автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.15, диссертация на тему:Разработка технологии продуктов питания на базе микробной биоконверсии комплексного растительного сырья

На правах рукописи

00505Ыэ*э

НГУЕН ЧЫОНГ ЗАНГ

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПРОДУКТОВ ПИТАНИЯ НА БАЗЕ МИКРОБНОЙ БИОКОНВЕРСИИ КОМПЛЕКСНОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ

Специальность 05.18.15- Технология и товароведение пищевых продуктов и функционального и специализированного назначения и общественного питания

2 2 НОЯ 2012

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

Москва-2012

005055645

Работа выполнена на кафедре «Биотехнология» ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств»

Научный руководитель: доктор технических наук, профессор

Борисенко Евгений Георгиевич

Официальные оппоненты: Ермолаева Галина Алексеевна

доктор технических наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств», заведующая кафедрой «Процессы ферментации и промышленного биокатализа», Серба Елена Михайловна, кандидат технических наук, доцент, ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии» Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИ ПБТ РАСХН), старший научный сотрудник

Ведущая организация: ФГУ Российский государственный аграрный университет -МСХА имени К.А.Тимирязева

Зашита состоится: «¿С » декабря 2012 г. в Щ ч. в ауд. 302 на заседании Совета по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук Д 212.148.08 при ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств» по адресу: 125080, Москва, Волоколамское шоссе, д. 11.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «МГУПП».

Отзыв на автореферат в двух экземплярах, заверенный печатью учреждения, просим направлять по адресу: 125080, Москва, Волоколамское шоссе, д. 11, ФГБОУ ВПО «МГУПП».

Автореферат разослан « 0^» - і 4 - 2012 г.

Ученый секретарь Совета Д 212.148.08

к.х.н., доц. В.С. Штерман

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Около половины 7 миллиардного населения Земли испытывает недостаток в тех или иных пищевых веществах. Это в первую очередь относится к развивающимся странам, в которых люди получают в 2 раза меньше растительного белка и в 5 раз меныце белков животного происхождения, чем в высокоразвитых странах.

Нехватка в рационе питания полноценных белков, витаминов, пищевых волокон, макро- и микронутриептов, полезных микробов вызывает рост социально опасных заболеваний, в том числе желудочно-кишечных. Часто причиной этих заболеваний является нарушение микробиоценозов желудочно-кишечного тракта. Возбудителями заболеваний нередко становятся условно-патогенные бактерии, приобретающие плазмиды токсигенности, колонизационной резистентности и

антибиотикоустойчивости. Современное человечество перед этой угрозой становится все менее защищенным, о чем свидетельствуют вспышки микробных токсикоинфекций даже в относительно благополучной Европе в 2011 и 2012 году.

Вышеприведенные проблемы могут эффективно решаться путем включения в рацион питания продуктов с пробиотическими свойствами, получаемых с использованием микробной биоконверсии. При этом особенный интерес вызывает возможность использования в качестве производственных культур для биоконверсии растительного сырья микроорганизмов из натуральной микрофлоры человека.

Цель н задачи исследования: Целью настоящей работы стала разработка технологии новых продуктов, обладающих пробиотическими свойствами, путем биоконверсии растительного сырья с помощью микроорганизмов, выделенных из грудного молока и их товароведная оценка.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи:

- оценить женское грудное молоко (ЖГМ) из разных регионов планеты как возможный источник микроорганизмов-продуцентов биомассы на растительном сырье;

- определить способность к накоплению биомассы на растительном сырье дрожжевых изолятов из грудного молока представительниц разных регионов и отобрать наиболее продуктивные;

- исследовать взаимное влияние микроорганизмов в дрожже-бактериальных ассоциациях;

- подобрать сахаристые растительные субстраты разных регионов, перспективные для микробной биоконверсии с помощью отселекционированных культур;

- из сахаристых и целлюлозосодержащих субстратов сконструировать питательные среды для твердофазного культивирования микроорганизмов;

- подобрать оптимальные режимы культивирования микроорганизмов на отобранном растительном сырье;

- изучить динамику роста дрожжей и бактерий на разных комплексных растительных субстратах в ходе твердофазного и твердофазно-глубинного культивирования;

- исследовать показатели качества и биологической ценности функциональных продуктов, полученных путем дрожже-бактериальной биоконверсии растительного сырья.

