автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.07, диссертация на тему:Разработка технологии комплексной переработки бобовых культур на основе использования микробных ферментных препаратов

МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ПРИКЛАДНОЙ БИОТЕХНОЛОГИИ

На правах рукописи

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ КОМПЛЕКСНОЙ ПЕРЕРАБОТКИ БОБОВЫХ КУЛЬТУР НА ОСНОВЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МИКРОБНЫХ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ

Специальность 05.18.07 - Биотехнология пищевых продуктов (перерабатывающие отрасли АПК)

Осадько Марина Игоревна

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата технических наук

Москва 2007

003061555

Работа выполнена на кафедре «Химия пищи и пищевая биотехнология» Московского государственного университета прикладной биотехнологии (МГУПБ)

Научный руководитель.

кандидат технических наук, доцент

Румянцева Г.Н.

Официальные оппоненты

доктор технических наук, профессор

Токаев Э.С.

доктор технических наук, профессор Ермолаева Г.А.

Ведущая организация ГНУ ВНИИ пищевой биотехнологии РАСХН

Защита диссертации состоится « 18 » сентября 2007 г в 11 часов на заседании диссертационного совета Д 212.149.01 при Московском государственном университете прикладной биотехнологии по адресу 109316, Москва, ул Талалихина, д 33, Конференц-зал.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МГУПБ

Автореферат разослан « 2007 г

Д 212 149 01, ктн, проф

Ученый секретарь диссертационного совета

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность работы. В настоящее время задача обеспечения населения полноценными пищевыми веществами, такими как белки, жиры и углеводы сохраняет свою актуальность

Определенный вклад в решение этой задачи вносят исследования, направленные на повышение эффективности современных пищевых производств, в основе которых лежит рациональное использование пищевого сырья, а также вовлечение в производство нетрадиционных ресурсов

Большой интерес в качестве сырьевого ресурса для выработки пищевых продуктов представляют соевые бобы и продукты их переработки, в частности соевая мука, а также такой нетрадиционный вид сырья, как культура гороха, широко распространенная в нашей стране и практически не используемая для получения пищевого белка (Рогов И А , Кроха Н Г, Браудо Е Е , Жаринов А И , Токаев Э С , Траубенберг СЕ)

Следует отметить, что традиционная технология переработки бобов сои, включающая получение компонентов белковой и жировой природы, имеет ряд недостатков, связанных с использованием высоких температур, органических растворителей и других химических реагентов, что негативно отражается на качестве конечных продуктов

Учитывая это, особую актуальность приобретает совершенствование существующих технологий за счет использования в качестве гидролизующих агентов микробных ферментных препаратов, которые, благодаря своей специфичности и эффективности действия, позволяют проводить направленную модификацию сырья, повысить выход целевых продуктов, а также улучшить экологическое состояние производства

Исследования в области биотехнологической переработки растительного сырья, в частности бобовых культур, позволят рекомендовать промышленности наиболее эффективные ферментные препараты и режимы их использования при получении наиболее ценных компонентов пищи белка, масла, пектина

Цели и задачи исследования. Основной целью диссертационной работы является разработка технологии переработки бобовых культур, предусматривающей получение белка, масла, а также пектина, на основе использования микробных ферментных препаратов протеолитического и карбогидразного действия

В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи- изучить каталитическую активность группы ферментных препаратов микробного, растительного и животного происхождения и выбрать наиболее эффективные для гидролиза растительного сырья,

- определить оптимальные условия и каталитические параметры действия выбранных биокатализаторов,

- подобрать технологические режимы ферментативной обработки сырья для получения белка бобовых культур,

- исследовать влияние ряда индивидуальных ферментов на процесс совместного выделения белка и масла из бобов сои, создать на их основе композицию для интенсификации процесса и оптимизировать дозы

биокатализаторов, входящих в состав композиции,

- выбрать наиболее эффективный метод для разделения белково-жировой эмульсии, полученной в результате ферментативной обработки сырья сои и подобрать рациональные режимы обработки,

- исследовать возможность ферментативного получения соевого пектина из отходов производства - соевой окары - и изучить его качественные характеристики,

- изучить основные характеристики белковых препаратов, полученных из бобов сои и гороха, по фракционному составу и функционально-технологическим свойствам;

- разработать принципиальную технологическую схему производства белка, масла и пектина из бобовых культур с использованием биокатализа и испытать ее в опытно-промышленных условиях,

- разработать экспериментальный регламент на производство соевого белкового изолята с использованием ферментных препаратов,

- исследовать возможность использования белковых препаратов, полученных ферментативным способом, в технологии мясопродуктов

Научная новизна работы состоит в том, что

установлена высокая субстратная специфичность протеаз микроорганизма ВасШш эиЫгЬз в отношении белков сои и гороха,

- показана роль протеаз и карбогидраз микроорганизмов в процессе обработки муки бобовых культур и создана композиция на их основе, позволяющая получить максимальный выход белка и масла;

- изучены продукты гидролиза белков сои и гороха ферментными препаратами протеолитического и карбогидразного действия методом электрофореза, идентифицированы основные белковые фракции и определена их молекулярная масса,

- установлены функционально-технологические свойства белков сои и гороха, полученных с использованием микробных ферментных препаратов,

- впервые методом ферментативного катализа из соевой окары выделен пектин и установлены его основные качественные характеристики

Практическая ценность работы:

- установлена возможность замены химических реагентов на стадии экстракции белка и масла бобовых культур на ферментные препараты микробного происхождения,

- экспериментально обоснованы и предложены рациональные для выделения белка и масла бобовых культур режимы ферментативной обработки сырья,

экспериментально установлена эффективность использования совокупности физических и химических методов для разделения белково-жировой эмульсии, полученной в результате ферментативной обработки соевого сырья, и установлены рациональные режимы разделения фаз,

- разработан экспериментальный регламент на производство соевого белкового изолята с использованием на стадии экстракции ферментных препаратов микробного происхождения,

- метод апробирован с положительным эффектом в опытно-промышленных условиях ООО "Гелла-ТЭКО"

Апробация работы. Результаты работы были представлены на 4-ой и 5-ой Международной научной конференции студентов и молодых ученых "Живые системы и биологическая безопасность населения" (Москва, 2005, 2006), работы отмечены дипломами; Всероссийской выставке научно-технического творчества молодежи (Москва, 2006); IV Московском Международном конгрессе "Биотехнология состояние и перспективы развития" (Москва, 2007), работа отмечена дипломами и медалями II и Ш степени

Публикации. По результатам проведенных исследований опубликовано 11 печатных работ

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы; экспериментальной части, включающей методы и объекты исследования, результаты и их обсуждение, выводов, списка используемой литературы и патентов, а также приложений.

Работа изложена на 201 страницах машинописного текста, содержит обзор литературы и патентов, включающий 11 таблиц и 1 рисунок, экспериментальный материал представлен в 14 таблицах, 35 рисунках Библиография включает 216 наименований работ отечественных и зарубежных авторов Диссертация включает 5 приложений

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ Во введении обоснована актуальность темы диссертационной работы В первой главе представлен аналитический обзор научно-технической и патентной литературы в области получения пищевых компонентов, в частности белка, масла и пектина из бобовых культур

Работы отечественных и зарубежных ученых (Браудо Е Е., Кроха Н Г., Антипова Л В , Нечаев А П , Траубенберг С Е., Зайцева JIВ , Hernandes L, Fredricson М, Lee JE) свидетельствуют о том, что наиболее перспективным методом для переработки бобов сои и гороха является биотехнологический, предусматривающий использование в качестве гидролизующих агентов ферментные препараты

Рассмотрен химический состав и свойства растительных белков, масел и пектинов (Даниленко А Н, Kalapathy U , May С D , Nakamura А )

Приведена классификация белковых препаратов из культур бобовых, показана цель их использования в составе продуктов питания (Толстогузов В Б , Жаринов А И, Токаев Э С , Гурова Н В.).

Проведена сравнительная оценка ферментных препаратов растительного, животного и микробного происхождения, показана область их использования при производстве продуктов питания Работы в этой области представлены крупными учеными Роговым И А , Грачевой И М, Калунянцем К А, Гернет М В , Римаревой JI В, Бравовой Г Б, Поландовой Р Д, Undercoffler LAB заключение первой главы сформулированы цель и задачи исследования

Во второй главе приведена схема постановки эксперимента,

характеристика объектов исследования и описаны условия и методы определения изучаемых показателей

Объектами исследования являлись измельченные бобы сои, соевая обезжиренная и не обезжиренная мука, высушенная измельченная соевая окара, обезжиренная и не обезжиренная мука гороха, а также коммерческие препараты соевого и горохового белка - изоляты соевого белка «Майсол 90» и "Майсол И" (ф "Могунция", Германия), гороховый белок Nutralys F85M (ф "Рокетг", Франция), растворимая гороховая мука (ф "Паула", Польша)

В качестве ферментных препаратов использовали микробные протеазы Bacillus subtilis (ПВ, ПА), протеазу Aspergillus oryzae (Флавозим), комплексный препарат из смешанных культур Bacillus subtilis и Pénicillium emersonii (ПР); комплексный препарат Bacillus subtilis (БР), амилоглюкозидазу Aspergillus mger (АМГ), целлюлазы Trichoderma reesei (ЦК) и Bacillus subtilis (БЦ), пектинтрансэлиминазу Bacillus subtilis (БГ); мультиферментный комплекс селекционного штамма Aspergillus (ВИС), протеазы растительного (Чилл, Папаин, получаемые из латекса Carica papaya) и животного происхождения (протепсин, получаемый из слизистых оболочек желудков крупного рогатого скота, кур, свиней)

Каталитическую активность протеазы, амилазы^ целлюлазы, и ß-глкжаназы оценивали по стандартным методикам (ГОСТ 20264 3-81, ТУ 11249895-13-13-92, ТУ 9291-034-34588571-2001) Определение специфичности ферментных препаратов осуществляли, используя в качестве субстратов белки сои и гороха

Определение содержания белка в сырье осуществляли на полуавтоматическом приборе Кьельтек фирмы "Текатор" (Швеция), а растворимого белка в экстрактах - по методу Лоури в модификации НТЦ "Лекбиотех" (Ларина Л H, 2005)

Для количественного определения содержания масла в экстрактах и сырье использовали стандартные методы (ГОСТ 27670-88, ГОСТ 5867-69)

Исследование молекулярной массы белковых продуктов гидролиза осуществляли методом электрофореза в полиакриламидном геле на приборе "Mini Protean" ("Bio-Rad", США) Функционально-технологические свойства белковых препаратов определяли по общепринятым методикам (Рогов И А, Гурова H В , Жаринов А И )

Содержание пектиновых веществ в сырье определяли, используя метод, основанный на кислотном гидролизе и последующем осаждении пектина этиловым спиртом. Ферментативное выделение пектина из сырья осуществляли по методу, разработанному в МГУПБ (Румянцева Г H, 2005)

Показатели качества пектина (pH, вязкость 1%-го раствора, степень этерификации, желируюшую способность) определяли по ГОСТ 29186-91

Обработку экспериментальных данных проводили с использованием методов математической статистики (Бородин А В , 2000)

В соответствии с целью работы и сформулированными задачами исследование проводили в несколько этапов, представленных на схеме постановки эксперимента (рис 1)

Рис. 1. Схема постановки эксперимента

На первом этапе проведен скриннинг ферментных препаратов растительного, животного и микробного происхождения с учетом их активности, оптимальных условий и каталитических параметров действия на стандартный субстрат Изучен химический состав различных видов бобового сырья по показателям содержания влаги, белка и масла

На втором этапе научно обоснованы и разработаны рациональные режимы ферментативной обработки сырья, необходимые для достижения максимального выхода белка бобовых культур

Проведено исследование процесса комплексного выделения белка и масла из бобов сои с использованием метода биокатализа Проведен выбор композиции ферментных препаратов для обработки сырья и оптимизация ее состава Дальнейшее исследование предусматривало разработку рациональных режимов разделения белково-жировой эмульсии

Исследован процесс ферментативного выделения соевого пектина из отходов производства белка и масла Дана характеристика его качества

На основании полученных данных предложена принципиальная технологическая схема производства белка, масла и пектина бобовых культур с использованием метода биокатализа

Апробирован процесс ферментативного получения белка в опытно-промышленных условиях ООО "Гелла-ТЭКО" Определены фракционный состав и функционально-технологические свойства полученных белковых препаратов, изучена возможность их использования в технологии мясопродуктов

На заключительном этапе разработан экспериментальный регламент на получение соевого белкового изолята с использованием ферментативной обработки сырья

Изучение каталитических свойств и специфичности действия ферментных препаратов

На первом этапе в соответствии со схемой постановки эксперимента проведен анализ 8 ферментных препаратов растительного, животного и микробного происхождения по протеолитической активности, присутствие которой необходимо для достижения максимального выхода белка бобовых культур Определение активности вели при температуре 30 °С в щелочной, нейтральной и кислой зонах (рис 2)

Анализ полученных данных свидетельствует о том, что наибольшей протеолитической активностью обладают препараты микробного и растительного происхождения

Установлено, что исследуемые препараты растительного и животного происхождения действуют в кислой среде, а препараты микробного происхождения - в нейтральной и щелочной средах Учитывая технологические трудности, связанные с необходимостью корректировки рН в процессе гидролиза-экстрагирования, использование препаратов животного и растительного происхождения, а также препарата ПА, действующего в щелочной среде, в процессах получения белка сои и гороха нецелесообразно

ПВ ПА ПР БР Флавозим Чилл Папанн Прогепсин

Рис. 2. Протеолитическая активность ферментных препаратов ИрН5,5 DpH7,2 Ы pH 9,5

Сделан вывод о том, что наиболее активными и рациональными для данной работы являются препараты микробного происхождения - ПВ, БР (продуценты - штаммы бактерий Bacillus subtihs) и ПР (получаемый культивированием смешанных культур бактерий Bacillus subtihs и грибов Pemcillium emersonn)

На следующем этапе исследовали влияние температуры и pH на активности протеазы, амилазы и /3-глюканазы для выбранных ферментных препаратов Полученные зависимости позволили выбрать оптимальные условия действия препаратов (табл 1)

Таблица 1

Каталитическая активность ферментных препаратов в условиях _оптимальных температуры и рН_

« Активность протеазы Активность амилазы Активность /3-глюканазы

Ферментнь препарат Активность, ед/г(см3) и о Н С л Ё Я? о. Активность, ед/г(см3) О о i J" Ё t£ а. | Активность, ед/г(см3) о о j Ё 3? о.

