автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.04, диссертация на тему:Теоретическое обоснование и практическая реализация технологий гидролизатов молочных белков и специализированных продуктов с их использованием

На правах рукописи

003 16351Э

КРУГЛИК Владимир Иванович

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ И ПРАКТИЧЕСКАЯ РЕАЛИЗАЦИЯ ТЕХНОЛОГИЙ ГИДРОЛИЗАТОВ МОЛОЧНЫХ БЕЛКОВ И СПЕЦИАЛИЗИРОВАННЫХ ПРОДУКТОВ С ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ

Специальность 05 18 04 - технология мясных, молочных, рыбных продуктов и холодильных производств

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора технических наук

7 /> ЯНВ 2000

Кемерово 2008

003163519

Работа выполнена в ГНУ Всероссийский Научно-исследовательский институт детского питания Россельхозакадемии (ГНУ ВНИИ ДП Россельхочака-демии) и ОАО «Нутринвестхолдинг»

Официальные оппоненты- доктор технических наук, профессор,

лауреат Государственных премий СССР и РФ Э.С. Токаев

(заведующий кафедрой технологии продуктов детского и функционального питания ГОУ ВПО МГУПБ)

доктор технических наук, профессор И.А. Смирнова

(заведующая кафедрой технологии молока и молочных продуктов ГОУ ВПО КемТИПП)

доктор технических наук, заслуженный работник пищевой индустрии Г.Б. Гаврилов (директор ГУ Ярославский государственный институт качества сырья и пищевых продуктов)

Ведущая организация: ГНУ Сибирский научно-исследовательский институт сыроделия Сибирского отделения Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ Сиб-НИИС СО Россельхозакадемии)

Защита диссертации состоится 19 февраля 2008 г в 10 00 ч на заседании диссертационного совета Д21208901 в ГОУ ВПО Кемеровский технологический институт пищевой промышленности по адресу 650056, г Кемерово, бульвар Строителей, 47

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КемТИПП С авторефератом можно ознакомиться на официальном сайте ВАК Минобрнау-ки РФ (http //vak ed gov ru/announcements/techn/)

Автореферат разослан 9 января 2008 года

Ученый секретарь диссертационного совета, ЯТл/7

кандидат технических наук, профессор нНПотипаева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Рациональное питание способствует сохранению здоровья, профилактике заболеваний, а также создает условия для повышения способности организма противостоять неблагоприятным воздействиям окружающей среды и переносить физические и психоэмоциональные нагрузки На приоритетную значимость питания указывает постановление Правительства РФ №917 от 10 08 98 «О Концепции государственной политики в области здорового питания населения Российской Федерации», рассчитанной напериоддо2010г

Особое место в современной нутрициологии занимает проблема пищевой недостаточности при критических состояниях Агрессивные воздействия любой этиологии (травмы, ранения, кровопотери, ожоги, хирургические вмешательства), а также патологические проявления (онкологические, инфекционные заболевания, воспалительные процессы в печени и поджелудочной железе) развивают неспецифические реакции гиперметаболизма и гиперкатаболизма Это приводит к нарушениям обмена белков, углеводов, липидов, усиленному расходу углеводно-липидных компонентов и распаду тканевых белков При этом основной чертой всей совокупности изменений обмена веществ является сочетание резкого повышения потребностей организма в белково-энергетических субстратах со снижением толерантности к белку пищи Специфические требования также предъявляются к белковой составляющей рациона больных наследственными заболеваниями аминокислотного обмена, пищевой аллергией, в том числе, детей первого года жизни

В соответствии с вышеизложенным и с учетом опыта зарубежных стран, существует доказанная необходимость промышленного производства продуктов специализированного питания, назначаемых больным в критических состояниях или при нарушении функции пищеварения Как правило, в их состав входят гидролизаты белков с различной глубиной гидролиза, которые оказываются зачастую единственным средством лечебного воздействия, обеспечивающим жизнедеятельность и полноценное развитие больных детей и взрослых с различной патологией

Ввиду актуальности вопроса создания специализированных продуктов (СП) с заданными свойствами в последние годы отмечается значительное усиление интереса исследователей к процессам их получения В нашей стране в 7080-х гг прошлого столетия были созданы и внедрены в клиническую практику отечественные пищевые смеси, использование которых положительно повлияло на результаты лечения многих категорий больных и тяжело пострадавших

Вклад в освоение технологии продуктов для специализированного питания, в т ч на основе молочных белков, внесли В Г Высоцкий, Г Б Гаврилов, И А Евдокимов, П Ф Крашенинин, К С Ладодо, Н Н Липатов, Н Н Липатов (мл ), М Ф Нестерин, А А Покровский, Т С Попова, И А Рогов, Ю Я Свири-денко, Н А Тихомирова, Э С Токаев, В А Тутельян, В Д Харитонов, А Г Храм-цов, А П Чагаровский, А М Шалыгина, В А Шатерников, другие отечественные и зарубежные ученые

Однако, в начале 90-х гг в Российской Федерации выпуск СП прекратил-

ся, и в течение последующих 10 лет на рынке были представлены только зарубежные продукты

В этой связи направление по созданию ферментативных гидролизатов молочных белков (ФГМБ) и СП на их основе следует признать принципиально новым, позволяющим решить важные социальные проблемы, а также расширить знания в области лечебного питания, что указывает на актуальность выполненных исследований

Цель и задачи исследований. Целью диссертационной работы является теоретическое обоснование, исследование биотехнологических и физико-химических закономерностей получения ФГМБ, а также разработка технологий СП с их использованием

Для достижения поставленной цели определены следующие задачи

- оптимизировать условия ферментативного гидролиза (ФГ) молочных белков с различным фракционным составом в зависимости от технологических факторов,

- оценить изменение качественного и количественного состава пептидных фракций, их молекулярно-массового распределения (ММР), остаточной анти-генности (АГ) и содержания свободных аминокислот в процессе гидролиза,

- изучить влияние мембранной очистки и фракционирования ФГМБ на показатели их качества,

- разработать принципы расчета процессов мембранного фракционирования ФГМБ,

- исследовать закономерности удаления фенилаланина из ФГМБ с использованием метода адсорбционной хроматографии (АХр),

- обосновать принципиальную технологическую схему получения ФГМБ и разработать частные технологии получения ФГМБ с направленно регулируемыми составом и свойствами,

- разработать блочно-модульные схемы и технологии ФГМБ и СП с их использованием,

- использовать полученные результаты и установленные закономерности гидролиза, мембранной очистки и фракционирования, АХр ФГМБ для разработки нормативной документации и освоения промышленного производства СП на их основе

Научная новизна работы- исследованы особенности ФГ молочных белков в зависимости от их фракционного состава, происхождения ферментных препаратов, их концентрации, температуры, активной кислотности, применения рН-статирования и других факторов,

- показано, что решающая роль в формировании качественного и количественного состава пептидных фракций ФГМБ принадлежит природе используемого ферментного препарата, фермент-субстратному соотношению и условиям гидролиза,

- изучено изменение характеристик ФГМБ (ММР, содержания свободных аминокислот, остаточной АГ и др) в процессе очистки ультрафильтрацией (УФ) и фракционирования нанофильтрацией (НФ) В результате достигнуто

снижение АГ гидролизатов молочных белков, достаточное для их использования в лечебных и лечебно-профилактических СП Получены гидролизаты концентрата сывороточных белков (КСБ) с улучшенными характеристиками в сравнении с существующими аналогами,

- разработаны принципы и методики расчета мембранной обработки для получения ФГМБ с заданным составом и свойствами с учетом основных технологических факторов,

- исследованы закономерности и оптимизированы условия процесса селективной сорбции фенилаланина из различных видов ФГМБ с использованием АХр, получены ФГМБ с содержанием фенилаланина, сопоставимым с аналогичной характеристикой смесей кристаллических 1-аминокислот,

- предложена функциональная классификация ФГМБ и СП,

- исследованы пищевая, биологическая и энергетическая ценность ФГМБ и СП, полученных на их основе, а также их клиническая эффективность

Практическая значимость и реализация результатов работы в промышленности. Созданы оригинальные технологии, новизна технических решений которых подтверждена авторскими свидетельствами, патентами и положительными решениями на выдачу патентов №№1358890, 1369710, 1446705, 1457192, 1522462, 1608866, 1614169, 1622967, 1658433, 1663800, 1827771, 1839085, 2017427, 2019971, 2054264, 2262240, 2290822, 2290823, 2290824, 2005114358/13, 2005114361/13, 2005114365/13, 2006122680/13) Предложена принципиальная технологическая схема и разработаны частные технологии ФГМБ с использованием различных процессов во взаимосвязи Обоснована блочно-модульная схема получения ФГМБ и широкой гаммы СП на их основе Указанные разработки внедрены в производство (ТУ 9229-127-17023360-03, ТУ 9229-133-17023360-04, ТУ 9229-149-17023360-03, ТУ 9229-151-17023360-04, ТУ 9229-152-17023360-04, ТУ 9197-163-17023360-05, ТУ 9229-176-17023360-07)

Апробация работы. Основные результаты работы доложены и получили одобрение на симпозиумах, конгрессах, конференциях, семинарах и совещаниях различного уровня (Киев, 1987, Москва, 1987, 1988, 1990, 1995, Ереван, 1987, София, 1988, Углич, 1988, Вологда, 1988, Минск, 1989, Одесса, 1990, Могилев, 1990, Монреаль, 1990, Краснодар, 1993, Тюмень, 1995, Гродно, 1995, Истра, 1997, Санкт-Петербург, 2006)

Публикации. По материалам диссертации опубликовано более ста печатных работ, в том числе две монографии, статьи в журналах, рекомендованных ВАК для публикации основных материалов диссертаций, научных трудах институтов, материалах Международного молочного конгресса, симпозиумов, конференций, а также описаниях авторских свидетельств, патентов и заявок на выдачу патентов РФ

Структура и объем работы. Диссертация состоит из 9 глав, в том числе введения, аналитического обзора, методической части, результатов собственных исследований и их анализа, выводов, списка использованных источников литературы и приложений Основной текст работы изложен на 310 страницах машинописного текста, содержит 75 таблиц, 32 рисунка, 388 литературных источников и приложения, отражающие масштабы реализации работы

Основные положения, выносимые на защиту:

- физико-химические и биотехнологические закономерности получения ФГМБ, предназначенных для использования в СП лечебной и лечебно-профилактической направленности,

- результаты изменений качественных и количественных характеристик ФГМБ (степени гидролиза, ММР белковых фракций, АГ и содержания свободных аминокислот) в процессе гидролиза и различных мембранных обработок,

- требования к исходным ФГМБ и параметры технологического процесса АХр, обеспечивающие освобождение ФГМБ от фенилаланина до уровня, соответствующего современным подходам к диетотерапии больных фенилкетону-рией (ФКУ),

- концепция создания ФГМБ с направленно регулируемыми составом и свойствами,

- блочно-модульная схема и технологии получения ФГМБ и СП на их основе

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Введение. Обоснована актуальность, научная новизна и практическая значимость диссертационной работы

Глава 1. Научные и практические предпосылки разработки современных технологий ФГМБ (аналитический обзор). Рассмотрен вопрос о роли белка в питании здорового и больного человека Эти данные в дальнейшем использованы при разработке функциональной классификации ФГМБ и СП на их основе Сформулированы медико-биологические требования к белковым компонентам СП и определены основные параметры, определяющие их качество, включая биологическую ценность, содержание отдельных аминокислот, ММР пептидных фракций, остаточную АГ, осмолярность Представлены данные, свидетельствующие о преимуществах использования пептидных фракций ФГМБ в качестве белковых компонентов различных СП Рассмотрены общие вопросы получения ферментативных гидролизатов пищевых белков с позиции активности и специфичности применяемых ферментных препаратов, режимов и кратности обработки Проанализированы данные мировой патентной литературы об основных технологических подходах к получению ФГМБ, методах их мембранной очистки и фракционирования, селективной сорбции фенилаланина, технологии СП на основе ФГМБ и аминокислотных смесей

Глава 2. Обоснование направлений собственных исследований, их цель и задачи. В главе показано, что в области технологии СП на основе ФГМБ имеется ряд важных нерешенных задач Недостаточно разработаны подходы к получению ФГМБ на основе сывороточных белков, как наиболее перспективного ввиду его высокой биологической ценности Необходимо также разработать технологии гидролиза, позволяющие получать ФГМБ как с глубокой, так и со средней степенью гидролиза Для ФГМБ с глубокой степенью гидролиза критически важным является снижение АГ до уровня не выше 1 10"5 от исходного белка, что практически недостижимо при использовании существующих технологических подходов Для гидролизатов со средней степенью

гидролиза, помимо показателя АГ, необходимо достижение невысокой осмо-лярности и удовлетворительных вкусовых свойств Это может быть осуществлено за счет снижения содержания в ФГМБ свободных аминокислот и увеличения доли фракции «средних пептидов»

Особенностью ФГМБ, предназначенных для получения удовлетворяющих современным требованиям продуктов для питания больных ФКУ, является средняя молекулярная масса пептидов, которая должна быть как можно меньшей, чтобы обеспечить высокоэффективную сорбцию фенилаланина В литературе в настоящее время не освещены технологии получения таких гидролизатов на основе сывороточных белков, а также оптимальные методы селективной сорбции фенилаланина из различных ФГМБ Поэтому разработка универсальной схемы и частных технологий ФГМБ, а также обобщенной схемы блочно-модульного типа для получения СП является одной из важнейших задач современных технологий

В заключение главы сформулирована цель и задачи исследований Глава 3. Структура исследований, организация эксперимента, объекты и основные методы исследований. Теоретические и экспериментальные исследования выполнены в 1986-2007 гг в соответствии с поставленными задачами в ГНУ Всероссийском НИИ детского питании Россельхозакадемии (г Истра), а также в научно-исследовательском центре ОАО «Нутринвестхолдинг» Общая схема исследований представлена на рис 1 Весь цикл исследований состоял из нескольких логически взаимосвязанных этапов

Первый этап работы связан с обобщением материалов отечественных и зарубежных специалистов по теме исследований На основании анализа информации обоснована необходимость создания СП на основе ФГМБ, сформулирована цель и задачи собственных исследований

Второй этап посвящен экспериментальному изучению закономерностей получения ФГМБ Исследовали процесс накопления пептидов различной молекулярной массы в составе ФГМБ в ходе ФГ систем с различным соотношением казеинов и сывороточных белков под действием ферментных препаратов в зависимости от ряда технологических факторов, включая фермент-субстратное соотношение, продолжительность гидролиза, режимы температурной обработки, наличие рН-статирования В получаемых ФГМБ оценивали изменение ММР, содержание свободных аминокислот, остаточной АГ

На основании данных об остаточной протеолитической активности в гид-ролизатах определяли параметры инактивации фермента

В дальнейших исследованиях изучали особенности очистки и фракционирования ФГМБ, анализировали изменение свойств гидролизатов в процессе мембранной обработки (в тч кратной) с использованием ультрафильтрации (УФ), селективной ультрафильтрации (СУФ), НФ и обратного осмоса (00), разрабатывали принципы расчета процессов мембранного фракционирования ФГМБ В качестве основных контролируемых при получении ФГМБ величин выбраны характеристики мембранных процессов, ММР, остаточная АГ, расчетная биологическая ценность

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ И ПРАКТИЧЕСКАЯ РЕАЛИЗАЦИЯ ТЕХНОЛОГИИ ГИДРОЛИЗАТОВ МОЛОЧНЫХ БЕЛКОВ И СПЕЦИАЛИЗИРОВАННЫХ ПРОДУКТОВ С ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ

I. Теоретические исследования

¡Обобщение и анализ результатов; •отечественных и зарубежных ис-1-■следований >

¡- аналитический обзор

обоснование направлений 1 собственных исследований Цель и задачи работы _ _

II. Экспериментальные исследования

¡Оптимизация процессов ФГ мо-| ¡лочных белков (КМБ и КСБ)

¡Изучение характеристик ФГМБ в!_ ¡процессе мембранной обработки

■Исследование закономерностей! ¡удаления фенилаланина из1-¡ФГМБ с использованием АХр 1

Разработка параметров технологий ФГМБ

Разработка блочно-модульной схемы получения ФГМБ и СП на их основе

параметры процесса кинетика ФГ ■ММР АГ

■ аминокислотный состав

режимы инактивации фермента

г- селективность мембран

1- параметры процесса -,'- кратность обработки ¡- состав и свойства гидролизатов '- принципы расчета

Г-ММР .........

содержание фенилаланина закономерности фракционирования ¡- параметры АХр

- ФГ, УФ, СУФ, 00, АХр

- параметры сгущения и сушки

- частные технологии ФГМБ

- состав и свойства образцов

]

технологические блоки

- принципиальная блочно-модульная технологическая схема

- классификацияФГМБ и_СП_

III. Практическая реализация результатов исследований

Организация производства

Техническая документация

Социальная значимость

Рис 1 Схема проведения исследований

Исследовали закономерности селективной сорбции фенилаланина из

ФГМБ, прошедших мембранную очистку и фракционирование Оптимизировали процесс АХр

Обобщенный материал экспериментальных исследований послужил основанием для разработки технологических процессов различных видов ФГМБ и СП на их основе

Следующая часть исследований связана с разработкой классификаций ФГМБ и продуктов на их основе, обоснованием принципиальной технологической схемы с указанием технологических процессов и контролируемых величин, а также блочно-модульной схемы получения ФГМБ и СП

Третий, заключительный этап работы, связан с практической реализацией результатов исследований В соответствии с медико-биологическими требованиями осуществляли адаптацию разработанных технологий к промышленным условиям, разрабатывали техническую документацию, внедряли результаты исследований в промышленности с проведением клинических апробаций новых СП, оформляли патентную документацию

На разных этапах работы объектами исследований являлись молоко коровье, предназначенное для производства продуктов детского питания, концентрат молочного белка (КМБ) и КСБ с массовой долей белка не менее 80%, в т ч получаемые по импорту и разрешенные органами Госсанэпиднадзора Минздрава России для использования в производстве продуктов детского питания, коммерческие ферментные препараты «Флавоэнзим» из Asp orhyzae («Novozyme», Дания) и «Панкреатин» из поджелудочной железы крупного рогатого скота (отечественного или импортного производства), сорбент ХАД-16 («Laboratoire Channy», Франция) для АХр, лабораторные, пилотные и промышленные образцы продукции

При выполнении работы использовали общепринятые, стандартные и оригинальные методы исследования

Физико-химические и микробиологические показатели сырья, вспомогательных материалов и готовых продуктов, контроль параметров технологического процесса осуществляли в соответствии с действующей нормативной базой МУК 4 2 577 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов», СанПиН 2 3 4 551 «Производство молока и молочных продуктов», СанПиН 2 3 2 1078 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов», «Инструкция по технохимическому контролю производства сухих молочных продуктов детского питания», утвержденная 30 12 92, «Санитарно-технологические требования к производству продуктов детского и лечебного питания на молочной основе», утвержденные 16 09 80, «Инструкция по технохимическому контролю для предприятий, вырабатывающих молочные продукты для детей различных возрастных групп», утвержденная 25 12 1980

При оптимизации процессов получения ФГМБ в лабораторных масштабах гидролиз проводили без предварительной термической обработки субстратов в водяном или суховоздушном термостате с перемешиванием, при температуре 37-50°С Контроль рН осуществляли с использованием лабораторных рН-метров рН-статирование осуществляли добавлением 1,0 M раствора гидрооки-

си натрия или 1,0 М соляной кислоты По окончании процесса ферментный препарат в составе гидролизата инактивировали нагреванием при 90-95 °С в течение 5-10 мин Ультрафильтрацию полученных гидролизатов проводили на лабораторной установке «МИНИТАН» («М111фоге»,США) с использованием мембран с диаметром пор 10 и 5 кД НФ проводили на установке производства «ВЛАДИСАРТ» (Россия), через мембрану с размером пор около 0,5 кД при рН 6,0-6,5 Полученные гидролизаты лиофильно высушивали на лабораторной сублимационной сушке

В основу получения гидролизатов молочных белков со сниженным содержанием фенилаланина положен метод АХр с использованием в качестве неподвижной твердой фазы смолы ХАД-16, представляющей собой пористые гранулы химически модифицированного полистирола В лабораторных масштабах на хроматографическую колонку (2,5x40 см) с ХАД-16, уравновешенную дистиллированной водой, через перистальтический насос наносили водный раствор ФГМБ с массовой долей сухих веществ от 20 до 45% в объеме от 10 до 25 мл После этого проводили элюирование дистиллированной водой со скоростью 2,0 мл/мин в течение 100 минут, отбирая хроматографические фракции на коллектор Колонку далее регенерировали последовательным пропусканием 600 мл 0,2 М гидроокиси натрия, 500 мл 0,1 М соляной кислоты и 1000 мл дистиллированной воды В отобранных фракциях измеряли оптическую плотность при 280 нм на спектрофотометре и определяли содержание сухих веществ рефрактометрическим методом, а также проводили анализ ММР методом эксклю-зионной хроматографии После этого фракции лиофильно высушивали В высушенных фракциях определяли содержание фенилаланина методом ВЭЖХ на обращенной фазе

В процессе перехода к пилотным условиям производства была применена полупромышленная хроматографическая колонка с неподвижной фазой ХАД-16 размером 44x100 см) В качестве основного критерия подобия при переходе к пилотной установке нами было принято время элюирования полного объема колонки, которое составило 100 минут

При исследовании характеристик ФГМБ и их фракций, полученных методами мембранной фильтрации и препаративной АХр в лабораторных и полупромышленных масштабах, использовали следующие методы

ММР пептидов оценивали методом эксклюзионной хроматографии Были использованы две хроматографические колонки с характеристиками пористости, наиболее подходящими для получаемых ФГМБ В качестве аналитической колонки применяли колонку высокого давления ТБК вЕЬ в2000 (НР,

США), 0,8><30см В качестве элюента использовали 0,05 М калий фосфорнокислый однозамещенный с 0,15 М хлористым натрием и 0,01% азидом натрия или 0,2 М хлористый натрий с добавлением 0,01% азида натрия Скорость элюирования составляла 0,2 мл/мин, в качестве проточного детектора использовали спектрофотометрический детектор на длину волны 280 нм

Использовали также колонку среднего давления с неподвижной фазой «Супероза-12» («Фармация», Швеция) 1,6x50 см Скорость элюирования составляла 2,0 мл/мин (при использовании тех же элюентов, что и для предыду-

и

щей колонки) В качестве детектора использовали проточный ультрафиолетовый детектор с длиной волны 280 нм, которая является наиболее специфической для белков и пептидов Обе колонки откалиброваны по стандартному набору водорастворимых глобулярных белков производства фирмы «СЕРБА» (Германия) в диапазоне молекулярных масс (и, соответственно, времен удерживания) от свободного до полного объема

Массовую долю общего азота в препаратах определяли на анализаторе 1130-AUTO-Kjeltek-3, содержание аминного азота определяли колориметрическим методом с реагентом 2,4,6-тринитробензолсульфокислотой по методике Воробьева с соавторами Фракционирование азотистых веществ, а также изучение их состава и свойств проводили по известным методикам, массовую долю аминокислот - после гидролиза белков в 6 Н НС1 на автоматическом аминокислотном анализаторе «ААА-400» Аминокислотный скор рассчитывали с использованием шкалы ФАО для идеального белка

Массовую долю фенилаланина определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на колонке «Nucleosil 300-5 С18» 5 мкм, 250x4,6 мм Использовали в изократическом режиме жидкостной хроматограф «MERCK HITACHI» (Япония) с ультрафиолетовым детектором UV L-7400 и длиной волны 220 нм

Определение протеолитической активности проводили спектрофотомет-рическим методом с использованием в качестве субстрата гемоглобина по Фармакопейной статье ФСП 42 0308-1449-01

Остаточную АГ в ФГМБ определяли по методу торможения непрямого твердофазного иммуноферментного теста на полистироле В основу метода положена конкуренция антигена, растворенного в объеме образца и такого же антигена, иммобилизованного на твердой фазе (полистироле) за связывание с ограниченным количеством специфических антител, растворенных в объеме образца Путем построения графика в координатах десятичный логарифм разведения (ось абсцисс) - ингибирование реакции в % (ось ординат) рассчитывали методом линейной интерполяции концентрацию 50% ингибирования (ID5o) для исследуемого (ФГМБ) и стандартного (белок молока, белок молочной сыворотки) образцов На основании этих данных определяли остаточную АГ исследуемого образца в долях от АГ стандартного образца и кратность снижения антигенных свойств в ходе обработки

