автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.06, диссертация на тему:Научно-практические аспекты технологии модификации растительных масел для жировых продуктов с функциональными свойствами

На правах рукописи

Шр

Шеламова Светлана Алексеевна

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕХНОЛОГИИ МОДИФИКАЦИИ РАСТИТЕЛЬНЫХ МАСЕЛ ДЛЯ ЖИРОВЫХ ПРОДУКТОВ С ФУНКЦИОНАЛЬНЫМИ СВОЙСТВАМИ

Специальность 05.18.06 - Технология жиров, эфирных масел и парфюмерно-косметических продуктов

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора технических наук

2 9 НОЯ т

Москва-2012

005055730

Работа выполнена в ФГБОУ пищевых производств»

ВПО «Московский государственный университет

Научный консультант:

Официальные оппоненты:

доктор технических наук, профессор Тырсин Юрий Александрович

Кривова Анна Юрьевна,

доктор технических наук, профессор, Научный Центр ОАО «Свобода», зав. лабораторией Бутова Светлана Николаевна, доктор биологических наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств», зав. кафедрой «Технология продуктов биоорганического синтеза» Султанович Юрий Аврамович, доктор химических наук, профессор, ООО УК «Солнечные продукты», советник генерального директора

Ведущая организация:

ОАО «ГосНИИсинтезбелок»

Защита состоится «25» декабря 2012 года, в 11 часов на заседании диссертационного совета Д 212.122.05 при ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет технологий и управления им. К. Г. Разумовского», по адресу: 109029, г. Москва, ул. Талалихина, дом 31, ауд. 13 (первый этаж).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет технологий и управления им. К. Г. Разумовского».

Автореферат разослан: «/% ноября 2012 г.

С авторефератом диссертации можно ознакомиться на сайтах ВАК РФ Министерства образования и науки РФ http://vak2.ed.gov.ru/cataloeue и ФГБОУ ВПО МГУТУ им. К.Г. Разумовского http://tngutro.ru/graduates-and-doctors/

Ученый секретарь диссертационного совета

Козярина Галина Ивановна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В перспективах развития масложирового комплекса России важное место отводится вопросам повышения качества и безопасности продукции, что соответствует положениям Доктрины продовольственной безопасности Российской Федерации; государственной политике в области здорового питания населения на период до 2020 года, в число основных задач которой включено развитие производства продуктов функционального назначения, внедрение био- и нанотехнологий. К таким инновационным технологиям относится энзимная переэтерификация природных масел для получения специализированных жиров. Этот способ одновременно ограничивает использование химических реагентов в производственных процессах, загрязнение окружающей среды и обеспечивает удовлетворение готовых продуктов требованиям здорового питания по содержанию насыщенных триацилглицеролов и трансизомеров жирных кислот.

В последние годы специализированные жиры занимают значительный объем масложировой отрасли как рецептурные ингредиенты для молочной, кондитерской, хлебопекарной промышленности; углубляется дифференциация жиров под конкретные продукты. Высокая специфичность липолитических ферментов к строению жирнокислотного остатка и его положению в молекулах триацилглицеролов (ТАГ) дает возможность получать широкий спектр жировых продуктов как в отношении технологической функциональности, так и соответствия научным принципам нутрициологии о роли различных жирных кислот в питании и значении их распределения в ТАГ.

Большой вклад в формирование и развитие современных тенденций технологии специальных жиров внесли А. П. Нечаев, Ю. А. Султанович, И. В. Павлова, А. А. Кочеткова и другие ученые. Фундаментальные и прикладные исследования ферментативной модификации ТАГ представлены в работах Ю. А. Тырсина, Л. В. Зайцевой, В. В. Мельникова, А. К. Macrae, S. Bloomer, С. Е. Martinez, Y. Schimada, D. Zhou, Т. Oba & В. Witholt и др.

Практика внедрения ферментативной технологии при переработке масел и жиров показала, что липолитические ферментные препараты должны иметь высокую трансферазную активность, стабильность в производственном процессе, устойчивость к технологическим факторам.

Липолитические ферменты широко распространены в организмах различного уровня биологической организации, но решить технологические задачи возможно только с помощью их микробного синтеза. Работы по скринингу продуцентов, получению активных генетически модифицированных штаммов микроорганизмов, изучению свойств липаз, их иммобилизации активно проводятся учеными различных стран. Исследования отечественных авторов (Е. Л. Рубан, Л. О. Северина, Г. Б. Ксандопуло, К. Д. Давранов, Ю. А. Свириденко, И. М. Аренде, Ж. X. Диеров, А. Ю. Кривова и др.) проводились с целью использования липаз для гидролиза масел и жиров. Количество работ, посвященных изучению липолитических ферментов в процессах синтеза в микроводных условиях крайне ограничено (Ю. А. Тырсин, К. Д. Давранов). В крупномас-

штабном производстве специализированных жиров в России используются ферментные препараты липаз зарубежных фирм. В связи с перспективами данных технологий получение отечественных препаратов липаз со свойствами, необходимыми для эффективного осуществления биомодификации жиров, - важная и насущная проблема.

Диссертационная работа направлена на решение важной народнохозяйственной задачи - разработку научно обоснованных технологических решений биомодификации растительных масел, реализация которых отвечает современным тенденциям развития науки и технологий, ориентированных на создание экологически чистых производств, в частности, масложировых продуктов функционального назначения.

Работа проводилась в соответствии с планом НИР ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный университет инженерных технологий» по теме «Биосинтез микроорганизмами биологически активных веществ и исследование их физико-химических свойств» (номер гос. регистрации 01930004491), в рамках проблемы «Модификация сорбентов путем иммобилизации ферментов и других физиологически активных веществ», утвержденной Координационным планом Научного Совета РАН, выполняемой в ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный университет»; на кафедре органической, пищевой и биохимии ФГБОУ ВПО «МГУПП» в рамках государственного задания 4.2053.2011 «Разработка принципов контроля морфогенетической активности физико-химических факторов на биосистемы с привлечением современных методов экологической экспертизы пищевых продуктов» по заказу Министерства образования и науки РФ.

Цель и задачи исследований. Цель настоящего исследования заключалась в научном обосновании и практической реализации разработанной технологии модификации растительных масел на основе ферментативного гидролиза и переэтерификации ТАГ для получения функциональных жировых продуктов с определенными технологическими и физиологическими свойствами.

Поставленная цель достигалась решением следующих задач:

- скрининг активного продуцента микробных липаз, удовлетворяющих требованиям направленной конверсии жиров и масел, и микробных продуцентов внеклеточных липоксигненаз;

- изучение особенностей регуляции биосинтеза изоферментов внеклеточного липолитического комплекса выбранного продуцента;

- разработка технологии получения препаратов липаз с различной степенью очистки;

- исследование физико-химических и каталитических свойств выделенных изоферментов липазы, идентификация функциональных групп активного центра липаз;

- оценка субстратной специфичности изоформ липаз;

- разработка приемов иммобилизации липазы на различных носителях и изучение свойств иммобилизованных препаратов;

- исследование кинетических параметров реакций гидролиза и трансэтери-фикации в водной и органической средах, катализируемых иммобилизованной липазой;

- разработка технологии хлебобулочных изделий с использованием модифицированных жиров;

- разработка технологии получения жировых продуктов с функциональными свойствами на основе ферментативных процессов этерификации, глице-ролиза, ацидолиза;

- проведение производственных испытаний разработанных технологий на предприятиях масложировой и хлебопекарной промышленности.

Научная концепция. Научная концепция состоит в разработке научно-практических аспектов технологии модификации растительных масел на основе ферментативного гидролиза и переэтерификации для получения функциональных жировых продуктов посредством использования ферментов липаз и липок-сигеназ, включающего выбор липолитического фермента с высокой гидролитической и трансацилирующей активностью, получение ферментных препаратов липазы н липоксигеназы, изучение каталитических свойств липазы, иммобилизацию липазы, выявление закономерностей ферментативных процессов гидролиза и трансотерификации ацилглицеролов в водной среде и в системах с органическими растворителями, оценку факторов, определяющих соотношение продуктов трансэтерификации, научное обоснование использования жиров, модифицированных липазой и лнпоксигеназой, в технологии пищевых производств.

Основные положения, выносимые на защиту.

На защиту выносятся следующие положения:

- методологический подход к оценке эффективности использования липо-литических ферментов для модификации растительных масел на основе совокупности экспериментальных исследований каталитических свойств липаз;

- особенности биосинтеза липаз и липоксигеназ микроорганизмами;

- модель механизма действия липаз;

- специфичность действия липаз (позиционная, к жирным кислотам) при гидролизе и этерификации в микроводных условиях и в системах с органическими растворителями;

- кинетические и термодинамические характеристики адсорбции липазы при иммобилизации;

- кинетические параметры ферментативного гидролиза и трансэтерификации;

- технологические решения по использованию липазы и липоксигеназы в хлебопечении;

- оценка эффективности использования липазы для получения жировых продуктов с функциональными свойствами.

Научная новизна. Научно обоснован выбор ферментов липаз и липоксигеназ с целью модификации растительных масел для получения функциональных жировых продуктов и имеющих перспективы использования в технологии пищевых производств.

С целью интенсификации процессов гидролиза и переэтерификации растительных масел, совершенствования технологии хлебобулочных изделий и повышения их качества экспериментальным путем выявлены штаммы микро-мицетов с высоким уровнем синтеза внеклеточных липазы (КМгориз тугае 1403), липоксигеназы (ЯЬ. огугае 605) и комплекса этих ферментов (Кк. ткго-,чроги$ уаг. сЫпет 'к 1062).

На основе анализа факторов, влияющих на биосинтез липаз при культивировании микроминета Ыг. о>угае 1403, установлено, что им синтезируется комплекс липолитических ферментов.

Впервые получены в гомогенном виде изоформы Липаза I и Липаза II, охарактеризованы их биохимические, физико-химические и каталитические свойства. Определение кинетических параметров реакций гидролиза и трансэтери-фикации триацилглицеролов и ингибиторный анализ позволили выявить функциональные группы активного центра ферментов. На основании собственных экспериментальных и данных литературы предложена модель механизма действия липаз.

Впервые установлена специфичность изоформ липаз Як огугае 1403 к строению ацильного остатка и его положению в триацилглицеролах как при гидролизе, так и при этерификации.

Установлены особенности иммобилизации липазы на различных носителях. Определены кинетические и термодинамические характеристики адсорбции фермента на гидрофобном сорбенте - стиросорбе, которые показали высокое аффинное сродство липазы к сорбенту.

Проведен комплексный анализ кинетических параметров реакций гидролиза, этерификации, глицеролиза, ацидолиза иммобилизованным препаратом липазы в водной и органической средах; установлены общие закономерности проведения ферментативной конверсии ацилглицеролов.

В рамках обоснования целесообразности использования жиров и масел, частично гидролизованных липазой, при изготовлении хлебобулочных изделий, выявлены особенности их влияния на свойства клейковины, крахмала, жизнедеятельность дрожжей; на технологические параметры и качество готовых изделий.

Впервые определены факторы, влияющие на соотношение и выход продуктов в процессах этерификации, глицеролиза и ацидолиза, катализируемых липазой Л/г. огугае 1403, в водной и органических средах.

Новизна исследований защищена 1 авторским свидетельством и 3 патентами.

Практическая значимость. Полученный экспериментальный материал позволил сформировать рекомендации по практическому приложению микробных липаз и липоксигеназ; определить рациональные условия проведения ферментативных процессов гидролиза и транеэтерификации триацилглицеролов для модификации жиров и масел и области практического использования получаемых продуктов конверсии.

Разработана технология культивирования продуцента липазы ЯЫгорш огугае 1403 и технология ферментного препарата липазы с высоким выходом -62,3

% и активностью 27,5 ед./мг. Способ биосинтеза липазы запатентован (Патент 2397247 РФ).

Получен иммобилизованный препарат липазы, отличающийся высокой трансферазной активностью - 385 ед./г и стабильностью в органических растворителях. Высокая активность препарата, позиционная специфичность и широкий спектр сродства к жирным кислотам позволили рекомендовать его для получения разнообразных продуктов путем энзимной переэтерификации.

Установлены режимы проведения гидролиза жировых продуктов, позволяющие получить жиры с функциональными свойствами для технологии хлебопечения. Разработаны технологии хлебобулочных изделий на основе ферментированных жиров и сдобных изделий с использованием липазы и растительной липоксигеназы (A.C. 1405130). Производственные испытания этих технологий на хлебозаводах (г. Воронеж) булочно-кондитерском комбинате (г. Санкт-Петербург) подтвердили получаемый положительный эффект. Получен диплом 4-й Международной выставки «Современное хлебопечение. Сладкоеж-ка-2000», г. Воронеж.

Получен препарат липоксигеназы, отличающийся высокой активностью и низким уровнем окисления ß-каротина (Патент 2233324 РФ); комплексный препарат липазы и липоксигеназы с высокой активностью обоих ферментов (Патент 2233325 РФ). Эти препараты рекомендованы для использования в хлебопекарной промышленности.

Показана перспективность использования иммобилизованной липазы Rhi-zopus oiyzae 1403 для получения жиров с повышенным содержанием моно- и днацилглицеролов (МАГ и ДАГ) путем этерификации или глицеролиза растительных масел.

Доказана возможность получения низкокалорийных жиров с помощью ацидолиза растительных масел. Оптимизирован процесс ацидолиза подсолнечного масла с каприновой кислотой, что позволило увеличить включение кислоты до 91,8 % от максимального возможного и сократить длительность процесса в 2-3 раза.

Предлагаемые технологии модификации растительных масел успешно апробированы в производственных условиях на предприятии ЗАО «ГК Масло-продукт» (г. Воронеж).

Личный вклад соискателя. Личное участие автора являлось основополагающим на всех стадиях работы и состояло в формировании научных направлений, постановке задач и целей исследований, организации эксперимента, анализе и обработке результатов, подготовке материалов к опубликованию, проведении производственных испытаний.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы были доложены на 35-ти научных конференциях, в том числе: на симпозиуме «Биотехнология микробов» (Москва, 2004); на Всероссийском конгрессе диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье» (Москва, 2009); на международных и всесоюзных конференциях: «Техника и технология пищевых производств» (Могилев, 1998, 2005), «Биотехиологические процессы переработки сельскохозяйственного сырья» (Москва, 2002), «Пищевые технологии и биотехнологии»

(Казань, 2009, 2010), «Технологии и продукты здорового питания. Функциональные пищевые продукты» (Москва, 2009), «Управление торговлей: теория, практика, инновации» (Москва, 2009), «Аналитические методы измерений и приборы в пищевой промышленности. Экспертиза, оценка качества, подлинности и безопасности пищевых продуктов» (Москва, 2009), «Идентификация фальсифицированных пищевых продуктов. Контроль содержания и безопасности наночастиц в продукции сельского хозяйства и пищевых продуктах» (Москва, 2009), «Потребительский рынок: качество и безопасность товаров» (Орел, 2010), «Актуальные проблемы потребительского рынка товаров и услуг» (Киров, 2009, 2011), «Потребительский рынок: качество и безопасность товаров» (Орел, 2011), «Новости научной мысли» (Прага, 2011), «Наука и технологии: шаг в будущее» (Прага, 2012).

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 72 работы, в том числе 16 статей в журналах, рекомендованных ВАК; 2 монографии; получено 1 авторское свидетельство и 3 патента РФ на изобретения.

Структура и объем работы. Диссертационная работа включает введение, обзор литературы, экспериментальную часть, выводы, список использованной литературы и приложения. Содержание работы изложено на 336 страницах основного текста, включающего 45 таблиц и 91 рисунок, и 8 приложений. Список литературы включает 663 источника, в том числе 451 иностранных.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность решаемой проблемы, доказана необходимость проведения исследований в направлении скрининга липолити-ческих ферментов с соответствующими свойствами для биоконверсии природных триацилглицеролов с получением жировых продуктов с функциональными свойствами.

Глава 1. Состояние проблемы и постановка задач исследования

В представленном обзоре научной и технической литературы по теме диссертации обобщены достижения, накопленные к настоящему времени в области энзимной переэтерификации ТАГ для получения специализированных жиров; изучения липолитических ферментов микроорганизмов.

Энзимная переэтерификация не только исключает образование токсичных трансизомеров жирных кислот, но имеет ряд преимуществ со стороны технологической оценки готовых жировых продуктов. За счет высокой пластичности, способности кристаллизоваться в устойчивой Р'-форме они могут быть использованы в качестве жировой основы маргаринов, заменителей молочного жира, начинок для различных кондитерских изделий. Становится решаемой проблема получения заменителей какао-масла. Использование переэтерифицированных масел в технологии пшеничного хлеба позволяет улучшить реологические свойства теста, физико-химические и органолептические показатели хлеба по сравнению с применением растительных масел и традиционных маргаринов.

Ферментативная переэтерификация незаменима для получения диетических жировых продуктов. Согласно современным представлениям науки о пи-

тании переваривание и метаболизм жиров определяется как распределением жирных кислот в молекуле ТАГ, так и соотношением молекулярных масс его компонентов. Так называемые симметричные триацилглицеролы ABA типа, где А - жирная кислота со средней цепью, а В - длинноцепочечпая ненасыщенная жирная кислота, важны для больных с нарушениями пищеварения. Они чрезвычайно редки, и их трудно получить химическим синтезом. Большое внимание уделяется низкокалорийным жирам. Главный подход в этой технологии — это определенное распределение стеариновой кислоты и низкомолекулярных жирных кислот.

Известно создание диетических продуктов на основе ферментативного гидролиза - образующиеся диацилглицеролы (ДАГ) уменьшают факторы атеросклероза кровеносных сосудов, подавляют различные дегенеративные болезни. Технологические свойства ДАГ характеризуются эмульгирующими свойствами, что необходимо в процессе приготовления майонеза, молочных продуктов, в хлебопечении.

Однако множество проблем связано с использованием липаз в микроводных и органических средах. Во-первых, это солюбилизация фермента в масле. Во-вторых, липазы показывают более низкую скорость переэтерификации (в сотни и тысячи раз) по сравнению с гидролизом; органические растворители могут оказывать на них отрицательное действие. Остро в этом случае стоит проблема длительного использования фермента или его восстановления. Поэтому предпочтение отдается иммобилизованным препаратам. Иммобилизация липаз проводится различными способами, но преимущество имеет адсорбция как наиболее простой и экономичный. Основным недостатком энзимной переэтерификации является длительность процесса. Отечественными препаратами масложнровая промышленность не располагает.

Таким образом, необходимо получение липолитических ферментов с высокой трансацилирующией активностью, стабильностью, что позволит сократить длительность процессов энзимной переэтерификации жиров и улучшить экономические показатели производства. Это требует комплексной оценки ферментативных процессов и решения ряда технологических задач:

- направленный выбор продуцентов ферментов;

- определение условий получения препаратов в растворимой и иммобилизованной формах;

- исследование физико-химических свойств липаз, стабильности, специфичности;

- разработка направлений использования полученных препаратов.

В рамках проведения комплексной оценки эффективности ферментативной модификации растительных масел были проведены серии экспериментов для установления рациональных режимов проведения различных процессов гидролиза и транеэтерифнкации и разработке технологических решений по их применению.

Общая структура исследований представлена на рис. 1.

Рисунок 1 - Структурная схема проведенных исследований

Глава 2. Материалы и методы исследований

Объектами исследования служили микромицеты различных родов, ферменты липаза и липоксигеназа, продуцируемые этими микроорганизмами. В работе использованы различные общепринятые и специальные методы исследования -микробиологические, физические, физико-химические, биохимические, в том числе хроматография липидов (тонкослойная, газовая, высокоэффективная жидкостная), хроматография белков (гелевая и ионообменная), спектрофото-метрия, электрофорез, фотоколориметрия, а также методы оценки качества полуфабрикатов и готовых продуктов, принятые в хлебопекарной промышленности. Исследования проводили не менее чем в 3-х кратной повторности, обработку экспериментальных данных осуществляли методами математической статистики. Для оптимизации процессов применены методы математического планирования эксперимента.

Глава 3. Выбор активного продуцента липазы. Исследование особенностей биосинтеза липолитического комплекса из Rltizopus oryzae 1403

Опыт исследования липолитических ферментов микроорганизмов показывает, что штаммы одного и того же вида могут различаться как по уровню биосинтеза, так и по свойствам фермента.

С целью получения активного продуцента липазы нами было проверено 68 штаммов микроскопических 1рибов из родов Aspergillus, Rhizopus, Mucor и др. в условиях глубинного культивирования. Чистые культуры микроорганизмов были получены из Всероссийской коллекции микроорганизмов и из коллекции почвенных микромицетов кафедры биологии растений и животных ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный педагогический университет».

Одновременно с липазной (ЛА) проверялась липоксигеназная активность (ЛО) с целью выявления продуцентов ферментных препаратов целевого назначения - для хлебопечения. Положительная роль ферментов липазы и липокси-геназы в приготовлении теста из пшеничной муки известна. В связи с этим перспективна биоконверсия жировых рецептурных составляющих при совместном действии этих ферментов.

Высокая активность липазы была обнаружена у Rhizopus oryzae 1403 (49,8 ед./см3), липоксигеназы - у Rh. oryzae 605 (105,6 ед./см') (Пат. 2233324 РФ); Rh. microsporus var. chinensis 1062 синтезировал оба фермента на достаточно высоком уровне (ЛА=33,7 ед./см3; Л0=70,4 ед./см3) (Пат. 2233325 РФ).

Дальнейшие исследования посвящены продуценту липазы Rhizopus oryzae 1403. Установлено, что он образует липоксигеназу с активностью 26,1 ед./см3 и является продуцентом главным образом зкзоформ ферментов, так как внутри-мицелиальные JIA и ЛО составили 3,0 и 8,5 % соответственно от внеклеточной активности.

Глубинный способ культивирования продуцента был намного эффективнее, чем поверхностный, при котором ЛА в расчете на 1 г СВ экстракта по сравнению с фильтратом культуральной жидкости была в 55 раз меньше.

Исследования физиологических особенностей Rhizopus oryzae 1403 показали, что оптимальными условиями для роста и биосинтеза липазы являются

температура 30 °С и рНнач 7,0. Продуцент нуждался в восстановленной форме азота. Углеводы - moho-, олиго-, и полисахариды; многоатомные спирты подавляли биосинтез липазы. Добавление в питательную среду органических источников азота (пептона, казеина и БВК), а также продуктов животного происхождения (кровяной, мясо-костной и рыбной муки) значительно интенсифицировало рост Rh. oryzae 1403 и его биосинтетическую активность. Лучшие результаты получены на средах с соевой мукой, которая может быть заменена на соевый жмых; и с рыбной мукой. На фоне среды с соевым жмыхом уровень J1A повышали на 13-16 % некоторые соли (MgS04, Na2HP04), а из факторов роста-кукурузный экстракт.

Биосинтез липазы Rh. oryzae 1403 индуцировался как субстратами - триа-цилглицеролами, так и продуктами их гидролиза - жирными кислотами и их производными - твинами. Активность по сравнению с пептонно-солевой средой увеличивалась в 2,3-4,0 раза (табл. 1).

Таблица 1 - Влияние индукторов на биосинтез липазы Rh. oryzae 1403

Индуктор Массовая доля, % ЛА, ед./см3 ЛА, %

Среда без индуктора - 12,0 100

Масло оливковое 0,5 42,6 355

Олеиновая кислота 0,5 41,8 350

Линолевая кислота 0,5 27,8 230

Твин 20 1,0 33,6 280

Твин 40 1,0 43,7 360

Твин 60 1,0 39,3 330

Твин 80 1,0 47,4 395

На биосинтез липаз микроорганизмами могут оказывать влияние поверхностно-активные вещества. Однако эти сведения весьма противоречивы. Исследование влияния различных ПАВ на биосинтез липазы Rh. огугае 1403 проводились па фоне среды с соевым жмыхом (2 %), кукурузным экстрактом (1,0 %), (МН4)2НР04 (0,5 %) и подсолнечным маслом (0,5 %). Результаты, представленные в табл. 2, показывают, что поливиниловый спирт и фосфатидный концентрат оказывали слабое влияние на биосинтёз липазы микромищетом.

Таблица 2 - Влияние ПАВ на биосинтез липазы Rh. oryzae Г403

Наименование ПАВ Массовая доля ПАВ, % ЛА, ед./см3 ЛА, %

Среда без ПАВ - 66,8 100

Поливиниловый спирт 0,1 70,5 105

Фосфатидный концентрат 0,1 69,7 104

Тритон Х-100 0,01 90,2 135

Тритон Х-305 0,01 217 325

Тритон Х-405 0,01 63,5 95

Бридж 35 0,01 23,4 35

Бридж 58 0,01 20,1 30

Отрицательное действие проявлял бридж. Тритоны сильно отличались по эффекту. При добавлении тритона Х-305 удалось повысить активность фермента в 3,25 раза.

Для некоторых продуцентов липаз установлено наличие нескольких изо-форм этого фермента. Они отличаются структурой, молекулярной массой, каталитическими свойствами, стабильностью. Множественность изоформ липаз может быть обусловлена изменениями в экспрессии генов, различным количеством ковалентно связанных углеводов, частичным протеолизом и другими трансляционными модификациями.

Исследования состава липолитического комплекса ЛИ. огугае 1403 при культивировании на средах с добавлением различных индукторов и без них показали, что на пептонно-солевой среде и с твином 20 образовывалась одна форма липазы. При введении в питательную среду оливкового масла, олеиновой кислоты и других твинов синтезировалась еще одна форма липазы. Таким образом, с большой достоверностью можно утверждать, что микромицет Шг. огугае 1403 способен синтезировать два липолитических фермента. По всей видимости, в данном случае происходит контроль на уровне экспрессии генов липазы.

На основании проведенных исследований установлено, что высокая липо-литическая активность НИ. огугае 1403 наблюдалась на среде с соевым жмыхом, подсолнечным маслом, кукурузным экстрактом, (ЫН^ШЧ^ и тритоном Х-305. Оптимизация состава питательной среды с помощью математических методов планирования позволила увеличить активность комплексного препарата до 352 ед./см1, что в 7 раз выше по сравнению с исходной средой. Максимум ЛА в культуральной жидкости наблюдался к 60 ч выращивания.

Глава 4. Получение препаратов липазы ЛИкврм огугае 1403 и исследование их физико-химических и биохимических свойств

Разработка технологий получения препаратов липазы. Препараты липазы ГЗХ и Г10Х были получены на основе ультрафильтрации и осаждения органическими растворителями.

При ультрафильтрации потери активности составили около 2 %, степень очистки — 2,2.

Токсикологическая экспертиза этого препарата установила, что он не обладал токсическим действием.

Исследования по осаждению липазы органическими растворителями показали, что на полноту выделения значительное влияние оказывает рН. Оптимальная зона находилась в пределах рН 5,5-6,0; кроме того, при подкислелии фильтрата культуральной жидкости до рН 5,5 часть балластных белков выпадала в осадок и удельная активность увеличивалась в 1,08-1,1 раза. Всеми органическими растворителями липаза ЯЬ. огугае 1403 осаждалась монотонно с последовательным увеличением их концентрации, соответственно, выход фермента возрастал до определенного предела, а удельная активность снижалась (рис. 2). Анализ полученных результатов показал, что лучшим осадителем для липазы Л/г. оуучас 1403 является ацетон - при концентрации его в смеси 70 % выход липазы составил 62,3 %, степень очистки - 1,88.

Значительное влияние на выход препаратов оказывала сушка. Распылительная сушка при температурных режимах 190-195 °С и 1ВЬ1Х 85-90 °С давала потери до 25 %. Поэтому температура была максимально снижена на входе до 140-145 и 70-75 °С на выходе. При этом потери активности удалось довести до 11-12% (табл. 3).

Соотношение объемов растворителя и культуральной

Рисунок 2 - Влияние концентрации растворителей на осаждение липазы: (0) ацетон; (□) изопропанол; (Д) этанол; светлые значки - ЛА в осадке, темные значки - удельная ЛА

Таблица 3 - Получение препаратов липазы путем осаждения органическими растворителями _ ._

Растворитель Масса препарата, из 1 дм3 Распылительная сушка Сублимационная сушка

ЛА, ед./мг Выход, % Потери, % ЛА, ЄД./МГ Выход, % Потери, %

Этанол 7,6 9,8 21,3 12,0 10,7 24,4 1,0

Изопропанол 7,4 18,9 40,2 11,2 20,7 46,5 0,9

Ацетон 7,5 24,9 52,8 11,0 27,5 62,3 1,0

Определены оптимальные параметры процесса вакуум-сублимационной сушки: температура замораживания - минус 12 - минус 15 °С, скорость охлаждения - 0,01 °С/мин, температура на стадии сублимации - 30-35 °С.

Активность препаратов липазы ЛЫгорт огугае 1403 Г10Х, полученных в результате осаждения фермента из ультрафильтрата культуральной жидкости ацетоном, составила 24,9 ед./мг при распылительной сушке и 27,5 ед./мг - при сублимационной. Препарат содержал незначительные примеси липоксигеназы -50 ед./г, протеазы - 7,1 ед./г и целлюлазы - 5,0 ед./г; амилазная, глюкоамилаз-ная активность не были обнаружены.

Технологическая схема получения препаратов липазы представлена на рис. 3.

Рисунок 3 - Схема получения препаратов липазы ЯИ. оіугае 1403

Получение высокоочшценных препаратов липазы. Ферментный препарат, полученный в результате ультрафильтрации и последующего осаждения, подвергали гель-фильтрации на Sephadex G-150. Липаза элюировалась одним пиком; при элекгрофоретическом анализе в нем обнаруживалось две белковые фракции с липолитической активностью. Разделение липаз Rhizopus oryzae 1403 проводили с помощью ионообменной хроматографии на DEAE Cellulose 52. Для элюции был применен ступенчатый градиент концентрации NaCl от 0,1 до 0,9 М, так как в ряде случаев он оказывался более эффективным, чем линейный. Кроме того, в элюирующий буфер был добавлен тритон Х-305 0,1 %. Таким способом удалось разделить две изоформы фермента. Одна из них элюировалась раствором NaCl с концентрацией 0,1 М (фракция 1), а другая - 0,7 М (фракция И). Повторная гель-фильтрация через Sephadex G-100 позволила повысить кратность очистки до 42,0 и 25,0 с выходом по активности5,8 и 8.8 % для I и II фракции соответственно (табл. 4). Далее они были названы как Липаза I и Липаза II.

Таблица 4 - Характеристика этапов очистки липаз Rh. oryzae 1403

Этапы очистки Количество белка, мг Липазная активность Выход, % Степень очистки

общая удельная, ед/мг по активности по белку

Фильтрат культуралыюй жидкости 820 70800 86 100,0 100,0 1,0

Ультрафильтрация 367 69380 190 98,0 44,8 2,2

Осаждение ацетоном (1:2,5) 112 42340 380 59,8 15,0 4,4

Гель-фильтрация в-150 42 22230 530 31,4 5,0 6,2

Хроматография на ДЕАЕ-52 I 2,9 6940 2400 9,8 0,35 27,9

II 6,7 11116 1650 15,7 0,82 19,2

Гель- фильтрация G-100 I 1.14 4100 3600 5.8 0.14 42.0

II 2.9 6230 2150 8.8 0.35 25.0

Молекулярная масса Липаз I и И, определенная гель-фильтрацией на Sephadex G-150 и методом электрофореза в присутствии SDS, была практически одинаковой и равнялась 44±2 кДа.

Изоэлектрические исследования изоформ липазы Rh. oiyzae 1403 показали, что pl Липазы I равна 3,0, а Липазы II — 4,2. Между изоформами наблюдалось большое соответствие в аминокислотном составе за исключением аминокислот с положительно и отрицательно заряженными радикалами - отношение (GIx + Asx) к (Lys + Arg) для Липазы I составило 3,2, для Липазы II - 2,2, что согласуется с их изоэлектрическими точками.

Оптимальные условия действия изоферментов были следующими: температура 35 °С и значение рН для Липазы I - 6,5; для Липазы II - 6,0.

Определение функциональных групп липаз и расшифровка механизма их действия. Известны многочисленные исследования по расшифровке строения активного центра микробных липаз, особенностей механизма их действия, поверхностной активации. Для этого используются методы химической модификации, сайт-направленного мутагенеза, молекулярного моделирования. Установлено, что большинство липолитических ферментов действуют как серино-вые гидролазы с триадой Ser-Gis-Asp в активном центре. Кислотный остаток аспарагиновой кислоты триады в гидролитических ферментах, катализирующих расщепление сложных эфиров, может быть заменен глутаминовым, как показано при определении структуры липаз Geolrichum candidum, Candida rugosa. Однако липаза Burkholderia sp. является тиоловьш ферментом, имеющим в активном центре цистеин. Наряду с этим обнаружена липаза из Mitcor hiemalis f. hiemalis, каталитическая активность которой остается неизменной при воздействии как модификаторов серина, так и цистеина.

Для идентификации остатков аминокислот липаз Rhizopus oryzae 1403, участвующих в катализе, была проведена модификация ферментов специфичными реагентами с привлечением кинетического анализа ингибирования.

Липаза I исследовалась в реакции пиролиза, в качестве субстрата был взят трибутирин. Начальная скорость определялась по накоплению свободных жир-пых кислот в первые 7-10 мин.

Зависимость начальной стационарной скорости процесса от концентрации субстрата имеет вид уравнения Михаэлиса

i)=k2-Cs,o-CE.o/(KM + Cs,o), (1)

где кг - эффективная константа; Км - константа Михаэлиса; С5 0 и СЕ,о -начальная концентрация субстрата и фермента соответственно.

Зависимость (lg 1 /к:, рН) позволила установить рК ионизирующихся групп фермента - рК|=5,2 и pKi=6,9. Первое значение близко к карбоксильной группе, второе — к гистидину. рК гистидина подтвердилась в эксперименте с фотоокислением Липазы I, проведенного при рН 5,5-7,5 и температурах 25, 30, 40 °С: были получены значения рК=6,51, и теплоты ионизации ДН=29,1 кДж/моль.