ПР 93,33 50,0 7,0 480,0 60,0 6,0 854,0 60,0 6,0

ПВ 485,0 50,0 7,0 0 30,0-70,0 5,0-9,0 0 50,0-75,0 3,0-7,0

БР 233,33 45,0 7,0 1,33 50,0 6,0 91,67 60,0 6,0

Установлены различия в действии исследуемых ферментных препаратов на стандартные субстраты препарат ПВ обладает индивидуальным протеолитическим действием, а препараты ПР и БР комплексным -протеолитическим и карбогидразным

Изучены каталитические параметры ферментативных реакций -

константа Михаэлиса (Км) н максимальная скорость гидролиза (Угаах) для выбранных ферментных препаратов В качестве субстратов использовали препараты соевого (Майсол 90) и горохового (№Лга1уз Б85М) белка Скорость ферментативной реакции определяли по количеству образовавшихся продуктов гидролиза белковых субстратов, неосаждаемых трихлоруксусной кислотой (рис 3)

Рис. 3 Зависимость скорости ферментативной реакции от концентрации субстрата для: а - протеазы ПВ (Bacillus subtilis); б - препарата ПР (Bacillus subtilis, Peniciliium emersomi), в - для препарата БР (Bacillus subtilis)

—соевый белок -е- гороховый белок

Сравнение значений констант Михаэлиса, полученных для двух видов субстратов, позволило прийти к заключению, что все исследуемые препараты обладают сродством как к белку сои, так и гороха, однако несколько большее сродство проявляется к соевому белку.

Из трех исследуемых ферментных препаратов наибольшей субстратной специфичностью к белкам бобовых культур - сои и гороха - обладает препарат нейтральной протеазы Bacillus subtilis (ПВ) Каталитические параметры его действия составляют при воздействии на гороховый субстрат - Км = 27,0 мг/мл, Vmax = 43,8 мкг/мин, при воздействии на соевый субстрат Км = 23,0 мг/мл, Vmax = 44,88 мкг/мин

Характеристика химического состава бобового сырья

Для изучения влияния ферментных препаратов на процесс получения белковых веществ сочли необходимым исследовать химический состав используемого в работе растительного сырья по трем показателям влажность, содержание белка и масла (табл. 2)

Таблица 2

Основные качественные показатели сырья_

Сырье Влажность, % Белок, % на С В Масло, % на С В

Измельченные бобы сои 11,0 38,5 17,2

Соевая не обезжиренная мука 12,3 47,4 18,7

Соевая обезжиренная мука 13,3 60,2 0,7

Отход производства соевого молока - высушенная окара 8,1 34,9 2,6

Гороховая не обезжиренная мука 7,9 26,9 1,9

Гороховая обезжиренная мука 8,5 27,2 0,6

Анализ химического состава показал, что содержание белка в бобах сои и продуктах ее переработки превосходит содержание белка в обеих исследуемых формах муки гороха Самое высокое содержание белка из всех используемых видов сырья (60,2 % на С В ) в обезжиренной соевой муке

Содержание масла в не обезжиренной соевой муке составляет 18,7 %, в измельченных бобах сои - 17,2 % на С В, что делает их важным промышленным источником этого ценного продукта Для горохового сырья этот показатель незначителен - всего 1,9 % на С В

Определение основных параметров ферментативной обработки белоксодержащего сырья

Цель данного этапа работы заключается в повышении экстракционной способности белов растительного сырья за счет рационализации процесса ферментативного гидролиза по следующим параметрам продолжительность процесса, доза ферментного препарата, гидромодуль, температура, рН и способ предобработки сырья

Исследование динамики процесса ферментативного гидролиза при использовании различных видов сырья

Изучена динамика ферментативного гидролиза для разных видов растительного сырья во временном диапазоне от 2 до 9 ч (рис. 4-6) Критерием оценки выхода белка при определении оптимальных каталитических параметров действия ферментных препаратов являлось его содержание в экстракте, а также масса препаративно выделенного белка в виде изолята

Исследование динамики накопления белка в реакционной смеси позволило выявить наиболее рациональный показатель продолжительности процесса, которая при использовании препарата ПВ составляет для гороха 5 ч, для всех форм соевого сырья -6ч (рис 4)

При использовании комплексных препаратов ПР и БР максимальный выход белка из сырья гороха наблюдается на 4 ч процесса гидролиза, а при использовании соевого сырья - на 5 ч, за исключением окары, для которой наибольший выход белка наблюдается на 6 ч (рис 5-6)

Сравнительные исследования процесса ферментативного гидролиза при использовании двух форм гороховой и соевой муки позволили сделать вывод о

125 т 100

Выход соевого ^5 "" белка, % от тахсп (100%) Т 25 +

0

j 125 -- 100

.. 75 Выход горохового белка, % от шах 50 (100%)

4 5 6 7 8

1родолжительность гидролиза, ч

Рис. 4. Динамика накопления белка при использовании препарата

ПВ

измельченные бобы сои соевая не обезжиренная мука соевая обезжиренная мука

—^— окара

—гороховая не обезжиренная мука -*— гороховая обезжиренная мука

Выход белка сои 11,5% принят за 100 % Выход белка гороха 1,6 % принят за 100 %

у 100

-- 75

Выход горохового - - 50 белка, % от шах (100%)

25

100 75

Выход соевого белка, % от шах 50 - -(100%)

25

0

ч—I—^

~T~t~i—t

23456789

Продолжительность гидролиза, ч

Рис. 5. Динамика накопления белка при использовании препарата

ПР

измельченные бобы сои соевая не обезжиренная мука соевая обезжиренная мука

-•— окара

гороховая не обезжиренная мука - гороховая обезжиренная мука

Выход белка сои 35,1 % принят за 100 % Выход белка гороха 12,6 % принят за 100 %

100 т 75

Выход соевого белка, % от тах50 -{(100%)

25

-Г 100

-■ 75

Выход горохового 50 белка, % от шах

25 0

(100%)

234 -5 6789 Продолжительность гидролиза, ч

Рис. 6 Динамика накопления белка при использовании препарата

БР

—♦— измельченные бобы сои -я- соевая не обезжиренная мука —соевая обезжиренная мука

—окара

гороховая не обезжиренная мука —гороховая обезжиренная мука

Выход белка сои 15,8 % принят за 100% Выход белка гороха 5,2 % принят за 100%

том, что целесообразно использовать сырье в обезжиренной форме Так, например, при использовании препарата нейтральной протеазы Bacillus subtilis (ПВ) выход белка повышается на 32 % при использовании соевой муки и на 17 % при использовании муки гороха

Выбор условий предобработки сырья

На данном этапе работы были предприняты попытки улучшить экстракцию белка за счет предварительной обработки сырья физическим методом воздействия - набуханием в воде

Для интенсификации процесса выделения белка использовали два температурных режима набухания обезжиренной соевой и гороховой муки +50 °С и +8 °С

Показано, что как для соевой, так и для гороховой муки увеличение выхода белка при использовании метода набухания наблюдается после 2 - 3 ч при температуре 50 °С, при низких значениях температуры -18 ч

Учитывая полученные рациональные показатели продолжительности процесса предварительной обработки сырья, из двух исследуемых температурных режимов наиболее технологически приемлемым можно считать набухание при температуре 50±2 °С.

Определение дозы ферментных препаратов для обработки сырья Выбор дозы ферментного препарата осуществляли, варьируя ее для препарата ПВ пределах от 0,24 до 1,46, для препарата ПР от 0,01до 0,033, а для препарата БР от 0,12 до 0,7 ед/г сырья

На основании полученных зависимостей выбраны рациональные дозы препарата ПВ для всех форм соевого сырья - 0,485 ед/г сырья, для обезжиренной гороховой муки - 0,24 ед/г сырья, что составляет 0,1 % и 0,05 % к массе сырья соответственно для сырья сои и гороха.

Установлены рациональные дозы для комплексного препарата ПР для сырья сои - 0,014 ед/г сырья, для сырья гороха - 0,01 ед/г сырья, что составляет соответственно 0,015 и 0,01 % к массе сырья

Показано, что при использовании комплексного препарата БР рациональными дозами для соевого сырья являются 0,47 ед/г сырья, для муки гороха - 0,35 ед/г сырья, что составляет соответственно 0,2 и 0,15 % к массе сырья сои и гороха

Наименьший показатель дозы при использовании всех исследуемых препаратов отмечен при использовании гороховой муки, что объясняется более низким содержанием белкового субстрата в сырье

Выбор гидромодуля, обеспечивающего максимальный выход белков сои и гороха

В работе варьировали показатель гидромодуля от 1 8 до 1.14 На основании полученных зависимостей установлено, что при использовании всех исследуемых ферментных препаратов для соевого сырья оптимальным является соотношение сырье вода 110 Такой режим позволяет провести наиболее полную экстракцию белка Для гороховой муки этот показатель может варьироваться от 1 8 до 1 12 в зависимости от используемого ферментного препарата

Определение рациональных температурных режимов для экстракции растительного белка

Показано (рис 7-9), что рациональные температурные режимы ферментативного гидролиза для всех видов сырья составляют при использовании препарата ПВ - 50 °С (рис 7), а при использовании препарата БР - 45 °С (рис. 9), что согласуется с данными об оптимальных условиях действия протеаз в составе этих препаратов на стандартный субстрат - казеинат натрия

Установлено, что при воздействии препарата ПР на обезжиренную муку сои и гороха рациональный режим температуры составляет 60-70 °С (рис 8), что свидетельствует о термостабильности препарата

Определение рационального значения рН для обработки сырья При исследовании влияния рН на выход растительного белка из семян сои и гороха варьировали этот показатель от 5,0 до 9,0

Полученные зависимости позволили сделать вывод о том, что рациональные значения рН для выделения растительных белков составляют для измельченных бобов сои - 6,2, для соевой обезжиренной муки - 6,8, для окары - 6,0 и для горохового сырья 6,7

Отмечено, что полученные рациональные значения рН для всех видов растительного сырья совпадают с естественным рН смеси сырья с водой, что не требует использования в технологическом процессе кислот и щелочей для корректировки кислотности гидролизуемой смеси

Выбор наиболее эффективного ферментного препарата для выделения белков сои и гороха

Проведен ферментолиз бобового сырья в рациональных режимах, установленных для каждого вида сырья (табл 3)

Таблица 3

Влияние ферментных препаратов на выход белка (п=3; У^%)*

Сырьевой источник Ферментный препарат Режимы обработки Выход белка при оптимальных условиях, % к массе С В сырья

Продолжительность гидролиза, ч Доза протеазы, ед/г сырья Гидромодуль Температура, °С Я Сч

Измельченные бобы сои ПВ 6,0 0,485 1 10 50,0 6,2 7,8

ПР 5,0 0,014 1 10 70,0 6,2 17,3

БР 5,0 0,47 1 10 45,0 6,2 7,2

Обезжиренная соевая мука ПВ 6,0 0,485 1 10 50,0 6,8 20,8

ПР 5,0 0,014 1 10 70,0 6,8 35,1

БР 5,0 0,47 1 10 45,0 6,8 15,8

Окара ПВ 6,0 0,485 1 10 50,0 6,0 3,7

ПР 5,0 0,014 1 10 70,0 6,0 4,1

БР 5,0 0,47 1 10 45,0 6,0 3,5

Обезжиренная мука гороха ПВ 5,0 0,24 1 10 50,0 6,7 2,8

ПР 4,0 0,01 1 8 60,0 6,7 20,8

БР 4,0 0,35 1 12 45,0 6,7 7,1

* - п - количество повторностей измерений, V - коэффициент вариации, %

100-1 - 100

75- / • 75

Выход соевого Выход горохового

белка, % от шах 50 - • 50 белка, % от тах

(100%) У А ■ 4---Л----* —_ (100%)

