодовой дробины и семян горчицы.

9. При изучении функционально-технологических свойств полученных белковых препаратов выявлена высокая пенообразующая способность у пшеничного (140 %) и солодового (80 %) белков, высокая эмульсионная способность у препарата из семян горчицы (85 %), что позволит использовать данные препараты в производстве пищевых продуктов.

10.На основании полученных экспериментальных данных усовершенствован процесс ферментативной обработки сырья при выделении растительных белков из нетрадиционных видов: солодовая дробина, пшеничные отруби, семена горчицы. Представлена принципиальная технологическая схема их производства.

11. Предполагаемый эффект от внедрения биокатализа в получение пищевого белка составляет 40,9 руб. на 1 кг продукта.

Выражаю благодарность директору НТЦ «Лекбиотех» Бравовой Г.Б. и сотрудникам центра: [Шишковой Э.А.|, Павловой Н.М. и Лариной Л.Н. за предоставление ферментных препаратов ксиланазы и целлюлазы, а также к.т.н., доценту, генеральному директору ОАО «Гелла-ТЭКО» Свитцову A.A. и главному технологу Горячему Н.В. за организацию опытно-промышленных испытаний.

По материалам диссертации опубликованы следующие работы: 1. Румянцева Г.Н. Изучение зернового сырья как источника получения пищевого белка / Г.Н. Румянцева, М.Н. Евсеичева // Биотехнология: состояние и перспективы развития: Материалы II Московского Международного конгресса. - М., 2005. - С. 149.

2. Румянцева Г.Н. Влияние ферментных препаратов протеолитического действия на белоксодержащее сырье / Г.Н. Румянцева, М.Н. Евсеичева // Хранение и переработка сельхозсырья. — 2005. — №7. — С. 31 -32.

3. Румянцева Г.Н. Влияние режимов протеолиза на выход белка из растительных источников / Г.Н. Румянцева, М.Н. Евсеичева // Биотехнология-2005: Материалы Международного семинара-презентации инновационных научно-технических проектов. - Пущино, 2005. - С. 109-110.

4. Румянцева Г.Н. Ферментативное выделение белка из семян горчицы Г.Н. Румянцева, М.Н. Евсеичева // Значение биотехнологии для здорового питания и решения медико-социальных проблем: Материалы научно-практической конференции. - Калининград. 2005. — С.81 - 82.

5. Евсеичева М.Н., Изучение каталитической активности ферментных препаратов, предназначенных для выделения белка / М.Н. Евсеичева, Г.Н. Румянцева // Живые системы и биологическая безопасность населения: Материалы 4-й Международной научной конференции студентов и молодых ученых. - М.: МГУПБ, 2005. - С. 25 - 26.

6. Евсеичева М.Н. Использование ксиланазы Trichoderma viride в процессах выделения пищевого белка / М.Н. Евсеичева, Г.Н. Румянцева, Д.А. Акишина // Живые системы и биологическая безопасность населения: Материалы 5-ой Международной научной конференции студентов и молодых ученых. - М.: МГУПБ, 2006. - С. 30 - 31.

7. Макурина C.B. Биокатализ в процессах получения пищевых добавок из растительного сырья / C.B. Макурина, М.Н. Евсеичева, М.И. Осадько // Живые системы и биологическая безопасность населения: Материалы 5-ой Международной научной конференции студентов и молодых ученых. - М.: МГУПБ, 2006. - С. 7 - 8.

Подписано в печать 14.11.2006. Формат60*84 1/16.

Печать лазерная. Усл.печ.л. 1,75.

Заказ,У/<2*>. Тираж 100 экз.

МГУПБ 109316, Москва, ул. Талалихина,33.

ООО «Полигувенир» 109316, Москва, ул. Талалихина,33.

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКОЙ И ПАТЕНТНОЙ

ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Характеристика белоксодержащего сырья растительного происхождения.

1.1.1. Источники получения растительного белка, их отличительные особенности.

1.1.2. Характеристика пшеничных отрубей как белоксодержащего зернового сырья и их использование при производстве продуктов питания.

1.1.3. Пивная дробина как сырье для получения солодового белка, ее применение в кормах сельскохозяйственных животных и продуктах питания.

1.1.4. Семена горчицы - один из перспективных масличных источников белка, пути его использования.

1.2. Состав и строение белков зерновых и масличных культур

1.3. Ферменты - биокатализаторы белковой природы и современные представления о них.

1.3.1. Механизм действия ферментов.

1.3.2. Источники получения ферментов растительного, животного и микробного происхождения.

1.3.3. Протеолитические ферменты и области их применения.

1.4. Применение ферментов при получении белковых добавок.

В настоящее время в структуре питания населения пашей страны доминирует углеводная пища и остро ощущается дефицит белка, в частности животного и незаменимых аминокислот. Только половина населения России обеспечена минимальной необходимой нормой потребления пищевого белка |126|.

Одним из перспективных направлений в сокращении белкового дефицита па сегодняшний день является рациональное использование растительного сырья и создание па его основе различных форм пищевого белка.

Как известно, в настоящее время, основным промышленным источниками белка остается соя. Второе место занимает пшеница, далее следуют другие зерновые, масличные и зернобобовые культуры.

По немаловажным остается решение проблемы переработки вторичных ресурсов, в частности белоксодсржащих отходов мукомольного и и и во варе пи о го i ipo и з во; ictb .

Па сегодняшний день активное развитие приобретает биотсхпологический способ, основанный па действии ферментов микробного происхождения, используемых в качестве гидролизующих агентов. Ферментативный гидролиз имеет ряд неоспоримых технологических преимуществ, главное из которых увеличение выхода белка при сохранении его функционально-технологических свойств.

Такие исследования позволят предложить промышленности эффективные ферментные препараты микробного происхождения и режимы их использования в технологии получения белковых продуктов.

Лктуилыюси, работы: Одним из перспективных направлений в технологии получения белковых продуктов па сегодняшний день является рациональное использование вторичных продуктов переработки растительного сырья и создание па его основе различных форм пищевого белка.