Однако инактивация ферментов в процессе фотоокисления в зависимости от температуры и рН может происходить как вследствие разрушения остатков гистидина, так и нарушения общей молекулярной структуры белка. Поэтому для выяснения роли остатков имидазола гистидина в функционировании Липазы 1 её модифицировали диэтилпирокарбонатом (DEP), который может реагировать в белках с имидазолом гистидина и с ОН-группами тирозина. Для Липазы 1 установлено увеличение светопоглощения при 242 им, что указывает на взаимодействие DEP с гистидином; при длине волны 278 нм, характерной для тирозина, уменьшение поглощения было крайне незначительным. Расчеты констант инактивации фермента при различных концентрациях ингибитора и преобразование значений в полулогарифмических координатах позволило установить, что порядок реакции, определенный по тангенсу угла наклона прямой

Р) равен 1,05, что указывает на участие в реакции не более одного остатка гистидина (рис. 4).

Подтверждение участия карбоксильных групп в каталитическом действии Липазы I проведено с помощью 1-этил-3(3-диэтил-аминопропил)карбодиимид гидрохлорида (ЕОС) в присутствии этилового эфира глицина. Известно, что карбодиимиды способны реагировать с другими аминокислотными остатками. Аминогруппу лизина можно исключить из-за ее высокого рК, который будет препятствовать реакции в условиях данного эксперимента.

-1 -1,2 -1,4

I

-1.6 -1,8-

О 5 10 16 20 Время, МИН

-0,6 -0,5 -0,4 -0,3 -0,2 -0,1 0 0,1 0,2 доер]

Рисунок 4 - (а) Спектры поглощения липазы, модифицированной БЕР (2,5-10"3М); (б) определение порядка реакции

С тирозином и гистидином карбодиимиды образуют устойчивые к кислотному гидролизу соединения. Но аминокислотный анализ модифицированного фермента показал, что количество этих остатков не изменяется. Установлено, что уменьшение скорости гидролиза трибутирина сильно зависело от концентрации водородных ионов (рис. 5), значение рК группы равнялось 5,0.

Время, мин

Рисунок 5 - (а) Зависимость скорости гидролиза трибутирина Липазой I, модифицированной ЕЭС при различных значениях рН: (х) 6,4; (Д) 6,0; (□) 5,4; (0) 4,6; (б) определение рК модифицированной группы

Если карбодиимиды реагируют с серином, как в случае с химотрипсином, то активность полностью восстанавливается гидроксиламином. Добавление к

инактивированной Липазе I №12ОН не дало такого эффекта. Таким образом, полученные результаты позволяют утверждать, что за инактивацию Липазы I ЕГ)С отвечают именно карбоксильные группы. Отсутствие инактивации без эфира в реакционной среде и экранирование фермента субстратом свидетельствовало об отсутствии внутримолекулярных взаимодействий, которые может вызывать ЕЭС. При практически полной потере активности в данном ферменте модифицировалось 11 карбоксильных групп (рис. 6). При условии псевдопервого порядка реакции получили, что для проявления активности необходимо не менее трех групп.

100« 80 -

н 60-

н

о

? 40 ■

>

20-

0<

<

Время, мни

Рисунок 6 - Ингибирование Липазы I карбодиимидом и включение глицина в молекулу фермента

Для выяснения механизма действия ЕБС па липазу были определены кинетические параметры гидролиза трибутирина и триолеина. мало отличались на обоих субстратах; Км на трибутирине увеличилось в 1,47, а на триоле-ине - в 1,18 раз. Соответственно в большей степени на трибутирине уменьшилась каталитическая эффективность - в 2,8 раз против 2,15 на триолеине. Это приводит к выводу, что карбоксильные группы отвечают за создание активной конформации фермента при связывании с определенным субстратом.

Анализ кинетических параметров гидролиза трибутирина Липазой 1, модифицированной различными ингибиторами, показал, что БЕР вызывал уменьшение Угаах, и-хлормеркурибензоат (н-ХМБ) - реагент на сульфгидриль-вые группы - увеличение Км; фенилметансульфонилфторид (РМЭР) - специфический ингибитор сериновых ферментов, и ЕВ С приводили к изменению обеих констант Михаэлиса (табл. 5).

Это говорит о том, что в соединении фермента с субстратом участвует сразу несколько областей молекулы фермента, каждая из которых имеет ключевые аминокислотные остатки и поэтому блокирование одной из групп может привести к искажениям конформации, что делает ее менее благоприятной для связывания с субстратом и для диссоциации фермент-субстратного комплекса.

Таблица 5 - Изменения кинетических параметров реакции гидролиза трибути-рина Липазой I в присутствии различных модификаторов_

Модификатор Относительные величины, %

Утах Км

Нативный фермент 100,0 100,0

ЭЕР 39,5 98,8

ЕЭС 52,1 145,5

РМЯР 36,4 134,1

п-ХМБ 95,2 128,4

Для исследования роли остатка серина в катализе была проведена модификация липазы ингибиторами, которые являются аналогами субстратов - п-гексил-этил-хлорофосфонатом и додецилсульфонатом и проведен кинетический анализ ингибирования (рис. 7).

а б

0,35 ■

2 0,3-

я

I 0,25 ■ 1/

ъ 0,2-

0,15 •

г

Л 0,1 ■

1 ■ тт 0.05; 11111 ■ ■ ■ ■ 1111 ■ 1 ■ 1111

-1.00 -0,50 0,00 0,50 1,00 1.50 2,00 1/[Б]о, ММ"'

Рисунок 7 - Кинетические зависимости ингибирования Липазы I (а) п-гексил-этил-хлорофосфонатом и (б) додецилсульфонатом в двойных обратных координатах; (■) нативный фермент; (♦), (А) с ингибиторами

Исходя из трехстадийного механизма ферментативной реакции гидролиза

(2)

к» к2 къ Е + ЭяХ ЕА -+■ Е+Р-,

Л

были рассчитаны индивидуальные константы к2 и к3 из соотношений

_к3-кз 3

сс" ~ к2+к3 ' { '

(4)

' к-, + к.

Для фосфоната они были равны: кг=4,2 с"1 и к3=7,6, то есть в данном случае ингибировалась стадия ацилирования. Для сульфоната соотношение между константами было обратным - £¿=18,5 с"1 и к3=3,2, что свидетельствует о подавлении стадии деацилирования.

При исследовании изоформ липаз в реакциях гидролиза триолеина и эте-рификации олеиновой кислоты и глицерина обнаружены близкие потери активности под действием специфических ингибиторов (табл. 6). Поэтому можно утверждать, гидролиз и трансэтерификация являются обращением одного и того же механизма.

Таблица 6 - Влияние ингибиторов на активность изоформ липаз Rh. oryzae 1403 в реакциях гидролиза и этерификации__

Реакция Остаточная активность, %

DtiP | EDC | PMSF

Липаза I

Гидролиз 32,4±1,5 48,2+2,4 29,8±1,4

Этерификация 33,8+1,6 46,7±2,2 30,5+1,5

Липаза IJ

Гидролиз 48,7+2,4 32,2+1,6 67,3±3,3

Этерификация 47,5±2.2 31,5+1,5 68,9+3,4

Представленные данные по идентификации остатков аминокислот Липазы I и ингибированию обеих изоформ липаз согласуются с известным механизмом, который предполагает, что нуклеофильная атака на карбонильный углерод эфирной связи осуществляется остатком серина, активизированным через сеть водородных связей гистидином и аспарагиновой кислотой. Сложноэфирная связь разрывается и образуется промежуточный интермедиат - ацил-фермент. Деацилирование происходит в результате нуклеофильной атаки молекул воды через формирование второго тетраэдрального промежуточного соединения. Когда липаза действует в среде с пониженной активностью воды, другие нуклео-фильные группы являются конечными акцепторами ацила (в трансферазных реакциях).

Исследование субстратной специфичности липолитического комплекса Rhiiopus oryzae 1403. Позиционную специфичность липаз оценивали по PSI (positional specifity index), вычисляемого по соотношению диацилглицеролов (DG, %), образующихся за 1 ч гидролиза триолеина:

PS! =

j(2,3)DG-l,3DGx2][00 (5)

l,2(2,3)£>G + l,3£>Gx2] Полученные данные (табл. 7) позволяют отнести обе изоформы липаз Rhizopus oryzae 1403 к позиционно специфичным, так как согласно данной методике строго 1,3-специфичные липазы имеют PSI +100, у неспецифичных липаз значения PS1 находятся в пределах от +30 до -20, к третьей группе относят несовершенные 1,3-специфичные липазы (т. е. скорее специфичные, чем неспецифичные) с PSI от +80 до +70.

Таблица 7 - Определение позиционной специфичности липаз ЯЫгорт оцъае 1403 __

Фермент Массовая доля продуктов гидролиза, % РЭ1

1,2(2,3 )-диацилглицеролы 1,3-диацилглицеролы

Липаза 1 9,76 ± 0,29 0,49 ±0,01 +81,8

Липаза 11 6,74± 0,38 0,13 ±0,01 +92,6

Для определения специфичности липаз к строению жирнокислотного остатка использован метод, предусматривающий гидролиз метиловых эфиров жирных кислот, полученных из натуральных жиров, и расчет коэффициента К(РА):

(6)

где [ГА]р и - концентрации жирных кислот во фракциях свободных жирных кислот и их метиловых эфиров соответственно.

В качестве исходных субстратов были выбраны молочный и рыбий жир, льняное, горчичное и касторовое масла, имеющие характерный жирнокислот-ный состав. Анализ полученных данных показал, что обе формы липазы ЯИаорш огугае 1403 проявляют предпочтительность к жирным кислотам со средней длиной цепи. Такая тенденция наблюдалась на всех маслах. В пределах длины углеводородной цепи 14-18 явно была выражена специфичность к ненасыщенным жирным кислотам с одной и двумя двойными связями (рис. 8).

(а) (б)

Жирные кислоты Жирные кислоты

Рисунок 8 - К(ГА) для жирных кислот при гидролизе метиловых эфиров, полученных из молочного жира (а) и рыбьего жира (б) Липазой I (о) и Липазой II (м)

Линоленовая кислота являлась менее предпочтительной, так же как и ри-цинолевая. Это говорит о том, что наличие большого количества (больше двух)

двойных связей и оксигруппы может создавать стерические помехи при соединении фермента с субстратом. Отмечено, что Липаза I имеет более выраженную специфичность.

Различия в скорости высвобождения олеиновой и масляной кислот составили у Липазы I - 4-5 раз, у Липазы Л - 1,3-1,8 раза; олеиновой и докозагекса-еновой кислот - 21,1 и 4,7 раз соответственно. Такие различия в специфичности изоформ продуцента объясняют тот факт, что препарат липазы Г10Х способен к гидролизу широкого спектра природных жиров и масел.

Иммобилизация липазы и физико-химические свойства иммобилизованного фермента. Для расширения возможностей биоконверсии липидов необходима иммобилизация липолитических ферментов, так как она не только позволяет многократно их использовать, но и увеличивает их стабильность в системах с органическими растворителями. Для иммобилизации липазы Мигорт огугае 1403 были выбраны носители, используемые в пищевой технологии - стиро-сорб МЭР ЮО(ЦГ) и анионит АВ-17-2П. Установлено, что перспективным носителем для фермента является стиросорб, так как эффективность связывания липазы с ним составила 57,3 %, С анионитом она не превышала 23 %.

Исследования адсорбции фермента на стиросорбе показали, что равновесие устанавливается к 40 мни для белка и к 60 мин для активности. Таким образом, липаза со временем вытесняет другие белки с поверхности носителя; адсорбционный коэффициент составил 1,25. Установлена оптимальная температура адсорбции - 30 °С. Адсорбционные константы, полученные при различных рН, мало отличались. Это дало основание предположить, что определяющую роль в связывании липазы со стиросорбом играют гидрофобные взаимодействия.

Кинетика связывания липазы с носителем изучалась с помощью смешанного уравнения Колмогорова, Ерофеева, Казеева, Аврами и Мампеля (КЕКАМ)

о^1-ехр(-А:-т"), (7)

где а - степень преобразования {{А]1[А]тзх, в единицах активности); к -константа скорости адсорбции; п - специфический кинетический параметр.

Применение модели КЕКАМ позволило нам получить прямолинейные зависимости (рис. 9). Значения констант для различных температур и энергии активации приведены в табл. 8. Параметр п рассматривается как критерий, определяющий ход гетерогенных реакций. Значения п для белка были 0,91-0,97, а для липазы - больше единицы, что говорит о том, что скорость адсорбции фермента лимитируется взаимодействием с поверхностью сорбента. При различных температурах значения п мало отличались, что свидетельствует о незначительном влиянии ее на механизм связывания.

Таблица 8 - Значения кинетических параметров и энергии активации для ад-сорбцин липазы Ш. огугае 1403 на стиросорбе__

Температура, "С п к, цс Еа, кДж-моль"'

4 1,19 15

23 1,15 23 17,96

30 1,13 28

-0,5 -1 -1.5

2

~ -2,5

-3 -3,5 -4 -4,5 -5

1

5 5,5 6 6,5 7 7,5 8 8,5 9 1пт

Рисунок 9 - Кинетические зависимости в координатах уравнения КЕКАМ для адсорбции липазы при различных температурах: (1) 30 "С; (2) 23 "С; (3) 4 "С

Низкая энергия активации говорит о высоком аффинном сродстве липазы Як. огугае 1403 к стиросорбу.

Таким образом, проведенные исследования показали, что для достижения максимальной сорбции липазы на стиросорбе ее нужно проводить при температуре 30 "С и рН 6,5 в течение 60 мин.

Гидролитическая активность иммобилизованного фермента составила 1350 ед./г носителя, активность переэтерификации - 385 ед./г. Исследования влияния рН и температуры на каталитическую активность препарата показали, что оп-тимумы его действия не отличаются от растворимой формы фермента - это рН 6,5 и 35 °С.

Иммобилизованный препарат отличался более высокой устойчивостью в органических средах. Полярные растворители (этанол, ацетон, изопропанол) вызывали инактивацию растворимой липазы при 35 °С за 0,5-2 ч, с то время как у иммобилизованной формы остаточная активность после 10 сут инкубации составляла 17^43 %. В неполярных растворителях (изооктан, гептан, гексан) она оставалась на уровне 98-95 % за тот же период (рис. 10).

Испытания препаратов липазы, лиофилизированных или иммобилизованных из буферных растворов с различными значениями рН, показали, что оптимум их действия в органических растворителях остается неизменным и составляет 6,5. Таким образом, растворители не вносят искажений в состояние ионизации фермента при катализе.

Иммобилизованный препарат показал более высокую термостабильность. Время потери 50 % активности у растворимой липазы составило при 40 °С 72 ч, 50 °С - 4 ч. У иммобилизованной липазы период «полужизни» увеличился вдвое. Особенно высокая термостабильность иммобилизованного препарата отмечена в реакциях этерификации в органической среде. Так, в реакции эте-

рификации в гексане при 50 °С степень конверсии за 8 ч была выше на 10 % по сравнению с 35 °С, длительность процесса сокращалась на 2 ч. В среде без растворителя степень конверсии при 50 °С не превышала 40 % к 2 ч, а затем снижалась в связи с тепловой денатурацией фермента (рис. 11).

Время экспозиции, сут

Рисунок 10 - Стабильность (а) растворимой и (б) иммобилизованной липазы при инкубации в органических растворителях при 35 "С: (♦) метанол, (0) этанол, (□) ацетон, (в) хлороформ, (—) изопропанол; (Д) бутанол, (о) гексан, (+) гептан, (*) изооктан

Время, ч

Рисунок 11 - Влияние температуры на этерификацию глицерина и олеиновой кислоты: (о) 35 °С; (Д) 50 °С ; (■) 60 °С ; (о, Д) система без растворителя; (•, А, ■) в гексане.

Высокая активность и стабильность иммобилизованной липазы позволяет рекомендовать ее для биоконверсии жировых продуктов.

Глава 5. Исследование кинетических параметров реакций гидролиза и трансэтерификации ацплглицеролов, катализируемых липазой в водной и органической средах

Различные типы превращений - как гидролиз, так и трансэтерификация триацилглицеролов под действием иммобилизованного препарата липазы Rh. oryzae 1403 исследованы в водной среде и в системах с органическими растворителями. Несмотря на то, что общие правила управления ферментативным катализом в таких нетрадиционных средах существуют, параметры для каждого фермента нельзя точно предсказать, поэтому они должны быть определены экспериментально.

Кинетические параметры гидролиза гомогенных триацилглицеролов К„„„ и Км были определены с помощью метода двойных обратных координат Лай-нуивера и Берка. Начальная скорость определялась по накоплению свободных жирных кислот. Полученные значения представлены в табл. 9.

Триацилглицеролы с высокой температурой плавления и находящиеся в твердом состоянии при оптимальной температуре действия липазы Rh. oiyzac 1403, не подвергались превращениям. Поэтому их гидролиз был проведен в системе с растворителями с различной полярностью - гексаном (log Р 3,5) и бута-ноном (log Р 0,28).

Таблица 9 - Кинетические характеристики гидролиза триацилглицеролов иммобилизованной липазой Rh. oryzae 1403____

Субстрат Ушах, ЦМВмИН'.Г"' К.цМ Уша'К.И. ҐІ'МИН'1'

Без растворителя

Трибутирии 505±30 8I0±52 0,62±0,04

Трикапроии 620±37 765±46 0,81 ±0,05

Трикапршшн 780±48 620±40 1,26±0,08

Трикаприн 910±54 510±28 1,78±0,1

Триолеин 1810±91 390±25 4,64±0,3

Трилинолеин 2030±110 350±20 5,80±0,4

Растворитель — гексан

Трилаурин 1150±61 720±43 1,60±0,09

Тримиристин 1390±82 980±59 1,42±0,08

Трипальмитин 1520±91 1190±72 1,28±0,07

Тристеарин 1740±104 1450±87 1,20±0,07

Растворител ь - бутанон

Трилаурин 450±32 920±52 0,49±0,02

Тримиристин 720±45 840±48 0,86±0,04

Трипальмитин 890±54 680±10 1,31±0,07

Тристеарин 1020±67 610±35 1,67±0,08

С увеличением длины цепи жирной кислоты в составе ТАГ скорость гидролиза возрастала вне зависимости от системы реакции. Характер изменения К и определялся полярностью среды реакции: в воде и бутаноне значения Ку уменьшались с длиной цепи, а в гексане - увеличивались. Таким образом, в неполярном растворителе требуется преодолеть более высокий энергетический

барьер для связывания субстрата с ферментом. Судя по константам скорости второго порядка - Утах /Км , специфичность к кислотам с большой длиной цепи проявлялась в воде и полярном растворителе; в неполярном растворителе наблюдалось обращение специфичности к длине цепи жирной кислоты. Эффективность гидролиза в бутаноне была ниже в 2,8-3,6 раз по сравнению с водной средой, что объясняется значительным снижением скорости реакции. Уменьшение эффективности гидролиза триацилглицеролов в гексане главным образом связано с возрастанием константы Михаэлиса в 1,4-3,7 раз.

Исследования динамики гидролиза растительных масел липолитическим комплексом ЯИ. огугае 1403 показали, что она отличается от таковой у позици-онно специфичных липаз. В последнем случае при достижении 40 % гидролиза происходит выделение глицерина и его количество монотонно увеличивается. Количество моноацилглицеролов в реакционной смеси при этом начинает уменьшаться. Как видно из рис, 12, глубина расщепления масла для препарата липазы ЯЪ. о1угае 1403 не превышала 37 %, глицерин образовывался в следовых количествах, что можно объяснить миграцией ацила в .уи-2-положение ацилглицерина.

V

\ 1

-----о--о

!— 1 1

0 20 40 60 80 100 Степень расщепления, %

Рисунок 12 - Характер гидролиза растительных масел липазой ЯЬ. огугае 1403: (0) ТАГ; (Ж) ДАГ; (■) МАГ; (о) СЖК; (*) глицерин

В рассматриваемой реакции

ТАГ + Н20 ДАГ + СЖК (8)

создающееся равновесие связано с особенными свойствами данного ферментного препарата, а именно, с высокой трансацилирующей активностью.

Основным фактором, определяющим положение равновесия в рассматриваемой реакции, является содержание воды в реакционной смеси. Изучение систем без растворителей показало, что при увеличении количества воды скорость гидролиза ТАГ монотонно возрастает, а для эгерификации существует некоторый предел, выше которого скорость реакции снижается (рис. 13). При

проведении процессов в среде с органическими растворителями вода в реакционной системе распределяется между ферментом, носителем, растворителем, субстратами и продуктами реакции. Поэтому количество воды становится некорректным параметром. По этой причине в экспериментах по исследованию влияния растворителей на ход реакций трансэтерификации использовался показатель активности воды аи-

3 б

Количество воды в реакционной смеси, %

S

S

Количество воды в реакционной смеси, %

Рисунок 13 - Влияние количества добавленной воды на ход реакций гидролиза триолеина (а) и этерификации глицерина и олеиновой кислоты (б), катализируемых иммобилизованным препаратом липазы Rh. oryzae 1403

Были испытаны растворители смешивающиеся и песмешивающиеся с водой, с различной гидрофобностью, характеризуемой коэффициентом распределения log Р: бутанон (0,28), дипропиловый эфир (1,9), бензол (2,0), гексан (3,5). Зависимость скорости реакции этерификации от а„ была подобна со всеми выбранными растворителями; максимальные ее значения наблюдались в диапазоне а„, 0,5-0,8 (рис. 14).

Снижение скорости реакции при дальнейшем увеличении о„ происходит прежде всего из-за конкуренции между гидролизом и алкоголизом промежуточного соединения - ацил-фермента.

При любой активности воды на скорость трансэтерификации оказывал влияние вид растворителя: в гексане она была выше по сравнению с реакционной системой без растворителя, а более полярные растворители приводили к ее снижению.

Осуществляемые липазой реакции биоконверсии ацилглицеролов, рассматриваемые в настоящей работе, и различия косубстратных систем показаны в табл. 10. Они включают две полуреакцин, в которых образуется тетраэдриче-ский иктермедиат.

ОЦ-----

О 0,2 0,4 0,6 0,8 1

а„.

Рисунок 14 - Скорость этерификации глицерина и олеиновой кислоты, осуществляемой липазой, как функция а„. в системах с органическими растворителями: (♦) гексан; (■) без растворителя; (А) бензол; (□) бутанон; (*) бутанон

Таблица 10 - Различия в косубстратных системах при биоконверсии ацилгли-церолов_

Тип реакции Косубстраты Факторы, влияющие на скорость полуреакций

Донор ацила+Ей»' ацил-Е +Х Ацил -Е+нуклеофилЫ» ашіл-нуклеофил +Е

Этерификация СЖК, глицерин СЖК (Х=Н20) Ацил-Е, глицерин

Глицеролиз ТАГ, глицерин ТАГ (Х=ДАГ) Ацил-Е, глицерин, ДАГ

Ацидолиз ТАГ, СЖК ТАГ, СЖК (Х=Н:0, ЛАГ) Ацил-Е, ДАГ

Переэтерификация ТАГ,,ТАГ2 ТАГ,,ТАГ2 (Х=ДАГ,,ДАГ2) Ацил-Е, ДАГ|, ДАГ2

Как можно ожидать, скорости этих реакций будут различными из-за различий в природе донора ацильной группы и нуклеофила.

Проведены сравнительные исследования реакций этерификации и глице-ролиза в средах с полярным и неполярным растворителями при а„ 0,83. В качестве доноров ацила использовали олеиновую кислоту и триолеин соответственно.

На рис. 15 показаны зависимости начальной скорости этерификации от концентрации олеиновой кислоты и глицерина.

б

1.00 І 0.80 -1 0,60 s 0,40

.§ 0,201 0,00

0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1/[С 18:1], мМ'1

Рисунок 15 - Влияние концентрации олеиновой кислоты (а) и глицерина (б) на скорость реакции этерификации в гексане: (♦) 1 мМ; (в) 2,5 мМ; (А) 5 мМ; (х) 10 мМ; (*) 20 мМ; (в) 50 мМ; (+) 100 мМ; (в) зависимость в двойных обратных координатах

Характер графиков в двойных обратных координатах (1/4-1 /[Л]) свидетельствует о пинг-понговом би-би-механизме реакции с конкурентным ингиби-рованием одним из субстратов - акцептором ацила - глицерином. Ингибирова-ния реакции этерификации олеиновой кислотой не было обнаружено. В этом случае механизм этерификации представляется следующей схемой:

А Р В Q

к,

к..,

к-г k¡

Е \ (EA-&FP) ЕВ

F (FB^-EQ) Е

к, К, <-В

к- 5

Согласно этому механизму начальная скорость может быть описана уравнением

Клч[В)\\ + Щ + Квм[А} + [ЛНВ}

(10)

где А и В - субстраты, донор и акцептор ацила соответственно; К^ и КІ{, кинетические константы Михаэлиса при насыщении В и А; К? - константа ин-гибирования для глицерина.

Установлено, что кинетическая модель реакций не зависела ни от типа донора ацила, ни от вида растворителя.

Кинетические параметры, определенные согласно уравнению (9), представлены в табл. 11. Значения УтаІ в бутаноне составили 44-52 % от У,„ах в гексане, что может быть связано с непосредственным влиянием полярного растворителя на фермент. В бутаноне было затруднено связывание с глицерином как ацил-фермента (Ку), так и свободного фермента {К?). В гексане связывание свободного фермента с олеиновой кислотой (К*{) и глицерином (К^) было сопоставимо, а с триолеином - менее сильным.

Таблица 11 - Кинетические константы этерификации и глицеролиза, катализи-

Растворитель Г7ІЙ.Т, рМ/мин'г Донор ацила, А Акцептор ацила, В

Донор ацила Акцептор ацила , мМ VmixIKil мин"'т"' ХІ0-3 Квк,, мМ К?, мМ ''max ' К у мин"1-ґ' *10"3

Бутанон

Триолеин Глицерин 70±5,6 3,7±0.3 19±1,| 49±3,4 76±4,5 1,4±0,05

С 18:1 Глицерин 46±2,5 5,4±0,3 27±1,2 86±5,4 1,7±0,08

Гексан

Триолеин Глицерин 160±9,6 36± 1,9 4,4±0,6 5,9±0,7 18±1,5 27,1 ±2,0

С 18:1 Глицерин 88±5,4 13±1,1 6,8±0,6 10,3±0,8 22±1,9 8,5±0,7

Скорость реакции этерификации олеиновой кислоты и глицерина была ниже в 1,9-2,3 раза, чем транеэтерификации между глицерином и триолеином и в гексане, и в бутаноне. Отмечено изменение в субстратной специфичности, оцениваемой как отношение (Vmax/KM ТАГ)/(Утах/Км С18:1) от гексана к бута-нону в 5,3 раза. Каталитическая эффективность по отношению к глицерину была значительно выше в гексане, чем в бутаноне.

Кинетика реакции ацидолиза в гексане исследована с точки зрения обращения реакции гидролиза триолеина. Скорость реакции гидролиза в этом случае определялась по убыванию субстрата, а скорость ацидолиза по его образованию в реакции между диолеином и олеиновой кислотой. Определение кине-

тических констант проведено согласно уравнению скорости для пинг-понгового би-би-механизма без ингибирования субстратом, так как оно не наблюдалось. Это уравнение имеет вид

У=__, си)

КАМ[В] +Квм[А] + {А]-[В}

Кинетические константы гидролиза триолеина и синтеза диолеина и олеата приведены в табл. 12. Анализ полученных данных показал, что максимальная скорость гидролиза триолеина в 3,3 раза меньше, чем обратной реакции, но каталитическая эффективность обеих реакций сравнимы, то есть для липазы Д/г. огугае 1403 при выбранных условиях гидролиз не является скорость лимитирующей стадией при ацидолизе.

Таблица 12 - Кинетические константы гидролиза и ацидолиза

Реакция цМ/мин'г К\ь мМ мМ \/ . гг кож А ' тех' Л. м і мин'-г"1 ХІ0-' К*,, мМ

Гидролиз триолеина 158±11 2,7±0,2 58±4,5

Этерификация 517±35 8.5±0,5 61±3,9 48±ЗД

Таким образом, установлено, что кинетические параметры реакций транс-этерификации зависят от природы как донора ацила, так и его акцептора, а также от присутствия растворителя и его полярности. Самая высокая каталитическая эффективность для иммобилизованной липазы КИ. огугас 1403 отмечена в реакции ацидолиза, а наиболее предпочтительным растворителем является неполярный растворитель - гексан.

Глава 6. Практическое использование ферментативной конверсии природных триацилглицеролов

6.1. Гидролизованные жировые продукты и их функциональные свойства в технологии хлебопечения.

Продукты гидролиза жиров липазой Як тугае 1403 - моно- и диацилгли-церолы, жирные кислоты обладают поверхностно-активными свойствами. Проведенные исследования показали, что жиры, модифицированные ферментативным гидролизом, являются достаточно эффективными улучшителями качества хлебобулочных изделий. Увеличивался удельный объем, пористость, эластичность мякиша, замедлялось черствение изделий. По органолептическим показателям опытные образцы соответствовали требованиям нормативной документации. Сокращалась длительность брожения теста в 1,4-1,5 раза.

С целью научного обоснования применения гидролизованного масла в технологии хлебопечения исследовано его влияние на жизнедеятельность дрожжевых клеток, свойства клейковины пшеничного теста и пшеничного крахмала при различной степени гидролиза и массовой доле масла.

При культивировании дрожжей на модельной синтетической среде установлено, что в присутствии гидролизованного масла в сравнении с нативным ускоряется потребление глюкозы дрожжевыми клетками (рис. 16). Подобный эффект получен с жирными кислотами - олеиновой и линолевой. Это может быть связано с повышением проницаемости мембран клеток и снижением затормаживающего действия нативного масла на проникновение в них углеводов.

Гидролизованное масло способствовало повышению сопротивляемости клейковины нагрузке сжатия (рис. 17).

* 100

з

СЧ

0

1 80

О) О

? 60- -о н сч

5 50 + 0

Рисунок 16 - Динамика потребления глюкозы дрожжевыми клетками в присутствии 5 % масла: гидролизованное масло (---) со степенью расщепления, (%): (0) 6,8; (□) 9,6; (А) 12,5; (•) нативное масло; (о) контроль - без масла

*■"1 1 1

'^^Г* — ' ---------

45 90 135

Время, мин

0 60 120 180

Время, мин

Рисунок 17 - Влияние 5 % нативного масла и гидролизованного со степенью расщепления (□) 6,8 %; (0) 9,6 %; (Д) 12,5 % на свойства клейковины в процессе брожения; (•) нативное масло; (о) контроль

Решающую роль в получении такого эффекта играют жирные кислоты. Они являются поверхностно-активными веществами с дифильным строением. Адсорбируясь на межфазовой поверхности, такие соединения снижают поверхностное натяжение, что эквивалентно образованию новой поверхности.

Для моделирования состояния крахмальной фракции муки в готовых хлебобулочных изделиях изучено влияние гидролизованного масла на процесс формирования крахмального студня по изменению его пластической прочности (рис. 18).

Время, мин

Рисунок 18 - Влияние 5 % нативного масла и гидролизованного со степенью расщепления (□) 6,8 %; (0) 9,6 %; (Д) 12,5 % на формирование крахмального студня (б); (•) нативное масло; (о) контроль

Прочность крахмального студня была максимальной без масла и снижалась по мере увеличения его концентрации. Очевидно, масло в этом случае выполняет роль пластификатора, уменьшая энергию связи частиц и затрудняя стабилизацию структуры. Гидролизованное масло приводило к повышению прочности крахмального студня. Вероятно, большая прочность создается за счет создания комплексов амилозы и амилопектина с моно- и диацилглицеролами, которые, как известно, вызывают флокуляцию крахмальных зерен и увеличивают таким образом степень полимеризации студня. Таким образом, изменение свойств клейковины и крахмала под влиянием гидролизованного масла позволяет стабилизировать физические свойства теста. Установлена рациональная степень гидролиза масел и жиров - 10-13 %.

Установлено, что при хранении крахмальных студней в течение трех суток их пластическая прочность возрастала, но в образцах с гидролизованным маслом этот процесс протекал медленнее. Это объясняет замедление черствение хлебобулочных изделий.

Более ощутимый эффект улучшения качества теста и хлеба получен при использовании совместного действия липазы и липоксигеназы. Это может быть достигнуто обработкой масла ферментными препаратами, полученными из раз-

ных продуцентов (КМгорт огугае 1403 и Юг. огугае 605), либо комплексным препаратом из Л/г. тісгохрогих гаг. с/гшенш 1062 (табл. 13).

Таблица 13 - Показатели качества хлеба

Наименование показателя Традиционный безопарный способ С препаратом липазы Яййо-рю огугае 1403 С препаратами липазы и липоксигена-зы С комплексным препаратом из Rh. mi-crosporvs vor. chinensis 1062

Влажность мякиша, % 43 43 43 43

Кислотность мякиша, град 2,4 2,5 2,5 2,5

Пористость, % 73 77 82 81

Удельный объем, см5/100 г 280 304 323 321

Формоустойчивость, Н:Д 0,37 0,39 0,42 0,43

Аппаратурная и технологическая схемы приготовления теста с использованием модифицированного масла представлены на рис. 19, 20.

Растител ы-»в масло

Рисунок 19 - Аппаратурная схема приготовления теста безопарным способом с использованием масла, гидролизованного препаратом липазы: 1 - гомогенизатор; 2 - водомерный бачок; 3 - сепаратор; 4 - дозировочная станция; 5 -тестомесильная машина; 6 - нагнетатель теста; 7 - бункер для брожения теста; 8 -тестоделительная машина

Рисунок 20 - Схема приготовления теста безопарным способом

6.2 Получение жировых продуктов с повышенным содержанием моно- и дцдцилглицеролов с помощью этерификации и глинеролиза.

Проведение этерификации глицерина и олеиновой кислоты при соотношении 1:1 в среде без растворителя показало, что моно- и диацилглицеролы образовывались почти в эквимолекулярных количествах. Формирование триолеина происходило очень медленно (рис. 21). Это можно объяснить позиционной специфичностью липазы, что подтвердилось результатами тонкослойной хроматографии продуктов этерификации". в начале процесса проявлялись 1(3) моноолеин и 1,3-диолеин. К 6 ч идентифицировались 1,2(2,3) диолеин, к 8 ч - 2-моноолеин, что связано со спонтанной миграцией ацила из первого положения молекулы глицерина во второе. За счет этого образовывался и триолеин.