Результаты экспериментов обрабатывали общепринятыми статистическими методами на ЭВМ с использованием пакетов программ EXCEL 2003 и SPSS 9 0 и 11 5 для Windows

Глава 4. Оптимизация процессов ФГ молочных белков (КМБ и КСБ). Разработка технологии гидролизатов с заданным составом и свойствами сводится, главным образом, к получению препаратов с необходимой степенью гидролиза, которая в свою очередь, зависит от многих факторов В качестве субстрата использовали системы, содержащие концентрат молочного белка (КМБ) с соотношением «казеин - сывороточные белки» (К/С), равным 80/20 (нативное соотношение казеинов и сывороточных белков, присущее молоку), и концентрат белка молочной сыворотки (КСБ), характеризуемый указанным со-

отношением равным 3/97 (соотношение, определяемое присутствием, в основном, сывороточных белков со следовыми количествами казеинов) В результате анализа литературных источников и поисковых исследований в лабораторных условиях с целью получения ФГМБ со средней и глубокой степенью гидролиза выбраны ферментные препараты «Панкреатин» и «Флавоэнзим», соответственно В первой серии экспериментов изучены ММР ФГМБ, свидетельствующие о накоплении в них различных пептидов и аминокислот в условиях обработки высокоактивным промышленным ферментным препаратом «Панкреатин» В табл 1 представлены результаты гидролиза КМБ «Панкреатином» в зависимости от продолжительности обработки Обработку проводили ферментом в количестве 2% по массе сухих веществ, температуре 50+1 °С и оптимальном для данного ферментного препарата значении рН 7,4-7,6, которое поддерживали путем рН-статирования

Таблица 1

ММР гидролизатов КМБ при гидролизе «Панкреатином» _через 2, 4 и 6 часов проведения реакции_

№ Диапазон молекулярных масс, кД Относительное распределение, % при продолжительности гидролиза, ч

2 4 6

1 Более 166 2,2 3,6 3,5

2 166-28,2 3,2 1,3 2,2

3 28,2-11,0 3,9 2,9 1,7

4 11,0-4,0 21,1 19,1 19,1

5 4,0-1,4 24,1 20,5 21,6

6 Менее 1,4 45,5 52,6 51,9

Как следует из представленных данных, ММР пептидов в продукте реакции практически не изменяется после 4 часов гидролиза, т е процесс по существу останавливается Причина этого состоит, по-видимому, в быстрой инактивации ферментов, входящих в состав «Панкреатина», как вследствие процесса автолиза, так и ингибирования короткими пептидами - продуктами реакции В дальнейших экспериментах использовали продолжительность обработки белковых субстратов «Панкреатином», равную 3 часам

Таблица 2

ММР гидролизатов КСБ при гидролизе «Панкреатином» через 3 часа реакции в зависимости от наличия тепловой инактивации ферментного препарата

№ Диапазон молекуляр- Относительное распределение, %

ных масс, кД без инактивации с тепловой инактивацией

1 Более 166 6,5 4,4

2 166-28,2 3,6 1,2

3 28,2-11,0 3,6 з.о

4 11,0-4,0 19,2 21,9

5 4,0-1,4 14,2 15,4

6 Менее 1,4 52,9 54,1

Как следует из данных табл 2, пептидный профиль панкреатинового гид-ролизата КСБ весьма сходен с таковым для КМБ Тепловая инактивация фермента по окончании процесса ФГ практически не влияет на распределение молекулярных масс, что свидетельствует об отсутствии в значительных масштабах процессов агрегации и сшивки пептидов, которые могли бы неблагоприятно повлиять на биологическую ценность получаемого ФГМБ

Результаты оптимизации процесса протеолиза по показателю фермент-субстратного соотношения показали, что увеличение концентрации «Панкреатина» выше 1,5% по массе сухих веществ практически не сказывается на глубине гидролиза (табл 3) В этой связи концентрация «Панкреатина» 1,5-2,0% по сухим веществам является оптимальной при ФГ белков коровьего молока

Таблица 3

ММР гидролизатов КСБ в зависимости от фермент/субстратного соотношения

№ Диапазон молекулярных масс, кД Относительное распределение, % при фермент/субстратного соотношении, %

0,5 1,5 3,0

1 Более 166 9,9 4,5 1,9

2 166-28,2 12,3 3,8 2,4

3 28,2-11,0 22,7 4,6 3,3

4 11,0-4,0 22,9 27,1 29,4

5 4,0-1,4 8,8 20,1 20,5

6 Менее 1,4 23,4 39,9 42,5

Проведение протеолиза белков молока панкреатином вблизи его рН-оптимума (рН 7,4-7,6) требует постоянного рН-статирования раствором щелочи вследствие закисления реакционной смеси высвобождаемыми карбоксильными группами пептидов и аминокислот При этом в составе гидролизата накапливаются ионы натрия или калия, вносимые с раствором щелочи, что неблагоприятным образом сказывается на его пищевой ценности и органолептических свойствах В связи с этим, изучена возможность проведения ферментолиза «Панкреатином» без рН-статирования (табл 4)

Таблица 4

ММР гидролизатов КСБ при гидролизе «Панкреатином», полученные через

4 и 6 часов проведения реакции без подведения рН

№ Диапазон молеку- Относительное распределение, %

лярных масс, кД при продолжительности гидролиза, ч

4 6

1 Более 166 13,2 11,0

2 166-28,2 2,6 1,9

3 28,2-11,0 5,7 5,6

4 11,0-4,0 25,0 22,2

5 4,0-1,4 12,5 14,5

6 Менее 1,4 41,0 44,8

Представленные результаты (для субстрата КСБ), свидетельствуют о

меньшей глубине гидролиза белка в этих условиях, если судить по выходу пептидов в диапазоне 1,4-4,0 и менее 1,4 кД (в сравнении с табл 2)

Таким образом, гидролиз «Панкреатином» без рН-статирования может использоваться в тех случаях, когда глубокий гидролиз белка не требуется

Оптимизация процесса получения ФГМБ под действием панкреатина по показателю температуры позволила установить, что наилучшие результаты достигаются при 50+1°С При более высоких температурах происходит быстрая инактивация фермента, а при пониженных (37+1°С) резко снижается атакуе-мость ряда индивидуальных белков в составе КСБ (таких, как Р-лактоглобулин), и они выявляются на хроматограммах гидролизатов в виде пиков с не измененной молекулярной массой

При подборе условий гидролиза КСБ и КМБ ферментным препаратом «Флавоэнзим» принимали во внимание, что этот комплекс протеаз, продуцентом которых является низший гриб Asp orhizae, обладает рН оптимумом активности вблизи рН 6,0, то есть для проведения процесса не требуется рН-статирование с применением щелочи Кроме того, ферменты, входящие в состав «Флавоэнзима», обладают более высокой, в сравнении с «Панкреатином» устойчивостью к автолизу и термической инактивации Следствием этого является возможность проведения процесса в течение значительно большего (в сравнении с «Панкреатином») времени, чем достигается существенное увеличение степени расщепления белкового субстрата Как следует из данных табл 5, степень гидролиза, достигаемая при 20 часах гидролиза КСБ, оказывается выше, чем при 6 часах обработки При этом более 70% белкового материала переходит во фракцию в диапазоне молекулярных масс менее 1,4 кД, т е представляет собой свободные аминокислоты и олигопептиды

Таблица 5

Молекулярно-массовое распределение гидролизатов КСБ «Лакпродан 80»

Флавоэнзимом» в количестве 5% по массе сухих веществ _через 6 и 20 часов гидролиза_

№ Диапазон молеку- Относительное распределение, %

лярных масс, кД при продолжительности гидролиза, ч

6 20

1 Более 166 3,6 зд

2 166-28,2 2,2 1,4

3 28,2-11,0 5,1 1,9

4 11,0-4,0 22,7 9,4

5 4,0- 1,4 15,8 13,7

6 Менее 1,4 50,6 70,5

Значение рН реакционной смеси, изначально равное 6,6 (что соответствует собственному значению рН белковых субстратов при их восстановлении водой) снижается на 0,5 единицы в течение первого часа гидролиза и далее не меняется в пределах точности измерения на протяжении всего процесса В результате отсутствия рН-статирования в гидролизате не накапливаются катионы натрия или калия, что облегчает его использование в составе СП, требования к

минеральному составу которых являются весьма жесткими, а также делает более эффективным хроматографическое фракционирование гидролизата

Оптимизация параметра фермент-субстратного соотношения при гидролизе КСБ и КМБ «Флавоэнзимом» показала, что глубина гидролиза растет вплоть до 5% фермента по массе сухих веществ реакционной смеси (табл 6) Дальнейшее увеличение вносимого «Флавоэнзима» нецелесообразно, т к приводит к избыточному накоплению потенциально аллергенных материалов ферментного препарата в гидролизате, а также к удорожанию процесса

Таблица 6

Зависимость ММР гидролизатов КМБ при гидролизе «Флавоэнзимом» от

фермент/субстратного соотношения, продолжительность гидролиза _20 часов, температура 50+1°С_

№ Диапазон молекулярных масс, кД Относительное распределение, % при фермент/субстратном соотношении

0,5% 2,0% 5,0%

1 Более 158 12,0 6,8 9,7

2 158-79,4 1,5 0,7 0,7

3 79,4-28,2 11,2 5,4 1,3

4 28,2-11,2 8,1 3,3 1,7

5 11,2-4,5 10,4 18,0 6,0

6 4,5-1,4 16,6 18,3 12,7

7 Менее 1,4 40,2 47,5 67,9

Отдельно изучена возможность использования двухстадийных схем про-теолиза с последовательной обработкой «Панкреатином» и «Флавоэнзимом» или в обратной последовательности без промежуточной инактивации фермента Результаты (данные не показаны) свидетельствуют о том, что такая обработка позволяет повысить на 10-20% содержание в ФГМБ продуктов глубокого гидролиза белка (молекулярной массой менее 1,4 кД) и одновременно снизить количество высокомолекулярных белковых фракций Тем не менее, их полная элиминация при этом все равно не достигается

В исследуемых препаратах ФГМБ в процессе ФГ «Панкреатином» определяли содержание свободных аминокислот Результаты исследований приведены в табл 7

Как показал анализ представленных экспериментальных данных, накопление свободных аминокислот происходило пропорционально продолжительности ФГ Выявлено, что белки в составе КСБ требуют большего времени для ФГ, что связано, вероятно, с меньшей атакуемостью ферментами ряда глобулярных сывороточных белков (р-лактоглобулин, сывороточный альбумин) в сравнении с казеинами, доминирующими в составе КМБ Вместе с тем, способность пептидов - продуктов гидролиза казеина ингибировать ферментативную реакцию приводит к тому, что процесс протеолиза сывороточных белков оказывается, судя по накоплению аминокислот, более растянутым во времени

В процессе лабораторных исследований на основании анализа остаточной протеолитической активности ферментов установлены оптимальные режимы

инактивации температура 93±2°С с выдержкой 5±0,2 мин

Таблица 7

Накопление свободных аминокислот в процессе ФГ молочных белков при

Аминокислоты, мкмоль/л Белковые субстраты

КМБ КСБ

продолжительность ФГ, ч

0,5 1,5 3,0 5,0 0,5 1,5 3,0 5,0

Триптофан 917 1000 2100 2169 350 400 605 1750

Фенилаланин 1442 2017 4033 4096 244 689 1333 2689

Лейцин 1847 1947 3447 5516 1200 1856 2218 3622

Изолейцин 692 731 1077 1201 686 971 1743 2657

Треонин - 433 556 603 - 500 1200 1575

Метионин 436 564 1107 1176 311 667 800 1489

Лизин 950 1168 2515 2615 920 1218 2619 3220

Валин 500 730 1181 1270 1233 1600 2367 3567

Гистидин - 17 69 75 - - - -

Аргинин - 17 69 75 - - -

Алании 256 319 531 608 967 1133 1233 2267

Серин - 209 280 316 - 216 350 418

Глутаминовая кислота 1250 2333 2600 2671 429 857 1025 1243

Глицин 69 100 115 173 19 114 200 343

Тирозин 688 1121 2421 2516 600 980 1890 3192

Таким образом, исследование в лабораторных масштабах процессов получения ФГМБ в результате гидролиза концентратов молочного белка с разным соотношением казеин/сывороточные белки промышленными ферментными препаратами позволило определить оптимальные условия проведения процесса В случае использования «Панкреатина» оптимальным является концентрация фермента 2% по массе, температура 50±1°С, продолжительность реакции 3 часа, рН оптимум 7,5 (с рН-статированием щелочью или без него) Применение «Флавоэнзима» наиболее эффективно при содержании фермента 5% по массе сухих веществ, температуре 50±ГС, продолжительности реакции до 20 часов, рН оптимуме 6,0 (без рН-статирования) Подобранные условия действия ферментных препаратов использованы далее при получении ФГМБ в промышленных масштабах

Итогом исследований в данном разделе явилась оптимизация технологических режимов ФГ для получения ФГМБ на основе КМБ и КСБ со средней и высокой степенью гидролиза Основные параметры этих процессов и критически важные характеристики получающихся ФГМБ приведены в табл 8

Анализ критически важных характеристик ФГМБ, получающихся при действии «Панкреатина» и «Флавоэнзима» на молочные белки, показал, что они близки для КСБ и КМБ Однако, с учетом существенно большей биологи-

Таблица 8

Технологические характеристики процесса ФГ_

Параметры процесса и ха- КСБ+ «Пан- КМБ+ «Пан- КСБ+ «Фла- КМБ+ «Фла-

рактеристики ФГМБ креатин» креатин» воэнзим» воэнзим»

Массовая доля сухих ве- 5 5 3 3

ществ в растворе, %

Количество фермента от 2 2 5 5

массы субстрата, %

Температура процесса °С 50±1

рН процесса 7,4-7,6* 7,4-7,6* 5,8-6,0 5,8-6,0

Продолжительность про- 3 3 20 20

цесса, ч

Температура инактивации фермента, °С 93±2

Продолжительность инак- 5+0,2

тивации, мин

Мсп,** кД 4,5 3,1 1,8 1,4

АГ 5 Ю-3 1 10"3 1,5 10"3 5 10"4

Примечание * Возможно использование рН-статирования раствором щелочи **Мср- средняя молекулярная масса пептидов

ческой ценности КСБ в сравнении с КМБ, а также того обстоятельства, что ФГМБ на основе концентратов сывороточных белков имеют в целом гораздо менее выраженную горечь в сравнении с гидролизатами КМБ и казеина В этой связи выбор КСБ в качестве основного объекта дальнейших исследований представляется предпочтительным

Глава 5. Изучение характеристик ФГМБ в процессе мембранной обработки Как было показано в предыдущем разделе, в результате ФГ белков коровьего молока (как КМБ, так и КСБ) не удается получить ФГМБ, полностью свободные от остаточных количеств нерасщепленного или частично расщепленного белка (в диапазоне молекулярных масс 10 кД и более), количество которого в отдельных случаях может достигать нескольких процентов при расчете по величине оптической плотности при длине волны 280 нм (см табл 1-6) С учетом жестких требований, предъявляемых к содержанию остаточных количеств нерасщепленных антигенов молока в составе гипоаллергенных СП для питания детей (особенно, страдающих аллергическими заболеваниями), использование полученных ФГМБ непосредственно в составе указанных продуктов не представляется возможным Высокой степени элиминации из продукта макромолекулярных белковых структур можно достичь с использованием методов мембранной обработки гидролизатов

Основными достоинствами мембранных методов обработки является их высокая селективность по высокомолекулярным фракции (ВМФ) с молекулярной массой более 10 кД и возможность длительного многократного использования мембран при высокой производительности процесса При этом наряду с остаточными количествами нерасщепленного белкового субстрата из продукта

удаляются следовые количества жира, бактерии, а также макромолекулярные компоненты используемого ферментного препарата

В табл 9-10 приведены результаты оценки ММР пептидов в ферментативных гидролизатах, полученных из образца КСБ после мембранных обработок Использовали УФ-мембрану с размером пор 10 кД и последующую нано-фильтрацию Исходный гидролизат получен при обработке 2% «Панкреатином» в течение 3 часов и 5% «Флавоэнзимом» в течение 22 часов, соответственно

Таблица 9

ММР пептидов ФГМБ, полученных из образца КСБ,

при гидролизе «Панкреатином» после мембранной обработки

Диапазон мо- Относительное распределение пептидов

лекулярных по молекулярным массам, %

масс, кД исходный УФ УФ+НФ, УФ+НФ,

гидролизат ВМФ НМФ*

Более 166,0 6,5 0 0 0

166,0-28,2 3,6 0 0 0

28,2-11,0 3,6 2,2 3,7 0

11,0-4,0 19,2 16,3 28,0 0

4,0-1,4 14,2 19,5 27,3 9,9

Менее 1,4 52,9 65,0 41,0 90,1

Примечание * НМФ - низкомолекулярная фракция

Анализ полученных результатов показал, что ультрафильтрационная обработка (в тангенциальном потоке при использованием мембран с пропускной способностью по молекулярной массе 10 кД) удаляет из реакционной смеси высокомолекулярные структуры размерами более 11 кД

Последующее НФ-фракционирование приводит к практически полному удалению из образца пептидов с молекулярными массами более 1,4 кД

Таблица 10

ММР пептидов ФГМБ, полученных из образца КСБ, при гидролизе

«Флавоэнзимом» после мембранной обработки

Диапазон мо- Относительное распределение пептидов

лекулярных по молекулярным массам, %

масс, кД исходный УФ УФ+НФ, УФ+НФ,

гидролизат ВМФ НМФ

Более 166,0 3,2 0 0 0

166,0-28,2 1,0 0 0 0

28,2-11,0 0,5 0,3 0,5 0

11,0-4,0 10,0 8,5 17,8 0

4,0-1,4 17,4 15,9 25,5 8,6

Менее 1,4 67,9 75,3 56,2 91,4

Как следует из полученных данных, в составе пептидного фильтрата при НФ более 92% материала представлено свободными аминокислотами и олиго-

пептидами, отсутствуют пептиды, превосходящие по массе 4 кД При этом на-нофильтрационный ретентат (остаток) обогащается «средними» пептидами в диапазоне молекулярных масс 1,4-4,5 кД Особенностью этой фракции является то, что она обладает удовлетворительными органолептическими свойствами (практически отсутствует горечь) и достаточно низкой осмолярностью Тем самым, она имеет хорошие перспективы использования в составе продуктов для энтерального питания и гипоаллергенных продуктов профилактической направленности, где важным показателем качества является вкус, позволяющий больным применять продукты не только через зонд, но и в виде напитка

НМФ, получаемая в результате НФ, обладает, как будет показано ниже, чрезвычайно низкой остаточной АГ и может поэтому использоваться в качестве белкового компонента СП для больных, страдающих тяжелыми и средней тяжести формами аллергических заболеваний Как будет показано в главе 6, она также перспективна для получения ферментативных гидролизатов, модифицированных по аминокислотному составу

В табл 11 приведены результаты определения остаточной АГ ФГМБ, полученных из образца КСБ путем гидролиза «Флавоэнзимом» и последовательных мембранных обработок

Таблица 11

Остаточная АГ гидролизата КСБ «Флавоэнзимом» _и его фильтрационных фракций_

№ Образец АГ

Гидролиз «Панкреатином» Гидролиз «Флавоэнзимом»

1 КСБ 0,382

2 ФГМБ 5 10"3 2 104

3 Фильтрат ФГМБ через УФ мембрану 10 кД 6 10"5 6 10'6

4 ВМФ ФГМБ после НФ УФ-фильтрата 7 10"5 7 106

5 НМФ ФГМБ после НФ УФ-фильтрата 2 10"5 2 Ю"6

Из приведенных результатов можно заключить, что использование мембранных обработок позволяет снизить АГ более чем в 100 ООО раз Такое значение остаточной АГ позволяет использовать подобные гидролизаты в качестве белкового компонента в лечебных продуктах питания для детей, страдающих непереносимостью пищевых белков

Отдельно был рассмотрен вопрос о влиянии повторных УФ-обработок на АГ ФГМБ В табл 12 приведены результаты таких исследований, выполненных на УФ- и СУФ-мембранах с пропускной способностью мембран 10 и 5 кД, соответственно

Полученные результаты позволили установить, что эффективного снижения АГ ФГМБ можно добиться при двух повторных циклах УФ и СУФ, дальнейшие циклы обработки не дают эффекта Для гипоаллергенных продуктов на

основе гидролизатов КСБ предпочтительным является процесс СУФ, так как он позволяет получать гидролизаты с гарантированно сниженной до требуемого уровня АГ

Таблица 12

Влияние кратности УФ и СУФ на АГ гидролизата КСБ «Флавоэнзимом»

№ Число УФ (циклов) АГ

УФ 10 кД СУФ 5 кД

1 Исходный ФГМБ 1 10"3 1 10"3

2 1 цикл 5 10° 2 10'5

3 2 цикл 2 Ю-5 0,9 10"6

4 3 цикл 2,5 Ю"5 110"6

Таким образом, в процессе исследований, осуществленных в данной главе, установлены технологические параметры мембранных обработок для ФГМБ, используемых в энтеральном питании (ФГМБ 1), критической характеристикой которого является ММР, ФГМБ, используемых в лечебном и лечебно-профилактическом питании при пищевой аллергии и непереносимости белков коровьего молока (ФГМБ 2 и ФГМБ 3), для которых критическая характеристика - остаточная АГ белков коровьего молока в составе белкового компонента продукта (не более 1 10"5 и 1 10'4, соответственно) Вид мембранной обработки, основные и критические характеристики упомянутых ФГМБ представлены в табл 13

Таблица 13

Характеристики ФГМБ для СП после мембранной обработки

Образец Белок, фермент Мембранная обработка Характеристики ФГМБ

УФ СУФх2 НФ М со, кД АГ, не более

ФГМБ1 КСБ, «Панкреатин» + + 5,8 1 10"4

ФГМБ 2 То же - + + 5,3 3 10°

ФГМБ 3 КСБ, «Флавоэнзим» + 1,4 1 105

Для направленного регулирования ММР в ФГМБ предложен принцип расчета мембранного фракционирования с учетом различных факторов селективности мембран (УФ, СУФ, НФ) по конкретным диапазонам молекулярных масс, кратности обработки, степени концентрирования и степени диафильтра-ции, требуемого соотношения пептидных фракций, ММР исходного ФГМБ В результате выведены формулы, позволяющие с высокой точностью рассчитывать ММР в ФГМБ, подвергнутых указанным видам мембранных обработок

Глава 6. Исследование закономерностей удаления фенилаланина из ФГМБ с использованием АХр. Получив удовлетворительные данные по исследованию закономерностей фракционирования гидролизатов, полученных из концентратов молочных белков, провели изучение содержания фенилаланина в полученных образцах В дальнейшем для сорбции фенилаланина использовали метод АХр В качестве неподвижной фазы применяли пористые гранулы хими-

чески модифицированного полистирола ХАД-16

Эксперименты проводили как в лабораторных условиях (колонка 2,5x40 см), так и на пилотной установке в условиях опытного производства (колонка 44x100 см) В качестве основного критерия подобия при переходе к пилотной установке принято время элюирования полного объема колонки, которое составило 100 минут Объем наносимого раствора гидролизата составлял не более 12% от объема хроматографической колонки (больший объем приводил к объемной перегрузке) Концентрация исходного гидролизата составляла от 25 до 45% по сухим веществам При больших концентрациях отмечались эффекты неоднородности нанесения материала на колонку и его выпадения в осадок, что резко снижало эффективность разделения При меньших концентрациях наносимого материала падала производительность колонки

Основные технологические параметры хроматографического фракционирования на лабораторной и пилотной колонке приведены в табл 14