Безусловный интерес в качестве дополнительного сырьевого ресурса для производства пищевых продуктов представляют белоксодсржащие отходы мукомольного и пивоваренного производств - пшеничные отруби и солодовая дробина, образующиеся в большом количестве па предприятиях мукомольной и пивоваренной промышленности и недостаточно используемые для пищевых целей.

Учитывая высокое содержание белка в солодовой дробипс (21,5 %), пшеничных отрубях (17 %) и семенах горчицы (35 %), актуальными являются исследования, направленные на разработку способа извлечения данных видов белка и использование их при производстве продуктов питания.

Как правило, в традиционных технологиях выделения белка из растительного сырья в качестве гидролизующего агента применяют неорганические реагенты (щелочь). Наиболее современным способом выделения белка является биотсхпологический, основанный па действии ферментов микробного происхождения, имеющий ряд преимуществ: увеличение выхода; улучшение экологических условий производства; снижение энергозатрат па получение единицы продукции.

Исследования в области биокатализа, основанные на использовании ферментов с избирательным действием па субстраты белоксодержащего сырья, позволят предложить промышленности наиболее эффективные режимы гидролиза растительного сырья, в том числе отходов пищевых производств и получить белок, отвечающий требованиям пищевых производств.

Научная новизна работы состоит в том, что: установлена возможность и целесообразность использования нетрадиционных источников: солодовой дробины, пшеничных отрубей и семян горчицы в производстве белковых препаратов;

- показана роль протеаз микроорганизмов Bacillus subtilis, Penicillium emersonii и ферментов, разрушающих структурные полимеры растительной клетки: ксилапазы, целлюлазы, глюкапазы (продуценты Trichoderma viridc и Trichoderma rcesei) в процессе выделения белка;

- показана возможность совместного действия новых ферментных препаратов протеазы из смешанных культур Bacillus subtilis и Pcnicillium emersonii, а также ксилапазы Trichoderma viridc, обеспечивающих максимальный выход белка при сохранении его свойств;

- изучены продукты ферментативного гидролиза сырья (пшеничные отруби, солодовая дробина, семена горчицы) и экспериментально выделенные белки методом электрофореза в полиакриламидпом геле, идентифицированы белковые фракции, относящиеся в основном к альбуминам с определением их молекулярных масс; изучен их аминокислотный состав, свидетельствующий о повышенном в сравнении с эталоном ФЛО/ВОЗ содержании фенилалапипа и тирозина в белковом препарате из солодовой дробины и семян горчицы; установлены фупкциопалыю-тсхпологичсскис свойства экспериментальных белков солодового, пшеничного и горчичного белков, полученных методом ферментативного катализа.

Практическая ценность работы:

- установлена возможность замены химических реагентов па стадии экстракции бслоксодержащего сырья па ферменты микробного происхождения;

- показана возможность интенсификации технологии получения пищевого белка из отходов мукомольного и пивоваренного производств за счет действия ферментных препаратов микробного происхождения;

- экспериментально обоснованы и разработаны рациональные режимы ферментативной обработки белоксодержащего сырья, позволяющие достичь максимального выхода белка;

- в технологии использован новый отечественный препарат Ксилозим (разработка IГП \ «Лекбиотсх»)

- метод получения белка из солодовой дробины апробирован в опытпо-промыпиюпных условиях ООО «Гслла-ТЭКО».

Апробация работы. Результаты выполненного исследования были представлены на: III Московском Международном кошрсссе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2005); IV Международной научной конференции «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва, 2005); Научно-практической конференции «Значение биотехнологии для здорового питания и решения медико-социальных проблем» (Калининград, 2005); 8-й Международном ссмипарс-прсзеитации инновационных научно-технических проектов «Биотсхнология-2005» (Пущипо, 2005); Всероссийской выставке научно-технического творчества молодежи (Москва, 2006).

Публикации. По материалам работы опубликовано 7 работ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, включающей описание методов и объектов исследования, результатов экспериментов и их обсуждения, выводов, списка используемой литературы и патентов, а также приложений.

выводы

1. При изучении химического состава нетрадиционного сырья установлено количественное содержание белков - субстратов для действия нротсолитических ферментов: в пшеничных отрубях - 17 %, в солодовой дробине - 21,5 %, в семенах горчицы - 35,87 %.

2. Па основании исследования семи ферментных препаратов по составу и каталитической активности основных ферментов выявлены две группы ферментов: первая - обладающие протсолитической активностью, вторая - разрушающие полисахариды сырья.

3. Оптимальными условиями действия ферментных препаратов является:

- температура для протеаз ПВ и BZ (продуцент Bacillus subtilis) 45 + 5°С, для комплексного препарата ПР(продуцепт Bacillus subtilis и Pcnicillium cmcrsonii)-50+5°C;

- рП для протеаз ПВ и BZ (Bacillus subtilis) - 7,0, для комплексного препарата 1 IP (Bacillus subtilis и Pcnicillium cmersonii) - 6,5.

4. Наиболее активными препаратами по действию па пшеничные отруби и семена горчицы являются протсаза BZ, на солодовую дробину -про тсазы I IB и BZ.

5. Оптимальными параметрами процесса ферментативной обработки являются:

- для пшеничных отрубей продолжительность гидролиза 2 часа, pi I 7,0, гидромодуль -1:9;

- для солодовой дробины - продолжи тельность гидролиза 4 часа; рП 6,5, гидромодуль 1 : 9;

- для горчицы продолжительность гидролиза 3 часа; рП 6,5, гидромодуль 1 : 9.

6. Показано, что совместное действие протсазы Bacillus subtilis и ксилапазы Trichoderma viride дает дополнительное увеличение выхода белка из пшеничных отрубей па 10 %, из солодовой дробины - на 15 %.