Время, ч

Рисунок 21 - Изменение состава продуктов этерификации глицерина и олеиновой кислоты: (о) олеиновая кислота; (в) моноолеин; (А) диолеин; (0) триолеин

Эффективность синтеза сильно зависела от количества воды в реакционной смеси. Лучший результат получен при содержании воды 2,5-3,0 %, при дальнейшем его увеличении степень конверсии снижалась, соотношение продуктов при этом не изменялось. Для получения высоких концентраций продуктов в равновесии необходим избыток глицерина - лучший результат дало молярное отношение олеиновой кислоты и глицерина 1:3,1.

Исследован процесс глицеролиза различных масел и жиров в средах с органическим растворителем и в его отсутствие. В качестве растворителя был выбран 2-метил-2-пропанол. Факторы, влияющие на характер процесса, изучены на примере глицеролиза подсолнечного масла.

Процесс глицеролиза в системе без растворителя показан на рис. 22.

К 3 ч 74,3 % триацилглицеролов масла конвертировалось в моно- и диа-цилглицеролы. Наблюдалось почти равное распределение между 1,3 и 1,2(2,3)-диацилглицеролами. При более длительной инкубации -8ч- трансформировалось до 97 мол. % триацилглицеролов; моноацилглицеролы накапливались в количестве 68,7 мол. %. Диацилглицеролы составляли в сумме 26,1 мол. %. Жирные кислоты появлялись в реакционной смеси начиная с 4 ч, в равновесном состоянии их количество находилось в пределах 2 %.

Время, ч

Рисунок 22 - Глицеролиз подсолнечного масла в среде без растворителя: (о) СЖК; (в) МАГ; (А) 1,2(2,3) ДАГ; (А) 1,3 ДАГ; (0) ТАГ

Проведение глицеролиза в среде с растворителем при концентрации масла 20 % и глицерина 10 % показало, что процесс конверсии триацилглицеролов идет несколько медленнее, что, по всей вероятности, связано с влиянием растворителя на активность фермента. Равновесное состояние отличалось составом продуктов от системы без растворителя: больше образовывалось моноа-цилглицеролов - до 85,8 мол. % и, соответственно, меньше диацилглицеролов -7,2 мол. % (рис. 23).

100«

90-

80 ■

70 -

О 60-

3 50-

Р 40-

о ГС. 30-

П 20-

10 -

0

i-----

А

\ 1 V

=====

0 2 4 6 8

Время, ч

Рисунок 23 - Глицеролиз подсолнечного масла в среде с 2-метил-2-пропанолом: (о) СЖК; (■) МАГ; (Ж) 1,2(2,3) ДАГ; (Д) 1,3 ДАГ; (0) ТАГ

На выход и состав конечных продуктов при глицеролизе сильно влияло соотношение субстратов - глицерина и масла. Причем наблюдалась различная картина в водной среде и в 2-метил-2-пропаноле (рис. 24, 25). Для получения максимального количества моноацилглицеролов в системе без растворителя оптимальное соотношение глицерина (как добавленного, так и в составе масла) и ацильных групп триацилглицеролов масла составило 1,6:1, дальнейшее его повышение не приводило к изменению равновесного состояния в реакционной смеси. В 2-метил-2-пропаноле выход моноацилглицеролов повышался до избытка глицерина в 2,7 раза к ацильным группам. Количество диацилглицеролов при этом соответственно снижалось.

80

70 ■

а-- 60 ■

л 50-

3 40 •

30-

о о. 20 -

10 -

0-

ч

У

-----

О- - -о-

0,5 1 1,5 2 2,5 Количество глицерина, г

Рисунок 24 - Влияние количества глицерина на выход продуктов при глицеролизе подсолнечного масла в среде без растворителя: (о) СЖК; (■) МАГ; (А)ДАГ

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 О

■

\

—*—

2,5 5 10 15

Концентрация глицерина, %

20

Рисунок 25 - Влияние количества глицерина на выход продуктов при гли-церолизе подсолнечного масла в 2-метил-2-пропаноле: (о) СЖК; (■) МАГ; (А)ДАГ

Максимальный выход диацилглицеролов мог быть получен при низкой концентрации глицерина с соотношением (0,65-0,7): 1 как в среде с растворителем, так и без него.

Исследование влияния концентрации масла в органическом растворителе в пределах 10-50 % при постоянном количестве глицерина - 15 % показало, что лучший результат (по выходу моноацнлглицеролов) в мол. % достигался при концентрации масла 15 %. По всей вероятности, это связано с более благоприятным соотношением глицерина и ацильных групп (3,5:1). Технологическая схема производства жировых продуктов с повышенным содержанием моно- и диацилглицеролов приведена на рис. 26.

6.3 Получение низкокалорийных жиров путем ацидолиза.

Иммобилизованный комплексный препарат липазы Rh. oryzae 1403 является перспективным для проведения ацидолиза. Установлено, что жирные кислоты со средней молекулярной массой могут быть успешно включены в триа-цилглицеролы растительных масел как в среде с растворителем, так и без него (рис. 27).

При дозировке препарата 10 % к массе субстратов и соотношении кислот к маслу 2:1 моль/моль равновесие устанавливалось к 12 ч и количество включенных кислот от максимально возможного (66,6 %) для каприловой кислоты составило 54,7 и 59,6 и каприновой - 70,4 и 81,5 % соответственно в среде без растворителя и в гексане. Система с растворителем была несколько предпочтительней. Однако в промышленности имеют преимущество технологии без растворителей, так как их добавление усложняет процесс, повышает его стоимость; выход продукта на единицу объема реакционной смеси значительно снижается.

Рисунок 26 - Технологическая схема процесса производства жировых продуктов с повышенным содержанием моно- и диацилглицеролов на основе ферментативного катализа

Время, ч

Рисунок 27 - Ацидолиз подсолнечного масла иммобилизованной липазой с кислотами: (о) каприиовой; (о) каприловой; светлые значки - без растворителя; темные значки - в органической среде

В связи с этим был исследован ацидолиз различных растительных масел с каприновой кислотой в среде без растворителя. С целью достижения максимального включения этой кислоты в триацилглицеролы масла была проведена оптимизация ацидолиза с использованием центрального ком-позиционного униформ-рототабелыюго планирова ния эксперимента. На основании предварительной оценки в качестве факторов, оказывающих влияние на выход процесса, были выбраны: дозировка ферментного препарата к массе субстратов (Е, %), соотношение масла и кислоты (С№о:ТАГ, моль/моль), содержание воды в реакционной смеси (\¥, %) и длительность (х). Реализация плана эксперимента и результаты расчетов эффектов факторов показали, что основную роль играет соотношение субстратов и содержание воды. Оптимальные параметры проведения ацидолиза - Е= 11,3 %; \У=3,5 %; кислота:масло (моль:моль) = 6,8 и время 5 ч позволили повысить включение С 10:0 до 60,6 мол. % , т. е. до 91,8 % от теоретически возможного. Сокращение длительности процесса в 2-3 раза по сравнению с известными технологиями дает увеличение прибыли в среднем в 3,3 раза и рентабельности продукции на 44,4 %. Газовая хроматография состава жирных кислот триацилглицеролоп после ацидолиза показала, что с увеличением включения каприновой кислоты почти эквивалентно в них уменьшается количество других кислот (рис. 28).

Позиционная специфичность липазы Як огуїае ¡403 сохранилась, о чем свидетельствовали данные жирнокислотных композиций в 1(3) и 2-положениях триацилглицеролов масла: во 2-ом положении она не изменилась после ацидолиза, то есть каприновая кислота обменивалась с жирными кислотами только в 1-м и 3-м положениях ацилглицеролов (табл. 14).

Растительные масла оказались различными по эффективности процесса ацидолиза. Для соевого, хлопкового масел получены результаты, близкие к подсолнечному при установленных оптимальных режимах.

Время, ч

Рисунок 28 - Изменение жирнокислотного состава подсолнечного масла при ацидолизе с каприновой кислотой: ($) С10:0; (■) С18:1; (А) С18:2; («) С16:0

Таблица 14 - Изменение состава жирных кислот в 1(3)- и 2-положениях триацнлглнцеролов в подсолнечном масле при ацидолизе__

Жирные кислоты Содержание жирных кислот, мол. %

Исходное масло Масло после ацидолиза

ИЗ) 2 из) 2

10:0 _ - 58,25 0,61

16:0 5,01 0,12 - 0,12

18:0 3,89 0,26 - 0,26

18:1 17,79 12,34 0,35 12,34

18:2 37,06 22,12 4,54 22,42

20:0 0,50 0,27 0,50 0,27

22:0 0,19 0,15 0,19 0,15

В аналогичных условиях каприновая кислота с трудом включалась в ТАГ касторового масла и особенно, горчичного. Это согласуется со специфичностью липазы Rh. oryzae 1403 к жирным кислотам, определенной в реакциях гидролиза - обмен на рицинолевую и эруковую кислоты проходил медленно.

Таким образом, проведенными исследованиями показана перспективность использования липаз с высокой трансацилируюшей активностью для модификации жировых продуктов путем этерификации, глицеролиза или ацидолиза. Доказана высокая эффективность получения жировых продуктов с повышенным содержанием моно- и диацилглицеролов, низкокалорийных жиров. Обоснован положительный эффект масла, подвергнутого конверсии липазой и липоксигена-зой, в производстве хлебобулочных изделий.

выводы

1. Выполнено комплексное научное исследование, позволившее научно обосновать н разработать практические решения по модификации растительных масел на основе ферментативного гидролиза и переэтерификации ТАГ для получения функциональных жировых продуктов с определенными технологическими и физиологическими свойствами.

2. Научно обоснована необходимость скрининга ферментов микробного происхождения для конверсии растительных масел. Экспериментальным путем выявлены активные продуценты внеклеточных ферментов липазы и липоксиге-назы: (1) КкЬорич огугае 1403, синтезирующий липазу, которая обладает позиционной специфичностью и высокой трансферазной активностью, необходимыми для эффективной модификации жиров и масел; (2) Як туюе 605, превосходящий по уровню активности липоксигеназы известные микробные источники; (3) Л/г. »¡¡стропа гаг. с/гшешн 1062, рекомендованный для получения комплексного препарата липазы и липоксигеназы.

3. Определены факторы, регулирующие биосинтез липазы ЯЬкорт о гуте 1403. Показана индуцибельность фермента и его синтез в виде двух изоформ в зависимости от вида индуктора. Оптимизация условий культивирования продуцента позволила повысить (в 7 раз) липолитическую активность - до 352 ед/см\ что сравнимо с известными в настоящее время продуцентами.

4. Разработаны технологии получения ферментных препаратов липазы ЯЫ-гори$ огугае 1403 различной степени очистки на основе ультрафильтрации, осаждения органическими растворителями и сублимационной сутки: (1) препарата липазы Г10Х с выходом - 62,3 % и активностью 27,5 ед./мг при гидролизе и транеэтерификации - 385 ед./г; (2) высокоочищенных препаратов Липазы I и Липазы II с удельной активностью 3600 и 2150 ед./мг белка и степенью очистки 42,0 и 25,0 соответственно.

5. Определены физико-химические, биохимические и каталитические характеристики изоформ липазы (I и II). Посредством анализа кинетических параметров реакций установлена принадлежность липаз I и II к сериновым гидролазам, содержащим каталитическую триаду Азр(01и)-8ег-Н1з; доказано участие в реакциях гидролиза и этерификации одного и того же активного центра.

6. Доказана специфичность изоформ (I и II) липазы Я1шориа огугае 1403 к 5л-1(3)-положениям триацилглицеролов как при гидролизе, так и при транеэтерификации. Установлена специфичность липаз к строению ацильного остатка в триацилглицеролах масел, а именно, предпочтительность к жирным кислотам со средней длиной цепи (С|2-С|8), содержащим не более двух двойных связей.

7. Получен иммобилизованный препарат липазы на стиросорбе, обладающий высокой устойчивостью к органическим растворителям при повышенных температурах. Изучена кинетика адсорбции, установлено высокое сродство липазы к сорбенту, обеспеченное преобладанием гидрофобных взаимодействий.

8. Установлены кинетические закономерности гидролиза и транеэтерификации в процессе конверсии триацилглицеролов в водной и органической средах для липазы Як огугае 1403. Доказано, что этерификация и глицеролиз подчиняются пинг-нонговому би-би-механизму с ингибированием акцептором

ацила - глицерином. Ацидолиз не ингибируется субстратом и гидролиз не является скорость лимитирующей стадией.

9. Разработаны технологии хлебобулочных изделий на основе модификации растительных масел с использованием препаратов липазы Rhizopus oryzae 1403 и липоксигеназы растительного и микробного происхождения. Длительность брожения сокращается в 1,4-1,5 раза, улучшаются реологические свойства теста и качество хлеба (удельный объем на 8,6-12,5 %; формоустойчивость - на 5,4-13,5 %; пористость мякиша - на 5-11 %); замедляется черствение изделий.

10. Разработаны технологии получения жировых продуктов на основе ферментативных процессов с повышенным содержанием моно- и диацилглицеро-лов путем этерификации или глицеролиза; определены рациональные режимы этерификации; установлена возможность регуляции соотношения моно- и диа-цилглицеролов при глицеролизе изменением баланса «глицерин-ацильные группы» и полярности среды реакции.

Разработан способ получения низкокалорийных жиров с помощью ацидо-лиза растительных масел с каприловой и каприновой кислотами липазой Rhizopus oryzae 1403 в средах без растворителя и в гексане. Оптимизация параметров, влияющих на эффективность ацидолиза в системе без растворителя, позволила повысить включение каприновой кислоты до 60,6 мол. %, то есть до 91,8 % от теоретически возможного.

11. Проведены производственные испытания технологий хлебобулочных изделий на булочно-кондитерском комбинате (г. Санкт-Петербург) и хлебозаводах (г. Воронеж); технологий модификации растительных масел на предприятии ЗАО «ГК Маслопродукт» (г. Воронеж).

Список работ, опубликованных по материалам диссертации Монографии

1. Шеламова, С.А. Биотехнологические основы конверсии триглицери-дов [Текст] / С.А. Шеламова. - Воронеж: Научная книга, 2008. - 145 с.

2. Шеламова, С. А. Механизмы гидролиза, синтеза и переэтерификации в пищевой биотехнологии [Текст] / Ю. А. Тырсин, С. А. Шеламова. - Изд.-полиграф. центр «Научная книга», 2012. - 125 с.

Статьи в журналах, рекомендуемых ВАК

3. Шеламова, С. А. О позиционной специфичности некоторых микробных липаз [Текст] / Г.Д. Федорова, И.М. Аренде, В.В. Дорохов, М.Е. Кончалов-ская, И. А. Соколова, С. А. Шеламова, Ж. Д. Лебедева, И. М. Волкова // Прикладная биохимия и микробиология. - 1986. - Т. 22, № 5,- С. 630-634

4. Шеламова, С. А. Оптимизация процесса ферментативного гидролиза жиров [Текст] / Н. А. Жеребцов, С. А. Шеламова, Л. П. Пашенко, Ю. С. Сербу-лов // Биотехнология. - 1988. - Т. 4, № 5. - С. 627-628

5. Шеламова, С. А. Биоконверсия животных жиров для целей хлебопекарного производства [Текст] / Л. П. Пащенко, С. А. Шеламова // Хранение и переработка сельхозсырья. - 1998. -№ 4. - С. 24—25

6. Шеламова, С. А. Ферментативный гидролиз растительных масел в технологии производства диетических сортов хлеба [Текст] / С. А. Шеламова,

Н. М. Дерканосова, Н. А. Жеребцов // Хлебопечение России. - 1999. - №3 -С.26-27

7. Шеламова, С. А. Иммобилизация липазы Rh. japonicia 1403 путем ковалентного связывания [Текст] / С. А. Шеламова, Т. А. Ковалева, В. Ф. Селеме-нев, О. Д. Трофимова, Н. D. Бондарева II Биотехнология, 2001. - № 5. - С. 32-39

8. Шеламова, С. А. Исследование особенностей строения активного центра липазы Rh. japonicus [Текст] / Т. А. Ковалева, С. А. Шеламова, О. Д. Трофимова, Н. В. Бондарева // Вестник ВГУ. - 2001. - № 2. - С. 114-117

9. Шеламова, С. А. Иммобилизация липазы Rhizopus japonicus на анио-иите АВ-17-2П модифицированным глутаральдегидным методом [Текст] / Т. А. Ковалева, С. А. Шеламова, О. Д. Трофимова, Н. В. Бондарева, В. Ф. Селеменев // Сорбционные и хроматографические процессы, 2001. - Т. 1. - Вып. 1. - С. 107-113

10. Шеламова, С. А. Технология получения ферментного препарата липазы [Текст] / И. Т. Кретов, С. В. Шахов, С. А. Шеламова, А. И. Рязанов, Н. В. Янышева // Вестник Российской академии сельхознаук. - 2002. - № 4. - С. 7679

11. Шеламова, С. А. Исследование влияния модифицированного растительного масла на свойства клейковины [Текст] / С. А. Шеламова, Н. В. Янышева, Н. М. Дерканосова, Т. А. Ковалева, О. Д. Трофимова // Вестник Российской академии сельхознаук. - 2002. - № 5. - С. 82-85

12. Шеламова, С. А. Выделение экстрацеллюлярной бактериальной нну-линазы Bacillus polymyxa 722 и изучение ее физико-химических спойств[Текст] / Н. А. Жеребцов, И. Н. Абрамова, С. А. Шеламова // Биотехнология. - 2002-№3.-С. 13-20

13. Шеламова, С. А. Биосинтез инулиназ бактериями рода Bacillus [Текст] / Н. А. Жеребцов, И. Н. Абрамова, С. А. Шеламова // Прикладная биохимия и микробиология. - 2002. - Т. 38. - № 6. - С.634-638

14. Шеламова, С. А. О целесообразности использования гидролизованно-го растительного масла в технологии хлебопечения [Текст] / С. А. Шеламова, Н. М. Дерканосова, JI. П. Бондарева, Н. В. Янышева // Хранение и переработка сельхозсырья,- 2005. - № 6. - С. - 46-48

15. Шеламова, С. А. Адсорбция липазы на гидрофобном носителе [Текст] / С. А. Шеламова, В. Ф. Селеменев, И. А. Крылов, Н. В. Янышева, А. И. Ситников // Биотехнология. - 2007. - № 3. - С. 52-57.

16. Шеламова, С. А. Идентификация гистидина в активном центре Липазы I Rhizopus oryzae 1403 [Текст] / Ю.А.Тырсин, С. А. Шеламова // Вестник Государственного Оренбургского университета. - 2009. - № 6. - С. 374-378

17. Шеламова, С. А. Некоторые каталитические свойства Липазы I Rhizopus oryzae 1403 [Текст] / С. А. Шеламова, Ю. А. Тырсин // Вестник Государственного Оренбургского университета. - 2009. - № 6. - С. 434-437

18. Шеламова, С. А. Определение положения включения кислоты в триг-лицериды при ферментативном ацидолизе [Текст] / Ю. А. Тырсин, С. А. Шеламова, II. М. Дерканосова // Товаровед продовольственных товаров. - 2010. - № 2.- С. 24-26

Статьи и материалы конференций

19. Шеламова, С. А. Использование жировых гидролизатов для сдобных изделий [Текст] / Л. П. Пащенко, Н. А. Жеребцов, С. А. Шеламова, Т. В. Санина, В. В. Носовец, Г. Ф. Иванова // Известия вузов. Пищевая технология. - 1986. - № 5 (Деп. в АгроНИИТЭИПП, № 1346-пщ)

20. Шеламова, С. А. Выделение и очистка липазы Як ]аротсш 1403 [Текст] / С. А. Шеламова, И. М. Аренде, Э. А. Шишкова // Материалы III Всесо-юзн. конф. «Биосинтез ферментов микроорганизмов». - Кобулеги, 1986. - С. 7

21. Шеламова, С. А. Способ приготовления теста для сдобных изделий [Текст] / С. А. Шеламова, Л. П. Пащенко, Н. А. Жеребцов, Е. Ю. Малютина // Деп. в ЦНИИТЭИхлебопродуктов, 1987. - № 742-хб87

22. Шеламова, С. А. Модификация жидкой окислительной фазы в технологии приготовления сдобных изделий [Текст] / Н. А. Жеребцов, С. А. Шеламова, Л. П. Пащенко, В. Ф. Каримова // ВИНИТИ. - 1987. - № 10 (Деп. в ЦНИИТЭИМинхлебопродуктов, № 800-хб87)

23. Шеламова, С. А. Исследование условий применения препарата липазы из гриба /г/г. тугае в меховой промышленности [Текст] / В. Ю. Пружанская, Л. А. Комисарова, Т. П. Назарова, Е. Г. Стрельникова, С. А. Шеламова, Е. Н. Орешкин // ВИНИТИ, 1987. - № 6 (Деп. в ВНИИ меховой пром-сти, № 1939-лп87)

24. Шеламова, С. А. Изучение свойств липазы из Ю>. огугае [Текст] / В. Ю. Пружанская, И. М. Грачева, С. А. Шеламова // Тез. докл. Всесоюзн. науч. конф. «Разработка и совершенствование технологических процессов, машин и оборудования для производства, хранения и транспортировки продуктов питания», г. Москва, 26-28 мая 1987. - М„ 1987. - С. 24

25. Шеламова, С. А. Использование мультиэнзимных композиций в хлебопечении [Текст] / С. А. Шеламова, В. С. Григоров // Межвузовский сборник научных трудов (ДСП). - М.: МТИПП, 1987. - С. 19

26. Шеламова, С. А. Использование гидролизованного жира при производстве хлебобулочных изделий [Текст] / Л. П. Пащенко, Н. А. Жеребцов, С. А. Шеламова, В. В. Носовец, Г. Ф. Иванова // Информ. сборник «Передовой и производственный опыт и науч.-техн. достижения, рекомендуемые для внедрения. - М., 1989,- Вып. 3. - С. 35-36

27. Шеламова, С. А. Очистка и свойства липазы из Юг. уаротсиз 1403 [Текст] / Н. А. Жеребцов, С. А. Шеламова, Э. А. Шишкова, И. А. Новикова, И. М. Аренде, В. Ю. Пружанская // Сб. статей «Ферменты микроорганизмов».- М.: ВНИИСЭНТИ, 1989. -Ч. 1.-С. 120-128.

28. Шеламова, С. А. Жировые гидролизаты как факторы интенсификации процесса брожения и улучшения физических свойств теста при производстве сдобных изделий [Текст] / С. А. Шеламова, Н. А. Жеребцов, Л. П. Пащенко, Ю. И. Попрыгина // ВИНИТИ, 1989. - № 2 (Деп. в ЦНИИТЭИхлебопродуктов, № 966-хб88)

29. Шеламова, С. А. Практическое использование липазы [Текст] / С. А. Шеламова, Н. А. Жеребцов, В. С. Григоров, Л. П. Пащенко // Материалы Все-

союзн. науч.-практ. конф. «Ферменты - народному хозяйству». - Черновцы, 1990.-С. 89

30. Шеламова, С. А. О субстратной специфичности липазы Rh. japonicus 1403 [Текст] / С. А. Шеламова, Н. А. Жеребцов // Деп. в НПО Медбиоэкономи-ка. - 1991. - № 549-мб91

31. Шеламова, С. А. Применение биохимической обработки дополнительного сырья в производстве сдобных изделий [Текст] / С. А. Шеламова, Н. А. Жеребцов, В. С. Григоров, Л. Ф. Забелина // Деп. в АгроНИИТЭИПП. - 1991. -№2445

32. Шеламова, С. А. Гидролиз подсолнечного масла [Текст] / С. А. Шеламова, Л. В. Спивакова, Л. Г. Кириллова // Материалы Первой конф. СевероКавказского региона «Современные достижения в биотехнологии». - Ставрополь, 1995. -С. 72-73

33. Шеламова, С. А. Ингибиторы и активаторы липазы Rh. japonicus [Текст] / С. А. Шеламова // Вестник ВГТА. - 1998. - Вып. 2. - С. 32-35

34. Шеламова, С. А. Действие ферментированного растительного масла на адгезионные свойства теста [Текст] / С. А. Шеламова, В. А. Дятлов, Н. М. Дсрканосова, А. Н. Рязанов // Сб. науч. трудов «Модернизация существующего и разработка новых видов оборудования для пищевой промышленности». — Воронеж, 1998. - Вып. 8. - С. 75-77

35. Шеламова, С. А. Влияние различных видов гидролизованных масел на качество полуфабрикатов и готовых изделий [Текст] / С. А. Шеламова, Н. М. Дерканосова //Деп. в ВИНИТИ. - 1998. - № 3298-В98

36. Shelamova, S. A. Hydrolytic enzymes of typical chernozem microscopic fungi [Техт] / S. A. Shelamova, I. D. Svistova, Т. I. Agutova // Ecological Congress. - 1999.-V. 3,№ 1.-P. 51-53

37. Шеламова, С. А. Ультрафильтрация в процессе получения ферментного препарата липоксигеназы [Текст] / С. А. Шеламова, А. Н. Рязанов, Н. Н. Козырева, Н. В. Бондарева // Сб. науч. трудов «Модернизация существующего и разработка новых видов оборудования для пищевой промышленности». - Воронеж, 1999. - Вып. 9. - С. 51-52

38. Шеламова, С. А. Совершенствование технологии приготовления хлеба с добавлением растительного масла [Текст] / С. А. Шеламова, Н. М. Дерканосова // Тез. докл. межрегион, науч. конф. «Продовольственная безопасность России. Качество продуктов питания-99». - Воронеж, 1999. - С. 127-129

39. Шеламова, С. А. Биоконверсия растительных масел в производстве массовых и диетических сортов хлеба [Текст] / С. А. Шеламова, Н. М. Дерканосова, Н. В. Бондарева // Тез. докл. Мсждунар. науч. конф. «Прогрессивные пищевые технологии - третьему тысячелетию», Краснодар, 19-22 сент. 2000 г., Краснодар,- 2000,- С. 88

40. Шеламова, С. А. Исследование физико-химических и кинетических характеристик свободной и иммобилизованной липазы из Rh. japonicus [Текст] / Т. А. Ковалева, С. А. Шеламова, О. Д. Трофимова, Н. В. Бондарева // Труды IY междунар. симпозиума «Новые и нетрадиционные растения и пути их исполь-

зования», Москва-Пущино, 20-24 июня 2001 г., М.: Изд-во Росс, ун-та дружбы народов, 2001.- Т. З.-С. 493-495

41. Шеламова, С. А. К вопросу о влиянии липидов на жизнедеятельность дрожжей [Текст] / С. А. Шеламова, H. М. Дерканосова, Н. В. Янышева // Материалы междунар. науч. конф. «Биотехнология на рубеже двух тысячелетий», Саранск, 12-15сент. 2001 г.- Саранск, 2001.-С. 155

42. Шеламова, С. А. Ферментативная модификация жировых продуктов и ее практическое использование [Текст] / С. А. Шеламова, Н. В. Янышева, Т. А. Ковалева, О. Д. Трофимова // Тез. докл. междунар. конф. мол. ученых «От фундаментальной науки - к новым технологиям», Москва-Тверь, 25-28 сент. 2001 г.-Тверь, 2001. - С. 70

43. Шеламова, С. А. Исследование физико-химических и кинетических характеристик реакции гидролиза триглицеридов свободной и иммобилизованной липазой [Текст] / Т. А. Ковалева, С. А. Шеламова, О. Д. Трофимова, Н. В. Бондарева // XYI11 Съезд физиологического общества им. И.П. Павлова: Тез. докл.- Казань, 2001.- С. 355

44. Шеламова, С. А. Функциональность жировых продуктов в хлебопечении [Текст] / С. А. Шеламова, Т. А. Ковалева, Н. В. Янышева, О. Д. Трофимова // Материалы междунар. науч.-практ. конф. «Потребительский рынок: качество и безопасность товаров и услуг», Орел, 18-21 дек. 2001. - Орел, 2001 .-Т. 1. - С. 304

45. Шеламова, С. А. Масла как регуляторы свойств клейковины [Текст] / С. А. Шеламова, H. М. Дерканосова, Т. А. Ковалева, Н, В. Янышева, О. Д. Трофимова // Сборник докладов юбил. науч.-практ. конф. «Пищевые продукты XXI века».-М., 2001.-T. 1.-С. 115

46. Шеламова, С. А. Хроматографический анализ свободных жирных кислот при гидролизе масла [Текст] / С. А. Шеламова, Н. В. Янышева, В. Ф. Се-леменев, Т. А. Ковалева, О. Д. Трофимова // Сб. тез. Всерос. симп. «Современные проблемы хроматографии». - М., 2002. - С. 102

47. Шеламова, С. А. К вопросу о роли биомодификацни масла в технологии хлебопечения [Текст] / С. А. Шеламова, H. М. Дерканосова, Н. В. Янышева // Материалы 2-ой Всеросс. науч.-техн. конф. «Современные достижения биотехнологии», Ставрополь, 12-13 сент. 2002.- Ставрополь, 2002.- Т. 2.- С. 175177

48. Шеламова, С. А. Биоконверсия растительных масел в технологии приготовления диетических сортов хлеба [Текст] / С. А. Шеламова, H. М. Дерканосова, Н. В. Янышева // Сб. докл. 6-ой Междунар. науч. конф. памяти В.М. Горбатова «Биотехнологические процессы переработки сельскохозяйственного сырья», М., 5-6 дек. 2002 г. - М., 2002. - С. 60-62

49. Шеламова, С. А. Влияние гидролизованных масел на некоторые функции дрожжевых клеток [Текст] / H. М. Дерканосова, С. А. Шеламова, Н. В. Янышева // Сб. науч. трудов «Производство продуктов питания из растительного сырья: свершения и надежды». - Воронеж, 2002. - С. 277

50. Шеламова, С. А. Управление процессом вакуум-сублимационного обезвоживания во вспененном состоянии ферментного препарата липазы Rh.

¿аротсиз 1403 [Текст] / А. А. Шевцов, С. А. Шеламова, А. Н. Рязанов, А. В. Санин//Там же. - С. 291

51. Шеламова, С. А. Модификация глугаральдегидного метода при иммобилизации липазы из Маория ¡аротсих 1403 на ионообменных смолах [Текст] / Т. А. Ковалева, В. Г. Артюхов, О. Д. Трофимова, С. А. Шеламова, Н. В. Янышева// Международный форум «Аналитика и аналитики»: Каталог рефератов и статей, Т. II, Воронеж, Россия, 2-6 июня 2003 г. - С. 413

52. Шеламова, С. А. Непрерывный ферментативный гидролиз растительного масла [Текст] / С. А. Шеламова, Н. В. Янышева // Материалы II Междунар. науч.-техн. конф., поев. 100-летию засл. деят. науки техники РСФСР, проф. Попова В.И. «Прогрессивные технологии и оборудование для пищевой иромыш-лешюсти», Воронеж,22-24 сентября 2004 г.- Воронеж, 2004,- Ч. I,- С. 237-238

53. Шеламова, С. А. Ковалептная и адсорбционная иммобилизация липазы Я/игори-ч /аратам 1403 [Текст] / С. А. Шеламова, В. Ф. Селеменев, II. В. Янышева // Всеросс. симпозиум «Биотехнология микробов». - М.: МАКС Пресс, 2004. - С. 97

54. Шеламова, С. А. Влияние низких температур на активность ферментного препарата липазы [Текст] / II. В. Янышева, С. А. Шеламова, А. Н. Рязанов // Материалы V Науч.-практ. конф. «Совершенствование техники, технологии и методов управления на предприятий пищ. и перераб. пром-сти», Воронеж, 2627 апреля 2005. - Воронеж. - 2005. - С. 23-25

55. Шеламова, С.А.. Технология модификации растительного масла для хлебопечения [Текст] /С.А. Шеламова, Н.В. Янышева // Всеросс. науч.-практ. конф. с междунар. участием «Пищ. пром-сть: интеграция науки, образования и производства», Краснодар, 26-28 мая 2005 г.- Краснодар.- 2005,- С. 344

56. Шеламова, С. А. Липолитический фермент для хлебопекарной и кондитерской промышленности [Текст] / С. А. Шеламова, Н. В. Янышева, Н. М. Дерканосова // Тезисы докл. V Междунар. науч.-техн. конф. «Техника и технология пищевых производств», Могилев, 18-20 мая 2005 г.,.- Минск: Издат. центр БГУ,-2005.-С. 73

57. Шеламова, С. А. Специфичность Липазы I Шигориа огухае 1403 к жирным кислотам [Текст] / С. А. Шеламова, Н. В. Янышева, Н. М. Дерканосова // Материалы Междунар. науч.-практ. конф. «Перспективы и проблемы развития биотехнологии в рамках единого экономического пространства стран содружества», Минск - Нарочь, Республика Беларусь, 25-28 мая 2005 г.- Минск: РИВШ,- 2005,- С. 274

58. Шеламова, С. А. Роль гистидина в действии Липазы I ЛАкор/и огугае 1403 [Текст] / С. А. Шеламова, Н. В. Янышева, Т. И. Хоменко // Сборник тез. докл. Обшеросс. конф. мол. ученых с междунар. участием «Пищ. технологии», Казанский гос. технол. ун-т, 30 мая 2006 г. - Казань. - 2006. - С. 96

59. Шеламова, С. А. Эффективность ферментативного ацидолиза различных растительных масел [Текст] / С. А. Шеламова, Ю. А. Тырсин // Материалы III Междунар. науч.-техн. конф. «Инновационные технологии и оборудование для пищ. промышленности (приоритеты развития)», посвящ. 80-летию

ГОУВПО «Воронеж, гос. технол. академия», Воронеж, 22-24 сент. 2009 г. - Воронеж, 2009.-Т. 2.-С. 63

60. Шеламова, С. А. Ферментативный способ улучшения качества хлебобулочных изделий [Текст] / 10. А. Тырсин, С. А. Шеламова // Сб. материалов первой междунар. науч.-практ. конф. «Идентификация фальсифицированных пищевых продуктов. Контроль содержания и безопасности наночастиц в продукции сельского хозяйства и пищевых продуктах», Москва, 28-29 октября 2009 г. - М.: МГУПП-МЕДИА, 2009. - С. 146-148

61. Шеламова, С. А. Липазы и липоксигеназы в хлебопекарной промышленности [Текст] / Ю. А. Тырсин, С. А. Шеламова // Материалы XI Всероссийского конгресса диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье», Москва, 30 ноября-2 декабря 2009 г. - М., 2009. - С. 164

62. Шеламова, С.А. Регулируемая энзиматическая трансэтерификация жиров для пищевой промышленности [Текст] /Ю.А. Тырсин, С.А. Шеламова //Материалы XI Всероссийского конгресса диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье», Москва, 30 ноября-2 декабря 2009 г. - М., 2009. - С. 165

63. Шеламова, С. А. Ферментативный способ получения низкокалорийных жиров [Текст] /10. А. Тырсин, С. А. Шеламова // Материалы XI Всероссийского конгресса диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье», Москва, 30 ноября-2 декабря 2009 г. - М., 2009. - С. 166

64. Шеламова, С. А. Методы определения позиционной специфичности липазы [Текст] / 10. А. Тырсин, С. А. Шеламова // Материалы межрегион, науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы потребительского рынка товаров и услуг», Киров, 25 декабря 2009 г. - Киров, 2009. - С. 21

65. Шеламова, С. А. Анализ продуктов ферментативного гидролиза и синтеза триглицеридов [Текст] / Ю. А. Тырсин, С. А. Шеламова, H. М. Дерка-носова // Материалы V междунар. науч.-практ. конф. «Потребительский рынок: качество и безопасность товаров», Орел, 8-9 декабря 2009 г. - Орел, 2009. -С. 22-23

66. Шеламова, С. А. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии в исследовании ферментативной трансэтерификации ацилглицеринов [Текст] / С. А. Шеламова, Ю. А. Тырсин, H.A. Шеламова // Материалы Всеросс. науч.-практ. конф. с междунар. участием «Актуальные проблемы потребительского рынка товаров и услуг», Киров, 18 февраля 2011 г. - Киров, 2011. - С. 209

67. Шеламова, С. А. Кинетика ферментативного гидролиза триацилгли-церолов [Текст] / Ю. А. Тырсин, С. А. Шеламова // Mezinárodnf védecko-practicá [conference «Zprávy vêdekë ideje-2011» Praha, 27.10-5.11. 2011 г. - Praha: «Education and Science», 2011. - С. 103-105

68. Шеламова, С. А. Стабильность липазы Rh. oiyzae 1403в органических средах [Текст] / С. А. Шеламова, Ю. А. Тырсин // Mezínárodní védecko-practicá konference «Véda a technologie: krok do budoucnosti-2012») Praha, 27.03-5.04. 2012 г. - Praha: «Education and Science», 2012. - С. 51-53

Авторские свидетельства и патенты

69. A.C. 1405130 СССР, МПК А 21 D 8/04. Способ производства хлебобулочных изделий / Н. А. Жеоебцов, В. С. Григоров, С. А. Шеламова, Л. Ф.Забелина; ВТИ. -№ 4033123/31-13; Заявл. 04.03.86; Опубл. 22.02.88.

