автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.04, диссертация на тему:Разработка технологии бактериального концентрата бифидобактерий и бактерий Lactobacillus casei

На правах рукописи

Яркина Яна Алексеевна

I

Разработка технологии бактериального концентрата бифидобактерий и бактерий Lactobacillus casei

Специальность № 05.18.04 - технология мясных, молочных, рыбных продуктов и холодильных

производств

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата технических наук

Москва - 2005 год

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности (ГНУ ВНИМИ)

Научный руководитель: заслуженный деятель науки РФ, доктор технических наук, профессор Семенихина В. Ф.

Официальные оппоненты: доктор технических наук, Профессор Ганина В. И.

кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Перфильев Г. Д.

Ведущая организация: Северо-Кавказский Государственный технический университет

Защита диссертации состоится «_»_ 2005 г, в_час на заседании

диссертационного совета Д. 006.021.01. при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт мясной промышленности им. В.М. Горбатова (ВНИИМП) Российской Академии сельскохозяйственных наук по адресу: 109316, Москва, ул. Талалихина, 26.

Отзыв на автореферат (в двух экземплярах), заверенный печатью, просим направлять в адрес учёного секретаря диссертационного совета.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИИМП.

Автореферат разослан «сМаЛ 2005 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, кандидат технических наук,

старший научный сотрудник А.Н. Захаров

¿им-Ч iWOO&f

тз Общая характеристика работы

Актуальность работы. Ключевой составляющей концепции здорового питания стало новое научно-прикладное направление, возникшее на стыке медицинской науки и пищевой биотехнологии, которое в 1989 году в Японии получило специальное название - продукты функционального назначения. В эту группу пищевых продуктов, безусловно, входят кисломолочные продукты, обобщённые пробиотиками и пребиотиками.

В настоящее время в нашей стране отмечается неуклонный рост объёмов выпуска кисломолочных продуктов, обогащенных микроорганизмами, входящими в состав нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта (бифидобактериями и др.).

в основе которых лежат разнообразные микробиологические и биохимические процессы, определяющие органолеггтические, физико-химические и функциональные свойства данных продуктов, их пищевую ценность и безопасность для потребителя. Главной проблемой при выработке кисломолочных продуктов с относительно медленно или слабо развивающимися культурами является обеспечение необходимого количественного состава микроорганизмов, определённого соотношения отдельных видов и штаммов. При этом в подавляющем большинстве случаев причины изменения концентрации в продукте, например, бифидобактерий, связаны либо с нарушениями в направленности и интенсивности микробиологических процессов, либо с гибелью вносимых клеток. Поскольку необходимым элементом процесса изготовления пробиотических кисломолочных продуктов являются концентрированные и пригодные для длительного хранения закваски, очевидно, что для производства функциональных кисломолочных продуктов нужны бактериальные закваски и концентраты высокого качества.

Труды отечественных и зарубежных учёных - В.М Богданова, Н.С. Королёвой, Л.А. Банниковой, В.Ф. Семенихиной, Г.И. Гончаровой, Н.Н Лизько, М.Б. Сундуковой, В.И. Ганиной, В.В. Поспеловой, Б.А. Шендерова, J. Dehnert, О. Kandier, Т. Mitsuoka и др. - подтверждают, что целенаправленное регулирование параметров технологии подготовки пробиотических культур, т е. изготовления высококонцентрированных бактериальных препаратов, оказывает существенное влияние на их качество и, следовательно, на качество функциональных молочных продуктов. Поэтому рабочей гипотезой является предположение о том, что существует реальная возможность стабилизировать качество кисломолочных продуктов с

Изготовление пробиотических кисломолочных продуктов относится к числу производств,

пробиотичесхими культурами путём изучения, подбора и разработки рациональных условий и приёмов выращивания, а также обработки пробиотических микроорганизмов с целью интенсификации процесса производства бактериальных концентратов и улучшения их основных показателей и технологических свойств.

В соответствии с вышеизложенным представляется актуальной разработка технологии двухвидового бактериального концентрата пробиотических культур для производства новых видов кисломолочных продуктов и повышения их качества.

Цели и задачи исследований. Целью настоящей работы является совершенствование технологии бакконцентрата бифидобактерий и разработка технологии двухвидового бакконцентрата пробиотических культур (бифидобактерий и бактерий Цзс.саБв!) для производства функциональных молочных продуктов.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

- исследовать влияние компонентов питательных сред (в том числе пептона, гидролизата казеина, углеводов, дрожжевого экстракта, микроэлементов, потенциал-редуцирующих веществ) на интенсивность размножения пробиотических штаммов бифидобактерий и мезофильных молочнокислых палочек 1Ьс.сат\

- разработать состав и уточнить режимы подготовки биологически полноценной, технологичной в применении (стандартной и т. д.) питательной среды для накопления биомассы различных штаммов бифидобактерий при периодическом культивировании; рассмотреть возможность использования сконструированной среды для накопления биомассы бактерий Цю.(яж;

- исследовать влияние технологических параметров периодического культивирования (вида и дозы инокулята, дозы и порядка пропускания углекислого газа в культуральную среду, скорости перемешивания) на интенсивность развития бифидобактерий;

- исследовать влияние продуктов метаболизма и питательных веществ в среде на динамику накопления биомассы пробиотических штаммов бифидобактерий и бактерий Ш-савет,

- исследовать влияние условий подготовки и дальнейшей обработки биомассы бифидобактерий и бактерий ¿.Ьс.сэ8в/ (продолжительности периодического культивирования, состава защитной среды и соотношения её с биомассой, температуры предварительного

замораживания суспензии клеток, дозы суспензии клеток во флаконах перед сушкой) на качество бакконцентрата;

- исследовать изменение концентрации жизнеспособных клеток бифидобактерий и бактерий 1Ьс.сазе/ в процессе хранения бактериального концентрата при различных температурных режимах и установить сроки хранения;

- разработать технологию производства двухвидового бактериального концентрата пробиотических культур (бифидобактерий и бактерий Цх.сазв!) и утвердить техническую документацию;

- провести опытно-промышленную выработку бакконцентрата в производственных условиях.

Научная новизна. Комплекс проведённых исследований позволил экспериментально установить и научно обосновать способ производства отечественного сухого двухвидового бакконцентрата пробиотических культур для молочной промышленности.

Установлены закономерности роста бифидобактерий В.адо^овпЯв и мезофильных молочнокислых палочек \JDc.casei на различных питательных средах. Выявлено положительное влияние компонентов (пептона, гидролизата казеина и т. д.) питательных сред на интенсивность размножения бифидобактерий и бактерий ик-саая. Разработана новая питательная среда, позволяющая накапливать большее количество клеток рассматриваемых пробиотических культур, обеспечивающее высокую концентрацию их в готовом бактериальном концентрате и продолжительные сроки его хранения.

Впервые предложено по количеству продуктов метаболизма более обосновано устанавливать длительность процесса накопления биомассы конкретного лробиотического штамма. Показана возможность на основании определения концентрации лактата в среде направлено регулировать производственный процесс наращивания бифидобактерий и молочнокислых бактерий.

Выявлена зависимость между выживаемостью бифидобактерий в готовом бакконцентрате и продолжительностью культивирования их до отделения клеток.

Установлена зависимость между выживаемостью клеток рассматриваемых пробиотических культур в готовом бактериальном концентрате, составом защитной среды и её соотношением с биомассой.

Определены закономерности изменения количества клеток бифидобактерий и бактерий ЦЬс.саж в бактериальном концентрате при различных температурах хранения.

Практическая значимость работы. Разработана научно-обоснованная технология двухвидового бактериального концентрата пробиотических культур Разработана и утверждена техническая документация- ТУ 9229-325-00419785-03 «Концентрат бактериальный сухой пробиотических культур» и «Технологическая инструкция по производству сухого бактериального концентрата пробиотических культур».

По данной технологии на экспериментальном заводе (ПЭЗ ГНУ ВНИМИ, г Москва) успешно проведена опытно-промышленная выработка бакконцентрата (подтверждена «Актом опытно-промышленной выработки бактериального концентрата пробиотических культур»).

Апробация работы. Основные положения и результаты работы доложены на Международной конференции «Технологии и продукты здорового питания» (МГУПП, 2003 г), секции Учёного Совета (25.02.2005 г) и Учёном Совете ГНУ ВНИМИ (29 03 2005 г).

Публикации. По результатам выполненных исследований опубликовано 8 печатных

работ.

Структура и объём работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, схемы организации эксперимента с описанием объектов и методов исследований, результатов экспериментальных исследований, выводов, списка использованной литературы, приложений.

Диссертация изложена на$2страницах машинописного текста, включает-^? таблиц и ^"рисунков Список литературы содержисй^источник, в том числеТ^С^забот зарубежных авторов.

Содержание диссертационной работы

Во введении обоснована актуальность темы диссертационной работы.

В первом разделе представлен обзор литературы, который содержит анализ научно-технических данных, характеризующих современное представление об основных свойствах и роли бифидобактерий и молочнокислых бактерий в функциональном питании Рассмотрены вопросы влияния различных условий культивирования на способность пробиотических микроорганизмов размножаться и накапливаться, а также влияния основных технологических параметров изготовления и хранения на качество бактериальных концентратов

На основании выполненного анализа литературы во втором разделе уточнена цель и сформулированы задачи исследований. В третьем разделе приведён материал по организации проведения эксперимента, объектам и методам исследований.

В четвёртом разделе представлены результаты экспериментальных исследований, в том числе конструирования питательной среды для наращивания пробиотических микроорганизмов, изучения влияния параметров периодического культивирования на развитие бифидобактерий и отдельных технологических факторов получения и обработки биомассы на качество бакконцентрата Выбраны и обоснованы условия и отдельные приёмы изготовления бактериального концентрата пробиотических культур, разработана технология производства.

В заключение даны выводы по выполненной работе.

В приложениях представлены составы питательных сред, основные материалы исследований и их характеристика, численные данные результатов собственных исследований и мопии документов, подтверждающих завершённость работы.

Организация эксперимента, объекты и методы исследований

Работа проводилась в рамках Государственного контракта № 43055.1 1.2553 по теме 02 05.03.35 «Технология производства продуктов функционального и лечебно-профилактического назначения на основе мониторинга питания и специфики метаболизма у различных групп населения». Схема проведения исследований представлена на рис. 1

Основной комплекс микробиологических исследований был выполнен в центральной лаборатории микробиологии ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности в период с 2001 по 2004 гг

Определение концентрации в питательных средах азота свободных аминогрупп (мг %) проводили в лаборатории технохимконтроля ГНУ ВНИМИ методом Зеренсена - Гаврилова (ТУ-9229-083-00419785-97). Измерение концентрации лакгатов и глюкозы в культуральной среде определяли методом ферментного электрода с помощью индикаторного биосенсорного анализатора «Биолак» совместно с сотрудниками ГНЦ прикладной микробиологии.

Для периодического культивирования микроорганизмов в условиях регулируемых параметров процесса (активной кислотности, температуры и др.) был использован лабораторный ферментёр аппарата Prelude (фирмы Biolafitte) Отделение биомассы бифидобактерий и молочнокислых бактерий осуществляли с помощью центрифуги Rotanta 46R фирмы «Heffich-Zentrifugen» (производство Германии) при температуре (7,0 ± 3,5) °С и угловой скорости 5470 мин-1. Биомассу взвешивали на технических весах (4 кл. т. с. НПВ 160 г ГОСТ 24104-88) и вычисляли её процент от массы культуральной среды с закваской, принимая последнюю за 100 %.

Анализ литературы. Выбор направления и задач исследований

---■■ ■ т

_ Проведение экспериментальных исследований _

,, I ,,_1_

Исследование влияния вносимых компонентов на рост бифидобактерий

Исследование влияния технологических факторов на рост и накопление биомассы

Исследование влияния технологических параметров на выживаемость бактерий

Рис. 1. Схема проведения исследований

Для предварительного замораживания бакконцентратов использовали морозильный шкаф Рпдега N8 400 / 40 \Л/ (производство Чехии). Высушивали опытные образцы с помощью сублимационной сушилки Т&50.4.

Объектами исследований являлись- жидкая закваска бифидобактерий и мезофильных молочнокислых бактерий ЦЬс.сэзв/ на питательных средах и на обезжиренном молоке; культуральная среда с бифидобактериями или бактериями Цх.са$вг, биомасса бифидобактерий

или бактерий Lbc.case'r, замороженный и сублимационно высушенный бакконцентрат бифидобакгерий; сублимационно высушенный бакконцентрат бактерий Lbc casei.

В исследованиях использовали штаммы бифидобактерий В adolescentis МС-42 (в большей части экспериментов), B.tongum ВВ 536, B.lactis ВЬ-12, В.ЫМит 1, Lbc casei 2, Lbc.casei 01 и Lbc.casei «Финл» из коллекции ЦЛМ ВНИМИ.

При выполнении экспериментальной части работы использовались стандартизированные и общепринятые методы микробиологических и физико-химических исследований, микроскопия (микроскопические препараты по ГОСТ 9225, с использованием микроскопа Olympus В 202).

Активную кислотность питательных сред определяли по ГОСТ 26781-85 «Молоко. Методы измерения pH» с помощью рН-метра 410 «Аквилон» в комплекте с рН-электродом ЭСК-10601 / 7, а также с помощью встроенного рН-метра аппарата Prelude в комплекте с рН-электродом Mettler-Toledo 405-DPAS-SC-K8S / 325.

Показатели безопасности и качества готового бакконцентрата, полученного при проведении опытно-промышленной выработки, опредепяли в соответствии с требованиями нормативной документации и согласно «Гигиеническим требованиям безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов» (СанПиН 2.3.2.1078 - 01).

Проведение микробиологических, биохимических, физико-химических и др. экспериментов осуществлялось по мере необходимости на различных стадиях исследований.

Математическая обработка полученных данных проводилась по результатам от 3 до 20 повторностей статистическими методами с использованием персонального компьютера и программируемого калькулятора SRP-145 «Citizen».

Основные результаты исследований

Анализ литературы дал возможность полагать, что изучение влияния компонентов питательных сред и технологических параметров периодического культивирования на рост и накопление биомассы бифидобактерий и молочнокислых бактерий Lbc.casei, отдельных условий подготовки и обработки биомассы на качество готового бакконцентрата позволит разработать и усовершенствовать технологию производства бактериального концентрата пробиотических культур.

1. Подбор и конструирование питательной среды. Прежде всего, провели сравнительную оценку питательных сред, используемых для культивирования бифидобакте-

рий. Установили (результаты на рис 2), что наибольшее количество бифидобактерий было получено на среде БФ-2, составленной на основе препарата BIOS 2000 с добавлением пептона и гидролизата казеина. После уточнения концентрации вносимых белковых компонентов, а также препарата BIOS 2000 вариант с содержанием пептона -Юг/ дм3, гидролизата казеина -7 г / дм3, препарата BOIS 2000 - 50 г / дм3 был выбран объектом дальнейших исследований и обозначен как БФ-3.

