Совершенствование технологии пробиотических культур прямого внесения для молочных продуктов

Ананьева, Наталья Валентиновна

Биотехнология пищевых продуктов (по отраслям)

автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.07, диссертация на тему:Совершенствование технологии пробиотических культур прямого внесения для молочных продуктов

кандидата технических наук: Ананьева, Наталья Валентиновна
город: Москва
год: 2007
специальность ВАК РФ: 05.18.07

Диссертация по технологии продовольственных продуктов на тему «Совершенствование технологии пробиотических культур прямого внесения для молочных продуктов»

Автореферат диссертации по теме "Совершенствование технологии пробиотических культур прямого внесения для молочных продуктов"

ГОУ ВПО МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ПРИКЛАДНОЙ БИОТЕХНОЛОГИИ

На правах рукописи

АНАНЬЕВА НАТАЛЬЯ ВАЛЕНТИНОВНА

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ ПРОБИОТИЧЕСКИХ КУЛЬТУР ПРЯМОГО ВНЕСЕНИЯ ДЛЯ МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ

Специальность 05.18.07 - Биотехнология пищевых продуктов

(перерабатывающие отрасли АПК)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

Москва - 2007

003064369

Работа выполнена на кафедре «Технология молока и молочных продуктов» ГОУ ВПО «Московский государственный университет прикладной биотехнологии» (МГУПБ)

Научный руководитель: доктор технических наук, профессор

ГанинаВ.И.

Официальные оппоненты: академик РАЕН, доктор технических наук,

профессор Дунченко Н.И.

доктор технических наук, профессор Хвыля С.И.

Ведущая организация: ГНУ ВНИМИ

(ГНУ ВНИИ молочной промышленности)

Защита состоится » ШиЛ^рИ.2007 г. в // часов на заседании Диссертационного совета Д 212.149.01 при ГОУ ВПО «Московский государственный университет прикладной биотехнологии» по адресу: 109316, г. Москва, ул. Талалихина, д.ЗЗ, конференц-зал.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО МГУПБ.

Автореферат разослан «3 »

Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат технических наук, проф.

Забашта А.Г.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы

Фундаментальные и клинические исследования со всей очевидностью свидетельствуют о том, что микрофлора кишечника человека является легкоуязвимой частью микробного сообщества организма, а оптимальный микроэкологический статус желудочно-кишечного тракта - важным механизмом поддержания здоровья человека. В этой связи важнейшими задачами, направленными на оздоровление населения, являются исследования в области разработки новых эффективных пробиотических продуктов и препаратов-пробиотиков, совершенствование выпускаемых форм и интенсификация производства для гарантированного получения качественной продукции.

Биотехнологический процесс пробиотических продуктов основан на использовании стартовых культур, в состав которых входят микроорганизмы различных таксономических групп. Биохимическая направленность процессов, протекающих в сырье, главным образом зависит от состава микрофлоры, которая играет важную роль в формировании показателей качества и безопасности получаемых продуктов. В этой связи представляется важным осуществлять подбор штаммов по комплексу требуемых признаков, прогнозировать стабильность их свойств, совершенствовать биотехнологию биомассы пробиотических культур, применяемых в производстве пищевых продуктов.

Теоретические и практические основы в области создания функциональных продуктов питания заложены в трудах Гавриловой Н.Б., Ганиной В.И., Евдокимова И.А., Забодаловой JI.A., Королевой Н.С., Рогова И.А., Рябцевой С.А., Семенихиной В.Ф., Титова Е.И., Тихомировой H.A., Токаева Э.С., Хорольского В.В., Храмцова А.Г., Degeest В., Fuller R., Lee К., ShahN.P. и др.

На современном этапе существует объективная необходимость в увеличении эффективности действия продуктов лечебно-профилактической направленности, обусловленная снижением иммунорезистентности организма человека. В таких условиях ученые предлагают увеличивать нормируемое минимальное количество пробиотических бактерий с 10б КОЕ до 108-109 КОЕ в 1 г продукта, а также вводить в продукты пребиотики, способствующие развитию аутофлоры кишечника человека. Однако получение таких продуктов сопряжено с появлением дополнительных экономических затрат, обусловленных необходимостью внесения большего количества стартовых культур, часть которых, находясь в продукте и проходя через желудочно-кишечный тракт гибнет. В этой связи актуальными представляются исследования по поиску нового комплексного подхода к подбору штаммов пробиотических бактерий и питательных сред для накопления биомассы, созданию консорциумов микроорганизмов, расширению спектра криопротекторов, научному обоснованию и разработке современных способов

защиты клеток, способствующих производству продуктов здорового питания, обладающих высоким лечебно-профилактическим действием.

Цель и задачи исследований

Целью диссертационной работы являлось совершенствование технологии пробиотических культур прямого внесения путем повышения их стрессоустойчивости в ходе биотехнологического цикла получения стартовых культур и продуктов, при прохождении через желудочно-кишечный тракт человека, а также повышение профилактической эффективности действия продуктов здорового питания.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

• Исследовать свойства новых отечественных штаммов пробиотических культур различных таксонов, определить популяционную изменчивость и стабильность проявляемых ими свойств;

• Определить адгезивную способность штаммов пробиотических культур и выявить способы ее увеличения;

• Обосновать условия культивирования изучаемых штаммов пробиотических культур, обеспечивающие получение высокого количества жизнеспособных клеток микроорганизмов в биомассе;

• Обосновать пути увеличения стрессоустойчивости микроорганизмов на основании изучения действия пищевых волокон в составе защитных сред для высушивания пробиотических культур и определения рациональных условий получения инкапсулированных форм пробиотических культур;

• Изучить свойства и направления применения инкапсулированных форм пробиотических микроорганизмов в составе продуктов лечебно-профилактической направленности, изучить показатели качества и безопасности продуктов;

• Исследовать показатели пробиотических культур прямого внесения, полученных по усовершенствованной технологии: готовых форм и в процессе хранения; определить токсичность и профилактическую эффективность действия инкапсулированных форм пробиотических культур в биологическом эксперименте на линейных белых крысах;

• Разработать технологическую инструкцию по производству пробиотических культур прямого внесения.

Научная новизна работы

Предложен способ увеличения адгезивной способности пробиотических культур путем их сочетания со специально отобранным штаммом, синтезирующим экзополисахариды (ЭПС).

Научно и экспериментально обосновано, что введение пищевых волокон в состав защитных сред для высушивания микроорганизмов обеспечивает повышение стрессоустойчивости клеток в ходе биотехнологического цикла и увеличение сроков годности пробиотических культур прямого внесения.

Подобраны типы и установлены рациональные концентрации веществ, обеспечивающие возможность инкапсулирования пробиотических культур. Получена математическая модель процесса инкапсулирования пробиотических культур, позволяющая регулировать диаметр капсул в зависимости от внутреннего диаметра дозирующего устройства и расстояния от дозирующего устройства до раствора. Выявлено, что альгинатно-хитозановые капсулы обусловливают повышение стрессоустойчивости и эффективности действия пробиотических микроорганизмов в условиях «in vitro» и «in vivo».

Доказана безопасность и целесообразность применения инкапсулированных форм пробиотических культур и их консорциумов в продуктах лечебно-профилактической направленности на линейных белых крысах.

Практическая ценность работы

Получены высокоадгезивные консорциумы пробиотических культур. Определены стандартизованные питательные среды «Биос» и «TW50»/«MW50», позволяющие получать стабильное высокое количество жизнеспособных клеток пробиотических культур в биомассе.

Разработана технологическая инструкция по производству пробиотических культур прямого внесения. В производственных и лабораторных условиях проведена проверка разработанной технологии пробиотических культур прямого внесения, эффективность которой подтверждена актами.

Во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов проведено депонирование ЭПС-штамма Streptococcus thermophilus ТСЭ-38 и штаммов пробиотических культур Lbm. acidophilus ANT-7, Lbm. helveticus LH-4, Lbm. rhamnosus LC-52GV с присвоением коллекционных номеров ВКПМ 9473, ВКПМ В-9471, ВКПМ В-9472, ВКПМ В-9475, соответственно.

Результаты работы внедрены в учебный процесс: используются при выполнении лабораторных, курсовых и дипломных работ на основе вновь разработанных методических указаний к выполнению лабораторных и научно-исследовательских работ для магистров техники и технологий направления 260100 - Технология продуктов питания и студентов по специальностям: 260303, 260301, 260302, 260505, 240902, 240901 по дисциплине «Стартовые культуры в технологии продуктов питания и кормов», а также по дисциплине «Техническая микробиология».

Работа выполнялась в рамках НИР №2-3-06 «Развитие биотехнологических принципов создания многокомпонентных продуктов лечебно-профилактической направленности, обогащенных биологически активными веществами, оптимизация процесса их вакуумной сушки для обеспечения длительных сроков хранения», а также НИР №2-4-06 «Методология создания продуктов для адекватного нутриентного жизнеобеспечения спецконтингентов и пострадавших в критических ситуациях с учетом физико-химических воздействий на сырье» осуществляемых в рамках

приоритетных направлений развития науки, технологий и техники РФ «Живые системы».

На Всероссийской выставке научно-технического творчества молодежи НТТМ-2007 получена медаль за разработку в области биологии «Получение консорциумов пробиотических культур нового поколения для продуктов питания». На международной специализированной выставке «Мир биотехнологии 2007» присужден дипломом II степени за разработку «Способа повышения выживаемости пробиотических культур в неблагоприятных условиях».

Апробация работы

Результаты диссертационной работы доложены и обсуждены на 3-ей и 4-ой Международной научной конференции «Живые системы и биологическая безопасность населения» (2005г. и 2006г.); 3-ем и 4-ом Московском международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития», Всероссийской выставке научно-технического творчества молодежи НТТМ-2007, Москва (26 июня -29 июня, 2007г.).

Публикации

По материалам диссертации опубликована 21 работа, в т.ч. 4 статьи.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа состоит из введения, аналитического обзора литературы, экспериментальной части, содержащей 5 глав, выводов, библиографического списка, приложений. Основной текст работы изложен на 148 страницах машинописного текста, содержит 28 таблиц и 40 рисунков. Библиография представлена 210 источниками, в том числе 166 зарубежных авторов, количество приложений 19.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность выбранного направления исследований в свете проблем повышения стрессоустойчивости и профилактической эффективности действия пробиотических культур.

Глава 1. Аналитический обзор

В аналитическом обзоре рассмотрены аспекты состояния здоровья населения России, приведена характеристика рынка продуктов лечебно-профилактической направленности. Рассмотрено значение заквасок прямого внесения при получении пробиотических и синбиотических продуктов. Проанализированы вопросы, связанные с производством культур прямого внесения и способами повышения эффективности действия пробиотических культур в организме человека.

На основании анализа и обобщения информации обзора литературы обоснованы и сформулированы цель и задачи диссертационной работы.

Глава 2. Объекты и методы исследований

Объектами исследований служили культуры и биомасса молочнокислых бактерий разных таксонов: Str. thermophilus ТСЭ-38 ВКПМ 9473; Lbm. acidophilus ANT-7 ВКПМ В-9471; Lbm. bulgaricus БГ-G ВКПМ В-8554; Lbm. helveticus LH-4 ВКПМ B-9472; Lbm. rhamnosus LC-52GV ВКПМ B-9475; Lbm. plantarum LP-2 ВКПМ B-9467 и бифидобактерий В. adolescentis В-1 ВКПМ В-2944; В. longum ВГБ-21 ВКПМ S-1540; В. bifidum ГСБ-15 ВКПМ S-1539 из коллекции микроорганизмов кафедры «Технология молока и молочных продуктов» МГУПБ в нативном и инкапсулированном состоянии; культуры Lbm. rhamnosus LC-52GV ВКПМ В-9475, Lbm. acidophilus ANT-7 ВКПМ В-9471 и В. adolescentis В-1 ВКПМ В-2944 (свежеприготовленные, в сухом виде и в процессе хранения); кисломолочные продукты «Ацидолакт» и «Ацидофильное молоко», полученные с применением традиционных и инкапсулированных форм пробиотических микроорганизмов.

При проведении исследований использовали: микробиологические, генетические, физико-химические, биохимические методы, эксперименты на лабораторных животных и методы математической статистики. Эксперименты проводили в 3-5 кратной повторности.