25- - •———* - -25

п. . п

40 45 50 55 60 65 70 75

Температура, °С

Рис. 7. Влияние температуры на выход белка при использовании

препарата ПВ

—♦— измельченные бобы сои -*- окара

соевая обезжиренная мука -*- гороховая обезжиренная мука

За 100 % принят выход соевого белка 20,8 %, выход горохового белка - 2,8 %

100 -| Г 100

75 - - 75

Выход соевого к— Выход горохового

белка, % от max 50 - ■ 50 белка, %оттах

(100%) *— —*— (100%)

25 - ■ • -1—•—!—f—;—•—;—• I * Г~* ■ 25

0 -1 Т ) Т | т—|—1—|—1—|—1—|—1— 1- 0

40 45 50 55 60 65 70 75

Температура, С

Рис 8. Влияние температуры на выход белка при использовании

препарата ПР

—♦— измельченные бобы сои —•— окара

А соевая обезжиренная мука гороховая обезжиренная мука

За 100 % принят выход соевого белка 35,1 %, выход горохового белка - 20,8 %

100 j

75 -Выход соевого белка, % от шах 50 - -(100%)

25

0

-Г 100 -- 75

Выход горохового 50 белка, % от max (100%) + 25

40 45 50 55 60 65 70 75

Температура, °С

Рис. 9 Влияние температуры на выход белка при использовании ферментного препарата БР

-измельченные бобы сои - соевая обезжиренная мука

окара

гороховая обезжиренная мука

За 100 % принят выход соевого белка 15,8 %, выход горохового белка - 7,1 %

Показано, что наиболее эффективным препаратом для выделения белка из бобовых культур является комплексный препарат ПР (Bacillus subtilis и Pemcilhum emersonn), использование которого позволяет достичь максимального выхода белка для измельченных бобов сои - 17,3 %, для обезжиренной соевой муки - 35,1 %, для окары - 4,1 %, для горохового сырья -20,8 %

Лучшим сырьем по выходу растительного белка является соевая обезжиренная мука Однако, учитывая доступность сырьевых ресурсов и низкую стоимость гороховой муки, ее также рекомендуется использовать для получения белковых препаратов

Исследование возможности комплексной переработки бобов сои с использованием метода биокатализа В результате исследования химического состава сырья (табл 2) было показано, что измельченные бобы сои обладают высоким содержанием не только белка (38,5 %), но и масла (17,2 %) В связи с этим представлялось целесообразным исследование возможности замены растворителей на стадии экстракции соевого масла на ферментные препараты

Изучение процесса выделения соевых белка и масла при обработке бобов сои различными ферментными препаратами

На данном этапе работы исследована возможность выделения белка и масла с использованием ферментных препаратов ПВ, ПР, а также 4 микробных препаратов карбогидраз, разрушающих структуру клеточной стенки растений -ВИС, БГ, АМГ и ЦК Условия ферментативного процесса для препаратов ПВ и ПР были выбраны, учитывая полученные данные о рациональных режимах выделении белка из соевого сырья, для препаратов ВИС, БГ, АМГ и ЦК -согласно рекомендациям фирм-производителей Во всех полученных соевых экстрактах определяли содержание белка и масла (табл 4)

Таблица 4

Влияние ферментных препаратов и условий гидролиза на качественные

Ферментный препарат Доза, % к массе сырья Условия гидролиза Выход масла, % к с в сырья Выход белка, % к с в сырья

т, ч t, °С Гидромодуль

ПВ 0,11 6 50 1 10 7,0 7,8

ПР 0,015 5 70 1 10 17,1 17,3

ВИС 0,05 2 50 1 10 5,0 9,7

БГ 0,02 2 60 1 10 5,0 14,7

АМГ 4,0 2 70 1 10 5,6 19,3

ЦК 0,05 2 50 1 10 6,8 19,0

Установлено, что для исследуемых карбогидраз лучший результат по выделению масла наблюдается при использовании препарата целлюлазы ЦК -6,8 % При этом выход белка составляет 19,0 % Аналогичный выход соевого белка достигается при использовании препарата амилолитического действия

АМГ - до 19,3 %, однако выход масла несколько ниже, чем при использовании препарата ЦК Учитывая это, для дальнейших исследований выбран препарат ЦК (активность целлюлазы - 7600 ед/мл)

Выбор композиции ферментов для интенсификации процесса гидролиза Учитывая полученные экспериментальные данные по использованию индивидуальных ферментных препаратов, были подобраны три композиции препаратов ПВ+ЦК, ПР+ЦК и ПР+ПВ+ЦК

Дозы ферментных препаратов, гидромодуль и рН были выбраны на основании экспериментально полученных рациональных режимов для выделения соевого белка

В случае использования композиции ферментных препаратов, состоящей из протеазы ПВ и целлюлазы ЦК, температурный режим использования обоих препаратов совпадает и составляет 50 °С

Для обработки сырья композициями ПР+ЦК и ПВ+ПР+ЦК ферментативную обработку сырья предложено вести в 2 этапа нагревание соевой суспензии до температуры 50 °С (действие целлюлазы ЦК и протеазы ПВ) в течение 1 ч с последующим нагреванием смеси сырья с водой до 70 °С, внесением комплексного препарата ПР и продолжением гидролиза при данной температуре

Содержание белка и масла в экстрактах определяли в динамике ферментативного процесса (рис. 10)

ПВ+ЦК ПР+ЦК ПВ+ПР+ЦК

Продолжительность гидролиза, ч Рис. 10. Влияние продолжительности гидролиза на выход белка и масла при воздействии композиций ферментных препаратов на бобы сои □ масло □ белок

Установлено, что использование композиции ПВ+ПР+ЦК позволяет сократить продолжительность процесса ферментативного гидролиза для достижения максимального выхода белка до 3 ч Выход соевого белка в экстракт на 3-м часу гидролиза составляет 36,5 %, соевого масла - 14,3 % Получение изолята соевого белка осуществляли выделением из экстракта в изоэлектрической точке (рН 4,5) Следует отметить, что выход белка в виде изолята составляет 35,0 %, т е. потери на стадии выделения белка из раствора в изоэлектрической точке - 1,5 % от содержания С.В в сырье.

Оптимизация доз ферментных препаратов в энзимной композиции С целью оптимизации доз ферментных препаратов по схеме полного факторного эксперимента построена математическая модель, описывающая процесс получения белка из измельченных бобов сои:

У =34,55 + 332Х[ + 7,6Х2 - 0,4Х3- 224Х2Х3 - 1520Х,Х3 - 10800Х,2 + 384ХД где Хь Х2 и Хэ - дозы препаратов ГТР, ПВ и ЦК соответственно, % к массе сырья.

Поверхность отклика при постоянных значениях параметра дозы препарата ЦК (0,034 и 0,042 %) представлена на рис. 11.

36,3 с!

о 36,72

К

¡Г

3(3,7 36,65 36,6 Зе'.ЗЗ Э6.5

0.01 0,011 0,012 0,013 0,014 0,015 0,016 0.017— 2- ° До,а

До!« пр«[¿р 1та ИР, % х вздлсе шрьА ущ ^ к

Рис. 11. Зависимость выхода белка из измельченных сыр*„ бобоа соч от дозы ферментных препаратов

П доза препарата ЦК 0,034% О доза препарата ЦК 0,042%

Применение математической обработки экспериментальных данных позволило сократить дозы препаратов в энзимной композиции: препарата ПР от 0,015 % (0,014 ед'г сырья) до 0,013 % (0,012 ед/г сырья); Л В от 0,1 % (0,485 ед/г сырья) до 0,03 % (0,15 ед/г сырья); ЦК от 0,05 % (3,8 ед/г сырья) до 0,034 % (2,584 ед/г сырья). Теоретически рассчитанный выход белка при установленных оптимальных дозах составил 36,8 %, что в пересчете на исходное содержание в сырье составляет 95,7 %.

Разделение белково-жировой эмульсии из сырья сои на белкойуто_» масляную фракции

Для дестабилизации белково-жировой эмульсии, полученной после ферментативной обработки бобов сои, были применены физические и химические приемы: седиментационный метод, воздействие различных температур и введение растворов поваренной соли.

При изучении возможности использования сед им ентац ионного метода регулировали частоту вращения ротора центрифуги (от 1000 до 7000 об/мин) и продолжительность обработки (от 15 до 60 мин).

Критерием опенки выхода масляной фазы при определении оптимальных режимов разделения эмульсии являлась масса препаративно выделенного соевого масла (рис. 12).

0 5

ее 5

£ з

1 £

Л ГУ

Ю а Я

90 1 80 -70 60

0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

Частота вращения ротора центрифуги, об/мин

Рис. 11. Влияние параметров центрифугирования на выход масла

из соевой эмульсии

—♦—продолжительность процесса 15 мин — продолжительность процесса 30 мин —А— продолжительность процесса 45 и 60 мин

Установлено, что максимальное значение выхода соевого масла из эмульсии (82 %) достигается центрифугированием при 6000 об/мин Дальнейшее увеличение частоты вращения ротора не приводит к увеличению выхода масла из эмульсии Показано, что при увеличении продолжительности центрифугирования от 15 до 45 мин выход соевого масла повышается незначительно - от 82 до 86 %. Дальнейшее увеличение продолжительности процесса не приводит к увеличению выхода масла

При исследовании влияния введения в систему ИаС1 на процесс выделения соевого масла из эмульсии в систему вводили растворы ЫаС1 различной концентрации от 2,5 до 10,0 %, а также контрольный раствор без поваренной соли при температурах 20 и 50 °С при установленных рациональных режимах центрифугирования (рис 13)

Концентрация КаС1, % Рис 13. Зависимость выхода масла из соевой эмульсии от

концентрации №С1

020 °С Ш50 °С

Установлено, что для достижения максимального выхода соевого масла из эмульсии (93 %) требуется введение в систему №С1 в количестве 0,3 % к массе исходного сырья в виде 2,5%-го раствора и температура 20 °С

Таким образом, каждый из исследуемых методов разделения эмульсии метод давал положительный эффект, а их совокупность позволила достичь выхода соевого масла до 93 % к его исходному содержанию в эмульсии

Так, при обработке эмульсии, содержащей 14,3 % соевого масла, полученной при воздействии на измельченные бобы сои композиции ферментных препаратов ПР+ПВ+ЦК, из исходного сырья возможно получить до 13,3 % масла (77,3 % к исходному содержанию в сырье) Получение пектина из отходов переработки сои (окары) Учитывая значительное содержание пектина в исходном сырье (8,2 %) сочли целесообразным исследовать динамику процесса выделения пектина в экстракт (соевое молоко) при воздействии на измельченные бобы сои выбранной композиции ферментных препаратов ПР+ПВ+ЦК во временном диапазоне от 1 до 6 ч

Показано, что при продолжительности процесса 3 ч, необходимой для достижения максимального выхода соевых белка и масла, в растворимое состояние переходит незначительная часть соевого пектина, а основная его часть остается в окаре - 6,4 %, что свидетельствует о возможности ее использования для получения пектиновых веществ

Выделение пектина из окары, полученной после извлечения белка и масла из бобов сои, проводили используя обработку композицией ферментных препаратов, предложенную Г H Румянцевой и О А Варфоломеевой, состоящую из препарата ПР (Bacillus subtihs, Pénicillium emersonn), пектинтрансэлиминазы БГ (Bacillus subtihs) и препарата БЦ (Bacillus subtilis), обладающего активностями /?-глюканазы и целлюлазы

В качестве контроля использовали промышленный образец окары, образующийся после получения соевого молока (табл 5)

Таблица 5

Выход пектина из окары и его физико-химические свойства ____(n-3; V<S%)____________

Выход пектина

Сырьевой источник % к массе сырья % к исходному содержанию в бобах сои рН экстракт01 Вязкость экстрактов мПас Степень этерификации, %

Экспериментальный образец окары 6,4 78,0 6,54 1,75 57,75

Контроль промышленный образец окары 7,2 87,4 6,85 1,8 57,7

Показано, что использование ферментативной обработки соевой окары, полученной после выделения белка и масла биотехнологическим способом, позволяет получить из бобов сои до 80 % пектина от его исходного содержания в цельных бобах Этот показатель несколько ниже, чем при использовании в качестве сырьевого источника промышленной окары, что объясняется потерями пектина на стадии экстрагирования белка и масла

Учитывая низкую степень этерификации и, следовательно, низкую

желирующую способность, соевый пектин можно рекомендовать для использования в профилактических и медицинских целях как комплексообразователь и детоксикант

На основании полученных данных разработана принципиальная технологическая схема переработки бобовых культур, включающая получение комплекса продуктов белка, масла и пектина (рис 14)

Рис. 14. Принципиальная схема комплексной переработки бобовых культур

Разработанная схема апробирована в опыт!го-промышленных условиях ООО "Гелла-ТЭКО" на установке марки СМ-30. Концентрирование экстрактов, полученных после ферментативной обработки сырья, осуществляли с применением ультра фильтрационных полисульфонамидных мембран в соответствии с режимами, предложенными РХТУ им. Д.И. Менделеева. Сушку белковых препаратов из сои и гороха проводили с использованием метода сублимации в НТЦ "Лекбиотех" при следующих параметрах: температура замораживания -30 -35 °С; продолжительность замораживания - 12 ч; продолжительность сушки - 5-7 ч; давление в камере 1-5' 10' мбар.