10 12 14 16 18 20

Продолжительность культивирования, час

Общее уравнение аппроксимации экспериментальных данных имеет вид.

1пу = (а+сх+ехг)/(1+Ьх + <1хг)

Рис. 2. Зависимость концентрации бифидобактерий в культуральной среде от продолжительности культивирования в термостате при использовании различных питательных сред, в том числе среды БФ-1 с пептоном и гидролизатом казеина

С целью обогащения среды БФ-3 другими компонентами вносили в отдельные варианты по 5 г / дм3 лактозы, глюкозы и дрожжевого экстракта. Установили, что включение в состав

среды дрожжевого экстракта ведёт к увеличению концентрации бифидобактерий на 18,7 % (см. варианты № 23 и № 24 на рис. 3), а включение одновременно обоих углеводов ведёт к повышению концентрации бифидобактерий всего на 5,4 %. На основании полученных результатов выбрали состав среды с дрожжевым экстрактом и обозначили как БФ4

С целью удаления свободного кислорода из питательной среды БФ-4 и создания более благоприятных условий для культивирования бифидобактерий в её состав включали раствор цистеин-Ь-годрохлорида, который вносили двумя способами' после стерилизации в виде стерильного раствора и перед ней. Установили, что увеличение клеток бифидобактерий в культуральной среде на 25,7 % происходит при повышении концентрации цистеин-!.-

12 14 16 18 20

Продолжительность культивирования, час

Общее уравнение аппроксимации экспериментальных данных имеет вид: 1пу = а + Ьх+сх2

Рис. 3 Зависимость концентрации бифидобактерий в культуральной среде от продолжительности культивирования в термостате при различном качественном составе питательных сред серии БФ

гидрохлорида до 1,13 г / дм3. Этот вариант среды обозначили как БФ-5. При культивировании в ферментёре (см. рис. 4) на данной среде было получено наибольшее количество бифидобактерий, которое в точке наблюдения максимума клеток составило 10,2 * 109 КОЕ в 1 см3.

Результаты наращивания различных штаммов бифидобактерий на средах БФ-4 и БФ-5 показали, что количество жизнеспособных микроорганизмов и, соответственно, бакгериапьной массы (см рис. 5), полученное на среде БФ-5, для всех рассмотренных штаммов было существенно больше, чем полученное на среде БФ-4.

Была изучена возможность использования сконструированной среды БФ-4 для наращивания бактерий Lbc.casei. Для сравнения использовали среды MRS и ГМК-2. Из рис. 6 и

10,02

8 9 10 11 12

Продолжительность культивирования, час

Общее уравнение аппроксимации экспериментальных данных имеет вид: 1пу = (а + сх)/(1+Ьх+(1х2) Рис. 4. Зависимость концентрации бифидобактерий от продолжительности культивирования при различном содержании цистеин-1_-гидрохлорида в среде

9,5

□ Среда БФ-4 □ Среде БФ-5|_' 1

J

I

I

В iactis ВЬ-12 В adolescentis МС-42 B.longum ВВ 536 В bffidum 1

Культивируемые штаммы бифидобактерий

Рис. 5. Зависимость выхода биомассы различных штаммов бифидобактерий при культивировании на средах БФ-4 и БФ-5

7 видно, что наибольшее количество клеток выросло на среде MRS. Среда БФ-4, однако, существенно эффективнее среды ГМК-2, поэтому рекомендована нами для культивирования данного вида молочнокислых бактерий.

2. Уточнение параметров процесса периодического культивирования бифидобактерий. По результатам экспериментов установили, что максимальное количество бифидобактерий накапливается при использовании инокулята, приготовленного на среде БФ-5 возрастом 15 часов (сравнивали с разновозрастным инокулятом, приготовленным на средах ГМК-2 и тиогликолевой), а наиболее рациональная его доза составила 5 %. Результаты изучения влияния дозы выбранного инокулята на концентрацию бифидобактерий показаны на рис.8.

Установили, что при пропускании углекислого газа из расчёта 4,8 дм3 на 1 дм3 воздуха во внутриаппаратном пространстве ферментёра (соответствует варианту № 3 на рис. 9) количество бифидобактерий в культуральной среде повышается на 31,5 % по сравнению с вариантом без использования газа.

3. Изучение влияния концентрации лактата и глюкозы в питательной среде на процесс периодического культивирования бифидобактерий и молочнокислых палочек Lbc.casel. На рис. 10 и 11 представлены кривые изменения концентрации лактата, глюкозы и концентрации бифидобактерий в процессе культивирования. Увеличение концентрации лактата до начала стационарной фазы идёт прямо пропорционально увеличению концентрации клеток в культуральной жидкости. После достижения максимального значения концентрации клеток в среде концентрация лактата продолжает расти, а количество клеток снижается. Концентрация

3

ю

12 14 16

Продолжительность культивирования, час

18

Рис. 6. Зависимость концентрации бактерий ¿¿с-саяе/ 01 от продолжительности культивирования при выращивании в различных средах

9,35

10 12 14 16

Продолжительность культивирования, час

Рис. 7. Зависимость концентрации бактерий ¿.Ьс.свБе/ «Финл» от продолжительности культивирования при выращивании в различных средах

6 7 8 9 10 11 12

Продолжительность культивирования, час

Общее уравнение аппроксимации экспериментальных данных имеет вид: 1п у = (а+сх+ехг) / (1+Ьх+с1хг) Рис. 8. Зависимость концентрации бифидобактерий в культуральной среде от продолжительности культивирования при использовании различных доз закваски, приготовленной на среде БФ-5

глюкозы в среде снижается обратно пропорционально увеличению количества клеток до точки максимума, а затем прямо пропорционально снижению количества клеток. Характер процесса накопления продуктов метаболизма и потребления питательных веществ одинаков у всех рассмотренных штаммов, однако, продолжительность культивирования до достижения максимума количества клеток и наблюдаемая при этом концентрация лакгата и глюкозы различны Так при выращивании бактерий В.эс/о/езсе^к МС-42 на среде БФ-4 максимальное количество клеток наблюдалось через 8,0 - 9,0 часов культивирования, концентрация лактата в среде при этом составляла 0,70 - 0,85 %. Концентрация глюкозы в этот период времени составляла 1,11 - 0,76 %. При выращивании бактерий В.Ьпдит ВВ 536 на среде БФ-4 максимальное количество клеток наблюдалось через 12,0 -13,0 часов культивирования, концентрация лактата в среде составляла при этом 0,78 - 0,86 %, а глюкозы - 0,84 - 0,61 %. Для молочнокислых бактерий 1Ьс.саз0/О1 максимум количества клеток наблюдали через 14,0 -15,0 часов культивирования при концентрации лактата в среде 0,84 - 0,87 %, а глюкозы -

менее 0,10 %. Поэтому метод определения количества продуктов метаболизма предлагается использовать для установления длительности процесса наращивания биомассы конкретного штамма экспериментально, по соответствующей концентрации их в питательной среде, при прочих постоянных условиях. Данный метод оперативен и может быть использован для контроля над ходом производственного процесса наращивания пробиотических культур

Общее уравнение аппроксимации экспериментальных данных имеет вид 1п у = (а+ос+ех2) / (1+Ьх+оЬс2) Рис. 9. Зависимость концентрации бифидобакгерий в культуральной среде от продолжительности культивирования при различных дозе и порядке пропускания углекислого газа

9,9 9,7 9,5 9,3

Ь,

5 8,9

38.7 8,5 8,3 8,1 7,9

Уравнение аппроксимации данных по концентрации

бифидобактерий: .. 1пу = {а+сх+ех2' >/(1+Ьх + сЬс2) * •

- — г *

4 0 »

- - < #

ф -

ё ! • ■

* « -

(* • -

-ЦЗ КОЕ ■ 1 МЛ • * 'Лопат, %

ш

¡III! М-

1,2 1,1 1

0,9 0,8 0,7„ 0,в| о,в5

0,4 0,3 0,2 0,1 0

3 4 5 8 7 8 9 10 11 12 13 Продолжительность культивирования, час

14

Рис.10. Зависимость концентрации лактата и концентрации бактерий ЕаЛз/евселАа МС-42 в среде от продолжительности культивирования

9,9

9,7

9,5

9,3

!,1 в

8 8,9

о> - _

8,7

8,5 8,3 8,1 7,9

_ -

ч. -

Общее уравнение аппроксимации данных по концентрации лактата и глюкозы:

»

\ 1

пу (Ы (1 * ) \ \

/1 1 \ -

в КОЕ * 1 мл люкоэа, %

■ к V --г

ч < * ч -

- **

2,4 2,2

1,8 1,4)«

121 1 £

0.8 0,8 0,4 0,2 0

О 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Продолжительность культивирования, час

Рис.11. Зависимость концентрации глюкозы и концентрации бактерий В.а<к^в5свпН$ МС-42 в среде от продолжительности культивирования

4. Изучение влияния отдельных технологических факторов на качество готового бакконцентрата. Чтобы правильно выбрать момент отделения биомассы при производстве бакконцентрата, необходимо учитывать влияние возраста клеток культуры на выживаемость их при дальнейшей обработке и сублимационной сушке. Для постановки экспериментов биомассу бифидобактерий отделяли после различной продолжительности наращивания и соединяли с защитной средой. Затем часть флаконов с бактериальным концентратом замораживали при температуре (-20 ± 1) °С, а часть сублимационно высушивали. Сублимационная сушка во всех экспериментах проводилась при одинаковых режимах, используемых на производстве, в частности, на экспериментальном заводе ВНИМИ. Установили, что (см. рис 12) наибольшая выживаемость клеток бифидобактерий при сублимационной сушке наблюдается для клеток бифидобактерий, отделённых после 8,0, 7,5 и 8,5 часов: 72,4, 72,0 и 68,0 % соответственно. При хранении замороженного бакконцентрата в течение 5 месяцев максимальная выживаемость была равна 80,6 % и наблюдалась для клеток, отделённых после 8,0 часов культивирования. При хранении сухого бакконцентрата на протяжении 10 месяцев более стойкими оказались бактерии, отделённые также после 8,0 часов культивирования -количество выживших микроорганизмов составило 88,4 %.

100

□ Выживаемость при сублимационной сушке

□ Выживаемость при пятимесячном хранении замороженного бакконцентрата

□ Выживаемость при десятимесячном хранении сухого бакконцентрата

7,5 часов 8,0 часов 8,5 часов 9,0 часов 9,5 часов 10,0 часов 10,5 часов 11,5 часов Продолжительность культивирования до отделения биомассы бифидобактерий,

час

Рис 12. Зависимость выживаемости клеток бифидобактерий при сублимационной сушке, при хранении замороженного и сухого бактериальных концентратов от продолжительности культивирования до отделения биомассы

Таким образом, установили продолжительность культивирования до отделения биомассы для штамма В.асЬ1в$свЫ18 МС-42 - 8,0 часов.

При изготовлении бакконцентратов необходим подбор наиболее рациональной с точки зрения выживаемости микроорганизмов защитной среды. Рассматривали 6 различных защитных сред, состав которых показан в таблице 1, и установили, что наибольшая выживаемость клеток бифидобакгерий (75,6 %) была в случае соединения биомассы с защитной средой № 5 в соотношении 1 :1,0 (см. рис 13). На втором этапе исследований (см. рис. 14) уточнили влияние различных соотношений биомассы и защитных сред № 5 и № 6 на * выживаемость бифидобакгерий при сушке. Наибольшая выживаемость - 82,0 % наблюдалась

при соединении биомассы и защитной среды № 5 как 1:2,0. 1> Изучили возможность использования защитной среды № 5 для сушки бактерий

Цх.са$ег Согласно полученным результатам, представленным на рис. 15, данная защитная среда обеспечивает высокий процент выживаемости молочнокислых бактерий - 76,0 % при соотношении биомассы и защитной среды 1:1,0.

Для изучения влияния температуры предварительного замораживания на выживаемость клеток при замораживании и сублимационной сушке биомассу бифидобактерий и молочнокислых бактерий их.са®В! смешивали с защитной средой № 5 в соотношениях, выбранных по результатам предыдущих исследований. Суспензию клеток замораживали при температуре - (-18 ± 1) °С, (-26 ± 1) °С и (-35 ± 1) °С. Концентрат хранился при температуре замораживания в течение (144 ± 14) часов. Затем направлялся на замораживание при

-- П1:1=биомасса:защ.среда □ 1-3*биомасса:защ среда □ 16= биоиассазащ.среда

—

:— ---

Среда 1 Среда 2 Среда 3 Среда 4 Среда 5 Среда 6 Защитная срада

Рис. 13. Зависимость выживаемости клеток бифидобакгерий при сублимационной сушке от вида защитной среды и концентрации бифидобактерий в ней перед сушкой

Таблица 1. Состав защитных сред

Компоненты защитной среды

Желатин

ай

Я

3

Я

<ч

«ч

8

8

8

Цитрат натрия

о 8'

О)

о

о> о

о Й

я

о

5?"

Малою обезжиренное

8

Никотиновая кислота

о" 8

Поваренная саль

Гпютомат натрия

температуре (-35 ± 5)°С в течение 2-6 часов в зависимости от температурного режима предварительного хранения в замороженном виде и далее на сушку. Установили, что обе культуры имеют наибольшую выживаемость (см. рис. 16) при температуре предварительного замораживания (-35 ± 1) "С. Для бифидобактерий выживаемость при сушке составила 71,0 -78,0 % в зависимости от концентрации клеток в защитной среде, а для молочнокислых палочек в пределах 66,0 - 72,0 %. Выживаемость после замораживания при температуре (-26 ± 1) °С при прочих равных условиях была меньше, чем при (-35 ± 1) °С - для бифидобактерий на 24 -

83 78

а«73 ¿68

|63

§58

¡53

»48

43

38

□Защлная среда № 5 □Заиртая среда № в

110 115 12 0 12 5 1 3 0 1 3 5 1 • 4.0 1 4.5 15 0 Соотношаииа биомассы и защитной среды соответственно

Рис. 14. Зависимость выживаемости клеток бифидобакгерий при сублимационной сушке от концентрации их в защитной среде

77 *73-

; 65 ¡61

57 53

1 0.5

: 1.0 1 :1.5 1 : 2.0 1 : 2.5 1 Соотношение биомассы и защитной среды

3.0

1:3.5

Рис. 15. Зависимость выживаемости молочнокислых бактерий Цк.са$е1 при сублимационной сушке от концентрации их в защитной среде

□ В adolescente (1-1 5)

■ B.adolescent» (1.2 0)

□ В adotescentif (1.2 5)

■ L casei (1:0.5) BL.casei (1 1 0)

□ L caaei (1 1 5)

Температура замораживания, *C

Рис 16 Зависимость выживаемости клеток бифидобакгерий и молочнокислых палочек после замораживания и сублимационной сушки от температуры предварительного замораживания и концентрации клеток в защитной среде

30 %, а для бактерий Lbc.casei на 13 -17 % Режим замораживания при температуре (-18 ± 1) "С ведёт к очень большой гибели клеточной массы, и совершенно не приемлем.