Структурно-логическая схема проведения исследований, представленная на рис.1, предусматривает последовательную реализацию обозначенных в схеме этапов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Глава 3. Повышение эффективности действия пробиотических культур, предназначенных для продуктов лечебно-профилактической направленности

В данной работе была высказана гипотеза о возможности повышения эффективности действия пробиотических культур в организме человека за счет увеличения их стрессоустойчивости и адгезивной способности к стенкам эпителиальной ткани кишечника путем создания консорциумов пробиотических культур, содержащих ЭПС-штаммы молочнокислых бактерий. Это обусловило проведение исследований в нескольких направлениях: поиск штаммов пробиотических культур, обладающих комплексом полезных свойств; изучение стрессоустойчивости ЭПС-штаммов и факторов, усиливающих способность к продуцированию ЭПС, в т.ч. при создании консорциумов. В результате проведенной работы изучен комплекс свойств новых штаммов пробиотических культур Lbm. helveticus LH-4, Lbm. rhamnosus LC-52GV, Lbm. plantarum LP-2, Str. thermophilus ТСЭ-38 и установлены их отличительные характеристики. Показано, что все штаммы обладали антагонистической активностью по отношению к патогенным и условно-патогенным тест-культурам (Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumonei, Citrobacter freundii, Salmonella dublin, Shigella sonnei, Bacillus subtilis); штаммы Lbm. rhamnosus LC-52GV и Lbm. plantarum LP-2 - высокой степенью выживаемости при действии факторов шока

Рис. 1. Схема проведения исследований

Показатели: 1 - титруемая кислотность; 2 - активная кислотность; 3 -органолептические показатели; 4 - активность ферментации; 5 - влагоудерживающая способность; 6 - количество клеток; 7 - микроскопический препарат; 8 -супероксиддисмутазная активность; 9 - антагонистическая активность; 10 - выживаемость в неблагоприятных условиях, имитирующих желудочно-кишечный тракт; 11- способность к синтезу ЭПС; 12 - популяционная изменчивость; 13 - стабильность свойств; 14 - адгезивная способность; 15 - бактерии группы кишечных палочек; 16 - патогенные микроорганизмы, в т.ч. сальмонеллы; 17 - дрожжи и плесени; 18 - Staphylococcus aureus; 19 - массовая доля влаги; 20 - набухаемость; 21 - паропроницаемость; 22 - прочностные характеристики; 23 -сканирующая электронная микроскопия; 24 - исследования на линейных белых крысах.

(различные концентрации поваренной соли, желчи, фенола, кислые и щелочные уровни рН, а также их комплекса); Lbm. rhamnosus LC-52GV и Str. thermophilus ТСЭ-38 - способностью синтезировать экзополисахариды; Lbm. helveticus LH-4 и Str. thermophilus ТСЭ-38 - технологичностью. Среди исследуемых культур были определены штаммы, обладающие неоднородной популяцией, что служит косвенным показателем изменчивости свойств микроорганизмов, в связи с чем проведено изучение стабильности свойств штаммов пробиотических культур в процессе пассирования и под действием различных стрессовых факторов (повышение температуры, действие мутагена химической природы и их комплекса). В процессе пассирования отмечали увеличение активности ферментации, а также изменение соотношения диссоциантов, синтезирующих и не синтезирующих ЭПС. После шестого пассажа это соотношение не изменялось и составляло для: Str. thermophilus ТСЭ-38 - 90%: 10%, Lbm. bulgaricus БГ-G - 40%:60%, Lbm. acidophilus ANT-7 -50%:50%, соответственно.

Для определения отличительных признаков на генетическом уровне были выделены плазмиды различных диссоциантов, продуцирующих и не продуцирующих ЭПС, а также исходного штамма Str. thermophilus ТСЭ-38 (рис.2). В результате сравнения плазмидных профилей диссоциантов и исходного штамма различий по размеру и набору генов выявлено не было. У всех изученных вариантов было визуализировано три плазмиды размером 50, 9.2 и 8.7 т.п.н. Полученные данные позволяют говорить о том, что гетерогенность микробной популяции Str. thermophilus ТСЭ-38 затрагивает лишь физиолого-биохимические свойства, не изменяя генетические.

12 3 4

Рис.2. Плазмидный профиль диссоциантов Str. thermophilus ТСЭ-38: 1- маркер; 2 - исходный штамм Str. thermophilus ТСЭ-38; 3 - диссоциант Str. thermophilus ТСЭ-38, продуцирующий ЭПС; 4 - диссоциант Str. thermophilus ТСЭ-38, не продуцирующий ЭПС

Результаты изучения действия на популяции штаммов микроорганизмов стрессовых факторов показали, что большинство штаммов отличались нестабильностью свойств. При изучении морфологических характеристик

явление полиморфизма выявлено не было. Анализ полученных данных позволил отобрать среди изученных культур, наиболее устойчивые к действию стрессовых факторов штаммы: диссоциант Str. thermophilus ТСЭ-38 26 (в дальнейшем Str. thermophilus ТСЭ-38), Lbm. acidophilus ANT-7, Lbm. bulgaricus БГ-G, отличающиеся стабильностью проявляемых ими свойств.

Результаты определения среднего показателя адгезии (СПА) изученных штаммов пробиотических культур позволили выявить как высокоадгезивные, так и неадгезивные штаммы бактерий (рис.3). Установлено, что штаммы, продуцирующие ЭПС, относились к высокоадгезивным или среднеадгезивным микроорганизмам; штаммы, не продуцирующие ЭПС, - к неадгезивным. При наличии в популяции штамма более 90 % ЭПС-диссоциантов штамм относили к высокоадгезивным; менее 50 % - к неадгезивным.

г......

1 - ¡в - рр

iV-v- - -.. ...

шШШ

Рис. 3. Адгезия штаммов пробиотических культур на поверхности эритроцитов крупного рогатого скота: а) высокоадгезивный диссоциант БШкегторМШв ТСЭ-38,^1000; б) низкоадгезивный диссоциант БШНегторкИш ТСЭ-38,*1000

Выявленная зависимость среднего показателя адгезии от способности штамма к продуцированию ЭПС привела к необходимости подбора условий культивирования микроорганизмов (температура и питательная среда), способствующих усилению синтеза ЭПС. Показано, что отклонение от оптимальной температуры культивирования и использование сред «Т\У50» («Ми^О») и «Биос» в наибольшей степени стимулировали способность штаммов пробиотических культур к продуцированию ЭПС, и, следовательно, к увеличению адгезивной способности.

Анализ взаимодействия высокоадгезивных штаммов с эритроцитами в световом микроскопе показал, что на поверхности эритроцитов находились как отдельные бактериальные клетки, так и группы клеток, объединенных между собой, нередко в виде покровов. Скопления клеток свидетельствуют о процессе коадгезии, в который вовлекаются клетки, возможно, благодаря синтезу некапсулярных (свободных) форм ЭПС. Полагали, что в данный процесс могут

вовлекаться не только клетки штамма, продуцирующего ЭПС, но и другого неактивного ЭПС-штамма. Результаты проведенных исследований показали, что совместное культивирование пробиотических культур со штаммом Зй-.ШегторШш ТСЭ-38, продуцирующего ЭПС, приводило к увеличению среднего показателя адгезии клеток в 1,5-2,5 раза для низкоадгезивных штаммов и в 6-9 раз для неадгезивных штаммов (рис.4).

о о.

S пробиотическая монокультура

□ консорциум пробиотической культуры с ЭПС-шгаммом Str.thermophilus

l-Lbm.rhamnosus LC-52GV; 2 - Lbm.helveticus LH-4; 3- Lbm.acidophilus ANT-7;

4 - Lbm.plantarum LP-2;

5 - Lbm.bulgaricus БГ-G;

6 - B. longum ВГБ-21;

7 - B.adolescentis B-l;

8 - B. bifidum ГСБ-15.

Рис.4. Адгезивная способность пробиотических культур до и после совместного культивирования со штаммом, продуцирующим ЭПС

Полученные данные указывают на целесообразность включения ЭПС-культур в мультиштаммовые закваски и препараты с целью увеличения стрессоустойчивости и адгезивной способности штаммов пробиотических культур за счет совместного вовлечения клеток бактерий в полисахаридный матрикс.

Результаты проведенных исследований позволили провести депонирование новых штаммов пробиотических культур, отличающихся комплексом уникальных свойств, во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов с присвоением коллекционных номеров ВКПМ 9473, ВКПМ В-9471, ВКПМ В-9472, ВКПМ В-9475, соответственно, для штаммов Sir. thermophilus ТСЭ-38, Lbm. acidophilus ANT-7, Lbm. belveticus LH-4, Lbm. rhamnosus LC-52GV.

Глава 4. Пути совершенствования технологии пробиотических культур прямого внесения

Одним из важнейших этапов биотехнологии пробиотических культур прямого внесения является получение биомассы, эффективность которого во

многом определяется типом питательной среды, применяемой для наращивания микроорганизмов. В настоящее время на рынке появились стандартизованные питательные среды, отличающиеся простой в приготовлении. В этой связи были проведены исследования по получению биомассы изученных штаммов пробиотических культур на типовых (среда на основе молочной сыворотки и обезжиренное молоко), стандартизованных («М\<У50»/«Т\У50», «Биос») и комбинированных (среда на основе молочной сыворотки с ростовой добавкой «Фаворит»; среда на основе молочной сыворотки и 2.5% «М\У50» («ТУ/бО»); среда на основе молочной сыворотки и 5% «М\¥50» («Т\У50»); «М\У50» («Т\¥50») с обезжиренным молоком и сывороткой) питательных средах (рис.5.).

9,5-Г

ЬЬт.Латпозиз И>т.р1ап1агит ЬЬт.аЫс1орЫ1и5 ЬЬт.ЬеЬ'еИсиз ЬЬт.Ьи^апсиз В.ЫПс1ит Наименование штамма пробиотических культур

ЫБиос

□ Т\У50/М\¥50

В среда на основе молочной сыворотки с ростовой добавкой "Фаворит" И среда на основе молочной сыворотки с добавлением Т^/50/М^50 0 среда Т\У50/М\У50 с молоком и сывороткой ЁЗ среда на основе молочной сыворотки

Рис.5. Развитие пробиотических культур на питательных средах различного состава

Анализ полученных данных позволил определить типы питательных сред, обеспечивающих получение высокого стабильного количества клеток изучаемых штаммов пробиотических культур в биомассе: стандартизованные среды «Т\У50» («М'^О»), «Биос» и типовая среда на основе молочной сыворотки (для бифидобактерий). В производственных условиях была проведена апробация питательных сред для наращивания биомассы пробиотических культур, результаты которой подтвердили данные, полученные в лабораторных условиях.

Из большого количества факторов, влияющих на выживаемость и сохранение пробиотических культур в процессе высушивания, важную роль играет состав среды-криопротектора. Для увеличения эффективности действия криопротекторов и выживаемости клеток в процессе хранения в качестве структурообразующего защитного матрикса и источника питания пробиотиков изучили действие полисахаридов под торговой маркой «РЛге^шп»,

фруктоолигосахаридов (ФОС) «Фибрулоза» и комбинацию «ИЛге^т» и ФОС -«Р1огас1а» совместно с обезжиренным молоком и комплексной защитной средой, состоящей из сахарозо-желатозной среды и обезжиренного молока. Пищевые волокна вносили в количестве 10% при соотношении биомассы и защитной среды 1:1. Применение указанных компонентов в составе защитных сред не вызывало изменения внешнего вида и массовой доли влаги сухой биомассы, которая составляла 3,0 ± 0,1 %. Показано, что включение пищевых волокон «Р1ога«а» в состав комплексной защитной среды (сахарозо-желатозная среда и обезжиренное молоко) в наибольшей степени способствовало увеличению выживаемости клеток пробиотических культур в процессе высушивания (на 10-15%) по сравнению с другими изученными составами сред-криопротекторов (рис.6).

о а,

я о.

о &

с о. с

Количество клеток, lg КОЕ/гр

5 - сахарозо-желатозная среда,

обезжиренное молоко и «Фибрулоза»;

6 - обезжиренное молоко и «Р1огас1а»;

7 - сахарозо-желатозная среда,

обезжиренное молоко и «Р1огаЫа».

1- сахарозо-желатозная среда и обезжиренное молоко;

2 - обезжиренное молоко и «Fibregum»;

3 - сахарозо-желатозная среда,

обезжиренное молоко и «Fibregum»;

4 - обезжиренное молоко и «Фибрулоза»;

Рис.6. Влияние пищевых волокон в составе криопротекторных сред на выживаемость клеток Lactobacterium acidophilus в процессе сублимационного высушивания

Полученные данные свидетельствуют о целесообразности и перспективности использования комбинации фруктоолигосахаридов и полисахаридов в качестве компонента криопротекторных сред в производстве пробиотических культур прямого внесения, характеризующихся стабильным высоким уровнем стрессоустойчивых жизнеспособных клеток.