70. Патент 2233324 РФ, МПК 7 С 12 N 9/02, 1/14. Способ получения ферментного препарата липоксигеназы / С. А. Шеламова, Н. В. Янышева, Э. А. Шишкова, Е. Н. Ефременко; ВГТА. - № 2002130136/13; Заявл. 10.11.02; Опубл. 27.07.04, Бюл. № 21

. 71. Патент 2233325 РФ, МПК 7 С 12 N 9/02, 9/20, 1/14. Способ получения комплексного ферментного препарата липазы липоксигеназы / С. А. Шеламова, Н. В. Янышева, ВГТА. - № 2003100557/13; Заявл. 08.01.03; Опубл. 27.07.04, Бюл. №21

72. Патент 2397247 РФ, МПК 7 C12N 9/20. Способ биосинтеза липазы / С. А. Шеламова; ВГТА. -№ 2008152363/10; Заявл. 29.12.08; Опубл. 20.08.10, Бюл. №23

к і

Отпечатано в типографии ООО "Франтера" Подписано к печати 07.11.2012г. Формат 60x84/16. Бумага "Офсетная №1" 80г/м2. Печать трафаретная. Усл.печл. 3,25. Тираж 100. Заказ 548.

WWW.FRANTERA.COM

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Биомодификация жиров на основе ферментативного катализа.

1.2. Синтез липолитических ферментов микроорганизмами. Особенности выделения и очистки препаратов липаз.

1.3. Свойства липаз микробного происхождения.

1.4. Поведение липаз в системах с органическими растворителями

1.5. Иммобилизация липолитических ферментов.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Объекты исследований.

2.2. Методы определения липолитической активности.

2.3. Метод определения активности липоксигеназы.

2.4. Методы определения активности сопутствующих ферментов.

2.5. Методы определения содержания белка.

2.6. Получение препаратов липазы различной чистоты.

2.7. Электрофоретическое исследование препаратов липаз.

2.8. Определение молекулярной массы липаз.

2.9. Изоэлектрическое фокусирование липаз.

2.10. Определение аминокислотного состава липаз.

2.11. Модификация липаз специфическими ингибиторами.

2.12. Методы иммобилизации липазы.

2.13. Определение содержания свободных жирных кислот в маслах в процессе гидролиза.

2.14. Определение состава продуктов модификации жиров и масел.

2.15. Уравновешивание фермента и субстратов к определенному значению

2.16. Условия проведения этерификации, глицеролиза, ацидолиза.

2.17. Методы исследования клейковины пшеничной муки, пшеничного крахмала.

2.18. Статистическая обработка результатов и методы математического планирования эксперимента.

ГЛАВА 3 ВЫБОР АКТИВНОГО ПРОДУЦЕНТА ЛИПАЗЫ.

ИССЛЕДОВАНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ БИОСИНТЕЗА ЛИПО-ЛИТИЧЕСКОГО КОМПЛЕКСА ИЗ RHIZOPUS ORYZAE 1403.

3.1. Выбор продуцента липазы.

3.2. Влияние условий культивирования на рост Rh. oryzae и биосинтез липазы.

3.3. Способы индукции биосинтеза липазы Rhizopus oryzae 1403.

3.4. Характеристика липолитического комплекса Rhizopus oryzae 1403.

3.5. Оптимизация состава питательной среды для продуцента липазы.

ГЛАВА 4. ПОЛУЧЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ ЛИПАЗЫ RHIZOPUS ORYZAE 1403 И ИССЛЕДОВАНИЕ ИХ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ И БИОХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ.

4.1. Разработка технологии получения препаратов липазы.

4.2. Исследование некоторых биохимических и физико-химических свойств изоферментов - Липазы I и Липазы II.

4.3. Определение функциональных групп активного центра липаз и расшифровка механизма их действия.

4.4. Исследование субстратной специфичности липолитического комплекса.

4.5. Получение иммобилизованных препаратов липазы. Кинетические и термодинамические характеристики адсорбции липазы на неионогенном носителе.

4.6. Физико-химические свойства иммобилизованного препарата.

ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ КИНЕТИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ РЕАКЦИЙ ГИДРОЛИЗА И ТРАНСЭТЕРИФИКАЦИИ АЦИЛГЛИЦЕРОЛОВ, КАТАЛИЗИРУЕМЫХ ЛИПАЗОЙ В ВОДНОЙ И

ОРГАНИЧЕСКОЙ СРЕДАХ.

5.1. Кинетические параметры гидролиза триацилглицеролов в водной среде и в системе с органическими растворителями.

5.2. Исследование состояния равновесия в реакции гидролиза триацилглицеролов, катализируемой липазой Rhizopus oryzae 1403.

5.3. Исследование кинетики реакций трансэтерификации - эте-рификации, глицеролиза и ацидолиза.

ГЛАВА 6. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ФЕРМЕНТАТИВНОЙ

КОНВЕРСИИ ПРИРОДНЫХ ТРИАЦИЛГЛИЦЕРОЛОВ.

6.1. Гидролизованные жировые продукты и их функциональные свойства в технологии хлебопечения.

6.1.1. Исследование влияния гидролизованных жировых продуктов на жизнедеятельность дрожжевых клеток.

6.1.2. Изменение свойств клейковины теста и пшеничного крахмала

6.1.3. Влияние гидролизованных жировых продуктов на качество хлебобулочных изделий.

6.2. Получение жировых продуктов с повышенным содержанием моно- и диацилглицеролов с помощью этерификации и глицеролиза

6.3. Получение низкокалорийных жиров путем ацидолиза.

ВЫВОДЫ.

Актуальность темы. В перспективах развития масложирового комплекса России важное место отводится вопросам повышения качества и безопасности продукции, что соответствует положениям Доктрины продовольственной безопасности Российской Федерации; государственной политике в области здорового питания населения на период до 2020 года, в число основных задач которой включено развитие производства продуктов функционального назначения, внедрение био- и нанотехнологий. К таким инновационным технологиям относится энзимная пере-этерификация природных масел для получения специализированных жиров. Этот способ одновременно ограничивает использование химических реагентов в производственных процессах, загрязнение окружающей среды и обеспечивает удовлетворение готовых продуктов требованиям здорового питания по содержанию насыщенных триацилглицеролов и трансизомеров жирных кислот.

В последние годы специализированные жиры занимают значительный объем масложировой отрасли как рецептурные ингредиенты для молочной, кондитерской, хлебопекарной промышленности; углубляется дифференциация жиров под конкретные продукты. Высокая специфичность липолитических ферментов к строению жирнокислотного остатка и его положению в молекулах триацилглицеролов (ТАГ) дает возможность получать широкий спектр жировых продуктов как в отношении технологической функциональности, так и соответствия научным принципам нутрициологии о роли различных жирных кислот в питании и значении их распределения в ТАГ.

Большой вклад в формирование и развитие современных тенденций технологии специальных жиров внесли А. П. Нечаев, Ю. А. Султанович, И. В. Павлова, А. А. Кочеткова и другие ученые. Фундаментальные и прикладные исследования ферментативной модификации ТАГ представлены в работах Ю. А. Тырсина, J1. В. Зайцевой, В. В. Мельникова, А. К. Macrae, S. Bloomer, С. Е. Martinez, Y. Schimada, D. Zhou, Т. Oba & В. Witholt и др.

Практика внедрения ферментативной технологии при переработке масел и жиров показала, что липолитические ферментные препараты должны иметь высокую трансферазную активность, стабильность в производственном процессе, устойчивость к технологическим факторам.

Липолитические ферменты широко распространены в организмах различного уровня биологической организации, но решить технологические задачи возможно только с помощью их микробного синтеза. Работы по скринингу продуцентов, получению активных генетически модифицированных штаммов микроорганизмов, изучению свойств липаз, их иммобилизации активно проводятся учеными различных стран. Исследования отечественных авторов (Е. Л. Рубан, Л. О. Северина, Г. Б. Ксандопуло, К. Д. Давранов, Ю. А. Свириденко, И. М. Аренде, Ж. X. Диеров, А. Ю. Кривова и др.) проводились с целью использования липаз для гидролиза масел и жиров. Количество работ, посвященных изучению липолитических ферментов в процессах синтеза в микроводных условиях крайне ограничено (Ю. А. Тырсин, К. Д. Давранов). В крупномасштабном производстве специализированных жиров в России используются ферментные препараты липаз зарубежных фирм. В связи с перспективами данных технологий получение отечественных препаратов липаз со свойствами, необходимыми для эффективного осуществления биомодификации жиров, - важная и насущная проблема.

Диссертационная работа направлена на решение важной народнохозяйственной задачи - разработку научно обоснованных технологических решений биомодификации растительных масел, реализация которых отвечает современным тенденциям развития науки и технологий, ориентированных на создание экологически чистых производств, в частности, масложировых продуктов функционального назначения.

Работа проводилась в соответствии с планом НИР ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный университет инженерных технологий» по теме «Биосинтез микроорганизмами биологически активных веществ и исследование их физико-химических свойств» (номер гос. регистрации 01930004491), в рамках проблемы «Модификация сорбентов путем иммобилизации ферментов и других физиологически активных веществ», утвержденной Координационным планом Научного Совета РАН, выполняемой в ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный университет»; на кафедре «Органическая, пищевая и биохимия» ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств» в рамках государственного задания 4.2053.2011 «Разработка принципов контроля морфогенетической активности физико-химических факторов на биосистемы с привлечением современных методов экологической экспертизы пищевых продуктов» по заказу Министерства образования и науки РФ.

Цель и задачи исследований. Цель настоящего исследования заключалась в научном обосновании и практической реализации разработанной технологии модификации растительных масел на основе ферментативного гидролиза и переэте-рификации ТАГ для получения функциональных жировых продуктов с определенными технологическими и физиологическими свойствами.

Поставленная цель достигалась решением следующих задач:

- скрининг активного продуцента микробных липаз, удовлетворяющих требованиям направленной конверсии жиров и масел, и микробных продуцентов внеклеточных липоксигненаз;

- изучение особенностей регуляции биосинтеза изоферментов внеклеточного липолитического комплекса выбранного продуцента;

- разработка технологии получения препаратов липаз с различной степенью очистки;

- исследование физико-химических и каталитических свойств выделенных изоферментов липазы, идентификация функциональных групп активного центра липаз;

- оценка субстратной специфичности изоформ липаз;

- разработка приемов иммобилизации липазы на различных носителях и изучение свойств иммобилизованных препаратов;

- исследование кинетических параметров реакций гидролиза и трансэтерифи-кации в водной и органической средах, катализируемых иммобилизованной липазой;

- разработка технологии хлебобулочных изделий с использованием модифицированных жиров;

- разработка технологии получения жировых продуктов с функциональными свойствами на основе ферментативных процессов этерификации, глицеролиза, ацидолиза;

- проведение производственных испытаний разработанных технологий на предприятиях масложировой и хлебопекарной промышленности.

Научная концепция. Научная концепция состоит в разработке научно-практических аспектов технологии модификации растительных масел на основе ферментативного гидролиза и переэтерификации для получения функциональных жировых продуктов посредством использования ферментов липаз и липоксигеназ, включающего выбор липолитического фермента с высокой гидролитической и трансацилирующей активностью, получение ферментных препаратов липазы и ли-поксигеназы, изучение каталитических свойств липазы, иммобилизацию липазы, выявление закономерностей ферментативных процессов гидролиза и трансэтери-фикации ацилглицеролов в водной среде и в системах с органическими растворителями, оценку факторов, определяющих соотношение продуктов трансэтерифика-ции, научное обоснование использования жиров, модифицированных липазой и липоксигеназой, в технологии пищевых производств.

Основные положения, выносимые на защиту.

На защиту выносятся следующие положения:

- методологический подход к оценке эффективности использования липоли-тических ферментов для модификации растительных масел на основе совокупности экспериментальных исследований каталитических свойств липаз;

- особенности биосинтеза липаз и липоксигеназ микроорганизмами;

- модель механизма действия липаз;

- специфичность действия липаз (позиционная, к жирным кислотам) при гидролизе и этерификации в микроводных условиях и в системах с органическими растворителями;

- кинетические и термодинамические характеристики адсорбции липазы при иммобилизации;

- кинетические параметры ферментативного гидролиза и трансэтерификации;

- технологические решения по использованию липазы и липоксигеназы в хлебопечении;

- оценка эффективности использования липазы для получения жировых продуктов с функциональными свойствами.

Научная новизна. Научно обоснован выбор ферментов липаз и липоксигеназ с целью модификации растительных масел для получения функциональных жировых продуктов и имеющих перспективы использования в технологии пищевых производств.

С целью интенсификации процессов гидролиза и переэтерификации растительных масел, совершенствования технологии хлебобулочных изделий и повышения их качества экспериментальным путем выявлены штаммы микромицетов с высоким уровнем синтеза внеклеточных липазы (ЯЫгорш огугае 1403), липоксигена-зы (Як огугае 605) и комплекса этих ферментов (Як. тгсгоярогш уаг. сЫпет18 1062).

На основе анализа факторов, влияющих на биосинтез липаз при культивировании микромицета Ш. огугае 1403, установлено, что им синтезируется комплекс липолитических ферментов.

Получены в гомогенном виде изоформы Липаза I и Липаза II, охарактеризованы их биохимические, физико-химические и каталитические свойства. Определение кинетических параметров реакций гидролиза и трансэтерификации триацилг-лицеролов и ингибиторный анализ позволили выявить функциональные группы активного центра ферментов. На основании собственных экспериментальных и данных литературы предложена модель механизма действия липаз.

Установлена специфичность изоформ липаз Ш. огугае 1403 к строению ацильного остатка и его положению в триацилглицеролах как при гидролизе, так и при этерификации.

Установлены особенности иммобилизации липазы на различных носителях. Определены кинетические и термодинамические характеристики адсорбции фермента на гидрофобном сорбенте - стиросорбе, которые показали высокое аффинное сродство липазы к сорбенту.

Проведен комплексный анализ кинетических параметров реакций гидролиза, этерификации, глицеролиза, ацидолиза иммобилизованным препаратом липазы в водной и органической средах; установлены общие закономерности проведения ферментативной конверсии ацилглицеролов.

В рамках обоснования целесообразности использования жиров и масел, частично гидролизованных липазой, при изготовлении хлебобулочных изделий, выявлены особенности их влияния на свойства клейковины, крахмала, жизнедеятельность дрожжей; на технологические параметры и качество готовых изделий.

Определены факторы, влияющие на соотношение и выход продуктов в процессах этерификации, глицеролиза и ацидолиза, катализируемых липазой Rh. oryzae 1403, в водной и органических средах.

Новизна исследований защищена 1 авторским свидетельством и 3 патентами.

Практическая значимость. Полученный экспериментальный материал позволил сформировать рекомендации по практическому приложению микробных липаз и липоксигеназ; определить рациональные условия проведения ферментативных процессов гидролиза и трансэтерификации триацилглицеролов для модификации жиров и масел и области практического использования получаемых продуктов конверсии.

Разработана технология культивирования продуцента липазы Rhizopus oryzae 1403 и технология ферментного препарата липазы с высоким выходом -62,3 % и активностью 27,5 ед./мг. Способ биосинтеза липазы запатентован (Патент 2397247 РФ).

Получен иммобилизованный препарат липазы, отличающийся высокой трансферазной активностью - 385 ед./г и стабильностью в органических растворителях. Высокая активность препарата, позиционная специфичность и широкий спектр сродства к жирным кислотам позволили рекомендовать его для получения разнообразных продуктов путем энзимной переэтерификации.

Установлены режимы проведения гидролиза жировых продуктов, позволяющие получить жиры с функциональными свойствами для технологии хлебопечения. Разработаны технологии хлебобулочных изделий на основе ферментированных жиров и сдобных изделий с использованием липазы и растительной липокси-геназы (A.C. 1405130). Производственные испытания этих технологий на хлебозаводах (г. Воронеж) булочно-кондитерском комбинате (г. Санкт-Петербург) подтвердили получаемый положительный эффект. Получен диплом 4-й Международной выставки «Современное хлебопечение. Сладкоежка-2000», г. Воронеж.

Получен препарат липоксигеназы, отличающийся высокой активностью и низким уровнем окисления ß-каротина (Патент 2233324 РФ); комплексный препарат липазы и липоксигеназы с высокой активностью обоих ферментов (Патент

2233325 РФ). Эти препараты рекомендованы для использования в хлебопекарной промышленности.

Показана перспективность использования иммобилизованной липазы Rhizopus oryzae 1403 для получения жиров с повышенным содержанием моно- и диацилгли-церолов (МАГ и ДАГ) путем этерификации или глицеролиза растительных масел.

Доказана возможность получения низкокалорийных жиров с помощью ацидо-лиза растительных масел. Оптимизирован процесс ацидолиза подсолнечного масла с каприновой кислотой, что позволило увеличить включение кислоты до 91,8 % от максимального возможного и сократить длительность процесса в 2-3 раза.

Предлагаемые технологии модификации растительных масел успешно апробированы в производственных условиях на предприятии ЗАО «ГК Маслопродукт» (г. Воронеж).

Личный вклад соискателя. Личное участие автора являлось основополагающим на всех стадиях работы и состояло в формировании научных направлений, постановке задач и целей исследований, организации эксперимента, анализе и обработке результатов, подготовке материалов к опубликованию, проведении производственных испытаний.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы были доложены на 35-ти научных конференциях, в том числе: на симпозиуме «Биотехнология микробов» (Москва, 2004); на Всероссийском конгрессе диетологов и нутри-циологов «Питание и здоровье» (Москва, 2009); на международных и всесоюзных конференциях: «Техника и технология пищевых производств» (Могилев, 1998, 2005), «Биотехнологические процессы переработки сельскохозяйственного сырья» (Москва, 2002), «Пищевые технологии и биотехнологии» (Казань, 2009, 2010), «Технологии и продукты здорового питания. Функциональные пищевые продукты» (Москва, 2009), «Управление торговлей: теория, практика, инновации» (Москва, 2009), «Аналитические методы измерений и приборы в пищевой промышленности. Экспертиза, оценка качества, подлинности и безопасности пищевых продуктов» (Москва, 2009), «Идентификация фальсифицированных пищевых продуктов. Контроль содержания и безопасности наночастиц в продукции сельского хозяйства и пищевых продуктах» (Москва, 2009), «Потребительский рынок: качество и безопасность товаров» (Орел, 2010), «Актуальные проблемы потребительского рынка товаров и услуг» (Киров, 2009, 2011), «Потребительский рынок: качество и безопасность товаров» (Орел, 2011), «Новости научной мысли» (Прага, 2011), «Наука и технологии: шаг в будущее» (Прага, 2012).

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 72 работы, в том числе 16 статей в журналах, рекомендованных ВАК; 2 монографии; получено 1 авторское свидетельство и 3 патента РФ на изобретения.

выводы

1. Выполнено комплексное научное исследование, позволившее научно обосновать и разработать практические решения по модификации растительных масел на основе ферментативного гидролиза и переэтерификации ТАГ для получения функциональных жировых продуктов с определенными технологическими и физиологическими свойствами.

2. Научно обоснована необходимость скрининга ферментов микробного происхождения для конверсии растительных масел. Экспериментальным путем выявлены активные продуценты внеклеточных ферментов липазы и липоксигеназы: (1) ЯЫгорт огугае 1403, синтезирующий липазу, которая обладает позиционной специфичностью и высокой трансферазной активностью, необходимыми для эффективной модификации жиров и масел; (2) Ш. огугае 605, превосходящий по уровню активности липоксигеназы известные микробные источники; (3) Як. тгсгоярогш уаг. сЫпет1$ 1062, рекомендованный для получения комплексного препарата липазы и липоксигеназы.

3. Определены факторы, регулирующие биосинтез липазы ЯЫгорш огугае 1403. Показана индуцибельность фермента и его синтез в виде двух изоформ в зависимости от вида индуктора. Оптимизация условий культивирования продуцента позволила повысить (в 7 раз) липолитическую активность - до 352 ед/см3, что сравнимо с известными в настоящее время продуцентами.

4. Разработаны технологии получения ферментных препаратов липазы ЯЫгорш огугае 1403 различной степени очистки на основе ультрафильтрации, осаждения органическими растворителями и сублимационной сушки: (1) препарата липазы Г10Х с выходом - 62,3 % и активностью 27,5 ед./мг при гидролизе и тран-сэтерификации - 385 ед./г; (2) высокоочищенных препаратов Липазы I и Липазы II с удельной активностью 3600 и 2150 ед./мг белка и степенью очистки 42,0 и 25,0 соответственно.

5. Определены физико-химические, биохимические и каталитические характеристики изоформ липазы (I и II). Посредством анализа кинетических параметров реакций установлена принадлежность липаз I и II к сериновым гидролазам, содержащим каталитическую триаду Asp(Glu)-Ser-His; доказано участие в реакциях гидролиза и этерификации одного и того же активного центра.

6. Доказана специфичность изоформ (I и II) липазы Rhizopus oryzae 1403 к sn-1(3)-положениям триацилглицеролов как при гидролизе, так и при трансэтерифи-кации. Установлена специфичность липаз к строению ацильного остатка в триа-цилглицеролах масел, а именно, предпочтительность к жирным кислотам со средней длиной цепи (Ci2-C18), содержащим не более двух двойных связей.

7. Получен иммобилизованный препарат липазы на стиросорбе, обладающий высокой устойчивостью к органическим растворителям при повышенных температурах. Изучена кинетика адсорбции, установлено высокое сродство липазы к сорбенту, обеспеченное преобладанием гидрофобных взаимодействий.

8. Установлены кинетические закономерности гидролиза и трансэтерификации в процессе конверсии триацилглицеролов в водной и органической средах для липазы Rh. oryzae 1403. Доказано, что этерификация и глицеролиз подчиняются пинг-понговому би-би-механизму с ингибированием акцептором ацила - глицерином. Ацидолиз не ингибируется субстратом и гидролиз не является скорость лимитирующей стадией.

9. Разработаны технологии хлебобулочных изделий на основе модификации растительных масел с использованием препаратов липазы Rhizopus oryzae 1403 и липоксигеназы растительного и микробного происхождения. Длительность брожения сокращается в 1,4-1,5 раза, улучшаются реологические свойства теста и качество хлеба (удельный объем на 8,6-12,5 %; формоустойчивость - на 5,4-13,5 %; пористость мякиша - на 5-11 %); замедляется черствение изделий.

10. Разработаны технологии получения жировых продуктов на основе ферментативных процессов с повышенным содержанием моно- и диацилглицеролов путем этерификации или глицеролиза; определены рациональные режимы этерификации; установлена возможность регуляции соотношения моно- и диацилглицеролов при глицеролизе изменением баланса «глицерин-ацильные группы» и полярности среды реакции.

Разработан способ получения низкокалорийных жиров с помощью ацидолиза растительных масел с каприловой и каприновой кислотами липазой Rhizopus oryzae 1403 в средах без растворителя и в гексане. Оптимизация параметров, влияющих на эффективность ацидолиза в системе без растворителя, позволила повысить включение каприновой кислоты до 60,6 мол. %, то есть до 91,8 % от теоретически возможного.

11. Проведены производственные испытания технологий хлебобулочных изделий на булочно-кондитерском комбинате (г. Санкт-Петербург) и хлебозаводах (г. Воронеж); технологий модификации растительных масел на предприятии ЗАО «ГК Маслопродукт» (г. Воронеж).

1. Адсорбционная иммобилизация щелочной липазы / Е. Я. Софьина, М. М. Рахимов, И. В. Штейн и др. // Прикл. биохимия и микробиол. 1991. - Т. 27, №. 4. -С.523-528

2. Алексеенко, А. В. Переэтерификация масел и жиров / А. В. Алексеенко, А. В. Предыбайло // Молоч. пром-сть. 2008. - № 11. - С. 24

3. Аминова, Э. М. Интенсификация и исследование процесса пеносушки пастообразных продуктов при комбинированном энергоподводе: дисс. . канд. техн. наук / Э. М. Аминова. Рига, 1985. - 132 с.

4. Аренде, И. М. Биосинтез липолитических ферментов Aspergillus awamori : дисс. . канд. техн. наук/И. М. Аренде. -М., 1971. 186 с.

5. Ауэрман, Л. Я. Применение липоксигеназы в хлебопечении / Л.Я. Ауэрман, Р.Д. Поландова, Т.Н. Пименова М.: ЦНИИТЭИпищепром, 1975. - 44 с.

6. Ауэрман, Л. Я. Технология хлебопекарного производства / Л. Я. Ауэрман. -СПб.: Профессия, 2003. 416 с.

7. Ауэрман, Л. Я. Ферментный способ улучшения качества пшеничного хлеба путем окислительного воздействия / Л. Я. Ауэрман, В. Л. Кретович, Р. Д. Поландова // Прикл. биохим. и микробиол. 1965. - Т. 1, № 1. - С. 66-73

8. Ацидолиз лярда липазой для продукции низкокалорийных функциональных липидов / H.-Z. Zhao, Z.-X. Lu, Х.-М. Bie et al. // Yingyong huaxue = Chin. J. Appl. Chem. 2006. - V. 23, № 2. - P. 203-206

9. Башкатова H. А. Липазы некоторых грамотрицательных бактерий : автореф. . канд. биол. наук / Н. А. Башкатова. М.: МГУ, 1980. - 23 с.

10. Березин, И. В. Введение в прикладную энзимологию. Иммобилизованные ферменты / И. В. Березин, К. Мартинек. М.: МГУ, 1982. - 383 с.

11. Бери, Д. Биология дрожжей / Д. Бери; пер. с англ. В. Г. Горбулева; под ред. Н. М. Мейселя. М.: Мир, 1985. - 95 с.

12. Бойцова, Е. Е. Новое поколение жиров для производства твердых и полутвердых начинок и конфет / Е. Е. Бойцова // Кондитер, и хлебопек, пр-во. 2010. - № 10.-С. 28-29

13. Брокерхоф, К. Липолитические ферменты / К. Брокерхоф, Р. Дженсен; пер. с англ. Т. П. Левчук, Э. А. Малаховой, Э. А. Толосы; под ред. А. Е. Браунштейна и Е.

14. B. Горяченковой. -М.: Мир, 1978.-396 с.

15. Буйнов, А. А. Оценка пригодности жидких пищевых продуктов к сушке во вспененном состоянии / А. А. Буйнов // Хранение и переработка сельхозсырья-1998.-№2,-С. 17-23

16. Буник, В. И. О функциональной роли гистидиновых остатков а-кетоглутарат-дегидрогеназы / В. И. Буник, В. С. Гомазкова // Биохимия. 1987. - Т. 52. - С. 1235-1247

17. Бурлова, И. А. Маргарины обычные и специализированные. В чем разница? / И. А. Бурлова // Кондитер, и хлебопек, пр-во. 2011. - № 2. - С. 32-34

18. Бухмет, М. Свойства дистиллированных моноглицеридов / М. Бухмет // Мас-ложир. пром-сть. 2007. - № 6. - С. 22-25

19. В фокусе жиры специального назначения // Кондитер, и хлебопек, пр-во. -2010.-№ 1-2.-С. 53

20. Варфоломеев, С. Д. Биокинетика: Практический курс / С. Д. Варфоломеев, К. Г. Гуревич. М.: ФАИР-ПРЕСС, 1999. - 720 с.

21. Васюкова, А. Влияние компонентов рецептуры на качество хлебобулочных изделий при хранении / А. Васюкова, Л. Абесадзе // Хлебопродукты. 2008. - № 8. -С. 50-51

22. Вершинина, О. Л. Пищевые добавки липидной природы и перспективы их применения в хлебопекарной промышленности /О. Л. Вершинина, Н. Н. Корнен,

23. C. А. Ильинова // Изв. вузов. Пищевая технол. 2001. - № 1. - С. 25-28

24. Вецозола, А. О. Сравнительное изучение влияния растительных масел и ПАВ на биосинтез липазы дрожжами Candida paralipolytica 739 / А. О. Вецозола, В. Т. Лука // В сб.: Влияние условий культивирования на активность продуцентов Рига, 1980,-С. 156-159

25. Взаимодействие аденозиндезаминазы с ингибиторами, модификация диэтил-пирокарбонатом / С. С. Марданян, С. Г. Шароян, А. А. Антонян и др. // Биохимия. 2002. - Т. 67, № 7. - С. 930-938

26. Влияние состава среды на биосинтез и свойства экзолипаз микроорганизмов / Ю. JI. Свириденко, Л. Б. Лобырева, А. Е. Марченкова и др. // Прикл. биохимия и микробиол,- 1978.- Т. 14.- № 5,- С. 677-682

27. Влияние техрегулирования на масложировую отрасль, сырьевую базу и выпуск новых видов продукции // Кондитер, и хлебопек, пр-во. 2012. - № 5. - С. 810

28. Вода в пищевых продуктах. / Под ред. Р. Б. Дакуорта; пер. с англ. Р. Н. Евтее-вой, Г. Е. Русанова; под ред. А. С. Гинзбурга, Г. Е. Русанова. М.: Пищевая пром-сть, 1980.-376 с.

29. Волошина, Т. Ю. Разработка способа получения растворимой и иммобилизованной липазы Rhizopus oryzae 14 и ее характеристика : дисс. . канд. техн. наук / Т. Ю. Волошина. М.: МГУПП, 1995. - 194 с.

30. Воробьева, О. В. Биосорбенты для иммобилизации белковых комплексов ферментных препаратов / О. В. Воробьева // Биотехнология. 2004. - № 2. - С. 70-75

31. Вудворд, Дж. Иммобилизованные клетки и ферменты. Методы : пер. с англ. / Дж. Вудворд. М.: Мир, 1988. - 215 с.

32. Выделение и характеристика внеклеточных липаз микромицета Pénicillium sp. / К. Д. Давранов, К. А. Тумялова, Б. Розмухамедова, М. Шамилева // Прикл. биохимия и микробиол. 1994. - Т. 30, № 2. - С. 234-237

33. Гааль, Э. Электорофорез в разделении биологических макромолекул. / Э. Га-аль, Г. Медьеши, Л. Верецкеи; пер. с англ. Е. Б. Мейзеля и др.; под ред. В. И. Ро-зенгарта. М.: Мир, 1982. - 446 с.

34. Гладкова, С. А. Жидкие маргарины ГК «НМЖК» / С. А. Гладкова // Кондитер. и хлебопек, пр-во. 2012. - № 6. - С. 22-23

35. Горохова, И. В. Изучение каталитических свойств липаз, иммобилизованных в гидрофобных средах : Автореф. дисс. . канд. хим. наук / И. В. Горохова. М.: Ин-т биоорган, химии РАН, 2003. - 24 с.

36. Горячева, А. Ф. Пути улучшения качества хлеба и сохранение его свежести / А. Ф. Горячева, Р. В. Кузьминский. М.: ЦНИИТЭИпищепром, 1984. - 28 с.