5. Определение сроков хранения сухих бактериальных концентратов бифидобактерий и молочнокислых бактерий Lbc.casei при различных температурных режимах. По 6 партий сухих бакконцентратов бифидобактерий и молочнокислых палочек Lbc.casei закладывали на хранение при трёх температурных режимах - (-20 ± 1) "С (морозильная камера), (6 ± 1) °С (камера бытового холодильника) и (20 ± 3) °С (комнатные условия).

Наибольшая выживаемость наблюдалась при температуре (-20 ± 1) °С, затем в порядке убывания процента выживаемости следовали режимы хранения в холодильнике и при комнатной температуре (см. рис. 17 и 18). Выживаемость бифидобактерий после 20 месяцев хранения в морозильной камере была в 29,4 раза больше, чем выживаемость при хранении в течение этого же времени при температуре (6 ± 1) °С, а для молочнокислых бактерий Lbc.casei выживаемость после 20 месяцев хранения при аналогичных режимах отличалась в 19,6 раз

Согласно «Гигиеническим требованиям безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов» (СанПиН 2.3.2. 1078 - 01) концентрация клеток каждого из видов в сухом бакконцентрате должна быть равной не менее 1 * 1010 КОЕ / 1г. При концентрации жизнеспособных клеток сразу после сушки не менее 3,04 * 1011 КОЕ бифидобактерий в 1г бакконцентрата и не менее 1,53 * 10" КОЕ бактерий Lbc.casei в 1г возможный срок хранения при комнатной температуре составил (8,0 ± 0,5) месяцев для бифидобактерий и (9,0 ± 0,5) месяцев для бактерий Lbccasei, при температуре (6 ± 1) °С - (18,0 ± 1,0) и (17,0 ± 0,5) месяцев соответственно, а при температуре (-20 ± 1) °С - более 2-х лет для обеих культур

6. Разработка технологии производства бактериального концентрата бифидобактерий и молочнокислых бактерий Lbc-casd. Ma основании результатов проведённых исследований разработали технологию производства двухвидового бактериального концентрата пробиотических культур (принципиальная схема представлена на рис. 19.), основанную на раздельном культивировании бифидобактерий и бактерий Lbccasei при различных оптимальных значениях температуры и уровня рН, с последующим соединением культур двумя способами - перед сушкой или после неё в определённом соотношении Внесённые изменения в существующую технологию изготовления бакконцентратов представлены в таблице 2.

11,4 11 10,6 10,2

ь.

Г-

5 8.8 1

о> 9,4

9 8,6 8,2 7.8

- - — -•

№1

-

N>2

—Е )ар» юнг № 1(- 201 1)- С

-- Общее уравнение аппроксимации данных имеет вид: 1пу = а+(Ь/(1+еН»-°)",>)) —вариант ре г: (в ± 1) -и -Вариант № 3 (20 ± 1) °С

№3 Р^-Г

6 8 10 12 14 16 18 Продолжительность хранения, месяцев

20

22

24

Рис 17. Зависимость концентрации бифидобактерий в сублимированном бакконцентрате от продолжительности и температуры хранения

в 8 10 12 14 18 18 Продолжительность хранения, месяцев

Рис. 18. Зависимость концентрации бактерий ^Ьссвве/ в сублимированном бакконцентрате от продолжительности и температуры хранения

Приготовление материнской закваски бифидобаетериЯиа среде БФ-5 (z,s'

т —

Приготовление отдельных компонентов среды БФ-4 для культивировании бифидобактерий ' '

Приготовление отдельных компонентов среды БФ-4 для культивирования Lbccaseï ' '

Приготовление материнской

закваски бактепий Lbccaseï ' '

Приготовление производственной

закваски '

Заполнение ферментёра и стерилизация питательной среды

Заполнение ферментёра и стерилизация питательной среды

Приготовление производственной за«*.

васки Lbc case/

Внесение производственной

закваски бифидобактерий

Пропускание углекислого газа и_.

установление рН ' ' »

Пропускание углекислого газа и-, установление рН ' '

Наращивание биомассы бифидобактерий (поддержание уровня рН, температуры, отбор проб для контроля чистоты, концентрации клеток бифидобак||^и лактата в среде)

Внесение производственной закваски бактерий Lbc.casei

Наращивание биомассы бактерий 1Ьс саве; (поддержание уровня рН, температуры, отбор проб для контроля чистоты, концентрации клеток молочнокислых баиерий и лактата в _среде) _

Охлаждение купьтуральной

среды *

Приготовление компонентов защитной среды № 5

Отделение биомассы бифидобастеоий * '

Соединение биомассы с защитной средой ''

Замораживание и сушка

Предварительное 'вмораживанием хранение * '

Смешивание культур и перемалывание сухого

концентрата * -

Охлаждение купьтуральной среды Т,

Отделение биомассы,, бактерий I ^«и_LL

Соединение биомассыс защитной тддпй_

Замораживание и сушка

Фасовка, укупорка, маркировка

W ~~

Хранение при различных режимах

(11)

Рис. 19. Технологическая схема производства лиофилизированного бактериального концентрата бифидобактерий и бактерий Lbc caser, красным цветом -технологические этапы, на которых режимы рекомендованы в соответствии с результатами проведённых исследований; (1) - (11) - нумерация усовершенствованных режимов и приёмов технологии бакконцентрата лробиотических культур, представленных в таблице 2.*

» - нумерация в таблице 2 и на рис. 19 дублируется

Таблица 2. Разработанные режимы и приёмы технологии бакконценграта пробиотических культур

До разработки технологии производства бакконцентрата пробиотических культур

По разработанной технологии производства бакконценграта пробиотических культур

1. Наращивание биомассы бифидо-бактерий на среде МГМ с автолизатом дрожжей

2. Инокулят для бифидобактерий на среде ГМК-2

3 Доза внесения инокулята бифидобактерий (6,0 ±1,0)%

4. Продолжительность культивирования до отделения биомассы различных штаммов бифидобактерий (24 ± 2) часа

5. Температура приготовления закваски бифидобактерий и наращивания биомассы (37 ± 1) °С

6. Активная киспотность при наращивании биомассы бифидобактерий (6,5 ± 0,2) ед. рН

7 Доза пропускаемого углекислого газа: нет

8 Контроль за развитием молочнокислых палочек и бифидобактерий по микроскопическому препарату, титруемой и активной кислотности среды

9. Соотношение биомассы бифидобактерий с защитной средой: 1:1,0

10. Предварительное хранение замороженной суспензии клеток бифидобактерий и бактерий \Jbc.casei перед сушкой: нет

11. Срок хранения бакконцентрата:

6 месяцев при температуре (-20 ± 1) °С

1. Наращивание биомассы бифидобактерий и бактерий Lbc case/ на среде БФ-4

2. Инокулят для бифидобактерий готовится на среде БФ-5

3. Доза внесения инокулята бифидобактерий в ферментёр (5,0 ±0,5)%

4. Продолжительность культивирования до отделения биомассы различных штаммов бифидобактерий (9 ± 2) часов и бактерий Lbc.casel (12 ± 2) часов

5. Температура приготовления закваски бифидобактерий и наращивания биомассы (38 ± 1) °С, а бактерий Lbc. casei (32 ± 1) °С

6. Активная кислотность при наращивании биомассы бифидобактерий (6,80 ± 0,10) ед. рН и бактерий Lbc.casei (6,05 ±0,10) ед. рН

7 Доза пропускаемого углекислого газа: 4,8 дм® на 1 дм3 воздуха во внутриаппаратном пространстве

8. Контроль за развитием молочнокислых палочек и бифидобактерий помимо микроскопического препарата, титруемой и активной кислотности среды по скорости изменения рН и концентрации лакгата и глюкозы

9. Соотношение биомассы бифидобактерий и бактерий Lbc.casei с защитной средой 1 • 2,0 и

1:1,0 соответственно

10. Предварительное хранение замороженной суспензии клеток бифидобактерий и бактерий Lbc.casei перед сушкой: при температуре

(-35 ± 5) °С в течение (144 ± 14) часов

11. Срок хранения бакконцентрата при начальной концентрации клеток по 1011 КОЕ 11 г при температуре (6 ± 1) °С до 12 месяцев; при температуре (-20 ± 2) °С до 24 месяцев_

7. Опытно-промышленная выработка двухвидового бакконцентрата. В соответствии с разработанной и утверждённой технической документацией на экспериментальном заводе ВНИМИ, в цехе заквасок проведена опытно-промышленная выработка бакконцентрата.

В результате был получен бактериальный концентрат КБСКБ (в составе бактерии B.adolescentis МС-42 и Lbccasei 01) с количеством жизнеспособных клеток в 1 г: 2,90 * 1011 КОЕ бифидобактерий и 1,40 * 1011 КОЕ бактерий Lbccasei. Массовая доля влаги в бакконценграте - не более 5,0 %; основные микробиологические показатели-дрожжи и плесневые грибы, в 1 гбакконцентрата, КОЕ: не обнаружено;

- бактерии группы кишечных палочек в 1 г бакконцентрата: не обнаружено;

- присутствие Staphylococcus aureus в 1 г бакконцентрата: не обнаружено;

- патогенные микроорганизмы, в том числе сальмонеллы, в 10 г бакконцентрата: не обнаружено.

Выводы

1. Комплекс проведённых исследований позволил экспериментально установить, научно обосновать технологические параметры и приёмы культивирования, подготовки, обработки клеток бифидобактерий и бактерий Lbccasei для изготовления двухвидовога концентрата пробиотических культур.

2 Выявлены закономерности роста бифидобактерий B.adolescentis и мезофильных молочнокислых палочек Lbc.casei на различных питательных средах. На основании полученных данных разработаны питательные среды БФ-4 и БФ-5 для наращивания бактериальной массы различных пробиотических штаммов бифидобактерий и молочнокислых бактерий Lbc.casei.

3. Определена зависимость между развитием бифидобактерий, бактерий Lbc.casei и изменением концентрации лактата (глюкозы) в культуральной среде при периодическом культивировании Разработан метод определения длительности культивирования конкретных пробиотических культур по содержанию продуктов метаболизма Предложено использовать оперативный метод определения концентрации лактата в среде для контроля над ходом технологического процесса наращивания бифидобактерий и молочнокислых бактерий.

4. Установлено, что наибольшая выживаемость клеток бифидобактерий при замораживании, сублимационной сушке и дальнейшем хранении достигается при отделении культуры в фазе замедления роста.

5. Разработаны технологические параметры накопления биомассы бифидобактерий при периодическом культивировании: питательная среда - БФ-4 и БФ-5; доза инокулята - (5,0 ±

0.5) %; расход углекислого газа - 4,8 дм3 на 1 дм3 воздуха во внутриаппаратном пространстве ферментёра (с учётом объёма воздуха над питательной средой); температура культивирования - (38 ± 1) °С; активная кислотность среды - (6,80 ± 0,10) ед. рН; продолжительность культивирования - для В.ас1о1е5СвпИ$ МС-42 (8,0 ± 0,2) часов.

6. Выбран состав защитной среды для биомассы бифидобактерий и бактерий 1Ьс.<же/; определены наиболее рациональные соотношения биомассы и защитной среды (1 : 2 и 1 :1 соответственно) для обоих видов микроорганизмов с точки зрения выживаемости при сублимационной сушке.

7. Определены сроки хранения сухого бактериального концентрата пробиотических культур при различных температурных режимах в зависимости от концентрации жизнеспособных клеток сразу после сушки. Показано, что наибольшей устойчивостью обладают микроорганизмы, сохраняемые при температуре (-20 ± 1) ° С; при этом количество бифидобактерий и молочнокислых бактерий в бакконцентрате снижается к 20 месяцам хранения в 2 раза, к 26 - 27 месяцам хранения - приблизительно в 4 раза. Для бакконцентрата с исходным содержанием пробиотических микроорганизмов не менее 1 * 1011 КОЕ /1 г обеих культур (при норме содержания жизнеспособных клеток наконец срока годности не менее 1 • 1010 КОЕ /1 г) установлены сроки хранения:

- при температуре (-20 ± 1) °С - 24 месяца;

- при температуре (6 ± 1) °С -12 месяцев.

8 Разработана технология двухвидового бактериального концентрата пробиотических культур Утверждена техническая документация: ТУ 9229-3254)0419785-03 «Концентрат бактериальный сухой пробиотических культур» и «Технологическая инструкция по производству сухого бактериального концентрата пробиотических культур» (утверждена 03.12.2003).

Публикации по теме диссертационной работы.

1. Семенихина В.Ф., Рожкова И.В., Яркина Я А. Создание нового поколения бактериальных концентратов и кисломолочных продуктов различного функционального назначения II Технологии и продукты здорового питания: Сб. докл. Междунар. конф. - Ч. I. - М., 2003. - С. 26 -29.

2. Семенихина В.Ф., Ярки на Я. А. Питательная среда для биомассы бифидобакгерий // Молочная промышленность. - 2003. - №10. - С.26 - 27.

3. Драгунова С Ф, Семенихина В.Ф, Ярки на Я.А Использование биосенсорных датчиков для контроля ферментационных процессов в ходе культивирования Bifidobacterium adolescents II Научное обоснование молочной промышленности (ВНИМИ 75 лет): Сб науч тр. / Все росс науч.-иослед. ин-т молоч пром-сти, - М„ 2004. - С. 98 -101.

4. Семенихина В.Ф, Яркина Я.А. Влияние концентрации лактатов на процесс культивирования бифидобакгерий II Молочная промышленность. - 2004. - Ns 3 - С.25 - 26.

5. Семенихина В.Ф., Яркина Я.А. Исследование некоторых параметров процесса периодического культивирования бифидобактерий с целью получения бактериальной массы II Хранение и переработка сельхоэсырья. - 2004. - Ne 12. - С.48 - 49.

6. Яркина Я.А. Изучение влияния некоторых технологических факторов на качество готового бакконцентрата с бифидобактериями II Хранение и переработка сельхозсырья. - 2005. - № 1. -С.33 - 35.

7. Яркина Я А. Бакконцентрат бифидобактерий и бактерий Lactobacillus easel II Молочная промышленность. - 2005. - № 2. - С. 34 - 35.

8. Яркина Я.А. Качество бакконцентрата с бифидобактериями II Переработка молока. - 2005. -№2.-С. 24 - 25.

