автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.04, диссертация на тему:Разработка метионинобогащенных препаратов из гидролизованного пера птицы

На правах рукописи

/1

СИВОЛОЦКАЯ Елена Владимировна

РАЗРАБОТКА МЕТИОНИНОБОГАЩЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ ИЗ ГИДРОЛИЗОВАННОГО ПЕРА ПТИЦЫ

Специальность 05.18.04 - Технология мясных, молочных, рыбных

продуктов и холодильных производств 05.18.07 - Биотехнология пищевых продуктов

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата технических I

Воронеж - 2007

003163015

Работа выполнена на кафедре технологии мяса и мясных продует ов ГОУВПО Воронежской государственной технологической академии

Научный руководитель: Заслуженный деятель науки РФ,

доктор технических наук, профессор

Ангипова Людмила Васильевна

Официальные оппоненты;

доктор биологических наук, профессор

Ковалева Тамара Андреевна; кандидат технических наук, доцент

Черняева Людмила Алексеевна

Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности

Защита состоится «14» ноября 2007 г 14 часов на заседании диссертационного совета Д 212 035 04 при Воронежской государственной технологической академии по адресу 394000, Воронеж, пр-т Революции, д 19, ауд 035

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВГТА Автореферат разослан «12» октября 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета ^А Глотова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность работы. Современная мясная промышленность охватывает решение целого ряда актуальных задач, прежде всего связанных с восполнением недостатка пищевого и кормового белка в мировом производстве, разработкой и внедрением способов рационального и максимального использования вторичного сырья переработки скота, птицы и мяса, в том числе промышленных кератинсодержащих продуктов Привлекательность их состоит, прежде всего, в полноценности аминокислотного состава белков, массовая доля которых находится в пределах 70-98 % Однако, сдерживающим фактором является низкая перевариваемость и усвоение, связанное со специфической упрочненной структурой и наличием значительного числа межцепочечных дисульфидных связей, образованных серусодержащими аминокислотами

Рост объемов производства птицеперерабатывающей промышленности и устойчивая тенденция ее дальнейшего развития в мире, ставит задачу масштабной переработки пера Остроту проблеме придает то, что традиционные направления его использования свернуты, материалы заменены синтетическими, увеличилась массовая доля малоценного сырья при переработке птицы, непригодного для производства перо-пуховых изделий Практическое отсутствие производственных мощностей по переработке кератиновых отходов гидротермическим, химическим и биотехнологическими способами, слабая востребованность этого белкового сырья отечественной комбикормовой промышленностью из-за низкой усвояемости, сложившийся стереотип в оценке перспектив применения на кормовые, пищевые и специальные цели, приводит к накоплению значительных объемов пера и ухудшению экологической напряженности

Проблемой рационального использования пера занимались многие отечественные и зарубежные ученые, в том числе Волик В Г, Жеребцов Н А , Антипова Л В , Ильина Н М , Насонова Л.В , Шамханов Ч Ю , Полянских С В и др Однако разработанные способы требуют совершенствования по обеспечению максимальной трансформации кератинов в усвояемую форму, особенно по получению биологически активных ингредиентов, например метионина

Метионин и другие серусодержащие аминокислоты необходимы в рационах птицы, особенно в период роста, в то же время именно эти аминокислоты превалируют в составе белков пера птиц. В частности метионин служит не только источником серы, но и участвует в регуляции жирового и белкового обмена, участвует в биосинтезе серина, цистина, холина, он является необходимым компонентом для роста и размножения эритроцитов, вместе с цистеином и витамином А участвует в образовании пера птицы, а также препятствует жировому перерождению печени

Учитывая важность этой аминокислоты, в настоящее время разработаны различные методы получения синтетического ОЬ-метионина Однако получение природного метионина - весьма привлекательная перспектива Очевидно, обоснование и разработка рекомендаций по получению концентратов метионина способствует организации отечественного

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Введение. Обоснована актуальность темы диссертационной работы, ее научно-практическое значение

Глава I Литературный обзор. Проведен обзор данных научно-технической литературы, касающейся свойств кератинов побочных продуктов переработки животных и птиц Приведен опыт переработки перо-пухового сырья Охарактеризована роль метионина в организме птицы и опыт получения метионинобогащенных препаратов

На основании проведенного исследования сформулированы цель и задачи диссертационного исследования

Экспериментальная часть

Глава II. Объекты и методы исследования. В соответствии с целью и задачами работы объектами исследования служили перо сухопутной птицы, полученное в условиях ООО «СХП ППХ Заброденское» (г Калач Воронежской области) при переработке кур-несушек

Экспериментальные исследования проводились в условиях НИЛ кафедры технологии мяса и мясных продуктов ВГТА, вивария и токсикологической лаборатории Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии (г Воронеж), лабораторий Всероссийского научно-исследовательского института комбикормовой промышленности, а также учебно-методического центра фармакологии, токсикологии и экологии ФВМ Воронежского ГАУ им Глинки В ходе экспериментальных исследований использовали физико-химические, биологические и биохимические методы исследования, а также методы математической статистики, оптимизации и программирования

Анализ белков и белковых веществ осуществляли биуретовым методом, методом Кьельдаля, определение суммарных белков, пептидов и аминокислот вели методом последовательного осаждения веществ, аминный азот - формольным титрованием

Определение аминокислотного состава проводили на автоматическом аминокислотном аминоанализаторе ААА-Т 339 (Чехия)

Фракционный состав и молекулярную массу белков определяли на приборе вертикального электрофореза (УЕ-1М, ООО «Биоклон») в пластинах полиакрштамидного геля размерами 1,0x130x124 мм при + 21 °С в системе, описанной Дэвисом Содержание метионина определяем по методу Салливана-Мак-Карти

Определение растворимости гидролизата проводили методом высушивания сухого остатка Величину рН растворов гидролизатов определяли потенциометрическим методом на универсальном иономегре рН-150М Общий химический состав - традиционными методами

Оценку безвредности проводили на теплокровных животных в соответствии с рекомендациями Химико-токсикологические исследования включали изучение острой токсичности, исследование токсикометрических показателей, исследование аллергенных и кожнорезорбтивного действия на

кроликах методом коньюктивиальных проб и на морских свинках путем накожных аппликаций

При обосновании рецептур комбикормов использовали программу схйесв, разработанную ВНИИ комбикормовой промышленности Биологическое действие препарата проверяли на курах несушках в соответствии с рекомендациями

Обработку экспериментальных данных проводили с привлечением методов математической статистики

Глава III. Обоснование выбора и условий получения источника метионина на основе гидролизата кератина куриного пера.

При промышленной переработке пера весьма важный фактор сбор и сортировка пера, которые являются достаточно трудоемкими процессами Для решения вопроса о необходимости и целесообразности сортировки пера, проведен анализ общих аминокислот и метионина, входящих в белки пера различных видов Результаты исследований приведены в табл 1

Из данных табл 1 видно, что, несмотря на некоторые отличия в содержании суммарных и отдельных аминокислот, содержание метионина остается постоянным не зависимо от вида пера В связи с этим при переработке пера для получения метионина предварительная сортировка не имеет практического значения, что упрощает технологическую цепочку традиционной схемы

Таблица 1 - Аминокислотный состав белков пера птицы(%)

Аминокислота Вид пера

крупное мелкое подкрылок

Аспарагиновая кислота 6,634 6,018 6,534

Треонин 4,532 9,839 4,5438

Серин 9,098 3,624 3,101

Глутаминовая кислота 11,624 11,224 10,839

Пролин 3,202 3,5954 3,210

Цистин 0,908 0,818 0,874

Глицин 3,543 4,234 3,604

Алании 5,111 5,218 4,998

Валин 6,209 5,534 5,831

Метионин 1,112 1,118 1,115

Изолейцин 2,835 3,000 2,732

Лейцин 6,834 6,829 6,728

Тирозин 0,718 0,408 0,702

Фенилаланин 4,034 4,194 4,104

Гистидин 5,233 3,283 5,109

Лизин 5,771 5,991 5,681

МН3 1,419 1,523 1,508

Аргинин 6,400 5,539 6,304

Сумма 79,217 75,929 77,512

В соответствии с известными технологическими схемами, в лабораторных условиях получены экспериментальные образцы различных гидролизатов и проанализированы на содержание аминвого азота, указывающего на наличие суммарных фракции свободных аминокислот и пептидов.