7. Изучение белковых продуктов, полученных в процессе ферментативного гидролиза, позволило идентифицировать основные альбуминовые фракции с молекулярной массой от 20 до 29 кДа в препарате из пшеничных отрубей, от 45 до 66 кДа в препарате из солодовой дробины, и 29-36 кДа в препарате из семян горчицы

8. Данные аминокислотного состава экспериментально полученных белков свидетельствуют о повышенном в сравнении с эталоном ФЛО/ВОЗ содержании фспилалапипа и тирозина в белковом препарате из солодовой дробины и семян горчицы.

9. При изучении фупкциопалыю-тсхпологических свойств полученных белковых препаратов выявлена высокая пенообразующая способность у пшеничного (140 %) и солодового (80 %) белков, высокая эмульсионная способность у препарата из семян горчицы (85 %), что позволит использовать данные препараты в производстве пищевых продуктов.

10. Па основании полученных экспериментальных данных усовершенствован процесс ферментативной обработки сырья при выделении растительных белков из нетрадиционных видов: солодовая дробина, пшеничные отруби, семена горчицы. Представлена принципиальная технологическая схема их производства.

11. Предполагаемый эффект от внедрения биокатализа в получение пищевого белка составляет 40,9 руб. па 1 кг продукта.

1. Агаларова JI.A. Разработка технологии паштета, содержащего иротеазный гидролизат гороха: авторефер. дис. . канд. техн. наук. -М., 2000.-С. 23.

2. Алсксаняп И.10. Исследование процесса сушки при утилизации отходов спиртового и пивного производств / И.Ю. Алсксаняп, 10.А. Максимсико // Известия ВУЗов. Пищевая технология. 2004. - №4. -С.59-60.

3. Аптипова JI.B. Разработка некоторых условий ферментативного гидролиза белков чечевицы / JI.B. Аптипова, П.Н. Курчасва //Хранение и переработка сельхозсырья. 2001. - № 6. - С. 18-21.

4. Аптипова Л.В. Применение микробных протеолитичсских ферментных препаратов для интенсификации созревания мяса / Л.В. Аптипова, Е.М. Сидслышков, Л.10. Бубнова Воронеж: Мясомолпром, 1991. - 36 с.

5. Антонов Ю.А. Применение метода безмембрапиого осмоса для концентрирования белков из молекулярпо-диспсрсиых и коллоидно-дисперсных растворов (обзор) / Ю.А. Антонов // Прикладная биохимия и микробиология. 2001. - т. 36. - № 4. - С. 380-394.

6. Арссиьева Т.П. Справочник технолога молочного производства. Технология и рецептуры. Т.4. Мороженое / Т.П. Арсепьева. СПб: ГИОРД, 2003.-184 с.

7. Аузрмап Л.Я. Технология хлебопекарного производства / Л.Я. Ауэрмаи. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. - 416 с.

8. Бачурская Л.Д. Пищевые концентраты / Л.Д. Бачурская, В.II. Гуляев. -М.: Пищевая промышленность, 1976. 335 с.

9. Ю.Ьендср М. Биологическая химия ферментативного катализа / М. Бендср, Р. Бсргероп и др. М.: Мир, 1987. - 352 с.

10. П.Бсрезип И.В. Основы физической химии ферментативного катализа / И.В. Бсрсзип, К. Мартипек. М.: Высшая школа, 1977. -279 с.

11. Бсрпхард С. Структура и функции ферментов / С. Бсрпхард. М.: Мир, 1971. - 334 с.

12. Биотехнология биологически активных веществ. Учебное пособие для студентов высших учебных заведений / под ред. И.М. Грачевой, Л.Д. Ивановой. -М.: Элевар, 2006.-453 с.

13. Бородин А.В. Математическая статистика. Учебно-методическое пособие для студентов технических специальностей / А.В. Бородин. -М.: МГУ ГШ, 2003.-56 с.

14. Булгаков И.И. Химия солода и пива / II.И. Булгаков. М.: Пищевая промышленность, 1978. -205 с.

15. Быкова И.А Разработка способов использования пивной дробины в качестве компонента различных биологических систем: авторсф. дис. . канд. техн. паук. Оренбург, 2003 - С. 23.

16. Васип А.В. Диагностика отравлений животных и птицы / А.В. Васин, 10.II. Квиткип. Саратов, 1957. - 54 с.

17. Волокитила З.В. Технология молока и молочных продуктов: программа, методические указания и контрольные задания для студентов специальности 271100 / З.В. Волокитина, Л.В. Калинина. -М., 2003.-65 с.

18. Волоичук С.К. Растительные протеолитичсские ферменты для обработки мясного и рыбного сырья / С.К. Волопчук, В.Ф. Косторпой, Л.11. Шорпикова // Пищевые ингредиенты. Сырье и добавки. 2000. -№2.-С. 52-54.

19. Востриков С.В. Оптимизация условий протеолиза спиртовой дробины некоторыми прогсолитичсскими ферментными препаратами / С.В. Востриков, II.В. Саутипа, М.А. Бушип // Храпение и переработка сельхозсырья. 2005. - №11.-С. 39-41.

20. Гарсев Р.Г. Рапс культура высокого экономического потенциала / Р.Г. Гареев. - Казань: Дом печати, 1996. - 242 с.

21. Глемжа А.А. Микробные ферменты в народном хозяйстве / А.А. Глемжа, Л.Я. Люджюс, Л.И. Петрова. Вильнюс: Мокслас, 1985. - 188 с.

22. Голспков В.Ф., Игоряпова П.А. // Деп. в ЦНИИТЭИ хлебопродуктов 24.10 86, №719.24.1'олепков В.Ф. Белки и витамины различных мельничных потоков пшеничных отрубей / В.Ф. Г'олеиков, П.А. Игоряпова // Вопросы питания. 1986. - №4. - С. 68-71.

23. Горлов И.Ф. Влияние функционально-технологических свойств белкового горчичного струкгурообразоватсля па свойства мясных систем / И.Ф. Горлов, Д.К. Кулик, П.В. Сапожпикова, К.П. Медянпиков // Храпение и переработка ссльхозсырья. 2004. - №10. - С. 33.