Полученные лабораторные образцы белковых препаратов представляют собой белый порошок без запаха с нейтральным вкусом.

При использовании сырьевых источников, содержащих незначительное количество масла (обезжиренная мука гороха, обезжиренная соевая мука, окара), из технологии исключается стадия выделения масла из экстракта, полученного после ферментативного гидролиза сырья. Энзиматическая обработка ведется при использовании рациональных режимов, установленных для каждого вида сырья.

Оценка качественных характеристик полученных белковых продуктов гидролиза

Исследование белковых продуктов ферментативного гидролиза методом электрофореза в полиакриламидном геле

Исследован фракционный состав белковых продуктов из сои и гороха, полученных С использованием био катализа методом электрофореза в полиакриламидном геле. Ферментативную обработку сырья при получении препаратов белка проводили, используя установленные ранее рациональные режимы. В качестве контроля использовали исходные сырьевые источники, а также коммерческие белковые препараты - соевый изолят "Майсол 90" и препарат растворимой гороховой муки (рис. ¡5).

Рис. 15. Фракционный состав белковых препаратов и сырьевых источников: 1 - соевая обезжиренная мука; 2 - соевый белковый препарат; 3 - коммерческий соевый изолят Майсол 90; 4 - гороховин обезжиренная мука; 5 - гороховый белковый препарат; б - коммерческий препарат растворимой гороховой муки; М - белки-маркеры.

Данные электрофореграммы показали, что при ферментативном гидролизе соевого сырья полипептиды с молекулярной массой более 45 кДа подверглись гидролитическим изменениям, при этом в составе продуктов гидролиза преобладает фракция с молекулярной массой 20 кДа, а также присутствуют полипетиды с молекулярной массой 14 и 36 кДа

Наблюдаемое снижение молекулярной массы белкового компонента позволяет сделать вывод о том, что в процессах экстракции соевого белка использование микробных протеаз способствует увеличению выхода белкового компонента в водный экстракт, используемый для выделения белка в изоэлектрической точке

Уменьшение молекулярной массы белковых фракций в составе исследуемого препарата по сравнению с белком сои, не подвергнутом энзиматической обработке, свидетельствует об изменении функционально-технологических свойств, в частности об увеличении растворимости и гидрофильности белковых молекул

Следует отметить, что коммерческий изолят соевого белка отличается от экспериментального образца наличием фракции с молекулярной массой 66 кДа, т е обладает меньшей растворимостью

Что касается гороховой муки, то в процессе ферментативного гидролиза фракционный состав белков исходного сырья остается практически неизменным Исходя из этого, можно сделать вывод, что в процессе выделения белка из гороховой муки главная роль принадлежит ферментам, действующим на полисахариды растительного сырья

Изучение функционально-технологических свойств белковых препаратов Проведена оценка основных качественных свойств экспериментальных препаратов белка сои и гороха В качестве контроля были выбраны коммерческие препараты соевого и горохового белка - изоляты соевого белка "Майсол 90" и "Майсол И" и препарат растворимой гороховой муки (табл. 6)

Таблица 6

Основные качественные характеристики белковых препаратов из бобов

сои и гороха (п=3; V

Образец Содержание белка, % к с в Доля растворимого белка, % рН 10% -й суспензии ККГ, % ВУС, г/г ЖУС, г/г Устойчивость эмульсии, % (при соотношении I белок масло вода 1 9 9)

при 20 °С к 9 е {2

1 Коммерческие белковые препараты

Майсол-90 90,21 79,11 81,15 7,28 15,0 6,0 1,0 10,75

Майсол-И 90,19 75,73 79,11 7,0 15,0 6,0 0,9 51,82

Растворимая гороховая мука 26,99 72,06 86,97 6,26 18,0 4,0 0,5 37,63

2 Экспериментальные белковые препа| эаты

Соевый белковый изолят 94,76 82,39 85,82 7,0 16,0 6,2 1,0 43,52

Гороховый белковый концентрат 70,68 74,83 78,99 7,0 23,0 4,4 0,5 50,98

Установлено, что по содержанию белка препараты, полученные методом биокатализа, можно отнести как к изолятам (соевый белковый препарат), так и к концентратам (гороховый белковый препарат)

Показано, что по функционально-технологическим свойствам белковые препараты, полученные с использованием ферментативной обработки соевого и горохового сырья, практически не уступают своим коммерческим аналогам, а по некоторым показателям (содержание белка в препарате, растворимость, водоудерживающая и эмульсионная способности) даже превосходят их

Исследование возможности использования экспериментальных белковых препаратов в технологии мясопродуктов

Проведено сравнение свойств вареных колбас, изготовленных с использованием продуктов ферментативного гидролиза - соевого белкового изолята и горохового белкового концентрата

Для определения показателей качества мясных изделий в условиях стенда ВНИИ мясной промышленности была проведена выработка готовых изделий по рецептуре вареной колбасы "Свиная" 1 сорта (ГОСТ Р 52196-2003). Уровень замены мясного сырья препаратами гидратированных растительных белков (с учетом степени гидратации каждого препарата) составлял 5 % Первым контролем служила вареная колбаса, изготовленная с использованием коммерческого соевого изолята "Майсол 90", вторым - образец колбасы, не содержащей белковых препаратов

Оценка показателей качества образцов вареных колбас (табл 7) показала, что образец, выработанный с использованием препарата соевого белка, полученного биотехнологическим методом, обладает наибольшими значениями водоудерживающей способности, пластичности и предельного напряжения сдвига Образец, выработанный с использованием горохового белка, уступает контрольным незначительно

Таблица 7

Значения показателей качества контрольных и опытных образцов

вареных колбас (п=3; У^>%)

Образец Массовая доля влаги, % Потери при термообработке, % ВУС, % Пластичность, см2/г Предельное напряжение сдвига, кПа

Биопрепарат соевого белка 70,2 0,4 77,0 11,4 8,8

Контроль 1 (Майсол 90) 70,2 0,2 72,9 10,2 6,5

Биопрепарат горохового белка 69,6 0,2 65,8 8,7 5,2

Контроль 2 (без использования белковых добавок) 64,6 0,1 73,0 10,2 7,1

Результаты органолептической оценки вареных колбас показали, что образец, содержащий концентрат горохового б!елка по органолептическим свойствам аналогичен контрольному образцу, содержащему коммерческий соевый изолят "Майсол 90", и несколько уступает по показателям сочности и

консистенции образцу, выработанному без использования белковых добавок Образец, содержащий соевый изолят, полученный методом биокатализа, по всем показателям сенсорной оценки значительно превосходит контрольные образцы

Таким образом, оценка показателей качества вареных колбас, изготовленных с использованием белковых препаратов из сои и гороха, полученных методом биокатализа, подтверждает возможность их использования при производстве мясопродуктов.

Полученные данные легли в основу разработанного экспериментального регламента на производство соевого белкового изолята

Расчет экономической эффективности производства препаратов белка с использованием биокатализа, показал, что себестоимость препарата из гороха на 9,15 руб ниже, чем из традиционно используемого сырья - сои Рассчитанная цена соевого изолята, полученного биотехнологическим способом, не превышает цены коммерческого препарата "Майсол И"

ВЫВОДЫ

1 В результате изучения протеолитической активности 8 ферментных препаратов выявлено преимущество использования для гидролиза растительного сырья микробных ферментных препаратов (48-485 ед/г) перед препаратами животного (53 ед/г) и растительного (79-215 ед/г) происхождения

2 Показано, что оптимальными условиями действия ферментных препаратов являются для протеаз ПВ (Bacillus subtilis) и ПР (Bacillus subtihs и Pénicillium emersonn) t = 50 °С и рН 7,0, для протеазы БР (Bacillus subtihs) -1 = 45 °С ирН 7,0

3 Установлен уровень специфичности протеаз микроорганизмов в отношении белков сои и гороха Наибольшее сродство фермента к субстрату отмечено у нейтральной протеазы Bacillus subtilis (гороховый субстрат - Км = 27,0 мг/мл, соевый субстрат Км = 23,0 мг/мл)

4 Показано, что рациональными режимами процесса выделения белка бобовых культур являются

- для протеазы ПВ t = 50 °С, гидромодуль 1 10, рН естественный для смеси сырья с водой, продолжительность процесса для сои 6 ч, для гороха -5 ч, доза - 0,485 ед/г для соевого сырья, 0,24 ед/г - для горохового,

- для препарата ПР t = 70 °С для соевого сырья, 60 °С - для горохового, гидромодуль 1 10, рН естественный для смеси сырья с водой, продолжительность процесса для соевого сырья 5 ч, для горохового -4 ч, доза - 0,014 ед/г для соевого сырья, 0,01 ед/г - для горохового сырья,

- для препарата БР t = 45 °С, рН естественный для смеси сырья с водой, гидромодуль 1 10 для соевого сырья, 1 12 - для горохового, продолжительность процесса для соевого сырья 5 ч, для горохового -4 ч, доза - 0,47 ед/г для соевого сырья, 0,35 ед/г - для горохового сырья

5 Создана композиция ферментных препаратов, применение которой позволяет увеличить выход соевых белков до 36,8 % и масла до 14,3 % к массе сухих веществ сырья Установлены оптимальные дозы биокатализаторов в

композиции ПР - 0,012, ПВ - 0,485 и ЦК - 2,584 ед/г сырья

6 Установлено, что для разделения белково-жировой эмульсии, полученной в результате ферментативной обработки сои, седиментационный метод, воздействие температуры и ИаС1 дают положительный эффект, а их совместное применение позволяет достичь выхода масла из эмульсии до 93 % к его исходному содержанию в эмульсии

7 Показана возможность ферментативного выделения пектина из соевой окары (до 80 % к исходному содержанию в цельных бобах) Степень его этерификации составляет не более 57,7 %, что позволяет рекомендовать его для использования в медицинских и профилактических целях

8 В результате электрофоретических исследований идентифицированы фракции полипептидов с молекулярной массой от 14 до 36 кДа в препарате соевого белка, что свидетельствует о глубоком гидролизе белкового субстрата и получении растворимых форм белка При изучении функционально-технологических свойств экспериментальных белковых препаратов выявлены высокие показатели растворимости (86 %), водоудерживающей (6,2 г/г) способности препарата соевого белка и эмульсионной способности (51 %) горохового белка

9 Предложена принципиальная технологическая схема биотехнологической переработки бобовых культур с получением комплекса продуктов белка, масла и пектина Разработан опытно-промышленный (экспериментальный) регламент на производство соевого белка с использованием ферментных препаратов микробного происхождения Технология прошла испытания в опытно-промышленных условиях ООО "Гелла-ТЭКО"

10 Установлена возможность замены 5 % мясного сырья при производстве вареных колбас гидратированными препаратами соевого и горохового белка, полученными биотехнологическим способом

Выражаю благодарность директору НТЦ "Лекбиотех" Бравовой Г Б и

зав лаб биологически активных веществ [Шишковой ЭА [за получение сублимированных образцов белковых препаратов, генеральному директору ОАО "Гелла-ТЭКО" Свитцову А А и главному технологу Горячему НВ за организацию опытно-промышленных испытаний, а также зав лаб "Технология колбас и полуфабрикатов" ГНУ ВНИИМП им В М Горбатова Семеновой А А за организацию стендовых испытаний белковых препаратов при изготовлении вареных колбас

По материалам диссертации опубликованы следующие работы:

1 Румянцева Г Н Свойства белков сои и гороха, полученных биотехнологическим методом / ГН Румянцева, МИ Осадько // Мясная индустрия - 2005 - №2 - С 44-45

2 Румянцева Г.Н. Биотехнологический способ получения изолятов белка бобовых культур / Г Н. Румянцева, М И Осадько // Биотехнология состояние и перспективы развития Материалы III Московского Международного

конгресса -М, 2005-С 150-151

3 Румянцева Г Н Получение дополнительных продуктов из сырья сои / ГН Румянцева, А А Свитцов, МИ Осадько // Биотехнология-2005. Материалы 8-го Международного семинара-презентации инновационных научно-технических проектов -Пущино, 2005 - С 112-114