37. Грачев, Ю. П. Математические методы планирования экспериментов / Ю. П. Грачев. М.: Пищевая пром-сть, 1979. - 199 с.

38. Грачева, И. М. Технология ферментных препаратов / И. М. Грачева, А. Ю. Кривова. Изд. 3-е, перераб. и доп. - М.: Элевар, 2000. - 512 с.

39. Давранов, К. Д. Микробные липазы в биотехнологии: обзор / К. Д. Давранов // Прикл. биохимия и микробиол. 1994. - Т. 30, №. 4-5. - С. 527-534

40. Давранов, К. Д. Препаративное выделение, очистка, кристаллизация и некоторые свойства липазы из Oospora lactis / К. Д. Давранов, М. Я. Табак, А. С. Сатта-ров // Биохимия. 1989. - Т. 54, № 11. - С. 1866-1872

41. Дейнека, В. И. Диглицериды как альтернатива триглицеридам / В. И. Дейне-ка, JI. А. Дейнека // Масложир. пром-сть. 2011. - № 1. - С. 27-29

42. Деревянкина, Н. В. Новое поколение кондитерских жиров / Н. В. Деревянки-на // Кондитер, и хлебопек, пр-во. 2011. - № 3. - С. 22-23

43. Деревянкина, Н. В. Разработка начиночных жиров с низким содержанием трансизомеров жирных кислот / Н. В. Деревянкина // Кондитер, и хлебопек, пр-во. -2010.-№3-4.-С. 26-29

44. Детерман, Г. Гель-хроматография ; пер. с англ. / Г. Детерман. М.: Мир, 1970. -320 с.

45. Диеров Ж. X. Липазы микромицетов : дисс. . докт. биол. наук / Ж. X. Дие-ров. Пущино: Ин-т биохим. и физиол. микроорганизмов, 1994. - 400 с.

46. Диксон, М. Ферменты : в 3-х т. / М. Диксон, Э. Уэбб; пер. с 3-го англ. изд. Л. Д. Гинодмана и М. И. Левянт; под ред. В. К. Антонова и А. Е. Браунштейна М.: Мир, 1982.- 1120 с.

47. Досон, Р. Справочник биохимика / Р. Досон, Д. Эллиот, У. Эллиот, К. Джонс; пер. с англ. В. Л. Друцы и Л. Н. Королевой. М.: Мир, 1991. - 544 с.

48. Дубцова, Г. Н. Липид-белковые комплексы пшеницы, их формирование ироль в технологических процессах : дисс. . канд. техн. наук / Г. Н. Дубцова. М.: МТИПП, 1999.-650 с.

49. Дужак, А. Б. Выделение и свойства препаратов внеклеточных липаз природного (В-10) и мутантного (М-1) штаммов / А. Б. Дужак, 3. Н. Панфилов, Е. А. Ва-сюнина // Прикл. биохимия и микробиол. 2000. - Т. 36, № 4. - С. 402-411

50. Жиры специального назначения для пищевой промышленности / И. В. Павлова, М. Б. Коблицкая, Н. Л. Черникова, Н. В. Долганова, Е. В. Кравченко Е. В. До-ценко // Кондитер, и хлебопек, пр-во. 2012. - № 3. - С. 10-12

51. Жиры. Химический состав и экспертиза качества / О. Б. Рудаков, А. Н. Пономарев, К. К. Полянский, А. В. Любарь. М.: ДеЛи принт, 2005. - 312 с.

52. Зайцева, Л. В. 8Б8 новое поколение заменителей масла какао для производства кондитерских изделий / Л. В. Зайцева, А. И. Анина // Кондитер, и хлебопек, пр-во. - 2010. - № 5-6. - С. 31-32

53. Зайцева, Л. В. Жиры специального назначения 8Б8: инновационный подход к повышению качества и безопасности масложировой продукции / Л. В. Зайцева // Молоч. пром-сть. 2010. - № 6. - С. 56-57

54. Зайцева, Л. В. Инновационный подход к повышению качества и безопасности масложировой продукции / Л. В. Зайцева // Масла и жиры. 2010. - № 1-6. - С. 2628

55. Зайцева, Л. В. Использование энзимной переэтерификации для модификации масел / Л. В.Зайцева // Пищ. пром-сть. 2011. - № 5. - С. 22-25

56. Зайцева, Л. В. Использование энзимной переэтерификации для модификации масел / Л. В. Зайцева, А. Ю. Юдин // Масложир. пром-сть. 2011. - № 2. - С. 26-29

57. Зайцева, Л. В. Новая эра: заменители молочного жира по ГОСТу / Л.В. Зайцева // Пищ. пром-сть. 2011. - № 3. - С. 50-51

58. Зайцева, Л. В. Новое поколение жиров специального назначения / Л. В. Зайцева // Перераб. молока. 2010. - № 5. - С. 34-35

59. Зайцева, Л. В. Роль различных жирных кислот в питании человека и при производстве пищевых продуктов / Л. В. Зайцева // Масла и жиры. 2010. - № 9-10. -С. 32-36

60. Зайцева, JI. В. Транс-изомеры чума XXI века / Л. В.Зайцева // Кондитер, и хлебопек, пр-во. - 2012. - № 3. - С. 26-28

61. Зайцева, Л. В. Энзимная и химическая переэтерификация: сравнительный анализ / Л. В. Зайцева // Пищ. пром-сть. 2011. - № 6. - С. 56-59

62. Заявка 0913468 ЕПВ, МПК{6} C12N 9/88, A21D 8/04. Bread improving composition / Johannes Jozef Plijter, Gabriel Marinus Henricus Meesters; В. V. Gist-Brocades. № 98202389.7; заявл. 16.07.98; опубл. 06.05.99, Бюл. № 99/18

63. Заявка 1658775 Япония, МПК А 23 D 9/00. Fat composition for bakery product and bakery product / Y. Kameo, Y. Asabu, T. Tokunaga, S. Ogiwara; KAO Corp. № 04746016.7; Заявл. 10.06.2004; Опубл. 24.05.2006

64. Заявка 1717318 ЕПВ Япония, МПК С 12 P. Process for producing fat or oil / M. Kase, K. Shibata, T. Komatsu; Kao Corp. № 060088705.; Заявл. 28.04.2006; Опубл. 02.11.2006

65. Заявка 1741342 Япония, МПК А 23 D 9/007. Fat composition / J. Kohori, M. Shi-mizu, S. Koike et al.; Kao Corp. № 05727625.5; Заявл. 30.03.2005; Опубл. 10.01.2007

66. Заявка 1759589 Япония, МПК А 23 D 9/00. Fat composition / К. Masui, H. Taka-hashi; KAO CORP. № 05738602.1; Заявл. 27.04.2005; Опубл. 07.03.2007

67. Заявка 1982597 ЕПВ, МПК А 21 D. Fat replacer for bakery and patisserie applications / C. Surdiacourt, E. Agache, C. Deledicque; N. V. Puratos № 07106655.9; Заявл. 20.04.2007; Опубл. 22.10.2008

68. Звягинцева, M. В. Начиночные жиры компании «ЭФКО» с пониженным содержанием транс-изомеров для производства кондитерских изделий / М. В. Звягинцева // Пищ. пром-сть. 2012. - № 2. - С. 62-63

69. Звягинцева, М. В. Специализированные жиры для продукции с заданными функциональными и потребительскими свойствами / М. В. Звягинцева, А. В. Пре-дыбайло // Кондитер, пр-во. 2009. - № 3. - С. 12-13

70. Зубенко, Т. Ф. Условия выделения липазы Rhizopus microsporus на средах с молочной сывороткой и хлопковым шротом / Т. Ф. Зубенко др. // Узбекский биолог. журнал. 1983. - № 4. - С. 9-11

71. Зубченко, А. В. Пути эффективного использования сахаросодержащих и жировых продуктов в хлебопекарной промышленности / А. В. Зубченко, Т. В. Санина. М.: ЦНИИТЭИхлебопродуктов, 1990. - 36 с.

72. Иванкин, А. Н. О качестве растительных и животных жиров / А. Н. Иванкин, И. М. Чернуха, Т. Г. Кузнецова // Масложир. пром-сть. 2007. - № 2. - С. 8-11

73. Изоферментный состав и активность липоксигеназы некоторых сортов пшеницы вида Triticum aestivum / H. А. Оганесян, И. Г. Борисова, Д. А. Соломатин, Е. В. Будницкая // Докл. АН СССР. 1983. - Т. 269, № 4. - С. 1002-1005

74. Изучение процесса ультрафильтрации растворов грибной липазы / Т. А. Григорьева, А. М. Рожанская др. // Прикл. биохимия и микробиол. 1977. - Т. 13, Вып. 5.-С. 779-781

75. Иммобилизованные ферменты. Биотехнология / И. В. Березин, Н. В. Клячко, А. В. Левашов и др. М.: Высшая школа, 1987. - 159 с.

76. Ипатова, Л. Г. Новые направления в создании функциональных жировых продуктов / Л. Г. Ипатова, А. А. Кочеткова, А. П. Нечаев // Пищ. пром-сть. 2007. - № 1. - С. 5-7

77. Казаков, Е. Д. Клейковина, ее формирование, состав : в 2-х ч. / Е. Д. Казаков // Элеваторная промышленность: обзорная информация. М.: ЦНИИТЭИ, 1992. - Ч. 1.-60 с.

78. Казаков, Е. Д. О теоретических основах образования клейковины // Изв. вузов. Пищевая технол. 1992. - № 1. - С. 5-7

79. Камышова, Е. Г. Функциональные свойства и назначение начиночных жиров / Е. Г. Камышова // Кондитер, и хлебопек, пр-во. 2009. - № 11. - С. 8, 10-11

80. Кейтс, М. Техника липидологии: Выделение, анализ и идентификация липи-дов / М. Кейтс; пер с англ. В. А. Вавера. М.: Мир, 1975. - 324 с.

81. Келети, Т. Основы ферментативной кинетики / Т. Келети; пер. с англ. JL Ю. Бровко и др.; под ред. Б. И. Курганова. М.: Мир, 1990. - 350 с.

82. Кинетика гидролиза животного жира панкреатической липазой / А. Б. Герман, А. Д. Неклюдов, А. Н. Иванкин, А. В. Бердутина // Прикл. биохимия и микро-биол. 2002. - Т. 38, № 6. - С. 604-608

83. Клесов, А. А. Ферментативный катализ : в 2-х ч. / А. А. Клесов, И. В. Березин. -М.: Изд-во МГУ, 1980.-Ч. 1.-264 с.

84. Ковалева, С. В. Фотоокисление и модификация диэтилпирокарбонатом «биосинтетической» L-треониндегидратазы из пивных дрожжей Sassharomyces carls-bergensis / С. В. Ковалева, А. И. Дорожко, 3. С. Каган // Биохимия. 1984. - Т. 49, №8.-С. 1253-1262

85. Коваленко, Г. А. Иммобилизация ферментов на углеродминеральных носителях. Некоторые закономерности адсорбционной иммобилизации ферментов / Г. А. Коваленко, М. П. Ванина // Биотехнология 1997- № 4 - С. 3-12

86. Ковальская, JI. П. Технология пищевых продуктов / JI. П. Ковальская, И. С. Шуб, Г. М. Мелькина. М.: Колос, 1999. - 752 с.

87. Козьмина, Н. П. Биохимия хлебопечения / Н. П. Козьмина. Изд. 2-е, пере-раб. и доп. - М.: Пищевая пр-сть, 1978. - 277 с.

88. Конова, Н. И. Влияние жидких растительных масел на качество хлеба из пшеничной муки / Н. И. Конова, Т. В. Рензяева // Кондитер, и хлебопек, пр-во. 2010. -№ 7-8. - С. 28-30

89. Концентрирование и очистка растворов щелочной протеиназы методом ультрафильтрации / Э. А. Шишкова, С. С. Фокина, Э. М. Трефилов и др. // Прикл. биохимия и микробиол. 1981. - Т. 17, № 2. - С. 233-237

90. Красильников, В. Н. Перспективы развития технологии жиров и масел / В. Н. Красильников // Прод. и ингредиенты. 2008. - № 8. - С. 56-57

91. Кретов, И. Т. Повышение эффективности сублимационной сушки вспененных продуктов / И. Т. Кретов, С. В. Шахов, А. Н. Рязанов // Хранение и переработка сельхозсырья. 2000,- № 5.- С. 20-24

92. Кретов, И. Т. Повышение эффективности сублимационной сушки ферментных препаратов / И. Т. Кретов, С. Т. Антипов, С. В. Шахов // Холодильная техника.- 1993,-№6.-С. 57-59

93. Кривова, А. Ю. Технология микробных ферментных препаратов, осуществляющих трансформацию липидов : дисс. . докт. техн. наук / А. Ю. Кривова. М., 1995.-426 с.

94. Ксандопуло, Г. Б. Влияние некоторых жиров и поверхностно-активных веществ на липазную активность грибов рода Сео1г1сИит / Г. Б. Ксандопуло // Микробиология,- 1974,- Т. 43, № 6,- С. 1001-1004

95. Кулакова, С. П. Спреды современные жировые продукты, особенности их химического состава и перспективы использования / С. Н. Кулакова, Е. В. Викторова // Масложир. пром-сть. - 2007. - № 7. - С. 4-5

96. Купажированное растительное масло для геродиетического питания / И. И. Кондратова, В. Н. Бабодей, В. С. Голубева, Д. А Хоняк., Л. Н. Николаевич // Пищ. пром-сть: наука и технол. (Беларусь). 2010. - № 4. - С. 21-26

97. Ливинский, А. А. Масла разные важны, масла разные нужны. / А. А. Ливин-ский // Масложир. пром-сть. 2011. - № 2. - С. 4-7

98. Липолитическая активность гриба Blakeslea trispora / С. А. Васильченко, Л. В. Баталкина, С. В. Васильченко и др. // Вопр. химии и хим. технол. Харьков. -1989.-№91.-С. 49-52

99. Лисицын, А. Н. Научные принципы получения экологически безопасных мас-ложировых продуктов / А. Н. Лисицын, В. Н. Григорьева // Хранение и перераб. сельхозсырья. 2008. - № 12. - С. 40-42

100. Луговой, В. И. Криоповреждения ферментов и ферментных систем. Актуальные проблемы криобиологии / В. И. Луговой; под. ред. Н. С. Пушкаря, А. М. Белоуса. Киев.: Наукова думка, 1981. - 607 с.

101. Мазалова, Л. М. Инновационные технологии производства специализированных жиров с пониженным содержанием трансизомеров жирных кислот / Л. М. Мазалова // Кондитер, пр-во. 2010. - № 5. - С. 18-19

102. Мазалова, Л. М. Тенденции в области производства специализированных жиров / Л. М. Мазалова, Т. Н. Мирошникова // Кондитер, пр-во. 2011. - № 3. - С. 1617

103. Мартинек, К. Иммобилизованные ферменты / К. Мартинек- М.: Наука, 1984. -324 с.

104. Матвеева, И. В. Пищевые добавки и хлебопекарные улучшители в производстве мучных изделий / И. В. Матвеева, И. Г. Белявская. М.: МГУПП, 1998. - 104 с.

105. Матвеева, И. В. Ферментные технологии в производстве и модификации жиров современный взгляд и перспективы применения / И. В. Матвеева, Д. Кован, X. К. Холм // Пищ. ингредиенты: сырье и добавки. - 2010. - № 2. - С. 30-32

106. Махсумханов, А. А. Условия культивирования и биосинтез липаз грибом Pénicillium melinii УзЛМ-4 / А. А. Махсумханов, И. Т. Якубов, К. Д. Давранов // Прикл. биохимия и микробиол. 2003. - Т. 39, № 1. - С. 47-51

107. Мееров, Г. И. О специфичности заменителей панкреатической липазы и методах ее определения / Г. И. Мееров, Е. Г. Михальская, Г. В. Савинова // Химико-фармацевтический журнал. 1980. - № 6. - С.42-45

108. Мельников, В. В. Переэтерификация: химическая или энзимная? / В. В. Мельников // Кондитер, и хлебопек, пр-во. 2010. - № 1-2. - С. 28-30

109. Механизм сорбции т-РНК неионогенным сорбентом / Г. Ю. Орос В. Ф. Селе-менев, В. Ю. Хохлов и др. // Физическая химия. 1988. - Т. 72, № 5. - С. 926932

110. Микробные ферменты и биотехнология ; пер. с англ. / Под ред. В. М. Фогарти. М.: Агропромиздат, 1986. - 318 с.

111. Мухамеджанова, Т. Г. Разработка условий биосинтеза липазы грибом ЯЫгорш огугае 14-14 : автореф. дисс. . канд. техн. наук / Т. Г. Мухамеджанова.- М., 1981 — 26 с.

112. Неклюдов, А. Д. Биохимическая переработка жиров и масел в новые липид-ные продукты с улучшенными биологическими и физико-химическими свойствами: обзор / А. Д. Неклюдов, А. Н. Иванкин // Прикл. биохимия и микробиол. -2002. Т. 38, № 5. - С. 469-481

113. Некоторые свойства внеклеточной липазы КЫгорт тгсгоярогт УзЛТ-3 / К. Д. Давранов, И. Т. Куйлибаев, Б. X. Розмухамедова, А. А. Махсумханов // Прикл. биохимия и микробиол. 1995. - Т. 31, № 4. - С. 405-411

114. Некрасов, П. О. Дослцркення ф1зюлопчних властивостей жирових емульсшних систем, збагачених д1ацилглщеринами / П. О. Некрасов, Т. В. Горбач, О. В. Подлюна // Вопр. химии и хим. технол. 2010. - № 4. - С. 55-58

115. Некрасов, П. О. Оптим1защя процесу молекуляржм дистиляцп при отриманш жир1в, збагачених д1ацилглщеринами / П. О. Некрасов // 1ТЕ: 1нтегров. технол. та енергозбереження. 2009. - № 3. - С. 75-81

116. Некрасов, П. О. Особенности микроструктуры функциональных майонезов, обогащенных диацилглицеринами / П. О. Некрасов // Масложир. пром-сть. 2009. -№ 3. - С. 24-25

117. Нечаев, А. П. Научные основы технологий получения функциональных жировых продуктов нового поколения / А. П. Нечаев // Масла и жиры. 2007. - № 8. - С. 26-27

118. Нечаев, А. П. Пищевые продукты XXI века / А. П. Нечаев // Масла и жиры. -2011.-№ 1.-С. 4-7

119. Нечаев, А. П. Продукция масложировой отрасли s важнейший сегмент продовольственного рынка / А. П. Нечаев // Мир мороженого и быстрозаморож. продуктов. 2010. - № 3. - С. 28-29

120. Нечаев, А. П. Теоретические основы и практические аспекты создания жировых продуктов функционального назначения / А. П. Нечаев // Тр. МГУПП. 2008. - № 1. - С. 81-90

121. Николаенко, С. В. Повышение эффективности сублимационной сушки ферментных препаратов : автореф. дисс. . канд. техн. наук С. В. Николаенко. Воронеж: ВТИ, 2000. - 24 с.

122. О'Брайен, Р. Жиры и масла. Производство, состав и свойства, применение / Р. О'Брайен; пер. с англ. 2-го изд. В. Д. Широкова, Д. А. Бабейкиной, Н. С Селивановой, Н. В. Магды. СПб.: Профессия, 2007. - 752 с.

123. Окара, А. И. Управление жирнокислотным составом и потребительскими свойствами растительных масел-смесей путем оптимизации рецептур / А. И.Окара, К. Г.Земляк, Т. К. Каленик // Масложир. пром-сть. 2009. - № 2. - С. 8-10

124. Оптимизация расчета смесей растительных жиров и масел с использованием критериев их физиологической функциональности / А. В. Самойлов, А. А. Кочет-кова, С. М. Севериненко и др. // Пищ. пром-сть. 2010. - № 9. - С. 68-70

125. Оценка безопасности транс-жирных кислот / Q. Jin, X. Wang, W. Cao, P. Ran // Zhongguo youzhi = China Oils and Fats. 2011. - 36, № 1. - C. 5-9

126. Очистка и свойства внутриклеточных липаз гриба Rhizopus microsporus / Ж. X. Диеров, А. Б. Циоменко, К. Д. Давранов, И. С. Кулаев // Биотехнология. 1993. -№ 7.-С. 26-30

127. Очистка, физико-химические и каталитические свойства микробных липаз: обзор. / Р. Ю. Аре, Б. Я. Лусиня, М. Г. Плата и др. // Известия АН Латвийской ССР, 1979.-№6. -С. 92-106

128. Павлова, И. В. Проблемы модернизации в области производства специальных жиров / И. В. Павлова, М. Б. Коблицкая // Масла и жиры. 2011. - № 6. - С. 11-13

129. Паронян, В. X. Технология жиров и жирозаменителей / В. X. Паронян. М. : ДеЛи принт, 2006. - 760 с.

130. Пат. 158936 Польша, МКИ5 с 11С 1/04. Sposob wytwrzauia wolnych kwasow tluszczowych z flejow glicerydowych / M. Rucka, B. Turkiewicz; Polytechnika W № 279298, заявл. 4.05.89; опубл. 30.10.92

131. Пат. 2148645 РФ, МПК7 C12N 9/18, C12N 11/02. Способ получения микрокап-сулированной липазы / Р. Б. Айсина, Н. Б. Демина, Н. Ф. Казанская и др.; МГУ. -SU 1112056; заявл. 18.02.83; опубл. 07. 09. 84, Бюл. № 33

132. Пат. 2377775 Россия, МПК А 21 D 8/02. Способ приготовления пшеничного хлеба / К. М. Рамзин, А. Н. Лисицын, А. И. Шебеко, В. Н. Григорьева; Гос. ВНИИЖ. № 2007130752/13; Заявл. 03.08.2007; Опубл. 10.01.2010

133. Пат. 2415178 Россия, МПК С12 Р. Ферментативная переэтерификация масла / С. У. Пирс, Л. С. Педерсен, Т. Л. Хусум, X. X. Хольм, П. М. Нильсен; НОВОЗАЙМЗ НОРТ АМЕРИКА, ИНК., НОВОЗИМС А/С. № 2008114354/13; Заявл. 11.09.2006; Опубл. 27.03.2011

134. Пат. 2422032 Россия, МПК А23 D 7/00. Продукты питания с низким содержанием насыщенных и трансизомерных ненасыщенных жиров / Б. Кленеверк, Т. Юсиода, С. Вербек; ФУДЖИ ОЙЛ ЮРОП. № 2008136033/13; Заявл. 08.02.2007; Опубл. 27.06.2011

135. Пат. 2422498 Россия, МПК С11С 3/08. Способ получения диолеоил пальмито-ил глицерида / Э. Й. Швейцер, Ф. У. Кэйн, У. Шмид; ЛОДЕРС КРОКЛАН Б. В. № 2008113374/04; Заявл. 08.09.2006; Опубл. 27.06.2011

136. Пат. 4904485 США, МКИ4 А 23 L 1/28. Fat compositions suitable for use in baceries or confections / T. Hirakawa, K. Oya et al. № 104712; Заявл. 1.10.87; Опубл. 27.02.90; приор 2.10.86, № 61 - 234783 Яп., МКИ 426/62

137. Пат. 5166069 США, МКИ5 С 12 N 1/20, С 12 N 1/100. Bacillus sp. А30-1 АТСС 53841 / Gwo-Sean Shen, Kailash С. Srivastava, Yongxiang Wang, Henry Y. Wang; Michigan Biotechnology Institute. № 796961; заявл. 25.10.91; опубл. 24.10.92; НКИ 435/252,5

138. Пат. 5227300 США, МКИ С 12 N 9/20. Identification, characterization and method of production of a novel microbial lipase / Paul E. Holmes, Jon A. Kornacki; Olin corp. -№ 966652; заявл. 23.10.92; опубл. 13.07.93.; МКИ 435/198

139. Пат. 7090886 США, МПК{8} А 23 D 9/007. Oil/fat composition / S. Koike, Т. Yasumasu, Т. Hase; Kao Corp. № 10/343748; Заявл. 07.08.2001; Опубл. 15.07.2006

140. Пат. 7241468 США, МПК А 23 D 9/007. Reduced calorie fat compositions / R. В. Naber, J. J. Kester, J. W. Jr. McRorie et al.; The Procter & Gamble Co. № 10/149875; Заявл. 18.12.2000; Опубл. 10.07.2007

141. Пат. 773466 Австралия, МПК{6} C12N 011/08, C12N 011/14. Surfactant-lipase complex immobilized on insoluble matrix / Basheer Sobhu; Enzymotec Ltd. № 200033206; заявл. 16.03.00; опубл. 27.05.04

142. Перт, С. Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток ; пер. с англ. / С. Дж. Перт. М.: Мир, 1978. - 330 с.

143. Петрова, JI. J1. Применение pH-статного метода для изучения ферментативного действия липазы Pénicillium sp. / Jl. Л. Петрова, Г. А. Казанина, А. А. Селезнева // Прикл. биохим. и микроб. 1977. - Т. 13, № 5. - С. 758

144. Петрова, С. Н. Достойная альтернатива маргарину / С. Н. Петрова // Хлебопек. пр-во. 2008. - № 5. - С. 65-66

145. Поландова, Р. Д. Применение пищевых добавок в хлебопечении / Р. Д. По-ландова // Хлебопечение России. 1996. - № 1. - С. 25-30

146. Поландова, Р. Д. Проблемы промышленного производства комплексных хлебопекарных улучшителей / Р. Д. Поландова, Т. П. Турчанинова, Б. Увайтхэст // Хлебопечение России. 1998. - № 3. - С. 25-28

147. Получение высокоактивных препаратов нейтральной протеазы Bacillus subtilis / В. А. Мартьянов, А. Ф. Зябрев, Б. П. Финогенов и др. // Ферменты микроорганизмов: сб. ст. М.: ВНИИСЭТИИ, 1989. Ч. 1.-С. 175-185

148. Получение продукта, богатого 1,3-дистеароил-2-олеоилглицерином, ферментативным ацидолизом в системе, не содержащей растворителя / L. Wang, Y. Liu, Z. Xu et al. // Zhongguo youzhi = China Oils and Fats. 2010. - V. 35, № 11. - P. 33-35

149. Приготовление хлеба с добавлением растительного масла / Н. Конова, Т. Рен-зяева, И. Шарфунова, Т. Кичаева, О. Рензяев // Хлебопродукты. 2009. - № 2. - С. 50-51

150. Пучкова, JI. И. Взаимодействие крахмала с липидами в пшеничном хлебе / Л. И. Пучкова, Р. И. Теленкова, Е. А. Назаренко // Изв. вузов. Пищевая технол. 1980. -№ 1.-С. 125-127

151. Пучкова, Л. И. Влияние различных жировых продуктов на свойства клейковины пшеничной муки первого сорта / Л. И. Пучкова, Р. И. Теленкова, Е. А. Назаренко // Изв. вузов. Пищевая технол. 1979. - № 1. - С. 51-54

152. Пучкова, Л. И. Лабораторный практикум по технологии хлебопекарного производства / Л. И. Пучкова. СПб.: ГИОРД, 2004. - 264 с.

153. Рабинович, Л. М. Научные принципы получения пищевых жиров с минимальным содержанием транс-изомеров / Л. М. Рабинович // Масла и жиры. 2007. - № 8.-С. 16-20

154. Рахимов, M. М. Изучение липолитических ферментов и некоторых закономерностей гетерогенного ферментативного катализа : дисс. . докт. биол. наук / М. М. Рахимов. Ташкент: И-т микробиологии АН УзССР, 1981. - 580 с.

155. Регдел, Д. Липоксигеназа плодов помидора. Выделение, частичная очистка, краткая характеристика. Взаимодействие с биологическими мембранами / Д. Регдел, Т. Шеве, X. Кюн // Биохимия. 1994. - № 6. - С. 788-795

156. Рихтер, М. Избранные методы исследования крахмала / М. Рихтер, 3. Аугу-стамт, Ф. Ширбаум; пер. с нем. Л. В. Бабиченко; под ред. Н. П. Козьминой, В. С. Грюнера. М.: Пищевая пром-сть, 1975 - 183 с.

157. Роль остатков гистидина в конститутивной НАД(Ф)-глутаматдегидрогеназе Chorella pirenoidosa / Л. П. Лосева, М. В. Бендианишвили, В. Р. Шатилов и др. // Биохимия. 1986. - Т. 51. - С. 840-849

158. Романовская, И. И. Иммобилизация липазы Pénicillium solitum на углеродном волокнистом материале "Днепр-МН" / И. И. Романовская, Г. И. Бондаренко, Т. И. Давиденко // Хим.-фармац. ж. 2008. - 42, № 6. - С. 49-51

159. Рощупкина, H. В. «ЭФКО Пищевые Ингредиенты» расширяет линейку жиров с низким содержанием трансизомеров / Н. В. Рощупкина // Пищ. ингредиенты: сырье и добавки. 2007. - № 2. - С. 40-41

160. Рубан, Е. JI. Микробные липиды и липазы / Е. JI. Рубан. М.: Наука, 1977216 с.

161. Рухлядева, А. П. Методы определения активности гидролитических ферментов / А. П. Рухлядева, Г. В. Полыгалина. М.: Легкая и пищевая пром-сть, 1981. -288 с.

162. Рязанов, А. Н. Исследование процесса вакуум-сублимационной пеносушки ферментного препарата липазы Rhizopus japonicus 1403 : дисс. . канд. техн. наук / А. Н. Рязанов. Воронеж, 2001.- 179 с.

163. Сажина, Е. И. Опыт применения жировых продуктов в производстве булочных изделий / Е. И. Сажина, Г. Н. Дубцова, И. У. Кусова, Г. Г. Дубцов // Кондитер, и хлебопек, пр-во. 2012. - № 4. - С. 18-19

164. Свириденко, Ю. Я. Селекция микроорганизмов продуцентов липаз, перспективных для сыроделия : дисс. . канд. техн. наук / Ю. Я. Свириденко. - Углич, 1978.-221 с.

165. Северина, Л. О. Выделение и свойства экзолипазы Serratia marcescens 345 / Л.О. Северина, Н. А. Башкатова // Прикл. биохимия и микробиол 1980 - Т. 16-№ I.- С. 72-79

166. Семенкина, Н. Г. Влияние продуктов переработки расторопши пятнистой на реологические свойства пшеничного теста / Н. Г. Семенкина // Хлебопечение России. 2010.-№ 6. - С. 23-25

167. Синдякова, Т. А. Переэтерификация как наиболее эффективный способ модификации жиров / Т. А. Синдякова // Кондитер, и хлебопек, пр-во. 2010. - № 11. -С. 14-15

168. Система научного и инженерного обеспечения пищевых и перерабатывающих отраслей АПК России / А. Н. Богатырев, В. А. Панфилов, В. И. Тужилкин и др. -М.: Пищ. пром-сть, 1995 528 с.

169. Скрябина, Н. М. Научно обоснованные методы разработки рецептур жировых продуктов / Н. М. Скрябина, А. П. Нечаев // Масложир. пром-сть. 2006. - № 5. - С. 28-29

170. Солопенкова, О. В. Жировой продукт энзимной переэтерификации для производства сахарного печенья / О. В. Солопенкова, И. В. Матвеева, Е. Е. Дудник // Кондитер, пр-во. 2011. - № 1. - С. 14-15

171. Софьина, Е. Я. Иммобилизация липазы из Pseudomonas aeruginosa на магнитном носителе, модифицированном полиамидом / Е. Я. Софьина, J1. Н. Мухутдино-ва, М. М. Рахимов // Химия природ, соед. 1998. - № 6. - С. 812-817

172. Специальные жиры для предприятий пищевой промышленности / И. В. Павлова, М. Б. Коблицкая, Н. JI. Черникова и др. // Масла и жиры. 2007. - № 1. - С. 1213

173. Сравнительный анализ жирнокислотного состава традиционных иэкзотиче-ских видов сырья / JI. В. Пешук, И. Г. Радзиевская, В. А. Кищенко, И. В. Левчук // Хранение и перераб. сельхозсырья. 2011. -№ 7. - С. 29-33

174. Степанова, Л. И. Заменители молочного жира SDS и СОЮЗ гарантия качества вашей продукции / Л. И. Степанова // Перераб. молока. - 2010. - № 10. - С. 5051

175. Стопский, В. С. Химия жиров и продуктов переработки жирового сырья / В. С. Стопский, В. В. Ключкин, Н. В. Андреев. М.: Колос, 1992. - 286 с.

176. Стромберг А. Г. Физическая химия / А. Г Стромберг, Д. П. Семченко. М.: Высш. шк., 1988.-496 с.

177. Субботина, М. А. Физиологические аспекты использования жиров в питании / М. А. Субботина // Техн. и технол. пищ. пр-в. 2009. - № 4. - С. 54-57

178. Султанова, И. Г. Влияние аминокислот и витаминов на образование липазы грибом Rhizopus microsporus штамм УзЛТ-1 / И. Г. Султанова, Т. Ф. Зубенко, М. 3. Закиров // Узбекский биолог, журнал 1976 - № 6 - С. 6-9

179. Султанова, И. Г. Влияние некоторых поверхностно-активных веществ на биосинтез липазы грибом штамм Rhizopus microsporus УзЛТ-1 / И. Г. Султанова, Т. Ф. Зубенко // Узбекский биолог, журнал 1976 - № 5 - С. 71-72

180. Султанович, Ю. А. Современные тенденции развития технологии специальных жиров и маргаринов / Ю. А. Султанович, В. В. Мельников // Кондитер, и хлебопек, пр-во.-2011.-№ 8.-С. 12-13

181. Табакаева, О. В. Новые виды растительных масел как источники полиненасыщенных жирных кислот и селена / О. В. Табакаева // Масложир. пром-сть. -2007. № 6. - С. 26-27

182. Теоретические основы биотехнологии. Биохимические основы синтеза биологически активных веществ / С. Н. Бутова, И. А. Типисева, Г. И. Эль-Регистан; под общей редакцией И. М. Грачевой. М.: Элевар, 2003. 554 с.

183. Технико-экономический анализ инноваций в производстве пищевых модифицированных жиров / Ю. А. Тырсин, В. В. Сухонос, О. К. Филатов, А. А. Корчем-кин. М. : Пищепромиздат, 2004. - 80 с.