24. ГОСТ 13496.21-87. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения лизина и триптофана. -М.: Издательство стандартов. -1987. С. 17.

25. ГОСТ 13496.22-90. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения цистина и метиопипа. -М.: Издательство стандартов. -1990. С.11.

26. ГОСТ 20264.3-81. Препараты ферментные. Методы испытаний. -М.: Издательство стандартов. -1981. С. 16.

27. Грачева И.М. Лабораторный практикум но технологии ферментных препаратов / И.М. Грачева, IO.II. Грачев, М.С. Мосичсв, Г.Г. Борисепко, С.П. Богатков, М.В. Герпег- М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. -238 с.

28. Грачева И.М. Технология ферментных препаратов / И.М. Грачева, АЛО. Кривова. М.: Элевар, 2000. - 512 с.31 .Гребсшова P.II. Использование микробных ферментных препаратов в СССР / P.M. Грсбешова. М.: 01 ГГИТЭИмикробиопром, 1982. - 44 с.

29. Гурова II.В. Методы определения эмульсионных свойств белков / П.В. Гурова, Э.С. Токаев, A.II. Гуров. М.: АгроПИИ ГЭИММ11, 1994, -32 с.

30. Гусляппиков И.В. Разработка технологии мясных продуктов с использованием модифицированной муки гороха: авторефер. дис. . канд. техн. наук. М., 2004. - С. 23.

31. Диксон М. Ферменты / М. Диксон, Э. Уэбб. М.: Мир, 1982. - 1118 с.

32. Ермаков А.И. Методы биохимического исследования растений / А.И. Ермаков, В.В. Арасимович и др. Ленинград: Колос, 1972. - 456с.

33. Жарипов А.И. Пищевая биотехнология: научно-практические решения в АПК / А.И. Жарипов, И.Ф. Горлов, 10.II. Нслепов, II.А. Соколова. -М.: Вестник PACXII, 2003. 384 с.

34. Жарипов А.И. Изучение возможности ферментной модификации мяса кур яйценосной породы / А.И. Жарипов, II.II. Евтихов, С.А. Марушипа,

35. Л.И. Абдулов // Пища. Экология. Человек: материалы 5-й международной научно-технической конференции. М.: МГУПБ, 2003.-С. 125-126.

36. Жаринов Л.И. Ферментная модификация свойств мяса кур-несушек / А.И. Жаринов, 11.11. Гвтихов, С.А. Марушина, 'Г.Г. Кузнецова // Мясная индустрия. 2002. - №12. - С. 20-21.

37. Жаринов Л.И. Оценка Са+ь-допарской функции горчичного порошка / Л.И. Жаринов, А.В. Стефанов // Пиша. Экология. Человек: материалы III международной научно-технической конференции. М.: МГУПБ, 1999.-С. 49.

38. Журавская U.K. Технохимический контроль производства мяса и мясопродуктов / U.K. Журавская и др.: учебник. М.: Колос, 1999. - с. 54-55.

39. Захарова JI.M. Использование пшеничных отрубей при выработке молочных продуктов / JI.M. Захарова, II.А. Кропотов // Технологии и процессы пищевых производств: материалы конференции. Кемерово, 1999.-С. 10-11.

40. Иваницкий С.К. Получение и применение растительных белков из масличных семян / С.Б. Ивапицкий. М., 1991. - с. 24.

41. Игоряпова П.А. Биохимические свойства и особенности храпения пшеничных отрубей пищевого назначения: автореф. дис. . канд. техп. паук.-М„ 1987.-С. 24.

42. Казаков Г.Д. Биохимия зерна и продуктов его переработки / Г.Д. Казаков, B.JI. Кретович. М.: Лгропромиздат, 1989. - 368 с.

43. Калашникова П.А. Получение белковых гидролизатов с использованием микробных протеолитичсских ферментов / П.А. Калашникова, Р.П. Грсбешова, И.М. Виноградова // В кн.: Повое в получении и применении ферментов. М.: Пищевая промышленность, 1978.-С. 85-94.

44. Калупяпц К.А. Химия солода и пива / К.А. Калупяпц. М.:

45. Агронромиздат, 1990. 176 с.

46. Капрсльяпц JI.B. Белковые продукты из нетрадиционного растительного сырья. Обзорная информация, серия: Мукомольпо-круняная промышленность / JI.В. Каирельяпц, 1I.B. Серсдпицкий, А.Р. Духанина. М.: Ц11ИИТЭИ хлебопродуктов, 1992. - 40 с.

47. Кислухина О.В. Ферменты в производстве пищи и кормов / О.В. Кислухина. М.: ДсЛи принт, 2002. - 336 с.

48. Колпакова В.В. Эмульгирующие и непообразующие свойства белковой муки из пшеничных отрубей / В.В. Колпакова, А.Н. Волкова, A.II. Нечаев // Известия ВУЗов. Пищевая технология. 1995. - №1-2. - С.34-37.

49. Колпакова В.В. Научные основы технологии получения и применения белковых продуктов из пшеничных отрубей: автореф. дис. . д-ра техп. паук.-М., 1998.-с. 67.

50. Колпакова В.В. Получение белка из пшеничных отрубей с применением ферментных препаратов / В.В. Колпакова, O.IO. Борисова, О.И. Карпова, М.В. Герпет // Храпение и переработка сельхозсырья. -2001. №6. - С, 12-18.

51. Колпакова В.В. Растворимость и водосвязывающая способность белковой муки из пшеничных отрубей / В.В. Колпакова, А.И. Нечаев // Известия ВУЗов. Пищевая технология. 1995. - №1-2. - С. 31-33.

52. Колпакова В.В. Медико-биологическая характеристика и экологическая безопасность белка из пшеничных огрубей / В.В. Колпакова, А.П. Нечаев, И.С. Зилова, II.А. Букина, В.М. Воробьева // Известия ВУЗов. Пищевая технология. 1995. -, №1-2. - С.38-41.