Глава 5. Изучение возможности инкапсулирования пробиотических

культур

В последние годы все больший интерес проявляется к получению инкапсулированных форм микроорганизмов, что способствует повышению

стрессоустойчивости клеток в неблагоприятных условиях. Это обусловило проведение исследований, направленных на определение рациональных условий инкапсулирования изучаемых штаммов пробиотических культур.

В качестве капсулирующих веществ использовали природные биодеградируемые нетоксичные полисахариды: хитозан с молекулярной массой 38, 240, 500 и 700 кДа и альгинат натрия различных марок. Результаты проведенных исследований позволили обосновать рациональное соотношение биомассы пробиотических культур и 1%-ного раствора хитозана с Мг 240 и 500 кДа при концентрации раствора полифосфатов 1% для формирования хитозан-полифосфатных капсул, которое составляло 1:4. При получении альгинатных капсул в качестве гельформирующего вещества был отобран альгинат марки «МАЖЗСОЪ БН» при концентрации раствора 2%, соотношение биомассы пробиотических культур и альгината натрия - 1:4; в качестве сшивающих ионов применяли 1%-ный раствор хлорида кальция. Полученные альгинатные капсулы были не стабильны в средах, где присутствовали фосфаты, сульфаты и другие соединения. Это, по-видимому, обусловлено тем, что эти вещества взаимодействовали с ионами кальция, за счет чего происходила «экстракция» сшивателя и разрушение матрицы носителя. Для использования таких капсул в молочных продуктах необходимо было провести дополнительные операции, приводящие к их укреплению. Показано, что обработка альгинатных капсул 0,5% раствором хитозана обеспечивала улучшение качества и стабильности капсул. Это можно объяснить появлением оболочки полиэлектролитного комплекса на поверхности капсул и возможным дальнейшим распространением реакции между макромолекулами полиэлектролитов в глубь ядра капсул.

В ходе проведенных исследований было выявлено, что благодаря использованию материалов, не оказывающих токсический эффект, и отсутствию сильных механических, физических и химических воздействий гибели клеток в процессе инкапсулирования не происходило: количество молочнокислых бактерий составляло 10,21-10,85 ^ КОЕ/г; бифидобактерий -9,45-9,78 ^ КОЕ/г. Показано, что количество жизнеспособных инкапсулированных клеток пробиотических культур не зависело от конкретного штамма бактерий, а определялось типом дыхания (анаэробы или факультативные анаэробы).

Форма и размер получаемых капсул зависели от таких факторов, как молекулярная масса и концентрация растворов капсулирующих веществ, внутренний диаметр дозирующего устройства и расстояние от дозирующего устройства до поверхности раствора.

В ходе сравнения различных^ видов хитозана с молекулярными массами 240, 500 и 700 кДа было выявлено, что при увеличении молекулярной массы хитозана, соответственно, увеличивался диаметр формируемых капсул. При получении альгинатных капсул в результате увеличения концентрации, а, следовательно, вязкости раствора альгината натрия, размер капсул уменьшался. Значительное сокращение или увеличение рационального значения расстояния от дозирующего устройства до раствора (10 см) вызывало деформацию капсул и формирование несферических частиц. Увеличение внутреннего диаметра

дозирующего устройства приводило к пропорциональному увеличению диаметра капсул (рис.7).

Расстояние от дозирующего устройства до раствора, мм

Рис.7. Математическая модель процесса инкапсулирования пробиотических культур

В результате обработки экспериментальных данных получено уравнение регрессии, адекватно описывающее изменение диаметра капсул в зависимости от внутреннего диаметра дозирующего устройства и расстояния от дозирующего устройства до раствора:

Y=2,66Х1+0,2X2+0,73,

где Y - диаметр капсул, мм; Хг внутренний диаметр дозирующего устройства, мм (0,33 <Xj <0,8); Х2 - расстояние от дозирующего устройства до раствора, мм (50 <Х2 ^00).

Анализ полученных данных позволил обосновать рациональные условия инкапсулирования биомассы пробиотических бактерий, обеспечивающие минимальный диаметр капсул (1.1-1.8 мм): расстояние от дозирующего устройства до раствора - 100 мм; внутренний диаметр дозирующего устройства - 0.33 мм.

Полученные инкапсулированные формы пробиотических культур отличались стрессоустойчивостью в неблагоприятных условиях желудочно-кишечного тракта, что подтверждено опытами, проведенными на модельной системе в условиях «in vitro». В результате изучения выживаемости штамма Lbm. acidophilus в нативном и инкапсулированном состоянии в неблагоприятных условиях, имитирующих желудочно-кишечный тракт, выявлено, что в течение 3 часов происходила практически полная гибель свободных клеток при действии низких значений рН, 40% желчи и в комплексных неблагоприятных условиях; под действием других

неблагоприятных факторов (рН 4, 8.5, 9.2; желчь 20%; фенол 0.4%; №С1 2, 4 и 6.5%) количество клеток сокращалось на 1,2-2,7 ^ КОЕ/см3 (рис.8).

6.5% 40%

И свободные клетки

(Ш клетки, инкапсулированные в альгинатные капсулы О клетки, инкапсулированные в хитозановые капсулы с Mr 500 кДа Н клетки, инкапсулированные в альгинатно-хитозановые капсулы

К1=желчь 40%+рН 7.5; К2=рН 2+фенол 0.4%+NaCl 6.5%; КЗ=рН 9.2+фенол 0.4%+NaCl 6.5%

Рис.8. Выживаемость инкапсулированных и свободных клеток Lbm. acidophilus в неблагоприятных условиях, имитирующих желудочно-

кишечный тракт

Заключение клеток в капсулы обеспечивало повышение выживаемости штамма Lbm. acidophilus в агрессивных условиях окружающей среды в среднем на 40-50% по сравнению со свободными клетками, при этом капсулы оставались стабильными и не подвергались изменениям. Было установлено, что наибольшую защиту клеток обеспечивали альгинатно-хитозановые и хитозан-полифосфатные капсулы, полученные с применением хитозана с Mr 240 кДа: количество инкапсулированных клеток снижалось на 2-2,5 lg КОЕ/г при действии 40 % желчи, рН 2 и 3 и комплекса К2 (рН 2 + фенол 0.4 % + NaCl 6.5%); на 1-1,5 lg КОЕ/г - при действии рН 4 и комплексов К1 (желчь 40 % + рН 7.5) и КЗ (рН 9.2 + фенол 0.4 % + NaCl 6.5 %). За время экспозиции инкапсулированных микроорганизмов в растворе поваренной соли, фенола и щелочных значений рН среды количество инкапсулированных бактерий оставалось практически неизменным.

Для более полной характеристики капсул проведено изучение их мембран, в ходе которого было выявлено, что они отличались высокой степенью паропроницаемости: альгинатно-хитозановая - (276,65±24,16) г/м2; альгинатная - (351,63±23,67) г/м2. Изученные образцы характеризовались высокой набухаемостью в воде, значения которой уменьшались в растворе 2%-ной молочной кислоты. Наибольшей набухаемостью в воде отличалась хитозановая мембрана: процент набухаемости составил 227% при времени

достижения сорбционного равновесия 20 мин. По этой причине альгинатно-хитозановая мембрана обладала большей набухаемостью по сравнению с альгинатной: 209% и 125%, соответственно, при одинаковом времени достижения сорбционного равновесия - 15 мин.

При изучении прочностных свойств мембран капсул получена диаграмма растяжения, показывающая, что под действием силы, действующей вдоль продольных осей, альгинатно-хитозановые мембраны выдерживали максимальную нагрузку в два раза большую по сравнению с альгинатными (0.148 и 0.076 Мпа, соответственно). При изучении мембран на прокол выявлено, что альгинатно-хитозановая пленка выдерживала максимальную нагрузку на 0,05 Н большую, чем альгинатная. Полученные данные говорят о целесообразности использования в молочной промышленности с целью иммобилизации пробиотических культур многослойных капсул, формируемых за счет полиэлектролитного взаимодействия альгината и хитозана, что позволит улучшить эксплутационные характеристики капсул.

Методом сканирующей электронной микроскопии изучен характер внешней поверхности, среза капсул и распределения микроорганизмов в альгинатных, альгинатно-хитозановых и хитозан-полифосфатных капсулах (рис.9).

Клетки Lbm. acidophilus

Рис.9. СЭМ хитозан-полифосфатных капсул: А -локализация микроорганизмов в матрице капсул; Б - срез капсул; В - внешняя

поверхность капсул Полученные данные свидетельствуют о том, что изученные виды капсул представляли собой матрицу, содержащую микроорганизмы, окруженную внешней непрерывной оболочкой, характеризующейся различной пористостью. Наружная поверхность капсул представляла собой складчатую неровную структуру с многочисленными незначительными углублениями. Основная часть микрофлоры была ассоциирована с матрицей, формируемой в капсулах, однако на поверхности мембран локально обнаруживались отдельные палочковидные клетки. Агрегация микроорганизмов наблюдалась очень редко, и представляла собой сочетание не более трех клеток. В результате сравнения

мембран капсул было выявлено, что наружная поверхность хитозан-полифосфатной капсулы отличалась более рыхлой структурой по сравнению с альгинатной. Ядро и мембрана альгинатно-хитозановых капсул характеризовались большей плотностью. Благодаря формированию дополнительного слоя толщина мембраны таких капсул увеличивалась по сравнению с мембранами альгинатных капсул, что косвенно указывает на улучшение прочностных характеристик альгинатно-хитозановых капсул.

Для изучения возможности использования инкапсулированных форм пробиотических культур в молочных продуктах в лабораторных условиях было получено «Ацидофильное молоко» и «Ацидолакт» трех видов: I -выработанные со свободными клетками Lbm. acidophilus; II - выработанные с инкапсулированными и свободными клетками Lbm. acidophilus; 1П -выработанные с инкапсулированными клетками Lbm. acidophilus. Показано, что использование инкапсулированных форм пробиотических культур приводило к изменению активности ферментации молока. При получении «Ацидолакта» III типа активность ферментации составляла 6,0±0,5 ч, II типа - 5,0±0,5 ч, I типа -4,0±0,5 ч; при получении «Ацидофильного молока» - 12,5±0,5 ч, 7,0±0,5 ч и 4,5±0,5 ч, соответственно.

Выявлено, что инкапсулированные клетки были метаболически активны как в процессе получения, так и в процессе хранения продукта. Изучение кинетики кислотообразования инкапсулированных микроорганизмов показало, что скорость образования молочной кислоты была ниже по сравнению со свободными клетками. В течение 14 дней (при температуре хранения 4±2 °С) титруемая кислотность «Ацидолакта», полученного с помощью свободных клеток, достигала 130 °Т (максимально допустимое значение при хранении), с помощью инкапсулированных клеток - 100 °Т.

Инкапсулирование микроорганизмов обеспечивало надежную защиту клеток пробиотических культур в неблагоприятных условиях кисломолочных продуктов: количество инкапсулированных клеток Lbm. acidophilus в течение 30 дней хранения продуктов оставалось на исходном уровне. В случае использования свободных форм пробиотических культур количество клеток через 14 дней хранения снижалось и не соответствовало требованиям СанПиН 2.3.2.1078-01. Полученные данные указывают на возможность повышения выживаемости клеток микроорганизмов и увеличения сроков годности продуктов лечебно-профилактической направленности путем инкапсулирования пробиотических культур.

Как показали результаты исследований, одним из ограничений применения инкапсулированных форм пробиотических культур является увеличение времени ферментации молока. В этой связи предложено при производстве ферментируемых молочных продуктов применять традиционную заквасочную микрофлору совместно с инкапсулированной формой пробиотических культур с целью получения продуктов здорового питания, характеризующихся высокой профилактической эффективностью.

Анализ изучения свойств инкапсулированных форм пробиотических культур, полученных с применением различных капсулирующих веществ,

указывает на преимущества применения в молочных ферментированных продуктах альгинатно-хитозановых капсул, устойчивых к неблагоприятным условиям кисломолочных продуктов и желудочно-кишечного тракта, отличающихся стабильностью и прочностью, способных выдерживать значительные механические воздействия, и характеризующихся ферментативной и пробиотической активностью.

На основании результатов проведенных исследований научно обоснованы основные этапы совершенствования технологии пробиотических культур прямого внесения, позволяющие получать стартовые культуры с высоким уровнем стрессоустойчивых высокоадгезивных клеток; разработана технологическая инструкция на производство пробиотических культур прямого внесения (рис.10.).