Таблица 14

Технологические характеристики препаративной хроматографии

Показатель Лабораторная колонка Пилотная колонка

Размеры, см 2,5x40 44x100

Неподвижная фаза ХАД-16 ХАД-16

Подвижная фаза Дистиллированная Обратноосмотиче-

вода ская вода

Концентрации наносимого ФГМБ, % 25-45 45

Объем наносимого ФГМБ, % от объ-

ема колонки Не более 12 Не более 12

Скорость элюирования 2,5 см^/мин 1,5 л/мин

Продолжительность элюирования полного объема колонки, мин 100 100

Во всех случаях для нанесения на колонку ХАД-16 использовали низкомолекулярные фракции, полученные в результате мембранной обработки (препараты предварительно высушивали либо в лаборатории методом лиофилиза-ции, либо в условиях производства методом распылительной сушки) Перед нанесением на хроматографическую колонку гидролизат растворяли в дистиллированной или обратноосмотической воде и очищали микрофильтрацией

В процессе АХр в хроматографических фракциях определяли оптическую плотность, массовую долю сухих веществ и отношение этих показателей, являющееся качественным критерием присутствия фенилаланина в образце Предварительный скрининг показал недостаточную эффективность удаления фенилаланина из гидролизатов КМБ и КСБ, полученных под действием «Панкреатина» (данные не показаны) Поэтому основная часть экспериментов, как в лабораторных, так и в промышленных масштабах, была проведена с использованием гидролизатов КСБ, полученных с использованием «Флавоэнзима»

Результаты хроматографической очистки гидролизатов белков коровьего молока хорошо воспроизводились при переходе от лабораторной колонки к полупромышленной пилотной для всех использовавшихся препаратов Это свиде-

тельствует о корректности выбора общей продолжительности элюирования препарата в качестве критерия подобия хроматографического процесса в целом В табл 15 приведены результаты хроматографического фракционирования гидролизата КСБ, полученного путем обработки «Флавоэнзимом» и промышленной СУФ через мембрану с размером пор 5 кД

Таблица 15

АХр ФГМБ (гидролиз КСБ «Флавоэнзимом» + СУФ 5 кД) на колонке ХАД-16 (2,5x40 см)___

№ Образец Объем выхода V, мл D280 RI, % D280/RI, % Содержание в % от нанесенного Phe, %

VXÜ280, VxRI, %

1 Фракция 1 30 0,22 1,4 0,16 0,17 4,62 0,006

2 Фракция 2 30 1,34 6,8 0,20 1,02 22,42 0,027

3 Фракция 3 30 2,00 6,0 0,33 1,532 19,78 0,052

4 Фракция 4 30 2,10 3,9 0,54 1,60 12,86 0,207

5 Фракция 5 30 2,37 2,0 1,19 1,81 6,59 0,532

6 Фракция 6 30 2,53 1,2 2,11 1,93 3,96 1,300

7 Объединенные фракции 1-4 120 1,42 4,5 0,32 4,12 59,3 0,093

8 Объединенные фракции 1-3 90 1,19 4,7 0,25 2,73 46,3 0,036

9 Исходный ГКСБ 20 196 45,5 4,31 100 100 2,09

Примечание Щ, % - массовая доля сухих веществ, определенная рефрактометрическим методом, УхШ, % - масса сухих веществ во фракции в граммах, рассчитанная по концентрации сухих веществ и объему фракции, Ух028о - количество оптических единиц (280 нм) во фракции, характеризующее количество ароматических аминокислот, Б28о/М, % - параметр, характеризующий степень удаления ароматических аминокислот из образца, РЬе, % - массовая доля фени-лаланина в пересчете на белковый эквивалент

Из приведенных в таблице результатов видно, что если отбирать в качестве продукта сумму фракций 1-3, то выход по сухим веществам составит 46,3% при содержании фенилаланина в объединенной фракции 0,036% по массе сухого вещества Препарат с таким содержанием фенилаланина удовлетворяет современным требованиям к качеству белкового компонента лечебных продуктов питания со сниженным содержанием фенилаланина Если продолжать собирать продукт по мере элюирования, то будет происходить резкое увеличение содержания фенилаланина в объединенной фракции Поэтому чрезвычайно важной является стабильная работа колонки и элементов хроматографической системы (насосы, коллектор и т д) для точного отбора фракций с целью получения препарата гарантированного качества

Значительного повышения эффективности процесса сорбции и дальнейшего снижения уровня фенилаланина можно достичь при нанесении на колонку НМФ ФГМБ, полученных путем НФ Пример такого фракционирования приве-

денвтабл 16

Таблица 16

АХр НМФ, получаемой при НФ ФГМБ (гидролиз КСБ «Флавоэнзимом» + _СУФ 5 кД) на колонке ХАД-16 (2,5x40 см)_

№ Образец Объем выхода V, мл D280 RI, % D28o/ % RI Содержание в % от нанесенного Phe, %

v*d280, VxRI, %

1 Фракция 1 30 0,076 1,8 0,042 0,067 12,6 0,002

2 Фракция 2 30 0,207 4,6 0,045 0,182 32,1 0,002

3 Фракция 3 30 0,259 3,1 0,084 0,227 21,6 0,001

4 Фракция 4 30 0,392 1,3 0,302 0,344 9,1 0,011

5 Фракция 5 30 0,580 0,7 0,829 0,509 4,9 0,072

6 Фракция 6 30 0,718 0,4 1,795 0,630 2,8 0,379

7 Фракция 7 30 0,753 0,1 7,53 0,661 0,7 1,754

8 Фракция 8 30 0,682 0,1 6,82 0,598 0,7 6,626

9 Объединенные фракции 1-3 90 0,181 3,2 0,057 0,476 66,3 0,002

10 Объединенные фракции 1-4 120 0,233 2,7 0,086 0,820 75,4 0,003

11 Объединенные фракции 1-5 150 0,303 2,3 0,132 1,33 80,3 0,007

12 Исходный ГКСБ 20 171 21,5 7,95 100 100 5,95

Установлено, что удаление фенилаланина из гидролизата происходит намного более эффективно, чем при очистке гидролизата, подвергнутого только УФ Так, при отборе фракций 1-4, дающем выход процесса 75% по сухим веществам, содержание фенилаланина в пептидной смеси не превышает 0,003%, что находится близко к пределу его аналитического детектирования методом ВЭЖХ и сопоставимо с остаточными количествами этой аминокислоты, выявляемыми в виде артефакта в коммерческих смесях кристаллических 1-аминокислот

Таким образом, использование НМФ при НФ позволяет повысить выход ФГМБ, свободного от фенилаланина, до 70-80% против 50-60%, характерных для очистки ультрафильтратов соответствующих гидролизатов При этом существенно, что эффективность использования белкового субстрата в целом при введении стадии НФ еще более возрастает до 85-90% с учетом того, что получаемая при НФ ВМФ также находит применение в качестве белкового компонента целого ряда СП питания лечебного и профилактического назначения Все вышеизложенное подтверждает целесообразность проведения очистки от фенилаланина ФГМБ, фракционированных с применением НФ, что гарантирует снижение содержания фенилаланина до величины менее чем 0,01% в пересчете на белковый эквивалент

Глава 7. Разработка параметров технологий ФГМБ. Основной задачей при получении ФГМБ заданного состава является полный анализ возможностей

целенаправленного изменения его критически важных показателей под влиянием различных технологических факторов

В табл 17 представлен перечень показателей ФГМБ, изменение которых возможно в тех или иных процессах

Таблица 17

Показатели ФГМБ, изменяемые при технологической обработке

Показатель ФГМБ Технологический процесс

ММР ФГ, УФ, СУФ, НФ, АХр

АГ ФГ, УФ, СУФ, НФ, АХр

Аминокислотный состав НФ,

Фенилаланин АХр

Минеральные вещества УФ, СУФ, НФ, АХр, электродиализ

Сухие вещества НФ, ОО, ВВ*,РС**

Лактоза УФ, СУФ

Примечание *ВВ - вакуум-выпаривание,** РС - распылительная сушка

Параметры процессов ВВ, пастеризации и РС оптимизированы непосредственно в промышленных условиях

При изучении параметров сгущения выявлена оптимальная концентрация сухих веществ 45-50% для всех видов ФГМБ Установлен оптимальный режим пастеризации концентратов ФГМБ после ВВ 80-85°С с выдержкой 2+0,2 мин

Основным критерием при выборе температурных режимов сушки являлось содержание влаги в готовом продукте С целью выбора оптимальных параметров процесса сушки ФГМБ исследовали три температурных режима входящего и выходящего из сушильной башни воздуха, соответственно 180+1 и 80+ГС, 170+1 и 75+ГС, 160+1 и 70+ГС Изменение массовой доли влаги в продукте, полученном при указанных температурных режимах сушки представлено в табл 18

Таблица 18

Массовая доля влаги при различных температурах сушки_

Образец Массовая доля влаги при температуре воздуха, (1ВХ-1ВЬ|Х)

180-80°С 175-75°С 170-70°С

ФГМБ 2,5±0,20 1 3,6±0,25 4,8±0,33

Из приведенных данных видно, что сушку ФГМБ наиболее целесообразно проводить при температуре входящего воздуха не менее 175°С и выходящего 75°С В этом случае влажность продукта соответствует предъявляемым требованиям (не более 4%)

На рис 2 представлена принципиальная технологическая схема получения ФГМБ, в которой показаны технологические процессы во взаимосвязи

Всего основных технологических процессов - 8 Каждый процесс имеет свои характеристики, которые представлены в табл 19

Рис 2 Принципиальная технологическая схема получения сухих ФГМБ с регулируемым составом и свойствами Примечание МБ- молочный белок

Таблица 19

Основные характеристики технологических процессов_

№ - технологический процесс Основные характеристики процесса

1 -ФГ Характеристики приведены в таблице 8

2-УФ W=45±1°C, Р=0,5 МПа, СВ(,,=4±Г/о, t0X„<4°C

3 -СУФ tnD=40±l°C, Р= 0,7 МПа, CB(b=4±l%, t0XJ1<4°C

4-НФ tnD=30±l°C, Р=3,0 МПа, СВвмс=18%, СВнмс=1,0±0,5%, 10ХЛ<4°С

5-00 tnD=30±l°C, Р= 4 МПа, СВвмс=18%, 10ХЛ<4°С

6 - ВВ с пастеризацией СВ после сгущения 45-50%, температура пастеризации 80-85 °С с выдержкой 2+0,2 мин

7-АХр Характеристики приведены в табл 14

8-PC Температура на входе 175+ГС, на выходе 80+ГС

Обозначения 1пр- температура процесса, °С, Р - давление фильтрации, МПа, СВф - массовая доля сухи веществ в фильтрате, %, СВВмс - массовая доля сухих вещества в концентрате ВМС, %, СВнмс - массовая доля сухих веществ в

фильтрате НМС, %, ^¡ц,- температура охлаждения рабочего раствора, °С

В табл 20 приведены частные технологические цепочки, которые заключаются в определенной последовательности процессов при производстве различных видов ФГМБ

Таблица 20

Последовательности технологических процессов при получении ФГМБ

Вид ФГМБ Последовательности технологических процессов

ФГМБ 1 1 ->2 -»4 6 8

ФГМБ 2 1 -)3 4 ->6->8

ФГМБ 3* 2 1 ->3->5->6->8

ФГМБ 4 1-»3->4 ->5->6->7->5->6 ->8

Примечание *Для получения безлактозных ФГМБ 3 вводится дополнительный процесс УФ

Используя принципиальную технологическую схему (рис 2) и данные, представленные в табл 19-20, а также учитывая влияние процессов на изменение основных характеристик (табл 17), можно резюмировать, что установлены основные технологические закономерности получения ФГМБ с заданным составом и свойствами

В целях подтверждения результатов исследования частные технологии четырех ФГМБ апробированы в промышленных условиях Полученные результаты по критическим характеристикам (ММР, АГ, фенилаланин) полностью соответствовали таковым, полученным в лабораторных условиях Это позволило разработать технологические регламенты, которые используются в настоящее время при производстве промышленных партий сухих ФГМБ

В связи с тем, что ФГМБ имеют свои критические характеристики (ММР, АГ, массовая доля фенилаланина), целесообразно выпускать ФГМБ в сухом виде, что позволяет подтвердить их гарантированное качество путем лабораторных исследований с учетом утвержденных методик и действующих стандартов Это позволяет в дальнейшем практически исключить риски производства СП, не соответствующих требованиям действующей технической документации

Глава 8. Разработка блочно-модульной схемы получения ФГМБ н СП на их основе. Построение технологий по блочно-модульному принципу позволяет сформировать производственный цикл по оптимальному варианту, обеспечить рациональные связи между оборудованием, аппаратами и структурными производственными отделениями Блочно-модульные схемы показывают согласованность течения технологических процессов, а также учитывают многообразие и специфику технологий В табл 21 приведен перечень самостоятельных технологических блоков, используемых в технологии СП на основе ФГМБ Взаимосвязь структурных блоков в технологии СП на основе ФГМБ приведена в диссертации

Таблица 21

Перечень технологических блоков, используемых в технологии СП на основе ФГМБ

Блок Характеристики технологических операций

1 Приемка молочного сырья, восстановление сухих молочных и белковых компонентов, очистка, пастеризация, охлаждение и промежуточное хранение

2 Приемка растительных масел, получение масляно-витаминной смеси

3 Приготовление белково-углеводного раствора, нормализация и пастеризация смеси

4 УФ и ДФ*, пастеризация, охлаждение и промежуточное хранение

5 ФГ, инактивация фермента, охлаждение, промежуточное хранение

6 СУФ с ДФ, охлаждение, промежуточное хранение

7 НФ с ДФ, охлаждение, промежуточное хранение

8 Обратноосмотическая обработка молочного сырья, охлаждение, промежуточное хранение

9 АХр, пастеризация, охлаждение, промежуточное хранение

10 Приготовление нормализованной смеси, пастеризация, гомогенизация и ее промежуточное хранение

11 ВВ, пастеризация и РС

12 Электродиализная деминерализация, охлаждение, промежуточное хранение

13 Сухое смешивание

14 Расфасовывание готового продукта в потребительскую тару

15 Асептический розлив

Примечание *ДФ - диафильтрация

В табл 21 показаны четыре вида гидролизатов, которые по своим критическим характеристикам принципиально отличаются друг от друга, что позво-

лило создать широкий ассортимент СП на их основе

Таблица 21

__Классификация ФГМБ_

Виды Показатели

ФГМБ ММР (основная снижение АГ, массовая доля фенила-

фракция), кД тыс крат ланина (не более), %

5-6 менее 1-2 1-100 100-1000 и более 0,01

ФМГБ 1 ++ - - - -

ФМГБ2 + - ++ - -

ФМГБ 3 - + - ++ -

ФМГБ 4 - + - - ++

Примечание ++ основная характеристика ФГМБ, определяющая направления

его использования, + значимая характеристика, - незначимая характеристика

На рис 3 приведена функциональная классификация СП на основе ФГМБ

Специализированные продукты

Энтеральное питание Питание детей первого года жизни с аллергией к белкам Питание больных с ФКУ

Продукты для больных с нарушением деятельности ЖКТ (ФГМБ 1) Продукты для профилактики пищевых аллергий (ФГМБ 2) Продукты для питания детей до года (ФГМБ 4)

Продукты для боль- ных туберкулезом (ФГМБ 1) Продукты для лече-- ния пищевых аллергий (ФГМБ 3) Продукты для питания детей старше года (ФГМБ 4)

Продукты для больных онкологическими заболеваниями (ФГМБ 1)

Рис 3 Классификация СП на основе ФГМБ

На основании предложенной схемы блочно-модульного типа разработаны частные технологии СП, предусматривающие два основных подхода предварительное растворение ФГМБ с приготовлением нормализованной смеси, сгущением, пастеризацией и сушкой или сухое смешивание с безбелковой основой Частные технологии СП более подробно освещены в диссертации

Глава 9. Практическая реализация результатов исследований. На основании анализа отечественной и зарубежной научной литературы и патентной информации, а также результатов собственных исследований научно обоснованы технологии, заключающиеся в направленном ФГ, использовании различных мембранных процессов, а также метода АХр для получения ФГМБ с направленно регулируемыми составом и свойствами Разработана концепция создания широкой гаммы СП на основе использования блочно-модульного принципа построения технологий, предложена их функциональная классификация

Основные разработки, полученные при выполнении работы, использованы при проектировании, строительстве и пуске в эксплуатацию единственного в России предприятия по производству специализированных продуктов для питания детей и взрослых, в т ч на основе ФГМБ

На предприятии полностью реализован блочно-модульный принцип построения технологической схемы с использованием таких процессов, как ФГ, УФ, СУФ, НФ, 00, электродиализ, АХр и др технологические процессы, обеспечивающие получение конечного продукта, как в сухом, так и в жидком сте-

рилизованном виде В настоящее время на предприятии освоено промышленное производство более 40 наименований продуктов, а в 2008 г запланировано начало производства более 20 наименований новых продуктов В 2006 году предприятием выпущено 1562 тонн СП, в том числе 20 тонн на основе ФГМБ, а за 9 месяцев 2007 года уже выпущено 1603 тонн СП, в том числе 41 тонна на основе ФГМБ Относительно небольшая доля СП на основе ФГМБ в общем объеме производства связана с их узкой специальной направленностью Однако, следует подчеркнуть высокую социальную значимость этих продуктов, так как они часто назначаются больным по жизненным показаниям СП на основе ФГМБ успешно прошли апробацию в ряде ведущих клинических центров, включая НИИ скорой помощи им Склифосовского, Институт педиатрии РАМН, Клиника лечебного питания Института питания РАМН и др

ВЫВОДЫ

1 Научно обоснованы технологии, заключающиеся в направленном ФГ, использовании различных мембранных процессов, а также метода АХр для получения ФГМБ с направленно регулируемыми составом и свойствами Разработана концепция создания широкой гаммы ФГМБ и СП на основе использования блочно-модульного принципа построения технологий, предложена их функциональная классификация

2 Определены оптимальные условия получения ФГМБ с использованием промышленных ферментных препаратов При использовании «Панкреатина» максимальная глубина гидролиза молочных белков достигается при 3 часах ферментной обработки, температуре 50±1°С, концентрации ферментного препарата 2% по массе сухих веществ Поддержание оптимального значения рН 7,5±0,1 требует использования рН-статирования раствором щелочи Применение «Флавоэнзима» позволяет достичь большей, в сравнении с «Панкреатином», глубины гидролиза при продолжительности реакции до 20 часов, температуре 50±1°С, концентрации ферментного препарата 5% по массе сухих веществ Оптимум действия «Флавоэнзима» составил рН 6,0±0,2, что не требует использования рН-статирования

3 Методом эксклюзионной хроматографии определено ММР пептидов в динамике ФГ и в конечных ФГМБ Показано, что до 52% белкового материала в случае обработки «Панкреатином» и до 70% «Флавоэнзимом» представлено короткими пептидами и свободными аминокислотами в диапазоне молекулярных масс менее 1,4 кД, что отвечает средней и глубокой степени гидролиза, соответственно

4 Установлено, что даже при максимальной длительности гидролиза полной элиминации макромолекулярных белковых структур из состава ФГМБ не происходит Иммуноферментным методом определена остаточная АГ в динамике ФГ и в конечных ФГМБ В результате ФГ молочных белков содержание антигенов коровьего молока снижается в 103-104 раз Это недостаточно для непосредственного использования получаемых гидролизатов в

гипоаллергенных продуктах, что определяет необходимость дополнительной очистки ФГМБ

5 Изучены условия и параметры очистки ФГМБ с использованием процессов УФ и СУФ (мембраны с размерами пор 10 и 5 кД, соответственно) В результате очистки ФГМБ этими методами достигается полная элиминация остаточных количеств белковых и полипептидных структур с молекулярными массами более 10 кД При использовании метода УФ достигается снижение АГ гидролизатов до уровня 5 10'5 от АГ исходного белка, а при использовании СУФ доказана целесообразность повторной обработки глубоких гидролизатов КСБ, что впервые позволило снизить АГ до 110"6 и более, то есть до величины, характерной для глубоких ферментативных гидролизатов казеина Данные ФГМБ могут использоваться в качестве белковой основы лечебных гипоаллергенных продуктов

6 Показана эффективность использования НФ технологии для выделения и концентрирования из неглубоких гидролизатов КСБ фракции пептидов с Мср=4-6 кД и ее частичной деминерализации Полученные таким путем ФГМБ характеризуются низкой осмолярностью, хорошими органолепти-ческими свойствами, растворимостью и используются при производстве продуктов энтерального питания, а также гипоаллергенных смесей лечебно-профилактической направленности

7 Доказана перспективность использования НФ для фракционирования глубоких гидролизатов КСБ с целью получения НМФ и ВМФ фракций, из которых первая более чем на 92% представлена свободными аминокислотами и олигопептидами, а вторая обогащена фракцией «средних пептидов» в диапазоне молекулярных масс 1,4-10 кД Первая фракция характеризуется АГ менее 1 10"6, что позволяет ее использовать в продуктах для детей больных тяжелыми и средней тяжести аллергическими заболеваниями Вторая фракция, обладающая низкой осмолярностью и приемлемыми ор-ганолептическим свойствами, может послужить белковой основой СП, предназначенных для энтерального питания больных с нарушениями функции пищеварения и для гипоаллергенных СП лечебно-профилактической направленности Предложен принцип расчета мембранного фракционирования с учетом различных факторов (ММР исходного ФГМБ, селективность мембран, степень концентрирования) для получения ФГМБ с направленно регулируемым пептидным составом

8 Разработана технология ФГМБ со сниженным содержанием фенилалани-на, предназначенных для использования в питании больных ФКУ Ферментативные гидролизаты КСБ фракционировали на колонках с адсорбентом ХАД-16 Показано, что наибольшая эффективность очистки от фени-лаланина достигается при использовании в качестве сырья НМФ, полученной при НФ глубокого гидролизата КСБ Содержание фенилаланина в получаемом продукте гарантированно не превышает 0,01% по массе белкового эквивалента, что сопоставимо с аналогичной характеристикой смесей кристаллических 1-аминокислот При этом выход продукта составляет более 80% по сухим веществам

9 При переходе к промышленным масштабам признано целесообразным использовать при производстве СП лечебной и лечебно-профилактической направленности ФГМБ на основе КСБ, как имеющих более высокую биологическую ценность, сбалансированный минеральный состав и лучшие органолептические свойства в сравнении с аналогичными гидролизатами КМБ и глубокими гидролизатами казеина

10 На основе полученного экспериментального материала разработаны промышленные технологии различных ФГМБ с направленно регулируемым составом и свойствами В производственных условиях оптимизированы процессы ФГ, УФ, СУФ, НФ, АХр, 00, ВВ, пастеризации и сушки Показано, что при производстве СП в технологическом процессе целесообразно использовать сухие ФГМБ гарантированного качества Разработана принципиальная блочно-модульная схема, состоящая из 15 самостоятельных технологических блоков для получения ФГМБ и СП с их использованием Данная схема была впервые внедрена на базе предприятия по производству специализированных и лечебных продуктов в г Истра Московской области, что позволило освоить промышленное производство широкой гаммы СП с 2003 года Имеющиеся производственные мощности позволяют полностью удовлетворить потребности Российской Федерации в продуктах на основе ФГМБ, которые показали свою высокую клиническую эффективность

По материалам диссертации опубликованы следующие основные работы:

Монографии

1 Круглик В И Научные и практические аспекты создания продуктов для детского питания / В И Круглик, Г Ю Сажинов - Кемерово Кузбассвузиздат, 2005 - 195 с

2 Круглик В И Теория и практика реализации технологий специализированных продуктов на основе ферментативных гидролизатов молочных белков -М Университеты России, 2007 - 220 с

Статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ

3 Питание велосипедистов в период тренировочных сборов и соревнований / К А Коровников, В С Баева, Полесный, С А Фурсова, В В Чужакова, В И Круглик // Вопросы питания - 1988 - №5 - С 40-43

4 Пищевая сенсибилизация морских свинок ферментативными гидролизатами белка молочной сыворотки /ИВ Гмошинский, В И Круглик, В К Мазо и др // Вопросы питания - 1989 - №6 - С 27-32

5 Крашенинин П Ф Сухие концентраты и гидролизаты молочных белков /

П Ф Крашенинин, Г Ю Сажинов, В И Круглик // Молочная промышленность -1993 -№3-С 4

6 Современные продукты питания для беременных и кормящих матерей // П Ф Крашенинин, В И Круглик, JIВ Соломадина, О В Георгиева // Вопросы питания - 1993 - №4 - С 28-31