4 Румянцева ГН Сравнительные данные о ферментных препаратах, катализирующих протеолиз белков из бобовых культур / Г Н Румянцева, М И Осадько // Значение биотехнологии для здорового питания и решения медико-социальных проблем Материалы научно-практической конференции -Калининград, 2005 - С 84-85

5 Румянцева Г Н Влияние температуры и процесса протеолиза на выход соевого и горохового белка / Г Н Румянцева, М И Осадько // Живые системы и биологическая безопасность населения Материалы 4-ой Международной научной конференции студентов и молодых ученых - М МГУПБ, 2005 - С 20

6 Осадько М И Исследование влияния физических и химических факторов на выделение соевого масла из эмульсии, полученной биотехнологическим методом / МИ. Осадько, ЕГ. Васильев, ГН Румянцева// Живые системы и биологическая безопасность населения Материалы 5-ой Международной научной конференции студентов и молодых ученых - М. МГУПБ, 2006 - С 36

7 Макурина С В Биокатализ в процессах получения пищевых добавок из растительного сырья / С В Макурина, М Н Евсеичева, М И Осадько, Г Н Румянцева // Живые системы и биологическая безопасность населения Материалы 5-ой Международной научной конференции студентов и молодых ученых -М МГУПБ,2006 -С 7-8

8 Румянцева ГН Роль микробных ферментов при получении соевого белка / Г Н Румянцева, М И Осадько // Хранение и переработка сельхозсырья -2007 -№2 - С 53-54

9 Осадько М И Режимы ферментативной обработки сырья при получении соевого белка /МИ Осадько, Г Н Румянцева // Хранение и переработка сельхозсырья -2007 -№3 - С 46-48

10 Румянцева Г.Н Исследование ферментативного процесса выделения масла из бобов сои / Г Н Румянцева, М И Осадько // Биотехнология состояние и перспективы развития Материалы IV Московского Международного конгресса - М, 2007 - С 212

11 Румянцева ГН Получение белка бобовых культур с использованием химического и ферментативного гидролиза* методические указания к лабораторно-практическим работам для студентов специальностей 240901 и 240902/Г Н Румянцева, А И Жаринов,МИ Осадько -М МГУПБ, 2007 - 24 с

Подписано в печать 25 06 07 Формат 60x84 1/16

Печать лазерная Уел печ л 1,5

Заказ 4/12 Тираж 100 экз

МГУПБ 109316, Москва, ул Талалихина, 33

ООО "Полисувенир" МГУПБ 109316, Москва, ул Талалихина, 33

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКОЙ И ПАТЕНТНОЙ

ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Характеристика бобов сои и гороха как сырья для получения пищевых веществ.

1.2. Химический состав и свойства растительных белков, масел и пектинов.

1.2.1. Состав и строение белков бобовых культур.

1.2.2. Классификация, свойства и области применения белковых препаратов и:* семян бобовых.

1.2.3. Химический состав и строение растительных масел.

1.2.4. Состав и строение пектиновых веществ растений.

1.3. Ферментные препараты и их применение.

1.3.1. Классификация и мех-анизм действия ферментов.

1.3.2. Источники получения ферментов микробного, животного и растительного происхождения.

1.3.3. Области применения ферментов протсолитичсского действия.

1.4. Использование биокатализа в процессах получения растительных белков, масел и пектина.

1.4.1. Применение ферментов для получения белковых препаратов.

1.4.2. Использование ферментных препаратов в процессах получения растительных масел.

1.4.3. Получение пектина с использованием ферментных препаратов.•.

Актуальность работы. В настоящее время задача обеспечения населения полноценными пищевыми веществами, такими как белки, жиры и углеводы сохраняет свою актуальность.

Определенный вклад в решение этой задачи вносят исследования, направленные на повышение эффективности современных пищевых производств, в основе которых лежит рациональное использование пищевого сырья, а также вовлечение в производство нетрадиционных ресурсов.

Большой интерес в качестве сырьевого ресурса для выработки пищевых продуктов представляют соевые бобы и продукты их переработки, в частности соевая мука, а также такой нетрадиционный вид сырья, как культура гороха, широко распространенная в нашей стране и практически Fie используемая для получения пищевого белка.

Следует отметить, что 'традиционная технология переработки бобов сои, включающая получение компонентов белковой и жировой природы имеет ряд недостатков, связанных с использованием высоких 'температур, органических растворителей и других химических реагентов, что негативно отражается на качестве конечных продуктов.

Учитывая это, особую актуальность приобретает совершенствование существующих технологий за счет использования в качестве гидролизующих агентов микробных ферментных препаратов, которые благодаря своей специфичности и эффективности действия позволяют проводить направленную модификацию сырья, повысить выход целевых продуктов, а также улучшить экологическое состояние производства.

Исследования в области 1 биотехнологической переработки растительного сырья, в частности, бобовых культур, позволят рекомендовать промышленности наиболее эффективные ферментные препараты и режимы их использования при получении наиболее ценных компонентов пищи: белка, масла, пектина.

Научная новизна работы сострит в том, что: установлена высокая субстратная специфичность протеаз микроорганизма Bacillus subtilis в отношении белков сои и гороха;

- показана роль протеаз и карбогидраз микроорганизмов в процессе обработки муки бобовых культур и создана композиция па их основе, позволяющая получить максимальный выход белка и масла;

- изучены продукты гидролиза белков сои и гороха препаратами протеолитического и карбогидразного действия методом электрофореза, идентифицированы основные белковые фракции и определена их молекулярная масса;

- установлены функционально-технологические свойства белков сои и гороха, полученных с использованием микробных ферментных препаратов;

- впервые методом ферментативного катализа из соевой окары выделен пектин и установлены его основные качественные характеристики.

Практическая ценность работы:

- установлена возможность замены химических реагентов на стадии экстракции белка и масла бобовых культур на ферментные препараты микробного происхождения; Г

- экспериментально обоснованы и предложены рациональные для выделения белка и масла бобовых культур режимы ферментативной обработки сырья;

- экспериментально установлена эффективность использования совокупности физических и химических методов для разделения белково-жировой эмульсии, полученной в результате ферментативной обработки бобового сырья, и установлены рациональные режимы разделения фаз;

- разработан экспериментальный регламент па производство соевого белкового изолята с использованием/на стадии экстракции ферментных препаратов микробного происхождения;

- метод апробирован с положительным эффектом в опытно-промышленных условиях ООО Телла-ТЭКО".

Апробации работы. Результаты диссертационной работы были представлены на:

- 4-ой Международной научной конференции студентов и молодых ученых "Живые системы и биологическая безопасность населения" (Москва,

2005). Работа отмечена дипломом;

- Всероссийской выставке научно-технического творчества молодежи (Москва, 2006);

- 5-ой Международной научной конференции студентов и молодых ученых "Живые системы и биологическая безопасность населения" (Москва,

2006). Работа отмечена дипломом; (

IV Московском Международном конгрессе "Биотехнология: состояние и перспективы развития" (Москва, 2007). Работа отмечена дипломами и медалями II и III степени.

Публикации. По результатам проведенных исследований опубликовано 11 печатных работ. •

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, включающей методы и объекты исследования, результаты и их обсуждение; выводов, списка используемой литературы и патентов, а также приложений.

выводы

1. В результате изучения прогеолитической активности 8 ферментных препаратов выявлено преимущество использования для гидролиза растительного сырья микробных ферментных препаратов (48-485 ед/г) перед препаратами животного (53 ед/г) и растительного (79-215 ед/г) происхождения в процессе выделения белка бобовых.

2. Показано, что оптимальными условиями действия ферментных препаратов являются: для протеаз ПВ (Bacillus sublilis) и ПР (Bacillus sublilis и Penicillium emersonii) I = 50 °C и pi 1 7,0; для протеазы ЬР (Bacillus sublilis) -I = 45 °C и pi I 7,0.

3. Установлен уровень специфичности протеаз микроорганизмов в отношении белков сои и гороха. Наибольшее сродство фермента к субстрату отмечено у ней тральной протеазы Bacillus sublilis (гороховый субстрат - Км = 27,0 мг/мл, соевый субстрат Км = 23,0 мг/мл).

4. Показано, что рациональными режимами процесса выделения белка бобовых культур являются:

- для протеазы ПВ: I = 50 °С, гидромодуль 1:10, рП естественный для смеси сырья с водой, продолжительность процесса для сои 6 ч, для гороха - 5 ч, доза - 0,485 ед/г для соевого сырья, 0,24 ед/г - для горохового;

- для препарата IIP: I = 70 °С для соевого сырья, 60 °С - для горохового, гидромодуль 1:10, рН естественный для смеси сырья с водой, продолжительность процесса для соевого сырья 5 ч, для горохового -4 ч, доза - 0,014 ед/г для соевого сырья, 0,01 ед/г - для горохового сырья;

- для препарата HP: I = 45 °С, рН естественный для смеси сырья с водой, гидромодуль 1:10 для соевого сырья, 1:12 - для горохового, продолжительность процесса для соевого сырья 5 ч, для горохового - 4 ч, доза - 0,47 ед/г для соевого сырья, 0,35 ед/г - для горохового сырья.

5. Создана композиция ферментных препаратов, применение которой позволяет увеличить выход соевых белков до 36,8 % и масла до 14,3 % к массе сухих веществ сырья. Установлены оптимальные дозы биокатализаторов в композиции: ПР - 0,012; ПВ - 0,485 и ЦК - 2,584 ед/г сырья.

6. Установлено, что для разделения белково-жировой эмульсии, полученной в результате ферментативной обработки сои, ссдимсптационный метод, воздействие температуры и NaCl дают положительный эффект, а их I совместное применение позволяет достичь выхода масла из эмульсии до 93 % к сто исходному содержанию в эмульсии.

7. Показана возможность ферментативного выделения пектина из соевой окары (до 80 % к исходному содержанию в цельных бобах). Степень его этерификации составляет не более 57,7 %, что позволяет рекомендовать его для использования в медицинских и профилактических целях.

8. В результате элсктрофоретических исследований идентифицированы фракции полипептидов с молекулярной массой от 14 до 36 кДа в препарате соевого белка, что свидетельствует, о глубоком гидролизе белкового субстрата и получении растворимых форм белка. При изучении функционально-технологических свойств экспериментальных белковых препаратов выявлены высокие показатели растворимости (86 %), водоудерживающей (6,2 г/г) способности препарата соевого белка и эмульсионной способности (51 %) горохового белка.

9. Предложена принципиальная технологическая схема биотехпологичсской переработки бобовых культур с получением комплекса продуктов: белка, масла и пектина. Разработан опытно-промышленный (экспериментальный) регламент па. производство соевого белка с использованием ферментных препаратов микробного происхождения. Технология прошла испытания в опытно-промышленных условиях ООО "Гелла-ТЗКО".

10. Установлена возможность замены 5 % мясного сырья при производстве вареных колбас гидратированпыми препаратами соевого и горохового белка, полученными биотехнологическим способом.

1. А.е. 467732 СССР МКИ А 23 1/04. Способ получения пектина / Ф.Г. Нахметов, М.Л.Фрумкип, К.А.Калуиянц, Р.П.Гребешкова, ВИИИКОП.-№1960386/28-13; заявл.06.09.73; опубл. 25.04.75. Бюл. №15.

2. Аверип К.М. Способ получения пищевого белка из растительного сырья / К.М. Аверип, С.В. Иванов, Б.В. Страдомский. Патент 2124844

3. РФ. -№.98115615. Заявл. 24.08.98. Опубл. 20.01.99. БИ №13.I

4. Агаларова JI.A. Разработка технологии паштета, содержащего прогеазпый гидролизат гороха: авгореф. дис. . канд. техн. наук. М., 2000. - С. 24.

5. Аптипова JI.B. Перспективы применения препарата Протепсин при производстве мясных продуктов,/ Л.В. Аптипова, Р.А. Бибишев, О.В. Ларичев, Б.В. Пастухов, 1MB. Комарова // Мясная индустрия. 2004. -№3.-С. 15-16.

6. Щ 5. Аптипова Л.В. Разработка некоторых условий ферментативногогидролиза белков чечевицы / Л.В. Аптипова, П.Н. Курчаева // ХранениеIи переработка сельхозсырья. 2001. - №6. - С. 18-21.

7. Аптипова JI.B. Способ получения концентрата белков из растительного сырья / Л.В. Аптипова, И.А. Глотова, В.10. Астанипа. Патент 2174757 РФ. -№.2002132034. Заявл. 12.04.00. Опубл. 04.10.01. БИ №14.

8. Базарнова Ю.Г. Бслоксодержащие добавки для мясных продуктов / Ю.Г. Базарнова, A.J1. Ишевский, В.И. Соскип, П.В. Ринас // Пищевые ингредиенты. Сырье и добавки. 2004. - №1. - с. 75-78.