Рис.10. Основные этапы совершенствования технологии пробиотических культур прямого внесения

Глава 6. Изучение показателей качества и безопасности пробиотических культур прямого внесения, полученных по усовершенствованной

технологии

Одним из важнейших свойств пробиотических культур является антагонистическое действие по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам. Показано, что инкапсулирование клеток не вызывало снижения антагонистической активности пробиотических культур, что свидетельствует о диффузии продуктов жизнедеятельности микроорганизмов из капсул. Пробиотические культуры прямого внесения, полученные с применением комбинации полисахаридов и фруктоолигосахаридов («Р1огааа»), характеризовались незначительным увеличением антагонистической активности по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам (рис.11).

Salmonella dublin

Proteus vulgaris

Kleb, pneumonei

Citr. freundii

Staph.aureus

E.coli

0 2 4 6 8 10

Количество клеток, lg КОЕ/см3

□ контроль

0 инкапсулированные клетки пробиотических культур Ш пробиотические культуры с пищевыми волокнами Floracia" И свободные клетки пробиотических культур

Puc.ll. Антагонистическая активность Lbm.acidophilus но отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам

Для подтверждения безопасности, профилактической эффективности действия и преимуществ использования инкапсулированной формы пробиотических культур по сравнению со свободными клетками были проведены исследования на линейных белых крысах. Животные были разбиты на три группы: I группе вводили- инкапсулированную форму консорциума микроорганизмов Lbm. acidophilus ANT-7, Lbm. helveticus LH-4, Lbm. rhamnosus LC-52GV, II группе - свободную форму консорциума микроорганизмов Lbm. acidophilus ANT-7, Lbm. helveticus LH-4, Lbm. rhamnosus LC-52GV, III группа - интактная - служила контролем.

В ходе эксперимента, продолжительность которого составила 22 дня, изучали изменение микрофлоры кишечника лабораторных животных, которое

W/M////»"»';//'/////;/;;;/////;///////////////;/, ............ "

'¿А

WW^WiW 1 |

показало, что после введения в рацион пробиотиков у крыс I группы количество бифидобактерий возрастало на 2,03 КОЕ/см3, лактобактерий - на 2,57 ^ КОЕ/см , бактероидов - на 0,98 ^ КОЕ/см3; у крыс II группы - на 1,26 ^ КОЕ/см3; 1,33 ^ КОЕ/см3 и 0,67 ^ КОЕ/см3, соответственно (табл.1).

Отмечено снижение патогенной и условно-патогенной микрофлоры у крыс I и II групп. При применении инкапсулированных форм данный процесс протекал более интенсивно, что говорит о большей выживаемости инкапсулированных пробиотических культур в условиях гастроэнтерального тракта и большей колонизационной резистентности по сравнению со свободной формой клеток. В контрольной группе не происходило видимых изменений в микробиоценозе кишечника лабораторных животных.

Таблица 1

Изменение микрофлоры кишечника лабораторных животных в ходе

эксперимента

Наименование микроорганизмов Количество клеток, lg КОЕ/ г

В начале эксперимента В конце эксперимента

I группа II группа III группа

Бифидобактерии 6,69±0,02 8,72±0,02 7,95±0,04 6,61±0,06

Лактобактерии 6,28±0,03 8,85±0,06 7,64±0,03 6,22±0,04

Бактероиды 7,45±0,02 8,43±0,03 8,12±0,05 7,32±0,02

Энтерококки 7,32±0,04 7,35±0,05 7,32±0,02 7,31 ±0,01

Спорообразукмцие анаэробы (клостридии) 3,62±0,01 1,06±0,02 2,18±0,0б 3,59±0,03

Staph.aureus 2,36±0,02 1,52±0,03 2,04±0,03 2,38±0,05

Грибы рода Candida 5,11±0,05 3,11 ±0,04 4,52±0,02 5,23 ±0,03

Кишечные палочки 7,84±0,06 7,91 ±0,02 7,85±0,03 7,81±0,04

Условно-патогенные энтеробактерии (Citrobacter, Enterobacter) 4,62±0,03 2,64±0,02 3,11±0,06 4,65±0,02

Рассчитанный интегральный показатель хронической интоксикации, а также клинический и биохимический анализ крови животных экспериментальных групп показали отсутствие значительных отклонений по сравнению с показателями контрольной группы, что свидетельствует об отсутствии токсического эффекта инкапсулированных форм пробиотических бактерий. В результате проведенного биологического эксперимента на линейных белых крысах установлено, что введение в рацион животных пробиотических культур позволяет повысить массу животных и резистентность организма за счет нормализации микрофлоры кишечника.

Важным для пробиотических культур прямого внесения является установление их способности к сохранению показателей качества и безопасности в течение длительного периода времени. Изучение показателей сухой биомассы различных штаммов пробиотических культур в процессе хранения проводили в течение 12 месяцев при различных температурных режимах: минус 18±2 °С, 4±2 °С, 20+2 °С. Показано, что применение пищевых

волокон «Р1огааа» совместно с сахарозо-желатозной средой и обезжиренным молоком обеспечивало создание максимально щадящих условий в течение длительного периода времени, что способствовало повышению стабильности и выживаемости клеток на 50-70% и приводило к увеличению сроков годности сухой биомассы пробиотических культур (рис.12).

И §

ы>

УЗ = 10,14-0,13* Я2 = 0,98

У1 = 10,91-0,03х Я2 = 0,98

23456789 Продолжительность хранения, мес

12.1. При температуре хранения минус 18±2 "С

»1 2 3 4 5 6 7 8

Продолжительность хранения, мес

▲ сахарозо-желатозная среда и обезжиренное молоко ■ сахарозо-желатозная среда, обезжиренное молоко и "Р1огааа" • обезжиренное молоко и "Иогааа"

12.2. При температуре хранения 4±2 °С

Рис. 12. Влияние комбинации полисахаридов и фруктоолигосахаридов в составе криопротекторных сред на изменение количества клеток ЬЬт.аЫ(1орМ1ю в процессе хранения

Установлено, что сухая биомасса, полученная с применением в качестве криопротектора сахарозо-желатозной среды и обезжиренного молока с добавлением комбинации полисахаридов и фруктоолигосахаридов 'Т1огас1а",

может храниться не менее 12 месяцев при температуре минус 18±2 °С, не менее 10 месяцев при 4±2 °С и не менее 4 месяцев при 20±2 °С в отличие от биомассы, полученной с применением сахарозо-желатозной среды и обезжиренного молока, которая может храниться в течение 6, 4 и 1,5 месяцев, соответственно. В течение указанных сроков биомасса сохраняла основные органолептические, физико-химические и микробиологические показатели. При этом концентрация жизнеспособных клеток микроорганизмов составляла не менее Ю10 КОЕ/г на конец срока хранения.

Анализ результатов, полученных при изучении характеристик инкапсулированных форм пробиотических культур в процессе хранения, свидетельствует о том, что количество жизнеспособных клеток оставалось на постоянном уровне в течение 12 месяцев и составляло не менее Ю10 КОЕ/г (при температуре хранения минус 18±2 °С).

Выводы

1. Научно и экспериментально обоснованы принципы увеличения стрессоустойчивости и адгезивной способности пробиотических культур прямого внесения, заключающиеся в создании консорциумов со штаммом, продуцирующим ЭПС, применении комбинации полисахаридов и фруктоолигосахаридов в составе криопротекторных сред при высушивании и получении инкапсулированных форм микроорганизмов.

2. Созданы высокоадгезивные консорциумы пробиотических микроорганизмов совместно с ЭПС-штаммом Streptococcus thermophilus ТСЭ-38. На основании изученного комплекса свойств новых штаммов пробиотических культур проведено их депонирование во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов с присвоением коллекционных номеров ВКПМ 9473, ВКПМ В-9471, ВКПМ В-9472, ВКПМ В-9475 за штаммами Streptococcus thermophilus ТСЭ-38, Lbm. acidophilus ANT-7, Lbm. helveticus LH-4, Lbm. rhamnosus LC-52GV, соответственно.

3. Показано, что применение комбинации полисахаридов и фруктоолигосахаридов в составе криопротекторной среды, состоящей из обезжиренного молока и сахарозо-желатозной среды, приводит к увеличению выживаемости пробиотических культур в ходе биотехнологического цикла на 10-15% и в процессе хранения культур прямого внесения на 50-70%.

4. Обоснованы рациональные условия инкапсулирования пробиотических культур, заключающиеся в применении в качестве капсулирующих веществ 2%-ного раствора альгината натрия в сочетании с хитозаном с молекулярной массой 500 кДа. Сравнительное изучение стрессоустойчивости микроорганизмов показало, что выживаемость инкапсулированных пробиотических культур в модельных условиях желудочно-кишечного тракта увеличивалась в среднем на 40-50% по сравнению со свободными клетками.

целесообразность применения инкапсулированных форм пробиотических культур с целью повышения профилактической эффективности действия продуктов здорового питания.

6. Проведена оценка качества и безопасности пробиотических культур прямого внесения по комплексу органолептических, физико-химических и микробиологических показателей. Установлено, что готовые формы обладали профилактической эффективностью и стабильно сохраняли показатели качества и безопасности не менее 12 месяцев при температуре хранения минус 18±2 °С, не менее 10 месяцев при 4±2 °С и не менее 4 месяцев при 20±2 °С.

7. Проведены производственные выработки пробиотических культур прямого внесения, показавшие возможность реализации разработанных принципов увеличения стрессоустойчивости и профилактической эффективности действия микроорганизмов для улучшения качества продуктов лечебно-профилактической направленности. Разработана технологическая инструкция на производство новых штаммов пробиотических культур прямого внесения.

Список работ, опубликованных по материалам диссертации

1) Ганина В.И. Результаты оценки антагонистической активности штаммов бифидобактерий, обитающих в кишечнике современных здоровых детей / В.И. Ганина, Н.В. Ананьева, Л.В. Давиденко, Д.П. Уфимкин, Т.В. Вустина, И.Н. Мозговая // Сборник материалов международной конференции. Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы. - 2-4 июня 2004. - М. - С.22-23

2) Ананьева Н.В. Характеристика способности пробиотических культур к выживанию в условиях желудочно-кишечного тракта / Н.В. Ананьева, Л.В. Давиденко, М.А. Федотова, В.И. Ганина // Материалы 3-й Международной научной конференции «Живые системы и биологическая безопасность населения»,- 25-26 ноября 2004.- С.291.

3) Ганина В.И. Идентификация микроорганизмов, используемых в биотехнологии пищевых продуктов / В.И. Ганина, М.М. Сониева, Н.В. Ананьева, О.Ю. Волобуева // Материалы 3-его Московского международного конгресса Биотехнология: состояние и перспективы развития. - 14-18 марта 2005.-М.-С. 155.

4) Ганина В.И. Микрокапсулирование как способ защиты пробиотических культур от неблагоприятных условий / В.И. Ганина, Н.В. Ананьева, Л.В. Калинина // Сборник статей 2-ой международной научно-практической конференции «Перспективы производства продуктов питания нового поколения». - Омск: ФГОУ ВПО ОмГАУ. - 2005.- С. 100-102.

5) Ананьева Н.В. Изучение популяционной изменчивости штаммов молочнокислых микроорганизмов, продуцирующих экзополисахариды / Н.В. Ананьева, Е.Ю. Жаркова, В.И. Ганина, Л.А. Борисова // Материалы 4-ой международной научной конференции студентов и молодых учёных «Живые

системы и биологическая безопасность населения». - М., МГУПБ. - 30 ноября 2005г.- С. 134-136.

6) Ганина В.И. Интегрированный подход к созданию стартовых культур / В.И. Ганина, Н.В. Ананьева, Т.В. Рожкова // Молочная промышленность. - 2005. -№11.- С. 23-24

7) Ганина В.И. Стартовые культуры в технологии продуктов питания и кормов / В.И. Ганина, Т.В. Рожкова, Н.В. Ананьева // МУ к выполнению лабораторных и научно-исследовательских работ для магистров техники и технологий направления 260100 - технология продуктов питания и студентов по специальностям: 260303, 260301, 260302, 260505, 240902, 240901.- М.:МГУПБ. - 2005.-33 с.

8) Ганина В.И. Закваски и аспекты их применения в молочной промышленности / В.И. Ганина, Н.В. Ананьева, JI.A. Борисова, И.В. Ким // Материалы IV научно-практической конференции «Перспективы развития масложировой, маслодельной и сыродельной промышленности». - 6-9 июня 2006 года. М.: Издательский комплекс МГУПП. - 2006. - С. 116-118.