7 Использование смесей на основе гидролизатов белка у детей с множественной пищевой непереносимостью / Е А Рославцева, Т Э Боровик, К С Ладо-до, Н Н Семенова, В И Круглик, ГЮ Сажинов // Педиатрия - 1994 - №1 - С 70-73

8 Технологические аспекты производства молочных продуктов с низкими аллергенными свойствами и гипоаллергенных продуктов / Н Г Шацкая, П Ф Крашенинин, Г Ю Сажинов, В И Круглик // Вопросы питания - 1994 -№1-2-С 34-36

9 Специализированные продукты для питания детей, больных муковисци-дозом / JIВ Соломадина, В И Круглик, К С Ладодо, Т Э Боровик, Е А Рославцева, Н Н Семенова, Н И Капранов, Н Ю Каширская // Вопросы питания -1995 -№2-С 17-20

10 Таурин в составе нового сухого молочного продукта «Фемилак 2» для коррекции питания кормящих матерей //OB Георгиева, В И Круглик, Л В Недоспасова, В А Цыряпкин // Вопросы питания - 1995 - №2 - С 33-35

11 Соломадина Л В Новый специализированный молочный продукт для питания лактирующих женщин // Л В Соломадина, В И Круглик // Вопросы питания- 1995 -№5-С 37-38

12 Сажинов ГЮ Новые технологии в производстве перспективных продуктов детского питания / Г Ю Сажинов, В И Круглик, Л В Соломадина // Вопросы питания - 1996 - №5 - С 41-44

13 Сажинов ГЮ Новые продукты для детского питания / ГЮ Сажинов, В И Круглик, Л В Соломадина // Пищевая промышленность - 1996- №9- С 14

14 Низколактозный молочный продукт / ГЮ Сажинов, В И Круглик, Л В Соломадина, К С Ладодо, В П Зиматова И Пищевая промышленность -1997 -№6-С 31

15 Сравнительная оценка использования специализированных продуктов «Тетрафен» и «Фенил-фри» в дитетотерапии детей, больных фенилкетонурией / Т В Бушуева, О А Вржесинская, В М Коденцова, Е П Рыбакова, С Н Денисова, Н А Бекетова, А Г Таранова, О Г Переверзева, Л А Харитончик, Н В Ко-пылова, А Д Байков, В А Мелехина, Л В Соломадина, В И Круглик // Вопросы питания - 1998 - №2 - 7-18

16 Энтеральное питание в комплексной терапии и профилактике заболеваний / Т С Попова, А Е Шестопалов, Г Ю Сажинов, В И Круглик // Вопросы питания - 2004 - №3 - С 7-11

17 Пылеунос в распылительных сушильных установках со встроенным псевдоожиженным слоем / В.Д Харитонов, И В Зубков, А И Крылов, В И Круглик // Молочная промышленность - 2005 - №7 - С 56-57

18 Круглик В И Исследование кинетики ферментативного гидролиза натив-

ных молочных белков // Сыроделие и маслоделие - 2007 - № 5 - С 35-36

19 Круглик В И. Физико-химический состав гидролизатов молочных белков при дополнительной мембранной обработке // Молочная промышленность -2007 -№11 - С 51-52

20 Круглик В И Антигенные структуры нативных молочных белков и свободных аминокислот при ферментативном гидролизе // Молочная промышленность - 2007 - №12,-С 40-42

Сборники научных трудов институтов

21 Чагаровский А П Изучение структуры и свойств ультрафильтрационных мембран второго поколения // Труды ВНИКМИ - 1987 - С 91-97

22 Крашенинин ПФ Молочно-белковые концентраты - ценный компонент продуктов детского и диетического питания / П Ф Крашенинин, В И Круглик// Совершенствование технологии и улучшение показателей молочных продуктов детского и диетического питания Сборник научных трудов - М, 1988 - С 1721

23 Круглик В И Исследование физико-химических показателей и дисперсности жировой фазы ультра- и диафильтрационных концентратов молока / В И Круглик, В В Ушаков, Е И Черепкова // Совершенствование технологии и улучшение показателей молочных продуктов детского и диетического питания Сборник научных трудов - М, 1988 - С 173-177

24 Продукты энтерального питания на молочной основе / ГЮ Сажинов, В Г Высоцкий, В И Круглик, П Ф Крашенинин, JIА Сажинова // Обзорная информация Серия «Молочная промышленность» - М АгроНИИТЭИММП, 1989 - 22 С

25 Медико-биологические и технологические аспекты создания пищевых модулей / П Ф Крашенинин, Г Ю Сажинов, В Г Высоцкий, В И Круглик // Сборник научных трудов ВНИКМИ - М, 1990 - С 25-38

26 Использование сывороточных белков при производстве хлебобулочных изделий / Т Н Чекулаева, В Г Байков, Т Б Цыганова, В И Круглик // Вопросы производства пищевых продуктов и организация питания населения- Сборник научных трудов - Кемерово КемТИПП, 1991 - С 155-160

27 Круглик В И Разработка технологии гидролизатов молочных белков направленного химического состава и оценка их качества / В И Круглик, Г Ю Сажинов // Получение свойств и применение мелочно-белковых и растительных концентратов Сборник научных трудов - М ВНИКМИ, 1991 - С 106

28 Орлова Е В Изучение возможности ультрафильтрации сливок /ЕВ Орлова, В И Круглик, Ф А Вышемирский // Повышение эффективности маслоделия Сборник научных трудов ВНИИМС.- Выпуск 57 - Углич, 1992 - С 68-78

29 Масляны особенности физической структуры, пищевая и биологическая ценность /ЕВ Орлова, Ф А Вышемирский, В И Круглик, О В Лепилкина // Эффективность производства и качество сливочного масла. Сборник научных трудов ВНИИМС - Выпуск 59 - Углич, 1994 - С 52-63

30 Круглик В И Молекулярно-массовое распределение пептидов в глубоких

гидролизатах молочных белков // Продукты питания и рациональное использование сырьевых ресурсов Сборник научных работ - Выпуск 14 - Кемерово КемТИПП, 2007 - С 128-129

31 Круглик В И Использование промышленной хроматографии для сорбции фенилаланина из ферментативных гидролизатов молочных белков // Продукты питания и рациональное использование сырьевых ресурсов Сборник научных работ - Выпуск 14 - Кемерово КемТИПП, 2007 - С 130-132

32 Круглик В И Использование селективной ультрафильтрации в технологии ферментативных гидролизатов // Продукты питания и рациональное использование сырьевых ресурсов сборник научных работ - Выпуск 14 - Кемерово КемТИПП, 2007 - С 133-135

Труды Международной молочной федерации

33 Producing milk protein hydrolysates and evaluating their hypoakkergenous properties /VI Kruglik, V К Mazo, IN Marocco, V V Krzhechkovskaya, I V Gmoshinsky, G Y Sazhinov // Brief Communications and Abstracts of 23 International Dairy Congress - 1990 -VI.- №344 - Montreal, October 8-12 - P 185

34 Comparative study of the biological value of native milk proteins and their hy-drolisates / G Y Sazhinov, A M Saphronova, A S Vtokko, V I. Kruglik // Brief Communications and Abstracts of 23 International Dairy Congress - 1990 -VI-№543 - Montreal, Oktober 8-12 - P 299

35. Obtaining milk protein hydrolysates with present peptide profile / P Ph Krash-enmin, VI Kruglik, G Y Sazhinov // Brief Communications and Abstracts of 23 International Dairy Congress.- 1990 - V.l 1 - №667 - Montreal, October 8-12 - P 353

36 New dry mixtures for enteral nutrition / V G Visotsky, T D Yatsushina, VI Kruglik, G Y Sazhinov, S A Fursova, V V Chumakova // Bnef Communications and Abstracts of 23 international Dairy Congress - 1990 - V 11 - №797 - Montreal, October 8-12-P 420

37 Vyshemirskyj F.A Ultrafiltration of cream for production of butter and its analogues / F A Vyshemirskyj, E V Orlova, VI Kruglik // Protein and fat globule modification by heat Homogenization and other technological means for quality diary products - IDF seminar - Munich, 1992 - P 446-449

Материалы конференций, конгрессов, симпозиумов, семинаров

38 Чагаровский А П Влияние температуры и активной кислотности на мас-соперенос минеральных веществ через мембрану при ульрафильтрации молока / А П Чагаровский, В И Круглик, В П. Чагаровский // Тезисы докладов первой республиканской конференции по мембранам и мембранной технологии - Киев, 1987-С 87-89

39 Чагаровский АП Разработка технологии молочных продуктов второго поколения на основе ультрафильтрации / А П Чагаровский, В И Круглик, M А Гришин // Тезисы докладов первой республиканской конференции по мембранам и мембранной технологии - Киев, 1987 - С 91-92

40 Каламкарова О M Сравнительное изучение биологической ценности мо-

лочных белков, полученных с применением ультра- и диафильтрации / ОМ Каламкарова, В И Круглик, Т А Яцышина // Биотехнологические и биотехнические процессы в мясной и молочной промышленности Тезисы докладов Всесоюзной конференции - М, 1987 - С 43

41 Сравнительное изучение биологической ценности молочных белков, полученных с применением ультра- и диафильтрации /ТА Яцышина, В И Круг-лик, О М Каламкарова, В Г Круглик // Современная технология сыроделия и безотходная переработка молока Тезисы Всесоюзной конференции - Ереван, 1988-С 357-358

42 Липатов НН Использование молочнобелковых концентратов, полученных ультра- и диафильтрацией в производстве вареных колбас / Н Н Липатов, А П Чагаровский, В И Круглик //Пути повышения технологических процессов и оборудования в отраслях агропромышленного комплекса Тезисы докладов Всесоюзной научно-технической конференции - М, 1988 - С 30

43 Разработка технологии модульных белков для обогащения мясных и молочных продуктов / П Ф Крашенинин, В И Сергеев, В Г Высоцкий, В И Круглик, // Разработка процессов получения комбинированных продуктов питания (медико-биологические аспекты, технология, аппаратурное оформление, оптимизация) Тезисы докладов третьей Всесоюзной научно-технической конференции - М, 1988 - С 101-104

44 Разработка технологии белка сухого молочного к/с / А П Чагаровский, В И Круглик, М А Гришин, П Ф Крашенинин // Разработка процессов получения комбинированных продуктов питания (медико-биологические аспекты, технология, аппаратурное оформление, оптимизация) Тезисы докладов третьей Всесоюзной научно-технической конференции - М , 1988 - С 226-227

45 Круглик В И Экспериментальное изучение биологической ценности молочных белков с различным соотношением казеина и сывороточных белков // Тезисы докладов IV Национального симпозиума по питанию и гастроэнтерологии - София, 1988 - С 17

46 Круглик В И Разработка и клинические испытания новых сухих сбалансированных продуктов «Унипит» для полного восстановительного питания / В И Круглик, О М Каламкарова // Тезисы докладов IV Национального симпозиума по питанию и гастроэнтерологии - София, 1988 - С 30

47 Витолло А С Изучение биологической ценности и усвояемости молочного белка и его гидролизатов /АС Витолло, А М Сафронова, В И Круглик II Пути развития науки и техники в мясной и молочной промышленности Тезисы докладов Всесоюзной конференции - Углич, 1988 - С 136

48 Влияние фракционного состава и степени гидролиза на биологическую ценность и усвояемость молочных белков / А М Сафронова, А С Витолло, В И Круглик, Г Ю Сажинов // Актуальные проблемы переработки молока и производства молочных продуктов Тезисы докладов Всесоюзного научно-технического симпозиума - Вологда, 1989 - С 167-168

49 Использование процессов ферментативного гидролиза и ультрафильтрации для направленного изменения пептидного состава белковых гидролизатов / В И Круглик, С Н Зорин, Г Ю Сажинов // Актуальные проблемы переработки

молока и производства молочных продуктов Тезисы докладов Всесоюзного научно-технического симпозиума - Вологда, 1989 - С 171

50 Разработка и клинические испытания нового сухого сбалансированного безлактозного продукта / В И Круглик, Т Э Боровик, Н И Семенова, Л А Са-жинова // Актуальные проблемы переработки молока и производства молочных продуктов Тезисы докладов Всесоюзного научно-технического симпозиума -Вологда, 1989 - С 172

51 Круглик В И. Изменение минерального состава молочного сырья в процессе ультра- и диафильтрации / В И Круглик, Л А Сажинова // Актуальные проблемы переработки молока и производства молочных продуктов Тезисы докладов Всесоюзного научно-технического симпозиума - Вологда, 1989 - С 172-173

52 Разработка технологий сухих концентратов молочных белков, их гидро-лизатов, а также лечебных продуктов на их основе / В И Круглик, С А Фурсова, В В Чумакова, Т А Яцышина, Г Ю Сажинов // Ресурсосберегающие технологии переработки продуктов животноводства- Тезисы докладов научно-практической конференции - Минск, 1989 - С 75

53 Получение гидролизатов молочных белков, обладающих гипоаллерген-ными свойствами / В И Круглик, В К Мазо, И Н Марокко, В В Кржечковская, Г Ю Сажинов // Ресурсосберегающие технологии переработки продуктов животноводства Тезисы докладов научно-практической конференции - Минск, 1989-С 142

54 Сравнительное изучение термоустойчивости ультра- и диафильтрацион-ных белковых концентратов / В И Круглик, А П Чагаровский, Д.Е Щедушнов, Г Ю Сажинов // Научно-технический прогресс в цельномолочной и молочно-консервной промышленности Тезисы докладов Всесоюзной научно-технической конференции - М , 1990 - С 3-4

55 Круглик В И Основные направления получения гидролизатов молочных белков направленного химического состава / В И Круглик, Г Ю Сажинов // Научно-технический прогресс в цельномолочной и молочно-консервной промышленности Тезисы докладов Всесоюзной научно-технической конференции-М, 1990-С 5-6

56 Чагаровский А П Технология производства продуктов для детского и эн-терального питания на основе мембранной обработки молочного сырья / А П Чагаровский, В И Круглик // Перспективные направления в создании и внедрении новой техники и технологии для производства консервов детского питания Тезисы докладов Всесоюзного совещания - Одесса, 1990 - С 48-49

57 Круглик В И Производство сухих лечебных продуктов на основе молочных белков и гидролизатов / В И Круглик, Г Ю Сажинов, Л А Сажинова // Перспективные направления в создании и внедрении новой техники и технологии для производства консервов детского питания Тезисы докладов Всесоюзного совещания - Одесса, 1990 - С 90-92

58 Круглик В И Классификация и основные направления разработки технологий сухих специализированных и лечебных продуктов на молочной основе для питания детей и взрослых / В И Круглик, Г.Ю Сажинов, Л А Сажинова //

Перспективные направления в создании и внедрении новой техники и технологии для производства консервов детского питания Тезисы докладов Всесоюзного совещания - Одесса, 1990 - С 92-93

59 Высоцкий В Г Оценка пищевого статуса и эффективности искусственного питания сухими сбалансированными смесями «Унипит» хирургических больных / В Г Высоцкий, Т А Яцышина, В И Круглик П Актуальные проблемы искусственного питания в хирургии Тезисы докладов всесоюзного симпозиума с международным участием - М, 1990 - С 76

60 Круглик В И Физико-химические характеристики белковых препаратов, а также их гидролизатов, полученных с применением ультрафильтрации / В И Круглик, Г Ю Сажинов // Химия пищевых веществ Свойства и использование биополимеров в пищевых продуктах Тезисы докладов Всесоюзной конференции - Могилев, 1990 - С 5

61 Круглик В И Структурно-механические свойства диафильтрационных белковых концентратов / В И Круглик, Г Ю Сажинов // Химия пищевых веществ Свойства и использование биополимеров в пищевых продуктах Тезисы докладов Всесоюзной конференции - Могилев, 1990 - С 24

62 Кржечковская В В Оценка потенциальной аллергенности пептидных препаратов молочных белков, полученных ультрафильтрацией / В В Кржечковская, Г Ю Сажинов, В И Круглик // Питание здоровье и болезнь Материалы научной конференции с международным участием - М, 1990 - М 108

63 Круглик В И Новые специализированные продукты на молочной основе для питания детей и взрослых // Питание здоровье и болезнь Материалы научной конференции с международным участием - М, 1990 - М 109.

64 Георгиева О В «Фемилак» - новый продукт для коррекции питания беременных и кормящих женщин / О В Георгиева, В И Круглик, П Ф Крашенинин // Проблемы ресурсосберегающих и природоохранных технологий и оборудования для переработки и хранения сельскохозяйственного сырья Тезисы научно-научно-практической конференции с международным участием - Краснодар, 1993 - С 29

65 Георгиева О В Применение специализированного продукта «Фемилак» для коррекции питания беременных и кормящих женщин / О В Георгиева, В В Круглик, JIB Соломадина // Проблемы рационального питания детского и взрослого населения, проживающего на территории, пострадавшей в результате аварии на ЧАЭС Тезисы научной конференции - Брянск, 1993 - С 95

66 Георгиева О.В Специализированные продукты для беременных и кормящих матерей / О В Георгиева, В И Круглик // Прикладная биотехнология на пороге XXI века Тезисы докладов Международной научно-практической конференции - М, 1995 - С 111

67 Георгиева О В Сухие специализированные продукты на молочной основе для коррекции питания беременных и кормящих матерей / О В Георгиева, В И Круглик, П Ф Крашенинин // Антропогенные воздействия на здоровье человека Тезисы докладов научно-практической конференции - Калуга, 1995 - С 23-24

68 Георгиева О В Молочные продукты, обогащенные пищевыми добавками, для коррекции рациона питания беременных и кормящих матерей / О В Геор-

гиева, Л В Соломадина, В И Круглик // Новые биологически активные добавки (нутрицевтики) в лечении и профилактике наиболее распространенных заболеваний. Тезисы международного симпозиума - Тюмень, 1995 - С 7-8

69 Георгиева О В Использование специализированных продуктов на молочной основе для коррекции рациона питания беременных и кормящих женщин / О В Георгиева, П Ф Крашенинин, В И Круглик // Витамины и здоровье населения Белоруссии и смежных регионов Тезисы Международного симпозиума -Гродно, 1995 - С 5-6

70 Решение проблемы непереносимости молока / Г Ю Сажинов, В И Круглик, Л В Соломадина, И Г Иванова // Научные и практические аспекты совершенствования качества продуктов детского и геродиетического питания Труды участников 1-ой Международной конференции (г Истра, 13-16 мая) - М Пи-щепромгодат, 1997,-С 151-152

71 Разработка высокоэффективных технологических методов и схем использования витаминных премиксов для заменителей женского молока / Г Ю Сажинов, В И Круглик, Л В Соломадина, И Г Иванова // Научные и практические аспекты совершенствования качества продуктов детского и геродиетического питания Труды участников 1-ой Международной конференции (г. Истра, 13-16 мая)-М Пищепромиздат, 1997 - С 217-221

72 Низколактозный молочный продукт для детей раннего возраста / Г Ю Сажинов, В И Круглик, Л В Соломадина, К С Ладодо, В П Зиматова // Научные и практические аспекты совершенствования качества продуктов детского и геродиетического питания Труды участников 1-ой Международной конференции (г Истра, 13-16 мая) - М Пищепромиздат, 1997,-С 318-319

73 Высокобелковый продукт для коррекции питания беременных женщин / Г Ю Сажинов, В.И Круглик, Л В Соломадина, И Я Конь, В П Зиматова // Научные и практические аспекты совершенствования качества продуктов детского и геродиетического питания Труды участников 1-ой Международной конференции (г Истра, 13-16 мая) - М Пищепромиздат, 1997 - С 319-320

74 Лечебное питание при пищевой непереносимости у детей раннего возраста / Т Э Боровик, К С Ладодо, Е А Рославцева, Н Н Семенова, В И Круглик // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга - 2006 - №1-2 Материалы 8-го Международного Славяно-Балтийского научного форума «Санкт-Петербург - Гастро-2006»-С 18-19

75 Гмошинский ИВ Получение и перспективы использования ферментативных гидролизатов сывороточного белка молока /ИВ Гмошинский, С Н Зорин, В И Круглик, В К Мазо // Питание здорового и больного человека Материалы конференции - С-Пб, 2006 ~ С 47-49

76 Зорин СН Получение ферментативного гидролизата белков молочной сыворотки, модифицированного по аминокислотному составу / С.Н Зорин, В И Круглик // Питание здорового и больного человека Материалы конференции - С-Пб , 2006 - С 47-49

Авторские свидетельства, патенты и положительные решения по заявкам на выдачу патентов РФ

77 Авторское свидетельство №1358890 Союз Советских Социалистических Республик, МПК7 А 23 С 9/00 Способ получения кисломолочных продуктов / П Ф Крашенинин, А.П Чагаровский, В И. Круглик, М А Гришин, В Г Высоцкий, Л В Соломадина, Е.Н Черенкова, заявитель и патентообладатель Одесский институт пищевой промышленности им М В Ломоносова и ВНИИ молочной промышленности - Заявл 16 05 86 - ДСП

78 Авторское свидетельство №1369710 Союз Советских Социалистических Республик, МПК7 А 23 С 9/00 Способ получения кисломолочных продуктов / А П Чагаровский, Н Н Липатов, М А Гришин, В И Круглик, И А Алиев, В П Чагаровский, Л Н Иванова, заявитель и патентообладатель Одесский институт пищевой промышленности им М В Ломоносова и ВНИИ молочной промышленности - Заявл 25 12 85 - ДСП

79 Авторское свидетельство №1446705 Союз Советских Социалистических Республик, МКИ4 А 23 С 15/02 Способ получения маслоподобного продукта / В И Круглик, А П Чагаровский, М А Гришин, С А Фурсова - Заявл 28 08 86 -ДСП

80 Авторское свидетельство №1457192 Союз Советских Социалистических Республик, МКИ4 А 23 С9/144, А 23 11/20 Способ производства растворимого молочного белка / В И Круглик, А П Чагаровский, М А Гришин, В Н Сергеев, П Ф Крашенинин, С.А Фурсова, В В Чумакова, Т А Яцышина, О М Калам-карова, ЛД Кривенцева, заявитель и патентообладатель Институт питания АМН СССР, Одесский технологический институт пищевой промышленности им М В Ломоносова и Истринское отделение Всесоюзного НИИ молочной промышленности - Заявл 28 08 86 - ДСП

81 Авторское свидетельство №1522462 Союз Советских Социалистических Республик, МКИ4 А 23 С 9/144, А 23 J 1/20 Способ получения гидролизата белка пищевого молочного / В И Круглик, В Г Высоцкий, В Н Сергеев, В Я Баранов, П Ф Крашенинин, Т А Яцышина, С А Фурсова, В В Чумакова, Е Н Черенкова, Л Д Кривенцева, заявитель и патентообладатель Институт питания АМН СССР-Заявл 01Л2 87-ДСП

82 Авторское свидетельство №1608860 Союз Советских Социалистических Республик, МКИ5 А 23 I 1/20 Способ получения гидролизата молочных белков / В И Круглик, С А Фурсова, В В Чумакова, В Г Высоцкий, Т А Яцышина, А С Витолло, А М Сафронова, А И Пупов, Ю П Алешко-Ожевский, П В Ше-вякова, НН Махова, заявитель и патентообладатель Институт питания АМН СССР-Заявл 17 06 88,-ДСП

83 Авторское свидетельство №1614169 Союз Советских Социалистических Республик, МКИ5 А 23 ] 1/20 Способ получения гидролизата молочных белков / В И Круглик, В Г Высоцкий, П Ф Крашенинин, Г Ю Сажинов, А И Бон, Т А Яцышина, В Н Кравцов, В Г Байков, О И Лучкина, А С Витолло, А.М.Сафронова, заявитель и патентообладатель Институт питания АМН СССР-Заявл 18 04 89-ДСП

84. Авторское свидетельство №1622967 Союз Советских Социалистических Республик, МКИ5 А 23 I 3/00 Способ получения гидролизата молочных белков / В И Круглик, В Г Высоцкий, В К Мазо, П Ф Крашенинин, В Н Сергеев, Т А. Яцышина, И Н Марокко, И В Гмошинский, С Н Зорин, заявитель и патентообладатель Институт питания АМН СССР - Заявл 17 06 88 - ДСП