9. Балдынова Ф.П. Биотехнологический способ получения пектина изсвекловичного жома / Ф.П. Балдынова, О.Ю. Фалилеева, А.Г. Хаптургаев // Биотехнология: состояние и перспективы развития: материалы IV Московского Международного конгресса. М., 2007. -С. 44.

10. Барташсвич II.А. Интенсификация маслоизвлечеиия прессованием дальневосточных сортов семян сои: авторсф. дис. . капд. техп. паук. -Владивосток, 2006. С. 24.

11. П.Бархатова Т.В. Создание безотходной технологии соевого белкового концентрата / Т.В. Бархатова, A.M. Лунев // Пищевые ингредиенты. Сырье и добавки. 2003. - №1. - С. 22.

12. Бсйли Дж. Основы биохимической инженерии 4.1. / Дж. Бейли, Д. Оллис. М.: Мир, 1989. - 692 с.

13. Бслитов В.В. Совершенствование технологии вареных колбас с белково-жировыми композициями: авторсф. дис. . капд. техп. паук. -М., 2002. С. 27.

14. Ы.Березин И.В. Основы физической химии ферментативного катализа / И.В. Бсрсзип, К. Мартипек. М.: Высшая школа, 1977. - 279 с.

15. Бограчсва Т.Я. Способ получения, изолята белка и крахмала из гороха / Т.Я. Бограчева, Г.В. Гаревский, P.O. Гопсалес, М.А. Корабленко. Патент 2054265 РФ. №.94007599. Заявл. 28.02.94. Опубл. 20.02.96. БИ №13.

16. Бородип А.В. Статистические методы исследования в прикладной биотехнологии: учебное пособие:/ А.В. Бородин. М.: МГУПБ, 2000 -69 с.

17. Бравова Г.В. Ферментные препараты нового поколения для ряда отраслей пищевой промышленности / Г.В. Бравова // Биотехнология: состояние и перспективы развития: материалы III московского международного конгресса. М., 2004. - С. 90-91.

18. Браудо ЕМ. Биотехпологический метод получения растительных белковых продуктов / Г.Г. Браудо, А.П. Дапиленко, В.Т. Диапова, Н.Г.

19. Храпение и переработка сельхозсырья. 2000. - №3. - С. 17-21.

20. Буяиова И.В. Качественный состав и пищевая ценность осадка соевого молока / И.В. Буяпова, В.А. Зиновьева // Проблемы и перспективы здорового питания: сборник научных работ. Кемерово, 2000. - С. 60.

21. Буяпова И.В. Компонентный состав, функционально-технологические свойства и пищевая ценность осадка соевого молока окары / И.В. Буяпова, В.А. Зиновьева // Храпение и переработка сельхозсырья. -2002. - № 2. - С. 62-64.

22. Буяпова И.В. Получение и характеристика соевой окары 7 И.В. Буяпова, В.А. Зиновьева // Проблемы и перспективы здорового питания: сборник научных работ. Кемерово, 2000. - С. 61.

23. Буяпова И.В. Сроки храпения соевой окары для сырной массы / И.В. Буяпова, O.I I. Буянов // Сыроделие и маслоделие. 2004. - №4. - С. 2122. :

24. Варфоломеева О.А. Разработка технологии пищевого пектина па основе использования карбогидраз и лиаз микроорганизмов: автореф. дис. . канд. техн. паук. М., 2005. - С. 26.

25. Восканян О.С. Научные основы производства эмульсионных продуктов / О.С. Воскапян, В.Х. Пароияп, С.В. Круглов, Г.И. Козярипа. М.: Пищепромиздат, 2003. - 48 с.

26. Воюшипа 'ГЛ. Субтилизин в ферментативном синтезе пептидов / 'ГЛ. Воюшина, Ж.В. Потетинова, Н.И. Мильготина // Биотехнология: состояние и перспективы развития: материалы III Московского Международного конгресса. М., 2004. - С. 185.

27. Гагарина И.II. Лектипы фасоли как маркеры групп крови / И.II. Гагарина, II.Г!. Павловская // Значение биотехнологии для здорового питания и решения медико-социальных проблем: материалы научно-практической конференции. Калининград, 2005. - С. 22-23.

28. ЗГГапонова JI.B. Современные технологии переработки сои в России / Л.В. Гапонова, Т.Д. Полежаева, Н.В. Волотовская, A.JI. Кузьмин // Храпение и переработка ссльхозсырья, 2005. - №2. - С.30-31.

29. Глотова И.А. Перспективы применения белковых изолятов из чечевицы в технологии мясных продуктов / И.А. Глотова, В.10. Астанина, JI.B. Аптипова, А.Ю.'Кпязева // Вестник РАСХН. 1999.3. С. 70-73.

30. Глотова И.Л. Перспективы применения протеолитических ферментных препаратов в обработке коллагспсодежащего сырья / И.А. Глотова // Биотехнология: состояние и перспективы развития: материалы II московского международного конгресса. М., 2003. - С. 119.

31. ГОСТ 20264.3-81. Препараты ферментные. Методы испытаний.

32. ГОСТ 27670-88. Мука кукурузная. Метод определения жира.

33. ГОСТ 29186-91. Пектин. Технические условия.

34. ГОСТ 5867-69. Метод определения жира в молоке и молочных продуктах.

35. ГОСТ Р 51806.11ектип. Термины и определения.

36. Грачева И.М. Технология ферментных препаратов / И.М. Грачева, АЛО. Кривова. М.: Элевар, 2000". - 512 с.

37. Греков А. Соя. Хорошо забытое старое / А. Греков // Сфера. 2001. -№2. - С. 8-9.

38. Гуров В.А. Производство органопрепаратов / В.А. Гуров: учебник. 2-е изд., испр. и доп. - М.: Пищевая промышленность, 1976. - 172 с.

39. Гурова И.В. Исследование эмульсионных свойств концентратов соевого белка / И.В. Гурова, Г.I I. Варфоломеева, В.В. Сучков // Пища. Экология. Человек: материалы III Международной научно-технической конференции. М., 1999. - С. 37-38.

40. Гусева JI.P. Спрос па соевый белок растет / Л.Р. Гусева // Пищевые ингредиенты, сырье и добавки. 2000. - № 1. - С. 56-57.

41. Гуслянников П.В. Гидролитические изменения компонентов муки гороха в процессе индуцированного автолиза / П.В. Гусляппиков, II.Г.

42. Кроха, О.С. Андреева, A.M.: Даниленко, В.Т. Дианова, ГШ. Варфоломеева, Н.П. Браудо // Хранение и переработка сельхозсырья. -2004.-№5.-С.30-32.

43. Гуелянпнков II.В. Модифицированная мука гороха в реструктурированных ветчинных, изделиях / П.В. Гусляпииков, И.Г. Кроха, В.'Г. Дианова, Н.Е. Браудо // Мясная индустрия. 2004. - №8. -С. 18-20.

44. Гуслянников II.B. 1'азработка -технологии мясных продуктов с использованием модифицированной муки гороха: автореф. дис. . канд. техн. наук. М., 2004. - С. 23.

45. Депиеова С.А. Пищевые жиры. Товарный справочник. / С.А. Денисова, Т.В. Пилипенко. М.: Экономика, 1998. - 76 с.

46. Диксон М. Ферменты / М. Диксон, Э. Уэбб. М.: Мир, 1982. - 1118 с.

47. Доморощенкова МЛ. Современные технологии получения белков из соевого шрота / МЛ. Доморощенкова // Пищевая промышленность. -2001.-№4.-С. 6-10.

48. Допчепко Л.В. Технология пектина и пектинонродуктов / Л.В. Допчепко: учебное пособие. М.: ДеЛи, 2000,- 255 с.

49. Нвссичсва M.l 1. Совершенствование технологии полученияIрастительного белка из нетрадиционных видов сырья па основе использования протеаз и ксилаиаз микроорганизмов: автореф. дис. . канд. техн. наук. М., 2006. - С. 24.

50. Жаринов А.И. Изучение возможности ферментной модификации мяса кур яйценосной породы / А.И. Жаринов, ГШ. Нвтихов, С.А. Марушина, А.И. Абдулов // Пища. Экология. Человек: материалы 5 международной научно-технической конференции. М., 2003. - С. 125126.

51. Жаринов А.И. Изучение жироудерживающей способности гелей,полученных на основе соевых изолятов / А.И. Жаринов, М.П. Денисова, В.И. Решетов // Пища. Экология. Человек: материалы IV Международной научно-технической конференции. М., 2001. - С. 153.

52. Жаринов А.И. Пищевая биотехнология: паучно-нрактическис решения в АПК / А.И. Жаринов, И.Ф. Горлов, 10.11. Пелепов, П.А. Соколова. -М.: "Вестник РАСXI Iм, 2003. 384 с.I

53. Жаринов А.И. Ферментная модификация свойств мяса кур-несушек / А.И. Жаринов, П.II. Нвтихов, С.А. Марушипа, Т.Г. Кузнецова//Мясная индустрия. 2002. - № 12. - С.20-21.

54. Жаринов А.И. Формы связи влаги в мясе и мясопродуктах / А.И. Жаринов, I I.A. Соколова // Вестник "Аромарос-М". 2004. - №4. - С. 37-47.

55. Жаринов А.И. Функциональные свойства различных видов муки / А.И. Жаринов, II.В. Гурова // "Продукты XXI века". Технология. Качество. Безопасност ь": тезисы докладов М., 1998. - С. 74-75.I

56. Икач М. Рекомендации по применению соевой муки нового поколения компании "Сояпротеип" / JV1. Икач, В.И. Маликова, Б.И. Гут пик, И.Г. Аиисимова, М.Н. Смирнов // Мясная индустрия. 2003. - № 7. - С.37-38.

57. Капаев НА. Современные методы получения и использования ферментов из животного сырья / II.А. Канасв, А.А. Шсигср, С.С. Чуриков, И. 10. Киприна, 1I.B. Глазова // Биотехпология-2005: материалы научно-практической конференции. Пушило, 2005. - С. 106-107.

58. Капрельяпц JI.B. Функциональные продукты питания из сои / JI.B. Капрельяпц, А.II. Петроеьяпц // Пиша. Экология. Человек: материалы IV Международной паучпо-техпической конференции. М., 2001. - С. 56-57.

59. Кирдяшкин В.В. Некоторые аспекты водно-гепловой обработки гороха / В.В. Кирдяшкин, И.В. Мапошкина // Пища. Экология. Человек: материалы III Международной научно-технической конференции. -М., 1999.-С. 94.

60. Кисилепко II.Н. Извлечение белка из технологических растворов методом электрофлотации / ГШ. Кисилснко, В.А. Колесников, 10.И. Капустин // Химическая промышленность. 2002. - №9. - С. 1-4.

61. Кислухипа О.В. Биотехнологические основы переработки растительного сырья / О.В. Кислухина, И. Кюдулас. Каунас: Технология, 1997.- 183 с.

62. Кислухина О.В. Ферменты в производстве нищи и кормов / О.В. Кислухипа. М.: ДеЛи принт, 2002. - 336 с.

63. Клоуфли Д.Б. Способ разделения соединений, содержащих две, три или более этилен-ненасыщенных связей, экстрагирующее средство / Д.Б. Клоуфли, X. Репой, О. Боуд. Патент 2124045 РФ. №.93047025. Заявл. 15.06.93. Опубл. 27.12.98. БИ №36.

64. Козлова JI.C. Современные способы переработки сои / JI.C. Козлова. -М.: Достижения науки и техники АПК, 1997. С. 26-30.

65. Колпакова В.В. Научные основы технологии получения и применения белковых продуктов из пшеничных отрубей: автореф. дис. д-ра техн. наук. М., 1998.-С. 67.

66. Колпакова В.В. Получение белка из пшеничных отрубей с применением ферментных препаратов / В.В. Колпакова, O.IO. Борисова, О.И. Карпова, М.В. Герпет // Храпение и переработка сельхозсырья. 2001. - №6. - С. 12-18.

67. Колпакова В.В. Способ получения белкового продукта из отрубей / В.В. Колпакова, JI.B. Зайцева, 1;:А. Смирнов. Патент 2250026 РФ. -№.2002132034. Заявл. 28.11.02. Опубл. 20.04.05. БИ №11.

68. Комиссарова Ю.В. Гетерогенность и полиморфизм ингибиторов протеаз из семян сои и гороха: автореф. дис. . канд. техн. наук. СПб, 1998.-С. 50.

69. Комов В.П. Биохимия / В.11. Комов, В.П. Шведова: учебник. М.: Дрофа, 2004. - 640 с.

70. Кочергина П.И. Биотехнология получения нейтральных протеиназ Penicillium wortmanii BKMF 2091 и изучение их физико-химических свойств: дис. . канд. техн. паук. Воронеж, 1991.- 158 с.

71. Краиивпицкая И.А. Разработка технологии свекловичного пектинового экстракта и псктииопродуктов па его основе: автореф. дисс. . канд. техн. паук. Киев, 1992. - С. 25.I

72. Кретович B.J1. Введение в этимологию / B.J1. Кретович. М.: Паука, 1986.-336 с.