Научная новизна работы:

- впервые женское грудное молоко оценено как возможный источник микроорганизмов-продуцентов биомассы на твердом растительном сырье;

- установлена способность дрожжевых изолятов из грудного молока представительниц разных регионов активно накапливать биомассу на твердом растительном сырье;

- определено, что наиболее активные продуценты биомассы из изолятов отнесены к роду ПсЫа;

- установлены благоприятные возможности симбиоза дрожжей и лактобактерий в микробных сообществах из грудного молока;

- для микробной биоконверсии с помощью отселекционированных микробных ассоциаций подобраны перспективные тропические и российские сахаристые субстраты;

- выявлен выраженный стимулирующий эффект целлюлозосодержащих компонентов сред при культивировании микробных ассоциаций на сахаристых субстратах;

- установлена равноценность хранимых высушенных и свежих комплексных субстратов по накоплению на них дрожжевой биомассы;

- выявлена динамика взаимодействия дрожжей и бактерий на различных стадиях аэробно-анаэробного культивирования отселекционированных ассоциаций на растительных субстратах - интенсивное накопление дрожжевой биомассы на аэробном этапе, разрушение дрожжей и интенсивное накопление лактобактерий на анаэробном этапе;

- показано, что на стадии анаэробной ферментации формируются специфические органолептические и функциональные свойства новых напитков, которые по своим товароведным качествам могут быть отнесены к нутрипарафармацевтикам.

Практическая значимость результатов работы: Отселекционированы высокопродуктивные и быстрорастущие на различных видах твердого растительного сырья штаммы дрожжей рода Р1сИ1а.

Созданы дрожже-бактериальные ассоциации из дрожжей рода РкЫа и лактобактерий для биоконверсии растительного сырья.

Определен ряд первичных и вторичных сахаристых субстратов, перспективных для микробной биоконверсии (сахарный тростник, свеклосахарная пульпа и жом, арбузная пульпа и выжимки, зеленая биомасса кукурузы, виноградные выжимки).

Для изготовления питательных сред, используемых в твердофазном культивировании микроорганизмов, предложен ряд перспективных целлюлозосодержащих субстратов (зерновые отруби, рисовая мучка, травяная, сенная мука) и определены их соотношения с сахаристыми материалами в средах.

Впервые для сохранения скоропортящегося сахаристого сырья для микробной биоконверсии предложено высушивать его вместе с целлюлозосодержащими добавками.

Разработаны основные параметры культивирования дрожже-бактериальных ассоциаций на твердых растительных субстратах.

Для комплексной биоконверсии сахаристого и целлюлозосодержащего сырья предложен метод аэробно-анаэробной ферментации с получением напитков для человека и кормовых добавок для животных, содержащих симбиотические ассоциации дрожжей и бактерий.

Разработаны лабораторные регламенты производства функциональных напитков из сахарного тростника с рисовой мучкой и из арбуза с пшеничными отрубями, полученных путем микробной биоконверсии. Оптовая цена таких напитков составляет около 25 руб за 1 л.

Апробация работы. Основные положения работы докладывались на российских и международных конференциях и симпозиумах: ЕигаБтВю 2пЛ

5

International Congress-Partnering & Exhibition on Biotechnology and Bioenergy (Moscow, 2010), III межведомственной научно-практической конференции с международным участием "Товароведение, экспертиза и технология продовольственных товаров", (Москва, 2010); IX Международная научной конференции "Живые системы и биологическая безопасность населения" (Москва, 2011); Международная конференция "Биология-наука XXI века" (Москва, 2012); Конференция, посвященная 125-летию с дня рождения профессора П.М. Силина "Связь времен и поколений, из прошлого в настоящее" (Москва, 2012).

Публикации. По материалам диссертационного исследования опубликовано 6 печатных работ, в том числе 3 статьи в научных журналах, рекомендованных ВАК.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, библиографического списка, включающего 240 источников (в том числе 58 на иностранных языках). Работа изложена на 181 страницах, содержит 60 рисунков, 36 таблиц и 11 приложений.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ В обзоре литературы расмотрены общие представления о роли растительной биомассы как основы пищевой цепи, животных продуктов как источника наиболее ценных компонентов пищи и микробной биомассы как принципиального обогатителя растительной пищи. Расмотрена также микрофлора молока высших животных и человека и ее роль в формировании микробиоценозов желудочно-кишечного тракта. Представлены также современные представления о продуцентах микробной биомассы и методах получения продуктов с пробиотическими свойствами, их промышленного производства на различных источниках сырья.

2. ЭСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ Исследования проводились на кафедрах "Биотехнология", "Технология сахаристых, субтропических и пищевкусовых продуктов", "Технология общественного питания" МГУПП; в лаборатории «Молекулярные основы патогенности» ФГБУ «НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздравсоцразвития России; а также в лабораториях Иститута животноводства Вьетнама, в отделе "Технология ферментации" Государственного технологического и научного института Вьетнама.

2.1 Материалы и методы исследований Объектом исследования были различные штаммы дрожжей и бактерий, выделенные из ЖГМ представительниц России и Вьетнама, микробиоценозов молочнокислых продуктов, производственных заквасок и пробиотических продуктов.

Образцы ЖГМ высевали на твердофазную питательную среду (пшеничные отруби), в которую добавляли 50 мкг/г гентамицина. После инкубации в аэробных условиях при температуре 28-32°С выделяли доминирующие культуры и оценивали их продуктивность. Критерием оценки служила концентрация дрожжевых клеток в 1г субстрата, накопленных в процессе твердофазной ферментации (ТФФ). Подсчет клеток осуществляли микроскопически в камере Горяева. Размеры клеток определяли с помощью окуляр-микрометра.