Формат 60x90/16 Печать офсетная

Бум. тип Тираж 100 экз. Зак.69

ООО «Полиграфсервис» 1093 16 Москва, ул. Талалихина, 26

Р" 96 72

РНБ Русский фонд

2006-4 15283

Введение

1 Обзор литературы

1.1 Функциональное питание и пробиотики. Принципы производства кисломолочных

1.2 продуктов с бифидобактериями

1.2 Нормальная микрофлора кишечника. Функции бифидобактерий в организме человека и их значение

1.3 История изучения вопроса. Бифидосодержащие бакпрепараты и кисломолочные продукты сегодня

1.4 Краткая характеристика бифидобактерий, их свойства и условия культивирования

1.4.1 Морфология, классификация, культурально-физиологические свойства бифидобактерий, их биохимическая, антагонистическая активность и отношение к антибиотикам

1.4.2 Питательные потребности бифидобактерий. Факторы роста и их источники. Бифидус-фактор

1.4.3 Питательные среды для культивирования бифидобактерий

1.4.4 Отношение бифидобактерий к кислороду воздуха. Средства и способы для снижения воздействия кислорода на бифидобактерии при их культивировании

1.4.5 Отношение бифидобактерий к температуре и рН среды

1.4.6 Влияние процесса перемешивания, дозы и вида вносимого инокулята на накопление биомассы бифидобактерий

1.5 Технология производства сухих бактериальных концентратов

1.5.1 Отделение и концентрирование биомассы

1.5.2 Защитные среды

1.5.3 Консервирование бактериальных клеток и хранение бактериальных препаратов

1.5.4 Особенности производства многоштаммовых концентратов с бифидобактериями

1.6 Бактерии Lbc.casei и их использование для создания новых пробиотических продуктов

1.6.1 Некоторые свойства бактерий Lbc.casei. Бактерии Lbc.casei в качестве пробиотика 43 1.6.2. Клиническое влияние Lbc.casei на желудочно-кишечные заболевания. Поддержание нормальной работы микрофлоры кишечника. Иммуномодулирующий эффект Lbc.casei

1.6.3 Технологические аспекты изготовления и использования бакконцентратов с бифидобактериями и бактериями Lbacasei 46 1.7 Влияние продуктов метаболизма на рост и развитие бифидобактерий и молочнокислых бактерий

2 Цели и задачи исследований

3 Организация работы, объекты и методы исследований

3.1 Организация работы

3.2 Объекты исследований и материалы

3.2.1 Объекты исследований

3.2.2 Материалы исследований

3.3 Методы исследований

3.3.1 Микробиологические методы исследований

3.3.2 Биохимические методы исследований

3.3.3 Физико-химические методы исследований

3.3.4 Математические методы исследований

4 Собственные исследования 73 4.1 Подбор и конструирование питательной среды для бифидобактерий

4.1.1 Сравнительная оценка различных питательных сред, используемых ранее для культивирования бифидобактерий

4.1.2 Изучение возможности использования белковых добавок в составе питательных сред БФ-1 и ГМК-2 для периодического культивирования бифидобактерий

4.1.3 Уточнение количественного состава среды БФ-2 при периодическом культивировании бифидобактерий

4.1.4 Исследование влияния включённых в состав среды БФ-3 компонентов (дрожжевого экстракта, лактозы, глюкозы и лимоннокислого натрия) на развитие бифидобактерий при периодическом культивировании

4.1.5 Исследование влияния цистеин-Ьгидрохлорида в составе питательной среды БФна развитие бифидобактерий при периодическом культивировании

4.1.6 Изучение влияния препарата «Фитотон» на процесс развития бифидобактерий при периодическом культивировании на различных питательных средах

4.1.7 Изучение развития различных штаммов бифидобактерий на питательных средах

БФ-4 и БФ-5 при периодическом культивировании в условиях ферментёра

4.1.8 Исследование возможности использования питательной среды БФ-4 с целью наращивания биомассы различных штаммов мезофильных молочнокислых бактерий Lbc.casei

4.2 Уточнение отдельных параметров процесса периодического культивирования бифидобактерий с целью получения бактериальной массы

4.2.1 Изучение влияния дозы и вида инокулята на процесс периодического культивирования бифидобактерий

4.2.2 Исследование влияния углекислого газа и скорости перемешивания на процесс периодического культивирования бифидобактерий

4.3 Влияние концентрации лактата и глюкозы в питательной среде на процесс периодического культивирования бифидобактерий и молочнокислых бактерий Lbc.casei

4.4 Изучение влияния отдельных технологических факторов на качество готового бактериального концентрата

4.4.1 Исследование влияния продолжительности культивирования бифидобактерий на качество бактериального концентрата и стойкость при хранении

4.4.2 Сравнительная оценка различных защитных сред, используемых для производства сухих заквасок и бакконцентратов бифидобактерий. Изучение влияния на качество сухого бактериального концентрата вида защитной среды и концентрации бифидобактерий в ней перед сублимационной сушкой

4.4.3 Изучение возможности использования разработанной защитной среды № 5 для сублимационной сушки молочнокислых бактерий Lbc.casei

4.4.4 Исследование влияния температуры предварительного замораживания бактериального концентрата на выживаемость клеток бифидобактерий и Lbc.casei при последующей сублимационной сушке

4.4.5 Исследование влияния дозы сырого бактериального концентрата во флаконах на выживаемость бифидобактерий и молочнокислых бактерий Lbc.casei при сублимационной сушке

4.5 Определение сроков хранения замороженного и сухого бактериальных концентратов бифидобактерий и сухого бактериального концентрата молочнокислых бактерий Lbc.casei

4.5.1 Определение возможностей хранения замороженного концентрата бифидобактерий

4.5.2 Определение сроков хранения при различной температуре сухих бакконцентратов бифидобактерий и молочнокислых бактерий Lbc.casei

4.6 Разработка технологии производства бактериального концентрата бифидобактерий и молочнокислых бактерий Lbc.casei на основании проведённых исследований

4.7 Результаты опытно-промышленной выработки бактериального концентрата бифидобактерий и бактерий Lbc.casei 149 Выводы 151 Список литературы 153 Приложения

Анализ ситуации в отечественном молочном производстве свидетельствует, что в последние годы идёт неуклонный рост объёмов выпуска кисломолочных продуктов с пробиотическими штаммами бифидобактерий и молочнокислых бактерий.

Изготовление пробиотических кисломолочных продуктов относится к числу производств, в основе которых лежат разнообразные микробиологические и биохимические процессы, определяющие органолептические, физико-химические и функциональные свойства данных продуктов, их пищевую ценность и безопасность для потребителя. Главной проблемой при выработке кисломолочных продуктов с такими относительно медленно или слабо развивающимися культурами является обеспечение необходимого количественного состава микроорганизмов, определённого соотношения отдельных видов и штаммов. При этом в подавляющем большинстве случаев причины изменения концентрации в продукте, например, бифидобактерий, связаны либо с нарушениями в направленности и интенсивности микробиологических процессов (в случае способа производства, предусматривающего размножение пробиотической культуры во время выработки), либо с гибелью вносимых клеток (при способе производства с обеспечением определённой концентрации в продукте прямым внесением без дальнейшего размножения). Поскольку необходимым элементом процесса изготовления пробиотических кисломолочных продуктов являются концентрированные и пригодные для длительного хранения закваски, очевидно, что в любой из рассматриваемых ситуаций для устранения недостатков функциональных кисломолочных продуктов нужны бактериальные закваски и концентраты высокого качества.

Низкое качество бакконцентратов с пробиотическими микроорганизмами - это, прежде всего, недостаточно высокая концентрация и слабая физиологическая активность микробных клеток в них. Поэтому одним из интенсивно разрабатываемых научно-технических направлений является совершенствование существующих и создание новых более эффективных бактериальных концентратов с длительным сроком годности, содержащих клетки пробиотических культур в большом количестве и высокобиологичном состоянии.

Многочисленные литературные данные подтверждают, что целенаправленное регулирование параметров технологии подготовки пробиотических культур, т. е. изготовления высококонцентрированных бактериальных препаратов, оказывает существенное влияние на их качество и, следовательно, на качество* функциональных молочных продуктов. Поэтому рабочей гипотезой является предположение о том, что существует реальная возможность стабилизировать качество кисломолочных продуктов с пробиотическими культурами путём изучения, подбора и разработки рациональных условий и приёмов выращивания, а также обработки пробиотических микроорганизмов с целью интенсификации процесса производства бактериальных концентратов и улучшения их основных показателей и технологических свойств.

В соответствии с вышеизложенным представляется актуальной разработка и совершенствование технологии двухвидового бактериального концентрата пробиотических лулыур для производства новых видов кисломолочных продуктов и повышения их качества.

1 Обзор литературы

Выводы

1. Комплекс проведённых исследований позволил экспериментально установить, научно обосновать технологические параметры и приёмы культивирования, подготовки, обработки клеток бифидобактерий и бактерий Lbc.casei для изготовления двухвидового концентрата пробиотических культур.

2. Выявлены закономерности роста бифидобактерий B.adolescentis и мезофильных молочнокислых палочек Lbc.casei на различных питательных средах. На основании полученных данных разработаны питательные среды БФ-4 и БФ-5 для наращивания бактериальной массы различных пробиотических штаммов бифидобактерий и молочнокислых бактерий Lbc.casei.

3. Определена зависимость между развитием бифидобактерий, бактерий Lbc.casei и изменением концентрации лактата (глюкозы) в культуральной среде при периодическом культивировании. Разработан метод определения длительности культивирования конкретных пробиотических культур по содержанию продуктов метаболизма. Предложено использовать оперативный метод определения концентрации лактата в среде для контроля над ходом технологического процесса наращивания бифидобактерий и молочнокислых бактерий.

4. Установлено, что наибольшая выживаемость клеток бифидобактерий при замораживании, сублимационной сушке и дальнейшем хранении достигается при отделении культуры в фазе замедления роста.

5. Разработаны технологические параметры накопления биомассы бифидобактерий при периодическом культивировании: питательная среда - БФ-4 и БФ-5; доза инокулята - (5,0 ± 0,5) %; расход углекислого газа - 4,8 дм3 на 1 дм3 воздуха во внугриаппаратном пространстве ферментёра (с учётом объёма воздуха над питательной средой); температура культивирования - (38 ± 1) °С; активная кислотность среды - (6,80 ± 0,10) ед. рН; продолжительность культивирования - для B.adolescentis МС-42 (8,0 ± 0,2) часов.

6. Выбран состав защитной среды для биомассы бифидобактерий и бактерий Lbc.casei-, определены наиболее рациональные соотношения биомассы и защитной среды (1 : 2 и 1 : 1 соответственно) для обоих видов микроорганизмов с точки зрения выживаемости при сублимационной сушке.

7. Определены сроки хранения сухого бактериального концентрата пробиотических культур при различных температурных режимах в зависимости от концентрации жизнеспособных клеток сразу после сушки. Показано, что наибольшей устойчивостью обладают микроорганизмы, сохраняемые при температуре (-20 ± 1) ° С; при этом количество бифидобактерий и молочнокислых бактерий в бакконцентрате снижается к 20 месяцам хранения в 2 раза, к 26 - 27 месяцам хранения - приблизительно в 4 раза. Для бакконцентрата с исходным содержанием пробиотических микроорганизмов не менее 1 * 1011 КОЕ /1 г обеих культур (при норме содержания жизнеспособных клеток на конец срока годности не менее 1 * 1010 КОЕ /1 г) установлены сроки хранения:

- при температуре (-20 ± 1) °С - 24 месяца;

- при температуре (6 ± 1) °С -12 месяцев.

8. Разработана технология двухвидового бактериального концентрата пробиотических культур. Утверждена техническая документация: ТУ 9229-325-00419785-03 «Концентрат бактериальный сухой пробиотических культур» и «Технологическая инструкция по производству сухого бактериального концентрата пробиотических культур» (утверждена 03.12.2003).

1. Алёшкин В.А., Жакевич И.М. Микробиология на службе здорового питания II Молочная промышленность. -1999. № 11. - С. 14 -15.

2. Андреева Е.Ф., Тарасова И.И., Правдин И.П. Некоторые особенности организации процесса сублимационного обезвоживания в стерильных условиях II Оборудование и средства управления микробиологических производств. М., 1989. - Т. 2. - Ч. 1. - С. 148 -162.

3. Анисимов В. Производители «Бифилайф» лидеры молочной индустрии II Молочная промышленность. - 2002. - № 8. - С. 31.

4. Антагонистическая активность кишечной палочки (штамм М-17) и бифидобактерий (штамм 1) по отношению к холерным вибрионам Эль-Тор in vitro I М.П. Покровская, Р.В. Эпштейн-Литвак и др. II Микробиология. -1972. № 10. - С. 54 - 59.

5. Ашмарин И.П., Воробьёв А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. -Л.: Медгиз, 1962.-179 с.

6. А. С. 2002801. Питательная среда «Бактофет» для культивирования бифидобактерий / И.Г. Ерёмина, Г.Ф. Власова и др. -1993. № 41 -42.

7. А. С. 1271872. Питательная среда для выделения и культивирования бифидобактерий / М.Б. Сундукова, Е.А. Хорькова и др. -1986. Бил. № 43.

8. А. С. 1513029. Питательная среда для выращивания бифидобактерий / Е.Ф. Завгородняя, В.В. Зубов и др. -1989. № 37.

9. А. С. 1167198. Питательная среда для культивирования бифидобактерий штамма B.bifidum 1/ Н.П. Ефимова. A.M. Ивакина и др. -1985. № 26.

10. А. С. 789580 СССР. Питательная среда для накопления биомассы бифидобактерий / Т.М. Эрвольдер, Г.Д. Перфильев, А.В. Гудков, Г.А. Белова. -1980. Бил. № 47.

11. А. С. 1351560 СССР. Кисломолочный продукт «Бифилин» / Е.А. Хорькова, В.Ф. Семенихина, А.Н. Иванова и др. № 3706834; Заявл. 29.02.84 II Изобретения. -1987. - 6 с.

12. Банникова Л.А., Королёва Н.С., Семенихина В.Ф. Микробиологические основы молочного производства. М.: Агропромиздат, 1987. - 400 с.

13. Банникова Л.А. Селекция молочнокислых бактерий и их применение в молочной промышленности. М.: Пищевая промышленность, 1975. - 255 с.

14. Бархатова Т.В., Ганина В.И., Рожкова Т.В. Активизация бифидобактерий на новой питательной среде // Молочная промышленность. 2003. - № 3. - С. 48.

15. Бахнова Н.В., Анищенко И.П. Барнаульская биофабрика II Молочная промышленность. -2001.-№4.-С. 31-34.

16. Белова Г.А. Совершенствование производства бактериальных концентратов и разработка способов применения их в сыроделии: Дис. . канд. биол. наук: 26.12.72 / Волгогр. молочный ин-т.-Углич, 1972.-406 с.

17. Белоус A.M., Цветков Ц.Д. Научные основы технологии сублимационного консервирования. Киев: Наукова думка, 1985. - 208 с.

18. Берги Д.Х. Краткий определитель бактерий Берги. М.: Мир. -1980. - 495 с.

19. Биологическая активность бифидобактерий в молоке / А.В. Гудков, Т.М. Эрвольдер, Г.М. Свириденко, М.Я. Гудкова II Молочная промышленность. -1984. № 1. - С. 21 - 23.

20. Биологически активные вещества и их использование в производстве диетических продуктов питания / И.А. Рогов, В.А. Алексахина и др. М.: АгроНИИТЭИММП, 1994. - 48 с.