73. Криштафович В.И. Влияние соевых изолятов на пищевую ценность копченостей из говядины / В.И. Криштафович, И.А. Жебелева, С.В. Колобов, Т.Г. Кузнецова // Мясная индустрия. 2003. - № 3. - С. 33-35.

74. Кроха II.Г. Ферментативный гидролиз запасных белков в составе мукигороха "собственными" кислыми протеазами / II.Г. Кроха, JI.A.

75. Агаларова, P.P. Хугаев, А.Н. Даииленко, В/Г. Диапова, Is.1г. Браудо //

76. Пища. Экология. Человек: материалы III Международной научноiтехнической конференции. М., 1999. - С. 80.

77. Кругляков ИМ. Способ разрушения устойчивых разбавленных эмульсий / ИМ. Кругляков, Т.П. Хаскова. Патент 2095117 РФ. -№.94003079. Заявл. 26.01.94. Опубл. 10.11.97. БИ №31.

78. Кудрявцев P.M. Совершенствование производства кислотных белковыхгидролизатов и промышленное использование их: автореф. дис.канд. техн. паук. Одесса, 1981. - С. 30.

79. Кудряшов JI.C. Новый продукт па отечественном рынке изолят соевого белка "ИПСО-МРд" / Л.С. Кудряшов, О.А. Кудряшова //I11ищевые ингредиент ы. Сырье и добавки. 2003. - №1. - С. 19-21.

80. Лакина Т.А. Способ разделения эмульсий и устройство для его осуществления / Т.А. Лакипа, В.Т. Адамчук, А.Г. Лакип. Патент 2077363 РФ. №.94036186. Заявл. 27.09.94. Опубл. 20.04.97.1>И №11.

81. Лаптев 10.11. Растения от А до / 10.11. Лаптев // М.: Колос, 1992. -174 с.

82. Ларина Л.И. Направленный биосинтез ксиланазы микроскопическим грибом Trichoderma viride 44-11-62/3 и разработка технологии получения ферментного препарата: автореф. дис. . канд. техн. наук. -М., 2005.-С. 17.

83. Лейп Т.П. Крат кий обзор состояния рынка пектинов в России / Т.К. Лейп // Пищевые ингредиенты. Сырье и добавки. 2004. - №1. -С.9-10.

84. Леиипджер А. Основы биохимии / А. Лепипджер; под ред. В.А. Энгсльгарда, J1.M. Варшавского;'в 3-х томах. М.: Мир, 1986. - 1051 с.

85. Логинова К.М. Разработка метода количественного определения ДИК в соевых белковых препаратах и оценка влияния генной модификации па функционально-технологические свойства продуктов переработки сои: автореф. дис. ., канд. техн. паук. М., 2004. - С. 24.

86. Jlyrac Э.В. Производство и использование соевых белков. Руководство по переработке и использованию сои / Э.В. Jlyrac, Ки Чуп Ри; иод общ. ред. В.В. Ключкипа, M.JI. Доморощспковой. М.: Колос, 1998 - 61 с.

87. Любчепко В.И. Функциональные свойства муки 6 видов зерновых культур (овса, ячменя, гречихи, проса, риса, гороха) / В.И. Любчепко, Л.И. Лебедева // "Продукты XXI века". Технология. Качество. Безопасность: тезисы докладов. -М., 1998.-С. 120-121.I

88. Марташов Д.Г1. Влияние растворимости препарата соевого белка на стабилизацию жировых эмульсий / Д.П. Марташов // "Продукты XXI века". Технология. Качество. Безопасность: тезисы докладов. М., 1998.-С. 72-73.

89. Марташов Д.П. Влияние хлорида натрия на устойчивость эмульсий растительного масла, стабилизированных изолятом соевого белка / Д.П. Марташов // Пища. Экология. Человек: материалы III Международной научно-технической конференции. М., 1999. - С. 37.

90. Мессина М. Обыкновенная соя и ваше здоровье / М. Мессина, В. Мессина, К. Сетчелл. Майкоп: АССОЯ, 1995. - 130 с.

91. Микляшевски П. "Могупция" полный ассортимент соевых белков / II. Микляшевски, В.В. Прянишников, А.II. Пестова, X. Ладд // Пищевые ингредиенты. Сырье и добавки. - 2003. -№1.-С. 16-18.

92. Митасева Л.Ф. Метод определения содержания белка па полуавтоматическом приборе Кьельтек / Л.Ф. Митасева, С.К. Апраксина, С.М. Мухина, А.В. Стефанов: учебное пособие. М.: МГУПБ;2004. - 14 с.

93. Мосолов В.В. Протеолитичес'кие ферменты / В.В. Мосолов. М.: Паука, 1971.-414 с.

94. Мохначев И.Г. Комплексное использование яблочных выжимок / И.Г. Мохначев, В.П. Гранатова, Л.И. Давиденко, Г.М. Зайко // Известия вузов. Пищевая технология. 1998.- № 2-3.- С. 49-51.

95. Мрачковская Т.А. Регулирование функциональных свойств легумииов кормовых бобов и гороха путем комплсксообразовапия с хитозапом / Т.А. Мрачковская, А.С. Клемешов, ИЛ. Журавлева, Н.Н.

96. Браудо, A.M. Даниленко, И.Г. Плащина // Биотехнология: состояние и перспективы развития: материалы III московского международного конгресса. М., 2004. - С. 114.

97. Насонова JI.B. Биотехнология получения протеипазы актипомицета Streptomyces chromogtnis: автореф. дне. . канд. техн. наук. Воронеж, 1998.-С. 24.

98. Неклюдов А.Д. Свойства и применение белковых гидролизатов (обзор) / А.Д. Неклюдов, A.II. Ивапкип, А.В. Бердутипа // Прикладная биохимия и микробиология. 2000. - 'Г. 36. - № 5 - С. 525-534.

99. Нечаев А.II. Пищевая химия /"А.П. Нечаев, СМ. Траубепберг, А.А. Кочеткова, В.В. Колпакова, И.С. Витол, И.Б. Кобелева: учебник. -СПб.: Гиорд, 2004-640 с.

100. Нечаев A.II. Способ извлечения масла и белкового продукта из высокомасличного белкового материала / A.II. Нечаев, JI.B. Зайцева, T.JI. Наумова, JI.I I. Лутохина. Патент 2078797 РФ. №.94037735. Заявл. 04.10.94. Опубл. 10.05.97. БИ №13.

101. Нечаев А.П. Технологии пищевых производств / А.П. Нечаев. М. Колос, 2005. - 680 с.

102. Ноймюллер В. Способ получения белкового изолята из содержащего белок вещества / Ноймюллер В. Патент 2233097 РФ. №.2001125936.

103. Заянл. 23.02.00. Опубл. 27.07,03. БИ №13.

104. Остерман J1.A. Хроматография белков и нуклеиновых кислот / JI.A. Остермаи. М.: Маука, 1985. -304 с.

105. Пекеньо Х.11. Производство и переработка соевых бобов / Х.П. Пекеньо, МЛII. Бегеулов // Аграрная паука. 2002. - №2. - С. 15-16.

106. Перкипс Э. Состав и физические характеристики соевых семян и соевых продуктов. Руководство по переработке и использованию сои / Э. 11еркипс; иод общ. ред. В.В. Ключкипа, МЛ. Доморощепковой М. -М.: Колос, 1998.-40 с.

107. Петер Т.А. Создаиие белкового препарата па основе модифицированного белка муки семян гороха для использования в производстве мясных изделий: авгорсф. дис. . канд. техп. паук. М., 1997.-С. 24.

108. Пилат 'ГЛ. Биологически активные добавки к пище (теория, производство, применение) / 'ГЛ. Пилат, А.А. Иванов. М.: Аввалоп, 2002.-710 с.I

109. Плутах и и Г.А. Получение белкового изолята из подсолнечного шрота с помощью электроактиватора / Г.А. Плутахип, А.Г. Кощаев, А.И. Петепко // Храпение и переработка сельхозсырья 2005. - №6. -С.38-39.

110. Подвойская И.А. Новые изОляты растительных белков / И.А. Подвойская // Мясная индуст рия. 2004. - №10. - С. 55.

111. Подобедов А.В. Продукты переработки сои / А.В. Подобедов // Хлебопечение России. 1999. - №5. - С. 15-17.

112. Полапдова Р.Д. Применение биоактиироваппой сои в хлебопечении / Р.Д. Полапдова, А.И. Стребыкипа, ГШ. Котельников, Л.И. Пучнова // Хлебопечение России. 2006. -№1. - С. 10-11.

113. Поляков В.А. Технология производства и использования ферментных препаратов и пищевых добавок / В.А. Поляков, ВЛ. Кудряшов // Пищевая промышленность. 2000. - № 13. - С. 115.

114. Попона М.10. Влияние ограниченного ферментативного гидролиза на функциональные свойства соевых белковых препаратов / M.IO. Попова, В.В. Сучков // Пища. Экология. Человек: материалы III Международной научно-технической конференции. М., 1999. - С. 3839.

115. Попова П.В. Влияние источников азотного питания на биосинтез протеолитических ферментов Aspergillus terricola / П.В. 1 (опова // Прикладная биохимия и микробиология.- 1965. 'Г. 1. - №5.- С.481-484.

116. Потапов II.А. Устройство для разрушения эмульсии в электрическом поле / I I.А. Потапов. Патент 2100047 РФ. №.4911180. Заявл. 11.11.90. Опубл. 27.12.97. БИ №36.

117. Растительный белок /иод ред. Микулович Т.П./ М.: Агропромиздат, 1991.-684 с.

118. Растительный белок: новые перспективы / под ред. Г.П. Браудо -М.: Пищспромиздат, 2000,- 180 с.

119. Расулуидзатуву М.З. Биосинтез и исследование протеолитического комплекса Streptomyces lulvoviricus ВКМАс: автореф. дис. . капд.Iтехн. наук. Воронеж, 1989. - С. 21.

120. Римарева JI.B. Эффективный ферментный препарат для протеолиза растительного сырья / JI.B. Римарева // Хранение и переработка сельхозсырья. 1995. - № 6. - С. 40.

121. Рогов И.А. Определение активности воды в пищевых системах и продуктах криоскопическим методом: метод, указ. / И.А. Рогов, А.И. Жаринов, Г.В. Фатьянов, А.К. Алейников, С .Г. Юзов. М.: МГУГШ, 2003.-27 с.

122. Рогов И.А. Химия пищи. Функциональные свойстваIгидроколлоидов. Соевые белковые препараты: метод, указ. / И.А. Рогов, А.И. Жарипов, П.В. Гурова, АЛО. Попов. М.: МГУГШ, 2003. -32 с.

123. Рожко Ы.Д. Будут ли па Допу расширяться посевы сои? / Н.Д. Рожко // АгроБизпес. 2003. - № 3. - С. 29.

124. Розанцев Э.Г. Биологическая химия. Практикум для студентов / Э.Г. Розанцев, И.И. Симбирева, Н.С. Данилова, В.В. Бойко, Л.И. Салитринник. М.: МГУПБ, 2003 - 132 с.

125. Романова И.А. Изучение растворимости белков муки соевой обезжиренной / П.А. Романова, С.Б. Гридипа // Технологии и процессы пищевых производств: материалы конференции. Кемерово, 1999. - С. 93-94.

126. Румянцева Г.11. Использований биокатализа для получения пектина / Г.И. Румянцева, А.А. Свигцов, под общ. ред. И.М. Грачевой и JI.A. Ивановой // В кн.: Биотехнология биологически активных веществ. -М.: Элевар, 200б! 453 с.

127. Румянцева Г.И. Использование ферментов в пищевой промышленности (обзор) / Г.И. Румянцева // Пищевая и перерабатывающая промышленност ь. 1994. - № 7 - С. 24-28.

128. Румянцева Г.И. Мацерация растительного пищевого сырья / Г.И. Румянцева, Г.Б. Бравова, Р.П. Гребешова, А.Г. Гиатепко, Д.А. Зарапяп // Пищевая промышленность. 1091. - № 2. - С. 124.

129. Румянцева Г.И. Микробные ферментные препараты в производстве пектина: механизм действия и эффективность применения / Г.Н. Румянцева//Вестник РАСХМ. 1993.-№12.- С. 15-17.

130. Румянцева Г.Н. Модифицированный пектин радиопротекторпого действия: получение и свойства / Г.Н. Румянцева // Храпение и переработка ссльхозсырья. 1998. - №12.- С.30-33.

131. Румянцева Г.П. Получение выеокоочищеппой З-глюкозидазы Geotriehum Candidum, исследование ее свойств и условий применения: дис. . канд. техн. наук. М., 1977. - 237 с.

132. Румянцева Г.И. Совместное использование протеаз и целлюлаз при получении пищевого белка, тезисы доклада / Г.П. Румянцева, A.M. Дапиленко // Пищевой белок и экология: материалы Международной конференции. М.: МГУПБ, 2000. - С. 182.