9) Ананьева Н.В. Аспекты использования сыворотки в качестве питательной среды для получения биомассы молочнокислых микроорганизмов / Н.В. Ананьева, В.И. Ганина, И.Р. Ким, М.М. Фролова // Сборник материалов международного научно-практического семинара. Современные направления переработки сыворотки. - Ставрополь. - 2006. - С.78-79

10) Ганина В.И. Изучение свойств пробиотических культур / В.И. Ганина, Л.В. Калинина, Н.В. Ананьева, М.М. Сониева // Методические указания к выполнению лабораторных и научно-исследовательских работ для магистров техники и технологии по направлению 260100 - Технология продуктов питания и студентов специальностей 260303, 260301, 260302, 260505, 240902, 240901. -М.:МГУПБ.-2006.-41 с.

11) Ганина В.И. Изучение стабильности свойств молочнокислых бактерий / В.И.Ганина, Н.В.Ананьева, Л.А.Борисова, Е.Ю.Жаркова // Молочная промышленность. - 2006. - №10,- С.39-40

12) Ананьева Н.В. Изучение процесса ферментации молока капсулированными молочнокислыми микроорганизмами / Н.В. Ананьева, В.И.Ганина,

A.Н.Соловьева, М.А.Коромыслова // Материалы 5-ой международной научной конференции студентов и молодых учёных «Живые системы и биологическая безопасность населения». - М.: МГУПБ. - 2006г.- С. 25-27.

13) Ананьева Н.В. Влияние различных факторов на процесс формирования капсул с иммобилизованными микроорганизмами / Н.В.Ананьева, В.И.Ганина, Н.В.Нефедова, С.В.Абинскова // Сборник материалов научных чтений с международным участием, посвященных 100-летию со дня рождения профессора П.Ф.Дьяченко: научное издание. - М.: МГУПБ. - 2006. - С. 45-47

14) Ананьева Н.В. Перспективы применения иммобилизованных форм пробиотических бактерий в производстве молочных продуктов / Н.В.Ананьева,

B.И.Ганина, Н.В.Нефедова, Г.Р.Габрильян // Молочная промышленность. -2006.-№11,- С. 46-47

15) Ананьева Н.В. Изучение процесса хранения кисломолочного продукта, выработанного с применением капсулированных форм Lactobacterium acidophilus / Н.В.Ананьева, В.И.Ганина, Н.В.Нефедова, М.А.Коромыслова, С.В.Абинскова // Сборник научных трудов «Проблемы совершенствования холодильной техники и технологии. Энергосбережение». Выпуск 3. - М.: МГУПБ. - 2006,- С.79-82.

16) Ананьева Н.В. Изучение процесса культивирования молочнокислых палочек на питательных средах различного состава / Н.В.Ананьева, В.И.Ганина, Л.В.Калинина, А.Н.Соловьева // Переработка молока. - 2007. - № 2. - С.20-21

17) Ганина В.И. Особенности обеспечения стабильности капсул с иммобилизованными микроорганизмами в молочных продуктах / В.И. Ганина, Н.В.Ананьева, Е.В.Казакова, О.В.Виденин // Материалы четвертого Московского международного конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития». - М.:ЗАО «Экспо-биохим-технологии», РХТУ им. Д.И.Менделеева. - 2007. - часть 2 - С. 168.

18) Ананьева Н.В. Характеристика мембран капсул, предназначенных для иммобилизации пробиотических микроорганизмов / Н.В.Ананьева, В.И.Ганина, Е.В.Казакова // Актуальные вопросы совершенствования технологии производства и переработки продукции сельского хозяйства: Мосоловские чтения. Выпуск IX./ Материалы международной научно-практической конференции. Йошкар-Ола: Мар.гос.ун-т. - 2007. - Кн.2. - С.243-246

19) Ананьева Н.В. Влияние экзополисахаридов на стрессоустойчивость пробиотических культур / Н.В. Ананьева, В.И. Ганина // Сборник материалов международного конгресса. Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Фундаментальные и клинические аспекты. - Санкт-Петербург. - №1-2/2007. - С.20

20) Ганина В.И. Повышение биологического потенциала пробиотических бактерий в продуктах функционального питания / В.И. Ганина, Г.В. Семенов, Н.В. Ананьева // Материалы симпозиума Международной Молочной Федерации. - Москва. - 14-17 мая 2007. - С.287-288

21) Ананьева Н. В. Оценка методов исследования взаимодействия бактерий с клетками животных / Н.В. Ананьева, В.И. Ганина, Е.М. Ленченко, Н.Н. Ванина // Научно-теоретический журнал «Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук». - 2007. - №3. - С.53-55

Подписано в печать ^2.0?.Р?.Формат 60x84 1/16. Печать лазерная.

Усл.п.л. 1,50. Тираж 100 экз. Заказ 4/18.

ООО «Полисувенир»

109316, Москва, ул. Талалихина, 33.

Тел. 677-03-86

Оглавление автор диссертации — кандидата технических наук Ананьева, Наталья Валентиновна

ВВЕДЕНИЕ.

1. АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР.

1.1. Современное состояние рынка продуктов профилактической направленности.

1.2. Пробиотические культуры и их роль в биотехнологии щ продуктов лечебно-профилактической направленности.

1.3. Значение заквасок прямого внесения в производстве пробиотических и синбиотических продуктов.

1.4. Совершенствование технологии пробиотических культур прямого внесения.

1.4.1. Генная инженерия в биотехнологии пробиотических культур.

1.4.2. Влияние условий культивирования и состава питательных сред на процесс накопления биомассы пробиотических культур.

1.4.3. Процесс концентрирования биомассы. 1.4.4. Способы консервирования биомассы.

1.5. Аспекты решения проблемы выживаемости пробиотических культур.

1.5.1. Способы инкапсулирования.

1.5.2. Характеристика капсулирующих веществ.

1.5.3. Пути решения проблемы нестабильности капсул.

1.5.4. Свойства инкапсулированных форм пробиотических культур.

1.6. Обоснование перспективности выбранного направления, формулирование цели и задач работы. 2. ОРГАНИЗАЦИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА, ОБЪЕКТЫ

И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Организация эксперимента.

2.2. Объекты исследований.

2.3. Материалы и питательные среды.

2.4. Методы исследований.

2.4.1. Микробиологические методы.

2.4.2. Биохимические методы.

2.4.3. Генетические методы.

2.4.4. Методы получения и исследования инкапсулированных форм микроорганизмов.

2.4.5. Математические методы.

3. ПОВЫШЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ДЕЙСТВИЯ ПРОБИОТИЧЕСКИХ „ КУЛЬТУР, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫХ ДЛЯ ПРОДУКТОВ

ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЙ НАПРАВЛЕННОСТИ.

3.1. Изучение особенностей новых штаммов пробиотических культур.

3.2. Изучение популяционной изменчивости штаммов пробиотических культур.

3.3. Изучение стабильности свойств микроорганизмов.

3.4. Изучение адгезивной способности пробиотических культур.

3.5. Исследование влияния внешних факторов на способность штаммов пробиотических культур синтезировать ЭПС.

3.6. Увеличение адгезивной способности штаммов пробиотических культур.

4. ПУТИ СОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ТЕХНОЛОГИИ

ПРОБИОТИЧЕСКИХ КУЛЬТУР ПРЯМОГО ВНЕСЕНИЯ.

4.1. Подбор питательных сред для наращивания биомассы пробиотических культур.

4.2. Изучение развития пробиотических культур в условиях полунепрерывного культивирования.

4.3. Изучение возможности применения ВМС в составе защитных сред для сублимационного высушивания пробиотических культур.

5. ИССЛЕДОВАНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ

ИНКАПСУЛИРОВАНИЯ ПРОБИОТИЧЕСКИХ КУЛЬТУР.

5.1. Влияние различных факторов на процесс формирования капсул.

5.2. Изучение выживаемости инкапсулированных клеток

Lbm.acidophilus в условиях, имитирующих желудочно-кишечный тракт.

5.3. Изучение процесса диффузии клеток микроорганизмов и продуктов метаболизма из капсул.

5.4. Изучение характеристик мембран капсул, используемых для иммобилизации пробиотических культур.

5.5. Сравнительная характеристика капсул методом сканирующей электронной микроскопии. ф 5.6. Применение инкапсулированных форм пробиотических культур в технологии продуктов лечебно-профилактической направленности.

ГЛАВА 6. ИЗУЧЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА И БЕЗОПАСНОСТИ ПРОБИОТИЧЕСКИХ КУЛЬТУР ПРЯМОГО ВНЕСЕНИЯ, ПОЛУЧЕННЫХ ПО УСОВЕРШЕНСТВОВАННОЙ

ТЕХНОЛОГИИ.

6.1. Изучение антагонистической активности пробиотических культур прямого внесения, полученных по усовершенствованной технологии.

6.2. Исследование хронической токсичности и профилактической эффективности действия инкапсулированных пробиотических культур в биологическом эксперименте.

6.3. Изучение свойств сухой формы инкапсулированных пробиотических культур в процессе хранения.

6.4. Изучение показателей пробиотических культур прямого внесения, полученных по усовершенствованной технологии, в процессе хранения.

ВЫВОДЫ.

Введение 2007 год, диссертация по технологии продовольственных продуктов, Ананьева, Наталья Валентиновна

Актуальность работы. Фундаментальные и клинические исследования со всей очевидностью свидетельствуют о том, что микрофлора кишечника человека является легкоуязвимой частью микробного сообщества организма, а оптимальный микроэкологический статус желудочно-кишечного тракта -важным механизмом поддержания здоровья человека. В этой связи важнейшими задачами, направленными на оздоровление населения, являются исследования в области разработки новых эффективных пробиотических продуктов и препаратов-пробиотиков, совершенствование выпускаемых форм и интенсификация производства для гарантированного получения качественной продукции.

Теоретические и практические основы в области создания функциональных продуктов питания заложены в трудах Гавриловой Н.Б., Ганиной В.И., Евдокимова И.А., Забодаловой J1.A., Королевой Н.С., Рогова И.А., Рябцевой С.А., Семенихиной В.Ф., Титова Е.И., Тихомировой Н.А., Токаева Э.С., Хорольского В.В., Храмцова А.Г., Degeest В., Fuller R., Lee К., ShahN.P. и др.

На современном этапе существует объективная необходимость в увеличении эффективности действия продуктов лечебно-профилактической направленности, обусловленная снижением иммунорезистентности организма человека. В таких условиях ученые предлагают увеличивать нормируемое минимальное количество пробиотических бактерий с 106 КОЕ до 108-109 КОЕ в 1 г продукта, а также вводить в продукты пребиотики, способствующие развитию аутофлоры кишечника человека. Однако получение таких продуктов сопряжено с появлением дополнительных экономических затрат, обусловленных необходимостью внесения большего количества стартовых культур, часть которых, находясь в продукте и проходя через желудочно-кишечный тракт гибнет. В этой связи актуальными представляются исследования по поиску нового комплексного подхода к подбору штаммов пробиотических бактерий и питательных сред для накопления биомассы, созданию консорциумов микроорганизмов, расширению спектра криопротекторов, научному обоснованию и разработке современных способов защиты клеток, способствующих производству продуктов здорового питания, обладающих высоким лечебно-профилактическим действием.

Научная новизна работы. Предложен способ увеличения адгезивной способности пробиотических культур путем их сочетания со специально отобранным штаммом, синтезирующим экзополисахариды (ЭПС).

Практическая ценность работы. Получены высокоадгезивные консорциумы пробиотических культур. Определены стандартизованные питательные среды «Биос» и «TW50»/«MW50», позволяющие получать стабильное высокое количество жизнеспособных клеток пробиотических культур в биомассе.

Апробация работы. Результаты диссертационной работы доложены и обсуждены на 3-ей и 4-ой Международной научной конференции «Живые системы и биологическая безопасность населения» (2005г. и 2006г.); 3-ем и 4-ом Московском международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития», Всероссийской выставке научно-технического творчества молодежи НТТМ-2007, Москва (26 июня - 29 июня, 2007г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликована 21 работа, в т.ч. 4 статьи.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, аналитического обзора литературы, экспериментальной части, содержащей 5 глав, выводов, библиографического списка, приложений.

Заключение диссертация на тему "Совершенствование технологии пробиотических культур прямого внесения для молочных продуктов"

выводы

5. В опытах «in vivo» выявлены преимущества использования инкапсулированных пробиотических культур. Установлено, что полученная форма не проявляла кумулятивного токсического эффекта. Показана целесообразность применения инкапсулированных форм пробиотических культур с целью повышения профилактической эффективности действия продуктов здорового питания.

Библиография Ананьева, Наталья Валентиновна, диссертация по теме Биотехнология пищевых продуктов (по отраслям)

1. Барановський, А.Ю. Дисбактериоз и дисбиоз кишечника. / А.Ю. Барановський. Э.А. Кондрашина // Санкт-Петербург. 2002. - 224 с.