Ферментативный гидролизат кератина пера получали в соответствии с рекомендациями проф. Шамханова Ч.Ю. (2005 г.) при применении ферментативного препарата «Савиназа» (фирма- производитель «Ново-Нордиск», Дания).

В ходе экспериментальных исследований перо-пуховое сырье очищали от загрязнений, промывали, измельчали. Предварительную обработку проводили в автоклаве под давлением 0,2 МПа в течение 2,0 - 3,0 ч. В качестве восстановителя использовали сульфит натрия, который добавляли в количестве 0,5 % к массе сырья. После охлаждения смеси ферментативный гидролиз проводили при оптимальных условиях действия: температуре 45-50 градусов, рН = 7,5-7,8 в течение 5,5 -6 ч. Полученный осадок отделяли сепарированием, надосадочную жидкость упаривали в течение 12 ч при температуре 60 градусов и давлении 0,03-0,04 МПа, а затем сушили на распылительной сушилке до концентрации сухих веществ 2-5 %.

Результаты приведены на рис. 1.

Количество

аминного азота,

%

□ Гидротермический @ Щелочной Ш Ферментативный ^ Кислотный

Рис. 1 — Содержание аминного азота в гидролизатах пера На рисунке видно, что ферментативный способ дает глубокую деструкцию с максимальным выходом пептидов и аминокислот. Общий химический состав гидролизатов представлен в табл. 2.

Таблица 2 - Химический состав продуктов

Наименование гидролизатов Массовая % доля,

Белка, мг/см3 влаги жира золы

Щелочной 4,1 86,4 0,050 1,95

Кислотный 4,2 86,7 0,047 1,85

Гидротермический 3,5 87,3 0,053 1.83

Ферментативный 4,4 85,6 0,045 1,97

Способы гидролиза

Полученные данные подтверждают преимущества ферментативного гидролиза как способа, максимально сохраняющего белковые вещества в процессе обработки пера

Ферментативный гидролизат пера, полученный в лабораторных условиях, характерен составом (%) углеводы - 0,1, аминокислоты - 4,9, пептиды - 14,8, нерастворимый белок - 20,9, растворимый белок - 59,3

С целью совершенствования базовой технологии ферментативного гидролиза пера и замены импортного препарата на препараты отечественного производства исследовали эффект деструкции кератина пера, обработанного в соответствии со схемой сульфитом натрия при автоклавировании Использовали препараты протеолитического действия в соответствии с оптимальными значениями рН и температуры, а также их композиции

В ходе экспериментальных исследований установлено, что все ферментные системы применимы для растворения пера Однако коллагеназа, пепсин, протосубтилин и их смеси оказались наиболее предпочтительными в деструкции кератина

Состав свободный аминокислот - отправная точка в определении направления использования гидролизатов Для оценки перспективности использования гидролизатов в качестве источника метионина определяли аминокислотный состав входящих белковых веществ Данные представлены в табл 3

Таблица 3 - Аминокислотный состав гидролизатов пера птицы

Наименование аминокислоты Массовая доля, %

кислотный щелочной гидротермический ферментативный

Незаменимые аминокислоты

Метионин 0,110 0,015 0,132 0,157

Треонин ОД 54 0,078 0,280 0,107

Фенил ал анин 0,408 0,102 0,472 0,589

Изолейцин 0,151 0,006 0,154 0,250

Лизин 0,202 0,217 0,297 0,333

Триптофан 0,213 0,067 0,576 0,229

Валин 0,309 0,303 0,504 0,608

Лейцин 0,324 0,014 0,430 0,536

Заменимые аминокислоты

Аспарагиновая кислота 0,213 0,067 0,576 0,229

Цистеин 0,104 - 0,110 0,107

Тирозин 0,08 0,027 0,109 0,116

Аргинин 0,226 0,189 0,375 0,315

Глицин 0,326 0,102 0,110 0,406

Пролин 0,357 0,475 0,532 0,343

Гистидин 0,309 0,303 0,504 0,608

Алании 0,324 0,014 0,430 0,536

Серин 0,159 0,138 0,288 0,147

Глутаминовая кислота 1,858 0,586 1,414 3,617

Содержание аминокислот 5,682 3,857 6,929 8,474

Содержание пептидов и аминокислот, мкг/см3 893 684 1008 1104

Экспериментальные данные показывают, что максимально метионин сохраняется при использовании ферментативного гидролизата Весьма важно, что общее количество свободных аминокислот также больше

Полученные образцы гидролизатов подвергали электрофоретическим исследования на приборе VE-1M (ООО «Биоклон»)

Данный прибор предназначен для электрофоретического разделения белков в полиакриламидных и агарозных гелях В качестве маркеров использовали кристаллические белки с молекулярными массами в диапазоне 40,0-330,0 КДа

Как показали результаты электрофореза, картина проявленного геля представляет гетерогенную систему белковых веществ различной молекулярной массы, находящейся в исследуемом диапазоне, что составляет менее 120 аминокислотных остатков в белковой цепочке, с наличием нечетких, смазанных полос, увеличивающих интенсивность окраски в катодной части геля

Параметр Rf (электрофоретическая подвижность), характеризующий подвижность полипептидов в геле определяли как частное расстояний, пройденных анализируемым полипептидом и фронтом

Зафиксировано увеличение интенсивности полос, соответствующих полипептидам с молекулярной массой от 100 до 300 кДа Оценка молекулярной массы для этих полипептидов, сделанная с помощью калибровки геля по подвижности маркеров, дает массы 300,0 кДа, 119,5 кДа, 119,0 кДа, соответственно При этом наличие и интенсивность полос зависит от применяемой системы ферментов В случае пепсина полосы были четкими, что свидетельствовало о наличие полипептидных фракций и неполном гидролизе белков, размытые и нечеткие линии наблюдались в случае базовой технологии, щелочного и кислотного гидролиза Наилучшим был эффект при использовании композиций коллагеназа-протосубтилин-пепсин, когда полос, свидетельствующих о наличие полипептидов не проявилось

Из данных вышеприведенных таблиц видно, что в белковых гидролизатах содержится большое количество аминокислот Гидролизат, полученный ферментативным способом, отличается наибольшим содержанием аминокислот, в том числе серусодержащих

Хроматографический анализ показал, что ферментативные гидролизаты с применением композиций отечественных препаратов по уровню деструкции близки, но отличаются аминокислотным составом, как видно из табл 4

Применительно к получению метионина наиболее предпочтительно использование сочетание ферментов коллагеназа- пепсин (11) или коллагеназа - протосубтилин - пепсин (111), которые дают лучший эффект деструкции по сравнению с базовой технологической схемой