53. Колпакова В.В. Белковые продукты из пшеничных отрубей / В.В. Колпакова, А.П. Нечаев, С.М. Севсринепко, М.П. Попов; под общ. ред Н.Н. Браудо // В кн.: Растительный белок: новые перспективы. М.: 1 Бпцепромиздаг, 2000.- е.

54. Комов В.I I. Биохимия / В.II. Комов, В.I I. Шведова. М.: Дрофа, 2004. - 640 с.

55. Коиарев В.Г. Белки пшеницы / В.К. Коиарев. М.: Колос, 1980. -351 с.

56. Кораблева II. Фракционный состав белков пшеницы, культивируемой в Узбекистане / II. Кораблева, П. Турсупходжаев, Т. Касымова, II. Юлдашев // Хлебопродукты. 2002. - №9. - С. 31-32.

57. Корпсйский М.Я. Активные центры ферментов: стереохимия и динамика / М.Я. Корпейский // Молекулярная биология. 1976. - т. 10. -вып. 6.-С. 1197-1210.

58. Крстович В Л. Введение в зпзимологию / B.JI. Крстович. М.: Паука, 1986.-336 с.

59. Кудряшов JI.C. Протсолитическис ферменты мяса и их роль в процессе созревания и носола (обзор) / JI.C. Кудряшов // Известия ВУЗов. Пищевая технология. 1987. - №5. - С.20-30.

60. Куликом В.М. Эффективность использования "Ьелка Сарспта-5" в рационах сельскохозяйственных животных / В.М. Куликов, С.И. Николаев, А.Г. Чсшсва, Р.И. Малахова, АЛО. Ицкович, О.В. Чепрасова,

61. B.I I. Стрелков, О.С. Коротаева // Новое в технологии производства и переработки продукции животноводства: материалы конференции. -Волгоград, 1996.-С. 89-91.

62. Марнов Д.И. Аминокислотный, витаминный и микроэлемеитпый состав кормовых отходов мукомольного и крупяного производства / Д.И. Марпов и др. //Труды / ВИИИЗ. 1967. - Вып.60. - С. 161.

63. Мартынов А.В. Проблемы дефицита белка в рационе питания россиян и путь их решения / А.В. Мартынов // Молочная промышленность. -2002,-№7. -С. 11-15.

64. Мснх JI.B. Научные и практические основы производства плавленых сыров с зерновыми добавками: автореф. дис. . канд. техн. паук. М., 1996.-С. 15.

65. Митасева Л.Ф. Метод определения содержания белка па полуавтоматическом приборе Кьельтск / Л.Ф. Митасева, С.К. Апраксина, С.М. Мухина, Д.В. Стефанов: учебное пособие. М.: МГУ1 lb, 2004,- 14 с.

66. Моргуп В.Д., Игнатьева А.Ф. и др. // Изв. вузов. Пищевая технология. Деп. в ЦПИИТЭИ хлебопродуктов 28.11.86. № 722-хб.

67. Мосолов В.В. Протсолитическис ферменты / В.В. Мосолов. М.: Паука, 1971.-414 с.

68. Некрасов Р.В. Эффективность использования сухой пивной дробины и пробиотика в полпорационпых кормах для доращиваемых и откармливаемых свиней: авторефер. дис. . канд. техн. наук. -Дубровины, 2004.-С.26.

69. Печасв Д.И. Пищевые добавки / Л.П. Нечаев, Л.Л. Кочсткова, Л.II. Зайцев. М.: Колос, 2001. - 256 с.

70. Псчасв Л.II Пищевая химия / Л.П. Нечаев, С.П. Траубепбсрг, Л.Л. Кочсткова, В.В. Колпакова, И.С. Вигол, И.Б. Кобслева: учебник. -СПб.: Гиорд, 2001 -592 с.85.0лепсв 10.Д. Производство мороженого / Олепев 10.А, Зубова II.Д.

71. М.: 11ищевая промышленность, 1977. 232 с. 86.Олепев Ю.А. Мороженое / Ю.А. Оленев. - М.: Колос, 1992. - 256 с. 87.0лзепгарт В.И. Ферменты - двигатели жизни / В.И. Олзепгард. - JI.

72. Пат. 2124844 РФ. Способ получения пищевого белка из растительного сырья / К.М. Аверин, С.В. Иванов, Б.В. Страдомский. № 98115615/13. Заявл. 24.08.1998. Опубл. 20.01.1999. БИ№13.

73. Пат. 2233091 РФ. Способ производства бисквитного полуфабриката / Т.В. Санина, С.И. Лукина, Н.И. Пономарева, И.В. Черемушкина. -№2003100166/13. Заявл. 04.01.03. Опубл. 27.07.04. БИ №21.

74. Пат. 229336 РФ. Способ производства колбасных изделий из мяса птицы с пивной дробиной / В.А. Апдреепков, А.И. Спицарь, Л.В. Алехина, С.А. Рыжов, В.М. Трахапова, Р.А. Ващук, А.А. Спицарь, Б.Б.

75. Пат. 2174757 РФ. Способ получения концентрата белков из растительного сырья / Л.В. Аптипова, И.А. Глотова, В.10. Астапипа. -№.2002132034. Заявл. 12.04.00. Опубл. 04.10.01. ЬИ №14.

76. Пат. 2250026 РФ. Способ получения белкового продукта из отрубей / В.В. Колпакова, Л.В. Зайцева, Г.А. Смирнов. №.2002132034. Заявл. 28.1 1.02. Опубл. 20.04.05. ЬИ №11.

77. Петер Т.Д. Создание белкового препарата па основе модифицированного белка муки семян гороха для использования в производстве мясных изделий: авторефер. дис. . канд. техн. паук. -М., 1997.-С. 23.

78. Петрова И.С. Прогеолитические ферменты актипомицетов / И.С. 11етрова. М.: 11аука, 1976. - 60 с.