21. Бифидобактерии и использование их в молочной промышленности: Обзорная информация / Л.В. Красникова, И.В. Салахова, В.И. Шаробайко, Т.М. Эрвольдер. М.: АгроНИИТЭИММП, 1992.-32 с.

22. Бифидобактерии. Опыт использования в медицине: 2-е издание / Сост. А.И. Калмыкова. -Новосибирск: «Варяг», 1998. 55 с.

23. Бифидогенный концентрат из молочной сыворотки / А.Г. Храмцов, А.Д. Лодыгин, И.А. Евдокимов, С.А. Рябцева II Молочная промышленность. -1996. № 8. - С. 16.

24. Бифифрут реальность и перспективы / С.И. Черняев, А.В. Казаков, С.А. Сошин, М.Н. Черняева II Молочная промышленность. -1998. - № 1. - С. 16 -17.

25. Блохина И.Н. Дисбактериозы. Л.: Медицина, 1979. - 254 с.

26. Борисова Г.В., Буйлова Л.А. Повышение качества творога биологическим путём // Молочная промышленность. -1986. № 10. - С. 23 - 24.

27. Василисина С.В., Рохмистров В.В., Рябцева С.А. Направленная химическая трансформация лактозы в лактулозу в целях получения бифидогенного препарата для продуктов детского и диетического питания. Краснодар. 1990. - 38 с.

28. Вельтищев Ю.Э., Харькова P.M. Биологически активные факторы грудного молока // Вопросы охраны материнства и детства. -1991. № 6. - С. 48 - 53.

29. Виестур У.Э., Кристапсонс М.Ж., Былинкина Е.С. Культивирование микроорганизмов. М.: Пищевая промышленность, 1980. - 232 с.

30. Влияние защитных факторов на развитие лактобацилл и бифидобактерий / Г.П. Шаманова, Т.А. Кудрявцева, М.А. Щелкунова, И.П. Кириенко // Молочная промышленность. -1995. № 6. -С. 22-23.

31. Вождаев В.В. Исследование и разработка биотехнологии кисломолочных напитков, обогащённых бифидобактериями и пшеничными зародышевыми хлопьями:: Дис. канд. техн. наук: 18.05.01 / Кемеровский технол. ин-т пищевой промышленности. Кемерово, 2001. -167 с.

32. Воздействие ферментативных гидролизатов на накопление биомассы бифидобактерий / Т.М. Эрвольдер, А.В. Гудков и др. II Молочная промышленность. -1980. № 12. - С. 15 -17.

33. Ганина В.И., Большакова Е.В. Действие пробиотических продуктов на возбудителей кишечных инфекций II Молочная промышленность. 2001. - № 11. - С. 47 - 48.

34. Ганина В.И. Научные и практические основы биотехнологии кисломолочных продуктов и препаратов с пробиотическими свойствами: Дис. докт. техн. наук: 05.10.01 / Моск. Госуд. ун-т прикладной биотехнологии. М., 2001.-444 с.

35. Ганина В.И. Разработка технологии сухого молочного продукта «Бифацид»: Автореф. дис. . канд. техн. наук: 01.01.87/ Всесоюз. науч.-исслед. ин-т молоч. пром-сти. М., 1987.-21 с.

36. Гаппаров М.М., Никольская Г.И. О роли углеводов в питании детей II Вопросы питания. -1991.-№2.-С. 15-22.

37. Генералова Н.А., Лихацкая С.В. Напиток «Биогран» из молочной сыворотки // Молочная промышленность. 2003. - № 2. - С. 39 - 40.

38. Герасимова Л.М. Разработка технологии бактериального препарата для варёно-копчёных колбас с целью улучшения их качества: Автореф. дис. канд. техн. наук: 01.01.91 / Всесоюз. науч.-исслед. и конструкт, ин-т молоч. пром-сти. М., 1991. - 24 с.

39. Головачёва С.Н., Королюк A.M., Воложовская Н.И. Биотехнологические аспекты конструирования двухштаммовой бифидозакваски II Дисбактериозы и эубиотики: Тез. докл. Всеросс. науч.-практ. конф. М.р 1996. - С. 13.

40. Гончарова Г.И., Дорофейчук В.Г., Смолянская А.З. Микробная экология кишечника в норме и при патологии II Антибиотики и химиотерапия. -1989. № 6. - С. 462 - 468.

41. ГОСТ Р 51331-99. Продукты молочные. Йогурты. Общие технические условия.

42. Гудков А.В., Эрвольдер Т.М., Гудкова М.Я. Производство молочных продуктов сIиспользованием бифидобактерий: Обзорная информация. ЦНИИТЭИмясомолпром. - Серия: Цельномолочная промышленность. - М., 1981. - 9 с.

43. Гудкова М.Я. новые кисломолочные напитки «Вита» и «Угличский» II Достижения науки и техники АПК. -1989. № 4. - С. 53 - 54.

44. ГУП «Экспериментальная биофабрика». Ассортимент бактериальных концентратов и заквасок для сыров и других молочных продуктов. Углич: Изд-во Спектр-Сервис, 2003. - 26 с.

45. Диапазон антигенной специфичности пептидогликана бифидобактерий / Н.И. Сибирякова,

46. Д.Г. Астафьев, И.В. Маян екая, Г.И. Гончарова // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1991. № 6. - С. 2 - 3.

47. Диланян З.Х., Гудков А.В., Попыркана С.И. Выработка сметаны повышенной биологической ценности в Красноярском крае II Известия ВУЗов. Пищевая технология. -1991. № 4 - 6. -178 с.

48. Донских Е.Е., Гончарова Г.И. Качественный и количественный состав кислот, образуемых бифидобактериями II Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1988. № 7. -С. 11.

49. Жукова Ю.Ю. Новые молочные продукты: Экспресс-информ. М.: АгроНИИТЭИММП, 1994. -Вып. 5.-С. 9-12.

50. Ивченко Г.И., Медведев Ю.И. Математическая статистика. М.: Высшая школа, 1992. - 303 с.

51. Иммуномодулирующее действие препаратов-эубиотиков / Т.К. Лопатина, М.С. Бляхер и др. II Вестник РАМН. -1997. № 3. - С. 30 - 34.

52. Инструкция по микробиологическому контролю производства на предприятиях молочной промышленности: Утв. Зам. Нач. отдела по производству и переработке продукции животноводства Сергеевым В.Н. 28.12.1987 II АгроНИИТЭИММП. М., 1988. -122 с.

53. Использование антибиотикоустойчивых бифидобактерий при лечении язвенно-некротического энтероколита у детей раннего возраста / Б.В. Пинегин, В.М. Коршунова и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1983. № 1. - С. 59 - 64.

54. Калинина Т.Э. Питательные среды для культивирования бифидобактерий: Дис. . канд. мед. наук: 01.04.95 / Ростовский науч.-исслед. ин-т микробиологии и паразитологии. Ростов-на-Дону, 1995.-123 с.

55. Калинина Т.Э., Тарковская Л.Н., Шепелев А.П. Новые питательные среды для культи зирования бифидобактерий // Дисбактериозы и эубиотики: Тез. докл. Всеросс. науч.-практ. конф. М., 1996. - С. 18.

56. Квасников Е.И. Место и значение молочнокислых бактерий в биосфере // Микробиология. -1992.-Т. 54.-№5.-С. 3-9.

57. Квасников Е.И., Нестеренко О.А. Молочнокислые бактерии и пути их использования. М.: Изд-во «Наука», 1975.-389 с.

58. Кефир как продукт высоких биотехнологий // Молочная промышленность. 2003. - № 5. -С. 38-39.

59. Кисломолочный напиток «Бифидин» / В.Ф. Семенихина, М.Б. Сундукова и др. // Проблемы и пути рационального использования сырья в маслоделии и сыроделии: Тез. докл. 7-й науч.-техн. конф. Каунас, 1986. - 4.1. - С. 193.

60. Клиническое значение исследования функционального состояния местного и системного клеточного иммунитета при синдроме мальадсорбции у детей / Д.В. Стефани, Ю.А. Изачик и др. II Педиатрия. 1993. - № 5. - С. 59 - 61.

61. Комплексный препарат-пробиотик, содержащий бифидобактерии II Пробиотические микроорганизмы современное состояние вопроса и перспективы использования: Сб. матер. Междунар. науч.-практ. конф. памяти Г.И. Гончаровой. - М., 2002. - С. 50.

62. Красникова Л.В., Кострова И.Е. Роль микрофлоры закваски в повышении качества молочных продуктов: Обзорная информация. М.: АгроНИИТЭИММП, 1989. - 36 с.

63. Красникова Л.В. Ферментированные напитки из молочной сыворотки с пробиотиками II Вестн. Междунар. акад. холода. -1999. Вып. 1. - С. 46-47.

64. Крашенинин П.Ф., Шаманова Г.П. Новые виды кисломолочных продуктов детского и диетического питания II Вопросы питания. -1994. -№ 5. — С. 12 —15.

65. Критская И.В. Разработка питательных сред и процесса непрерывного культивирования бифидобактерий: Автореф. дис. . канд. биол. наук: 01.01.98 / Науч.-исслед. ин-т вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН. М„ 1998. - 27 с.

66. Куваева И.Б., Веселова О.Л., Кузнецова Г.Г. Микроэкологическая система пищеварительного тракта при пищевой аллергии у детей // Проблемы иммунологии и аллергологии в детской гастроэнтерологии. Нижний Новгород, 1991. - С. 102 -109.

67. Куплетская М.Б., Аркадьева З.А. Методы длительного хранения коллекции микроорганизмов кафедры микробиологии Московского государственного университета // Микробиология. -1997. Т. 66. - № 2. - С. 283 - 288.

68. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М.: «Медицина», 1978. - 394 с.

69. Лагода И.В. Исследование основных факторов при сублимационной сушке, влияющих на качество и стойкость заквасок молочнокислых бактерий: Дис. . канд. техн. наук: 01.01.72 / Всесоюз. науч.-исслед. ин-т молоч. пром-сти. М., 1972. -160 с.

70. Лебедева М.Н., Гончарова Г.И., Лизько Н.И. Современные аспекты нормы и патологии кишечной микрофлоры II Микробиология. -1974. № 9. - С. 36-41.

71. Лунькова Л.В. Разработка технологии кисломолочного напитка с бифидобактериями: Дис. канд. техн. наук: 01.01.941 Ставрополье, политехи, ин-т. Ставрополь, 1994. -177 с.

72. Лысова Е.А. Причины и лечение микроэкологических нарушений пищеиарительной системы II Антибиотики и химиотерапия. -1994. Т. 39. - № 7. - С. 57 - 60.

73. Лянная А.М., Гончарова Г.И., Высоцкий В.В. Морфология бифидобактерий в светооптическом и электронно-микроскопическом уровне и их биологические свойства // Микробиология. -1979. № 6. - С. 54 - 58.

74. Лянная А.М., Ильинская Е.С. Влияние B.bifidum на стафилококки, выделенные из кишечника детей // Острые детские инфекции. М., 1978. - Т. XIX. - С. 98 -101.

75. Максимов В.И. Углеводные стимуляторы бифидобактерий II Биотехнология. -1991. № 6. - С. 3 - 7.

76. Манидарова Л.Н. Разработка технологии бифидосодержащих кисломолочных продуктов с длительным сроком хранения: Дис. канд. техн. наук: 01.01.00 / Вост.-Сибир. гос. технол. ун-т. -Улан-Уде, 2000.-112 с.

77. Майнелл Д., Майнелл Э. Экспериментальная микробиология. М.: Мир, 1967. -197 с.

78. Механизмы воздействия пробиотиков на функциональное состояние лимфоцитов при остром шигеллозе / Н.П. Исаева, М.З. Шахмарданов и др. // Микробиология. -1994. № 6. - С. 107-108.

79. Микроэкология желудочно-кишечного тракта. Коррекция микрофлоры при дисбактериозах кишечника: Учебное пособие / В.М. Коршунов, Н.Н. Володин и др. М.: МЗ РФ, 1999. - 80 с.

80. Мурашова А.О., Ланских А.Г, Баснакьян И.А. Усовершенствование процесса выращивания бифидобактерий в биореакторе для получения лиофилизированной посевной культуры // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2000. - № 6. - С. 80 - 82.

81. Новая питательная среда для выделения представителей рода Bifidobacterium / И.В. Критская, Е.С. Гиршович и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1995.-№6.-С. 87-88.

82. Новик Г.И., Астапович Н.И., Самарцев А.А. Исследование физиолого-биохимических особенностей бифидобактерий на поздних стадиях развития популяций II Микробиология. -2001. Т. 70. - № 4. - С. 495 - 502.

83. О некоторых биологических свойствах бифидобактерий / Н.А. Поликарпова, Н.И. Бёвз и др. II Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1992. № 4. - С. 6 - 8.

84. Остроумов Л.А., Вождаева Л.И., Цибулько Л.А. Функциональный кисломолочный напиток для детей II Молочная промышленность. 2002. - № 11. - С. 36 - 38.

85. Патент 649424 Австрия, МКИ5 А 23 С 009 /123,009 /127. Method of preparing milk-fermented food I M. Yajima, S. Hashimoto, T. Saita, K. Matsuzaki; KK Yakult Honsha. № 66950 / 90; Заявл. 23.11.90; Опубл. 26.05.94.

86. Патент 2011352 Россия, МКИ5 А 23 С 9 /127.

87. Патент 4087559 США, МКИ А 23 С 9 /12. Fermented milk containing viable Bifidobacteria I Mutal Manahiko, Hada Mitzuo, Nacajama Kei et al. (EP). № 735412; Заявл. 26.10.76. Опубл. 02.05.78. II РЖ Химия. -1979. - № 10.

88. Патент1519555 Франция, МКИ А 23 С 9112. Диетический продукт для грудных детей / Жак Маскельер. Заявл. 26.07.66; Опубл. 26.02.68. II РЖ Химия. -1969. № 9.

89. Патент 679677 Швейцария, МКИ С 12 Р 19164. / P. Farras, J. Torroella, R. Jean-Paur. -Опубл. 31.03.92.120. Патент 446105 Японии.121. Патент 4921785 Японии.

90. Пахомова М.В., Гончарова Г.И., Лянная А.М. Молекулярно-биологическая характеристика бифидобактерий, применяемых при создании молочнокислых продуктов II Медицинские аспекты микробной экологии: Сб. науч. тр. М., 1991. - С. 28 - 33.

91. Пилуй А.Ф., Кислякова З.И., Лаппо Л.В. Питательные среды для культивирования бифидобактерий, выделенных от телят II Проблемы научного обеспечения животноводства Молдавии: Тез. докл. конф. 25 мая 1990 г. Кишинёв, 1990. - С. 98 - 99.

92. Пинегин Б.В., Мальцев В.Н., Коршунов В.М. Дисбактериозы кишечника. М.: Медицина, 1984.-143 с.