/О

Аминокислоты Коллагеназ а Ги Пепсин дролизаты Коллагеназ а - пепсин Коллагеназа-протосубтилин - пепсин

Незаменимые аминокислоты

Метионин 0,144 0,139 0,145 0,199

Треонин 0,284 0,289 0,304 0,319

Фенилаланин 0,400 0,412 0,415 0,421

Лейцин 0,199 0,139 0,144 0,145

Изолейцин 0,654 0,659 0,718 0,724

Триптофан 0,473 0,484 0,513 0,521

Валин 0,288 0,289 0,335 0, 0,145339

Лизин 0,269 0,275 0,298 0,315

Заменимые аминокислоты

Лейцин 0,404 0,423 0,441 0,464

Тирозин 0,088 0,101 0,111 0,116

Цистин 0,139 0,138 0,202 0,210

Цистеин 0,271 0,293 0,302 0,315

Гистидин 0,289 0,295 0,303 0,309

Аргинин 0,381 0,396 0,414 0,429

Глава IV. Получение и свойства метионинобогащенного препарата

Учитывая значение серусодержащих компонентов в рационах кормления птиц, в современной практике известно получение метионин обогащенных препаратов различными методами и способами Известно использование хроматографических методов разделения смеси аминокислот Однако они достаточно продолжительны, дорогостоящие, требуют сложной процедуры организации процесса с использованием дорогостоящих и токсичных реактивов, для промышленного применения они мало пригодны

Представляло интерес разработка простого и применимого в промышленности способа на основе физико-химических свойств веществ, в частности, теплоты растворения

Растворение — сложный физико-химический процесс Разрушение структуры растворяемого вещества и распределение его частиц между молекулами растворителя — это физический процесс Одновременно происходит взаимодействие молекул растворителя с частицами растворенного вещества, т е химический процесс В результате этого взаимодействия образуются сольваты.

Сольваты - продукты переменного состава, которые, как известно, образуются при химическом взаимодействии частиц растворенного вещества с молекулами растворителя

Калориметрический метод изучения химических процессов широко применяется в практике научных исследований Этот метод позволяет с высокой точностью определить величину и знак теплового эффекта, изучить

//

кинетику процесса, сделать выводы о его механизме

Ионообменные процессы сопровождаются незначительными величинами энергетических эффектов, которые к тому же растянуты во времени При этом очень важно избежать влияния помех, вызванных возможными температурными колебаниями окружающей среды

Измерение тепловых эффектов, сопровождающих процесс ионного обмена, представляет интерес для выяснения энергетики, установления механизма и для расчета кинетики рассматриваемого явления

Для измерения малых количеств тепла или малых тепловых мощностей, выделяемых или поглощаемых исследуемыми объектами, применяют приборы, которые принято называть микрокалориметрами

Исследуемый объект, тепловой процесс которого требуется измерить при постоянной температуре, размещают в одной из рабочих ячеек теплопроводящего дифференциального микрокалориметра МИД-200 Рабочие ячейки окружены термоэлектрическими тепломерами Тепломеры двух ячеек включены навстречу друг другу

При выделении в ячейке с исследуемым объектом тепла в ядро микрокалориметра устремляется тепловой поток через тепломеры, на которых при этом возникает перепад температуры, преобразующийся в свою очередь, в соответствии с эффектом Зеебака в термоэлектродвижущую силу Величина последней пропорциональна проходящему тепловому потоку, она регистрируется измерительными приборами - компаратором или вольтамперметром Из градуировочного графика (калибровки) предварительно определяют чувствительность ячеек Высокая термостабильность микрокалориметра позволяет проводить исследование очень малых тепловых эффектов Интегрирование калориметрического сигнала позволяет определить выделившееся количество теплоты за определенное время, мгновенное значение калориметрического сигнала выражает мощность и интенсивность обмена Значение калориметрического сигнала в установившемся режиме в случае постоянно действующего теплового потока позволяет определить величину этого теплового потока Интегрирование калориметрического сигнала производится с помощью цифрового интегратора или графическим способом по ленте записи калориметрического сигнала на потенциометре

Рабочая и сравнительная ячейки калориметра помещены в термостатируемый блок, состоящий из медного ядра, по наружной поверхности которого в керамических бусах уложен нагреватель ядра Ядро расположено в герметичной медной оболочке Воздушное пространство между оболочкой и кожухом заполнено стекловатой, выполняющей роль теплоизоляции Кожух подвешен в цилиндрическом корпусе Корпус с крышками выполняет роль рубашки Термостатирование ядра обеспечивается автоматическим поддержанием заданной температуры на рубашке, охватывающей со всех сторон ядро

В калориметре предусмотрена система качания ядра вместе с ячейками на 40°, 60°, 90°, 120° Это позволяет производить перемешивание реакционной системы без дополнительного ввода в нее мешалки

Исследовалась теплота растворения кристаллического метионина

массовой концентрацией 0,157%. Данную фракцию получали путем замораживания объекта при температуре - 18°С и далее отепляли, определяя теплоту растворения и оценивая количественно переход метионина в растворенную форму. На основании полученных данных, нами была построена кривая зависимости растворимости аминокислоты от температуры (рис. 2)

На рисунке видно, что наибольшее выделение метионина отмечено в области -8-6 градусов С.

Проведенные исследования послужили основой для разработки оригинального способа и технологии получения концентрата метионина.

КоШ5етрйцШ|,

1,3 >Д 1,0 0.9 0,8 0,7 0.6 0.5 0,4

0.2

ОД -------

-ч--——-1---—■-:---------—:—---------------------------*

-Н) -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3 -2 -! 0 1 2 ? 4 5 6 7 8 9 10 И I, "С

Рисунок 2. - Кривая зависимости растворимости метионина от температуры

С целью получения препаратов метионина, гидролизат пера после сепарирования и (или) фильтрации направляют на глубокое замораживание при температуре (-25) - (-30) °С, а затем постепенно отепляя замороженный продукт при температуре (-7) °С осуществляют сбор выделившейся фракции. Полученную фракцию концентрата метионина направляют на фасовку и упаковку или сушку, фасовку и упаковку.

Анализ химического состава полученного белкового гидролизата из кератинсодержащего сырья подтверждает высокую массовую долю белка -78,03 % и выход препарата - до 72 %. Конечный продукт характеризуется полным набором незаменимых аминокислот. Аминокислотный скор составляет: метеонин+цистеин-190,3 %, валин-138,9 %, лейцин-105,6 %, треонин-99 %, изолейцин-97,9 %, лизин-78 %, фенилаланин+тирозин-67,8 %, триптофан-67,4 %. Именно эти свойства дают основания для широкого многоотраслевого применения.

Разработанная технологическая схема представлена на рисунке 3.