184. Технологические свойства жировых продуктов в производстве булочных изделий / А. П. Косован, Г. Ф. Дремучева, А. А. Невский и др. // Хлебопечение России. 2010.-№ 2. - С. 20-21

185. Торчинский, Ю. М. Сера в белках / Ю. М. Торчинский. М.: Наука, 1977. -302 с.

186. Тривен, М. Иммобилизованные ферменты: Вводный курс и применение в биотехнологии / М. Тривен; пер. с англ. Е. Б. Майзеля, под ред. И. В. Березина. М.: Мир, 1983.-213 с.

187. Тутельян, В. А. Функциональные жировые продукты в структуре питания / В. А. Тутельян, А. П. Нечаев, А. А. Кочеткова // Масложир. пром-сть. 2009. - № 6. -С. 6-9

188. Тырсин, Ю. А. Интенсификация гидролиза в биотехнологии и пищевой промышленности : дисс. . докт. техн. наук / Ю. А. Тырсин. М., 1993. - 283 с.

189. Ферментативный гидролиз целлюлозы / А. А. Клесов, М. Я. Рабинович, И. К. Чурилова и др. // Биоорган, химия. 1980. - № 6. - С. 1225-1242

190. Черных, В. Я. Оценка качества жировых продуктов, используемых при производстве хлебобулочных изделий / В. Я. Черных, И. X. Мизова, Ю. А. Султанович // Пищ. пром-сть. 2011. - № 3. - С. 5 8-60

191. Чижова, К. Н. Белок клейковины и его преобразование в процессе хлебопечения / К. H. Чижова. M.: Пищевая пром-сть, 1979. - 135 с.

192. Шарфунова И. Б., Использование сурепного масла при производстве ржано-пшеничного хлеба / И. Б. Шарфунова, М. Р. Ванюхина // Продукты питания и рациональное использование сырьевых ресурсов : Сб. науч. работ. Вып. 14. Кемерово, 2007.-С. 114

193. Шарфунова, И. Б. Обогащение ржано-пшеничного хлеба / И. Б. Шарфунова, Т. В. Рензяева, Н. В. Вандакурова // Продукты питания и рациональное использование сырьевых ресурсов : Сб. науч. работ. Вып. 15. Кемерово, 2008. - С. 66

194. Шленская, Т. В. Назначение и функциональные свойства специальных жиров / Т. В. Шленская, А. К. Махмудов // Хранение и перераб. сельхозсырья. 2008. - № 11.-С. 61-62

195. Штейн, И. М. Разработка технологии бактериальной щелочеустойчивой липазы : автореф. . канд. техн. наук/И. М. Штейн. -М.: МТИПП, 1991. -26 с.

196. Штыркова, Е. А. Технология и технологический контроль крахмального производства / Е. А. Штыркова, Е. К. Сидорова, М. Пазирук. М.: Агропромиздат, 1986.-315 с.

197. Юдин, А. Ю. Влияние жировых продуктов энзимной переэтерификации на свойства теста из пшеничной муки / А. Ю. Юдин // Пищ. пром-сть. 2010. - № 12. - С. 88-89

198. Юдин, А. Ю. Жировые продукты при приготовлении хлебобулочных изделий из пшеничной муки высшего сорта / А. Ю. Юдин, Ю. М. Феофанова, Е. Е. Дудник // Хранение и перераб. сельхозсырья. 2010. - № 12. - С. 43-47

199. Юдин, А. Ю. Использование жиров, полученных методом энзимной переэтерификации, для повышения качества хлеба из пшеничной муки / А. Ю. Юдин, JI. В. Зайцева, Л. И. Валеева // Пищ. пром-сть. 2011. - № 12. - С. 46^18

200. A novel application of solid state culture: production of lipases by Yarrowia lipolytica / A. Dominguez, M. Costas, M. A. Longo, A. Sanroman // Biotechnol. Lett.2003.-V. 25, № 15.-P. 1225-1229

201. A serine protease triad forms the catalytic centre of a triacylglycerol lipase / L. Brady, A. M. Brzozowski, Z. S. Derewenda et al. // Nature. 1990 - V. 343. - P. 767770

202. Abdel-Fattah Yasser Refaat. Optimization of thermostable lipase production from a thermophilic Geobacillus sp. using Box-Behnken experimental design / Abdel-Fattah Yasser Refaat // Biotechnol. Lett. 2002. - 24, № 14. - P. 1217-1222

203. Active serine involved in the stabilization of the active site loop in the Humicola lanuginosa lipase / G. H. Peters, A. Svendsen, H. Langberg et al. // Biochem. 1998. -V.37.-P. 12375-12383

204. Adamitsch, B. F. Formation of lipolytic enzymes by Brevibacterium linens / Bernard F. Adamitsch, Werner A. Hampel // Biotechnol. Lett. 2000. - V.22, № 20. - C. 1643-1646

205. Adamitsch, B. F. High cell density cultivation of Brevibacterium linens and formation of proteinases and lipase / B. F. Adamitsch, F. Karner, W. A. Hampel // Biotechnol. Lett. 2003. - 25, № 9. - P. 705-708

206. Aintesche, R. Verfahren zur immobilisierung von biologisch aktiven materialen / R. Aintesche // Mol. Biol. 1994. - V. 23, № 3. - P. 587-600

207. Akoh, C. C. Structured lipids enzymatic approach / C. C. Akoh // Inform. - 1995. V. 6.-P. 1055-1961

208. Akoh, C. Enzymatic synthesis of position-specific low-calorie structured lipids / C. Akoh, L. N. Yee // J. Am. Oil Chem. Soc. 1997. V. 11. - P. 1409-1413

209. Ali, S. Production of an extracellular lipase from Candida lipolytica and parameter significance analysis by Plackett-Burman design / S. Ali, H. Rafi, Ikram-ul-Haq // Eng. Life Sci. 2010. - V. 10, № 5. - P. 465-473

210. Ando, S. Occurrence of marine bacterial lipase hydrolyzing fish oil / S. Ando, A. Yochida, M. Hatano // Agr. Biol. Chem. 1991. - V. 55, № 10. -P. 2657-2659

211. Application of immobilized lipase to regio-specific interesterification of triglyceride in organic solvent / K. Yokozeki, S. Yamanaka, K. Takinami et al. // Eur. J. Appl. Biotechnol. 1982. - V. 14. - P. 1-5

212. Application of water mimics on preperetion of eicosapentaenoic and docosahex-aenoic acids containing glycerolipids / M. Hosokawa, K. Takahashi, N. Miyazaki et al. // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1995. - V. 72, № 4. P. 421-425

213. Arcos, J. A. Rapid enzymatic production of acylglycerols from conjugated linoleic acid and glycerol in a solvent-free system / A. J. Arcos, C. Otero, G. Hill Charles // Bio-technol. Lett. 1998. - V. 20, № 6. - P. 617-621

214. Armas, J. C. Mucor griseocyanus lipase: Production, characterization and study of some catalytic properties of the immobilised enzyme / J. C. Armas, J. C. D. Mendoza, H. J. L. Martinez // Food Technol. and Biotechnol. 2008. - V. 46, № 2. - P. 195-201

215. Arsan, J. Selectivity of Candida antarctica B lipase toward fatty acid and (isopro-panol substrates in esterification reactions in organic media / J. Arsan, K. L. Parkin // J. Agr. Food Chem. 2000. - V. 48, № 8. - P. 3738-3743

216. Aucoin, M. G. Hyperactivation of Rhizomucor miehei lipase by hydrophobic xe-rogels / M. G. Aucoin, F. A. Erhardt, R. L. Legge // Biotechnol. Bioeng. 2004. - V. 85, №6.-P. 647-655

217. Aulakh, S. S. Optimization of medium and process parameters for the production of lipase from an oil-tolerant Aspergillus sp. (RBP-01) / Aulakh, R. Prakash // J. Basic Microbiol. 2010. - V. 50, № 1. - P. 37-42

218. Avaliacao e comparacao da eficiencia de imobilizacao de lipase pancreatica em quitosana para producao de acidos graxos em frascos agitados / de Aguiar R. O., Macarini M. R., Agnes E. J. et al. // Acta sci. Technol. 2010. - V. 32, № 1. - P. 15-19

219. Babayan, V. K. Medium chain triglycerides and structured lipids / V. K. Babayan // Lipids. 1987. - V. 22. - P. 417-420

220. Bacterial lipases / K.-E. Jaeger, S. Ransac, B.W. Dijkstra et al. // FEMS Microbiol. Rev. 1994,- V. 15.- P. 29-63

221. Badings, H. T. Glass capillary gas chromatography of fatty acid methyl esters. A study of conditions for the quantitative analysis of short- and long-chain fatty acids in lipids / H. Т. Badings, С. de Jong // J. Chromatogr. 1983. - V. 279. P. 493-506.

222. Bai, Z.-W. Приготовление иммобилизованной липазы с использованием смеси хитозан-силикагель в качестве переносчика / Zheng-Wu Bai, Chuan-Qi Yin, Li Wu // Yingyong huaxue = Chin. J. Appl. Chem. 2002. - V. 19, № 12. - P. 1194-1196

223. Balcao, V. M. Bioreactors with immobilized Lipases: State of the art / V. M. Balcao, Ana L. Paiva, F. Xavier Malcata // Enzyme Microb. Technol. 1996. - V. 18. - P. 392-416

224. Barahona, D. Effect of water activity on the lipase catalyzed esterification of gera-niol in ionic liquid / Donifan Barahona, Peter H. Pfromm, Mary E. Rezac // Biotechnol. Bioeng. 2006. - V. 93, №2.-P. 318-324

225. Benjamin, S. Isolation and characterization of three distinct forms of lipases from Candida rugosa produced in solid state fermentation / S. Benjamin, A. Pandey // Braz. Arch. Biol, a Technol. 2001. - V. 44, № 2. - P. 213-221

226. Benjamin, S. Mixed-solid substrate fermentation. A novel process for enhanced lipase production by Candida rugosa / S. Benjamin, A. Pandey // Acta biotechnol. 1998. -V. 18, №4. -P. 315-324

227. Berger, M. Enzymatic esterification of glycerol II. synthesis of regioisomerically pure l(3)-rac-monoacylglycerols / Berger, M. P. Schneider // J. Amer. Oil Chem. Soc. -1992. V. 69, № 10. P. 961-965

228. Betigeri, S. S. Immobilization of lipase using hydrophilic polymers in the form of hydrogel beads / Seema S. Betigeri, Steven H. Neau // Biomaterials. 2002. - V. 23, № 17.-P. 3627-3636

229. Bezusov, A. T. Immobilization of lipase from plant in pectin / A. T. Bezusov, H. E. A. Ramadan // Науч. тр. УХТ, Пловдив. 2008. - V. 55, № 1. - P. 337-341

230. Bienkiewicz, G. Wplyw interakcji lipidy skrobia na zawartosc wolnej skrobi / G. Bienkiewicz, M. Doszczeczko, D. Kowalska // Folia Univ. agr. stetin. Sci. alim. - 2006. -№ 5.-C. 5-11

231. Biocatalytic production of enantiopure cyclohexane-trans-l,2-diol using extracellular lipases from Bacillus subtilis / Jean Detry, Thorsten Rosenbaum, Stephan Lutz et al. // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2006. - V. 72, № 6. - P. 1107-1116

232. Bioreactor operated production of lipase: Castor oil hydrolysis using partially-purified lipase / Chetna Sharon, Midori Nakazato, Hiroaki I. Ogawa, Yasuhiko Kato // Indian J. Exp. Biol. 1999. - V. 37, № 5. - P. 481-486

233. Bloomer, S. Triglyceride interesterification by lipases: 2 Reaction parameters for the reduction of trisaturated impurities and diglycerides in batch reactions / S. Bloomer, P. Adlercreutz, B. Mattiasson // Biocatalysis. 1991. - V. 5. - P. 145-162

234. Blow, D. M. Role of a buried acid group in the mechanism of action of chymotryp-sin / D. M. Blow, J. J. Birktoft, B. S. Hartlet // Nature. 1969. - V. 221. - P. 337-340

235. Borgstrom, B. Interactions of serum albumin and other proteins with porcine pancreatic lipase / B. Borgstrom, C. Erianson // Gastroenterology. 1978. - V. 75. - P. 382386

236. Borgstrom, B. On the interactions between pancreatic lipase and colipase and the substrate, and the importance of bile salts / B. Borgstrom // Lipid Res. 1975 - V. 16-P. 411-417

237. Borgstrom, B. Pancreatic colipase: chemistry and physiology / B. Borgstrom, C. Erianson-Albersson, T. Wieloch // J. Lipid Res. 1979. - V. 20. - P. 805-816

238. Bracco, U. Effect of triglyceride structure on fat absorption / U. Bracco // Am. J. Clin. Nutr. 1994. - V. 60(suppl). - P. 1002-1009

239. Braun, P. Activity of bacterial lipases at chilling temperatures / Peggy Braun, Grit Balzer, Karsten Fehlhaber // Food Microbiol. 2001. - V. 18, № 2. - P. 211-215

240. Bruice, T. C. Some pertinent aspects of mechanisms as determined with small molecules / T. C. Bruice // Annu. Rev. Biochem. 1976. - V. 45. - P. 331-373

241. Brumlik, M. J. Identification of the catalytic triad of the lipase/acyltransferase from Aeromonas hydrophila / M. J. Brumlik, J. T. Buckley // J. Bacteriology. 1996. - V. 178, №7.-P. 2060-2064

242. Biihler, M. Oleochemicals by biochemical reactions? / M. Buhler, C. Wandrey // Fat Sci. Technol. -1992. V. 94, № 3. - P. 82-94

243. Carbon and nitrogen sources modulate lipase production in the yeast Yarrowia lipolytica / P. Fickers, J. M. Nicaud, C. Gaillardin et al. // J. Appl. Microbiol. 2004. -V. 96, № 4. - P. 742-749

244. Catalytic properties of lipases immobilized on various mesoporous silicates / Ka-tsuya Kato, Roxana Irimescu, Takao Saito et al. // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2003. -V. 67, № l.-P. 203-206

245. Chaiyaso, T. Biocatalytic acylation of carbohydrates with fatty acids from palm fatty acid distillates / T. Chaiyaso, A. Hikittikun, W. Zimmermann // J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 2006. - V. 33, № 5. - P. 338-342

246. Chander, H. Factors affecting lipase production in Aspergillus ventii / H. Chander, V. Batis, S. Sannabhadti, R. Srinivasan // J. Food Sci. 1980. - V. 45, № 3. - P. 598-600

247. Chang, R.-C. Multiple forms and functions of Candida rugosa lipase / Rey-Chang Chang, Shu-Jen Chou, Jei-Fu Shaw // Biotechnol. Appl. Biochem. 1994. - V. 19. - P. 93-97

248. Chang, R.-C. Studying the active site pocket of Staphylococcus hyicus lipase by site-directed mutagenesis / Rey-Chang Chang, Jack Chien Chen, Jei-Fu Shaw // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996. - V. 229, № 1. - P. 6-10

249. Characterisation of Candida rugosa lipase immobilised on alkylamine glass beads / W. Nadrus, I. C. Leao, N. Krieger et al. // Genet. Eng. Biotechnol. 1994. - V. 14, № 3. -P. 143-148

250. Characterization of Mucor miehei lipase immobilized on polysiloxane-polyvinyl alcohol magnetic particles / L. M. Bruno, J. S. Coelho, E. H. M. Melo, J. L. Lima-Filho // World J. Microbiol. Biotechnol. - 2005. - V. 21, № 2. - P. 189-192

251. Characterization of the lipase and esterase multiple forms in an enzyme preparation from a Candida rugosa pilot-plant scale fed-batch fermentation / A. Sanchez, P. Ferrer, A. Serrano et al. II Enzyme Microb. Technol. 1999. - V. 25, № 3-5. - P. 214-223

252. Chemoenzymatic synthesis of structured triacylglycerols with conjugated linoleic acids (CLA) in central position / P. Villeneuve, N. Barouh, B. Barea et al. // Food Chem. 2007. - V. 100, № 4. - P. 1443-1452

253. Chen, J.-P. Sol-gel powders and supported sol-gel polymers for immobilization of lipase in ester synthesis / J.-P. Chen, W.-S. Lin // Enzyme Microb. Technol. 2003. - V. 32, №7.-P. 801-811

254. Cho, A-Ra. Cloning, sequencing and expression in Escherichia coli of a thermophilic lipase from Bacillus thermoleovorans ID-1 / A-Ra Cho, Seung-Ku Yoo, Eui-Joong Kim // FEMS Microbiol. Lett. 2000. - V. 186, № 2. - C. 235-238

255. Christensen, M. S. Absorption of triglycerides with defined or random structure by fats with biliary and pancreatic diversion / M. S Christensen, A. Miillertz, C.-E. Hey // Lipids. -1995. V. 30. - P. 521-526

256. Cleland, W. W. Low-barrier hydrogen bonds and enzymatic catalysis / W. W. Cleland, M. M. Kreevoy // Science. 1994. - V. 264. - P. 1887-1890

257. Cloning and nucleotide sequence of two lipase genes from Candida cylindracea / S. Longhi, F. Fusetti, T. Grandon et al. // Biochim. Biophys. Acta. 1992. - V. 1131. -P. 227-232

258. Colin, V. L. Effect of environmental conditions on extracellular lipases production and fungal morphology from Aspergillus niger MYA 135 / V. L. Colin, M. D. Baigori, L. M. Pera // J. Basic Microbiol. 2010. - V. 50, № 1. - P. 52-58

259. Colin, V. L. Mycelium-bound lipase production from Aspergillus niger MYA 135, and its potential applications for the transesterification of ethanol / V. L. Colin, M. D. Baigori, L. M. Pera // J. Basic Microbiol. 2011. - V. 51, № 3. - P. 236-242

260. Comparison between two processes for the enzymatic synthesis of tri-docosahexaenoylglycerol in a solvent-free medium / P. Borg, M. Girardin, B. Rovel, D. Barth // Biotechnol. Lett. 2000. - V. 22, № 9. - P. 777-781

261. Comparison of two-phase lipase-catalyzed esterification on micro and bench scale / J. W. Swarts, P. Vossenberg, M. H. Meerman et al. // Biotechnol. and Bioeng. 2008. -V. 99, № 4. - P. 855-861

262. Continuous synthesis of alkyl ferulate by immobilized Candida anarctica lipase at high temperature / Yayoi Yoshia, Yukitaka Kimura, Megumi Kadotta et al. // Biotechnol. Lett. -2006. V. 28, № 18.-P. 1471-1474

263. Cross-linked enzyme aggregates with enhanced activity: Application to lipases / P. Lopez-Serrano, L. Cao, F. van Rantwijk, R. A. Sheldon // Biotechnol. Lett. 2002. - V. 24, № 16.-P. 1379-1383

264. Cui, J. Изучение иммобилизованной липазы / Juan Cui, Jianping Wu, Lirong Yang, Zhihao Sun // Huaxue fanying gongcheng yu gonyi = Chem. React. Eng. Technol. -2005.-V. 21, № l.-P. 43-48

265. Current progress in crystallographic studies of new lipases from filamentous fungi / U. Derewenda, L. Swenson, R. Green et al. // Protein Engineering. 1994. - V. 7, № 4. -P.551-557

266. De Greyt, W. Chemical und physico-chemical modification of lipids / W. De Greyt, A. Huyghcbaeri, M. Kellcns // In: Chrisiophe AB, editor. Structural modified food fats: synthesis, biochemistry, and use. AOCS Press. Champaign. 1989. - P. 1-19

267. Defay, T. Protein modelling. Molecular Biology and Biotechnology. A comprehensive desk reference / T. Defay, F. Cohen. New York. - 1995. - P. 757-762

268. Demonstration of Structural Integrity of an Enzyme in Organic Solvents by SolidState NMR / P. A. Burke, S. 0. Smith, W. W. Bachovchin, A. M. Klibanov // J. Am. Chem. Soc.- 1989,-V. 111.-P. 8290-8291

269. Dordick, J. S. Desinging enzymes for use in organic solvents / J. S. Dordick // Biotechnol. Prog. 1992. - V. 8. - P. 259-267

270. Dordick, J. S. Enzymatic catalysis in in monophasic organic solvents / J. S. Dordick // Enzyme Microb. Technol. 1989. - V. 11. - P. 194-211

271. Dufour, C. The role of carboxyl groups in the activity of pancreatic lipase / C. Du-four, M. Semeriva, P. Dessnuelle // Biochim. Biophys. Acta. 1973. - V. 327. - P. 101113

272. Dynamics of proteins in different solvent systems: Analysis of essential motion in lipases / G. H. Peters, D. M. F. Van Aalten, O. Edholm et al. // Biophys. J. 1996. - V. 71,N5.-P. 2245-2255

273. Effect of chemical modification of isoenzymes A and B from Candida rugosa on their activity and stability / M. V. Calvo, F. J. Dlou, E. Pastor, A. Ballesterons // Bio-technol. Lett. 1995. - V. 17, № 2 - P. 171-176

274. Effect of different carbon sources on lipase production by Candida rugosa / E. Dalmau, J. L. Montesinos, M. Lotti, C. Casas // Enzyme Microb. Technol. 2000. - V. 26, №9-10.-P. 657-663

275. Effect of nitrogen and carbon sources on lipase production by Pénicillium auran-tiogriseum / Valeria M. G. Lima, Nadia Krieger, Maria Inez M. Sarquis et al. // Food Technol. Biotechnol. 2003. - V. 41, № 2. - C. 105-110

276. Elliot, J. M. Lipase-mediated acylexchange reactions with butteroil in anhydrous media / J. M. Elliot, K. L. Parkin // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1991. - V. 68, № 3. P. 171-175

277. Enantioselective transesterification using immobilized Aspergillus oryzae overex-pressing lipase / M. Kaieda, M. Nagayoshi, S. Hama et al. II Appl. Microbiol. Biotechnol. 2004. - V. 65, № 3. - P. 301-305

278. Engineering of baker's yeasts, E. coli and Bacillus hosts for the production of Bacillus subtilis lipase A / Marta Sanchez, Nuria Prim, Francisca Randez-Gil et al. II Biotechnol. Bioeng. 2002. - V. 78, № 3. - P. 339-345

279. Enhanced reasctivity of Rhizopus oryzae lipase displayed on yeast cell surfaces in organic solvents: Potential as a whole-cell biocatalyst in organic solvents / Seizaburo

280. Shiraga, Masayuki Kawakami, Masaji Ishiguro, Mitsuyoshi Ueda // Appl. Environ. Microbiol. 2005. - V. 71, № 8. - P. 4335-4338

281. Enzymatic acylation of cellulose acetate in organic media / V. Sereti, H. Stamatis, E. Koukios, F. N. Kolisis // J. Biotechnol. 1998. - V. 66, № 2-3. - P. 219-223

282. Enzymatic characterization of 30 kDa lipase from Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 / L. T. Izrael-Zivkovic, G. D. Gojgic-Cvijovic, K. R Gopcevic. et al. // J. Basic Microbiol. 2009. - V. 49, № 5. - P. 452-462

283. Essamri, M. Optimization of lipase production by Rhizopus oryzae and study on the stability of lipase activity in organic solvents / M. Essamri, V. Deyris, L. Comeau // J. Biotechnol. 1998. - V. 60. - P. 97-103

284. Ester and glyceride synthesis by Rhizopus arrhizus mycelia / G. Bell, J. A. Blain, J. D. E. Patterson et. al. // FEMS Microbiology Lett. 1978. - V. 3. - P. 223-225

285. Exploring the active site cavity of human pancreatic lipase / D. Y. Colin, P. De-prez-Beauclair, M. Allouche et al. // Biochem. and Biophys. Res. Commun. 2008. - 370, №3. - P. 394-398

286. Expression of LIP1 and LIP2 genes from Geotrichum species in Baker's yeast strains and their application to the bread-making process / Aurelia Monfort, Amalia Blasco, Pascual Sanz, Jose A. Prieto // J. Agr. Food Chem. 1999. - V. 47, № 2. - P. 803-808

287. Factors affecting the resolution of dl-menthol by immobilized lipase-catalyzed esteriafication in organic solvent / Dong-Lin Wang, Nag Ahindra, Guan-Chun Lee, Jei-Fu Shaw // J. Agric. Food Chem. 2002. - V. 50. - P. 262-265

288. Fersht, A. R. Enzyme structure and mechanisms. Oxford: Freeman, 1984. - 475 p.

289. Fersht, A. R. The charge relay system in chymotrypsin and chymotrypsinogen / A. R. Fersht, J. Sperling // J. Mol. Biol. -. 1973. V. 74. - P. 137-149

290. Fickers, P. Improvement of Yarrowia lipolytica lipase production by fed-batch fermentation / P. Fickers, J.Destain, P. Thonart // J. Basic Microbiol. 2009. - V. 49, № 2. -P. 212-215

291. Foam fractionation of exo-lipases from a growing fungus (Pleurotus sapidus) / D. Linke, H. Zorn, B. Gerken et al. // Lipids. 2005. - V. 40, № 3. - P. 323-327

292. Fomuso, L. B. Enzymatic modification of triolein: Incorporation of caproic and butyric acids to produce reduced-calorie structured lipids / L. B. Fomuso, C. C. Akoh // J. Am. Oil Chem. Soc. 1997. - V. 74. - P. 269-272

293. Frey, P. A. A low-barrier hydrogen bond in the catalytic triad of serine proteases / P. A. Frey, S. A. Whitt, J. B. Tobin // Science. 1994. - V. 264. - P. 1927-1930

294. Fu, X. Oil and fat hydrolusis with lipase from Aspergillus sp. / X. Fu, X. Zhu, K. Gao, J. Duan // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1995. - V. 72, № 5. - P. 527-536

295. Fureby, A. M. Acyl migration and its implications in lipid modifications / A. M. Fureby, P. Adlercreutz, B. Mattiasson // Ann NY Acad Sci. 1996. - V. 799. - P. 231237

296. Fusarium solani cutinase is a lipolytic enzyme with a catalytic serine accessible to solvent / C. Martinez, P. D. Geus, M. Lauwereys et al. // Nature. 1992. - V. 356. - P. 615-618

297. Gao, X.-G. Production, properties and application to nonaqueous enzymatic catalysis of lipase from a newly isolated Pseudomonas strain / Xiu-Gong Gao, Shu-Gui Cao, Zang // Enzyme Microb. Technol. 2000. - V. 27, № 1-2. - P. 74-82

298. Ghanem, E. H. An alkalophilic thermostable lipase produced by a new isolate of Bacillus alcalophilis / E. H. Ghanem, A. Al-Sayed Hashim, M. Saleh Kareema // World J. Microbiol. Biotechnol. 2000. - V. 16, № 5. - P. 459^164

299. Ghosh, M. Soy lecithin monoester interchange reaction by microbial lipase / M. Ghosh, D.K. Bhattacharyya // J. Amer. Oil Chem. Soc. - 1997. - V. 74, № 6. - P. 761763

300. Gitlesen, T. Adsorbtion of lipase on polipropilene powder / T. Gitlesen, M. Bauer, P. Adlercreutz // Biochem. Biophys. Acta. 1997. - V. 1345. - P. 188-196

301. Goh, S. H. Transesterification of cocoa butter by fungal lipases: effect of solvent on 1,3-specificity / S. H. Goh, S. K. Yeong, C. W. Wang // J. Am. Oil Chem. Soc. 1993. -V. 70.-P. 567-570

302. Goldberg, M. The control of lipase-catalyzed transesterification and esterification reaction rates / M. Goldberg, D. Thomas, M.-D. Legoy // Eur. J. Biochem. 1990. - V. 190.-P. 603-609

303. Gorbachev, V. M. Remarks on the application of the combined Kolmogorov- Ero-feev-Kazeev-Avrami-Mampel equation in the kinetics of non-isothermal transformations / V. M. Gorbachev // J. Thermal Analysis. 1978. - V. 13. - P. 509-514

304. Guo, Z. Characteristics of immobilized lipase on hydrophobic superparamagnetic microspheres to catalyze esterification / Zheng Guo, Yan Sun // Biotechnol. Progr. -2004. V. 20, № 2. - P. 500-506

305. Gupta, S. Lipase immobilization on Polysulfone globules and their performances in olive oil hydrolysis / S. Gupta, K. Singh, A. Bhattacharya // Int. J. Biol. Macromol. -2010. V. 46, № 4. - P. 445-450

306. Hailing, P. J. Thermodynamic predictions for biocatalysis in nonconventional media: Theory, tests, and recommendations for experimental design and analysis: review / P. J. Hailing // Enzyme Microbiol. Technol. 1994. - V. 16. - P. 178-205

307. Han, S.-J. Expression and characterization of a novel enantioselective lipase from Acinetobacter sp. SY-01 / Soo-Jin Han, Jung Ho Back, Yoon Moon Young et al. // Biochimie. -2003. V. 85, №5.-P. 501-510

308. Haperburg, D. Exracellulare lipase aus Acinetobacter calcoaceticus / D. Haperburg, H.-P. Kleber // Acta Biotechnologica. 1982. - V. 2, № 4. - P. 337-342

309. Hasan, F. Influence of culture conditions on lipase production by Bacillus sp. FH5 / Fariha Hasan, Aamer Ali Shah, Abdul Hameed // Ann. Microbiol. 2006. - V. 56, № 3. - P. 247-252

310. Hayes, D. G. The catalutic activity of lipases toward hudroxy fatty acids: review / Douglas G. Hayes // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1996. - V. 73, № 5. - P. 543-5349

311. Heird, W.C. Structured lipids and their use in clinical nutrition / W.C. Heird, S.M. Grundy, S. Van Hubbard // Am. J. Clin. Nutr. 1966. - V. 43. - P. 320-324

312. Hernaiz, M. J. Improved stability of the lipase from Candida rugosa in different purification degrees by chemical modification / M. J. Hernaiz, J. M. Sánchez-Montero, J. V. Sinisterra // Biotechnol. Techn. 1996. - V. 10, № 12. - P. 917-922

313. Herrgard, S. Role of an electrostatic network of residues in the enzymatic action of the Rhizomucor miehei lipase family / S. Herrgard, C. J. Gibas, Shankar Subramaniam // Biochemistry. 2000. - V. 39, № 11. - P. 2921-2930

314. Hesugi, V. Continual conversion of the fatty acid in rice bran oil to triacylglyceril by immobilizea lipase / V. Hesugi, T. Humeda, N. Azuma // J. Amer. Oil Chem. Soc. -1997. V. - 71, № 4. - P. 445-448

315. Heterologous production of functional forms of Rhizopus oryzae lipase in Escherichia coli / Mirella Di Lorenzo, Aurelio Hidalgo, Michael Haas, Uwe Т. Bornscheuer II Appl. Environ. Microbiol. 2005. - V. 71, № 12. - P. 8974-8977

316. Highly efficient enzymatic synthesis of 2-monoacylglycerides and structured lipids and their production on a technical scale / J. Pfeffer, A. Freund, R. Bel-Rhlid et al. // Lipids. 2007. - V. 42, № 10. - P. 947-953

317. Highly selective synthesis of l,3-oleoyl-2-palmitoylglycerol by lipase catalysis / U. Schmid, U. T. Bornscheuer, M. M. Soumanou et al. // Biotechnol. Bioeng. 1999. - V. 64, № 6. - P. 678-684

318. Hildebrand, J. H. Regular and Related Solutions / J. H. Hildebrand, J. M. Prausnitz, R. L. Scott // New York: Van Nostrand Reinhold, 1970

319. Hilton, S. Studies on the reaction mechanism of a microbial lipase/ acyltransferase using chemical modification and site-directed mutagenesis / S. Hilton, J. T. Buckley // J. Biol. Chem. 1991.- V. 266, № 2. - P. 997-1000

320. Hirose, Т. Использование порошкообразного препарата липазы для промышленной этерификации пищевых масел / Tadashiro Hirose, Satoshi Negishi // Kagaku to kogyo = Sei. and Ind. (Osaka). 2005. - V. 79, № 7. - P. 291-296

321. Holmquist, M. Identification of residues essential for differential fatty acyl specificity of Geotrichum candidum lipases I and II / M. Holmquist, D. C. Tessier, M. Cygler // Biochemistry. 1997.-V. 36, №48.-P. 15019-15025

322. Hong, M. C. Purification and characterization of an alkaline lipase from a newly isolated Acinetobacter radioresistens CMC-1 / Ming Chuan Hong, Ming Chung Chang //

323. Boitechnol. Lett. 1998,- V. 20, № 11.-P. 1027-1029

324. How do serine proteases really work? / A. Warshel, G. Naray-Szabo, F. Sussman, J.-K. Hwang // Biochemistry. 1989. - V. 28. - P. 3629-3637

325. Hsu, A.-F. Immobilisation of Pseudomonas cepacia lipase in a phyllosilicate sol-gel matrix: effectiveness as a biocatalyst / A.-F. Hsu, T. A. Foglia, S. Shen // Biotechnol. Appl. Biochem. 2000. - V. 31. - P. 179-183

326. Huang, K. H. Enzymatic Synthesis of structured Lipids: Transesterification of triolein and caprylic acid ethyl ester / Kuan Hsiang Huang, C. C. Akoh // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1996. - V. 73, №2. - P. 245-250

327. Huang, Y. Purification and characterization of an extracellular lipase from Geotrichum marinum / Y. Huang, R. Locy, J. D. Weete // Lipids. 2004. - V. 39, № 3. -P. 251-257

328. Huixian, X. Immobilisation Candida cylindracea lipase on methyl acrilat divinil benze copolimer and its derivates / X. Huixian, L. Mingin, H. Benglin // Enzyme Microti. Technol. - 1995. -V. 17. -№ 3. - P. 194-199

329. Hydrolysis and esterification of acylglycerols and analogs in aqueous medium catalyzed by microbial lipases / A. Kovac, P. Stadler, L. Haaick et al. // Biochim. Biophys. Acta.- 1996.-V. 1301.-P. 57-66

330. Hydrolysis of plant oils by meanse of lipase from Rhizopus nigricans / M. Rucka, B. Turkiewicz, J. Zuk et al. // Bioprocess Eng. 1991. - V. 7, № 3. - P. 133-135

331. Identification of bacteria producing a thermophilic lipase with positional non-specificity and characterization of the lipase / Y. Lu, F. Lu, X. Wang et al. // Ann. Microbiol. 2009. - V. 59, № 3. - P. 565-571

332. Identification of the histidine and aspartic acid residues essential for enzymatic activity of a familiy 1.3 lipase by site-directed mutagenesis / Hyun-Jun Kwon, Amada Kei, Haruki Mitsuru et al. // FEBS Lett. 2000. - V. 483, № 2-3. - P. 139-142

333. Ijiro, K. Functional capsule membranes. Lipase immobilized capsule membranes as a reactor in ester synthesis and hydrolysis in organic solvents / K. Ijiro, Y. Okahata // J. Membr. Sci. 1991. - V. 59, № 1. - P. 101-112

334. Immobilisation of Lipase from Candida rugosa on a polymer support / L. Mojovic, Z. Knezevic, R. Popadic, S. Javanovic // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1998. - V. 50.