79. Петушкова Г.В. Введение в кинетику ферментативных реакций / Н.В. Петушкова. М.: МГУ, 1972. -200 с.

80. Подобедов А.В. Эффективность использования продуктов переработки соевых бобов / А.В. Подобедов, В.И. Тарушкип // Мясная индустрия. 1998. - №8. - С. 25-27.

81. I (олыгалипа Г.В. Определение активности ферментов: справочник / Г.В. Полыгалипа, B.C. Чередниченко, JI.B. Римарева. М.: ДеЛи принт, 2003.-375 с.

82. Попелло И.А. Выделение и очистка 11S глобулинов из семян кормовых бобов и гороха / И.А. Попелло, В.В. Сучков, В.Я. Гринберг, В.Б. Толстогузов // Прикладная биохимия и микробиология. 1988. - т. 24. - выи. 1.-С. 50-55.

83. Попов В.II. Мировое растениеводство. Зерновые культуры: Учеб. пособие / В.П. Попов. М.: РУД11, 2002. - 255 с.

84. Пшеница и оценка ее качества / Пер.с англ. М.: Колос, 1967.

85. Раст ительный белок /под ред. Микулович Т.П./ М.: Агропромиздат, 1991.-684 с.

86. Растительный белок: новые перспективы / Под ред. Г.Г. Браудо -М.: Пищепромиздат, 2000. 180 с.

87. Ратушпый А.С. Применение ферментов для обработки мяса / А.С. Ратушпый. М.: Пищевая промышленность, 1976. - 88 с.

88. Римарева JI.B. Эффективный ферментный препарат для протеолиза растительного сырья / JI.B. Римарева // Храпение и переработка сельхозсырья. 1995. - № 6. - С. 40.

89. Рогов И.Л. Химия пищи. Функциональные свойства гидроколлоидов. Соевые белковые препараты: Учебное пособие / П.А. Рогов, И.В. Гурова, А.И. Жаринов, А.Ю. Попова. М.: МГУПБ, 2003. -32 с.

90. Розанцев Э.Г. Биологическая химия. Практикум для студентов / Э.Г. Розанцев, Г.И. Симбирева, 11.С. Данилова, В.В. Бойко, JI.H. Салитрииник. М.: МГУПБ. - 132 с.

91. Румянцева Г.Н. Использование ферментов в пищевой промышленности / Г.II. Румянцева // Пищевая и перерабатывающая промышленность. 1994. - №. - С.

92. Румянцева Г.Н. Совместное использование протеаз и целлюлаз при получении пищевого белка / Г.Н. Румянцева, A.II. Дапилспко // Пищевой белок и экология: материалы Международной конференции -М., МГУПБ, 2000.-С. 25.

93. Румянцева Г.Н. Свойства белков сои и гороха, полученных биотехпологическим способом / Г.П. Румянцева, М.И. Осадько // Мясная индустрия. 2005. - №2. - С. 44-45.

94. Русакова Г.Г. Семена горчицы и продукты их переработки -ценный корм для сельскохозяйственных животных и птицы / Г.Г. Русакова. М.: Волгоград, 1998. - 96 с.

95. Русакова Г.Г. Дополнительное кормовое средство / Г.Г. Русакова, В.Л. Хомутов, Л.10. Ицкович // Кормопроизводство. 1998. - №1. - С. 29-32.

96. Рыжков В.М. Новая технология очистки продуктов переработки семяп горчицы от аптипитательпых веществ: авторефер. дис. . капд. с.-х. наук. нос. Дубовицы, 1998,- С. 30.

97. Рыжков В.М. Кормовой белок из горчицы / В.М. Рыжков, Г.Г. Русакова// Комбикормовая промышленность. 1995. - №1. - С. 22.

98. Свиридов Д.А. Пивная дробина в производстве белковых концентратов / Д.А. Свиридов, М.В. Гернст, К.В. Кобслев // Пиво и напитки. 2005. - №6. - С. 28-29.

99. Серба И.М. Разработка биотсхиологичсского процесса ферментативного гидролиза дрожжевой биомассы с целыо получения биологически активных добавок, авторефер. дис. . капд. с.-х. паук. М., 2005,- С. 25.

100. Спицарь А.И. Биологическая ценность муки из пивной дробины / А.И. Сницарь, Н.Э. Бабаев, С.А. Рыжов, Ч.К. Авылов, С.И. Хвыля, К.11. Сои, А.В. Иванов // Мясная индустрия. 2003. - №11. - С. 55-57.

101. Сницарь А.И. Состав технологического оборудования линии производства муки из пивной дробины / А.И. Сницарь, 10.В.

102. Космодемьянский, И.Э. Бабаев, С.Л. Рыжов, Ч.К. Лвылов, П.Д. Мипко // Мясная индустрия. 2004. - №3. - С.63-65.

103. Сницарь А.И. Производство колбасных изделий и мясных полуфабрикатов с добавлением пивной дробины / А.И. Сницарь, С.А. Рыжов, П.М. Трахапова // Доклады Российской академии сельскохозяйственных паук. 2003. - №6. - С. 42-43.

104. Сницарь А.И. Использование пивной дробины при производстве колбасных изделий и полуфабрикатов / А.И. Сницарь, С.А. Рыжов, Г.М. Трахапова, О.А. Маслобоев // Храпение и переработка сельхозсырья. 2001. - № 10. - С. 59-61.

105. Соколова З.С. Лабораторный практикум по технологии молока и молочных продуктов / З.С. Соколова, Л.И. Лакомова, Л.В. Чекуласва, В.Г. Типяков, U.K. Ростроса. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1984. -216 с.

106. Суханов Б.П., Кузнецов В.Д. и др. // Деп. в Arpol 1ИИТЭИ1III 29.09.86, N 1432 пщ.

107. Тарасова Л.И. Использование горчичного порошка из семян белой и сизой горчицы в производстве майонеза / Л.И. Тарасова, В.II. Григорьева, А.В. Стсцепко, И.М. Завадская, В.М. Федорова // Масложировая промышленность. -2004. №3. - С. 41-43.