133. Румянцева Г.П. Сохранение желирующей способности пектина в процессе его выделения из яблочных выжимок / Г.П. Румянцева, О.А. Варфоломеева, I I.А. Киндра // Храпение и переработка сельхозсырья. -2006.- №7.- С.25-28. '*

134. Румянцева Г.П. Ферментативное выделение белка из семян горчицы / Г.П. Румянцева, М.Н. Квсеичева // Значение биотехнологии для здорового питания и решения медико-социальных проблем: тезисы научно-практической конференции. Калининград, 2005. - С. 81-82.

135. Румянцева Г.П. Экстракция пект ина из тыквенного жома с помощью отечественных ферментных препаратов / Г.П. Румянцева, О.А. Маркина, II.M. Птичкииа // Храпение и переработка сельхозсырья. -2002,- №6.- С.33-35.

136. Садовой В.В. Соевая иищева^ окара в композиционных рецептурах мясных изделий / В.В. Садовой, В.А. Самылина // Известия ВУЗов. Пищевая технология. 2005. - №1. - С. 46-48.

137. Свящева В.II. Способ разделения водно-масляпых шламов / В.II. Свящева, Т.С. Сергиенко, II.Г. Шабуиипа, II.II. Горыпип. Патент 2076767 РФ. -№.93016877. Заявл. 31.03.93. Опубл. 10.04.97. БИ №10.

138. Скурихин И.М. Все о пище с точки зрения химика / И.М. Скурихип,

139. A.И. Нечаев. М.: Высшая школа, 1991. - 288 с.

140. Супрун И.П. Разработка уровни ферментативного гидролиза обезжиренной соевой муки / И.П. Супрун, Е.В. Милорадова, О.А. Фу голь // Пища. Экология. Человек: материалы III Международной научно-технической конференции. М., 1999. - С. 94.

141. Толстогузов В.Б. Искусственные продукты питания. Новый путь получения пищи и его перспективы. Научные основы производства /

142. B.Б. Толстогузов. М.: Наука, 1978. - 232 с.

143. Траубенберг С.1:. Кинетика гидролиза соевой обезжиренной муки ферментным препаратом Бирзим П7/С.Н. Траубенберг, И.В. Вяльцева, П.В. Милорадова, А.А. Козлова // Известия ВУЗов. Пищевая технология. 2005. - №2-3. - С. 54-56.

144. Траубенберг С.Н. Ферментативные соевые гидролизаты: получение и применение / С.Н. Траубенберг, Н.В. Милорадова, М.М. 11ивцаева, М.А. Лысюк // Научные труды Цоск. гос. акад. пищ. пр-в. М., 1996. -Ч. 1.-С. 80-84.

145. ТУ 11249895-13-13-92. Метод определения целлюлолитической активности.

146. ТУ 9291-034-34588571-2001. Метод определения р-глюкапазной активности.

147. Уорфел Д.Б. Экстракция в технологии соевого масла / Д.Б. Уорфел. -М.: Колос, 2003.- 150 с.

148. Фершт Э. Структура и механизм действия ферментов / Э. Фершт. -М.: Мир, 1980.-334 с. г

149. Фрашель Б. Свойства протеолитических ферментов, содержащихся в культуральпой жидкости Actinomyces rimous / Б. Фрашель, Э.А. Шишкова // Прикладная биохимия и микробиология. 1968.- №6. - С. 627-631.I

150. Фу голь О.А. Разработка условий ферментативного гидролиза соевой муки для получения соевых гидролизатов: автореф. дис. канд. техн. наук. М, 2002, С. 24.

151. Хамракулова М.Х. Адсорбционное осветление нейтрализованного соевого масла сорбентами местного происхождения / М.Х. Хамракулова, 10. Кадыров, P.M. Турсунова, М. Турсуиов // Хранение и переработка сельхозсырья. 2003. - №10. - С. 53-55.

152. Хугаев P.P. Разработка технологии комбинированных мясных продуктов с учетом комплексообразовапия мышечных и растительныхIбелков: автореф. дис. . канд. техн. наук. М., 2002. - С. 23.

153. Шарова I1.IO. Кислотостабильные амидолитичсские фермен ты гриба Aspergillus niger / I1.IO. Шарова, JI.H. Мушникова // Пищевые ингредиенты. Сырье и добавки. -2003. №1. - С. 28-29.I

154. Шелухина II.П. Научные основы технологии пектина / Н.П. Шелухина.-Фрупзе, 1998.-168 с.

155. Шен Дж.Л. Соевый белковый изолят, обогащенный аглюконизофлавопами (варианты) / Дж.Л. Шен, Б.А. Бриэп. Патент 2206230 РФ. №.98107586. Заявл; 16.04.98. Опубл. 20.06.03. БИ №13.

156. Шишкина JI.II. Влияние центрифугирования па состояние липидпой компоненты соевого гидролизата / JI.I I. Шишкина, А.А. Козлова, Н.В. Милорадова // Извест ия ВУЗов. Пищевая технология.- 2006.- №1.- С.25-27.

157. Щербакова F.B. Семенная оболочка сои как источник пектиновых веществ / Н.В. Щербакова // Известия ВУЗов. Пищевая технология. -2006.-№1.-С. 13-14.

158. Amiot J. Nitrogenous products released by short term in vitro enzymatic hydrolysis of food proteins / J. Amiot, G.J. Brisson, L. Savoie // Nutritional Reports International. -1981. №24. - P. 513-529.

159. Arrese ILL. Hlectrophoretic, solubility, and functional properties of commercial soy protein isolates / E.L. Arrese, D.A. Soorgentini, J.R. Wagner, M.C. Anon //J. Agric. Food Chem. -1991. -№39. P. 1029-1032.

160. Badlcy R.A. The structure, physical properties of the soybean protein glicinin / R.A. Badley, I). Athinson, II. Mauser, D. Oldani, G.P. Green, J.M. Stubbs // Biochim. Biophys. Acta. 1975. - №12. - P. 214-228.

161. Bhatty R.I I. Albuminum proteins of eight edible grain legume species: electrophoretic patterns and amino acid composition / R.I I. Bhatty // J. Agr. Food. Chem. 1982. - Vol. 30. - P.'620-622.

162. Boulter D. Qaliti problems, in "Protein plants" withspecial attention paidon the protein of legumes / D. Boulter // In: Protein quality from leguminous crops. H.H.C. Commission EUR 5686 HN, 1977, - P. 11-47.

163. Braudo H.H. Some functional properties of technical protein isolates from sunilower seed and soybean / П.Н. Braudo, K.D. Schwenke // Nahrung. 1982. №26. - P. 31 -34.

164. Casey R. Quantitative variability in Pisum seed globulins: its assessment and significance / R. Casey, J.H. Sharman, D.J. Wright, J.R. Bacon, P.

165. Guldagcr // Qual. Plant. Foods Mum. Nutr. 1982. - Vol. 31. - P. 333-346.

166. Cerning J. A comparison of the harbohydrate of legume seeds: harse bean, peas and lupine / J. Cerning, A. Filiatre // Cereal Chem. 1976. -№53. - P. 968-970.

167. Coolbear T. Hnzymes and products from bacteria, fungi and plant cells / T. Coolbear. Berlin: Springer, 1992. - 144 p.

168. Decker K.J. New soy applications / K.J. Decker // The world of foodingredients. 2001. - № Oetober-November. - P. 76-84.

169. Hndaszewski T. Influence of proteolytic, lipolityc enzymatic preparations on rheological properties of beef / T. Hndaszewski, T. Lesiow // Nahrung. 1900. - V.34. - №.8. - P. 671-679.

170. Fukushima D. Internal structure of 7S and 11S globulin molecules in soybean proteins / D. Fukushima // Cereal Chem. 1968. - Vol. 45. - P. 203-224.

171. Grant D.R. An investigation of pea seed albuminus / D.R. Grant, A.K. Summer, J. Johnson // Can Inst. Food Sci. Technol. J. 1976. - № 2. - P. 84-91.

172. Gueguen J. Proteins of some legume seeds: soybean, pea, faba bean and lupin / J. Gueguen, P. Cerletti // In: B. J. F. Hudson (ed.). New and Developing Sources ol Food Proteins. London: Chapman & Halls, 1994. -P. 145-193.

173. Gwaiazda S. Some functional properties of pea and soy bean protein preparations / S. Gwaiazda, A. Rutkowski, J. Koson // Nahrung. 1979. -№23.-P. 681-686.

174. Hussain A. Hlectrophoretic analysis of field pea cultivars / A. Hussain, S.T. Ali-Khan, W. Bushuk // Pisum Newsletter. Geneva, N.Y. 1988. -V.20.-P. 16-17.

175. Kalapathy U. Hffect of acid extraction and alcohol precipitationconditions on the yield and purity of soy hull pectin / U. Kalapathy, A. Proctor // Food Chemistry. 2001. - Vol. 73. - №4. - P. 393-396.

176. Lee J.-Y. Characterization of hydrolysates produced by mild-acid treatment and enzymatic hydrolysis of defatted soybean Hour / J.-Y. Lee, I I.D. Lee, C.-I I. Lee // Food research international 2001. - V.34. - №2/3. -P. 217-222.

177. Lopez Hernandes J. Enzymatic hydrolisis of soybean protein using papain / J. Lopez Hernandes, II. Raz, J. Adris // Revista Agronomica del Noroesle Argenlino. 1977. - № 14. - P. 161 -174.

178. Lowry O.I I. Protein measurement with the Folin phenol reagent / О.И. Lowry, N.J. Rosebrough, A.L. Farr, R.J. Randall // Agr. Biol. Chem. 1970. V. 44. - №9. - P. 393-399.

179. Martiner W.N. The importance of functionality of vegetable protein in foods. Soy Proteins and Human Nutrition / W.N. Martiner: lid. by I LL. Wilcke, D.T. Hopkins, D.N. Waggle. N.Y., 1976 - 77 p.

180. May С. D. Industrial Pectins: sources, Production and Application / C.D. May // Carbohydr. Polym. 1990. - №12,- P. 79-99.

181. May C.I). Pectin the additive from fruit. 1. Origins and Properties / C.D. May // Food. Trade Review.- 1988. - V.58. - №8. - P. 438-439.

182. Nakamura A. Analysis of structural components and molecular construction of soybean soluble polysaccharides by stepwise enzymaticdegradation / A. Nakamura, II. Furuta, II. Maeda, Y. Nagamatsu, A.

183. Yoshimoto // Biosc. Biothechnol. «Biochem. 2001. - Vol. 65. - №10. - P. 2249-2258.

184. O'Toole Desmond K. Characteristic and use of okara, the soybean residue from soy milk production (a review) / K. O'Toole Desmond // J. Agric. Food Chem. 1999. - Vol. 47. - №2. - P. 363-371.

185. Owosu-Ansah Y.J. Pea proteins: A review of chemistry, technology of production and utilisation / Y.J. Owosu-Ansah, A.R. McCurdy // Food Rev.ф Intern.-1991.-№7.-P. 103-134.

186. Park R.J. Protein functionality in fabricated foods / R.J. Park // CSI-RO Food Res. Quart 1981. - V. 4f - P. 68-72.

187. Thakur B.R. Chemistry and uses of pectins a review / B.R. Thakur, R.K. Singh, A. 1 landa // Critical reviews in food science and nutrition. -1997. - Vol. 37.-№3.-P. 47-73.

188. Tolstoguzov V.B. Functional properties of food proteins. Role of interactions in protein systems / In: K.D. Schwenke and R. Mothes (eds) Food Proteins -Structure and Functionality. VCTI, Weinheim. - 1993. - P. 203-215.

189. Underkoffler L.A. Enzyme supplementation in baking / L.A. Underkoffler // Bakers Digest. 1961. - V. 35. - № 5. - P. 73-83.

190. Underkoffler L.A. Production of microbial enzymes and their applications / L.A. Underkoffler // Applied microbiology. 1968. - V. 6. -№3,-P. 212-221.

191. Visiolo F. Biological properties of olive oil phytocemicals / F. Visiolo, C. Galli // Critical reviews in food science and nutrition. 2002. - Vol. 42. -№3. - P. 209-221.

192. Wasche A. New processing of lupin protein isolates and functional properties / A. Wasche, K. Muller, U. Knauf// Nahrung. 2001. - V.45. -№6. - P. 393-395.

193. Webb M.F. Food protein functionality in a liquid system: a comparison of deamidated wheat protein with dairy and soy proteins / M.F. Webb, 11.A. Neem, K.A. Schmidt // Journal of food scicncc. 2002. - V.67. - №8 - P. 2896-2902.

194. Yamaguchi F. Effects of hexametaphosphate on soybean pectic polysaccharide extraction / F. Yamaguchi, I I. Kojima, M. Muramoto, Y. Ota, С. I latanaka // Biosc. Biolhechnol. Biochem. 1996. - Vol. 60. - №12. -P. 2028-2031. '