85 Авторское свидетельство №1658433 Союз Советских Социалистических Республик, МКИ5 А23 Т> 8/02 Способ приготовления композиции для производства хлеба / Т Н Чекунаева, В Г Банков, Т Б Цыганова, В И Круглик, А П Нечаев, И И Паносян, Г В Жукова; заявитель и патентообладатель Институт питания АМН СССР.- Заявл 20.06.89 - ДСП

86 Авторское свидетельство №1663800 Союз Советских Социалистических Республик, МПК7 А 23 С 23/00 Пищевая смесь и способ ее получения / В Г Высоцкий, Т А Яцышина, В И Круглик, С А Фурсова, В В Чумакова, П С Крашенинин, Г Ю Сажинов, заявитель и патентообладатель ВНИИКИМП - Заявл 24 01 89 - ДСП

87 Авторское свидетельство №1827771 Союз Советских Социалистических Республик, МКИ5 А23С9/00 Молочный продукт диетического питания /КС Ладодо, П Ф Крашенинин, Н Г Шацкая, В Г Высоцкий, Т Э Боровик, В И Круглик, В К. Мазо, И Н Марокко, И В Гмошинский, М М Левачев, М Г Гап-паров, А М Сафронова, А С Витолло, С Н Зорин, заявитель и патентообладатель Истринское отделение всесоюзного научно-исследовательского и конструкторского ин-та молочной промышленности и Ин-т питания АМН СССР-Заявл 22 07 88 - ДСП

88 Авторское свидетельство №1839085 Союз Советских Социалистических Республик, МПК7 А 23 I 3/00 Способ производства гидролизата молочных белков / В И Круглик, Г Ю. Сажинов, В К Мазо, В В Кржечковская, Н А Ма-ликова, АН Четвериков; заявитель и патентообладатель Институт питания АМН СССР - Заявл 06 07 90 Бюл №47-48

89 Патент (Россия) №2017427 Российская Федерация, МПК7 А 23 С 9/00 Сухая молочная каша / К С Ладодо, И Я Конь, В И Круглик, Г Ю Сажинов, НГ Шацкая, В В Чумакова, заявитель и патентообладатель научно-производственная фирма «Нутритек» - №4858595/13, заявл 27 04 92, опубл 30 09 94 - Бюл №14

90 Патент (Россия) №2019971 Российская Федерация, МПК7 А 23 С 9/00 Сухой молочный продукт «Солнышко» и способ его получения / В И Круглик, Г.Ю Сажинов, П Ф Крашенинин, Л А Сажинова, А П Плетнев, А С Севастьянов, Л Г Мамонова, заявитель и патентообладатель Институт питания РАМН и научно-производственная фирма «Нутритек» - №5040102/13, заявл 2704 92, опубл 15 08.94-Бюл №18

91 Патент (Россия) №2054263 Российская Федерация, МПК7 А 23 С 9/00 Композиция для получения сухого молочного продукта «Фортоген» /ЯД Ле-шик, К А Коровников, Г Ю Сажинов, В И Круглик, Н Г Шацкая, заявитель и патентообладатель научно-производственная фирма «Нутритек» - Заявл 17 07 92, опубл 20 02 96 - Бюл №5

92 Патент (Россия) №2054264 Российская Федерация, МПК7 А 23 Б 7/02

Способ производства аналога сливочного масла /ФА Вышемирский, Е В Орлова, В И Круглик, В А Стаховский, Г П Терешин, заявитель и патентообладатель научно-производственное объединение «Углич» - №5055188/13 - Заявл 19.107 92, опубл. 20 02 96 - Бюл №5

93 Патент (Россия) №2262240 Российская Федерация, МПК7 А 23 С 23/00 Продукт энтерального питания «Унипит» /ТС Попова, В А Тутельян, В И Круглик, АЕ Шестопалов, ИВ Гмошинский, заявитель и патентообладатель ЗАО «Нутритек» - №2004102110/13, заявл 28 01 04, опубл 20.10 05, бюл №5

94 Патент (Россия) №2290822 Российская Федерация, МПК7 А 23 С 23/00 Продукт энтерального питания «Нутриэн пульмо» /ТС Попова, В А Тутельян, В И Круглик, Г Ю Сажинов, А Е Шестопалов, И В Гмошинский, заявитель и патентообладатель ЗАО «Нутритек» - №2004102109/13; заявл 28 01 04, опубл 10 01 07-Бюл №1

95 Патент (Россия) №2290823 Российская Федерация, МПК7 А 23 С 23/00 Продукт энтерального питания «Нутриэн диабет» /ТС Попова, В А Тутельян, В И Круглик, Г Ю Сажинов, А Е Шестопалов, И В Гмошинский, заявитель и патентообладатель ЗАО «Нутритек» - №2004102111/13, заявл 28 01 04, опубл 10 01 07-Бюл №1

96 Патент (Россия) №2290824 Российская Федерация, МПК7 А 23 С 23/00 Продукт энтерального питания «Нутриэн стандарт» /ТС Попова, В А Тутельян, В И Круглик, Г Ю Сажинов, А Е Шестопалов, И В. Гмошинский, заявитель и патентообладатель ЗАО «Нутритек» - №2004102112/13, заявл 28 01 04, опубл 10 01 07-Бюл №1

97. Положительное решение на выдачу патента РФ по заявке «Продукт энтерального питания Нутриэн Нефро» №2005114358/13, заявл 13 05 05 /ГЮ Сажинов, Т С Попова, В А Тутельян, В И Круглик, А Е Шестопалов, И В Гмошинский - Заявитель и патентообладатель ЗАО «Компания «Нутритек»

98 Положительное решение на выдачу патента РФ по заявке «Продукт энтерального питания Нутриэн Гепа» №2005114361/13, заявл 13 05 05 / ГЮ Сажинов, Т С Попова, В А Тутельян, В И Круглик, А Е Шестопалов, И В Гмошинский - Заявитель и патентообладатель ЗАО «Компания «Нутритек»

99 Положительное решение на выдачу патента РФ по заявке «Продукт энтерального питания Нутриэн Фтизио» №2005114365/13, заявл 13 05 05 / ГЮ Сажинов, Т С Попова, В А Тутельян, В.И Круглик, А Е Шестопалов, И В Гмошинский, Д В Пономарев, JIА Вовк - Заявитель и патентообладатель ЗАО «Компания «Нутритек»

100 Положительное решение на выдачу патента РФ по заявке «Продукт энтерального питания «Нутриэн Элементаль» №2006122680/13, заявл 27 06 06 / В И Круглик, Т С Попова, В А Тутельян, А Е Шестопалов, Л А Вовк, Д В Пономарев, И В Гмошинский, Н Е Никитина, А А Абрамова, Н В Ревякина -Заявитель и патентообладатель ЗАО «Компания «Нутритек»

Список сокращений

АГ- антигенность

АХр - адсорбционная хроматография

ВВ - вакуум-выпаривание

ВМФ - высокомолекулярная фракция

ДФ- диафильтрация

ЬСМБ - концентрат молочного белка

КСБ - концентрат белка молочной сыворотки

ММР - молекулярно-массовое распределение

Мер - средняя молекулярная масса

НМФ - низкомолекулярная фракция

НФ- нанофильтрация 00- обратный осмос РС - распылительная сушка СП - специализированные продукты СУФ - селективная ультрафильтрация УФ - ультрафильтрация ФГ - ферментативный гидролиз ФГМБ - ферментативный гидролизат молочных белков

ФКУ - фенилкетонурия

Подписано в печать 14 11 2007 Формат 60х901/16 Тираж 140 экз Объем 2,6 п л Заказ №168 Кемеровский технологический институт пищевой промышленности 650056, г Кемерово, б-р Строителей, 47 Отпечатано в лаборатории множительной техники КемТИППа г Кемерово-10, ул Красноармейская, 52

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. НАУЧНЫЕ И ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДПОСЫЛКИ РАЗРАБОТКИ СОВРЕМЕННЫХ ТЕХНОЛОГИЙ ФЕРМЕНТАТИВНЫХ ГИДРОЛИЗАТОВ МОЛОЧНЫХ БЕЛКОВ (АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР).

1.1 Медико-биологические основы создания гидролизатов молочного белка и специализированных продуктов на их основе.

1.1.1 Значение белка в питании здорового и больного человека.

1.1.2 Белковый компонент специализированных гипоаллергенных продуктов.

1.1.2 Белковый компонент полуэлементных смесей для энтералъного питания.

1.1.3 Продукты с модифицированным аминокислотным составом.

1.2 Технологические аспекты получения гидролизатов молочных белков.

1.2.1 Общие вопросы гидролиза белка.

1.2.2 Технологии ферментативного гидролиза.

1.2.3 Использование технологий мембранной фильтрации.

1.2.4 Методы снижения горечи ферментативных гидролизатов.

1.2.5. Методы получения пептидных препаратов с модифицированным аминокислотным составом.

1.2.6 Состав специализированных продуктов на основе ферментативных гидролизатов белка.

ГЛАВА 2. ОБОСНОВАНИЕ НАПРАВЛЕНИЙ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ, ИХ ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ.

2.1 Нерешённые проблемы в области технологии ФГМБ.

2.2 Основные параметры состава СП па основе ФГМБ.

2.2.1 Гипоаллергенные продукты лечебного назначения.

2.2.2 Гипоаллергенные продукты профилактического назначения.

2.2.3 СП для энтералъного питания.

2.2.4 СП с измененным аминокислотным составом.

2.3. Цель и задачи исследования.

ГЛАВА 3. СТРУКТУРА ИССЛЕДОВАНИЙ, ОРГАНИЗАЦИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА, ОБЪЕКТЫ И ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1 Структура исследования.

3.2 Объекты исследования.

3.3 Методы исследований.

3.3.1 Ферментативный гидролиз и мембранная очистка молочных белков в лабораторных условиях.

3.3.2 Ферментативный гидролиз и мембранная очистка и фракционирование молочных белков в промыитенных условиях.

3.3.3 Получение в лабораторных и пилотных условиях ферментативных гидролизатов, модифицированных по аминокислотному составу (со сниженным содержанием фенилаланина).

3.3.4 Методы лабораторных исследований ферментативных гидролизатов молочных белков.

3.3.5 Биохимические, иммунохимические и аллергологические методы.

ГЛАВА 4. ОПТИМИЗАЦИЯ ПРОЦЕССОВ ФЕРМЕНТАТИВНОГО ГИДРОЛИЗА МОЛОЧНЫХ БЕЛКОВ (КМБ И КСБ).

4.1 Ферментативный гидролиз «Панкреатином».

4.2 Ферментативный гидролиз «Флавоэнзимом».

4.3 Использование двухферментных систем.

4.4 Накопление свободных аминокислот в процессе ферментативного гидролиза

4.5 Количественная оценка степени гидролиза по соотношению общего и аминного азота.

4.6 Определение средней молекулярной массы по хроматографическому профилю.

4.7 Оценка остаточной протеолитической активности.

ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ ХАРАКТЕРИСТИК ФГМБ В ПРОЦЕССЕ МЕМБРАННОЙ ОБРАБОТКИ.

5.1 Влияние мембранных обработок на физико-химические свойства гидролизатов молочных белков.

5.2 Влияние мембранных обработок на биологическую ценность и усвояемость гидролизатов молочных белков.

5.3 Влияние мембранных обработок на остаточную антигенность.

5.4 Изучение потенциальной аллергенности ФГМБ в опытах на животных.

5.5 Собственные сенсибилизирующие свойства ферментативных гидролизатов белка.

5.6 Методические принципы расчета процессов мембранного фракционирования ФГМБ.

ГЛАВА 6. ИССЛЕДОВАНИЕ ЗАКОНОМЕРНОСТИ УДАЛЕНИЯ ФЕНИЛАЛАНИНА ИЗ ФГМБ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АДСОРБЦИОННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ.

6.1 Хроматографическая очистка ФГМБ, полученных с использованием «Панкреатина».

6.2 Хроматографическая очистка ФГМБ, полученных с использованием «Флавоэнзима».

6.3 Хроматографическое получение ФГМБ без фенилаланина на основе нанофильтрационных фракций.

ГЛАВА 7. ОБОСНОВАНИЕ ПРИНЦИПИАЛЬНОЙ ТЕХНОЛОГИЧЕСКОЙ СХЕМЫ И РАЗРАБОТКА ЧАСТНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ ПОЛУЧЕНИЯ ФГМБ С ЗАДАННЫМИ СОСТАВОМ И СВОЙСТВАМИ.

7.1 Оптимизация технологических параметров ФГМБ на стадии сгущения, пастеризации и сушки.

7.1.1 Изучение реологических показателей и выбор оптимальных параметров сгущения.

7.1.2 Определение режимов пастеризации.

7.1.3 Обоснование режимов сушки.

12 Обоснование принципиальной технологической схемы получения ФГМБ с регулируемым химическим составом и свойствами.

7.3 Разработка частных технологий ФГМБ.

7.3.1 Разработка технологии ФГМБ 1 для продуктов энтерального питания полуэлементных смесей).

7.3.2 Разработка технологии ФГМБ 2 для гипоаллергенных продуктов лечебно-профилактической направленности.

7.3.3 Разработка технологии ФГМБ 3 для гиппоаллергенных продуктов лечебного назначения.

7.3.4 Разработка технологии ФГМБ 4 для питания больных фенилкетонурией.

ГЛАВА 8. РАЗРАБОТКА БЛОЧНО-МОДУЛЬНОЙ СХЕМЫ ПОЛУЧЕНИЯ ФГМБ И СП НА ИХ ОСНОВЕ.

8.1 Обоснование и разработка принципиальной блочно-модульной схемы получения ФГМБ и СП на их основе.

8.2 Разработка частных технологий СП на основе ФГМБ.

8.2.1 Технология производства продукта «НУТРИЛАКПЕПТИ-СЦТ».

8.2.2 Технология производства продукта «НУТРИЛАК-ГА».

8.2.3 Технология производства продукта «НУТРИЭН-ЭЛЕМЕНТАЛЬ».

8.2.4 Технология производства продукта «НУТРИЭН-ФТИЗИО».

8.2.5 Технология производства продукта «НУТРИЭН-ФОРТ».

8.2.6 Технология производства продуктов линии «НУТРИГЕН-ФКУ13,15,20».

8.2.7 Технология производства продуктов «НУТРИГЕН-ФКУ 30», НУТРИГЕН-ФКУ 40», НУТРИГЕН-ФКУ 70».

8.3 Функциональная классификация ФГМБ и СП на их основе.

ГЛАВА 9. ПРАКТИЧЕСКАЯ РЕАЛИЗАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

9.1 Организация промышленного производства ФГМБ и СП на их основе.

9.2 Разработка научно-технической документации.

9.3 Социальная значимость производства СП.

ВЫВОДЫ.

Актуальность работы. Рациональное питание способствует сохранению здоровья, профилактике заболеваний, а также создает условия для повышения способности организма противостоять неблагоприятным воздействиям окружающей среды и переносить физические и психоэмоциональные нагрузки. На приоритетную значимость питания указывает постановление Правительства РФ №917 от 10.08.98 «О Концепции государственной политики в области здорового питания населения Российской Федерации», рассчитанной на период до 2010 г.

Особое место в современной нутрициологии занимает проблема пищевой недостаточности при критических состояниях. Агрессивные воздействия любой этиологии (травмы, ранения, кровопотери, ожоги, хирургические, вмешательства), а также патологические проявления (онкологические, инфекционные заболевания, воспалительные процессы в печени и поджелудочной железе) развивают неспецифические реакции гиперметаболизма и гиперкатаболизма. Это приводит к нарушениям обмена белков, углеводов, липи-дов, усиленному расходу углеводно-липидных компонентов и распаду тканевых белков. При этом основной чертой всей совокупности изменений обмена веществ является сочетание резкого повышения потребностей организма в белково-энергетических субстратах со снижением толерантности к белку пищи. Специфические требования также предъявляются к белковой состав-. ляющей рациона больных наследственными заболеваниями аминокислотного обмена, пищевой аллергией, в том числе, детей первого года жизни.

В соответствии с вышеизложенным и с учетом опыта зарубежных стран, существует доказанная необходимость промышленного производства продуктов специализированного питания, назначаемых больным в критических состояниях или при нарушении функции пищеварения. Как правило, в их состав в качестве белкового компонента входят гидролизаты белков с различной глубиной гидролиза, которые оказываются зачастую единственным средством лечебного воздействия, обеспечивающим жизнедеятельность и полноценное развитие больных детей и взрослых с различной патологией.

Ввиду актуальности вопроса создания специализированных продуктов (СП) с заданными свойствами в последние годы отмечается значительное усиление интереса исследователей к процессам их получения. В нашей стране в 70-80-х годах прошлого столетия были созданы и внедрены в клиническую практику отечественные пищевые смеси («Энпиты», «Инпитан», «Ово-лакт» и др.), использование которых положительно повлияло на результаты лечения многих категорий больных и тяжело пострадавших.

Вклад в освоение технологии продуктов для специализированного питания, в том числе на основе молочных белков, внесли В.Г. Высоцкий, Г.Б. Гаврилов, И.А. Евдокимов, П.Ф. Крашенинин, К.С. Ладодо, H.H. Липатов, H.H. Липатов (мл.), М.Ф. Нестерин, A.A. Покровский, Т.С. Попова, И.А. Рогов, Ю.Я. Свириденко, H.A. Тихомирова, Э.С. Токаев, В.А. Тутельян, В.Д. Харитонов, А.Г. Храмцов, А.П. Чагаровский, A.M. Шалыгина, В.А. Шатер-ников [18-20, 52, 53, 58, 60, 63-68, 94, 119-121, 125, 128, 132, 133] другие отечественные и зарубежные ученые.

Однако, в начале 90-х годов в Российской Федерации выпуск СП прекратился, и в течение последующих 10 лет на рынке были представлены только зарубежные продукты.

В этой связи направление по созданию ферментативных гидролизатов молочных белков (ФГМБ) и СП на их основе следует признать принципиально новым, позволяющим решить важные социальные проблемы [109, 110], а также расширить знания в области лечебного питания, что указывает на актуальность выполненных исследований

Научная новизна работы. В работе исследованы особенности ферментативного гидролиза (ФГ) молочных белков в зависимости от их фракционного состава, происхождения ферментных препаратов, их концентрации, температуры, активной кислотности, применения рН-статирования и других факторов. Показано, что решающая роль в формировании качественного и количественного состава пептидных фракций ФГМБ принадлежит природе используемого ферментного препарата, фермент-субстратному соотношению и условиям гидролиза. Изучено изменение характеристик ФГМБ (молеку-лярно-массового распределения (ММР) пептидных фракций, содержания свободных аминокислот, остаточной антигенности (АГ) в процессе ультрафильтрационной (УФ) очистки и нанофильтрационного (НФ) фракционирования. В результате достигнуто снижение АГ гидролизатов молочного белка и белка молочной сыворотки, достаточное для их использования в лечебных и лечебно-профилактических СП. Получены гидролизаты концентрата сывороточных белков (КСБ) с улучшенными в сравнении с существующими аналогами органолептическими характеристиками. Разработаны принципы и методики расчета мембранной обработки для получения ФГМБ с заданным составом и свойствами с учетом основных технологических факторов. Исследованы закономерности и оптимизированы условия процесса селективной сорбции фенилаланина из различных видов ФГМБ с использованием промышленной адсорбционной хроматографии (АХр), получены ФГМБ с содержанием фенилаланина, сопоставимым с аналогичной характеристикой смесей кристаллических 1-аминокислот, используемых в СП для питания больных фенилкетонурией.

На основе данных литературы и результатов собственных исследований предложена функциональная классификация ФГМБ и СП с их использованием. Исследованы биологическая, энергетическая и пищевая ценность ФГМБ и СП, полученных на их основе, а также их клиническая эффективность.

Практическая значимость и реализация результатов работы в промышленности. На основе исследований, проведенных в лабораторных, пилотных и промышленных масштабах созданы оригинальные технологии, новизна технических решений которых подтверждена авторскими свидетельствами, патентами и положительными решениями на выдачу патентов №№1358890, 1369710, 1446705, 1457192, 1522462, 1608866, 1614169, 1622967,

1658433, 1663800, 1827771, 1839085, 2017427, 2019971, 2054264, 2262240, 2290822, 2290823, 2290824, 2005114358/13, 2005114361/13, 2005114365/13, 2006122680/13. Предложена принципиальная технологическая схема и разработаны частные технологии ФГМБ с использованием различных процессов во взаимосвязи. Обоснована блочно-модульная схема получения ФГМБ и широкой гаммы СП на их основе. Указанные разработки внедрены в производство (ТУ 9229-127-17023360-03, ТУ 9229-133-17023360-04, ТУ 9229-149-1702336003, ТУ 9229-151-17023360-04, ТУ 9229-152-17023360-04, ТУ 9197-16317023360-05, ТУ 9229-176-17023360-07).

Апробация работы. Основные результаты работы доложены и получили одобрение на симпозиумах, конгрессах, конференциях, семинарах и совещаниях различного уровня (Киев, 1987; Москва, 1987, 1988, 1990, 1995; Ереван, 1987; София, 1988; Углич, 1988; Вологда, 1988; Минск, 1989; Одесса, 1990; Могилев, 1990; Монреаль, 1990; Краснодар, 1993; Тюмень, 1995; Гродно, 1995; Истра, 1997; Санкт-Петербург, 2006).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано более ста печатных работ, в том числе две монографии, 20 статьей в журналах, рекомендованных ВАК для публикации основных материалов диссертаций, статьи в научных трудах институтов, материалах Международного молочного конгресса, тезисы в материалах симпозиумов, конференций, а также описания авторских свидетельств, патентов и заявок на выдачу патентов РФ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Обоснование физико-химических и биотехнологических закономерностей получения ФГМБ, предназначенных для использования в СП лечебной и лечебно-профилактической направленности;

2. Результаты изменений качественных и количественных характеристик ФГМБ (степени гидролиза, ММР белковых фракций, АГ и содержания свободных аминокислот) в процессе гидролиза и различных мембранных обработок;

3. Требования к исходным ФГМБ и параметры технологического процесса АХр, обеспечивающие освобождение ФГМБ от фенилаланина до уровня, соответствующего современным подходам к диетотерапии больных ФКУ;

4.Концепция создания ФГМБ с направленно-регулируемыми составом и свойствами;

5. Блочно-модульная схема и технологии получения ФГМБ и СП на их основе.

выводы

1. Научно обоснованы технологии, заключающиеся в направленном ФГ, использовании различных мембранных процессов, а также метода АХр для получения ФГМБ с направлено регулируемыми составом и свойствами. Разработана концепция создания широкой гаммы ФГМБ и СП на основе использования блочно-модульного принципа построения технологий, предложена их функциональная классификация.

2. Определены оптимальные условия получения ФГМБ с использованием промышленных ферментных препаратов. При использовании «Панкреатина» максимальная глубина гидролиза молочных белков достигается при 3-х часах ферментной обработки, температуре 50±2°С, концентрации ферментного препарата 2% по массе сухих веществ. Поддержание оптимального значения рН 7,5±0,1 требует использования рН-статирования раствором щелочи. Применение «Флавоэнзима» позволяет достичь большей, в сравнении с «Панкреатином» глубины гидролиза при продолжительности реакции до 20 часов, температуре 50±2°С, концентрации ферментного препарата 5% по массе сухих веществ. Оптимум действия «Флавоэнзима» составил рН 6,0±0,2, что не требует использования рН-статирования.

3. Методом эксюнозионной хроматографии определено ММР пептидов в динамике ФГ и в конечных ФГМБ. Показано, что до 52% белкового материала в случае обработки «Панкреатином» и до 70% «Флавоэнзимом» представлено короткими пептидами и свободными аминокислотами в диапазоне молекулярных масс менее 1,4 кД, что отвечает средней и глубокой степени гидролиза, соответственно.

4. Установлено, что даже при максимальной длительности гидролиза полной элиминации макромолекулярных белковых структур из состава ФГМБ не происходит. Иммуноферментным методом определена остаточная АГ в динамике ФГ и в конечных ФГМБ. В результате ФГ молочных белков содержание антигенов коровьего молока снижается в 103-104 раз. Это недостаточно для непосредственного использования получаемых гидролизатов в гипоаллерген-ных продуктах, что определяет необходимость дополнительной очистки ФГМБ.