/

/ \ / \

\

у

х

X

х

Упаковка, отправка на хранение

Рис 3 - Технологическая схема получения метионинобогащенного кератинового гидролизата

Качество и чистоту отепленной фракции определяли путем оценки аминокислотного состава Была исследована отепленная фракция гидролизата, результаты исследования представлены в таблице 5

Аминокислота Процентное содержание

Метионин 0,238

Изолейцин 0,018

Глицин 0,031

Валин 0,013

Лейцин 0,047

Аланин 0,028

Из данных табл 5 видно, что превалирующая фракция в препарате -аминокислота метионин, т е поставленная цель достигнута в результате реализации предложенного нового способа В качестве сопутствующих фракций обнаруживаются лейцин, глицин, аланин, изолейцин, валин Однако их примеси незначительны, содержание метионина составляет более 60 %, что вполне отвечает требованиям к концентрированным формам веществ, а препарат может бьггь использован как обогатитель кормовых рационов птицы Фракционный состав препарата установлен методами хроматографии на аминокислотном анализаторе

Качественную оценку метионинобогащенного препарата по органолептическим, физико-химическим показателям и аминокислотному составу проводили известными методами

Экспериментальные данные по оценке сухого метионинобогащенного кормового гидролизата, полученного методом сушки в общепринятых для белковых препаратов режимах, представлены в таблице 6

Таблица 6— Органолептические и физико-химические показатели сухого

метионинобогащенного препарата

Наименование показателя Характеристика и норма

Внешний вид Порошкообразные частицы

Цвет От матового до серого

Запах Характерный для белковых препаратов

Концентрация водородных ионов (рН) водного раствора 6,5-7,5

Массовая доля влаги, % , не более 10

Массовая доля хлористого натрия, %, не более 2,5

Массовая доля сульфита натрия, %, не более 10

Массовая доля жира, %, не более 0,5

Массовая доля общего азота, %, 12,3

Массовая доля аминного азота, %, 12,3

Массовая доля аминокислоты метионина, % 65

Разработка способа реальна для промышленного использования и имеет преимущества

- простота исполнения,

- уменьшение энергозатрат на замораживание по сравнению с сушкой исходного гидролизата,

- уменьшение удельных затрат на сушку ввиду малых объемов объекта сушки - метионинобогащенного препарата,

- отсутствие агрессивных сред:

- отсутствие сложных хроматографических или каких-либо других средств и оборудования,

- высокая растворимость продукта,

- эффективное выделение и концентрирование (малые примеси)

Жидкий препарат серусодержащего гидролизата подвергали химико-токсикологическим исследованиям При этом определяли концентрации основных токсичных веществ и сравнивали с установленными нормами ПДК Исследования проводили на базе ВНИВИФГТ (г Воронеж) в следующем объеме исследование кормовой ценности и безвредности препарата, изучение острой токсичности состава, аллергенное и кожно-резорбтивное действие препарата, эмбриотоксическое и тератогенное действие, изучение кумулятивных свойств и отдаленных последствий

Согласно классификации химических веществ по кумуляции в организме животных (Л И Медведь) вещества, имеющие коэффициент кумуляции свыше 5 относятся к 4 классу - к веществам слабовыраженной степени кумуляции и состав отнесен к этому классу.

Таким образом, препарат безвреден и может быть использован на кормовые, ветеринарные и пищевые цели

Глава V. Применение метионинового концентрата из ферментативного гидролизата пера.

Разработка рецептур для откорма бройлеров базировалась на практическом руководстве и программном обеспечении Всероссийского научно-исследовательского института комбикормовой промышленности (г Воронеж) Было составлено несколько рецептов комбикормов, оптимизированных по аминокислотному составу с применением разработанного препарата метионина Пример состава комбикорма представлен в таблице 7, а также рассчитаны показатели качества данного рецепта в таблице 8

Таблица 7 - Рецепт полнорационного комбикорма для бройлеров 1-4 недели

Состав В рецепте, % Количество, кг/т

Пшеница полновесная 22,64 226,38

Ячмень без пленок 15,43 154,35

Кукуруза 18,46 184,57

Шрот соевый юстированный СП 41% 19,55 195,51

Мука мясокостная СП 34% 2,06 20,58

Мука рыбная СП 63% 3,09 30,87

Масло растительное Дрожжи кормовые 4,51 5,14 45,12 51,45

Метионин, гидролизат 0,25% 0,51 5,1

Жмых подсолнечный 6,29 62,91

Соль поваренная 0,27 2,71

Мел кормовой 0,19 1,90

Трикапьцийфосфат 0,95 9,50

П5-1 молодняка 0,90 9,02

Таблица 8 - Показатели качества комбикорма

Наименование Норма Фактически Ед измерения

Обменная энергия птицы 310,0 302,40 Ккал/100г

Сырой протеин 22,00 21,14 %

Сырая клетчатка 4,0 4,12 %

Лизин 1,10 1,10 %

Метионин+цистин 0,82 0,78 %

Кальций 0,90 0,86 %

Фосфор 0,75 0,74 %

Натрий 0,15 0,21 %

Исследования жидкого метионинобогащеннош препарата из пера птицы проводилось в нескольких сериях экспериментов на цыплятах-бройлерах В эксперимент были взяты 2 группы цыплят-бройлеров 16-ти дневного возраста по пять голов Первой группе в течение 16 дней скармливали метионинсодержащий препарат из расчета 2,1 г/кг комбикорма В начале и в конце эксперимента птиц взвешивали, результаты представлены в таблице 9

Таблица 9 - Масса цыплят-бройлеров по окончании эксперимента

Группы Масса цыплят в начале опыта, г Масса цыплят в конце опыта, г Абсолютный прирост, г Среднесуточны й прирост, г

Опыт 336+4 2 1487+ 3,3 1151 71,9

Контроль 337 + 3,1 1293 ±4,1 956 59,8

Убойный выход опытных птиц составил 65,9 %, контрольных - 63,8% Таким образом, выход полезной продукции в случае скармливания корма с введением разработанного препарата достоверно повысился на 2,1 %

Также были проведены исследования содержания макро- и микроэлементов в органах и тканях цыплят, а также в их крови и сыворотке Результаты представлены в таблицах 10 и 11

Таблица 10 - Содержание макро- и микроэлементов в органах и тканях

цыплят бройлеров в конце опыта

Органы |Медь, мг/кг Цинк, | Марганец, мг/кг | мг/кг Железо, мг/кг Свинец, мг/кг Кадмий, мг/кг

Контроль

Печень 4,52 41,6 4,4 230 1,33 0,02

Почки 3,99 20,0 1,9 62 0,53 0,034

Мышцы 1,23 5 89 0,31 38 — 0 014

Яичник 0,78 18,4 0,52 68 0 67 0,08

Яйцевод 0,96 6,69 0,62 39 0,61 0,01

Опыт

Печень 4,64 25,1 2,55 185 0,26 0,02

Почки 3,78 19,6 1,72 72 — 0,026

Мышцы 0,87 4,77 0, 15 18 0,6 0,02

Яичник 1,36 10,4 0 19 37 0,61 0,01

Яйцевод 1,95 12,3 0,22 27 0,44 0,01

Из данных таблицы 10 видно, что содержание токсических элементов в некоторых органах и тканях опытных животных выражено ниже, чем в некоторых образцах, взятых у контрольных животных Однако, в некоторых случаях, например, в яйцеводе отмечается увеличение содержания меди, цинка в 2 раза Важно отметить, что мышцы - наиболее потребляемое сырье в питании, также «освобождается» от меди, цинка, марганца, железа, свинца Это следует учитывать при реализации кормовых рационов, особенно в случаях железа, марганца, так как они являются важными элементами