93. Питательная среда для производства жидкого концентрата бифидобактерий / М.А. Андреева, В.И. Байбаков и др. II Биотехнология. -1998. № 4. - С. 76 - 80.

94. Пиликарпова Г.А., Викторов А.Н. О биологической активности некоторых представителей нормальной анаэробной аутомикрофлоры толстого отдела кишечника здоровых лыдей II Актуальные проблемы химиотерапии бактериальных инфекций. М., 1991. - С. 510 - 511.

95. Препараты, нормализующие микрофлору кишечника, и их усовершенствование / И.Н. Блохина, М.Е. Блант и др. II Вопросы эпидемиологии и лабораторной диагностики инфекционных заболеваний: Матер, конф. Горький, 1967. - С. 53 - 55.

96. ПрийдакТ.А. Исследование процесса накопления биомассы мезофильных молочнокислых стрептококков в условиях периодического и непрерывного культивирования: Дис. канд. техн. наук: 01.01.77 / Всесоюз. науч.-исслед. ин-т молоч. пром-сти. М., 1977. -153 с.

97. Применение бифидумбактерина для нормализации биоценоза кишечника при различных заболеваниях у детей и взрослых / Г.И. Гончарова, Э.П. Козлова и др. II Тез. докл. 4-го Всеросс. съезда эпидемиологов и микробиологов. Волгоград, 1978. - С. 125 -127.

98. Применение комплекса иммунных и бактерийных препаратов беременным женщинам группы риска для направленного формирования микрофлоры кишечника новорождённых детей: Методические рекомендации. Оренбург. -1992. - 57 с.

99. Пробиотические микроорганизмы современное состояние вопроса и перспективы использования / В.А. Алёшкин, A.M. Амерханова, В.В. Поспелова, Л.В. Пожалостина II Молочная промышленность. - 2003. - № 1. - С. 59 - 61.

100. Пробиотические продукты в комплексной терапии детей с хранической неинфекционной патологией / Д.А. Воеводин, Г.Н. Розанова и др. // Молочная промышленность. 2001. - № 3. -С. 52-54.

101. Пробиотический кисломолочный продукт для школьников / Н.Ю. Эрвольдер, A.M. Шалыгина, В.И. Ганина, Л.В. Калинина II Молочная промышленность. 1999. - № 11. - С. 17 -19.

102. Продукты с нетрадиционными биологически активными добавками / А.Ф. Цыб, Р.А. Розиев и др. II Молочная промышленность. -1999. № 11. - С. 11 -13.

103. Производители «Бифилайф» лидеры молочной промышленности. Фирма «Калория» II Молочная промышленность. - 2003. - № 2. - С. 43 - 44.

104. Производство и применение бактериальных заквасок и препаратов в сыроделии / Г.Д. Перфильев, А.В. Гудков, Н.А. Щергин, Н.П. Сорокина. М.: ЦНИИТЭИММП, 1985. - 36 с. - (Сер. «Молоч. пром-сть». Обзор информ. / ЦНИИТЭИММП).

105. Профилактика колибактериоза телят штаммом-продуцентом микроцина / Н.А. Соколова, И .А. Хмель и др. II Ветеринария. -1991. № 1. - С. 24 - 25.

106. Разработка сухих сред для медицинской биотехнологии / Л.Д. Газиумарова, Р.С. Джалилова и др. II Актуальные вопросы биотехнологии: Матер, науч. конф., посвящ. 85-летию Томского НИИ вакцин и сывороток НПО «Вирион». Томск, 1991. - С. 169 -171.

107. Сафроненко Л.В., Жабовос Н.К. Селекция микроорганизмов, выделенных из нормальной микрофлоры кишечника II Научно-технический прогресс в пищевой промышленности: Тез. докл. Междунар. науч.-практ. конф. 22 24 ноября 1995 г. - Могилёв, 1995. - С. 111.

108. Семенихина В.Ф. Биология анаэробных молочнокислых палочек Lactobacterium bifidum: Дис. канд. биол. наук: 25.10.67 / Всесоюз. науч.-исслед. ин-т молоч. прм-сти. М., 1967. - 205 с.

109. Семенихина В.Ф. Биология бифидобактерий (обзор литературы) II Повышение биологической активности молочнокислых бактерий: Сб. науч. тр. / Всесоюз. науч.-исслед. ин-т молоч. прм-сти. М., 1968. - Вып. 26. - С. 69 - 78.

110. Семенихина В.Ф. Кислотообразующая и антибиотическая активность бифидобактерий II Молочная промышленность. -1967. № 3. - С. 17.

111. Семенихина В.Ф. Методика выделения и культивирования бифидобактерий II Повышение биологической активности молочнокислых бактерий: Сб. науч. тр. / Всесоюз. науч.-исслед. ин-т молоч. прм-сти. М., 1968. - Вып. 26. - С. 78 - 81.

112. Семенихина В.Ф., Рожкова И.В. Новые достижения в технологии кисломолочных продуктов II Молочная промышленность. 2002. - № 9. - С. 41 - 42.

113. Семенихина В.Ф., Рожкова И.В., Сундукова М.Б. Кисломолочные продукты нового поколения II Молочная промышленность. -1999. № 7. - С. 29 - 30.

114. Семенихина В.Ф., Сундукова М.Б. Использование бифидобактерий при выработке детских кисломолочных продуктов // Молочная промышленность. -1980. № 3. - С. 33 - 34.

115. Семенихина В.Ф., Сундукова М.Б., Хорькова Е.А. Питательная среда для накопления биомассы бифидобактерий // Молочная промышленность. -1985. № 9. - С. 12 -14.

116. Семенихина В.Ф. Типы бифидобактерий, их биологические и биохимические свойства // Повышение биологической активности молочнокислых бактерий: Сб. науч. тр. / Всесоюз. науч.-исслед. ин-т молоч. прм-сти. М„ 1970. - Вып. 27. - С. 72 - 78.

117. Семенихина В.Ф., Хорькова Е.А. Подбор среды для культивирования бифидобактерий // Тезисы 7-го съезда Всесоюзного микробиологического общества: Сборник. Алма-Ата, 1985. -Т. 4.-С. 100.

118. Сергеев В.Н. Новые виды молочных продуктов // Молочная промышленность. -1992. № 5.-С. 21-23.

119. Совместное использование антибиотиков и антибиотикоустойчивых бифидобактерий при лечении острых кишечных инфекций / 6.В. Пинегин, В.М. Коршунов и др. II Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1983. № 5. - С. 28 - 32.

120. Сохранение жизнеспособности и физиологических свойств бифидобактерий при консервировании и лиофилизации / Г.И. Новик, Н.И. Астапович, Н.Г. Кадникова, Н.Е. Рябая II Микробиология. -1998. Т. 67. - № 5. - С. 637 - 642.

121. Стоянова Л.Г., Аркадьева З.А. Сравнение способов хранениямолочнокислых бактерий II Микробиология. 2000. - Т. 69. - № 1. - С. 98 -104.

122. Сундукова М.Б. Разработка закваски бифидобактерий для производства кисломолочных продуктов: Дис. канд. техн. наук: 01.01.86 / Всесоюз. науч.-исслед. ин-т молоч. прм-сти. М., 1986.-212 с.

123. Сухой молочный продукт «Бифидолакт»: Листовка. М.: АгроНИИТЭИММП, 1987.

124. Тармакова С.С. Структурно-функциональные повреждения печени, кишечника и их коррекция фитобактериальными и бифидосодержащими средствами: Дис. докт. биол. наук: 05.11.99 / Буряте. Гос. сельскохоз. Акад. им. В.Р. Филиппова. Улан-Уде, 1999.-273 с.

125. Теория вероятностей и математическая статистика: Базовый курс с примерами и задачами / А.И. Кибзун, Е.Р. Горянкова, А.В. Наумов, А.Н. Сиротин; под ред. А.И. Кибзуна. М.: Физматлит, 2002. - 223 с.

126. Терагуши С., Кавашима Т., Кубояма М. Селективный подсчёт клеток бифидобактерий в молочных и фармацевтических продуктах II XXI Междунар. молочный конгресс: В 3 т. М., 1962. — Т.1. — Кн. 2.-С. 278.

127. Технологическая инструкция по производству сухого бактериального концентрата пробиотических культур: Утв. директором ГНУ ВНИМИ Харитоновым В.Д. 03.12.2003 II Всеросс. науч.-исслед. ин-т молоч. пром-сти. М., 2003. -14 с.

128. ТУ 9229-117-00419785-98. Концентрат бактериальный сухой бифидобактерий. Утв. 25.09.1998.

129. Технологическая инструкция по производству сухого бактериального концентрата бифидобактерий: Утв. директором ГНУ ВНИМИ Харитоновым В.Д. 25.09.1998 II Всеросс. науч.-исслед. ин-т молоч. пром-сти. М., 1998. - 9 с.

130. Тумунова С.Б. Разработка технологии производства сухого концентрата бифидобактерий: Дис. канд. техн. наук: 01.01.95 / Вост.-Сибир. Гос. технол. ун-т. Улан-Уде, 1995.-140 с. Т6.

131. ТУ 491091-87. Напитки кисломолочные «Вита» и «Угличский». Взамен ТУ 491091-84. Т1.

132. ТУ 10-02-02-789-192. Среды питательные сухие (ГМК-3) для определения бифидобактерий и пропионовокислых бактерий.

133. Фетисов Е.А. Статистические методы контроля качества молочной продукции: Справ, руководство. М.: Агропромиздат, 1985. - 80 с.

134. Формирование аллергической готовности при кишечном бактериозе у детей с патологией органов пищеварения / В.Г. Дорофейчук, J1.B. Бейер и др. II Проблемы иммунологии и аллергологии в детской гастроэнтерологии. Нижний Новгород. -1991. - С. 114 -118.

135. Хамагаева И.С., Манидарова Л.Н. Разработка технологии бифидосодержащего кисломолочного продукта с длительным сроком хранения II Пища. Экология. Человек: Матер. 2-й Междунар. науч.-техн. конф. М., 1997. - С. 18.

136. Хамагаева И.С., Столярова А.С. Лиофилизированные закваски бифидобактерий II Молочная промышленность. -1993. № 3. - С. 23.

137. Хамагаева И.С., Тумунова С.Б. Сухой концентрат бифидобактерий II Молочная промышленность. -1995. № 8. - С. 11.

138. Хамнаева Н.И., Иванова Н.Р. Кисломолочный напиток диетического и профилактического назначения II Пища. Экология. Человек: Матер. 2-й Междунар. науч.-техн. конф, М., 1997. - С. 68.

139. Характеристика полисахаридов, секретируемых Bifidobacterium adoiescentis 94 БИМ / Г.И. Новик, Н.И. Астапович, Й. Кюблер, А. Гамьян II Микробиология. 2002. - Т. 71. - № 2. С. 205 -210.

140. Хорькова Е.А. Разработка технологии кисломолочного продукта «Бифилин» для диетического питания детей раннего возраста: Дис. . канд. техн. наук: 01.01.86 / Всесоюз. науч.-исслед. ин-т молоч. пром-сти. М., 1986. -164 с.

141. Христенко И.М., Христенко О.Л., Шалыгина A.M. Производство бифидозакваски и бифидумбактерина II Молочная промышленность. -1999. № 8. - С. 30 - 31.

142. Цветков Ц.Д. Сублимационное консервирование (лиофилизация) биологических материалов //Актуальные проблемы криобиологии. Киев, 1981. - С. 428-482.

143. Цинберг М.Б., Дерябин Д.Г., Денисова И.В. Гигиеническая характеристика препаратов молочнокислых бактерий, полученных с использованием гидролизатов молочного и соевого сырья // Гигиена и санитария. 2002. - № 5. - С. 54 - 56.

144. Шаманова Г.П. Микробиологические и технологические подходы к производству ферментированных продуктов II Молочная промышленность. -1998. № 3. - С. 18 - 20.

145. Шевелёва С.А. Пробиотики, пребиотики и пробиотические продукты. Современное состояние вопроса II Вопросы питания. -1999. № 2. - С. 32 - 39.

146. Шендеров Б.А., Манвелова М.А. Функциональное питание и пробиоти.си: микроэкологические аспекты. М.: Агар, 1997. - 24 с.

147. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. В 3 т. Т. 1. Микрофлора человека и функциональное питание. М.: Гранть, 1998. - 288 с.

148. Шендеров Б. А. Микробиологическая характеристика некоторых анаэробных грамположительных, не образующих споры бактерий, обитающих в организме человека II Медицинские аспекты микробной экологии: Сб. науч. тр. М., 1991. - С. 78 - 84.

149. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора организма человека и некоторые вопросы микроэкологической токсикологии II Антибиотики и медицинская биотехнология. -1987. № 3. -С. 164-170.

150. Шлегель Х.Г. Общая микробиология. М.: Изд-во «Мир», 1972.-476 с.

151. Экспериментальный молочный центр CSLII Молочная промышленность. 2002. - № 3 - 4. -С. 180-181.

152. Экспресс-метод определения бактериальной обсеменённости молока / Л.П. Брусиловский, С.Ф. Драгунова и др. II Молочная промышленность. -1998. № 5. - С. 23 - 24.

153. Эрвольдер Н.Ю. Разработка кисломолочного продукта для питания детей школьного возраста: Дис. канд. техн. наук: 05.10.00 / Моск. Госуд. ун-т прикладной биотехнологии. М., 2000.-197 с.

154. Эрвольдер Т.М. Бактериальные препараты с бифидобактериями и методы их применения II Молочная промышленность. -1992. № 2. - С. 36 - 39.

155. Эрвольдер Т.М. Предварительная активизация лиофилизированной биомассы на развитие бифидобактерий в продуктах «Бифидок» II Молочная промышленность. 2002. - № 12, - С. 41 -42.

156. Analysis of Antitumor properties of effectors cells stimulated with a cell wall preparation (WPG) of Bifidobacterium infantis IK. Sekine, J. Ohta, M. Onishi et al. II Biological and pharmaceutical Bulletin. -1995.-Vol. 18(1).-P. 148-153.

157. Antiulcer effects of lactic acid bacteria and their cell wall polysaccharides I M. Nagaoka, S. Hashimoto, T. Watanabe et al. II Biological and pharmaceutical Bulletin. 1995. - Vol. 18. - P. 130 -135.

158. Antimutagenicity of milk cultured with lactic acid bacteria against N-Methyl-N '-Nitro-N-Nitrosoguanidine IM. Hosoda, H. Hashimoto, H. Morita & M. Chiba II J. Dairy Sc. -1992. № 75. - P. 976-981.

159. Application of L-(+)-Lactate Electrode for Clinical Analysis and Monitoring of Tissue Culture Medium IT. Tsuchida, H. Takasugi, K. Yoda et al. II Biotechnology and Bioengineering. -1985. Vol. XXVII.-P. 837-841.

160. Bacterial populations associated with different regions of the human colon wall / S.C. Croncher, A.P. Hauston, E. Bayliss Catherine, R.J. Turnen II Appl. and Envoiron. Microbiol. -1983. 45. - № 3. -P. 1025-1033.