5. Изучены условия и параметры очистки ФГМБ с использованием процессов УФ и СУФ (мембраны с размерами пор 10 и 5 кД, соответственно). В результате очистки ФГМБ этими методами достигается полная элиминация остаточных количеств белковых и полипептидных структур с молекулярными массами более 10 кД. При использовании метода УФ достигается снижение АГ гидролизатов до уровня 510"5 от АГ исходного белка, а при использовании СУФ доказана целесообразность повторной обработки глубоких гидролизатов КСБ, что впервые позволило снизить АГ до 110"6 и более, то есть до величины, характерной для глубоких ферментативных гидролизатов казеина. Данные ФГМБ могут использоваться в качестве белковой основы лечебных гипоал-лергенных продуктов.

6. Показана эффективность использования НФ технологии для выделения и концентрирования из неглубоких гидролизатов КСБ фракции пептидов с Мср=4-6 кД и её частичной деминерализации. Полученные таким путём ФГМБ характеризуются низкой осмолярностью, хорошими органолептическими свойствами, растворимостью и используются при производстве продуктов эн-терального питания, а также гипоаллергенных смесей лечебно-профилактической направленности.

7. Доказана перспективность использования НФ для фракционирования глубоких гидролизатов КСБ с целью получения НМФ и ВМФ фракций, из которых первая более чем на 92% представлена свободными аминокислотами и олигопептидами, а вторая обогащена фракцией «средних пептидов» в диапазоне молекулярных масс 1,4-10 к Д. Первая фракция характеризуется АГ менее 1.10"6, что позволяет её использовать в продуктах для детей больных тяжёлыми и средней тяжести аллергическими заболеваниями. Вторая фракция, обладающая низкой осмолярностью и приемлемыми органолептическим свойствами, может послужить белковой основой СП, предназначенных для энтераль-ного питания больных с нарушениями функции пищеварения и для гипоаллергенных СП лечебно-профилактической направленности. Предложен принцип расчёта мембранного фракционирования с учетом различных факторов (ММР исходного ФГМБ, селективность мембран, степень концентрирования) для получения ФГМБ с направленно-регулируемым пептидным составом.

8. Разработана технология ФГМБ со сниженным содержанием фенилаланина, предназначенных для использования в питании больных ФКУ. Ферментативные гидролизаты КСБ фракционировали на колонках с адсорбентом ХАД-16. Показано, что наибольшая эффективность очистки от фенилаланина достигается при использовании в качестве сырья НМФ, полученной при НФ глубокого гидролизата КСБ. Содержание фенилаланина в получаемом продукте гарантированно не превышает 0,01% по массе белкового эквивалента, что сопоставимо с аналогичной характеристикой смесей кристаллических 1-аминокислот. При этом выход продукта составляет более 80% по сухим веществам.

9. При переходе к промышленным масштабам признано целесообразным использовать при производстве СП лечебной и лечебно-профилактической направленности ФГМБ на основе КСБ, как имеющих более высокую биологическую ценность, сбалансированный минеральный состав и лучшие органо-лептические свойства в сравнении с аналогичными гидролизатами КМБ и глубокими гидролизатами казеина.

10. На основе полученного экспериментального материала разработаны промышленные технологии различных ФГМБ с направленно-регулируемым составом и свойствами. В производственных условиях оптимизированы процессы ФГ, УФ, СУФ, НФ, АХр, ОО, ВВ, пастеризации и сушки. Показано, что при производстве СП в технологическом процессе целесообразно использовать сухие ФГМБ гарантированного качества. Разработана принципиальная блочно-модульная схема, состоящая из 15 самостоятельных технологических блоков для получения ФГМБ и СП с их использованием. Данная схема была впервые внедрена на базе предприятия по производству специализированных и лечебных продуктов в г. Истра Московской области, что позволило освоить промышленное производство широкой гаммы СП с 2003 года. Имеющиеся производственные мощности позволяют полностью удовлетворить потребности Российской Федерации в продуктах на основе ФГМБ, которые показали свою высокую клиническую эффективность.

1. Айвазов Б.В. Практическое руководство по хроматографии.- М.: Высшая школа, 1968.- 280 С.

2. Алексеева Н.Ю. Современная номенклатура белков молока // Молочная промышленность.- 1983,- №4.- С.27-31.

3. Антонов В.К. Химия протеолиза. М.:Наука.-1983.-367 С.

4. Балаболкин И.И. Современная концепция патогенеза и принципы терапии аллергических заболеваний у детей// Педиатрия.-2003.-№ 4.- С.52-57.

5. Банникова Л.А., Королева Н.С., Семенихина В.Ф. Микробиологические основы молочного производства / М.: Агропромиздат, 1987.- 400 С.

6. Баранов A.A., Субботина O.A., Борисова И.В. и др. Клинические проявления перекрестных аллергических реакций на пищевые продукты у детей // Вопросы питания.- 2005.- №4.- С.36-40.

7. Баратова Л.А., Белянова Л.П. Определение аминокислотного состава белков// Методы биохимического эксперимента.- М: Изд-во МГУ.-1974.- С. 1-36

8. Барашнев Ю.И., Вельтищев Ю.Е. Наследственные болезни обмена веществ у детей.-Л.:Медицина.-1978.-320 С.

9. Бахна С., Хейнер Д . Аллергия к молоку. Пер. с англ.- Москва: Медицина.-. 1985.-206 С.

10. Башкиров О.И., Симоненко C.B., Антипов Т.А., Куленко В.Г. Проектирование специальных молочных продуктов для детей / // Молочная промышленность.- 2007.- №6.- С. 48-51.

11. Биологически активные вещества и их использование в производстве диетических продуктов питания / Рогов И.А., Алексахина В.А., Нефедова Н.В. и др. // Обзорная информация. Серия «Молочная промышленность».- М.: Аг-роНИИТЭИММП, 1994.- 48 С.

12. Биохимические методы исследования в клинике, под ред. А.А.Покровского.-. М.: Медицина, 1969, с. 27-42.

13. Боровик Т.Э., Гмошинский И.В., Рославцева Е.А., и др. Антитела к белкам пищевых продуктов у детей, страдающих целиакией и пищевой аллергией // Педиатрия.-1993.- № 5.- С.42-46.

14. Брок Т. Мембранная фильтрация: Пер. с англ.- М.: Мир, 1987.- 464 С.

15. Брык М.Т., Цапюк Е.А.,Твердой A.A. Мембранная технология в промышленности / М.Т. Брык,.- Киев: Техника, 1990.- 289 с.

16. Брык М.Т., Голубев В.Н., Чагаровский А.П. Мембранная технология в пищевой промышленности // Киев: Урожай, 1991.- 224 С.

17. Васильев Ф.В., Глотова И.А, Антипова JI.B. К вопросу оптимизации аминокислотного состава поликомпонентных продуктов с использованием методов вычислительной математики // Хранение и переработка сельхозсырья.- 2002.- №2.- С. 58-61.-

18. Высоцкий В.Г. и др. Экспериментальное обоснование рациональных уровней потребления белка для различных групп взрослого населения // Вопр. Питания.-1991.- № 2.- С. 6-13.

19. Высоцкий В.Г. К оценке потребности человека в белке.// Вопр. Питания.-1978,-№6.- С. 8-17.

20. Высоцкий В.Г. Экспериментальное обоснование потребностей человека в белке. Автореф. Дисс.д.б.н.(14.00.07).-М.- 1977.- 32 С.

21. Высоцкий В.Г., Яцышина Т.А., Рымаренко Т.В., Мамаева Е.М. О методах определения биологической ценности белков (обзор) // Медицинский реферативный журнал.-1976,-Раздел 7.- Реф. № 1425.- С. 24-35.

22. Гаврилов Г.Б. Современные аспекты переработки молочной сыворотки мембранными методами: Монография.- Кемерово: Кузбассвузиздат, 2004.160 С.

23. Гаврилов Г.Б. Технологии мембранных процессов переработки молочной сыворотки и создание продуктов с функциональными свойствами: Монография.- М: Издательство Россельхозакадемии, 2006.- 134 С.

24. Гаппаров М.М. Роль белка в питании человека в условиях загрязнения окружающей среды // Вестн.РАМН.- 2002.- № 9.- С. 20-22.

25. Гаппаров М.М., Левачев М.М. Питание детей первого года жизни: взгляд нутрициолога // Вопросы питания.- 2001.- №4.- С. 23-27.

26. Гельперин Н.И. Основные процессы и аппараты химической технологии. В 2-х кн.- М.: Химия, 1981.- 812 С.

27. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов. СанПиН 2.3.2.1078-01 .-М.-Минздрав РФ.-2002.-164 С.

28. Гмошинский И.В., Зорин С.Н., Баяржаргал М., и др. Получение, оценка качества и безопасности новых пищевых источников эссенциальных микро-элементов//Микроэлементы в медицине.- 2007.- Т.8,№ 1.- С. 21-23.

29. Горбатов A.B. Реология мясных и молочных продуктов.- М.: Пищевая промышленность, 1991.- 344 С.

30. Горбатова К.К. Биохимия молока и молочных продуктов.- М.: ГИОРД, 2003.- 320 С.

31. Горбатова К.К. Физико-химические и биохимические основы производства молочных продуктов.- М.: ГИОРД, 2003а.- 352 С.

32. Горелова Ж.Ю., Ладодо К.С., Левачев М.М. Роль ПНЖК в лечебном питании детей с аллергическими заболеваниями // Вопросы питания.- 1999.- №1.-С. 31-35.

33. Громова Л.В., Иоффе М.Л. Влияние пептидов, входящих в состав гидролиза-тов казеина, на всасывание глюкозы и воды в тонкой кишке крыс // Физи-ол.Журн.им. И.М.Сеченова.- 1993.- Т.79, № 6,- С. 73-79.

34. Гущин И.С. Аллергическое воспаление и его фармакологический контроль.-М.: «Фармарус Принт».- 1998.- 252 С.

35. Дамберг Б.Э. Реакция меланоидинообразования и её биологическое значение //Изв.АН Латв.ССР.- 1976.-№ 1.- С. 97-105.

36. Диетотерапия детей, больных ФКУ. Инструктивно-методические рекомендации.- МЗ РФ, 1997.- 37 С.

37. Дубяга В.П., Перепечкин Л.П., Каталевский Е.Е. Полимерные мембраны -М.: Химия, 1981.- 232 С.

38. Дытнерский Ю.И. Мембранные процессы разделения жидких смесей.- М.: Химия, 1975.- 252 С.

39. Дытнерский Ю.И. Обратный осмос и ультрафильтрация.- М.: Химия, 1975а.-352 С. 64.

40. Дьяченко П.Ф. К исследованию казезеинаткальцийфосфатного комплекса молока // Труды ВНИМИ.- М.: Пищевая промышленность, 1970.- №27.- С. 39.

41. Дэвени Т., Гергей Я. Аминокислоты, пептиды и белки.-М.: Мир.- пер с англ.-1976.-364 С.

42. Евдокимов И.А., Абдулина Е.Р. Мембранные технологии в молочной промышленности // Переработка молока,- 2001.- №10.- С. 10-11.

43. Зелинская. Д.И., Ладодо К.С., Рыбакова Е.П.и др. Вопросы организации диетологической помощи детям, больным фенилкетонурией // Вопросы питания.- 1998.- №2.- С.12-14.

44. Зилова И.С. Исследование качества белковых изолятов и их сбалансированных комбинаций. Автореф. дисс. к.м.н. (03.00.04).-М.- 1982.- 21 С.

45. Инихов Г.С. Методы анализа молока и молочных продуктов / Г.С. Инихов, Н.П. Брио.- М.: Пищевая промышленность, 1971.- 424 С.

46. Искусственное питание в неотложной хирургии и травматологии / Под ред. A.C. Ермолова, М.М. Абакумова.- М., 2001.- 388 С.

47. Касаткин А.Г. Основные процессы и аппараты химической технологии.- М.: Изд-во химической литературы, 1961.-831 С.

48. Конь И.Я. Углеводы пищи и здоровье детей и подростков // Пищевая промышленность.- 2005.- №4.- С. 14-16.

49. Копылова Н.В., Байков А.Д., Ходунова A.A. ФКУ: вчера, сегодня, завтра .М., 2004.- 47 С.

50. Костылева М.Г., Ширина Л.И., Мазо В.К. и др. Оценка перевариваемости in vitro пищевых белкови степени расщепления их антигенных структур с использованием мультиферментных систем // Вопр. Питания.-1985.- № 6.- С.35-38.

51. Костюченко А.Л., Костин Э.Д., Курыгин A.A. Энтеральное искусственное питание в интенсивной медицине.- СПб.- 1996.- 330 С.

52. Крашенинин П.Ф. Современное состояние и перспективы развития науки о создании детских молочных продуктов // Известия вузов. Пищевая технология,- 1985.-№3.- С.90-101.

53. Крашенинин П.Ф. Проблемы развития технологии производства продуктов детского питания // Вопросы питания.- 1995.- №5.- С.44-48.

54. Крусь Г.Н., Шалыгина A.M., Волокитина З.В. Методы исследования молока и молочных продуктов / под ред. Шалыгиной A.M.- М.: Колос, 2000.- 368 С.

55. Кудрин А.Н., Пономарева Г.Т. Применение математики в экспериментальной и клинической медицине. М.- 1967.- С.312.

56. Кузнецов В.В., Липатов H.H. Технология детских молочных продуктов.-СПб.: ГИОРД2005,- Т.6.- 512 С.

57. Кук Г.А. Процессы и аппараты молочной промышленности. М.: Пищевая промышленность, 1973.- 768 С.

58. Ладодо К.С. Руководство по лечебному питанию детей.- М.: Медицина, 2000.- 384 С.

59. Ладодо К.С., Рыбакова Е.П., Бушуева Г.В. и др. Результаты клинической апробации продуктов для лечения больных фенилкетонурией // Педиатрия.-1999.-№6.- С. 51-55.

60. Ладодо К.С., Сажинов Г.Ю. Специализированные продукты питания для детей с различной патологией.- М.: 2000а,- 200 С.

61. Лебедев Б.В., Блюмина М.Г. Фенилкетонурия у детей.-М.:Медицина.-1972.-160 С.

62. Ленинджер А. Основы биохимии. В 3-х т. Т.1. Пер. с англ.- М.: Мир, 1985.367 С.

63. Липатов H.H., Лисицин А.Б. , Юдина С.Б. Совершенствование методики проектирования биологической ценности пищевых продуктов // Хранение и переработка сельхозсырья.- 1996.- №2.- С.24-25.

64. Липатов H.H. и др. Усовершенствованные прибор и методика для определения перевариваемости белков in vitro // Вопр. Питания.-1984.-№ 4.-С.43-44.

65. Липатов H.H. Некоторые аспекты моделирования аминокислотной сбалансированности пищевых продуктов // Пищевая и перерабатывающая промышленность." 1986,- №4.- С.49-52.

66. Липатов H.H., Марьин В.А.,. Фетисов Е.А. Мембранные методы разделения молока и молочных продуктов. М.: Пищевая промышленность, 1976.- 168 С.

67. Липатов H.H., Рогов И.А. Методология проектирования продуктов питания с требуемым комплексом показателей пищевой ценности // Известия вузов. Пищевая технология.- 1987.- №2.- С.5-9.

68. Луфт В.М., Костюченко А.Л. Клиническое питание в интенсивной медицине. Практическое руководство.- СПб.- 2002.- С. 90-117.

69. Лященко Ю.Н., А.Б. Петухов. Энтеральное питание. Книга для врачей всех специальностей. М., 1999.- 71 С.

70. Мачихин Ю.А., Мачихин С.А. Инженерная реология пищевых материалов. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1981,- 212 С.

71. Медузов B.C., Бирюкова З.А., Иванова Л.Н. Производство детских молочных продуктов. М.:Легкая и пищевая промышленность, 1982.- 208 С.

72. Молчанова О.П. Роль белка в питании // XII съезд гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов и инфекционистов.-М.- 1949.- Т.1.- С. 222-230.

73. Мосолов В.В. Протеолитические ферменты.-М.:Наука.- 1971.- 414 С.

74. Мощинский П., Идзяк Я. Получение знзиматических гидролизатов казеина, обедненных фенилаланином // Прикладная биохимия и микробиология.-1993.- Т. 29, № 3.- С. 398-403.

75. Наследственная патология человека. Руководство в двух томах / под ред. Вельтищева Ю. Е., Бочкова Н.П. М.гМедицина.- 1992.-Т.1.- 450 С.

76. Неклюдов А.Д. Навашин С.М. Получение белковых гидролизатов с заданными свойствами // Прикладная биохимия и микробиология.- 1985,- Т. 21, №1,- С. 3-17.

77. Нечаев А.П. Траубенберг С.Е., Кочеткова A.A. Пищевая химия. СПб.: ГИ-ОРД, 2001.- 592 С.

78. Ногаллер А.М. Пищевая аллергия.- Москва: Медицина, 1975.- 192 с.

79. Нормы физиологических потребностей в пищевых веществах и энергии для различных групп населения СССР.-Утв. МЗ СССР 28 мая 1991 г.-№ 5786-91. //Вопр. питания.- 1992.- № 2.- С.9-15.

80. Нутритивная поддержка больных в критических состояниях / Попова Т.С., Шестопалов А.Е., Тамазашвили Т.Ш., Лейдерман И.Н.-М.: «М-Вести»,-2002,- 320 С.

81. Орлов Н.С. Исследование и оптимизация массообмена в ультрафильтрации // Мембранные процессы разделения жидких и газовых смесей. Труды МХТИ им. Д. И. Менделеева.- 1982.- № 122.- С.47-63.

82. Остерман JI.A. Хроматография белков и нуклеиновых кислот / отв. Ред. Георгиев Г.П.-М.:Наука.- 1985.- 536 С.

83. Павлов К.Ф. Романков П.Г., Носков A.A. Примеры и задачи по курсу процессов и аппаратов химической технологии. Л.: Химия, 1987.- 576 С.

84. Павский В.А. Иванова С.А., Лобасенко Б.А. Математическое описание непрерывного процесса мембранного концентрирования // Хранение и переработка сельхозсырья.- 2000.- №4.- С.39-40.

85. Павский В.А. Иванова С.А., Лобасенко Б.А. Расчет мембранного концентрирования методом теории массового обслуживания // Хранение и переработка сельхозсырья.- 2000а.- №1,- С.58-59.

86. Петровский К.С., Ванханен В.Д. Гигиена питания. М.: Медицина, 1982.- 528 С.

87. Плановский А.Н., Рамм В.М., Каган С.З. Процессы и аппараты химической технологии. М.: Изд-во химической литературы, 1962.- 846 С.

88. Позняковский В.М. Гигиенические основы питания, качество и безопасность пищевых продуктов: Учебник.- 5-е изд., перераб. и доп.- Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2007.- 455 С.

89. Покровский A.A. Белки одноклеточных. Медико-биологическая оценка и перспективы использования.-М.: АМН СССР.- 1971.- 83 С.

90. Покровский A.A. О биологической и пищевой ценности продуктов питания // Вопр. питания.- 1975.- № 3.- С. 25-35

91. Покровский A.A., Ертанов И.Д. Атакуемость белков пищевых продуктов протеолитическими ферментами in vitro// Вопр. питания.- 1965.- № 3.- С.38-44.

92. Порядков Л.Ф., Костылева М.Г., Мазо В.К., и др. Всасывание и иммунный ответ на овальбумин при различных способах его поступления в организм собак // Вопр. питания.- 1986.- № 6.- С.37-40

93. Потребности в энергии и белке. Доклад Объединенного консультативного совета экспертов ФАО-ВОЗ-УООН.-пер. с англ.-М: Медицина.-1987.-208 С.

94. Продукты специализированного лечебного питания / Рогов И.А., Токаев Э.С., Попова Т.С. и др. // Обзорная информация. Серия «Молочная промышленность».- М.: АгроНИИТЭИММП, 1991.- 36 С.

95. Производство продуктов детского питания: Учебник / Андреенко Л.Г., Блаттни Ц., Галачка К. и др./ под ред. П.Ф. Крашенинина и др.- М.: Агро-промиздат, 1989.- 336 С.

96. Просеков А.Ю. Шебукова A.C., Бабич О.О. Особенности питания детей, больных фенилкетонурией // Вестник Кемеровского технологического института пищевой промышленности.- Выпуск 5.- Кемерово: КемТИПП, 2007.- С. 83-85.

97. Просеков А.Ю. Юрьева С.Ю. Технология продуктов детского питания на молочной основе. Кемерово: КемТИПП, 2005.- 268 С.

98. Пыцкий В.И., Адрианова Н.В., Артомасова A.B. Аллергические заболевания,- М.:«Триада-Х».- 1999.- 470 С.

99. Рекомендуемые уровни потребления пищевых и биологически активных веществ. Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации. МР 2.3.1. 19150-04-М.-2004.

100. Руководство по детскому питанию/ Под ред. В.А.Тутельяна, И.Я.Коня.-М.-Медицинское информационное агенство.-2004.-662 С.

101. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов/ Под ред. И.М.Скурихина, В.А.Тутельяна М.: «БрандесМедицина». - 1998.-С. 37-42.

102. Рыбакова Е.В. Высокоэффективная ионная и жидкостная хроматография для анализа продуктов питания для детей // Пищевая промышленность.-2005.-№3,- С.24-26.

103. Рыбакова Е.П., Бушуева Т.В., Ладодо К.С. и др. Диетотерапия наследственных нарушений аминокислотного обмена // Вопросы детской диетологии.- 2005,- Т.З, №1.- С.11-17.

104. Сажинов Г.Ю. Разработка технологии гидролизатов молочных белков для продуктов лечебного питания. Автореф. дис. канд. техн. наук.- Вологда-Молочное, 1991.-20 С.

105. Сизенко Е.И. Проблемы детского питания // Хранение и переработка сель-хозсырья.- 2007.- №5,- С. 8-12.

106. Сизенко Е.И. Стратегия научного обеспечения развития конкурентоспособного производства отечественных продуктов питания // Хранение и переработка сельхозсырья.- 2006.- №1.- С.7-9.

107. Специализированные продукты питания для детей с различной патологией. Каталог./ Под ред. К.С.Ладодо, Г.Ю.Сажинова.-М.-Минсельхозпрод РФ.-2000.-200 С.

108. Спиричев В.Б., Шатнюк Л.Н., Позняковский В.М. Обогащение пищевых продуктов витаминами и минеральными веществами. Наука и технология / под общ. ред. В.Б. Спиричева.- Новосибирск: Сибирское университетское издательство, 2004,- 548 С.

109. Стан Е.Я. Казенны коровьего молока как источник «пищевых гормонов» // Сб.научн.трудов Института питания АМН СССР.-1986.-Т.7.- С.81-86.

110. Степанова Б.Н. Развитие индустрии детского питания на молочной основе в XXI века // Молочная промышленность.- 2001.- №12.- С.26-28.

111. Телишевская Л.Я. Белковые гидролизаты. Получение, состав, применение/ под ред. Панина А.Н.- М.: «Аграрная наука».-2000.- 295 С.

112. Теория и практика иммуноферментного анализа / A.M. Егорова, А.П. Осипов, Б.Б. Дзантиев и др.- М.: Высшая школа, 1991.- 288 С.

113. Тепел А. Химия и физика молока.- М.: Пищевая промышленность, 1979.323 С.

114. Терешкова Л.П. Гигиенические требования к продуктам детского питания // Пищевая промышленность.- 1996.- №9.- С. 15.

115. Тутельян В. А., Самсонов М. А. Справочник по диетологии.-М. : Медицина.- 2002,- 50 С.

116. Тутельян В.А. Медико-биологические требования к качеству и безопасности специализированных продуктов для детского питания // Пищевая промышленность.- 1996.- №9.- С. 13.

117. Тутельян В.А. Приоритеты и научное обеспечение реализации государственной политики здорового питания // В кн. «Федеральный и региональный аспекты политики здорового питания»: Материалы международного симпозиума.- Новосибирск, 2002.- С. 11-13.

118. Уголев A.M. Теория адекватного питания и трофология.- СПБ.- Наука.1991.- С.101-105.

119. Уголев A.M. Формирование новой концепции питания теория адекватного питания // Клиническая медицина.- 1986.- №6.- С.15-24

120. Уголев A.M. Эволюция пищеварения и принципы эволюции функций.- Л.: Наука, 1985.- 543 С.