108. Теплы М. Молокосвсртывающис ферменты животного и микробного происхождения / М. Теплы, Я. Машек, Я. Гавлова; под общ. ред. Т.В. Долгих. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1980. -272 с.

109. Толстогузов В.Б. Искусственные продукты питания. Новый путь получения пищи и его перспективы. Научные основы производства / В.Б. Толстогузов. М.: 11аука, 1978. - 232 с.

110. Траубспберг С.Г. Кинетика гидролиза соевой обезжиренной муки ферментным препаратом Бирзим 117 / С.Г. Траубспберг, И.В. Вяльцева, Н.В. Милорадова, А.А. Козлова // Известия ВУЗов. 11ищеваятехнология. 2005. - №2-3. - С. 54-56.

111. Траубенберг С.Н. Ферментативные соевые гидролизаты: получение и применение / С.Е. Траубенберг, Е.В. Милорадова, М.М. Пивцаева, М.А. Лысюк // Научные труды Моск. гос. акад. пищ. пр-в. М., 1996. -Ч. 1.-С. 80-84.

112. ТУ 10.963.27-91. Выжимки яблочные сушеные. Технические условия.

113. ТУ 11249895-43-13-92. Метод определения цсллюлолитичсской активности.

114. ТУ 9291-034-34588571-2001. Метод определения (З-глюканазпой активности.

115. Фараджсва И.Д. Разработка способа утилизации пивной дробины / Е.Д. Фараджсва, Р.В. Кораблип, О.е. Бапина, B.C. Шахов, А.В. Прибытков // Хранение и переработка сельхозсырья. 2001. - №10. -С. 57-59.

116. Фершт Э. Структура и механизм действия ферментов / О. Фсршт. -М.: Мир, 1980.-334 с.

117. Фуголь О.А. Разработка технологии получения и применения соевых ферментативных гидролизатов: авторефер. дис. . капд. техн. паук. М., 1997.-С. 25.

118. Харчепко JI.I1. Влияние географических зон выращивания па содержание жирного и эфирного масел в семенах / JI.I I. Харчепко, В.Ф. Шавло // Бюл. ПТИ ВПППМК. Краснодар, 1975. - №3. - С.46-49.

119. Хугасв P.P. Разработка технологии комбинированных мясных продуктов с учетом комплексообразования мышечных и растительныхбелков: авторефер. дис. . канд. техн. паук. М., 2002. - С. 23.

120. Чурип Л.И. Влияние сухой пивной дробины и биологически активных веществ па обменные процессы свиней и качество продукции: авторефер. дис. . канд. техн. паук. Казань, 2006. - С.21.

121. Швецова И.Л. Пищевые волокна в рациональном питании человека / И.Л. Швецова, II.A. Попов и др. М.: ЦПИИТЭИ Мипхлебопродуктов СССР. - 1989. - С.50-53.

122. Шидловская В.II. Оргаполситические свойства молока и молочных продуктов. Справочник / В.П. Шипдловская. М.: Колос, 2000. - 280 с.

123. IIIi юта В.И. Селекционная ценность горчичпо-рапсовых гибридов / В.И. Шпота, Е.В. Подколзипа // Бюл. МТБ ВПИИМК. -1985.-Вып. 4 (91).-С. 20-22.

124. Шульц Г. Принципы структурной организации белков / Г. Шульц, Р. Шилср. -М: Мир, 1982.-354 с.

125. Щербаков В.Г. Химия и биохимия переработки масличных семян /В.Г. Щербаков. М.: Пищевая промышленность, 1977.- 168 с.

126. Ярош II.II. Изменчивость содержания изотиоциапатов в семенах горчицы сизой различного происхождения / II.П. Ярош, Л.И. Ермаков // Бюл. IГГИ ВИР. Ленинград, 1993. - С. 32-36.

127. Alan F. Enzyme structure and mechanism / I;. Alan. SanFrancisco: W.I I. Freeman and Co., 1977. - 371 p.

128. Amiot J. Nitrogenous products released by short term in vitro enzymatic hydrolysis of food proteins / J. Amiot, G.J. Brisson, E. Savoic // Nutritional Reports International. -1981. №24. - P. 513-529.

129. Badlcy R.A. The structure, physical properties of the soybean protein glicinin / R.A. Badlcy, D. Athinson, II. Mauser, D. Oldani, G.P. Green, J.M. Stubbs // Biochim. Biophys. Acta. 1975.-№12. - P. 214-228.

130. Braudo E.E. Some functional properties of technical protein isolates from sunflower seed and soybean / E.E. Braudo, K.I).

131. Schwenke // Nahrung. 1982. - №26. - P. 31-34.

132. Brijs K. Solubilisation and degradation of wheat gluten proteins by barley malt proteolitie en/.umes / K. Brijs, F. Delvaux, V. Gilis, J.A. Dclcour //Journal of institute of brewing. 2002. - Vol. 10. - №3. - P. 348-354.

133. Comprehensive biotechnology. The principles of biotechnology / lid. Moo-Young M. N.Y.: Pergamon Press, 1985. V.2. - 670 p.

134. Coolbear T. Enzymes and products from bacteria, fungi and plant cells / T. Coolbear. Berlin: Springer. - 1992. - 144 p.

135. Damodaran S. Interrelationship of molecular and functional properties of food proteins / In: J.E. Kinsella and W.G. Soucie (eds) // Food Proteins, Am. Oil Chemists' Soc. Champaign. II. 1989. - p. 21-51.

136. DAppolonia B.L. Uses of Nonflour Fractions of Wheat / B.F. D'Appolonia//Cereal Foods World. 1979. -V.24. - № 8. - P. 326-330.

137. Doss 11.A. Improving the nutritive value of soybean protein produced in Egypt by addition of wheat germ / H.A. Doss, S.M. Girgis et al. // Grasas Accites. 1990. - V.41. - №1. - P. 46-53.