335. Immobilised lipase reactions for modification of fats and oils: review / F. X. Mal-cata, H. R. Reyes, H. S. Garcia, C. Hill et al. // J. Am. Chem. Soc. 1990. - V. 67. - P. 890-910

336. Immobilization of Candida rugosa lipase on poly(allyl glycidyl ether-co-ethylene glycol dimethacrylate) macroporous polymer particles / B. K. Vaidya, G. C. Ingavle, S. Ponrathnam et al. // Bioresour. Technol. 2008. - V. 99, № 9. - P. 3623-3629

337. Immobilization of Candida rugosa lipase on sporopollenin from Lycopodium clava-tum / Tutar H., Yilmaz E., Pehlivan E., Yilmaz M. // Int. J. Biol. Macromol. 2009. - V. 45, №3.-C. 315-320

338. Immobilization of cross-linked lipase aggregates onto magnetic beads for enzymatic degradation of polycaprolactone / M. Kim, J.-M. Park, H.-J. Um et al. // J. Basic Microbiol. 2010. - V. 50, № 3. - P. 218-226

339. Immobilization of lipase onto lipophilic polymer particles and application to oil hydrolysis / M. Murray, D. Rooney, M. Van Neikerk et al. // Process Biochem. 1997. -V. 32, №6.-P. 497-486

340. Immobilization of lipases on hydrophobilized zirconia nanoparticles: Highly enan-tioselective and reusable biocatalysts / Y. Z. Chen, C. T. Yang, C. B. Ching, R. Xu // Langmuir 2008. - V. 24, № 16. - P. 8877-8884

341. Increase of catalytic activity of lipase towards olive oil by Langmuir-film immobilization of lipase / V. Sivozhelezov, D. Bruzzese, L. Pastorino et al. // Enzyme and Mi-crob. Technol. 2009. - V. 44, № 2. - P. 72-76

342. Increased production of lactonizing lipase (Lip I) from Pseudomonas sp. strain 109 by lipids and detergents / Junko Tanaka, Towa Sudo, Fumio Ihara et al. Il Biosci. Bio-technol. Biochem. 1999. - V. 63, № 5. - P. 900-904

343. Influence de certaines conditions de la culture superfuciella sur la production deslipases et des proteases par des souches der Penicillium candidum / L. Stepaniak, K. Kornacki, J. Grabska et al. // Lait. 1980. - V. 60, № 2. - P. 591-592

344. Inhibition of lipases by proteins: a binding study using dicaprin monolayers / Y. Gargouri, G. Pieroni, C. Riviere et al. // Biochemistry. 1986. - V. 25. - P. 1733-1738

345. In-situ иммобилизация ферментов в мезопористом диоксиде кремния. In-situ immobilization of enzymes in mesoporous silicas / E. Santalla, E. Serra, A. Mayoral et al. // Solid State Sci. 2011. - V. 13, № 4. - P. 691-697

346. Interesterification of olive oil with a fully hydrogenated fat in a batch reactor using step changes in temperature / I.-H. Kim, S.-M. Lee, B.-m. Lee, et al. // J. Agr. and Food Chem. 2008. - 56, № 14. - C. 5942-5946

347. Isolation and characterization of a thermophilic lipase from Bacillus thermoleo-vorans ID-1 / D. Lee, You-Seok Koh, Ki-Jun Kim et al. // FEMS Microbiol. Lett. -1999. V. 179, № 2. - P. 393-400

348. Isolation and characterization of Acinetobacter sp. ES-1 excreting a lipase with high enantioselectivity for (S)-ketoprofen ethyl ester / Kwang-Woo Lee, Gab-Sang Shin, Hyun-Ae Bae et al. // Biotechnol. Lett. 2004. - V. 26, № 21. - P. 1639-1642

349. Isolation and characterization of an extracellular lipase from Mucor sp. strain isolated from palm fruit / Houria Abbas, Abel Hiol, Valerie Deyris, Louis Comeau // Enzyme Microb. Technol. 2002. - V. 31, № 7. - P. 986-975

350. Isolation, identification, and characterization of a novel, oil-degrading bacterium, Pseudomonas aeruginosa T1 / Mohammad Hasanuzzaman, Kathryn M. Umadhay-Briones, Szilvia M. Zsiros et al. // Curr. Microbiol. 2004. - V. 49, № 2. - P. 108-114

351. Ispitivanje unticaja masti na kvalitet nekia brasneno konditorskih proizvoda / M.

352. Govrilovic, Z. Vrbaski, O. Javanovic, K. Vranac // Zb. Rad. Technol. Fak. Novisad. -1989.-V. 20.-P. 55-56

353. Jacobsen, T. Substrate specificity of Geotrichum candidum lipase preparations / T. Jacobsen, J. Olsen, К. Allermann // Biotechnology. Let. 1990. - V. 12, № 2. - P. 121126

354. Jaeger, К. E. Microbial lipases from versatile tools for biotechnology / К. E. Jaeger, T. Ritz Manfred // Trends Biotechnol. 1998. - V. 16, № 9. - P. 396^03

355. Jäger, S. Lipase of Staphilococcus hyicus: analysis of the catalytic triad by site-directed mutagenesis / S. Jäger, G. Demieither, F. Götz // FEMS Microbiol. Lett. 1992. -V. 100.-P. 249-254

356. Jennings, В. H. Lipase-catalyzed modification of rice bran oil to incorporate capric acid / В. H. Jennings, С. C. Akoh // J. Agric. Food Chem. 2000. - V. 48. - P. 44394443

357. Jensen, B. F. Safety aspects of microbial enzyme technology, exemplified by the safety assessment of an immobilised lipase preparation / B. F. Jensen, P. Edited // Food Biotechnol. 1990. - V.4, № 2. - P. 699-725

358. Jensen, R. G. Determination of Lipase Specificity / R. G. Jensen, F. A. Delong, F. Arid dark//Lipids. 1983.-V. 18.-P. 239-254

359. Jeyarani, T. Trans-free plastic shortenings from coconut stearin and palm stearin blends / T. Jeyarani, M. I. Khan, S. Khatoon // Food Chem. 2009. - 114, № 1. - C. 270275

360. Jiang, Y. Очистка и свойства внеклеточной липазы из Candida lipolytica / Yancheng Jiang, Wenlei Xie, Wenxin Zhang // Jilin daxue ziran kexue xuebao = Acta Sei. Natur. Univ. Jilinensis. 1996. - № 3. - P. 91-95

361. Jug, Y.-H. Lipase immobilized on hydrophobic microspores polypropylene for the hydrolysis of palm kernel olein / Yi-Hsu Jug, Fang-Cheng Huang // Appl. Biochem. Biotechnol. A. 1995. - V. 55, № l.-P. 17-26

362. Kasemsuwan, T. Location of amylose in normal starch granules. Locations of phos-phodiester cross-linking revealed by phosphorus-31 nudear magnetic resonance / T. Kasemsuwan, J. Jane // Cuneal Chen. 1994. - V. 71, № 3. - P. 282-287

363. Kaushal, R. K. Synthesis of a- and P-naphthyl acetate by alginate-immobilized lipase of Bacillus coagulans MTCC-6375 / R. K. Kaushal, S. S. Chimni, S. S. Kanwar // Minerva biotecnol. 2006. - V. 18, № 1. - P. 37

364. Kawakami, K. Enhancement of thermostability of lipase by the col-gel entrapment into methyl-substituted organic silicates formed on diatomaceous earth / K. Kawakami // Biotechnol. Techn. 1996. - V. 10, № 7. - P. 491-494

365. Kazlauskas, R. J. Biotransformations with lipases / R. J. Kazlauskas, U. T. Bom-scheuer // In: Rehm H. J., Reed G. Puhler A. Stadler P. J. W., Kelly D. R., editors. Biotechnology, V. 8a. Weinheim: VCH. 1998. - P. 37-191

366. Kazlauskas, R. J. Elucidating structure-mechanism relationships in lipases: prospects for predicting and engineering catalytic properties / R. J. Kazlauskas // Trends Biotechnol. -1994. V. 12. -P. 464-472

367. Keetels, C. J. A. M. Gelation and rétrogradation of concentrated starch systems. 1 Gelation / C. J. A. M. Keetels, Vliet T. Van, L. Walstra // Food Hydrocolloids. 1996. -V. 10, №3.-P. 343-353

368. Kellar, R. A rapid colorimetric assay forth exsracellular lipase of Pseudomonas fluorescens B 52 using |3-naphthylcaprylate. / R. Kellar // J. Dairy Res. 1986. -V. 53, № 1. - P. 114-127

369. Kermasha, S. Characterization of purified lipase fractions from Rhizopus niveus / S. Kermasha, M. Safari, B. Bisakowski // J. Agr. Food Chem. 1998. - V. 46, № 10. - P. 4451^456

370. Khol, H. T. Lipase-catalyzed hydrolysis of palm oil / H. T. Khol, N. H. Tan, C. L. Chua // J. Amer. Oil. Chem. Soc. 1986. - V. 63, № 4. - P. 538-540

371. Kim, H.-R. Produciton of a novel cold-active lipase from Pichia lynferdii Y-7723 / H.-R. Kim, I.-H. Kim, C. T. Hous et al. II J. Agr. and Food Chem. 2010. - V. 58, № 2. -P.1322-1326

372. Kinetic studies of Rhizopus oryzae lipase using monomolecular film technique / A. Ben Salah, A. Sayari, R. Verger, Y. Gargouri // Biochem. 2001. - V. 83. - P. 463^69

373. Kinetic study of esterification by immobilized lipase in я-hexane / W. Chulalak-sananukul, J. S. Condoret, P. Delorme, R. M. Willemot // FEBS. 1990. - V. 276. - № 1,2.-P. 181-184

374. Kinetics of lipase-catalyzed esterification in organic media: Correct model and solvent effects on parameters / A. E. M. Janssen, B. J. Sjursnes, A. V. Vakurov, P. J. Hal-ling // Enzyme Microb. Technol. 1999. - V. 24, № 8-9. - P. 463-470

375. Kinetik properties of soluble and immobilized Candida rugosa lipase / Maria I. Virto, L. Serra Zuan, L. Landeta et al. // Appl. Biotechnol. Biohem. A. 1995. - V. 50, №2.-P. 127-136

376. Knezevic, Z. Immobilization of lipase on a hydrophobic zeolite type Y / Z. Kne-zevic, L. Mojovic, B. Adnadjevic // J. Serb. Chem. Soc. 1998. - V. 63, № 4. - P. 257264

377. Koike, S. Oil or fat composition / S. Koike, T. Murase, T. Hase // U. S. patent application 2003/0054082 Al. 2003

378. Koller, W. Mechanism of action of cutinase: chemical modification of the catalytic triad characteristic for serine hydrolases / W. Koller, P. E. Kolattukudy // Biochemistry. 1982.-V. 21.-P. 3083-3090

379. Kosugi, J. Continuous hydrolysis of oil by immobilized lipase in a counter-current reactor / J. Kosugi, H. Tanaka, N. Tomizuka // Biotechnol. Bioeng. 1990. - V. 36, №6. -P. 617-622

380. Kuno, H. Новая методика очистки внеклеточных липаз из Yarrowia (Saccharo-mycopsis) lipolytica и некоторые свойства липазы А / Hitoshi Kuno, Yasuhide Ota // J. Fac. Appl. Biol. Sci. Hiroshima Univ. 1996. - V. 35, № 2. - P. 191-197

381. Kwon, S. J. Produktion and in siti separation of mono- or diacylglucerol catalyzed by lipases in n-hexane / Seok Joon Kwon, Jeon Iun Han, Joon Shick Rhee // Enzyme Microb. Technol. 1995. - V. 17, № 8,- P. 700-704

382. Lanser, А. С. Regioselectivity of new bacterial lipases determined by hydrolysis of triolein / Alan C. Lanser, Linda K. Manthey, Ching T. Hou // Curr. Microbiol. 2002. -V. 44, №5.-P. 336-340

383. Lau, E. Y. Consequences of breaking the Asp-His hydrogen bond of the catalytic triad: effects on the structure and dynamics of the serine esterase cutinase / E. Y. Lau, T. C. Bruice // Biophysical Journal. 1999. - V. 77. - P. 85-98

384. Lee, G. Development of magnetically separable polyaniline nanofibers for enzyme immobilization and recovery / G. Lee, J. Kim, J.-h. Lee // Enzyme and Microb. Technol. 2008. - V. 42, № 6. - P. 466^472

385. Lee, J. H. Physical properties of trans-free bakery shortening produced by lipase-catalyzed interesterification / J. H. Lee, С. C. Akoh, K.-T. Lee // JAOCS: J. Amer. Oil Chem. Soc. 2008. - 85, № l.-C. 1-11

386. Li, Z.-g. Изучение кинетики иммобилизованной липазы / Zhi-guo Li, Ling Ou, Qing-xun Song, Dong-zhi Wei // Huadong ligong daxue xuebao. Ziran kexue ban = J. E. China Univ. Sci. Technol. Nat. Sci. Ed. 2004. - V. 30, № 1. - P. 107-110

387. Lin, L. Очистка и N-концевая последовательность щелочной липазы из Penicillium expansum / L. Lin, Qiao-qin Shi, Xiao-ling Guo et al. // Xiamen daxue xuebao. Ziran kexue ban = J. Xiamen Univ. Natur. Sci. 2002. - V. 41, № 5. - P. 600-604

388. Lin, S.-F. Effect of triton X-100 on alkaline lipase production by Pseudomonas pseudoalcaligenes F-lll / Shuen-Fuh Lin, Chien-Ming Chion, Ying-Chieh Tsai // Bio-technol Lett. 1995. - V. 17, № 9. - P. 959-962

389. Lin, S.-F. Purification and characterization of a lipase from Neurospora sp. / Shuck-Fuh Lin, Jane-Chyi Lee, Chien-Hing Chian // J. Am. Oil Chem. Soc. 1996. - V.73, №6. -P. 731-741

390. Lipase from Chromobacterium viscosum: Biochemical characterization indicating homology to the lipase from Pseudomonas glumae / M. A. Taipa, K. Liebeton, J. V. Costa et al. // Biochim. Biophys. Acta.- 1995,- V. 1256,- P. 396—402

391. Lipase immobilization into porous chitoxan beads: Activities in aqueous and organic media and lipase localization / D. Magnin, S. Dumitriu, P. Magny, E. Chornet // Biotechnol. Progr. 2001. - V. 17, № 4. - P. 734-737

392. Lipase immobilization on oleic acid-pluronic (L-64) block copolymer coated magnetic nanoparticles, for hydrolysis at the oil/water interface / I. Mahmood, C. Guo, H. Xia et al. // Ind. and Eng. Chem. Res. 2008. - V. 47, № 17. - P. 6379-6385

393. Lipase nanogel catalyzed transesterification in anhydrous dimethyl sulfoxide / Ge J., Lu D., Wang J., Liu Z. // Biomacromolecules 2009. - V. 10, № 6. - P. 1612-1618

394. Lipase production from hydrocarbons by Trichosporon fermentans WU -C12 in the presense of surfactants / Jiacong Chen, Susumu Shimura, Kohtaro Kirimura, Shaji Usami // Biosci. Biotechnol. Biochem. 1994. - V. 58, № 4. - P. 773-775

395. Lipase-catalysed acidolysis of lard with caprylic acid to produce structure lipid / H.-h. Zhao, Z. Lu, F. Lu et al. // Int. J. Food Sci. and Technol. 2006. - V. 41, № 9. - P. 1027-1032

396. Lipase-catalysed ester exchange reactions in organic media with controlled humidity / H. L. Goderis, G. Ampe, M. P. Feyten et al. // Biotechnol. Bioeng. 1987. - V. 30. -P. 258-266

397. Lipase-catalysed esterification of glycerol and polyunsaturated fatty acids from fish and microalgae oils / Robles A. Medina, L. Esteban Cerdan, A. Gimenez Gimenez et al. // J. Biotechnol. 1999. - V. 70, № 1-3. - P. 379-391

398. Lipase-catalyzed acidolysis of lard for the production of human milk fat substitute / W. Y. Hua, Q. X. Li, Z. Q. Si et al. // Eur. Food Res. and Technol. 2010. - V. 230, № 5. - P. 769-777

399. Lipase-catalyzed methanolysis of triricinolein in organic solvent to produce l,2(2,3)-diricinolein / Charlotta Turner, He Xiaohua, Nguyen Tasha et al. // Lipids. -2003.-V. 38, № 11.-P. 1197-1206

400. Lipase-catalyzes interesterification (acidolysis) of corn oil and conjugated linoleic acid in organic solvents / С. E. Martinez, J. C. Vinay, R. Brieva et al. // Food Biotechnol. 1999. - V. 13, № 2. - P. 183-193

401. Lipid reguirement for lipase production by Geotrichum candidum / M. Iwai, Y. Tsujisaka, Y. Okamoto, Y. Fukumoto // Agr. Biol. Chem.- 1973,- V. 37, № 4,- P. 929931

402. Lipolytic enzyme production by immobilized Rhizopus oryzae / E. Lopez, F. J. Deive, M. Asuncion, M. A. Sanroman // Chem. Eng. and Technol. 2008. - V. 31, № 11. -P. 1555-1560

403. Liu, G. Образование и характеристика термостабильных липолитических ферментов из Monascus faluginosus / Guangye Liu, Shiheng Lu, Yuelin Jiang, Yan-yong Wu // Weisheng Wu xuebao = Acta microbiol. Sin. 1995. - V. 35, № 2. - P. 109114

404. Liu, J. Optimisation of lipase production by a mutant of Candida antarctica DSM-3855 using response surface methodology / J. Liu, Y. Zhang // Int. J. Food Sci. and Technol. 2011. - V. 46, № 4. - P. 695-701

405. Liu, J. Выделение, идентификация и характеристики высокоэффективного разлагающего масло штамма / J. Liu, В. Yang // Zhongguo youzhi = China Oils and Fats. -2010.-V. 35, № 1.-P. 41-43

406. Liu, K. J. Lipase-catalyzed syntesis of fatty acid diethanolamides / Kuan Ju Liu, Ahindra Nag, Jei-Fu Shaw // J. Agric. Food Chem. 2001. V. 49. - P. 5761-5764

407. Liu, X.-x. Исследование иммобилизации липазы на целлюлозной мембране / Xin-xi Liu, Li-feng Peng // Hebei keji daxue xuebao = J. Hebei Univ. Sci. Techn. 2001. -V. 22, №2.-P. 15-18

408. Lombardo, D. Catalytic properties of modified human pancreatic carboxylic-ester hydrolase / D. Lombardo // Biochim. Biophys. Acta. 1982. - V. 700. P. 75-80

409. Lopez, S. Strategies in lipase production by immobilized Candida rugosa cells / S. Lopez, F. Valero, C. Sola //Appl. Biochem. Biotechnol. 1996. - V. 59. - P. 15-24

410. Low-temperature lipase from psychrotrophic Pseudomonas sp. strain KB700A / Rashid Naeem, Shimada Yuji, Ezaki Satoshi et al. // Appl. Environ. Microbiol. -2001. -V. 67, № 9. P. 4064-4069

411. Low-temperature-active lipase of Typhula ishikariensis / T. Hoshino, T. Sakamoto, S. Ohgiya et al. // Beijerinck Centenn. Microb. Physiol, and Gene Regul.: «Emerg. Princ. Appl.», The Hague, 10-14 Dec. 1995: Book Abstr. Delft. - 1995. - P. 183-184

412. Ma, L. Исследование этерификации, катализируемой липазой, смешанной с силикагелем непосредственно в отсутствие растворителя / Lin Ma, Zhong-li Huang, Lian-quan Gu // Fenzi cuihua = J. Mol. Catal. (China). 2003. - V. 17, № 4. - P. 283286

413. Macedo, G. A. Partial purification and characterization of an extracellular lipase from a newly isolated strain of Geotrichum sp. / G. A. Macedo, Y. K. Park, G. M. Pastore // Rev. Microbiol. 1997. - V. 28, № 2. - P. 90-95

414. Macrae, A. R. Lipase-catalyzed interesterification of oils and fats / A. R. Macrae // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1983. - V. 60, № 2. P. 291-294

415. Malcata, F. Hydrolysis of butterfat by immobilized lipase using three phase membrane reactors / F. Malcata // Ph. D. thesis. University of Wisconsin-Madison. Madison. WI, USA. - 1991. - P. 123

416. Malcata, F. X. Hydrolysis butteroil by immobilized Lipase using a hollow-fiber reactor: Part III. Multiresponse kinetic studies / F. X. Malcata, C. G. Hill, С. H. Amundson //Biotechnol. Bioeng. 1992. -V. 39. - P. 1002-1012

417. Martinelle, M. Kinetics of acyl transfer reactions in organic media catalyzed by Candida antarctica lipase В / M. Martinelle, K. Hult // Biochim. Biophys. Acta. 1995. -V. 1251.-P. 191-197

418. Mase, T. Purification and characterization of a new lipase from Fusarium sp. YM -30 / Tamio Mase, Yoko Matsumiya, Tetsunori Akiba // Biosci. Biotechnol. Biochem. -1995,-V. 59, №9.-P. 1771-1772

419. Mase, Т. Purification and characterization of Penicillium rogueforti IAM 7268 lipase / Tamio Mase, Yuko Matsumiya, Akura Matsuura // Biosci., Biotechnol. Biochem. 1995. - V. 59, № 2. - P. 329-330

420. Masui, K. Fat or oil composition / K. Masui, Y. Katsuragi, T. Tomoko // U. S. patent application 2003/0096867 Al. 2003

421. Matori, M. Reaction conditions influecing positional specificity index of microbial lipases / Miwa Matori, Takehiko Asahara, Yasuhide Ota // J. Ferment. Bioeng. — 1991. — V. 72,№6.-P. 413^115

422. Mattiasson, B. Tailoring the microenvironment of enzymes in water-poor systems / B. Mattiasson, P. Adlercreutz // Trends Biotechnol. 1991. - V. 9. - P. 394-398

423. McNeill, G. P. Hing-yield enzymatic glycerolysis of fats and oils / G. P. McNeill, S. Shimizu, T. Yamane // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1991. - V. 68, № 1. P. 1-5

424. McNeill, G. P. Isolation of erucit acid from rapes oil by lipase-catalysed hydrolysis / Gerald P. Mc Neill, Philip E. Sonnet // J.Amer Oil Chem. Sol. 1995. - V. 72, № 2. -P. 213-218

425. McNeill, G. P. Selective hydrolysis of rapeseed oil using fatty acid specific lipases / G. P. McNeill, P. E. Sonnet // INFORM: Int. News Fats Oils and Relat. Mater. 1994. -V. 5,№4. -P. 550

426. McNeill, G. P. Solid-phase enzymatic glycerolysis of beef tallow resulting in a hing yield of monoglyceride / McNeill, S. Shimizu, T. Yamane // J. Amer. Oil Chem. Soc. -1990. V. 67, № 11. P. 779-783

427. Measurement and control of water content of organic solvents / H. L. Goderis, B. L. Fouwe, S. M. van Cauwenbergh, P. P. Tobback // Anal. Chem. 1986. V. 58. -P.1561-1563

428. Microbial lipase production ona polumeric resin / P. Christen, N. Angeles, G. Corzo et al. // Biotechnol. Techn. 1995. - V. 9, № 8 - P. 597-600

429. Miller, D. A. Kinetics of lipase-catalyzed interesterification of triglycerides in cyclohexane / D. A. Miller, J. M. Prausnitz, H. W. Blanch // Enzyme Microb. Technol. -1991.-V. 13.-P. 98-103

430. Modification of lipase from Pseudomonas sp. with poly(acryloylmortholine) and study of its catalytic properties in organic solvents / R. Bovara, G. Ottolina, G. Carrea, et. al. // Biotechnol. Lett. 1994. -V. 16, № 10 - P. 1069 - 1024

431. Molecular characterization of an exstracellular acidresistant lipase produced Rhizopus javanicus / W. Uyttenbroeck, D. Hendriks, G. Vriend et al. // Biol. Chem.: Hoppe-Seyler. 1993. - V. 374, № 4. - P. 245-254

432. Molecular weight and degree of deacetylation effects on lipase-loaded chitosan bead characteristics / Ibrahim A. Alsarra, Seema S. Betigeri, Hua Zhang et al. // Biomaterials. 2002. - V. 23, № 17. - P. 3637-3644

433. Momsen, W. E. Inhibition of pancreatic lipase B activity by taurodeoxycholate and its reversal by colipase / W. E. Momsen, H. L. Brockman // J. Biol. Chem. 1976. - V. 251.-P. 384-388

434. Moreau, M. Importance of sulfhydryl group for rabbit gastric lipase activity / M. Moreau, X. Gargouri // J. Mol. Biol. 1988. - V. 98, № 9. - P. 1050-1054

435. Moreno, S. N. Produccion de lipidos estructurados por transesterificacion enzi-matica del aceite de soja y aceite de palmiste en reactor de lecho empacado / S. N. Moreno, V. A. Perea // Grasas y aceites. 2008. - V. 59, № 4. - P. 337-345

436. Murty, V. R. Hydrolysis of rice bran oil using an immobilized lipase from Candida rugosa in isooctane / V. R. Murty, Bhat Jayadev, P. K. A. Muniswaran // Biotechnol. Lett. 2004. - V. 26, № 7. - P. 563-567

437. Nasirullah, S. R. Development of chemically interesterified healthy coconut oil blends / S. R. Nasirullah, S. U. Shankara, P. S. Yella // Int. J. Food Sci. and Technol. -2010. V. 45, № 7. - C. 1395-1402

438. Neidleman, S. L. Biotechnology and oleochemicals: changing paterns / S. L. Neidleman, J. Geigert // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1984. - V. 61. - P. 290-297

439. Nishio, T. Ester synthesis by the lipase from Pseudomonas fragi 22.39 B / T. Ni-shio, T. Chikano, M. Kamimura // Agric. Biol. Chem. 1988. - V. 52, № 5. - P. 12031208

440. Oba, T. Inleresterification of milk fat with oleic acid catalyzed by immobilized Rhizopus oryzae lipase / T. Oba, B. Witholt // J Dairy Sci. 1994. - V. 77. - P. 17911797

441. O'Connell, P. J. Immobilization of Candida rugosa lipase on colloidal gas aphrons (CGAs) / P. J. O'Connell, J. Varley // Biotechnol. Bioeng. 2001. - V. 74, № 3. - P. 264-269

442. Oester, D. Mutant of Geotrichum candidum which produces novel enzyme system to selectively hydrolyse triglycerides / Dean Oester, Allen Hall, Stephen J. Vesper // Biotechnol. Adv. 1997. - V. 15, № 1,-P. 291

443. Ogiso, T. Studies on Bile-sensitive Lipase. Purification and Properties of Lipase from Mucor javanicus / Taro Ogiso, Mamori Sugiura // Chem. Pharm. Bull. 1969. - V. 17, №5.-P. 1025-1033

444. Optimisation of cultivation conditions of a mutant of Trichosporon laibachii CBS 5791 for enantioselective resolution of ketoprofen ester / Yuanyuan Zhang, Junhong Liu, Longhui Qiu et al. // Ann. Microbiol. 2005. - V. 55, № 2. - P. 101-106

445. Optimization of isoamyl acetate production by using immobilized lipase from Mucor miehei by response surface methodology / S. H. Krishna, B. Manohar, S. Divakar et al. // Enzyme and Microb. Technol. 2000. - V. 26, № 2-4. - P. 131-136

446. Osamu, M. Safety assessment of diacylglycerol oil as an edible oil: A review of the published literature / M. Osamu, G. S. Madhusudan // Food and Chem. Toxicol. 2009. -V. 47, № l.-C. 9-21

447. Ota, Y. Tributyrin specifically induces a lipase with a preference for the sn-2 position of triglyceride in Geotrichum sp. F0401B / Yasuhide Ota, Takeshi Sawamoto, Masaki Hasuo // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2000. - V. 64, № 11. - P. 2497-2499

448. Otero, C. Synthesis of mono- and dioleylglyceros using and immobilized lipase / C. Otero, A. Ballesteros // Appl. Biochem. Biotechnol. A. 1995. - V. 50, № 3. - P. 251263

449. Overbeeke, P. L. A. Solvent effect on lipase enantioselectivity. Evidence for the presence of two thermodynamic states / P. L. A. Overbeeke, J. A. Jongejan, J. J. Heijnen // Biotechnol. Bioeng. 2000. - V. 70, № 3. - P. 278-290

450. Pabai, F. Use of continuous culture of screen for lipase producing mikroorganismus and interestrificiation of puffer fat by lipase isolates / F. Pabai, S. Kermasha, A. Morin // Car. J. Mikrobiol. - 1996. - V. 42, № 5. - P. 446-452

451. Pancreatic and microbial lipase: a comparison of the interaction of colipase with lipases of various origins / P. Canioni, R. Julien, J. Rathelot, L. Sarda // Lipids. 1977. -V. 12.-P. 393-397

452. Parameswari, P. Production of lipase by Rhizopus sp. using copra waste extract as a substrate / P. Parameswari, O. Sivapriya, R. Palaniappan // J. Ecotoxicol. Environ. Monit. 2005. - V. 15, № 4. - P. 393-395

453. Peculiar properties of lipase from Candida parapsilosis (Ashford) langeron and talice / A. Riaublank, R. Ratomahenina, P. Galzy, M. Nicolas // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1993. - V. 70, № 5. - P. 497-500

454. Pedersen, S. B. Studies of the fatty acid specificity of the lipase from Rhizomucor miehei toward 20:ln-9, 20:5n-3, 22:ln-9 and 22:6n-3 / S. B. Pedersen, G. Holmer // J. Amer. Oil. Chem. Soc. 1995. - V. 72, № 2. - P. 239-243

455. Peggy, B. Activity of bacterial lipases at chilling temperatures / B. Peggy, G. Balzer, K. Fehlhaber // Food Microbiol. 2001. - V. 18, № 2. - P. 211-215

456. Penasse, L. Les Enzymes, Cinetique et Mecamsme d'Action / L. Penasse, Ed Mas-son et Cie//Paris. 1974. - P. 115-144

457. Pencreac'h, G. Properties of free and immobilised lipase from Burkholderia cepacia in organic media / G. Pencreac'h, J. C. Baratti // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1999. -V. 52, № 2. - P. 276-280

458. Pereira-Meirelles, F. V. Lipase location in Yarrowia lipolytica cells / F. V. Pereira-Meirelles, M. H. M. Rocha-Leao, G. Sant'Anna // Biotechnol. Lett. 2000. - V. 22, № 1. -P. 71-75

459. Petersen, M. Purification and characterization of an extracellular lipase from Clostridium tetanomorphum / Martin Petersen, Rolf Daniel // World J. Microbiol. Biotechnol. 2006. - V. 22, № 5. - P. 431-435

460. Physico-chemical properties of various palm-based diacylglycerol oils in comparison with their corresponding palm-based oils / A. H. Saberi, B. B. Kee, L. Oi-Ming, M. S. Miskandar // Food Chem. 2011. - V. 127, № 3. - C. 1031-1038

461. Pilot batch production of specific-structured lipids by lipase-catalyzed interesterifi-cation: preliminary study on incorporation and acyl migration / X. Xu, S. Balchen, C.-E. Hoy, J. Adler-Nissen // J. Am. Oil Chem. Soc. 1998. - V. 75. - P. 301-308

462. Preparation and catalytic performance of lipases encapsulated in sol-gel materials / Katsuya Kato, Yuefa Gong, Takao Saito, Yoshiyuki Yokogawa // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2002. - V. 66, № 1. - P. 221-223

463. Preparation of interesterified plastic fats from fats and oils free of trans fatty acid / J. H. Lee, C. C. Akoh, D. S. Himmelsbach, K.-T. Lee // J. Agr. and Food Chem. 2008. -V. 56, № 11. - P. 4039-4046

464. Preparation of lipases for use in organic solvents / M. Persson, I. Mladenoska, E. Wehtje, P. Adlercreutz // Enzyme Microb. Technol. 2002. - V. 31, № 6. - P. 833-841

465. Pretreatment of lipase with soybean oil before immobilization to prevent loss of activity / Dong Hwan Lee, Jung Mo Kim, Seong Woo Kang et al. // Biotechnol. Lett. -2006. V. 28, № 23. - P. 1965-1969

466. Producao de lipase por meio de microrganismos isolados de solos com historico de contato com petroleo /1. C. Feitosa, B. J. M. de Pinho, O. S. Cuadros et al. // Acta sci. Technol. 2010. - V. 32, № 1. - P. 27-31

467. Production and oxidative stability of a human milk fat substitute produced from lard by enzyme technology in a pilot packed-bed reactor / N. S. Nielsen, T. Yang, X. Xu, C. Jacobsen // Food Chem. 2006. - V. 94, № 1. - P. 53-60

468. Production of a diacylglycerol-enriched palm olein using lipase-catalyzed partial hydrolysis: Optimization using response surface methodology / L.-Z. Cheong, C.-P. Tan, K. Long et al. // Food Chem. 2007. - V. 105, № 4. - C. 1614-1622