Содержание аминокислот в печени и мышцах птицы указано в таблице 11

Таблица 11— Содержание аминокислот в печени и мышцах птицы

AMINO ACID Опыт Контроль

Печень Мышцы Печень мышцы

% % % %

Asp 2,501 2,462 1,723 1,621

Thr 1,231 1,27 0,894 0,867

Ser 1,264 1,261 0,992 0,893

Glu 3,541 3,64 4,225 3,874

Pro 1,005 1,011 1,128 0,995

mcys 0,394 0,397 0,261 0,257

Glu 1,142 1,145 0,997 0,978

Ala 1,463 1,438 1,024 0,994

Val 1,274 1,281 1,044 1,112

Met 0,463 0,460 0,350 0,297

lie 0,645 0,637 0,578 0,417

Leu 1,181 2,00 0,985 0,869

Tyr 0,171 0,168 0,163 0,162

Phe 0,867 0,883 0,724 0,677

His 0,724 0,734 0,771 0,624

Lys 1,887 1,991 1,148 1,028

NH 0,5 0,418 0,472 0,439

Arg 1,882 1,919 0,967 0,868

Сумма 22,845 23,115 18,446 16,974

Содержание макро- и микроэлементов в крови и сыворотке животных представлено в таблице 12 Полученные данные свидетельствуют о том, что накопление элементов зависит от свойств и поэтому картина не во всех случаях однозначная содержание меди - увеличивается, марганца -уменьшается и тд Другими словами, препарат оказывает биологическое действие на накопление элементов в органах и тканях

В ходе экспериментальных исследований установлено, что содержание большей части аминокислот возрастает, что положительно оценивает перспективы препарата и повышает ценность птицепродуктов

Согласно полученным нами данным, применение метионинсодержащего препарата в течение 16 дней из расчета 2,1 г/кг комбикорма цыплятам-бройлерам позволило оптимизировать метаболические процессы в организме, что выразилось в повышении биохимических значений Так содержание незаменимых серусодержащих аминокислот, витаминов и

эссенциальных микро- и макроэлементов в органах и крови было достигнуто выше в группе птиц, получавших препарат При этом отмечено снижение содержания ионов тяжелых металлов в органах и крови птиц опытной группы, что, вероятно, объясняется способностью серусодержащих препаратов связывать тяжелые металлы в организме, тем самым, снижая их отрицательное воздействие

Таблица 12 - Содержание макро- и микроэлементов в крови и сыворотке животных

Группа ' Медь, мкг % Цинк, мкг % Марганец, мг% Железо, мг % Магний, мг % Кальций, мМ/л Свинец, мкг % Кадмий, [ мкг %

Контроль в начале опыта 40,2 439,8 11,0 19,0 3,40 3,80 2,3 -

в конце опыта 40,0" 528,8 17,6 19,5 3,11 4,03 21,1 1,6

Опыт в начале опыта 36,6 514,0 11,0.. 18,6 3,19 3,67 12,9 2,1

в конце опыта 63,3 527,8 10,6 21,4 2,93 3,55 9,7 1,3

Применение метионинсодержащего препарата в течение 16 дней привело к увеличению продуктивности Таким образом, метиониновые препараты возможно производить как самостоятельные технологические формы или как жидкий концентрат для балансирования аминокислотного состава

Выводы:

1 Для производства метиониновых препаратов из пера сухопутной птицы возможно использовать традиционную схему обработки, исключая сортировку пера.

2 Установлено, что ферментативный гидролизат имеет приемущества как источника метионина Ферментативную обработку пера целесообразно проводить с использованием смесей препаратов протеолитического действия отечественного производства, например, коллагеназа-пепсин, коллагеназа-пепсин-просубтилин

3 В качестве источника получения метионина рекомендуется использовать ферментный гидролизат пера сухопутной птицы

4 Разработана модифицированная технологическая схема получения ферментативного гидролизата пера и новый способ выделения метионинобогащенного препарата

5 Метионинобогащенный препарат безвреден и может быть использован как кормовая и пищевая добавка

6 Установлено, что препарат стимулирует массу тела птицы С применением программированного обеспечения разработаны рецептуры кормов для птицы

7 Разработаны проект технической документации и результаты исследования апробированы в условиях

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1 Сиволоцкая, Е В Современные пути переработки пера [Текст] /Сиволоцкая ЕВ// МатериалыХЬШ отчетной науч -практ конф за 2004 год - Воронеж, 2005 - С 69 /

2 Антипова, J1В Получение кормового метионинобогащенного препарата из малоценного пера птицы [Текст] / JIВ Антипова, С.В Полянских, Е.В Сиволоцкая // Новое в переработке птицы и яиц Ржавки, выпуск 33, 2005 г С - 178

3 Полянских С В Свойства и практическое использование биомодифицированных гидролизатов малоценного пера птицы [Текст] /С В Полянских, Е В Сиволоцкая, // Материалы XLV отчетной научной конференции за 2006 год - Воронеж, 2006 - С 90

4 Антипова, Л В Биомодификация малоценного перо-пухового сырья в получении препаратов аминокислот различной степени чистоты [Текст] / Л В Антипова, С В Полянских, Е В Сиволоцкая // Хранение и переработка сельскохозяйственного сырья —2007-№ 10

5 Антипова, Л В Перспективы получения метионинобогащенных кормовых препаратов на основе малоценного пера птицы [Текст] / Л В Антипова, С В Полянских, Е В Сиволоцкая// Мясная индустрия -2007 -№10

6 Антипова, Л В Получение гидролизатов на основе малоценного пера птицы [Текст] / Л В Антипова, С.В Полянских, Е В

" Сиволоцкая// Птицеводство 2007-№ 10 С-31-32

7 Полянских С В Метионинобогащенные гидролизаты из пера сухопутной птицы [Текст] / С В Полянских, Е В Сиволоцкая, А Е Топоркова // МатериалыХЫУ отчетной научн -практ конф за 2005-Воронеж, 2006 -С 160.

8 Антипова Л В Направленная биомодификация малоценных

вторичных продуктов переработки сухопутной птицы в получении метионинобогащенных препаратов [Текст] / Л В Антипова, И А Глотова, Е В Сиволоцкая // Материалы научной конференции Перспективные нано- и биотехнологии в производстве продуктов функционального назначения - Краснодар, 2007

9 Антипова Л В , Полянских С В , Сиволоцкая Е В Заявка на патент

РФ «Способ получения концентрата серусодержащих аминокислот из белкового гидролизата кератисодержащего сырья» Регистрацгонный № 2007127959

Подписано в печать 11 10 07 Уел печ л 1,0 Тираж 100 Заказ № 366

Воронежская государственная технологическая академия Участок оперативной полиграфии ВГТА 394017, Воронеж, пр Революции,19

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Свойства кератиновых побочных продуктов переработки животных и птиц