121. Ультрафильтрационная обработка молочного сырья и тенденции его дальнейшей переработки / Чагаровский А.П., Гришин М.А., Чагаровский В.П. и др. // Обзорная информация. Серия «Молочная промышленность»,- М.: ЦНИИТЭИмясомолпром, 1986.- 57 С.

122. Фармакопейная статья предприятия ФСП 42 0308-1449-01. Стандарт качества лекарственного средства, до 06.07.2006 г., стр. 1-11.

123. Федоренко Б.Н. Современные мембранные системы в пищевой промышленности и биотехнологии: Обзорная информация.- М.: АгроНИИТЭИПП,1992.- 36 С.

124. Харитонов В.Д., Павло В.В., Писменская В.Н. Исследование основных факторов, влияющих на формирование качественных показателей новых молочных продуктов сложного сырьевого состава // Хранение и переработка сельхозсырья,- 2001.- №9.- С.7-10.

125. Хванг С.Т. Каммермейр К. Мембранные процессы разделения жидких смесей /Пер. с англ. Е.П. Моргуновой и Ю.Н. Жилина; под ред. Ю.И. Дыт-нерского,- М.: Химия, 1981,- 464 С.

126. Химический состав пищевых продуктов / под ред. Скурихина И.М., Волга-рева М.Н.-М.: «Агропромиздат».- 1987.- Т.2.- 360 С.

127. Химия пищи: Белки: Структура, функции, роль в питании / И.А. Рогов, JI.B. Антипова, Н.И. Дунченко и др. В 2-х кн. Кн.1- М.: Колос, 2000.- 384 С.

128. Храмцов A.A. Биомембранная технология молочных продуктов // Известия вузов. Пищевая технология.- 1999.- №2-3.- С.42-45.

129. Храмцов А.Г., Нестеренко П.Г. К вопросу ресурсосберегающей и эколого-щадящей переработки молочного сырья // Хранение и переработка сельхоз-сырья.- 2005.- №10.- С. 12-13.

130. Черников М.П. О предельной величине биологической ценности пищевых белков // Теоретические и клинические аспекты науки о пиатнии.-М.:АМН СССР,- 1986.- Т.7.- С.45-49.

131. Черников М.П. Потенциальная биологическая ценность пищевых белков и принцип Митчелла // Вопр. Мед.химии.- 1987.- Т.ЗЗ, № 2.- С.9-14.

132. Черников М.П. Протеолиз и биологическая ценность белков. Казенны как собственно пищевые белки.-М.Медицина.- 1975.- 231 С.

133. Шаззо Р.И., Ершова Л.Д., Павлова Г.Н., и др. Компьютерное моделирование белково-витаминных компонентов, сбалансированных по содержанию незаменимых аминокислот // Хранение и переработка сельхозсырья.- 2007.-№6.- С. 7-14.

134. Шатерников В.А., Высоцкий В.Г. Проблема белка в питании и основные проблемы её дальнейшей разработки // Вопр. Питания.- 1980.- № 5.- С.24-33.

135. Шатерников В.А., Марокко И.Н., Пятницкий H.H. и др. Экспериментальное воспроизведение пищевой анафилаксии у морских свинок // Вопросы питания.- 1982.- №2.- С. 27-31.

136. Широчина Т.Н., Трефилов Э.М., Ляная А.И. и др. Использование ультрафильтрации при производстве белковых гидролизатов // Биотехнология.-1985.-№5.- С.32-33.

137. Шлыгин Г.К. Роль пищеварительной системы в обмене веществ.-М.:Синергия.- 2001.- 232 С.

138. Шурыгин А.Я., Злищева Э.И., Тынянова М.А. и др. АС СССР № 571267.

139. Abubakar A., Saito Т., Kitazawa Н., et al. Structural analysis of new antihypertensive peptides derived from cheese whey protein by proteinase К digestion.//J. Dairy Sci.- 1998.- V.81, N 12.- P.3131-3138.

140. Agostoni C., Haschke F. Infant formulas. Recent developments and new issues// Minerva Pediatr.- 2003,- V.55, N 3.- P. 181-194.

141. Aimutis W.R.Bioactive properties of milk proteins with particular focus on anticariogenesis.//J. Nutr.- 2004.- V.134, N 4.- P.989S-995S.

142. Ait-Oukhatar N., Peres J.M., Bouhallab S. Bioavailability of caseinophos-phopeptide-bound iron// J. Lab. Clin. Med.- 2002.-V.140, N 4.-P.290-294.

143. Alting A.C., Van Berestein E.C.H. Method for the selective degradation of mlk protein in the presence of other milk proteins .- Европейское патентное приложение № 98/31239 (1998)

144. Amino acid content of foods and biological data on proteins.-Rome:FAO-WHO.-1970.-285 P.

145. Ayers J.S., Coolbear K.P., Elgar D.F. Process for isolating glycomacropeptide from dairy products with a phenylalanine impurity of 0.5% w/w.- ПАТЕНТ США № 6555659 (2003).

146. Ballevre О., Bovetto L., Charrier-Bromont S., et al. Organ specific nutrition.-Европейское патентное приложение № 99/13738 (1999a)

147. Ballevre О., Garcia-Rodenas С. Reiffers-Magnani K.,et al. Protein material for slow digestion and its use.- Европейское патентное приложение № 00/22937 (2000).

148. Belli D.C.A.JEigenmann P., Kahn J.-M., Polla B. Milk protein hydrolysates.-Европейский патент № 0,629,350,Al (1994).

149. Berk D.F., Breen M.D., Chmura J.N., et al. Nuritional formula containing hydro-lyzed protein and a fiber blend.- ПАТЕНТ США № 6017550 (2000).

150. Berk D.F., Breen M.D., Chmura J.N.,et al. Nutritional formula containing hy-drolysed protein and a fiber blend.- Европейское патентное приложение № 98/39980 (1998).

151. Beyer К. Hypoallergenicity: a principle for the treatment of food allergy// Nestle Nutr. Workshop Ser. Pediatr. Program.- 2007.- V.59.- P.37-43.

152. Bindels J.G., Van Baalen A., Hageman R.JJ. et al. Infant formula with improved protein content.- ПАТЕНТ США № 6863918 (2005).

153. Bjarnason J.B., Benediktsson B.//Protein hydrolysates produced with the use of cod proteases.- ПАТЕНТ США № 7070953(2006).

154. Block R.J.,Mitchell H.H. The correlation of the amino acid composition of proteins with their nutritive value// Nutr.Abstr.Rev.-1946/47.-V.16.-P.249-278

155. Boza J.J., Jiménez J., Martinez O., et al. Nutritional value and antigenicity of two milk protein hydrolysates in rats and guinea pigs.// J. Nutr.- 1994 .- V.124. N 10.- P.1978-1986.

156. Bradburn N.C., Wappner .RS., Lemons J.A. Lactation and phenylketonuria.// Am J Perinatol. 1985 Apr;2(2): 138-141

157. Bredehorst R., David K. What establishes a protein as an allergen?// J.Chromatogr. Ser. В. Biomed. Sci. Appl.- 2001 .- V.756.- N 1-2.- P.33-40.

158. Brule G. Roger L., Fauquant J., Piot M. Casein phosphopeptide composition.-ПАТЕНТ США № 4816398 (1989).

159. Brule G., Roger L., Fauquant J., Piot M. Nutrient composition containing non-phosphorylated peptides from casin-based material.- ПАТЕНТ США № 5334408 (1994).

160. Buchanan B.B., del Val G., Lozano R. M. , et al. Increasing the digestibility of food proteins by thioredoxin reduction.- ПАТЕНТ США № 5952034 (1999)

161. Burgard P., Bremer H.J., Bührdel P., et al. Rationale for the German recommendations for phenylalanine level control in phenylketonuria 1997.// Eur. J. Pediatr.-1999.- V.158, N 1.- P.46-54.

162. Cadee J.A., Chang C.Y., Chen C.W., et al. Bovine casein hydrolysate (cl2 Peptide) reduces blood pressure in prehypertensive subjects.// Am. J. Hypertens.-2007.- V.20, N 1.- P. 1-5.

163. Caffarelli C., Plebani A., Poiesi C., et al. Determination of allergenicity to three cow's milk hydrolysates and an amino acid-derived formula in children with cow's milk allergy// Clin. Exp. Allergy.- 2002.-V.32, N 1.-P.74-79.

164. Calbet J.A., Hoist J.J. Gastric emptying, gastric secretion and enterogastrone response after administration of milk proteins or their peptide hydrolysates in humans.//Eur. J. Nutr.- 2004 .- V.43, N 3.- P. 127-139.

165. Campos M.S. Lopez-Aliaga I., Alferez M.J., et al. Effects of goats' or cows' milks on nutritive utilization of calcium and phosphorus in rats with intestinal resection.//Br. J. Nutr.- 2003.-V.90, N 1.-P.61-67.

166. Cantani A., Micera M. Allergenicity of a whey hypoallergenic formula in genetically at risk babies: four case reports.// Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci.- 2005.-V.9, N 3.- P.179-182.

167. Cantani A., Micera M. Immunogenicity of hydrolysate formulas in children (part 1). Analysis of 202 reactions// J. Investig. Allergol. Clin. Immunol.-2000.-V.10, N 5.-261-276.

168. Cantani A., Micera M. Immunogenicity of hydrolysate formulas in children Part 2.//J. Invest.Allergol. Clin. Immunol.- 2001.-V.il, N 1.-P.21-26.

169. Cao J., Henry P.R., Guo R., e.a. Chemical characteristics and relative bioavailability of supplemental organic zinc sources for poultry and ruminants// J. Anim. Sci.- 2000.- V.78, № 8.-P.2039-2054.

170. Carlson M.D. Recent advances in newborn screening for neurometabolic disorders// Curr. Opin. Neurol.- 2004.- V.17, N 2.- P.133-138.

171. Carpenter K. Individual amino acid levels and bioavailability// in: Protein quality for humans: assessment and in vitro estimation / ed. by Budwell C.E.,et al.-Westport, CN.-AVI Publ.Co.-1980.-P.90-120.

172. Chatterton D.E.W., Berntsen G., Albertsen K., Pedersen В. E. Method of producing a peptide mixture.- ПАТЕНТ США № 6060269 (2000).

173. Cheruppanpullil R., Parigi R.K.,Vishweshwariah P. Process for the preparation of a high protein hydrolysate.- ПАТЕНТ США № 6420133 (2002).

174. Chervan M., Deeslie W.D. Protein hydrolysis.- ПАТЕНТ CILIA № 4443540 (1984).

175. Cho M.J., Singer D.A., Lin S.H. Short-chained peptide material.- ПАТЕНТ США№ 6221423 (2001)

176. Cho M.J., Unklesbay N., Hsieh F.H., Clarke A.D. Hydrophobicity of bitter peptides from soy protein hydrolysates.//J. Agric. Food Chem.- 2004 .- V.52, N 19.- P.5895-5901.

177. Cockburn F., Clark B.J Recommendations for protein and amino acid intake in phenylketonuric patients.// Eur. J.Pediatr.- 1996 .- V.155, Suppl 1.- P.S125-S129.

178. Codex Alimentarius Volume 4. Foods for special dietary uses (including foods for infants and children).- FAO-WHO.-Rome.-1994.

179. Collier S., Fulhan J., Duggan C. Nutrition for the pediatric office: update on vitamins, infant feeding and food allergies// Curr. Opin .Pediatr.-2004.- V.16, N 3.-P.314-320.

180. Columbus O. L., Lanzilotta R. P., Wong T.M. Enzyme modified soy protein for use as an egg white substitute oyce.- ПАТЕНТ США № 4632903 (1986).

181. Cordle C.T., Lin S.-B.,Nelles L.P., Thomas R.L.Debittered protein product having improved antigenicity and method for manufacture.- ПАТЕНТ США № 5837312 (1998).

182. Courtney-Martin G., Bross R. Raffi M., et al.Phenylalanine requirement in children with classical PKU determined by indicator amino acid oxidation.// Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab.-2002.- V.283, N 6.- P.E1249-E1256.

183. Crowley С., Koch R., Fishier K., et al. Clinical trial of'off diet' older phenylke-tonurics with a new phenylalanine-free product.//J. Ment. Defic. Res.- 1990 .-V.34, Pt 4.-P.361-369.

184. Deitch E.A. Multiple organ failure // Ann.Surg.- 1992.- V.216.- P. 117-127.

185. Diaz M., Decker E.A. Antioxidant mechanisms of caseinophosphopeptides and casein hydrolysates and their application in ground beef.// J. Agric. Food Chem.-2004.- V.52, N 26.- P.8208-8213.

186. Dietary reference intakes. Applications in dietary assessment-Washington D.C.: National Academy Press.-2000.- 290 P.

187. Drogari E., Smith I., Beasley M., Lloyd J.K Timing of strict diet in relation to fetal damage in maternal phenylketonuria. An international collaborative study by the MRC/DHSS Phenylketonuria Register// Lancet.- 1987 .- V.2, N 8565.- P.927-930.

188. Dupont C., De Boissieu D. Formula feeding during cow's milk allergy// Minerva Pediatr.- 2003.-V.55, N 3.-P.209-216.

189. Edens L., Schuurhuizen P., Simonetti A. L. M. Method for producing a protein hydrolysate .- ПАТЕНТ США № 6372282 (2002).

190. Ehn B.M., Allmere Т., Telemo E., et al. Modification of IgE binding to beta-lactoglobulin by fermentation and proteolysis of cow's milk.//J. Agric. Food Chem.- 2005,- V.53, N 9.- P.3743-3748

191. Elias R.J., Bridgewater J.D., Yachet R.W., et al. Antioxidant mechanisms of enzymatic hydrolysates of beta-lactoglobulin in food lipid dispersions.// J. Agric. Food Chem.- 2006.- V.54, N 25.- P.9565-9572.

192. Erasmus C. Nutritional formula.- ПАТЕНТ США № 5126162 (1992).

193. Eriksen S., Nielsen P.M. Method for production of pea protein hydrolyzate.-ПАТЕНТ США № 5520935 (1996)

194. Ernster J.H. Milk protein hydrolysate and process of preparation.- ПАТЕНТ США №4600588 (1986).

195. Etzel M.R. Production of kappa-casein macropeptide for nutraceutical uses ПАТЕНТ США № 5968586 (1999).

196. Faigh J.G., Stuart M.J., Talbot A. Enzymatic hydrolysis of proteins.- Европейский патент № 0,325,986,A2 (1989).

197. Fairclough P.D.,Hegarty J.E.,Silk D.B.A., Clark M.L. Comparison of the absorption of two protein hydrolysates and their effects on water and electrolyte movement in human jejunum// Gut.-1980.-V.10.-P.829-834.

198. FAO/WHO energy and protein requirements. WHO Techn.Rep.-Ser.N 522.-Geneva, 1973.-P.53-65.

199. Farr D.R.„ Magnolato D. Process for debittering a protein hydrolysate and the debittered hydrolysate obtained by this process.- ПАТЕНТ США № 4293583 (1981)

200. Feillet F. Phenylketonuria.// Presse Med.- 2006.- V.35, N 3, Pt 2.- P.502-508

201. Fiat A.-M., Levy-Toledano S., Caen J.P., Jolles P. Biologically active peptides of casein and lactoferrin implicated in platelet function// J.Dairy Res.-1989.-V.56.-P.351-355.

202. Fields R. The measurement of amino groups in proteins and peptides// Biochem. J. 1971. -V. 124. -P. 581-590

203. FitzGerald R.J., O'Cuinn G. Enzymatic debittering of food protein hydrolys-ates.//Biotechnol. Adv.- 2006.-V.24, N 2.- P.234-237.

204. Frenhani P.B., Burini R.C. Mechanism of action and control in the digestion of proteins and peptides in humans.- Arq Gastroenterol. -1999a .-V. 36, N 3.-P.139-147.

205. Frenhani P.B., Burini R.C. Mechanisms of absorption of amino acids and oligopeptides. Control and implications in human diet therapy// Arq. Gastroenterol. -1999b.-V.36, N 4.-P.227-237.

206. Fritsche R. Induction of oral tolerance to cow's milk proteins in rats fed with a whey protein hydrolysate// Nutr. Res.-1998.-V. 18, N 8.-P. 1335-1341.

207. Fritsche R., Adel-Patient K., Bernard H., et al. IgE-mediated rat mast cell triggering with tryptic and synthetic peptides of bovine beta-lactoglobulin.// Int. Arch. Allergy Immunol.- 2005.-V.138, N 4.- P.291-297.

208. Fritsche R., Pahud J.J., Pecquet S., Pfeifer A. Induction of systemic immunologic tolerance to beta-lactoglobulin by oral administration of a whey protein hydrolysate.//J. Allergy Clin. Immunol.- 1997 V.100, N 2).- P.266-273.

209. Fritsche R., Pecquet S., Bovetto L., Maynard F. Hypoallergenic composition containing tolerogenic peptides.- ПАТЕНТ США № 6737076 (2004).

210. Fritsche R.,Recquet S., Bovetto L.,Maynard F. A hypoallergenic composition containing tolerogenc peptides inducing oral tolerance.- Европейское патентное приложение № 00/42863 (2000)

211. Fuchs E.C., Garcia-Rodenas C.L., Guigoz Y. , et al. Method to provide nutritional composition.- ПАТЕНТ США № 6887850 (2005).

212. Garcia-Rodenas С. L., Finot P.-A., Maire J.-C.,et al. Nutritional composition intended for specific gastro-intestinal maturation in premature mammals.- ПАТЕНТ США № 6733770 (2004).

213. Garcia-Rodenas C.L., Finot P.-A., Maire J.-C.,et al. Nutritional composition intended for specific gastrointestinal maturation in premature mammals.- Европейский патент № 1,034,704,Al (2000)

214. Girsh L.S. Hypoallergenic milk products and process of making .-ПАТЕНТ США №5064674 (1991).

215. Girsh L.S. Hypoallergenic milk products and process of making.- Европейский патент № 0,469,206,В1 (1992).

216. Girsh L.S. Hypoallergenic milk products and process of making.- ПАТЕНТ США №4954361 (1990)

217. Girsh L.S. Hypoallergenic milk products and process of making.- ПАТЕНТ США №5186971 (1993).

218. Girsh L.S. Hypoallergenic milk products from natural and/or synthetic components and process of manufacture.- Европейский патент № 0,531,142,В1 (1993b).

219. Girsh L.S. Hypoallergenic milk products from natural and/or synthetic components and process of making.- ПАТЕНТ США № 5204134 (1993a).

220. Gjesing В., Osterballe O., Schwartz B. Antigen-specific IgE antobodies against antigenic components in cow's milk and milk substitutes// Allergy.- 1986.- V.41, №1.- P.51-56.

221. Gortier I., Urbanek R., Forster J. Characterization of antigens and allergens in hypoallergenic infant formulae// Eur. J. Pediatr.- 1995.-V.154, N 4.- P.289-294.

222. Groneberg D.A., Döring F., Eynott P.R.,et al. Intestinal peptide transport: ex vivo uptake studies and localization of peptide carrier PEPT1.//Am. J. Physiol. -2001 .-V.281, N 3.-P.G697-G704.

223. Hajos Gy., Gelenczer E., Hussein S., Polgar M. Antigenicity of soy proteins// Hung. Agr.Res.-1995 .-V.4, N 1.-P.30-32

224. Han Y.S., Park H.Y., Ahn K.M., et al. Short-term effect of partially hydrolyzed formula on the prevention of development of atopic dermatitis in infants at high risk.// J. Korean Med. Sei.- 2003.- V.18, N 4.- P.547-551.

225. Hansen M., Sandstrom В., Lonnerdal В. The effect of casein phosphopeptides on zinc and calcium absorption from high phytate infant diets assessed in rat pups and Caco-2 cells// Pediatr Res.- 1996.- V.40, №4.- P.547-552

226. Hartmann R., Wal J.M., Bernard H., Pentzien A.K. Cytotoxic and allergenic potential of bioactive proteins and peptides// Curr. Pharm. Des.- 2007.- V.13, N 9.-P.897-920.

227. Hayasawa H., Tamura Y., Miyakawa H., et al. Protein hydrolyzates, process for producing the same and drinks and foods containing the protein hydrolyzates.-ПАТЕНТ США № 6908633 (2005).

228. Hays Т., Wood R.A. A systematic review of the role of hydrolyzed infant formulas in allergy prevention.//Arch. Pediatr. Adolesc. Med.- 2005 V.159, N 9.-P.810-816.

229. Hegarty J.E.,Fairclough P.D.,Moriarty K.J.,et al. Effects of concentration on in vivo absorption of peptide containing protein hydrolysates// Gut.-1982.-V.23, N4.-P.304-309.

230. Henningfield M.,Mcewen J.W., Miller R.H. Nutritional product for trauma and surgery patients.- Европейский патент № 0,630,181,В1 (1999).

231. Hemández-Ledesma В., Dávalos A., Bartolomé В, Amigo L. Preparation of antioxidant enzymatic hydrolysates from alpha-lactalbumin and beta-lactoglobulin. Identification of active peptides by HPLC-MS/MS//J. Agrie. Food Chem.- 2005 V.53, N 3.- P.588-593.

232. Hernández-Ledesma В., Miguel M., Amigo L., et al. Effect of simulated gastrointestinal digestion on the antihypertensive properties of synthetic beta-lactoglobulin peptide sequences.// J. Dairy Res.- 2007 .-V.74, N 3.-P.336-339.

233. Hernández-Ledesma В., Ramos M., Recio I., Amigo L. Effect of beta-lactoglobulin hydrolysis with thermolysin under denaturing temperatures on the release of bioactive peptides.// J. Chromatogr. A.- 2006 .- V.l 116, N 1-2.- P.31-37.

234. Horrobin D.F., Lindmark L. Nutrition.- Европейский патент № 0,490,561,В1 (1992).

235. Host A., Halken S. Hypoallergenic formulas when, to whom and how long: after more than 15 years we know the right indication!// Allergy.- 2004 .- V.59, Suppl 78.- P.45-52.

236. Huang Q. Coleman J.W., Stanworth D.R. Investigation of the allergenicity of b-lactoglobulin and its clevage fragments // Int. Arch. Allergy and Appl. Immunol.-1985.- V.78, №4,- P. 337-344.

237. Hugli Т.Е., Moore S.J. Determination of tryptophan content of proteins by ion exchange chromatography of alkaline hydrolysates// J.Biol.Chem.-1972.-V.247, N 9.-P.2828-2834.

238. Humiski L.M., Aluko R.E. Physicochemical and bitterness properties of enzymatic pea protein hydrolysates// J. Food Sci.- 2007.- V.72, N 8.- P.S605-S611.

239. Isolauri E., Metsaniitty L., Korhonen H., et al Methods of preventing or treating allergies.- ПАТЕНТ США № 6506380 (2003).

240. Jost R., Meister N., Monti J. C. Preparation of a hypoallergenic whey protein hydrolyzate and food.- ПАТЕНТ США № 5039532 (1991).

241. Jost R., Meister N., Monti J.C. Process for preparing a whey protein hydrolyzate and a hypoallergenic foodstuff.-Европейский патент № 0,321,603,A1(1989).

242. Jost R., Meister N.,Monti J.C. Process for the preparation of a lactoserum protein hydrolysate and a hypoallergenic food.- Европейский патент № 0,322,589,B1 (1989a).

243. Kaczmarski M., Wasilewska J., Lasota M. Hypersensitivity to hydrolyzed cow's milk protein formula in infants and young children with atopic eczema/dermatitis syndrome with cow's milk protein allergy.// Rocz. Akad. Med. Bialymst.- 2005.-V.50.- P.274-8.

244. Kahn J.-M.,Mendy F.,Roger L. Protein hydrolysates.- Европейский патент № 0,421,309,B1 (1991).

245. Kammoun R., Bejar S., Ellouz R. Protein size distribution and inhibitory effect of wheat hydrolysates on Neutrase.// Bioresour. Technol.- 2003.- V.90, N 3.-P.249-254.

246. Kawakami H.,Yakabe T.,Idota T. Antiallergy agent and nutritional composition containing glutamine and process for the production thereof.- Европейский патент № 0,665,012, A1 (1995).

247. Kaye C.I., Accurso F., La Franchi S., et al. Introduction to the newborn screening fact sheets.//Pediatrics.- 2006.- V.l 18, N 3.- P. 1304-1312.