2. Вартанян, JI.C. Исследование определения супероксиддисмутазной активности в тканях животных с тетранитротетразолиевым синим / J1.C. Вартанян, С.М.Гуревич // Вопросы медицинской химии. -1982. -№ 5 С.23-26

3. Вековцев, А.А. Разработка новых бак.препаратов на основе новейших биотехнологий / А.А. Вековцев // www.artlive.ru. 2003

4. Волкова, О.В. Гистология, цитология и эмбриология: Атлас / О.В. Волкова, Ю.К. Елецкий, Т.К. Дубовая // М. Медицина. - 1996- 224 с.

5. Воробьев А.А. Дисбактериозы актуальная проблема медицины. /

6. A.А.Воробьев, Н.А.Абрамов, В.М. Бондаренко // Вести РАМН. -1997- №3 -С. 4-7

7. Гаврилова, Н.Б. Ферментированная молочная сыворотка // Молочная промышленность. 2006. - № 6. - С. 30

8. Ганина, В.И. Явление бактериофагии в молочной промышленности / В.И. Ганина, В.Ф. Семенихина // М. МГУПБ. - 1999. - 16 с.

9. Ганина, В.И. Пробиотики. Назначение, свойства и основы биотехнологии / монография / В.И. Ганина. М.: МГУПБ. - 2001. - 169 с.

10. Глик, Б. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение / Б. Глик, Дж. Пастернак // Пер. с англ. М.: Мир. - 2002. - 589 с.

11. Ю.Горбатова, К.К. Биохимия молока и молочных продуктов / К.К. Горбатова // СПб.: ГИОРД. 2001. - 320 с.

12. П.Горелов, А.В. Влияние пробиотического продукта «Актимель» на состояние здоровья детей. / А.В. Горелов, Д.В. Ксенко // Ж.:Вопросы современной педиатрии. 2003. - 4. - С. 87-90

13. Дзюба, В.А. Планирование многофакторных опытов и методы статистической обработки экспериментальных данных: метод, рекомендации /

14. B.А. Дзюба, Б.Н. Шмелев // М-во сел. хоз-ва РФ, рос. акад. с.-х. наук, Кубан. гос. аграр. ун-т, Всерос. науч.-исслед. ин-т риса Краснодар. 2004. - 83 с.

15. И.Доронин А.Ф. Функциональное питание. / А.Ф.Доронин, Б.А.Шендеров // М.:ГРАНТЪ.-2002.-296 с.

16. Иерусалимский, Н.Д. Теория и практика непрерывного культивирования микроорганизмов / Н.Д. Иерусалимский // Микробиология. 1961. - Т.30, вып. 5.- С. 818-824

17. Инструкция по микробиологическому контролю производства на предприятиях молочной промышленности / Москва. 1988. - 122 с.

18. Ким, В.В. Зарубежный опыт использования пребиотиков. / В.В. Ким, Э.Т. Щербакова, Д.В. Харитонов // Молочная промышленность. 2001. - №2 - С.25

19. Коршунов В.М. Проблема регуляции микрофлоры кишечника. / В.М. Коршунов // Микробиология. 1995. - №3. - С.40

20. Красникова, J1.B. Непрерывное культивирование молочнокислых бактерий с целью накопления биомассы и продуктов метаболизма / J1.B. Красникова, Е.И. Кострова // Обзорная информация ЦНИИТЭИ мясомолпром. М - 1979. -14с.

21. Крусь, Г.Н. Методы исследования молока и молочных продуктов / Г.Н. Крусь, A.M. Шалыгина, З.В. Волокитина // М.: Колос. 2000. - 368 с.

22. Маниатис, Т. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование / Т. Маниатис, Э. Фрич, Дж. Сэмбрук // М.:Мир.-1984. 479с.

23. Лопатина, Т.К. Иммуномодулирующее действие препаратов эубиотиков. / Т.К. Лопатина, М.С. Бляхер, В.Н. Николоянков // Вести РАМН. 1997.- №3 -79 с.

24. Мойсеенок, А.Г. Бифидобактерии и их использование в клинике, медицинской промышленности и сельском хозяйстве. // А.Г. Мойсеенок, JI.A. Кудрячева, Е.Д. Русина. М.: Агропромиздат. - 1996. - 120 с.

25. Парфенов, И.А. Теоретические и прикладные вопросы дисбактериоза кишечника. / И.А. Парфенов // Consilium medicum. 2003. - 6. - С. 328-330

26. Рогов, И.А. Пищевая биотехнология / И.А. Рогов, JI.B. Антипова, Т.П. Шуваева // В 4 кн. Кн. 1. Основы пищевой биотехнологии. М.: Колос. - 2004. -440 с.

27. Родоман, В.Е. Лактулоза и ее лечебные свойства. / В.Е. Родоман, В.И. Максимов // М.: ГРАНТЪ. 2000. - 80 с.

28. Родон, В.Е. Лечебно-профилактические свойства молочных продуктов, обогащенных лактулозой. / В.Е. Родон, В.И. Максимов // Молочная промышленность 2002. - №2. - С.30

29. Рябцева С.А. Технология лактулозы / С.А. Рябцева // Учебное пособие. -М.:ДеЛи принт. 2003. - 232 с.

30. Сазонова О.П. Пребиотические свойства пюре топинамбура. / О.П. Сазонова, Т.В. Фрампольская // Пищевая технология. 2001. №2. - С.2-3

31. СанПиН 2.3.2.1078 2001 Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов.

32. Сборник инструкций по селекции молочнокислых бактерий и бифидобактерий и подбору заквасок для кисломолочных продуктов / М. 1986

33. Скородумова, A.M. Диетические и лечебные кисломолочные продукты. / A.M. Скородумова//Медиздат. 1991. - 105 с

34. Смирнов, В.В Создание и практические применение математической модели антагонистического действия бацилл при конструировании пробиотиков. // В.В. Смирнов, О.Н. Рева, В.А. Вьюницкая // Микробиология-1995. том 64, № 5. - с. 661-667

35. Сорокулова, И.Б. Рекомбинантные пробиотики: проблемы и перспективы использования в медицине и ветеренарии. / И.Б. Сорокулова, К.Н. Белявский // Вести РАМН-1997.-С.З

36. Степаненко, П.П. Микробиология молока и молочных продуктов / П.П. Степаненко // Учебник для ВУЗов. Сергиев Посад: ООО «Все для Вас -Подмосковье» . - 1999. - 415 с.

37. Тамим, А.Й. Йогурт и другие кисломолочные продукты: научные основы и технологии. / А.Й. Тамим, Р.К. Робинсон. // Пер. с англ. под науч. ред. JT.A. Забодаловой. СПб: Профессия. - 2003. - 664 с.

38. Усенко, С.В. Пробиотики и пребиотики в молочных продуктах питания. / С.В. Усенко // Белорусский информационно-рекламный журнал. Пищевая промышленность. 2003. -№11-12. - С. 15-16

39. Храмцов А.Г. Лактулоза и функциональное питание. / А.Г.Храмцов, В.Д.Харитонов, И.А.Евокимов //Молочная промышленность.-2002.-№5- С.5

40. Шевелева, С.А. Максимально полезные пребиотики. / С.А. Шевелева// Здоровое питание. 2002. - №4 - С.25

41. Шендеров, Б.А. Антибиотики и химиотерапия. / Б.А. Шендеров // М.: Медиздат. 1990. - 80 с.

42. Шендеров, Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. / Шендеров Б.А. // Том 3: Пробиотики и функциональное питание. -М.: Изд-во «Грантъ». 2001. - 288 с.

43. Abee, Т. Microbial stress response in minimal processing. / T. Abee, J.A. Wounters. // International journal of food microbiolgy. 1999. - 50. - C.65-91

44. Adhikari, A. Viability of microencapsulated bifidobacteria in set yogurt during refrigerated storage. / A. Adhikari, A. Mustapha, I.U. Grun, L. Fernando // Journal dairy science. 2000. - 83(9). P. 1946-1951

45. Ana, S. Relevant factors for preparation of freeze-dried lactic acid bacteria. / S. Carvalho Ana, Joana Silva, Peter Ho, Paula Teixeira, F. Xavier Malcata, Paul Gibbs// International dairy journal. 2004. - 14. P.835-847

46. Amanatidou, A. Superoxide dismutase plays an important role in the survival of L. sake upon exposure to elevated oxygen / A. Amanatidou, M.N. Bennir, L.G. Gorris // Arch. Microbiol. 2001. - 179. (1-2) - P. 79-88

47. Alvarez-01mos, M.I. Probiotic agents and infectious diseases: a modern perspective and traditional therapy. / M.I. Alvarez-Olmos, R.A. Oberhelman // Clin Infect Dis. 2001. - 32(11). - P.1577-1578

48. Axession, L.T. Lactic acid bacteria; classification and physiolgy. / Axession L.T. // In S.Salminen, A.von Wright (Eds.), Lactic acid bacteria. New York: Marcel Dekker, Inc.- 1998.-P. 1-72

49. Azuma, Y. Lactobacillus casei NY 1301 increases the adhesion of Lactobacillus gasseri NY 0509 to human intestinal Caco-2 cells / Y. Azuma, M. Sato // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2001. - V.65. -№10. - P. 2326-2329

50. Beney, L. Influence of fluidity of the membrane in response of microorganisms to environmental stresses. / L. Beney, P. Gervais // Applied microbiolgy and biotechnolgy. 2001. -57. - P.34-42

51. Bielecka, M. Selection of probiotic and prebiotics for synbiotics and confirmation of their in vivo effectiveness. / M. Bielecka, F. Biedrycka, A. Majkowska // Food research international. 2002. - 35. - P. 125-131

52. Billi, D. Life and death of dried prokaryotes. / D. Billi, M. Potts // Research in microbiolgy. 2002,- 153.- P.7-12

53. Broadbent, J.R. Effect of heat shock or cold shock treatment on the resistance of Lactococcus lactis to freezing and liophilization. / J.R. Broadbent, C. Lin // Cryobiolgy. 1999. -39. - P.88-102

54. Byrne, M. Pre-, pro- and Synbioties. / M.Byrne // Fortified Future for Functional Foods. Eur Ed. 1997. - P.235-239

55. Cardinal, M.J. Isolation of lactococcus lactis strains producing inhibitory activity against Listeria. / M.J. Cardinal, J. Meghrous, C. Lacroix, R.E. Simard // Food Biotechnolgy. 1997.- 11.-P. 129-146

56. Carvalho, A.S. Protective effect of sorbitol and monosodium glutamate during storage of freeze-dried lactic acid bacteria. / A.S. Carvalho, J. Silva, P. Ho, P. Teixera, F.X. Malcata, P. Gibbs// Le Lait 2003. - 83. - P.203-210

57. Casto, H. Storage of lyophilized cultures Lactobacillus bulgaricus upon different temperatures and atmospheres. / H. Casto, P. Teixera, R. Kirby // Applied microbiolgy and biotechnolgy. 1995. - 44. - P. 172-176

58. Champagne, C.P. Lactococcus lactis release from calcium alginane beads / C.P. Champagne, C. Caudy, D. Poncelet, R.J. Neufeld // Applied and environmental microbiolgy. 1992. - 58 (5). -P.1429-1434

59. Champagne, C.P. Immobilized cells technolgies for the dairy industry. / C.P. Champagne, C. Lacroix, I. Sodini-Gallot // Critical reviews in biotechnolgy. 1994. -14(2). -P.109-134

60. Charalampopoulos, D. Growth studies of potentionally probiotic lactis acid bacteria in cereal-based substrates. / D. Charalampopoulos, S.S. Pandiella, C. Webb // Journal of applied microbiolgy. 2002. - 92. - P.851-859

61. Chervaux C. Physiolgical study of Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus stains in a novel chemically defined medium / C. Chervaux, S.D. Ehrlich, E. Maguin // Applied and environmental microbiolgy. 2000. - 66 (12). - P.5306-5311

62. Daly, C. The biotechnolgy of lactic acid bacteria with emphasis on applications in food safety and human health / C. Daly, R. Davis // Agricultural and Food Science in Finland. Vol 7. - №2. - 1998. - P. 251-265

63. Daly, C. Technolgical and health benefits of dairy starter cultures / C. Daly, G.F. Fitzgerald,//International Dairy Journal. 1998.- №8.- P. 195-205

64. Dave, R. Viability of yogurt and probiotic bacteria in yogurt from commercial starter culture / R. Dave, N.P. Shah // International dairy journal. -1997. 7. - P.31-41

65. Dave, R.I. Effectiveness of ascorbic acid as an oxygen scavenger in improving viability of probiotic bacteria in yogurts made with commercial starter cultures / R.I. Dave, N.P. Shah // International dairy journal. 1997. - 7. - P.435-443