161. Baylies Т., Paig D. Consequence of lactosemalabsorbtion Breath hydrogen excretion after milk ingestion // Gastroenterology. -1979. Vol. 76. - P. 1097 -1099.

162. Beerens H., Romond C., Went C. Influence of breast feeding on the bifid flora of the new-born intestine II Amer. s. cein. Nutr. -1980. - Vol. 33. - № 11. P. 2434 - 2439.

163. Buchanan R.E., Gibbons N.E. Bergey's Mannual of determinative Bacteriology. 8 thed. -Baltimore: Williams & Wilkins Company, 1974. -1268 p.

164. Cerna J. Nove pohledy na fermentovani melecne napoje. Vyziva hidu, 1977. - Vol. 32. - № 12. S. 178-179.

165. Characteristics of carbonated fermented milk and survival of probiotic bacteria / C.G. Vinderola, M. Gulimonde, T. Delgado et al. II International Dairy Journal. 2000. - Vol. 10. - P. 213 - 220.

166. Cheng C., Nagasawa T. Associative relation between Bifidobacteria and Lactobacillus in milk II J. Zootech. Sc. -1983. 54. - № 11. - P. 740 - 747.

167. Cheng C., Nagasawa T. Growth stimulants for Bifidobacteria produced by Lactobacillus casei II New. strateg. Improv. Hum. welfare I World conf. Anim. Tokyo. -1983.

168. Clark P.A., Martin J.H. Selection of bifidobacteria for use as dietary adjuncts in cultured dairy foods: Tolerance to simulated bile concentrations of human small intestines // Cultured Dairy Products Journal. -1994. Vol. 29. - № 3. - P. 18,20 - 21.

169. Comparison of bifidobacteria! growth-promoting activity of ultrafiltered casein hydrolyzate fractions IM. Proulx, P. Ward, S.F. Gauthier et al. II Lait. -1994. Vol. 74 - № 2. - P. 139 -152.

170. Cronan I., Gelman E. Physical properties of membrane lipids: Biological relevance and regulation II Bacteril. Rev. -1975. Vol. 39. - № 3. P. 232 - 256.

171. Crowe J., Cooper A. Cryptobiosis II Amer. Sc. -1971. Vol. 225. - № 6. - P. 30 - 36.

172. Damjanovic V. & Radulovic D. Survival of Lactobacillus bifidus after freeze-drying II Cryobiology. -1967. Vol. 4. - № 1. - P. 30-32.

173. Danmark the Danish Dairy company WINS an OSCAR II North European Dairy Journal. 1986. - № 6.-P. 189.

174. Dehnert J. Untersuchung Cber die grampositive Stuhlflora des Brustmilchkindes: I Mitteilung, Literaturubersicht // Zbl. Bact. I. Abt. Ref. -1957. Bd. 163. - S. 481 - 489.

175. Dehnert J. Untersuchung uber die grampositive Stuhlflora des Brustmilchkindes: II Mitteilung // ^ Zbl. Bact. (S. Abt. orig.). -1957. H. 169. - S. 66 - 83.

176. Detection of Bifid strains that induce Carge quantities of Ig AIH. Yasui, N. Nagaoka, A. Nike et al. II Microb. Ecol., Health and Disease. -1992. Vol. 5. - № 3. - P. 155 -162.

177. Diavag I. Intraabdominal infections. Etiology, clinical manifestations, diagnosis and treatment II Scand. J. Gastroenterol. -1983. -18. Suppl. - № 85. P. 26 - 33.

178. Die Bifiduskeime des Menschen I O.H. Braun, J. Dehnert, K. Hoffman u. a. II Dtsch. Ved. Wschr. -1964. Bd. 89. - № 35. - S. 1647 -1652.

179. Dose response colonization of faeces after oral administration of Lactobacillus case/ strain GGI M. Saxelin, S. Elo, S. Salminen & H. Vapaatalo // Microb. Ecol. Health Dis. -1991. № 4. - P. 209 -214.

180. Edmiston C.E., Avant G.R., Wilson F.A. Anaerobic bacterial populations on normal and diseased human biopsy tissue obtained at colonoscopy II Appl. and Environ. Microbiol. -1982. 43. - № 5. -P. 1173-1181.

181. Effect of Lactobacillus GG yogurt in prevention of antibiotic associated diarrhea / S. Siitonen, H. Vapaatalo, S. Salminen et a). //Ann. Med. -1990. № 22. - P. 57 - 59.

182. Enhancement of host resistance against Listeria infection by Lactobacillus casei: Efficacy of cell wall preparation of Lactobacillus casei / K. Sato, H. Saito, H. Tomioka & T. Yokokura U Microbiol Immunol. -1988. № 32. - P. 1189 -1200.

183. Enhancement of the circulating antibody secreting cell response in human diarrhea by a human Л Lactobacillus strain I M. Kaila, E. Isolauri, E. Soppi et al. II Pediatr. Res. 1992. - № 32. — P. 141 —144.

184. Fast and Reliable Organic Acid Determination in Fermented Milk Using an Enzyme-electrode Based Analyzer / F. Sechaud, S. Peguin, P.R. Coulet, G. Bardeletti II Process Biochemistry. -1989. -February.-P. 33-38.

185. Fermented milks and increased antibody responses against cholera in mice / N Portier, N.P. Boyaka, F. Bougoudogo et al. II Int. J. Immunother. -1993. IX. - P. 217 - 224.

186. Fuller R. Probiotics in man and animals II J. of Applied Bacteriology. -1989. Vol. 66. - P. 365 -378.

187. Gibson G.R., Wang X. Regulatory effect of Bifidobacteria on the growth of other colonic Bacteria II J. of Applied Bacteriology. -1994. Vol. 77. - № 4. - P. 412 - 420.

188. Gilliland S. Health and nutritional benefits from lactic acid bacteria II Farms Microb. Rev. -1990. Vol. 871. - № 1 - 2. - P. 175 -188.

189. Gomes A.M.P., Malcata F.X. Development of probiotic cheese manufactured from goat milk: response surface analysis via technological manipulation II J. Dairy Sc., 1998. Vol. 81. - № 6. - P. 1492-1507.

190. Gorbach S.L., Chang T.W. & Goldin B. Successful treatment of relapsing Clostridium difficile colitis with Lactobacillus GGII Lancet, 1987, December 26. -1987. P. 1519.

191. Greene J.D. & Klaenhammer T.R. Factors involved in adherence of lactobacilli to human caco-2 cells II Appl. Environ. Microbiol. -1994. № 60. - P. 4487 - 4494.

192. Growth-promoting factors for LMidus var. pennsylvanicus produced by the aminocarbonil reaction L-lysine and D-glucose / H. Furukawa, H. Matsuo, T. Deguchi et al. II Agric. Boil. Chem. -1968.-Vol. 32.-№5. P.617.

193. Growth response of Bifidobacterium bifidum to a hydrolytes product isolated from bovine casein I C. Kehagias, Y.C. Tao, E.M. Nikofajcik, P.M. Hansen II J. Food Sc. -1977. № 1. - P. 146 -150.

194. Hansen R. Bio-milk products containing bifidobacteria. Can easily become popular brand goods II North European Dairy Journal. -1983. № 3. - P. 61 - 64.

195. Hansen R., Switzer R., Holzer H. Effects of glucose and nitrogen source on the levels of proteinasses, peptidasses and proteinase inhibitions in yeast// Biochem. biophys. acta. -1977. Vol. 496.-№1.- P. 103-114.

196. Havenaar R., Marteau P., & Huis in't Veld J.H.J. Survival of lactobacilli strains in a dynamic computer controlled in vitro model of the gastrointestinal tract II Poster session: Lactic 94 Symposium, 7-9 September 1994. Caen. France. -1994.

197. Hayatsu H. & Hayatsu Т. Suppressing effect of Lactobacillus casei administration the urinary mutagenicity arising from ingestion of fried ground beef in the human II Cancer Lett. -1993. № 73. -P. 173-179.

198. Hayward A.C., Hale C.M., Bisset K.A. The Morphology and Relationships of Lactobacillus bifidus II J. Gen. Microbiol. -1955. Vol. 13. - № 2. - P. 282 - 294.

199. Heckly R. A brief review of lyophilization and repair in bacterial preparations II Cryobiology. -1981. Vol. 18. - № 6. - P. 592 - 597.

200. Hidaka H., Tashiro l„ Eida T. Profiliration of bifidobacteria by oligosaccharides and their useful effect on human health II Bifidobacteria microflora. 1991. - Vol. 10(1). - P. 65 - 79.

201. Hitchins A., Mc Donough F. Prophylactic and therapeutic aspects of fermented milk II Am. J. Clin. Nutr. -1989. -49. -P. 675 -684.

202. Hosono A., Wardojo R. & Otani H. Inhibitory effects of lactic acid bacteria from fermented milk on the mutagenicities of volatile nitrosamines II Agric. Biol. Chem. -1990. № 54. - P. 1639 -1643.

203. Hove H., Nordgaard-Andersen I. & Mortensen P.B. Effect of lactic acid bacteria on the intestinal production of lactate and short-chain fatty acids and the absorption of lactose II Am. J. Clin. Nutr. -1994.-№59.-P. 74 79.

204. Hunger W.f Peitersen N. New technical aspects of the preparation of starter cultures II New technologies for fermented milks: (Supplement B-Doc 217), Chapter 2. P. 20 - 31.

205. Hydrolysis of p-D-Galactosidase of Bifidobacterium breve 2031K. Sacai, T. Tachiki, H. Kumagai et al. // Agric. Biol. Chem. -1987. Vol. 51. - № 2. - P. 315 - 322.

206. Ibrachim S.A., Bezkorovainy A. Growth-promoting factors for Bifidobacterium longum II J. of Food Sc. -1994. Vol. 59. - № 1. - P. 189 -191.

207. Ibrachim S.A., Bezkorovainy A. Inhibition of Escherichia со// by Bifidobacteria II Journal of Food Protection. -1993. Vol. 56. - № 8. - P. 713 - 715.

208. Immunomodulating effects of lactic acid bacteria on mucosal and tumoral immunity II G. Perdigon, M. Medici, M.E. Bibas Bonet de Jorrat et al. // Int. J. Immunother. -1993. IX. - P. 29 - 52.

209. Immunomodulation of Human Blood Cells Following the Ingestion of Lactic Acid Bacteria I E. Shiffrin, F. Rochat, H. Linkmaster et al. // J. Dairy Sc. -1995. Vol. 78. - № 3. - P. 491 - 497.

210. Induction and activation of tumorocidal cells in vitro and in vivo by the bacterial cell wall of Bifidobacterium infantis / K. Sekine, E. Watanabe-Sekine, J. Ohta et al. II Bifidobacteria microflora. -1994.-Vol. 13.-P. 65-77.

211. Inhibition of Shigella sonnei by Lactobacillus case/and Lactobacillus acidophilus I U£. Nader de Macias, M.C. Apella, N.C. Romero et al. // J. Appl. Bacterid. -1992. № 73. - P. 407-411.

212. Ishibashi N. Shimamura S. Bifidobacteria: Research and Development in Japan II Food Technology. -1993. Vol. 47. - № 6. - P. 126 -136.

213. Isolation and characterization of the antibiotic-resistant strains of Bifidobacterium spp. I K. Miyazaki, S. Chida, K. Aikawa et al. // Bifidobacteria microflora. -1991. Vol. 10(1). - P. 33 - 41.

214. Kadooka Y., Fujiwara S., Hirota T. Effect of Bifido Cells on Mutogenic Response of spienocytes and Several Function of Phagocytes // Milchwissenschaft Milk Science International. -1991. - Vol. 46.-№10.-P. 626.

215. Kandler 0. & Weiss N. Regular, nonsporing Gram-positive rods // In Bergey manual of systematic bacteriology. Vol. 2. P.H.A. Sheath, N.S. Mair, M.E. Scharpe. - Baltimore: William and Wilkins.-1986.-P. 1208-1228.

216. Kebary K.M.K. Production, partial purification and stability of antimicrobial substances produced by Bifidobacterium bifidum Dl II Egypt J. of Dairy Sc. -1995. Vol. 23. - № 2. - P. 151 -166.

217. Югель Н.Ф. Особливосп технологи виробництва бактер1ального концентрату «БМК» для бюлопчних продуклв II Bich. аграр. науки. -1999. № 7. - С. 62 - 65.

218. Klaver F.A.M., Kingma F., Weerkamp A.N. Growth and survival of bifidobacteria in milk II Netherlands Milk and Dairy Journal. -1993. № 3 - 4. - P. 151 -164.

219. Klupsch H. Biogurt-Biogard-Saure Milchmissherzeugnisse mit optimalen Eigenschaften II Nordeuropaisk mejeri-tidsskift. -1983. Vol. 49. - № 2. - P. 29 - 32.

220. Kot E., Bezkorovainy A. Effect of Hydrogen Peroxide on the Physiology of Bifidobacterium thermophilus II J. Agric. Food Chem. -1998. Vol. 46. - P. 2921 - 2925.

221. Laboratory Wiesby Niebull Prospectus Gotteskoogstr. 40. - Niebull (GFR). -1980.

222. Lactobacillus strain GG supplementation decreases colonic hydrolytic and reductive enzyme activities in healthy female adults I W.H. Ling, R. Korpela, H. Mykkanen et al. II J. Nutr. -19943. № 124.-P. 18-23.

223. Lerche M., Reuter G. Isolierung und Differenzierung anaerober Lactobacille auf dem Darm erwachener Menschen II Zbl. Bact. I. Abt. Orig. -1961. Bd. 182. - S. 324 - 356.

224. LunderT. The determination of the configuration of lactic acid in milk// Milchwiss. -1972. № 7. -P. 227 - 230.

225. McCartney A.L, Wenzhi W. & Tannock. Molecular analysis of the composition of the bifidobacteria! and lactobacillus microflora of humans // Appl. Environ. Microbiol. № 62. - P. 4608 -4613.

226. Miller G.L., Finegold S.M. Antibacterial unsensitivity of Bifidobacterium (Lbifidus) II J. Bacterid. -1967. Vol. 93. - №1. - P. 125 -130.

227. Mishra A.K., Kuila R.K. Growth response of Bifidobacterium in semisunthetic and milk based media II Indian J. of dairy Sc. -1991. Vol. 44. - № 3. - P. 226 - 231.

228. Mishra A.K., Kuila R.K. Use of Bifidobacterium bifidum for the manufacture of bio-yogurt and fruit bioyogurt II Indian J. of dairy Sc. -1994. Vol. 47. - № 3. - P. 192 -197.

229. Mitic S., Cuperiovic M. Uniticai liofilizacije na transformaciju i digestibinost aminoxiseli na simbiosebacterija Streptococcus thermophiius u Lactobacillus bulgaricus II Hrana i iahrana. -1989. -Vol. 30.-№1.-P. 35 36.