1.2 Опыт переработки перо-пухового сырья

1.3 Роль метионина в организме и опыт получения препаратов

ГЛАВА II. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Объекты

2.2 Схема экспериментальных исследований

2.3 Методы исследования

2.3.1 Определение массовой доли влаги

2.3.2 Определение массовой доли жира

2.3.3 Анализ белков и белковых веществ

2.3.4 Определение растворимости методом высушивания сухого остатка

2.3.5 Определение величины pH

2.3.6 Определение массовой доли золы

2.3.7 Определение перевариваемости

2.3.8 Определение витаминов

2.3.9 Определение макро- и микроэлементов

2.3.10 Биологические методы исследования

2.3.11 Математическая обработка результатов

ГЛАВА III ОБОСНОВАНИЕ ВЫБОРА И УСЛОВИЙ ПОЛУЧЕНИЯ ИСТОЧНИКА МЕТИОНИНА НА ОСНОВЕ ГИДРОЛИЗАТА КЕРАТИНА КУРИНОГО ПЕРА

3.1 Оценка аминокислотного состава белков пера

3.2 Подбор условий ферментативного гидролиза пера птицы

3.3 Исследования свойств гидролизатов пера

ГЛАВА IV ПОЛУЧЕНИЕ И СВОЙСТВА

МЕТИОНИНОБОГАЩЕННОГО ПРЕПАРАТА

4.1 Разработка способа получения метионинового препарата

4.2 Физико-химические и качественные показатели продукта

4.3 Исследование кормовой ценности и безвредности препарата

4.3.1. Изучение острой токсичности состава

4.3.2 Аллергенное и кожно-резорбтивное действие препарата

4.3.3 Эмбриотоксическое и тератогенное действие

4.3.4 Изучение кумулятивных свойств и отдаленных последствий

ГЛАВА V. ПРИМЕНЕНИЕ МЕТИОНИННОВОГО КОНЦЕНТРАТА

ИЗ ФЕРМЕНТАТИВНОГО ГИДРОЛИЗАТА ПЕРА

5.1 Разработка рецептурного решения комбикормов с применением программирования

5.2 Исследование влияния препарата метионина на продуктивность бройлеров

ВЫВОДЫ

Современная мясная промышленность охватывает решение целого ряда актуальных задач, прежде всего связанных с восполнением недостатка пищевого и кормового белка в мировом производстве, разработкой и внедрением способов рационального и максимального использования вторичного сырья переработки скота, птицы и мяса, в том числе промышленных кератинсодержащих продуктов [6,40]. Привлекательность последних состоит, прежде всего, в полноценности аминокислотного состава белков, массовая доля которых находится в пределах 70-98 %. Однако, сдерживающим фактором является низкая перевариваемость и усвоение, связанное со специфической упрочненной структурой и наличием значительного числа межцепочечных дисульфидных связей [66].

Рост объемов производства птицеперерабатывающей промышленности и устойчивая тенденция ее дальнейшего развития в мире и у нас в стране обусловливает скопление значительных объемов пера, переход на переработку бройлеров и внедрение механизированных систем приводит к резкому снижению объемов пера, используемого в традиционных направлениях. К тому же современная индустрия позволяет заменить перо на синтетические материалы.

Современная ситуация дополнительно характерна усугублением необходимости изыскания новых решений и расширения области применения кератиновых отходов птицеперерабатывающей промышленности в виду перераспределения источников в общем объеме кератинсодержащего сырья в связи с сокращением поголовья скота и увеличением поголовья птицы. Актуальность проблемы подкрепляется увеличением общей экологической напряженности, отсутствием производственных мощностей по переработке кератиновых отходов гидротермическим, химическим и биотехнологическими способами, слабой востребованностью этого белкового сырья отечественной комбикормовой промышленность из-за низкой усвояемости, сложившимся стереотипом в оценке перспектив применения на кормовые, пищевые и специальные цели.

Проблемой наиболее полного сбора и использования перо-пухового производства успешно занимались многие специалисты (Волик В.Г., Жеребцов H.A., Антипова Л.В., Ильина Н.М., Насонова Л.В., Шамханов Ч.Ю., Полянских C.B. и др.). Обоснованы подходы и способы деструкции белковых компонентов электрофизическими, химическими и биотехнологическими методами, получены гидролизаты с достаточно высокой степенью усвоения и функционально-технологическими свойствами, доказаны потенциальные возможности гидролизатов в получении кормовых, пищевых, в том числе функциональных продуктов [2, 3,4,5,6,7,11,14,15,17,18,19,25].

Обогащение функциональными ингредиентами - насущная задача производства пищевых и кормовых продуктов. Разработка таких подходов весьма важна и для птицеперерабатывающей промышленности в виду необходимости поддержания стабильности и роста объемов поголовья птицы, а привлечение собственных сырьевых ресурсов во многом обеспечит совершенствование инфраструктуры отрасли, высокие экономические показатели и экологичность производства.

При откорме птицы особенное значение придается незаменимым или редко встречающимся аминокислотам, которые в современном производстве используются в виде дорогостоящих специальных препаратов и добавок. Наиболее распространены и освоены препараты аминокислоты метионина, который играет ряд важных функций в организме птиц.

В частности метионин служит не только источником серы, но и участвует в регуляции жирового и белкового обмена, участвует в биосинтезе серина, цистина, холина; он является необходимым компонентом для роста и размножения эритроцитов, вместе с цистеином и витамином А участвует в образовании пера птицы, а также препятствует жировому перерождению печени.

Метионин вместе с другими серосодержащими аминокислотами необходим в рационах птицы, особенно в период роста, в то же время привлекает внимание наличие значительной доли именно этих аминокислот в составе белков пера птиц.

В настоящее время разработаны различные методы получения синтетического DL-метионина, который применяется практически повсеместно. Однако получение природного метионина - весьма привлекательная и реальная перспектива. В связи с этим обоснование и разработка рекомендаций по получению и применению концентратов метионина из малоценного пера птицы обеспечит отечественное производство добавок и препаратов кормового значения.

Работа является составной частью госбюджетной НИР кафедры технологии мяса и мясных продуктов ВГТА «Теоретические и практические аспекты производства биологические полноценных, лечебно-профилактических и функциональных продуктов на основе биотехнологий и рационального использования сельскохозяйственного сырья» 2003-2007.г.г. (№г.р. 01.200.1.16991).

Цель работы состоит в создании кормовых добавок и продуктов функционального значения отечественного производства для улучшения качественных показателей птицеводства.

В рамках поставленной цели решались следующие научно-практические задачи:

- получение и сравнительная оценка гидролизатов кератина пера как источника метионина;

- оценка свойств и обоснование выбора ффметтивдогогидролизатапера;

- выбор и обоснование условии получения метионинобогащенного препарата;

- определение качественных характеристик, кормовой ценности и безвредности метионинового препарата в опытах in vivo (на теплокровных животных);

- оптимизация состава кормов для птиц с применением новой добавки; разработка рекомендаций по получению и применению метионинобогащенного препарата.

выводы

1. Для производства метиониновых препаратов из пера сухопутной птицы возможно использовать традиционную схему обработки, исключая сортировку пера.

2.Установлено, что ферментативный гидролизат имеет преимущества как источника метионина. Ферментативную обработку пера целесообразно проводить с использованием смесей препаратов протеолитического действия отечественного производства, например, коллагеназа-пепсин, коллагеназа-пепсин-протосубтилин

3. В качестве источника получения метионина рекомендуется использовать ферментативный гидролизат пера сухопутной птицы.

4. Разработана модифицированная технологическая схема получения ферментативного гидролизата пера и новый способ выделения метионинобогащенного препарата.

5. Метионинобогащенный препарат безвреден и может быть использован как кормовая добавка.

6. Установлено, что препарат стимулирует массу тела птицы. С применением программированного обеспечения разработаны рецептуры кормов птицы.

7. Разработан проект технической документации, и результаты исследования апробированы во Всероссийском научно-исследовательском институте патологии, фармакологии и терапии.

1. Амелин, А.Н. Калориметрия ионообменных процессов Текст./ А.Н. Амелин, Ю.А. Лейкин. Воронеж: Изд-во ВГУ, 1991. - 104 с.

2. Антипова Л.В. Биосинтез кератинрасщепляющих ферментов актино-мецетами Текст./ Л.В. Антипова, H.A. Жеребцов, Ч.Ю. Шамханов // Деп.рук. ВНИИСЭНТИ № 191 мб Д-84 9указатель неопубликованных и ведомственных материалов, 1984, № 4.

3. Антипова Л.В. Биохимические характеристики ферментативного гидролиза кератинсодержащего сырья птицеперерабатывающей промышленности Текст./ Л.В. Антипова, Ч.Ю. Шамханов, О.С. Осминин, H.A. Пожалова //Изв. Вузов пищ. Технология. 2003. - № 5-6.-С.59-64.