66. Dave, R.I. Viability of yogurt and probiotic bacteria in yogurts made with commercial starter cultures / R.I. Dave, N.P. Shah // International dairy journal. -1997.-7.-P.31-41

67. Dave, R.I. Ingredient supplementation effects on viability of probiotic bacteria in yogurt/R.I. Dave, N.P. Shah//Journal dairy science. 1998. - 81. -P.2804-2816

68. Davies, E.A. The use of bacteriocins, nisin, as a preservative in ricotta-type cheeses to control the food-borne pathogen Listeria monocytogenes / E.A. Davies, H.E. Bevis, J. Delves-broughton // Letters in applied microbiolgy. 1997. - 24. -P.343-346

69. Degeest, B. Exopolysaccharide (EPS) biosynthesis by Lactobacillus sakei 0-1: Production kinetics, enzyme activities and EPS yield / B. Degeest, B. Janssens, L. de Vuyst // Journal of applied microbiolgy. 2001. - 91. - P.470-477

70. Degeest, B. Microbial physiolgy, fermentation kinetics, and process engineering heteropolysaccharide production by lactic acid bacteria / B. Degeest, F. Vaningelgem, L. de Vuyst // International dairy journal. 2001. - 11. - P.747-757

71. Desmont, C. Environmental adaptations lactobacilli towards improvement of performance during spray drying / C. Desmont, C. Stantont, G.F. Fitzgerald, K. Collins, R.P. Ross//International dairy journal. -2001. 11. -P.801-808

72. De Vuyst, L. Recent developments in the biosynthesis and applications of heteropolysaccharide from lactic acid bacteria / L. de Vuyst, F. de Vin, F. Vaningelgem, B. Degeest // International dairy journal. 2001. - 11. - P.687-707

73. Douglas, G. Simple and rapid method for isolation large plasmid DNA from Lactic Streptococci / G. Douglas, Anderson, L. Larry Mc.Kay // Applied and Environmental microbiolgy. 1983. - P. 549-552

74. Drounault, S. Survival, physiolgy and lysis of Lactococcus lactis in the digestive tract / S. Drounault, G. Corthier, S.D. Ehrlich, P. Renault // Appl. Environ. Microbiol. 1999. - №1. -V.65. - P. 4881-4886

75. Du, F. Lactose transport, (3-galactosidase activity, and bile and acid tolerance of bifidobacteria / F. Du, S. Zhang, A. Mustapha // IFT Annu. Mtg. 1998. - P. 106

76. Eva, R. Diversity of bacteriocins produced by lactic acid bacteria isolated from raw milk / R. Eva, Beatriz Gonzales, Pilar Gaya, Manuel Nunez, Margarita Medina // International dairy journal. -2000. 10. - P.7-15

77. Ennahar, S. Inhibition of Listeria monocytogenes in smear-surface soft cheese by Lactobacillus plantarum WHE 92, a pediocin AcH producer / S. Ennahar, O. Assobhei, C. Hasselmann // Journal of food protection. 1998. - 61. - P. 186-191

78. Favaro-Trindate, C.S. Microencapsulation of L.acidophilus (La-05) and B.lactis and evalution of their survival at the pH values of the stomatch and bile / C.S. Favaro-Trindate, C.R. Grosso // J Microencapsulation. 2002. - 19(4). - P.485-94

79. Fonseca, F. Method for quantifying the loss of acidification activity of lactic acid starters during freezing and frozen storage / F. Fonseca, C. Beal, G. Corrieu // Journal of dairy research. 2000. - 67. -P. 83-90

80. Fooks, L.J. Prebiotics, probiotics and human gut microbiolgy / L.J. Fooks, R. Fuller, G.R. Gibson // Intern Dairy J. 1999. - 1. - 180 p

81. Fuller, R. Probiotic foods. Current use and future developments. / R. Fuller // Int Food Ingred. 1993. - 3. - P. 23-26

82. Fuller, R. Probiotics 2 applications and practical aspects. / R. Fuller// London: Chapman and Hall. - 1997. - 120 p

83. Gardiner, G.E. Comparative survival rates of human derived probiotic Lactobacillus paracasei and L.salivarius strains during heat treatment and spray drying / G.E. Gardiner, E. Osullivan, J. Kelly, M.A.E. Aury, G.F. Fitzgerald, J.K.

84. Collins, R.P.' Ross, С. Stanton // Applied and environmental microbiolgy. 2000. -66 (6). -P.2605-2612

85. Gibson, G.R. Dietary modulation of the human colonic microbiota; Introducing the concept of prebiotics / G.R. Gibson, M.B. Roberfroid // J. Nutr. 1995. - 125. -P. 1401-1412

86. Gissen, A.S. Off Probiotics, Prebiotics and Synbiotics / A.S. Gissen // Iss VRP's Inc.Vit Res Prod Newsletters, USA. 1995. - 170 p

87. Gombotz ,W.R. Protein release from alginate matrices / W.R. Gombotz, S.F. Wee // Advanced drug delivery review. 1998. - 31. - P.276-285

88. Gouesbet, G. Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus thermotolerance / G. Gouesbet, G. Jan, P. Boyaval // Le Lait. 2001. - 81 - P.301-309

89. Greene, J.D. Factors involved in adherence of lactobacilli to human Caco-2 cells / J.D. Greene, T.R. Klaenhammer // Appl. Environ. Microbiol. 1994. -V.60. -P. 4487-4494

90. Groboillot, A.F. Membrane formation by interfacial cross-linking of chitosan for microencapsulation of Lactococcus lactis // A.F. Groboillot, C.P. Champagne, C.D. Darling, D. Poncelet // Biotechnolgy and bioengineering. 1993. - 42(10). -P.l157-1163

91. Hartley, D.L. The role of lactic acid bacteria in yogurt fermentation / D.L. Hartley, G. Denariaz // Int. J. Immunotherapy. 1993. - 9(1). - P. 3-17

92. Hassan, A.N. Factors affecting capsule size and production by lactic acid bacteria used as dairy starter cultures / A.N. Hassan, J.F. Frank, S.I. Shalabi // International journal of food microbiolgy. 2001. - 64. - P.l99-203

93. Hattaka, K. Effect of long term consumption of probiotic milk on infections in children attending day care centres: double-blind, randomized trial. / K. Hattaka // Br J Med.-2001.-322.-P. 1327-1329

94. Hekmat, S. Survival of Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium bifidum in ice cream for use as probiotic food // S. Hekmat, D.J. McMahon // Journal dairy science 1992. 75(6). - P. 1415-1422

95. HeIiand, M.H. Growth and metabolisme of selected strains of probiotic bacteria, in maize porridge with added malted barley / M.H. Heliand, T. Wicklund, J.A. Narvhus // International journal of food microbiolgy. 2004. - 91. - P.305-313

96. Heller, K.J. Probiotic bacteria in fermented foods: product characteristics and starter microorganisms / K.J. Heller // Americal journal of clinical nutrition. 2001. - 73. - P.374-379

97. Hou, R.C.W. Increase of viability of entrapped cells of Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus in artificial sesame emulsions / R.C.W. Hou, M.Y. Lin, M.M.C. Wang, J.T.C. Tzen // Journal dairy science. 2003. -86. - P.424-428

98. Jacson, L.S. Microencapsulation and the food industry / L.S. Jacson, K. Lee // Lebensmittel-Wissenshaft Technol. 1991. - 24. - P.289-297

99. Jankowski, T. Encapsulation of lactic acid bacteria with alginate/starch capsules / T. Jankowski, M. Zielinska, A. Wysakowska // Biotechnolgical Technolgy. -1997. 11. - P.31-34

100. Kailasapathy, К. Microencapsulation of probiotic bacteria: technolgy and potential applications / K. Kailasapathy // Curr Issues Intest Microbiol. 2002. -3(2). - P.39-48

101. Kaur, I.P. Probiotics: potential pharmaceutical applications. / I.P. Kaur, K. Chopra, A. Saini // Eur J Pharmaceutical Sci. 2002. - 15(1). - P. 1-9

102. Kebary, K.M. Improving viability of bifidobacterium and their effect on frozen ice milk / K.M. Kebary, S.A. Hussein, R.M. Badawi // Egyptian journal dairy science. -1998. 26. - P.319-337

103. Khalil, A.H. Alginate encapsulated bifidobacteria survival in mayonnaise / A.H. Khalil, E.H. Mansour// Journal food science. 1998. - 63. - P.702-705

104. Kim, H.S. Method for the preparation of stabile microencapsulated lactic acid bacteria / H.S. Kim, B.J. Kamara, I.C. Good, G.L. Enders // Journal of undustrial Microbiolgy. 1998. -3. - P.253-257

105. Kim, K.I. A study on the preparation of direct vat lactic acid bacterial starter / K.I. Kim, Y.N. Yoon // Korean journal of dairy science. 1995. - 86. - P.424-428

106. Kimmel, S.A. Development of a growth medium suitable for exopolysaccharide production by Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus RR / S.A. Kimmel, R.F. Roberts, G.R. Zierler // International journal of food microbiolgy. 1998. - 40. -P. 87-90

107. Kimoto, H. Enchancement of bile tolerance in lactococci by Tween 80 / H. Kimoto, S. Ohmomo, T. Okamoto // Journal of applied microbiolgy. 2002. - 92. -P.41-46

108. King, A.H. Encapsulation of food ingredients: a review of available technolgy, focusing on hydrocolloids / S.J.Risch, G.A.Reineccius // Washington DC: American Chemical Society. 1995. - P.213-220

109. Knoshaug, E.P. Growth associated exopolysaccharide expression in Lactococcus lactis subspecies cremoris ropy 352 / E.P. Knoshaug, J.A. Ahlgrent and J.E. Trempy // Journal of Dairy Science. Vol.83.- No.4.- 2000. - P. 633-640

110. Koo, S. Improvement of the stability of Lactobacillus casei YIT 9018 by microencapsulation using alginate and chitosan / S. Koo, Y. Cho, C. Huh, Y. Beak, J. Park // Journal of microbiolgy and biotechnolgy. 2001. -11(3). - P.376-383

111. Krasaekoopt, W. Evalution of encapsulation techniques of probiotics for yoghurt: a review / W. Krasaekoopt, B. Bhandary, H. Deeth // International dairy journal. 2003. - 13(1). - P.l-13

112. Krishnakumar, V. Probiotics: challenges and opportunities / V. Krishnakumar, I.R. Gordon // Dairy Industries International. 2001. - №2. - P. 150-156

113. Kwak, H.S. Microencapsulation of p-galactosidase with fatty acid esters / H.S. Kwak, M.R. Ihm, J. // Ahn Journal dairy science. 2001. - 84. - P. 1576-1582

114. Lancaputhra, W.E.V. Survival of Lactobacterium acidophilus and Bifidobacterium spp. in the presence of acid and bile salts / W.E.V. Lancaputhra, N.P. Shah // Culture dairy product journal. 1995. -30. - P.2-7

115. Lancaputhra, W.E.V. Survival of Bifidobacterium during refrigerated storage in the presence of acid and hydrogen peroxide / W.E.V. Lancaputhra, N.P. Shah // Milchwissenschaft. 1996. - 51. - P.65-70

116. Larisch, B.C. Microencapsulation of Lactoccocus lactis subsp. cremoris / B.C. Larisch, D. Poncelet, C.P. Champagne // Journal of microencapsulation. 1994. -11(2).-P.189-195

117. Lee, K. Survival of Bifidobacterium longum immobilized in calcium alginate beads in simulated gastric juices and bile salt solution / K. Lee, T. Heo // Applied and environmental microbiolgy. 2000. - 66(2). - P.869-873

118. Lee, K. Estimating the viability of Bifidobacterium longum in Ca-alginate beads against simulated gastroenteric juices / K. Lee, J. Kim, Y. Lee, E. Choi, D.