469. Production of alkaline lipase by Corynebacterium paurometabolum, MTCC 6841 isolated from lake naukuchiatal, uttaranchal state, India / Gopal K. Joshi, Sarvesh Kumar, Bhumi Nath Tripathi, Vinay Sharma // Curr. Microbiol. 2006. - V. 52, № 5. -P. 354-358

470. Production of an extracellular thermohalophilic lipase from a moderately halophilic bacterium Salinivibrio sp. strain SA-2 / A. M. Ali, E. Salehghamari, K. Khajeh et al. // J. Basic Microbiol. 2008. - V. 48, № 3. - P. 160-167

471. Production of extracellular lipase from Aspergillus niger by solid-state fermentation / Gwen Falony, Janny Coca Armas, Julio C. Dustet Mendoza, Jose L. Martinez Hernandez // Food Technol. Biotechnol. 2006. - V. 44, № 2. - P. 235-240

472. Production of extracellular lipases by Pénicillium cyclopium purification and characterization of a partial acylglycerol lipase / H. Chahinian, G. Vanot, A. Ibrik et al. // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2000. - V. 64, № 2. - P. 215-222

473. Production of structured lipids containing essential fatty acids by immobilized Rhizopus delemar lipase / Y. Shimada, A. Sugihara, H. Nakano et al. II J. Amer. Oil Chem. Soc. 1996. - V. 73, № 11. P. 1415-1420

474. Production of two types of lipases with opposite positional specificity by Geotrichum sp. F0 401B / T. Asahara, M. Matori, M. Ikemoto et al. II Biosci. Biotechnol. Biochem. 1993. - V. 57, № 3. - P. 390-394

475. Production tactic and physiochemical properties of low w6/w3 ratio structured lipid synthesised from perilla and soybean oil / K. Mitra, J.-H. Lee, K.-T. Lee, S.-A. Kim // Int. J. Food Sci. and Technol. 2010. - V. 45, № 7. - C. 1321-1329

476. Production, purification and characterization of an extracellular lipase from Mucor hiemalis f. hiemalis / A. Hiol, M. D. Jonzo, D. Druet, L. Comeau // Enzyme Microb. Technol. 1999. - V. 25, № 1-2. - P. 80-87

477. Properties of a thermostable extracellular lipase from Bacillus megaterium AKG-1 / A. Sekhon, Neetu Dahiya, Ram P. Tiwari, Gurinder S. Hoondal // J. Basic Microbiol. -2005.-V. 45, №2.-P. 147-154

478. Properties of methoxy(polyethylene glycol)-lipase from Candida rugosa in organic solvents / M. Zacchigna, G. Di Luca, L. Lassiani et al. // Farmaco (Amsterdam). 1998. -V. 53, № 12.-P. 758-763

479. Protein measurement with the Folin phenol reagent / O. H. Lowry, N. J. Rose-brough, A. L. Farr, R. J. Randall // J. Biol. Chem. 1951,- V 193. - P. 265-275

480. Purification and characterization of a regiospecific lipase from Aspergillus terreus / Raman P. Yadav, K. Saxena Rajendra, Rani Gupta, W. Sheba Davidson // Biotechnol. Appl. Biochem. 1998. -V. 28, № 3. - P. 243-249

481. Purification and characterization of an extracellular lipase from a thermophilic Rhizopus oryzae strain isolated from palm fruit / Abel Hiol, Marie D. Jonzo, Nathalie Rugani et al. // Enzyme Microb. Technol. 2000. - V. 26, № 5-6. - P. 421-430

482. Purification and characterization of an extracellular lipase from Penicillium can-didum / B. Ruiz, A. Farres, E. Langley et al. // Lipids. 2001. - V. 36, № 3. - P. 283289

483. Purification and characterization of lipase from Rhizomucor miehei / G. Uvarani, L. Jaganatan, P. Shridas, R. Boopathy // Journal of Scientific & Industrial Research. 1998. -V. 57.-P. 607-610

484. Purification and partial characterization of an alkaline lipase from Pseudomonas pseudoalcaligenes F-lll / Shuen-Fuh Lin, Chien-Ming Chiou, Chuan-Mei Yeh, Ying-Chieh Tsai // Appl. Environ. Microbiol. 1996. - V. 62, № 3. - P. 1093-1095

485. Purification and properties from Pénicillium chrysogenum isolated from industrial wastes / M. Ferrer, F. J. Plou, O. M. Nuero et al. II J. Chem. Technol. Biotechnol-2000.-V. 75,-P. 569-576

486. Purification and properties of a lipase from Peniciliium expansum / W. Stocklein, H. Sztajer, U. Menge, R. D. Schmid // Biochim. Biophys. Acta. 1993. - V. 1168. - P. 181-189

487. Purification and properties of an extracellular lipase from the fungus Botrytis cinerea / P. Commenil, L. Belingheri, M. Sancholle, B. Dehorter // Lipids. 1995. - V. 30, № 4. - P.351-356

488. Purification and properties of extracellular lipase from Streptomyces rimosus / M. Abramic, I. Lescic, T. Korica et al. II Enzyme Microb. Technol. 1999. - V. 25, № 6. -P. 522-529

489. Purification and properties of Lipase from Peniciliium simplicissimum / H. Sztajer, H. Lunsdorf, H. Erdmann et al. II Biochim. Biophys. Acta. 1992. - V. 1124. - P. 253261

490. Purification and some properties of ollbaund lipase from Saccharomycopsis lipolytica / Yasuhide Ota, Gomi Komakazu, Kato Shigeari et al. II Agr. Biol. Chem. -1982. V. 46, № 12. - P. 2885 - 2893

491. Purification of a moderate thermotolerant Bacillus coagulans BTS1 lipase and its properties in a hydro-gel system / S. S. Kanwar, R. K. Kaushal, H. Sultana, S. S. Chimni // Acta Microbiol. Immunol. Hung. 2006. - V. 53, № 1. - P. 77-87

492. Purification of a Penicilium citrinum lipase by chromatographic processes / N. Krieger, M. A. Taipa, E. Melo et al. II Bioprocess Eng. 1999. - V. 20. - P. 59-65

493. Purification of conjugated linoleic acid isomers through a process including lipase-catalyzed selective esterification / Toshihiro Nagao, Yoshie Yamauchi-Sato, Akio Sugi-hara et al. // Biosci., Biotechnol. Biochem. 2003. - V.67, № 6. - P. 1429-1433

494. Purification of different lipases from Aspergillus niger by using a highly selective adsorption on hydrophobic supports / Gloria Fernandez-Lorente, Claudia Ortiz, Rosa L. Segura et al. // Biotechnol. Bioeng. 2005. - V. 92, № 6. - P. 775-779

495. Purification, characterization, and crystallization of two types of lipase from Rhizopus niveus / Mitsutaka Kohno, Wataru Kugimiya, Yukio Hashimoto, Yuhei Morita //Bioici. Siatech. Blochem. 1994. - V. 58, №6.-P. 1007-1012

496. Quinlan, P. Modification of triglycerides by lipases: Process technology and its application to the production of nutritionally improved fats / P. Quinlan, S. Moore // Inform. 1993. - V. 4. - P. 5-9

497. Ramamurthi, S. Lipase-catalyzed esterification of oleic and methanol in hexane a kinetic study / S. Ramamurthi, A. R. McCurdy // J. Am. Oil Chem. Soc. - 1994. - V. 71, №9.-P. 927-930

498. Rapp, P. Production, regulation, and some properties of lipase activity from Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum / P. Rapp // Enzyme Microb. Technol. 1995. - V. 17, №9.-P. 832-838

499. Rath, C. C. Heat stable lipase activity of thermotolerant bacteria from hot springs at Orissa, India / C. C. Rath // Cytobios. 1999. - V. 99, № 391. - P. 105 -111

500. Rawnne, Torben H. Triglyceride selectivity of immobilized Thermomyces lanuginosa lipase in interesterification / Torben H. Rawnne, Lars S. Pedersen, Xuebing Xu // JAOCS: J. Am. Oil Chem. Soc. 2005. - V. 82, № 10. - P. 737-743

501. Recovery of Acinetobacter radioresistens lipase by hydrophobic adsorption to n-hexadecane coated on nonwoven fabric / Hui-Min Wang, Jau-Yann Wu, Chuh-Yung Chen, Teh-Liang Chen // Biotechnol. Progr. 2003. - V. 19, № 2. - P. 464-468

502. Rees, H. C. Enzymes from alkaline saline lakes / H. C. Rees, S. Heaphy, W. D.

503. Grant // Halophiles 2001: International Conference on Halphilic Microorganisms, Sevilla, 23-27 Sept. 2001: programme and Abstracts. Sevilla, 2001. - P. 52

504. Regioselective deacetylation of peracetylated monosaccharide derivatives by polyethylene glycolmodified lipase for the oligosaccharide synthesis / Yoh Kodera, Katsu-kiyo Sakurai, Yuiko Satoh et al. // Biotechnol. Lett. 1998. - V. 20, № 2. - P. 177-180

505. Repeated use of immobilized lipase for monoacylglycerol production by solidphase glycerolysis of olive oil / R. Rosu, Y. Uozaki, Y. Iwasaki, T. Yamane // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1997. - V. 74, № 4. P. 445-450

506. Response surface methodology for optimization of lipase production by an immobilized newly isolated Penicillium sp. / E. Wolski, E. Menusi, M. Mazutti et al. // Ind. and Eng. Chem. Res. 2008. - V. 47, № 23. - P. 9651-9657

507. Rice, K. E. Hydrolysis of Menhaden Oil by a Candida cylindracea Lipase Immobilized in a Hollow-Fiber Reactor / Kenneth E. Rice, Y. Watkins, C. G. Hill // Biotechnol. Bioeng. 1999. - V. 63, № 1. - P. 32-45

508. Richardson, I. S. The anatomy and taxonomy of protein structure /1. S. Richardson //Adv. Prot. Chem. 1981. -V. 34. - P. 167-239

509. Rogers, G. A. Synthesis and evaluation of a model for the so-called "charge-relay" system of the serine esterase / G. A. Rogers, T. C. Brake // J. Am. Chem. Soc. 1974.1. V. 96. P.2473-2481

510. Rosell, C. M. Continuous in situ water activity control for organic phase biocaialy-sis in a packed bed hollow fiber reactor / C. M. Rosell, A. M. Vaidya, P. J. Hailing // Biotechnol. Bioeng. 1996. - V. 49. - P. 284-289

511. Rosenstein, R. Staphylococcus lipases: Biochemical and molecular characterization / R. Rosenstein, F. Gotz // Biochimie. 2000. - V. 82, № 11. - P. 1005-1014

512. Rules for Optimization of Biocatalysis in Organic Solvents / C. Laane, S. Boeren, K. Vos, C. Veeger // Biotechl. Bioeng. 1987. -V. 30. - P. 81-87

513. Ryu, K. Free energy relationships of substrate and solvent hydrophobicities on enzymatic catalysis in organic media / K. Ryu, J. S. Dordick // J. Am. Chem. Soc. 1989. -V. 111.-P. 8026-8027

514. Scaled-up production of zero-trans margarine fat using pine nut oil and palm stearin / P. Adhikari, X.-M. Zhu, A. Gautam et al. // Food Chem. 2010. - V. 119, № 4. - P. 1332-1338

515. Schmid, R. D. Lipases interfacial enzymes with attractive applications / R. D. Schmid, R. D. Verger // Angew. Chem. Int. Ed. Engl. - 1998. - V. 37. - P. 1608-1633

516. Schmidl, M. Parenteral and Enteral food systems / M. Schmidl, S. Massaro, T. La-buza // Food Technol. 1988. - V. 42. - P. 77-87

517. Schmidt-Dannert, C. Recombinant microbial lipases for biotechnological / C. Schmidt-Dannert // Applications Bioorganic & Medicinal Chemistry. 1999. - V. 7. - P. 2123-2130

518. Sehanputri, P. S. Lipase-mediated acidolysis of butteroil with free conjugated li-noleic acid in a packed bed reactor / P. S. Sehanputri, C. G. Hill // Biotechnol. Bioeng. -2003.-V. 83, № 5.-P. 608-617

519. Selective hydrolysis of polyunsaturated fatty acid containing oil with Geotrichum candidium lipase / Y. Shimada, K. Marnuame, M. Naramura et al. // J. Amer. Oil Chem. Soc. - 1995. - V. 72, № 12. - P. 1577-1581

520. Shen, R. Экстракция промышленной липазы смесью обращенных мицелл на основе СТАВ / Rui Shen, Jun-guo Liu, Jian-min Xing, Hui-zhou Liu // Guocheng gong-cheng xuebao = Chin. J. Process Eng. 2005. - V. 5, № 3. - P. 255-259

521. Single-step purification of lipase from Burkholderia multivorans using polypropylene matrix / N. Gupta, P. Rathi, R. Singh et al. // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2005. -V. 67, №5. -P. 648-653

522. Small, D. M. The effect of glyceride structure on absorption and metabolism / D. M. Small // Annu Rev. Nutr. 1991. - V. 11. - P. 413-434

523. Smith, R. E. Overview of SALATRIM, a family of low-calorie fats / R. E. Smith, J. W. Finley, G. A. Leveille // J. Agric. Food Chem. 1994. -V. 42. - P. 432-434

524. Sokokin, D. Y. Improved method for direct screening of true lipase-producing microorganisms with particular emphasis on alkaline conditions / D. Y. Sokokin, В. E. Jones // Микробиология. 2009. - V. 78, № 1. - P. 144-149

525. Soumanou, M. M. Two-step enzymatic reaction for the synthesis of pure structured triglycerides / M. M. Soumanou, U. T. Bomscheuer, R. D. Schmid // J. Am. Oil Chem. Soc. 1998. - V. 75. - P. 703-710

526. Specificity of Mucor miehei lipase on methyl ester substrates / G. Aggelis, M. Ko-maitis, M. Pina, J. Graille // Grasas y aceites (Esp.). 1993. - V. 44, № 6 - P. 331-334

527. Stability of hydpophlic lipase derivatiers immobilized in organic polumer beads / M. Basri, K. Ampon, W. M. Z. Wan Yunus et. al. // Appl Biochem Biotechnol. A. -1994.-V. 48, №3,-P. 178-183

528. Stadler, P. Understanding lipase action and selectivity / P. Stadler, A. Kovac and F. Paltauf // Croatica Chemica Acta. 1995. - V.68, № 3. - P. 649-674

529. Steptomyces rimosus GDS (L) lipase: Production, heterologous overexpression and structure-stability relationship / D. Vujaklija, M. Abramic, I. Lescic et al. // Food Tech-nol. Biotechnol. 2003. - V. 41, № 1. - P. 89-93

530. Structural characterization of extracellular lipase from Streptomyces rimosus: Assignment of disulfide bridge pattern by mass spectrometry /1. Lescic, M. Zehl, R. Muller et al. // Biol. Chem. 2004. - V. 385, № 12. - P. 1147-1156

531. Studies on the detergent inhibition of pancreatic lipase activity / Y. Gargouri, R. Julien, A. G. Bois et al. // J. Lipid Res. 1983. - V. 24. - P. 1336-1342

532. Studies on the factors that affec stereoselective esterification of (R, S) 2-octanol with octanoic acid catalyzed by lipase in organic solvent / H. Yang, S. G. Cao, S. P. Han et al. // Appl. Biochem. Biotechnol. A. 1996. - V. 59, № 2. - P. 177-186

533. Substrate specificity of the lipase from Candida parapsilosis / D. Briand, E. Du-breucq, G. Galzy, P. Galzy // Lipids. 1995. - V. 30, №. 8 - P. 747-754

534. Sugiura, M. Studies on the lipase of Chromobacterium viscosum IV. Substrate specificity of a low molecular weight lipase / M. Sugiura, M. Isobe // Chem. Pharm. Bull. 1975. - V. 23 - P. 1226-1230

535. Synthesis of structured triacylglycerols containing caproic acid by lipase-catalyzed acidolysis: optimization by response surface metodology / D. Zhou, X. Xu, X. Mu et al. // J. Agric. Food Chem. 2001. - V 49. - P. 5771-5777

536. Synthesis of structured triglycerides from peanut oil with immobilized lipase / M. M. Soumanou, U. T. Bomscheuer, U. Menge, R. D. Schmid // J. Am. Oil Chem. Soc. -1997.-V. 74.-P. 427^433

537. Synthesis of sugar fatty acid esters by modified lipase / W. Tsuzuki, Y. Kitamura, T. Suzuki, S. Kobayashi // Biotechnol. Bioeng. 1999. - V. 64, № 3. - P. 267-271

538. Sztajer, H. Purification and properties of Lipase from Pseudomonas fluorescens / H. Sztajer, J. Borkowski, R. Sobiech // Biotechnol. Appl. Biochem. 1991. - V. 13, №1. -P. 65-71

539. Tahoun, M. K. Gluceride synthesis by an intracellular lipase from Aspergillus niger / M. K. Tahoun, M. El-Kadu, A. Wahba // Microbios Lett. 1985. - V. 28, № 111-112. -P. 133-139

540. Tahoun, M. K. The mechanism of Rhizopus delemar intracellular lipases inhibition by various chemicals / M. K. Tahoun, R. Mashaley, A. A. Ismail // Microbios. 1988. -V. 53, №216-217.-P. 139-146

541. Taipa, M. A. Identification and characterization of Chromobacterivm viscosum lipase / M. A. Taipa, P. Moura-Pinto, J. M. S. Cabrai // Biotechnology Techniques. -1994. V. 8, № 1. - P. 27-32

542. Taipa, M.A. Purification of lipases / M. A. Taipa, M. R. Aires-Barros, J. M. S. Cabrai // J. Biotechnol. 1992. - V. 26. - P. 111-142

543. Tamerler, C. B. Production of lipolytic enzymes in batch cultures of Ophiostoma piceae / C. B. Tamerler, A. T. Martinez, T. Keshavarz // J. Chem. Technol. and Biotechnol. 2001. - V. 76, №9.-P. 991-996

544. Tangkam, K. Solvent-free lipase-catalyzed preparation of diglycerides from co-products of vegetable oil refining / K. Tangkam, N. Weber, B. Wiege // Grasas y aceites. 2008. - V. 59, № 3. - P. 245-253

545. Taylor, F. Fat splittig in an immobilized lipase enzyme reactor. / F. Taylor, D. J. O Brien//J. Amer. Oil Chem. Soc. 1985. - V. 62, № i.p. 193-198

546. Thannhauser, T. W. Sensitive quantitative analysis of disulfide bond in polypeptides and proteins / T. W. Thannhauser, Y. Konishi, H. A. Scheraga // Anal. Biochem. -1984.-V. 138, № l.-P. 181-188

547. The application of lipases to hydrolyze crude industrial lipid mixtures / M. Haas, K. Scott, D. Cichowicz, W. May Jun // InFORM: Int. News Fats, Oil and Relad Mater. -1994.-V. 5, №4.-P. 541-543

548. The application of PCR for the isolation of a lipase gene from the genomic DNA of an Antarctic microfungus / J. Ron Bradner, Philip J.L. Bell., V. S. Junior Te'o, K. M. Helena Nevalainen // Curr. Genet. 2003. - V. 44, № 4. - P. 224-230

549. The consequences of engineering an extra disulfide bond in the Pénicillium camem-bertii mono- and diglyceride specific lipase / S. Yamaguchi, K. Takeuchi, T. Mase et al. II Protein Eng. 1996. - V. 9, № 9. - P. 789-795

550. The crystal structure of Bacillus subtilis lipase: A minimal a/p-hydrolase fold enzyme / Gertie van Pouderoyen, T. Eggert, K-E. Jaeger, B. W. Dijkstra // J. Mol. Biol. -2001.-V. 309, № l.-P. 215-226

551. The effect of organic solvents on the equilibrium position of enzymatic acylglycerol syntesis / A. E. M. Janssen, A. Van der Padt, H. M. Van Sonsbeek, K. Van't Riet // Bio-technol. Bioeng. 1993. - V. 41. - P. 95-103

552. The effect of triglyceride positional distribution on fatty acid absorption in rats / E. L. Lien, F. G. Boyle, R. Yuhas et al. // J. Ped. Gastroenlerol. Nutr. 1997. - V. 25. - P. 167-174

553. The effects of enzymatic interesterification on the physical-chemical properties of blends of lard and soybean oil / R. C. Silva, L. N. Cotting, T. P. Poltronieri et al. // LWT Food Sci. and Technol. - 2009. - V. 42, № 7. - P. 1275-1282

554. The lipase/acyltransferase from Candida parapsilosis: molecular cloning, purification and characterization of purified recombinant enzymes. / V. Neugnot, G. Moulin, E. Dubreucq, F. Bigey // Eur. J. Biochem. 2002. - V. 269. - P. 1734-1734

555. The structure-function relationship of the lipases from Pseudomonas aeruginosa and Bacillus subtilis / O. Misset, G. Gerritse, K.-E. Jaeger et al. // Protein Engineering. -1994. V. 7, № 4. - P. 523-529

556. Thermostable lipase of Bacillus stearothermophilus: High-level production, purification, and calcium-dependent thermostability / Hyung-Kwoun Kim, Myung-Heez Kim, Jung-Kee Lee et al. // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2000. - V. 64, № 2. - P. 280-286

557. Toida, Z. Purification and characterization of a lipase from Aspergillus oryzae / Zinichi Toida, Kimio Kondoh, Mirio Furuzawa et al. // Biosel. 1995. - V. 59, № 7. - P. 1199-1203

558. Torres, C. Influence of the organic solvents on the activity in water and the conformation of Candida rugosa lipase: Derscription of a lipase-activating pretreatment / C. Torres, C. Otero // Enzyme Microb. Technol. 1996. - V. 19, № 8. - P. 594-600

559. Treatment of Candida rugosa lipase with short-chain polar organic solvents enhances its hydrolytic and synthetic activities / S. Chamorro, J. M. Sánchez-Montero, R. Alcantara., J. V. Sinisterra // Biotechnol. Lett. 1998. - V. 20, № 5. - P. 499-505

560. Triacylglycerol hydrolysis by lipase in a flat membrane bioreactor / K. Belati-Bako, A. Dombi, L. Szabo, E. Nagy // Biotechnol. Techn. 1994. - V. 8, № 9. - P. 671674

561. Tsai, S. W. Enantioselective synthesis of (S)-suprofen ester prodrugs by lipase in cyclohexane / S. W. Tsai, C. M. Huang // Enzyme Microb. Technol. 1999. - V. 25, № 8-9. - P. 682-688

562. Tsujisaka, Y. Glyceride synthesis by four kinds of microbial lipase / Y. Tsujisaka, S. Okumura, M. Iwai // Biochim. Biophys. Acta. 1977. - V. 489. - P. 415-422

563. Tsuzuki, W. Acidolysis between triolein and short-chain fatty acid by lipase in organic solvents / Wakako Tsuzuki // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2005. - V. 69, № 7. -P. 1256-1261

564. Tiiter, M. H. Solvent free glycerolysis of palm and palm kernel oils catalyzef by commercial 1,3-specific lipase from Humicola lanuginosa and composition of glycerolysis products / M. H. Tiiter, A. Aksoy // Biotechnol. Lett. 2000. - V. 22. - P. 31-34

565. Understanding lipase stereoselectivity / R. V. Muralidhar, R. R. Chirumamilla, R. Marchant et al. // World J. Microbiol. Biotechnol. 2002. - V. 18, № 2. - P. 81-97

566. Utilisation of powdered pig bone as a support for immobilization of lipase / S. Ne-gishi, S. Sato, S. Mukataka et al. // J. Ferment. Bioeng. 1989. - V. 67, № 5. - p. 350355

567. Utilization of microoganisms for production of monoacylglycerols / W. Bednarski, J. Kowalewska-Piontac, M. Adamczak, R. Zadernowski // Pol. J. Food Nutr. Sci. 1993. -V. 2, №4.-P. 99-103

568. Valenzuela, A. Technological challenges to assess n-3 polyunsaturated fatty acids from marine oils for nutritional and pharmacological use / A. Valenzuela, S. Nieto, R. Uauy // Grasas y Aceites. 1993. - V. 44. - P. 39-46

569. Valenzuela, F. Biotechnology of lipids: The use of lipases for the structural modification of fast and oils / F. Valenzuela, S. Nieto // Crasas y aceites (Esp.). 1994. - V. 45, №5.-P. 337-343

570. Valivety, R. H. Reaction rate with suspendet lipase catalyst shows similar dependence on water activity in different organic solvents / R. H. Valivety, P. J. Hailing, A. R. Macrae // Biochim. Biophys. Acta. 1992. - V. 1118. - P. 218-222

571. Van Camp, V. Enzymatic synthesis of structured modified fats / V. Van Camp, A. Huyghebaert, P. Goenan // In: Christophe AB, editors. Structural modified food fats: Synthesis, biochemistry, and use. Champaign AOCS Press. 1998. - P. 20-45

572. Variability within the Candida rugosa lipases family / M. Lotti, A. Tramontane, S. Longhi et al. // Protein Engineering. 1994,- V. 7, № 4. - P. 531-535

573. Variables that affect immobilization of Mucor miehei lipase on nylon membrane / L. M. Bruno, Saavedra Pinto Gustavo Adolfo, Ferreira de Castro Heizir et al. // World J. Microbiol. Biotechnol. 2004. - V. 20, № 4. - P. 371-375

574. Verger, R. «Interfacial activation» of lipases: Facts and artifacts / Robert Verger // Trends Biotechnol. 1997. - V. 15, № 1. - P. 32-38

575. Villeneuve, P. Lipase specificities: Potential application in lipid bioconversions / P. Villeneuve, T. A. Foglia // INFORM: Int. News Fats, Oils and Relat. Mater. 1997. - V. 8, № 6. - P. 640-650

576. Waif, D. The chemistry of enzyme and protein immobilization with glutaraldehyde / D. Waif, V. Agayn // Th. AC: Trends Anal. Chem. 1994. - V. 13, № 2. - P. 425-430

577. Wang, H.-j. Условия синтеза липазы Plancoccus migula in vitro / Hai-jing Wang, Zi-qing Mei, Xian-zhong Liu et al. // Jilin daxue xuebao. Lixue ban = J. Jilin Univ. Sci. Ed. 2002. - V. 40, № 4. - P. 430^132

578. Wang, L.-l. Термодинамика катализируемой липазой реакции этерификации в смеси двух органических растворителей / Le-le Wang, Shu Bai, Yan Sun // Guocheng gongcheng xuebao = Chin. J. Process Eng. 2005. - V. 5, № 6. - P. 605-608

579. Wang, Y.-j. Изучение иммобилизации липазы на магнитных наночастицах, содержащих Mn(II) / Y.-j. Wang, H.-l. Jiang, W.-q. Yin // Huaihai gongxueyuan xuebao. Ziran kexue ban = J. Huaihai Inst. Technol. Nat. Sci. Ed. 2008. - V. 17, № 2. - P. 51-54

580. Warshel, A. Computer modeling of chemical reactions in enzymes and solution / A. Warshel. New York: John Wiley and Sons, 1991

581. Warshel, A. Computer simulations of enzyme catalysis: finding out what has been optimized by nature / A. Warshel, J. Florian // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. - V. 95.-P. 5950-5955

582. Warshel, A. Electrostatic origin of the catalytic power of enzymes and the role of preorganized active sites / A. Warshel // J. Biol. Chem. 1998. - V. 273. - P. 2703527038

583. Warshel, A. Energy considerations show that low-barrier hydrogen bonds do not offer a catalytic advantage over ordinary hydrogen bonds / A. Warshel, A. Papazyan // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - V. 93. - P. 13665-13670

584. Warshel, A. Evaluation of catalytic-free energies in genetically modified proteins / A. Warshel, F. Sussman, J.-K. Hwang // J. Mol. Biol. 1988. - V. 201. - P. 139-159

585. Warwel, S. An efficient method for lipase-catalysed preparation of acrylic and methacrylic acid esters / S. Warwel, G. Steinke, M. R. gen. Klaas // Biotechnol. Techn. -1996. V. 10, № 4. - P. 283-286

586. Warwel, S. Substrate selectivity of lipases in the esterification of cis/trans-isomers and positional isomers of conjugated linoleic acid (CLA) / S. Warwel, R. Borgdorf // Biotechnol. Lett. 2000. - V. 22, № 14.-P. 1151-1155

587. Wei, H.-N. Production and characteristics of an enantioselective lipase from Burkholderia sp. GXU56 / H.-N. Wei, L.-L. Shi, B. Wu // Chem. Eng. and Technol. -2008. V. 31, № 2. - P. 258-264

588. Wescott, C. R. The solvent dependence of enzyme specificity / C. R. Wescott, A. M. Klibanov // Biochim. Biophys. Acta. 1994. - V. 1206. - P. 1-9

589. Wu, X. Y. Purification and partial characterization of Rhizomucor miehei lipase for ester synthesis / Xiao Yan Wu, Sanna Jaaskelainen, Yu-Yen Linko // Appl. Biochem. Biotechnol. A. 1996.-V. 59, №2.-P. 145-158

590. Xia, Y.-m. Глицеролиз пальмового масла, катализируемый липазой Pseudomonas в системе без растворителя. II. Изучение увеличения выхода моноглицеридов / Yong-mei Xia, Ke-chang Zhang // Jingxi huagong = Fine Chem. 2000. - V. 17, № 5. -P. 249-251

591. Xie, Y.-l. Создание рецептуры и анализ новой смеси пищевых масел / Y.-1. Xie, B.-s. Не, D.-d. Ren // Henan gongye daxue xuebao. Ziran kexue ban = J. Henan Univ. Technol. Nat. Sci. Ed. 2009. - V. 30, № 1. - P. 29-31

592. Xu, H. Enzyme bioreactors for lipid modifications / Huebing Xu // INFORM: Int. News Fats, Oils and Relat. Mater. 2000. - V. 11, № 9. - P. 1004-1012

593. Xu, J. Studies lipase from Penicillium camembertii II-PG3 / Jiali Xu, Jun Zhang, Zutong Qi // Zhenjun xuebao. Acta mycol sin. 1995. - V. 14, № 2. - P. 136-142

594. Xu, J.-H. Efficient preparation of (R)-a-monobenzoyl glycerol by lipase catalyzed asymmetric esterification: optimization and operation in packed bed reactor / J.-H. Xu, Y. Kato, Y. Asano // Biotechnol. Bioeng. -2001. -V. 73, № 6. P. 493-499

595. Yadav, G. D. Kinetic modeling of immobilized-lipase catalyzed transesterification of и-octanol with vinyl acetate in non-aqueous media / G. D. Yadav, A. H. Trivedi // Enzyme Microb. Technol. 2003. - V. 32, № 7. - P. 783-789

596. Yamada, К. / K. Yamada, H. Machida // Nippon Nogeikagaku Kaishi (in Japanese). 1992. - V. 36. - P. 858-860

597. Yamane, T. Repeated use of lipase immobilized on amphiphilic gel for hydrolysis of a smalt amount of glycerides included in liquid crude fatty acid / T. Yamane, T. Funada, S. Ishida // J Ferment Technol. 1982. - V. 60. - P. 517-523

598. Yang, B. Control of lipase-mediated glycerolysis reactions with butteroil in single liquid phase media with 2-methyl-2-propanol / B. Yang, W. J. Harper, K. L. Parkin // J. Agric. Food Chem.- 1993.-V. 41, № 11.-P. 1899-1904

599. Yang, B. Control of lipase-mediated glycerolysis reactions with butteroil in dual liquid phase media devoid of organic solvent / B. Yang, W. J. Harper, K. L. Parkin // J. Agric. Food Chem. 1993. - V. 41, № 11. - P. 1905-1909

600. Yang, X.-h. Оптимизация культуральной среды для продукции липазы иммобилизованными клетками Rhizopus arrhizus и свойства липазы / Xue-hao Yang, Chun-hua Yin, Si-zhou Fu et al. // Zhongguo youzhi = China Oils and Fats. 2004. - V. 29, № 7. - P. 29-32

601. Yeo, S.-H. Purification and characterization of tert-butyl ester-hydrolyzing lipase from Burkholderia sp. YY 62 / Soo-Hwan Yeo, Nihira Takuya, Yamada Yasuhiro // Bio-sci., Biotechnol. Biochem. 1998. -V. 62, № 12. - P. 2312-2317

602. Yesiloglu, Y. Glycerolysis of oleic acid by Candida rugosa lipase in organic solvents / Y. Yesiloglu, I. Kilic // Науч. тр. Хим. / Пловдив, унив. 2006. - V. 34, № 5. -Р. 81-86

603. Yon, J. Structure et dinamique conformationnelle des proteins / J. Yon. Paris: Ed. Hermann, 1969.-PP. 160-163

604. Yu, H. Enhanced activity and enantioselectivity of Candida rugosa lipase immobilized on macroporous adsorptive resins for ibuprofen resolution / Hongwei Yu, Jinchuan Wu, Chi Bun Ching // Biotechnol. Lett. 2004. - V. 26, № 8. - P. 629-633

605. Zaks, A. Enzymatic catalysis in nonaqueous solvents / A. Zaks, A. M. Klibanov // J. Biolog. Chem. 1988. - V. 263, № 7. - P. 3194-3201

606. Zaks, A. The effect of water on enzyme action in organic media / A. Zaks, A. Klibanov//J. Biol. Chem. 1988.-V. 263, № 17.-P. 8017-8021

607. Zhang, L. Y. Effective inducers for lipase production by Candida rugosa / L. Y. Zhang, D. Z. Wei, W. Y. Tong // Ann. Microbiol. 2003. - V. 53, № 4. - P. 499-504

608. Zheng, Y. Содержание полиненасыщенных жирных кислот в глицеридах после гидролиза рыбьего жира липазой / Yi Zheng, Nan Zheng, Jinfeng Zhuo, Lingling Ma // Yingyong yu huanjing shengwu xuebao = Chin. J. Appl. Environ. Biol. 2005. - V. 11, №5.-P. 571-574

609. Zou, W. Выделение Serratia liquefaciens продуцента липазы и характеристика последней / Wenxin Zou, Hui Liu, Wenhuan Yu // Nanjing daxue xuebao. Ziran kexue = J. Nanjing Univ. Natur. Sci. Ed. - 1996. - V. 32, № 4. - P. 713-716