4. Антипова Л.В. Биохимия мяса и мясных продуктов Текст./ Л.В. Антипова, H.A. Жеребцов. Ворнеж: ВТУ, 1991 - с.

5. Антипова Л.В. Использование вторичного коллагенсодержащего сырья мясной промышленности Текст./ Л.В. Антипова, И.А. Глотова. С-Петербург: Гиорд, 2006 - 382 с.

6. Антипова Л.В. Использование вторичного сырья в технологических процессах птицеперерабатывающей промышленности Текст./ Л.В. Антипова, C.B. Полянских // Известия вузов Пищевая технология -1998.-№2-3-с. 17-19

7. Антипова Л.В. Использование микробных протеолитических препаратов в разработке источников пищевого животного белка Текст./ Л.В. Антипова //Тез. Всесоюзной научно-технической конференции «Ферменты народному хозяйству». - Черновцы, 1990. - С.8.

8. Антипова Л.В. Методы исследования мяса и мясных продуктов Текст./ Л.В. Антипова, И.А. Глотова, И.А. Рогов. М.: Колос, 2001. -376 с.

9. Антипова Л.В. Основы рационального использования вторичного кол-лагенсодержащего сырья мясной промышленности Текст./ Л.В. Антипова, И.А. Глотова. Воронеж: Воронеж, гос. технол. акад., 1997 г. -248 с.

10. Антипова Л.В. Получение белковой пищевой добавки из вторичных продуктов птицеперерабатывающей промышленности Текст./ Л.В. Антипова, О.С. Осминин, Ч.Ю. Шамханов, Т.И. Струкова // Хранение и переработка сельхозсырья. 2003. - № 2. - С. 62-64.

11. Антипова Л.В. Получение и характеристика пищевого кератинового гидролизата Текст./ Л.В. Антипова, Л.П. Пащенко, Ч.Ю. Шамханов, Курилова Е.С.// Хранение и переработка сельхозсырья. 2003. - № 7. -С. 63-66.

12. Антипова Л.В. Прикладная биотехнология: УИРС для специальности 270900 Текст./ Л.В. Антипова, И.А. Глотова, А.И. Жаринов Воронеж. Гос. Техн. акад. - Воронеж, 2000. - 332 с.

13. Антипова Л.В. Совершенствование технологии производства керопеп-тида из перо-пухового сырья Текст./ Л.В. Антипова, Ч.Ю. Шамханов, О.С. Осминин // Мясная индустрия. 2004. - № 3. - С. 44-47.

14. Антипова Л.В., Биотехнологические аспекты рационального использования вторичного сырья мясной промышленности Текст./ Л.В. Антипова- АГРОНИИТЭИММП (Серия мясная промышленность), 1991 г. 45 с.

15. Антипова, Л.В. Токсикологическая оценка ферментативного белкового гидролизата из кератина пера Текст. / Л.В.Антипова, Ч.Ю.Шамханов, О.С.Осминин, М.Н.Аргунов // Хранение и переработка сельхозсырья. -2003.-№ 1.-С. 32-36.

16. Аргунов М.Н. Методические рекомендации по токсико-экологической оценке объектов животноводства Текст./ М.Н. Аргунов. Воронеж, 1999 г.-96 с.

17. Архипова, A.B. Протеиновое и аминоктслотное питание птицы Текст. /A.B. Архипова, Л.В.Топорова. М.: Колос, 2000. - 175 с.

18. Бемин А. Получение растворимой модефикации кератина Текст./ А. Бемин, К. Кирина, Л. Кузнецова // Мясная индустрия СССР. 1956 - № 6 с.48-51.

19. Вайтли Э.Х. Собаки наши друзья. Пер. с английского Евтушенко С.М. Текст./ Э.Х. Вайтли М: Агентство ФАИР, 1997 - с.368.

20. Волик В.Г. Биотехнологический способ выработки пищевого, лечебного и косметического белка Текст./ В.Г. Волик // Мясная индустрия. -1999.-№4. с. 36-38.

21. Гааль Э. Электрофорез в разделении биологических макромолекул Текст./ Э. Гааль, Г. Медьеши, Л.С. Верецкая. М.: Наука, 1982.- 446 с.

22. Горяев, М.И. Аммиачный гидролиз кератинсодержащего сырья Текст. / М.И. Горяев, Л.Н. Быкова // Мясная индустрия . 1998.- № 3. - 45с.

23. ГОСТ 23423-89 Метионин кормовой. Технические условия. Текст./ -М.: Изд-во стандартов, 1989.

24. ГОСТ 26570-95 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения кальция. Текст./ М.: Изд-во стандартов, 1995.

25. ГОСТ 30178-96 Сырье и продукты пищевые. Атомно-абсорбционный метод определения ток5сичных элементов. Текст./ М.: Изд-во стандартов, 1996.

26. Грачев Ю.П. Математические методы планирования экспериментов. Текст./ Ю.П. Грачев М.: Пищевая промышленность, 1989. - 199 с.

27. Грачева И.М. Технология микробных белковых препаратов, аминокислот и биоэнергия Текст./ И.М.Грачева, Л.А.Иванова, В.М.Кантере. -М.: Колос, 1992-382 с.

28. Гуслянников В.В. Технология мяса птицы и яйцепродуктов. Текст./ В.В. Гуслянников, М.А. Подлегаев М.: Пищевая промышленность, 1979.-288 с.

29. Демчук A.C. Эффективность скармливания свиньям кератиновой муки

30. Текст./ A.C. Демчук, Г.М. Рожанчук, А.И. Сницарь, Г.Б. Добрыченко // Мясная индустрия СССР. 1981. - № 10. - С. 22-25.

31. Дэвени Т. Аминокислоты, пептиды, белки / Пер. с англ. Маца А.Н. под ред. и с пред. д-ра биол.наук Незлина P.C. Текст./ Т. Дэвени, Я. Гергей -М.: Мир, 1976-364 с.

32. Карпова, В.П. Получение кормового гидролизата из кератинового сырья методом ферментативного гидролиза Текст. / В.П. Карпова, В.З. Кракова, Г.И. Эдельман, И.Р. Птак // Мясная индустрия. 1997. -№ 12. -С. 39-40.

33. Коренман Я.И. Практикум по аналитической химии. Хроматографиче-ские методы анализа Текст./ Я.И. Коренман Воронеж изд-во ВГУ 2000 г. - 336 с.

34. Ленинджер А. Основы биохимии /Пер. с английского В.Г. Горбулева, М.Д.Гроздовой, С.Н. Преображенского; Под ред. В.Л.Энгельгарда, Я.Н. Варшавского. В 3 т Текст./ А. Ленинджер М: Мир, 1985.

35. Лисицын А.Б. Основные направления развития науки и технологий мясной промышленности Текст./ А.Б. Лисицын, И.М. Чернуха // Мясная индустрия. 2000,- № 3. - С. 13-16.

36. Лобзов К.И. Рационально использовать отходы переработки птицы Текст./ К.И. Лобзов, В.Г. Волик // Мясная индустрия СССР. 1980. -№ 4. - С. 23-25.

37. Математическое моделирование технологических систем: Текст. //Сб. науч. тр. Вып. 2. Под ред. Сысоева В.В. Воронеж, 1997. - 180 с.