138. Endaszewski T. Influence of prtotiolytic, lipolityc enzymatic preparations on rhcological properties of beef / T. Endaszewski, T. Lesiow // Nahrung. 1900. -- V. 34. - №.8.1. P. 671-679.

139. Fcillet J.M. Soluble protein of wheat. III. Isolation and characterisation of two albumines, Alb, 13A and Alb. 13B from flour/ J.M. Feillc, C.C. Nimmo // Cereal Chem. 1970. - № 47. - P. 448-464.

140. Feng Y. Comparison of Flavonoids in Bran of Four Classes of Wheat / Y. Feng, C.E. McDonald // Cereal Chem. 1989. - V 66. - № 6. - p.

141. Fischcr W. Isolation and characterization of mustard (Sinapis alba E.) seed storage proteins / W. Fischcr, P. Schopler // Botanica acta. 1988. -№101.-P. 48-56.

142. Gfines R.D. The speeifity of the Myrosinase system / R.I). Gfincs, K.L. Goering // Archives of Biochemistry and Biophysics. 1962. - V.92. -P. 13-19.

143. Grosskrcutz J.C. Lipoprotein model of wheat gluten structure / J.C. Grosskrcutz // Cereal Chem. 1961. - V. 32. - P.

144. Gucgucn J. Proteins of some legume seeds: soybean, pea, faba bean and lupin / J. Gueguen, P. Cerletti // In: B. J. F. Hudson (ed.). New and Developing Sources of Food Proteins, Chapman & Halls. London. - 1994. -P. 145-193.

145. Ilolloway W.I). Composition of fruit, vegetable and cereal dietary fibre / W.D. Ilolloway // J. Sci. Food and Agr. 1983. - V. 34,- № 11. - P. 12-15.

146. Johnson I). W. Functional properties of oilseed proteins / D. W. Johnson // J. Am. Oil Chem. Soc. 1970. - № 47,- P. 402-407.

147. Kasarda D.D. Protein and the amino acid composition of wheal fractions / D.D. Kasarda, C.C. Nimmo, G.O. Kohler // In: Pomeranz Y. Wheat chemistry and Technology. AACC. St-Paul, Minnesota, 1971. - P. 227-249.

148. Kilara K.A. Effects of temperature on food proteins and its implications on functional properties / K.A. Kilara, T.Y. Sharkasi // CRC Crit. Rev. Food Sci. & Nutrit. 1986. - № 23. - P. 323-395.

149. Kinsella J.T. Functional properties of proteins in foods A survey / J.T. Kinsclla // Crit. Rev. Food Sci. and Nutrit. - 1976. - P. 219-280.

150. Light A., Grcenberg I. The sequence of 26 amino acid residnes at the amino terminus of papain //1. Biol. Chem. 1965. - p. 240-258.

151. Lopez Hernandes J. Enzymatic hydrolisis of soybean protein using papain / J. Lopez Hernandes, II. Raz, J. Adris // Revista Agronomica del Noroeste Argcntino. 1977. - №14. - P. 161-174.

152. Manning G.B. Thermostable a-amylase of Bacillus strcrothcrmophilus / G.B. Manning, L.L. Campbell, R.J. Foster // Physical properties molecularweight. J. Biol. Chem. - 1961. - Vol.236. - № 11. - P.2958-2961.

153. Marion D. Structure and function of wheat lipid binding proteins / D. Marion, M.F. Gautier, P. Joudrier, M. Ptak, Pczolet, 1*. Forest, F. Clark, W.F. Broekaert // Wheat Kernel Proteins: proceedings of International Meeting. Italy, 1994. - P.

154. Pintado M.E. Evaluation of whey protein hydrolysis using protease A and trypsin / M.E. Pintado, A.E. Pintado, E.R. Silva // Biol. Wet. 1997. -V. 62. -№ 4-P. 1365-1368.

155. Protein vegetalcs / Coordinatcur B. Gordon. Paris, Technique et documentation-lavoisier. - 1985. - XXXVI. - 629 p.

156. Saunders R.M., Connor М.Л., Edwards R.I I., Kohler G.O. // Cereal Chem. 1975. - V.52, - № 1. - P.93-100.

157. Schwarz P.B. The Distribution of lignin and Other Fiber Components within Hard Red Spring Wheat Bran / P.B. Schwarz, W.I I. Kunerth, V.E. Voungs // Cereal Chem. 1988. - V.65. - № 1. - P. 59-65.

158. Steincr R.F. The ultra-violet fluorescence of proteins / R.F. Stciner, II. Edechoch // Biochem. Biophys. Acta. 1963. - № 3. - P. 341-355.

159. Tolstoguzov V.B. Functional properties of food proteins. Role of interactions in protein systems / In: K.D. Schwenke and R. Mothes (cds) Food Proteins -Structure and Functionality. VCI I, Weinhcim. - 1993. - P. 203-215.

160. Undcrkofller E.A. Enzyme supplementation in baking / Е.Л.

161. Underkoffler. // Bakers Digest. 1961. - v. 35. - № 5. - P. 73-83.

162. Underkoffler L.A. Production of microbial enzymes and their applications / L.A. Underkoffler. // Applied microbiology. 1968. - V. 6. -№3.-P. 212-221.

163. Vcravcrbckc W.S. Wheat protein composition and properties of wheat glutcnin in relation to brcadmaking functionality / W.S. Vcravcrbckc, J.A. Dcclour // Critical reviews in food science and nutrition. 2002. - Vol. 42. -№3. - P. 348-354.

164. Waggle D.I I. Extensive analyses of flours and mill feeds made from nine different wheat mixes / D.I I. Waggle, M.A. Lambert, G.D. Miller, E.P. Larrcll, C.W. Deyoe // Cereal Chem. 1967. - V.44. - № 2. - P. 48-59.

165. Yon J.M. Some aspects of protein folding / J.M. Yon // Biochem. 1978. -60.-№6-7.-P. 1331-1334.