230. Mitsuoka Т., Sega T. & Yamamoto S. Eine verbesserte Methodik der qualitativen und quantitativen Analyse der Darmflora von Menschen und Tieren // Zbl. Bacteriol. Parasitenk. (1 Abt. Orig.). -1965. -1.195. S. 455 - 469.

231. Mitsuoka T. Taxonomy and ecology of Bifidobacteria II Bifidobacteria microflora. 1984. - Vol. 3(1).-P. 11-28.

232. Modulation of a Specific Humoral Immune-Response and Changes in Intestinal Flora Mediated Through Fermented Milk Intake / H. Linkmaster, F. Pochat, K. Saudan et al. // Fem. Immunol, and Med. Microb. -1994. Vol. 10. - P. 55 - 63.

233. Moineau S. & Goulet G. Effect of feeding fermented milks on the pulmonary macrophage activity in mice II Milchwiss. -1991. № 46. - P. 551 - 554.

234. Morphological changes of Lactobacillus bifidus var. perinsylvanicus produced by a cell wall precursor IM. Geick, T. Sail, F. Zilliken et al. II Biochem. et Biophus. Acto. -1960. Vol. 37. - P. 361 -363.

235. Nikolajcik E.M., Jao Y.C., Hansen P.M.T. Effect of heat on biological activity of N-acetil-glucosamine //J. Dairy Sc. -1973. Vol. 56. - № 5. - P. 631.

236. Nomoto K. & Yokokura T. Prevention of 5-fluorouracil-induced infection with indigenous Escherichia coli in tumor-bearing mice by nonspecific immunostimulation II Can. J. Microbiol. -1992. -№38.-P. 774-778.

237. Nord C.E., Kager L The normal flora of the gastrointestinal tract II Neth. J. Med. -1984. Vol. 27.-P. 249-252.

238. Nuet G., Romand C., Beerans H. Contribution of Bifidobacterium in the faecal flora of breast-fed and bottle-fed babies II Reproduction, Nutrition, Development. 1980. - Vol. 20. - № 6. - P. 1679 -1684.

239. Orla-Jensen S.O. La classification des bacteries lactiques II Lait. -1924. № 4. - P. 468 - 474.

240. Orla-Jensen S.O., Orla-Jensen A.D., Winther 0. Bacterium bifidum und Thermobacterium intestinal II Zbl. Bact. Orig. II. Abt. -1939. Bd. 93. - S. 321 - 343.

241. Orla-Jensen S.O. The lactic acid bacteria // Report of the Danish Science Academy. -1919. № 2.-P. 79-197.

242. Osborne R.I., Chubb L.J. Inhibition of the growth of cheese starter by ammonium lactate IIXIX Int. Dairy Congress. -1974. IE. - P. 417 - 418.

243. Pat. German Federal Republic № 1.949.886(1972). Self souring dried milk products inoculated with microorganisms / Schuler R., Hinter-Waldner R. DSA. -1973. - Vol. 35. - P. 225.

244. Peitersen N. Probiotic starter cultures for food products II «Proceedings of Lactic 91». Caen, France, for Chr. Hansen's Laboratorium, Danemark AIS. -1991. - P. 13 -19.

245. Perdigon G., Alvarez S. & Pesce de Ruiz Holgado A. Immunoadjuvant activity of oral Lactobacillus casei: influence of dose on the secretary immune response and protective capacity in intestinal infections II J. Dairy Res. -1991. № 58. - P. 485 - 496.

246. Petschow B.W., Talbott R.D. Growth promotion of Bifidobacterium by whey and casein fraction from human and bovine milk II J. Clin. Microbiol. -1990. Vol. 28. - № 2. - P. 287 - 292.

247. Phenotupic Differentiation of Bifidobacteria of Human and Animal origin IF. Gavini, A. Pourcher, G. Neut et al. II International J. of Systematic Bacteriol. -1991. Vol. 41. - № 4. - P. 548 - 557.

248. Pont E.C., Holloway C.L. A new approach to the production of cheese starter II Austr. J. Dairy Technol. -1968. Vol. 23. - № 1. - P. 22 - 29.

249. Pope S., Tamarelli R.M., Gyorgy F. Bifidus factor. Isolation of ethye-N-acetyl-p-D-glycosaminide from Aspergillus fermentations II Arch's Biochem., Biophys. -1956. Vol. 68. - P. 362 - 366.

250. Poupard J.A., Husain I., Norris R.F. Biology of the bifidobacteria II Bacteriol. Rev. 1973. - Vol. 37.-№32.-P. 136-165.

251. Prevention of gastrointestinal infection using immunobiological methods with milk fermented with Lactobacillus casei and Lactobacillus acidophilus IIG. Perdigon, M.E. Nader de Macias, S. Alvarez et al. II J. Dairy Res. -1990. № 57. - P. 255 - 264.

252. Prevention of infantile diarrhea by fermented milk / S. Gonzalez, G. Albarracin, M. Locascio de Ruiz Pasce et al. II Microb. Alim. Nutr. -1990. № 8. - P. 349 - 354.

253. Prevention of travellers' diarrhea by Lactobacillus GG / P.J. Oksanen, S. Salminen, M. Saxelin et al. II Ann. Med. -1990. № 22. - P. 53 - 56.

254. Production of crescenza cheese by incorporation of bifidobacteria / M. Gobbetti, A. Corsetti, E. Smacchi et al. // J. Dairy Sc. -1998. Vol. 81. - № 1. - P. 37 - 47.

255. Production of probiotic cheese (Cheddar-like cheese) using enriched cream fermented by Bifidobacterium infantislA. Daigle, D. Roy, G. Belanger, J.C. Vuillemard II J. Dairy Sc. -1999. Vol. 82.-№ 6.-P. 1081-1091.

256. Ranuir O., Weiss N. In: Bergey's Manual of Systemic Bacteria. Baltimore: MD «Williams and Wilkins» Company, 1986. - № 2. - P.1208 -1234.

257. Rasic J.L. Culture media for detection and enumeration of bifidobacteria in fermented milk products II Bulletin of the International Dairy Federation. -1990. № 252. - P. 24 - 34.

258. Rasic J.L., Kurmann J.A. Bifidobacteria and their role: Microbiological, Nutritional-Physiological, Medical and Technological Aspects and Bibliography. Ed. Birkhauser, Basel, Boston, Stuttgart, 1983.-295 p.

259. Renner E. Role of cultured and culture-containing dairy foods in health. II In: International Dairy Federal 1987. Cultured Dairy Products in Human Nutrition Bull of the IDF. -1987. - № 1995. - P. 104-109.

260. Resnick I.O., Kevin M.A. Quantitative procedure for enumeration of bifidobacteria II Appl. and Environ. Microbiol. -1981. Vol. 42. - № 3. - P. 428 - 432.

261. Reuter G. Vergleichende Untersuchungen uber die Bifidus-flora im Sauglings- und Erwachsenstuhe II Ibid. Zbl. Bact. I Abt. Orig. -1963. Bd. 191. - № 1. - S. 486 - 509.

262. Ricerche sull' impiege in corso di trattamento Antibiotico di Bifidobacterium bifidum e Lactobacillus acidophilus antibiotico resistente / G. Braca, E. Salvaggio, E. Manzara & F.M. Pavne // Clin. ter. -1979. Vol. 90. - № 6. - P. 565 - 578.*

263. Roberfroid M.B., Van Loo J.A., Gibson G.R. The bifidogenic nature of chicory inulin and its hydrolysis products II J. Nutr. -1998. Vol. 128. - № 1. - P. 11 -19.

264. Roy D. Bifidobacteria: friends in your food II Alimentich. -1992. Vol. 5. - № 2. - P. 14 -17.

265. Roy D., Dussuult F., Ward P. Growth requirements of Bifidobacterium strains in milk II Milchwissenschaft. -1990. Vol. 45. - № 8. - P. 500 - 502.

266. Roy D., Mainville I., Mondou F. Selective enumeration and survival of bifidobacteria in fresh cheese II Intern. Dairy J. -1997. Vol. 7. - № 12. - P. 785 - 793.

267. Salama F.M.M. Chemical and organoleptical properties of biogarde-like product made from lactose-hydrolyzed milk II Egypt. J. Dairy Sc. -1993. № 2. - P. 274 - 282.

268. Salama F.M.M., Hassan F.A.M. Manufacture of new yogurt-like products II Egypt. J. Dairy Sc. -1994.-Vol. 22. -№1.- P. 31 -38.

269. Saloff-Coste C.J. Bifidobacteria II Danone World Newsletter. November. - 1997. - № 12. - P. 2 -6.

270. Saloff-Coste C.J. Lactobacillus casei II Danone World Newsletter. January. -1995. - № 7. - P. 2-7.

271. Sanders M.E. Effect of consumption of lactic cultures on human health II Adv. Food Nutr. Res. -1993.-№37.-P. 67-130.

272. Sato K. Enhancement of host resistance against Listeria infection by Lactobacillus casei: role of macrophages II Infect. Immun. -1984. № 44. - P. 445 - 451.

273. Sato K., Saito H. & Tomioka H. Enhancement of host resistance against Listeria infection by Lactobacillus casei: activation of liver macrophages and peritoneal macrophages by Lactobacillus casei II Microbiol. Immunol. -1988. № 32. - P. 689 - 698.

274. Schacht E., Syrazinski A. Progurt a new-cultured product. Its manufacturing technology and dietetic value II Ind. Lechera. -1975. № 646. - P. 9 -11.

275. Schuler-Malyoth R., Ruppert A., Muller F. The microorganisms of the bifidus culture in the dairy plant II Milchwissenschaft. -1968. -1.23. H. 9. - S. 554 -558.

276. Sepp E., Mikelsaar M. & Salminen 3. Effect of administration of Lactobacillus casei strain GG on the gastrointestinal microbiota of newborns II Microb. Ecol. Health Dis. -1993. № 6. - P. 309 - 314.

277. Shakeel A., Thompkinson D.K. Manufacture of fruit flavored filled bio yogurt II Indian J. of Dairy Sc. -1994. Vol. 47. - № 8. - P. 698 - 701.

278. Singer S. The molecular organization of membranes II Ann. Rev. Biochem. -1974. Vol. 43. -P. 805-833.

279. Smard J.B., Pillidge C.J., Garman S.H. Growth of lactic acid bacteria and bifidobacteria on lactose and lactose-related mono-, die- and phospho-0-galactosidase II J. Dairy Res. 1993. - Vol. 60.-№4.-P. 557-568.

280. Solis Pereyra B. & Lemonnier D. Induction of human cytokines by bacteria used in dairy foods // Nutr. Res. -1993. -№ 13. P. 1127 -1140.

281. Steel K., Ross H. Survival of freeze-dried Bacterial cultures // J. Appl. Bacteriol. 1969. - Vol. 26. - № 3. - P. 370-375.

282. Strahm W.f Eberhard P. Savermilk mit Bifidobakterien // Schweizerische Milchzeitung. 1992. -V. 118.-№26.-S. 3-4.

283. Studies on the effect of the fermented milk by the Lactobacilli on the human health / K. Hamada, Y. Wakai, T. Kitagawa, K. Uchida & H. Chiba II In the summary of reports on Yakult, Tokyo: Yakult Honsha Co., LTD. -1971. P. 53 - 56.

284. Sundman V.f Bjorksten K.f Cyllenberg H.G. Morphology of the Bifid Bacteria I Organisms Previously Incorrectly Designated Lactobacillus bifidus (and Some related Genera). II J. Gen. Microbiol. -1959. Vol. 21. - № 2. - P. 371 - 384.

285. Survival of Lactobacillus species (strain GG) in human gastrointestinal tract / B.R. Goldin, S.L. Gorbach, M. Saxelin, S. Barakat, L. Gualtieri & S. Salminen II Dig. Dis. Sc. -1992. № 37. - P. 121 -128.

286. Susceptibility of anaerobic bacteria to a new semisynthetic, T-1220, and related drugs / T. Chida, A. Ishizu, K. Fukuda, R. Nakaya II J. Clin. Exper. Med. (Tokyo). -1977. № 101. - P. 889 - 891.

287. Suzuki Т., Itoh К., Kaneko T. Inhibition of bacterial translocation from gastrointestinal tract of mice by oral administration of a culture condensate of Bifidobacterium bifidum II J. Vet. Med. Sc. -1997.-Vol. 59(8).-P. 665-669.

288. Tamime A.Y., Marshall V.M.E., Robinson R.K. Microbiological and technological aspects of milks fermented by bifidobacteria// J. of Dairy Res. -1995. Vol. 62. - P. 151 -187.

289. Tanaka R., Mutai M. Improved medium for selective isolation and enumeration of Bifidobacterium II Appl. Environ. Microbiol. -1980. Vol. 40. - P. 866 - 869.

290. Tereguchi S., Kawashima Т., Kiboyama M. Test tool method for counting bifidobacteria in commercial milk products and pharmaceutical bacterial products II J. of Food Hygienic Society of Japan. -1982. Vol. 23. - № 1. - P. 39 - 44.

291. The nutrition of variants of Lactobacillus bifidus I R.M. Tomarelli, R.F. Norris, P. Gyorgy et al. II J. Biol. Chem. -1949. Vol. 181. - P. 879 - 888.

292. The isolation and cultivation of Lactobacillus bifidus: a comparison of branched and unbranched strains / R.T. Norris, T. Flanders, R.M. Tomarelli et al. II J. Bact. -1950. Vol. 60. - № 6. - P. 681 -696.

293. Tissier H. Recherches sur la flora intestinal des nourriscons (Etat normal et pathologique) II Thesis, Univ, of Paris (med). Ed. George Carri et C. Naud, Paris, France. -1900. - 253 p.

294. Topley H.L., Wilson G.S. Principles of bacteriology and immunity Lactobacillus bifidus. London, 4 edition. -1955. - Vol. 1. - P. 857 - 871.

295. Vinderola C.G., Reinheimer J.A. Culture media for the enumeration of Bifidobacterium bifidum and Lactobacillus acidophilus in the presence of yogurt bacteria II Intern. Dairy J. 1999. - Vol. 9. -P. 497-505.

296. Ventling B.L., Mistry V.V. Growth and activity of bifidobacteria in ultrafiltered milk II J. of Dairy Sc. -1991. № 74 (Supplement 1). - P. 82.

297. Ventling B.L., Mistry V.V. Growth characteristics of Bifidobacteria in ultrafiltered milk II J. of Dairy Sc. -1993. Vol. 76. - № 4. - 3.962 - 971.

298. Weiss E., Rettger L.E. Lactobacillus bifidus IN. Bact. -1934. Vol. 28. - P. 501 - 521.

299. Werner H., Seelinger H.P.K. Vergleichende Untersuchungen an bifidus-Stammen verschidener Herkunft II Pathology et Microbiol. I Basel. -1964. Vol. 27. - P. 202 - 215.

300. Yazawa K.K., Tamura Z. Oligosaccharides and polysaccharides specifically utilizable by bifidobacteria // Chem. Pharm. Bull. (Tokyo). -1978. Vol. 26. - № 11. - P. 3306 - 3311.