38. Медведь Л.И. Методические указания по гигиенической оценке новых пестицидов Текст./ Л.И. Медведь, Ю.С. Коган, О.П. Чепинога -ВНИИГИНТОКС-Киев, 1989 г.- 160 с.

39. Неклюдов А.Д. Источники резервного белка для получения пищевых гидролизатов из животного сырья Текст./ А.Д. Неклюдов, А.Н. Иван-кин, H.A. Баер, A.B. Бердутина, В.И. Дубина // Хранение и переработка сельхозсырья. 1998. - № 3. - С. 24-25.

40. Нечаев А.П. Пищевая химия. под ред. Нечаева А.П. Текст./ А.П. Нечаев, С.Е. Траубенберг, A.A. Кочеткова, В.В. Колпакова, И.С. Витол, И.Б. Кобелева- СПб.: ГИОРД, 2001. - 592 с.

41. Никитин Б.И. Переработка птицы, кроликов и производство птицепро-дуктов Текст./ Б.И. Никитин, Н.Б. Никитина М.: Легкая и пищевая промышленность, 1983. - 244 с.

42. Патент Великобритании, № 2091272. Способ и машина для гидролизакератинсодержащих веществ. Текст. Опубл. 1983.

43. Патент США, № 2151306. Способ гидролиза белковых производных кожи. Текст. Опубл. 1980.

44. Патент США, № 4269865. Способ производства пищевых продуктов из перьев. Текст. Опубл. 1981.

45. Патент США, № 4292334. Способ обработки перьев или меха животных. Текст. Опубл. 1982.

46. Патент США, № 4361586. Вакуумная ферментативная переработка белкового материала. Текст. Опубл. 1983.

47. Патент Франции, № 2448297. Способ получения кормов, в основном кормовых концентратов, из отходов костей, рогов и аналогичных материалов. Текст. Опубл. 1981.

48. Патент Франции, № 2501010. Способ гидролиза кератиновых материалов. Текст. Опубл. 1983.

49. Патент ФРГ, № 2004716. Способ получения растворимого протеина из протеинсодержащего сырья. Текст. Опубл. 1981.

50. Патент Японии, № 5529660. Способ гидролиза кератина до аминокислот. Текст. Опубл. 1980.

51. Патент Японии, № 5644694. Способ производства кормов с животным протеином. Текст. Опубл. 1982.

52. Пащенко Л.П. Получение и использование гидролизатов пера в технологии хлеба Текст./ Л.П. Пащенко, H.A. Жеребцов, И.М. Тареева // Хранение и переработка сельхозсырья. 1997. - № 5. - С. 34-36.

53. Переработка кератинсодержащего сырья (обзорная информация) Текст. //Мясная промышленность. ЦНИИТЭИмясомолпром, 1992. -50 с.

54. Петрухин И.В. Применение химических и биологических веществ в кормлении птицы Текст. /И.В. Петрухин. М.: Россельхозиздат, 2001. - 239 с.

55. Попов Е.М. Структурная организация белков Текст./ Е.М. Попов М.:1. Наука, 1989,-351 с.

56. Рогов И.А. Химия пищи. Белки: структура, функции, роль в питании Текст./ И.А Рогов, JI.B. Антипова, Н.И. Дунченко, H.A. Жеребцов М: Колос, 2001.

57. Рождественский, К.В. Кормление сельскохозяйственной птицы Текст. : учеб. пособие / К.В.Рождественский, В.А.Шафров. М.: Колос, 1990. -303 с.

58. Страйтер Л. Биохимия /Пер. с англ. М.Д. Гроздовой, H.A. Колчинского; Под ред. С.Е. Северина. Т.З Текст./ Л. Страйтер -М: Мир, 1985 397 с.

59. Стромберг, А.Г. Физическая химия Текст. : учеб. пособие для вузов / А.Г. Стромберг, Д.П. Семченко. М.: Высш. шк., 1999. - 527 с.

60. Сысоев В.В. Введение в нелинейное программирование (градиентные методы): Текст./ Методические указания по курсу «Математические методы и модели в расчетах на ЭВМ»/ В.В. Сысоев. Воронеж, технол. ин-т. - Воронеж, 1990. - 28 с.

61. Черняев Н.Г., Корма для животных пища для ума Текст. / Н.Г. Черняев // Комбикорма - 2000. - № 2 - с. 18-19.

62. Черняев, Н.Г. Корма для животных пища для ума Текст. / Н.Г. Черняев // Комбикорма. - 2000. - № 3. - С. 21.

63. Шамханов Ч.Ю. Получение и применение кератиновых продуктов на основе биомодификации сырья мясной промышленности: теория и практика Текст. / Ч.Ю. Шамханов //Диссертация на соискан. учен, степ. докт. техн. наук. Воронеж, 2002.

64. Шестакова И.С. Ферменты в кожевенном и меховом производстве Текст. / И.С. Шестакова, Л.В. Моисеева, Т.Ф. Миронова, М.: Лег-промбытиздат, 1990. - 128 с.

65. Шестакова И.С. Ферменты в кожевенном и меховом производстве Текст./ И.С. Шестакова, Л.В. Моисеева, Т.Ф. Миронова М.: Лег-промбытиздат, 1990. - 128 с.

66. Щербаков, A.A. Из опыта производства кератиновых гидролизатовбелковых стимуляторов роста растений и добавок в животные корма Текст. / А.А.Щербаков, А.П.Яцышин, С.Г.Либерман, М.Л.Файвишевский // НТИ. Мясная промышленность. 1990. - № 12. -С. 27-30.

67. Diplock А.Т., Agget P.J., Ashwell М. et al. Scientific concepts of functional foods in Europe: consensus document Text. / A.T. Diplock // British J. Nutrition.-1999.-V. 81.-Suppl. l.-P. 1-7.

68. Dowling L.M., Parry D.A., Sparrow L.G. Structural homology between hard d-keratin and the intermediate filament proteins desmin and vimentin Text. /L.M. Dowling//Biocsi. Repts. 1983. Vol. 3. № 1. P. 73-78.

69. ErbersdobIer H. F. / Summarising lecture and prospects for future research and development Text. / H. F. Erbersdobler // Food Research International. 2002. - V. 35. - Issues 2-3. Functional Foods - Challenges for the New Millenium. - P. 323-325.

70. Fraser R.D., Macrae T.P. Molecular structure and mechanical properties of keratins Text. / R.D. Fraser // Mech. Prop. Biol. Mater. Symp., Leeds, 1979. Cambr., 1980. P. 211-246.

71. Huggins M.L. Structural changes in the transformation from d-to b-keratin

72. Text. / M.L. Huggins I I Colloid and Polym. Sei. 1980. № 67. P.49-53.

73. Knorr D. Functional foods science in Europe Text. / D. Knorr // Trends in Food Science and Technology. 1998. - № 9. - P. 295-340.

74. Milner J.A. Functional foods and health: a US perspective Text. / J.A. Milner // British J. Nutrition. 2002. - V. 88. - Suppl. 2. - P. 151-158.

75. Murayama K., Ricko T., Yoshiko Y., Kiso A. Amino-acid sequence of feather keratin from fowl Text. / K. Murayama // Eur. J. Biochem. 1983. Vol. 132. № 3. P.501-507.

76. Roberfroid M. B. Global view on functional foods: European perspectives Text. / M. B. Roberfroid // British J. Nutrition. 2002. - V. 88. - Suppl. 2. -P. 133-138.

77. Spei M. Quellung von a-keratinen.- Melliand Text. / M. Spei Textiber, 1985, 66, 2, 77-78.