248. Kelleher S.L., Chatterton D., Nielsen K., Lonnerdal B. Glycomacropeptide and alpha-lactalbumin supplementation of infant formula affects growth and nutritional status in infant rhesus monkeys.// Am. J. Clin. Nutr.- 2003.- V.77, N5.-P.1261-1268.

249. Keohane P.P., Grimble G.K.,Brown B.,et al. Influence of protein composition and hydrolysis method on intestinal absorption of protein in man// Gut.-1985.-V.26, N 9.-P.907-913.

250. Kim H.O., Li-Chan E.C. Quantitative structure-activity relationship study of bitter peptides.// J. Agric. Food Chem.- 2006 .- V.54, N 26,- P.10102-10111.

251. Kim S.B. Seo I.S., Khan M.A., et al. Enzymatic hydrolysis of heated whey: iron-binding ability of peptides and antigenic protein fractions./Л. Dairy Sci.- 2007a.-V.90, N 9.- P.4033-4042.

252. Kim S.B., Ki K.S., Khan M.A., et al. Peptic and tryptic hydrolysis of native and heated whey protein to reduce its antigenicity.// J. Dairy Sci.- 2007.- V.90, N 9.-P.4043-4050.

253. Kimura K., Arai S. Oligopeptide mixtures produced from soy protein by enzymatic modification and their nutritional qualities Evaluated by feeding tests with normal and malnourished rats// J.Nutr.Sci.Vitaminol.-1988.-V.34.-P.375-386.

254. Kitagawa Т., Owada M., Aoki K., et al. Treatment of phenylketonuria with a formula consisting of low-phenylalanine peptide. A collaborative study.// Enzyme.- 1987.-V.38, N 1-4.-P.321-327.

255. Kitts D.D., Weiler K. Bioactive proteins and peptides from food sources. Applications of bioprocesses used in isolation and recovery.//Curr. Pharm. Des.- 2003.-V.9, N 16.- P.1309-1323.

256. Kodera Т., Asano M., Miwa Т., Nio N.Method for producing a protein hydrolysate with low bitterness.- ПАТЕНТ США № 6455273 (2002).

257. Korhonen H., Pihlanto A. Food-derived bioactive peptides opportunities for designing future foods.// Curr. Pharm. Des.- 2003.- V.9, N 16.- P.1297-1308.

258. Kumta NB. Inborn errors of metabolism (IEM)- an Indian perspective// Indian J. Pediatr.- 2005 .-V.72, N 4.-P.325-332.

259. Kwon S.S.Y., Vadehra D.V. Protein hydrolysis.- ПАТЕНТ США № 6214585 (2001)

260. Lee H.W., Keum E.H., Lee S.J., et.al. Allergenicity of proteolytic hydrolysates of the soybean 1 IS globulin//!. Food Sci.- 2007.- V.72, N 3.- P.C168-C172.

261. Li L., Yang .Z.Y., Yang X.Q., et al. Debittering effect of Actinomucor elegans peptidases on soybean protein hydrolysates//J. Ind. Microbiol. Biotechnol.- 2008.-V.35, N 1.- P.41-47.

262. Lo C., Kleinman R.E. Infant formula, past and future: opportunities for improvement// Am. J. Clin. Nutr.-1996.- V. 63, N 4.- P. 646S-650S.

263. Loosen P.C., Bressollier P.R., Julien R.A., et al. Method for preparing an enzymatic hydrolysate.- ПАТЕНТ США № 5356637 (1994)

264. Loosen P.С., Bressollier P.R., Julien R.A., et al. Method for preparing an enzymatic hydrolyzate.- Европейское патентное приложение № 91/10369 (1991)

265. MacDonald A., Chakrapani A., Hendriksz C. Protein substitute dosage in PKU: how much do young patients need?// Arch. Dis.Child.- 2006 .- V.91, N 7.588-593.

266. Mahmood M.T. Enteral nutritional hypoallergenic formula.- Европейский патент №0,189,161,В1 (1991).

267. Maldonado J., Gil A., Narbona E., Molina J.A. Special formulas in infant nutrition: a review// Early Hum. Dev.- 1998.- V.53, Suppl.l- P.S23-S32.

268. Mark D.A., Stalker L. Low caloric density enteral formulaton designed to reduce diarrhea in tube-fed patients.- Европейский патент № 0,570,791,A2 (1993).

269. Marshall J., Cook D., Christou N. Multiple organ disfunction score: descriptor of a complex clinical outcome// Crit. Care Med.-1995,- V.23, N 10.- P. 1638-1651

270. Martinez S. В., Leary H. L., Nichols D.J. Milk protein partial hydrolysate and process for preparation thereof.- ПАТЕНТ США № 5589357 (1996)

271. Martinez S.B., Leary H.L., Nichols D.J. Milk protein partial hydrolysate and process for preparation thereof. -Европейский патент № 0,631,731,A1 (1994 a).

272. Martinez S.B., Leary H.L., Nichols D.J. Milk protein partial hydrolysate and infant formula containing same ПАТЕНТ США № 5405637 (1995)

273. Maubois J.-L., Brule G., Piot M. Total enzymatic hydrolysate from whey proteins and process of obtaining the same.- ПАТЕНТ США № 4427658 (1984).

274. McBurney M.L. The gut: central organ in nutrient requirements and metabolism // Can.J.Physiol.Pharmacol.- 1994.-V.72.-P.260-265

275. Meakins J., Marshall J. The gastrointestinal tract: the motor of MOF// Arch.Surg.-1986.-V. 121 .-P. 197-201.

276. Medical Research Council Working Party on Phenylketonuria. Recommendations on the dietary management of phenylketonuria// Arch.Dis. Child.- 1993.-V. 68.- P.426-427.

277. Megias C., Pedroche J., Yust M.M. et al. Affinity purification of copper-chelating peptides from sunflower protein hydrolysates.// J. Agric. Food Chem.-2007.- V.55, N 16.- P.6509-6514.

278. Megias C., Pedroche J., Yust M.M., et al. Affinity purification of copper chelating peptides from chickpea protein hydrolysates.// Agric. Food Chem.- 2007a.-V.55, N 10.- P.3949-3954.

279. Meisel H. Biochemical properties of peptides encrypted in bovine milk proteins.// Curr. Med. Chem.- 2005.- V.12, N 16).- P. 1905-1919.

280. Meisel H., Fritser H. Chemical characterization of bioactive peptides from in vivo digests of casein // J.Dairy Res.-1989.-V.56.-P.343-349.

281. Mendy F., Kahn J.-M., Roger L. Whey protein hydrolysates and mixtures thereof with casein and/or soy protein hydrolysates.- ПАТЕНТ США № 5780439 (1998).

282. Mennella J.A., Griffin C.E., Beauchamp G.K. Flavor programming during infancy.//Pediatrics.- 2004.- V.l 13, N 4.- P.840-845.

283. Merrill D.A., Hunter E.A. Method for producing a gluten-free peptide preparation and preparation thus obtained.- ПАТЕНТ США № 6692933 (2004).

284. Miguel M., Aleixandre A. Antihypertensive peptides derived from egg proteins.//! Nutr.- 2006.- V.136, N 6.- P.1457-1460.

285. Miguel M., Aleixandre M.A., Ramos M., Lopez-Fandino R. Effect of simulated gastrointestinal digestion on the antihypertensive properties of ACE-inhibitory peptides derived from ovalbumin.// J. Agric Food Chem.- 2006a.- V. 54, N 3. P.726-31.

286. Mira N.V., Marquez U.M. Importance of the diagnoses and treatment of phenylketonuria.-Rev. Saude Publica.- 2000.- V.34, N 1.- P.86-96.

287. Mizuno S., Nishimura S., Matsuura Ket al. Release of short and proline-rich antihypertensive peptides from casein hydrolysate with an Aspergillus oryzae protease. // J. Dairy Sci.- 2004,- V.87, N 10.- P.3183-3188.

288. MollerA.B., Andrews A.T.,Cheeseman G.C.Chemical changes in ultra heat treated milk during storage. II. Lactoselysine and fructoselysine formation by Maillard reaction// J.Dairy Sci.-1977.-V.44, N 2.-P.267-275.

289. Moore S.J. On the determination of cysteine as cysteic acid// J.Biol.Chem.-1963.-V.238, N 1.-P.235-237

290. Motzfeldt K., Lilje R., Nylander G. Breastfeeding in phenylketonuria.// Acta Paediatr. Suppl.- 1999 .- V.88, N 432.- P.25-27.

291. Nakamori, Т., Akasaka Yoshimi., Maeda H. Process for producing soybean protein hydrolysate.- ПАТЕНТ США № 6537597 (2003).

292. Neumuller W. Method for preparing albumin hydrolysates.- ПАТЕНТ США № 6555336 (2003).

293. Nicodemus С., Philip G., Jones N. et al. Integrated clinical experience with tolerogenic peptides// Int. Arch. Allergy. Appl. Immunol.-1997.- V.113.- P. 326328.

294. Nielsen P.M. Casein hydrolysate and method for production of such casein hydrolysate.- Европейский патент № 0,610,411,В1(1994а).

295. Nielsen P.M. Casein hydrolyzate and method for production of such casein hydrolyzate.- ПАТЕНТ США № 5486461 (1996).

296. Nielsen P.M. Method for production of a milk protein hydrolyzate, the milk protein hydrolyzate and use of the milk protein hydrolyzate.- Европейское патентное приложение № 96/13174 (1996a)

297. Nielsen P.M., Eriksen S., Hansen O. R.Method for production of a whey protein hydrolyzate.- ПАТЕНТ США № 5691165 (1997)

298. Nielsen P.M., Eriksen S., Hansen O.R. , et al. Method for production of a vegetable protein hydrolyzate with proteases.- ПАТЕНТ США № 5716801 (1998).

299. Nielsen P.M., Hvass P. Method for production of a whey protein hydrolysate and a whey protein hydrolysate.- Европейский патент № 0,642,307,В1 (1995a).

300. Niggemann В., Binder С., Klettke U., Wahn U. In vivo and in vitro studies on the residual allergenicity of partially hydrolysed infant formulae// Acta Paediatr.-1999.- V.88, N 4.-P.394-398.

301. Nutritional evaluation of protein food/ ed. by Pellett L.,Young V.R.-Tokyo: United Nations University edition.-1980.-154 P.

302. Nutritional formula for phenylketonuria patients.- Европейское патентное приложение № 98/08402 (1998)

303. O'Callaghan D.M., Donnelly W.J. Hypoallergenic whey protein hydrolysate.-Европейское патентное приложение № 93/04593 (1993)

304. Olofsson M., Buhler M., Wood R. Process for the preparation of a purified protein hydrolysate Патент США № 4293571 (1981).

305. Osborn D.A., Sinn J. Formulas containing hydrolysed protein for prevention of allergy and food intolerance in infants.// Cochrane Database Syst. Rev.- 2006 .- N 4.- CD 003664.

306. Outinen M. Т., Tossavainen O., Harju M., Linko P. Method for removing phenylalanine from proteinaceous compositions, a product so obtained and use thereof.- ПАТЕНТ США № 5547687 (1996).

307. Owada M., Aoki K., Kitagawa T. Taste preferences and feeding behaviour in children with phenylketonuria on a semisynthetic diet.// Eur. J. Pediatr.- 2000 .V. 159, N 11.- P.846-850.

308. Peres J.M., Bouhallab S., Petit C., e.a. Improvement of zinc intestinal absorption and reduction of zinc/iron interaction using metal bound to the caseinophos-phopeptide 1-25 of beta-casein// Reprod. Nutr. Dev.- 1998.- V.38, № 4.- P. 465472.

309. Poustie VJ, Rutherford P. Dietary interventions for phenylketonuria.// Cochrane Database Syst. Rev.- 2000.- V.2.-CD001304.

310. Protein Quality Evaluation. Rep. of Joint FAO/WHO Expert Consultation.- FAO of UN.- Rome.- 1990.-66 P.

311. Radha C., Govindaraju K., Sindhu K.T.C., et al. Process for the preparation of high arginine peptides.- ПАТЕНТ США № 7091001 (2006).

312. Ragno V., Giampietro P.G., Bruno G., Businco L. Allergenicity of milk protein hydrolysate formulae in children with cow's milk allergy// Eur. J. Pediatr.- 1993.-Y.152, N 9.-P.760-762.

313. Raksakulthai R., Haard N.F. Exopeptidases and their application to reduce bitterness in food: a review// Crit. Rev. Food Sci. Nutr.- 2003.-V.43, N 4.-P.401-445.

314. Rao A.R., Gopala R.A., Chandrasekhara H. N. N. et al. Process for preparation of protein-hydrolysate from soy flour.- ПАТЕНТ США № 6896917(2005)

315. Renz H., Herz U. Immune mechanisms of peripheral tolerance// Nutr.Res.-1998.-V.18, N 8.-P.1327-1333

316. Ringseis R., Matthes В., Lehmann V., et al. Peptides and hydrolysates from casein and soy protein modulate the release of vasoactive substances from human aortic endothelial cells.//Biochim. Biophys. Acta.- 2005.-V.1721. N 1-3.-P.89-97.

317. Roberts P.R., Burney J.D., Black K.W., Zaloga G.P. Effect of chain length on absorption of biologically active peptides from the gastrointestinal tract// Digestion. -1999.-V.60, N 4.-P.332-337.

318. Rosendal A., Barkholt V. Detection of potentially allergenic material in 12 hydrolyzed milk formulas// J. Dairy Sci.- 2000.- V. 83, N 10.-P.2200-2210.

319. Roy C.C, Bouthillier L., Seidman E., Levy E. New lipids in enteral feeding.// Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care.- 2004.- V.7, N 2.-P.117-22.

320. Rutherford P., Poustie V.J. Protein substitute for children and adults with phenylketonuria.// Cochrane Database Syst Rev.- 2005.-V.19, N 4.- CD004731.

321. Said A.K., Hegsted D.M. Response of adult rats to low dietary levels of essential amino acids// J.Nutr.-1970.-V.100.-P.1363-1376.

322. Sampson H.A., Bernhisel-Broadbent J.,Yang E. Safety of casein hydrolysate formula in children with cow milk allergy // J.Pediatr.- 1991.-V.118, N 4, Pt.l.-P.520-525.

323. Samuelsson E.-G., Poulsen O.M. Peptide preparation, a process for producing it and use of the peptide preparation.- ПАТЕНТ США № 5112812 (1992).

324. Sasaki M., Bamba T.,Hosoda S. Intestinal brush border membrane enzyme activities of rats fed chemically defined diets containing oligopeptides or amino acids as the nitrogen source.-J.Clin.Biochem.Nutr.-1989.-V.7, N 3.-P.231-241.

325. Satoh M., Matsumoto Y. Hasegawa K., et al. Process for preparing hydrolyzed products of soy protein.- ПАТЕНТ США № 4757007 (1988).

326. Satterlee C.D.,Marshall M.F.,Tennyson J.M. Measuring protein quality// J. Am.Oil.Chem. Soc.-1979.-V,56, N 2.-P. 103-110.

327. Savino F., Cresi F., Maccario S., et al. "Minor" feeding problems during the first months of life: effect of a partially hydrolysed milk formula containing fructo-and galacto-oligosaccharides.//Acta Paediatr/ Suppl.- 2003 . V.91, N 441.- P.86-90.

328. Saylor J.D., Bahna S.L. Anaphylaxis to casein hydrolysate formula// J.Pediatr.-1991.-V.118, N 1.-P.71-74.

329. Schlothauer R.-C., Scholium L.M., Reid J. R., et al. Bioactive whey protein hydrolysate.- ПАТЕНТ США № 7148034 (2006).

330. Schmidl M.K., Kvamme C. Enteral nutritional composition having balanced amino acid profile.- ПАТЕНТ США № 5504072 (1996)

331. Schrauzer G.N. Nutritional selenium supplements: products types, quality and safety//J.Am.Coll.Nutr. 2001.- V. 20, N l.-P. 1-4.

332. Schudziarra V.,Schick R.,Schmidt R.,Brantl V. Role of exogenous and endogenous opiates in the regulation of pancreatic and gastric endocrine function// Opioid peptides Periphery Proc.Int.Symp., Rome, 23-25 May 1984.-Amsterdam et al.-1984.-P.255-263.

333. Shimamura S. , Tamura Y., Miyakawa H. Peptide mixture and products thereof. -ПАТЕНТ США № 5952193 (1999).

334. Shimamura S., Tamura Y., Miyakawa H., et al. Peptide mixture and products thereof .-ПАТЕНТ США № 6395508 (2002).

335. Shimizu N., Dairiki K., Ogawa S., Kaneko T. Dietary whey protein hydrolysate suppresses development of atopic dermatitis-like skin lesions induced by mite antigen in NC/Nga mice.// Allergol. Int.-2006.- V.55, N 2.- P. 185-189.

336. Silk D.B.A., Marris T.C.,Addison J.M.,et.al. Absorption of amino acids from an amino acid mixture simulating casein and a tryptic hydrolysate of casein in man// Clin.Sci.Mol.Med.-1973.-V.45, N 5.-P.715-719.

337. Silk D.B.A.,Clark M.L. Jejunal absorption of an amino acid mixture simulating casein and an enzymic hydrolysate of casein prepared from oral administration to normal adults// Brit.J.Nutr.-l975.-V.33, N.1.-P.95-100.

338. Sindayikengera S., Xia W.S. Nutritional evaluation of caseins and whey proteins and their hydrolysates from Protamex.// J.Zhejiang. Univ. Sci. B.- 2006.- V.7, N 2.- P.90-98.

339. Smith I. Treatment of phenylalanine hydroxylase deficiency. Acta Paediatr.-1994.-V. 407, Suppl.- P. 60-65.

340. Souba W.W. Salloum R.M., Austgen T.R. The gut: a key organ following injury and infection // Riv. Ital. Nutr. Parent, ed Ent.- 1991.- V.9, №1.- P.7-14.

341. Spellman D., Kenny P., O'Cuinn G., FitzGerald R.J. Aggregation properties of whey protein hydrolysates generated with Bacillus licheniformis proteinase activities. //J. Agric. Food Chem.- 2005a .- V.53, N 4,- P. 1258-1265.

342. Spellman D., O'Cuinn G., FitzGerald R.J. Physicochemical and sensory characteristics of whey protein hydrolysates generated at different total solids levels. //J. Dairy Res. -2005.-V. 72, N2/- P. 138-143.

343. Start K. Treating phenylketonuria by a phenylalanine-free diet.//Prof. Care Mother Child.- 1998.- V.8, N 4,- P.109-110.

344. Svedberg J., Haas J., Leimenstoll G.,et al. Demonstration of beta-casomorfin immunoreactive material in in vitro digests of bovine milk and in small intestine contents after bovine milk ingestion on adult humans// Peptides.-1985.-V.6, N 5.-P.825-830.

345. Swamylingappa В., Joseph J., Murthy K.S. Process for preparation of protein-hydrolysate from milk protein.- ПАТЕНТ США № 6589574 (2003).

346. Szepfalusi Z., Nentwich I., Jost E., et al. Cord blood mononuclear cells and milk-specific T-cell clones are tools to evaluate the residual immunogenicity of hydrolyzed milk formulas// J. Allergy Clin. Immunol.- 1998 .- V. 101, N 4, Pt. 1.-P. 514-520.

347. Takahachi A.,Azuma Y., Otsuka I. Liquid nutrient composition.- Европейский патент № 0,443,047,B1 (1991a)

348. Takahashi N., Asakawa S. Dousako S.-I., Idota T. Low allergenic nutrient composition and method of using same.- ПАТЕНТ США № 5670201 (1997).

349. Thibault P.A. Partial hydrolysate of whey proteins, enzymatic process for the preparation of this-hydrolysate, and hypoallergenic dietetic milk food containing it- ПАТЕНТ США № 4981704 (1991).

350. Thibault P.A. Partial hydrolysate of whey proteins free of lactoglobulin and enzymatic process to obtain it.- Европейский патент № 0,390,633,Bl(1990a).

351. Thibault P.A., Monsan P.F. Process for elimination of the bitterness of protein hydrolysate and product obtained.- Европейский патент № 0,323,930 Al (1989a)

352. Tirok S., Scherze I., Muschiolik G. Behaviour of formula emulsions containing hydrolysed whey protein and various lecithins// Colloids Surf. B. Biointerfaces.-2001.-V.21,N 1-3.-P.149-162.

353. Tolton J. K., Nimmagudda R., Braun S. D. et al. Method of preparing a casein hydrolysate enriched in anti-hypertensive peptides.- ПАТЕНТ США № 6514941 (2003).

354. Tome D., Dumontier A.-M.,Hautefeuille M.,Desjeux J.-F. Opiate activity and transepitelial passage of intact beta casomorfins in rabbit ileum// Am.J.Physiol.-1987.-V.253.-P.G737-G744.

355. Tsumura K., Kugimiya W., Hoshino K., Kudo T. Soybean protein hydrolysate, process for producing the same, and meat products and drinks using the same// ПАТЕНТ США № 6126973 (2000).

356. Tsumura К., Kugimiya W., Hoshino K.Process for producing a soy protein hydrolysate.- ПАТЕНТ США № 6022702 (2000a).

357. Tsumura K., Nakamura Y., Kugimiya W. et al. Soybean protein hydrolysates, their production and use.- ПАТЕНТ США № 6303178 (2001).

358. Van Rijn M., Bekhof J., Dijkstra Т., et al. A different approach to breast-feeding of the infant with phenylketonuria.// Eur. J. Pediatr.- 2003 .- V.162, N 5.- P.323-326.

359. Van Spronsen F.J., Van Rijn M., Bekhof J., et al. Phenylketonuria: tyrosine supplementation in phenylalanine-restricted diets// Am. J. Clin. Nutr.- 2001.- V.73, N 2.- P.153-157.

360. Vanderhoof J.A., Young R.J. Enteral nutrition in short bowel syndrome// Semin. Pediatr. Surg.-2001 .-V.10, N 2.-P.65-71.

361. Vijayalakshmi M.A., Lemieux L., Amiot J. High performance size exclusion liquid chromatography of small molecular weight peptides using methanol as a mobile phase additive// J.Liquid Chromatogr.-1986.-V.9, N 16.-P.3559-3576.

362. Villaveces J.W., Heiner D.C. Experience with an elemental diet Vivonex // Ann.Allergy.-1985.-V.55, N 6.-P.783-789.

363. Vissago I. Nutritional composition for persons who do not tolerate cow milk and soya protein and/or lactose.- Европейский патент № 0,611,261,A2 (1994).

364. Wahn U. Environmental factors facilitating allergic sensitization and atopic manifestation in early childhood//Nutr.Res.-1998.- V.18, N 8.-P.1363-1371

365. Wal J.M. Structure and function of milk allergens//Allergy.-2001.-V.56, Suppl 67.-P.35-38.

366. Walker-Smith J. Hypoallergenic formulas: are they really hypoallergenic?// Ann. Allergy Asthma Immunol.- 2003 .-V. 90, N 6, Suppl 3.-P.112-114.

367. Weetch E., Macdonald A. J. The determination of phenylalanine content of foods suitable for phenylketonuria// Hum . Nutr. Diet.- 2006 .- V.19, N 3.- P.229-236.

368. Weigle W.O.,Cochrane C.B., Dixon F.I. Anaphylactogenic properties of soluble antigen-antibody complexes in guinea pigs and rabbits// J.Immunol.-1960.-V.85, N 5.-P.469-477

369. Wenzel U., Meissner В., Doring F., Daniel H. PEPT1-mediated uptake of dipep-tides enhances the intestinal absorption of amino acids via transport system b(0,+)// J. Cell Physiol.- 2001 .-V.186, N 2.-P.251-259.

370. Wu J., Aluko R.E. Quantitative structure-activity relationship study of bitter di-and tri-peptides including relationship with angiotensin I-converting enzyme inhibitory activity.// J. Pept. Sci.- 2007.- V.13, N 1.- P.63-69.

371. Xu M., Shangguan X., Wang W., Chen J. Antioxidative activity of hen egg ovalbumin hydrolysates.//Asia Рас. J. Clin. Nutr.- 2007.- V.16, Suppl 1.- P. 178182.

372. Yust M.M., Pedroche J., Alaiz M., et al. Partial purification and immobilization/stabilization on highly activated glyoxyl-agarose supports of different proteases from flavourzyme.//J. Agric. Food Chem.- 2007.- V.55, N 16.-P.6503-6508.