119. Shin, Т. Heo I I Journal of microbiolgy and biotechnolgy. 2001. - 11(1). - P.97-105

120. Lee, K. Survival of Bifidobacterium breve in acidic solution and yogurt, following immobilization in calcium alginate beads / K. Lee, J. Kim, W. Yu, Y. Lee, S. Yoon, T. Heo // Journal of microbiolgy and biotechnolgy. 2001. -11(3). -P.412-417

121. Lian, W.-C. Survival of bifidobacteria after spray-drying / W.-C. Lian, H.-C. Hsiao, C.-C. Chou // International journal of food microbiolgy. 2002. - 74. - P.79-86

122. Lilly, D.M. Probiotics: Growth promoting factors produced by microorganisms. / D.M. Lilly, R.H. Still well // Science. 1985. - 147. - P. 747-748

123. Looijesteijn, P.J. Physiolgical function of exopolysaccharides produced by Lactococcus lactis / P.J. Looijesteijn, L. Trapet, E. de Vries, T. Abee, Hugenholtz // International journal of food microbiolgy. 2001. -64. - P.71 -87

124. Lorca, G.L. The effect of suboptimal growth temperature and growth phase on resistance of Lactobacillus acidophilus to environmental stress / G.L. Lorca, G. Font de Valdez // Cryobiolgy. 1999. - 39. - P.144-149

125. Low, D. Role of Streptococcus thermophilus MR-1C capsular exopolysaccharide in cheese moisture retention / D. Low, J.A. Ahlgren, D. Home, D.J. McMahon, C.J. Oberg, J.R. Broadbent // Applied and environmental microbiolgy. 1998. -64 (6). - P.2147-2151

126. Madsen, K. Probiotic bacteria enhance murine and human intestinal epithelial barrier function. / K. Madsen, A. Cornish, P. Soper // Gastroent. 2001. - 121. - P. 580-591

127. Marshall, V.M. Starter cultures employed in the manufacture of biofermented milks / V.M. Marshall, A.Y. Tamime // International Journal of Dairy Technolgy. -Vol 50. -№1. 1997.-P. 35-41

128. Marteau, P. Survival of lactic acid bacteria in a dynamic model of the stomach and small intestine: validation and the effects of bile / P. Marteau, M. Minekus, R. Havenaar// J. Dairy Sci. 1997. - V.80. - P. 1031-1037

129. Martensson, О. The effect of yoghurt culture on the survival of probiotic bacteria in oat-based, non-dairy products / 0. Martensson, R. Oste, 0. Hoist // Food research international. 2002. - 35. - P.775-784

130. Martinez, M.I. Detection of specific bacteriocin-producing lactic acid bacteria by colony hybridization / M.I. Martinez, E. Rodriguez, M. Medina, P.E. Hernandez, J.M. Rodriguez//Journal of applied microbiolgy. 1998. - 84. - P. 1099-1103

131. Mary, M. Daly. Chitosan-alginate complex coacervate capsules: effects of calcium chloride, plasticizers and polyelectrolytes on mechanical stability / M. Daly Mary, Knorr Dietrich // Biotechnolgy progress. 1998. - vol.4, No.2. - P.1234-129

132. McAuliffe, 0. Inhibition of Listeria monocytogenes in cottage chesse manufactured with a lacticin 3147-producing starter culture / O. McAuliffe, C. Holl, R.P. Ross //Journal of applied microbiolgy. 1999. - 86. - P.251-256

133. McLean Ross, A.H. A study of the effects of dietary gum arabic in the rat / A.H. McLean Ross//British journal of nutrition.- 1984.- 51.- P. 47-56

134. McLean Ross, A.H. A study of the effects of dietary gum arabic in humans / A.H. McLean Ross // The American journal of clinical nutrition. 1983. - March.- P. 368-375

135. Merete, H. Growth and metabolism of selected strains of probiotic bacteria in milk and water-based cereal puddings / H. Helland Merete, Trude Wicklund, A. Narvhus Judit // International Dairy Journal. -2004. -14. P.957-965

136. Michel, C. In vitro prebiotic effects of acacia gums onto human intestinal microbiota depends on both botanical origin and environmental рН / C. Michel, T. Kravtchenko, A. David, S. Gueneau, F. Kozlovski, C. Cherbut // Anaerobe. 1998.- №4. P. 257-266

137. Mizota, T. Functional and nutrional food containing bifidogenic factors / T.Mizota// Int. Dairy Fed. 1996. - №313. - 250 p

138. Mizota, T. Lactulose as a sugar with physiolgical significance / T. Mizota, Y. Tamura, M. Tomita, S. Okonogi // Int. Dairy Fed. 1987. - № 212. - 180 p

139. Murata, Y. Preparation of chitosan-reinfirced alginate gel beads-effect of chitosan on gel matrix erosion / Y. Murata, T. Meada, E. Miyamoto, S. Kawashima // International journal of pharmaceutics. -1993. 96(1-3). - P.139-145

140. Murata, Y. Preparation of alginate gel beads containing chitosan salt and their function / Y. Murata, S. Toniwa, E. Miyamoto, S. Kawashima // International journal of pharmaceutics. -1999. -176(2). P.265-268

141. Murga, M.L.F. Influence of growth temperature on crytolerance and lipid composition on Lactobacillus acidophilus / M.L.F. Murga, G.M. Carbera, G. Font de Valdez, A. Disalvo, A.M. Seides // Journal of applied microbiolgy. 2000. - 88. -P.342-348

142. Nordic Industrial Fund. Safe use of lactic acid bacteria in food / Center for innovation and commercial development. March. - 2001. - 6 p.

143. Palmfledt, J. Influence of culture pH on survival Lactobacillusreuteri subjected to freeze-drying / J. Palmfledt, B. Hahn-Hagerdal // International journal of food microbiolgy. 2000. - 55(1-3). - P.235-238

144. Mauriello, G. Spray-drying of bacteriocin-producing lactic acid bacteria / G. Mauriello, M. Aponte, M. Andolfi, G. Moschetti, F. Villani // Journal of food protection. 1999. - 62(7). - P.773-777

145. Pedone, C.A. The effect of supplementation with milk fermented by Lactobacillus casei DN-114001, on acute diarrhea in children attending day cavecenters / C.A. Pedone, A.O. Bernaubeu, E.R. Postaire // Intern. J. Clin. Pract. -1999.-Vol. 53.-P. 179-184

146. Pei-Ren, L.O. Antimutagenic activity of several probiotic Bifidobacterium against benzoapyrene / L.O. Pei-Ren, Roch-Chui-Yo, Cheng Chun Chou // J. Biosci. Bioengin. 2002. - №2. - V.94. - P. 148-153

147. Poncelet, D. Scale-up of gel bead and microcapsule production in cell immobilization / D. Poncelet, S.B. Poncelet, C. Beaulieu, R.J. Neufeld / Boca Raton: CRC Press Inc. 1993. - P.532-547

148. Ramos, A. Relationship between glycolysis and exopolysaccharides biosynthesis in Lactococcus lactis / A. Ramos, I.G. Boels, M. de Vos Willem, H. Santos // Applied and Environmental Microbiolgy.-2001 .-Vol.67.- №1.- P. 33-41

149. Rao, D.R. Liposamal encapsulation of {3-galactosidase: comprasion of two methods of encapsulation and in vitro lactose digestibility / D.R. Rao, C.B. Chawan, Veeramachaneni // Journal food biochemistry. 1995. - 18. - P.239-251

150. Ravula, R.R. Viability of probiotic bacteria in fermented frozen dairy dessrts / R.R. Ravula, N.P. Shah // Food Aust. 1998. - 3. - P.136-139

151. Rautava, S. Probiotics during pregnancy and breastfeeding might confer immnomodulatory protection against atopic disease in the infant. / S. Rautava, M. Kalliomaki, E. Isolauri // J Allergy Clin Immunol. 2002. - P. 109-111

152. Ruas-Madiedo, P. An overview of the functionality of exopolysaccharides produced by lactic acid bacteria / P. Ruas-Madiedo, J. Hugenholdz, P.Zoon // International dairy journal. 2002. - 12. - P. 163-171

153. Saavedra, J.M. Probiotics and infectious diarrhea. / J.M. Saavedra // Amer. J. Gastroenterol. 2000. - V.95. - P. 16-18

154. Saavedra, J.M. Human studies with probiotics and prebiotics: clinical implication. / J.M. Saavedra, A. Tscherina // Br J Nutr. 2002. - 87(2). - P. 241246

155. Salmine, S. Clinical use of probiotics for stabilizing the gut mucosal barrier: successful strains and future challenges. / S. Salmine, E. Isolauri, E. Salmine // Antonie Van Leeuwenhoek. 1996. - 70. - P. 347-358

156. Siuta-Cruce, P. Improving probiotic survival rates / P. Siuta-Cruce, J. Goulet // Food Technol. 2001. - №10. - V.55. - P. 36-42

157. Shah N.P. Probiotic bacteria: selective and enumeration and survival in dairy foods. / Journal dairy science.// 2000. - 83. - P. 894-907

158. Shah, N.P. Improving viability of Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium ssp. in yoghurt / N.P. Shah, W.E.V. Lankaputhra // International dairy journal. 1997. - 7(5). - P.349-356

159. Shah, N.P. Survival of Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium bifidum in commercial yoghurt during refrigerated storage / N.P. Shah, W.E.V. Lankaputhra, M. Britz, W.S.A. Kyle // International dairy journal. 1995. - 5(5). - P.515-521

160. Shah, N.P. Microencapsulation of probiotic bacteria and their survival in frozen fermented dairy desserts / N.P. Shah, R.R. Ravula // Researcher paper. 2000. -84(3). - P.342-348

161. Sherine, A.I. Survival of nonencapsulated and encapsulated Bifidobacterium bifidum in probiotic Kareish cheese / Abou Dawood Sherine A.I. // Egyptian Journal of Dairy Science. 30.- 2002.- P. 43-52

162. Sheu, T.Y. Improving culture viability in frozen dairy desserts by microencapsulation / T.Y. Sheu, R.T. Marshall // Journal dairy science. 1991. - 74. -P.107-110

163. Spiegel, J.E. Savety and Benefits of fructooligosaccharides as food ingredients / J.E. Spiegel, R. Rose, P. Karabell // Food technolgy. 1994. - 1. -500 p

164. Squillante, E. Microencapsulation of beta-galactosidase with Eudraget L-10 / E. Squillante, G. Morshed, S. Bagchi, K.A. Mehta // J Microencapsul. 2003. -20(2). -P.153-67

165. Stanton, C. Market potential for probiotics / C. Stanton, G. Gardiner, H. Meehan, K. Collins, G. Fitzerald, P.B. Lynch, R.P. Ross // Am. Journal clinical nutrition. 2005. - 73. - P.476-483

166. Sun, W. Survival of bifidobacteria in yogurt and simulated gastric juice following immobilization in gelan-xanthan beads / W. Sun, M. Griffiths // International journal of food microbiolgy. 2000. - 61(1). - P.17-25

167. Sung, H.H. Enhancing survival of lactic acid bacteria in ice cream by natural encapsulation / H.H. Sung // Dissertation abstract international. 1997. -13(9). -P.5407

168. Taqieddin, E. Enzyme immobilization in novel alginate-chitosane core-shell microcapsules / E. Taqieddin, M. Amiji // Biomaterials. 2004. - 25 (10). -P. 1937-45

169. Tavan, E. Antimutagenic activities of various lactic acid bacteria against food mutagenic: heterocyclic amines / E. Tavan, C. Cayvela, J.M. Antoine // J. Dairy Reseach. 2002. - V.69. - P. 335-341

170. Temmerman, R. Identification of lactic acid bacteria: culture-dependent and culture-independent methods / R. Temmerman, G. Huys and J. Swings // Trends in Food Science & Technolgy. No.15.- 2004. - P 348-359

171. Thompson, J.P. Product total flora support / J.P. Thompson // Questions and answers. Iss Interchange Inc. 1997. - 200 p

172. Vinderola, C.G. Survival of brobiotic microflora in Argentinian yoghurts during refrigerated storage / C.G. Vinderola, N. Bailo, J.A. Reinheimer // Food research international. 2000. - 33(2). - P.97-102

173. Wisselink, H.W. Mannitol production by lactic acid bacteria: A review / H.W. Wisselink, R.A. Weusthuis, G. Eggink, J. Hugenholtz, G.J. Grobben // International dairy journal. 2002. - 12. - P. 151 -161

174. Woo, C. Improvement of Bifidobacterium longum stability using cell-entrapment technique / C. Woo, K. Lee, T.Y. Heo // Journal of microbiolgy and biotechnolgy. 1999. - 9(2). - P.132-139

175. Wunwisa, K. The influence of coating materials on some properties of alginate beads and survivability of microencapsulated probiotic bacteria / K. Wunwisa, B. Bhandari, H. Deeth // International dairy journal. 2004. - 14. - P.737-743

176. Yu, W. Effect of skim milk alginate beads on survival rate bifidobacteria / W. Yu, T. Yim, K. Lee, T. Heo // Biotechnolgy and bioprocess engineering. 2001. -6(2). -P.133-138

177. Ziemer, C.J. An avervuew of probiotics, prebiotics and synbiotics in the functional food concept: perspectives and future strategies / C.J. Ziemer, G.R. Gibson // Intern. Dairy J. 1998. - №516. - 300 p

Похожие работы

Технология продовольственных продуктов
05.18.00