В качестве основы питательных сред использовалось первичное и вторичное сырье: сахарный тростник, отходы его переработки, сахарная свекла, свекловичный жом, кукуруза, арбуз, плодово-ягодные выжимки, сенная и травяная мука, соевый шрот, зерновые отруби, мучки.

Усредненные данные по химическому составу источников сырья, использованных в работе, представлены в табл. 1.

Таблица 1 - Химический состав сырья

№ п/п Сырье Содержание, %

Влажность Сырой протеин Жир Клетчатка Безазотистые экстрактивные вещества Зола

1 Арбуз 92,0 0,6 0,1 0,4 6,0 0,4

2 Виноградная выжимка 70,0 4,8 3,6 7,5 12,9 1,2

3 Зеленая масса кукурузы 70,0 2,6 0,6 8,1 16,4 2,3

4 Пшеничные отруби 16,3 13,4 3,3 8,6 54,2 4,2

5 Рисовая мучка 15,0 7,1 2,8 24,4 38,3 12,4

6 Сахарная свекла 83,0 1,3 0,2 4,0 10,5 1,0

7 Сахарный тростник 78,0 0,3 0,1 8,0 11,0 2,6

8 Свекловичный жом 88,8 5,8 0,3 3,3 5,7 0,7

9 Сено луговое 16,3 9,3 2,6 25,6 39,7 6,5

Для поддержания культур лактобактерий и дрожжей, их учета и определения антагонистической активности применяли питательные среды производства ФГУП ГНЦПМ, г. Оболенск.

Глубинную ферментацию (ГФ) вели в качалочных колбах на круговых лабораторных качалках при 180-220 об./мин. при температуре 30±2°С. ТФФ в лабораторных условиях проводили в чашках Петри и в качалочных колбах при высоте слоя 1-5 см и влажности субстрата 50-55%. Чашки Петри или колбы помещали в термостат на 48ч при температуре воздуха 30±2°С и влажности 90-95%.

Определение содержания молочнокислых микроорганизмов проводили в соответствии с ГОСТ 10444.11-89, дрожжей - в соответствии с ГОСТ 10444.12-88.

Титруемую кислотность определяли в соответствии с ГОСТ 3624-92, ГОСТ 27493-87, активную кислотность - потенциометрическим методом на рН-метре

HANNA pH 211. Содержание белка проводили в соответствии с ГОСТ 23327-98, ГОСТ 10846-91, «сырого протеина» - по методу Несслера.

Статистическую обработку экспериментальных данных осуществляли по программе Excel 2007 Microsoft Office, вычисляя среднее значение и стандартное отклонение для каждой величины, а также доверительный интервал при уровне значимости 95%.

Органолептические свойства напитков оценивали по результатам дегустаций с оценкой по 5-балльной шкале в соответствии с ГОСТ 6687.5-86.

2.2 Результаты исследований и их обсуждение.

2.2.1 Оценка рынка пробиотических продуктов

На современном рынке достаточно широко представлены кисломолочные пробиотические продукты (кефир, биокефир, ряженка, таны, айраны и т.п.) с содержанием полезных бактерий 107-108 КОЕ/г. Но молоко является крайне дефицитным продуктом особенно в развивающихся странах. Рынка микробных функциональных продуктов на базе растительного сырья практически не существует. Попытка заполнить именно эту нишу сделана в настоящей работе.

2.2.2 Селекция молочных дрожжей — суперпродуцентов биомассы на комплексном растительном сырье

В предшествующих исследованиях (Горин, 2011; Каночкина, 2012) было достаточно четко установлено, что российские дрожжевые изоляты из ЖГМ нередко обладают способностью интенсивно накапливать биомассу на таком твердом субстрате, как увлажненные пшеничные отруби. В рамках диссертационной работы было исследовано 60 вьетнамских образцов ЖГМ и из них выделено 46 чистых культур дрожжей, растущих при твердофазном культивировании на пшеничных отрубях. Следовательно, дрожжи-продуценты биомассы на твердых субстратах можно выделять в разных регионах планеты. 44 вьетнамских и 4 высокопродуктивных российских штамма были испытаны на способность расти на измельченном сахарном тростнике. По результатам этого эксперимента только 1 российский и 1 вьетнамский штамм обладали повышенной продуктивностью на чистом тростнике (3,0-3,5.109 кл/г).

Более детальную селекцию дрожжей-суперпродуцентов биомассы на тростнике провели, используя весь комплект дрожжей российской и вьетнамской селекции. При этом в качестве питательной среды использовали смесь измельченного тростника с сенной мукой в соотношении 3:2 (табл.2).

Таблица 2 - Продуктивность дрожжей на сахарном тростинке и сенной муке

№ Штамм дрожжей Продуктивность дрожжей, 10* кл/г № Штамм П родуктивность дрожжей, 10' кл/г

24 ч 48 ч 72 ч 24 ч 48 ч 72 ч

1 8* 3,2 4,6 4,2 33 V7a 0,6 1,2 0,8

2 P.anomala 9а* 4,6 8,0 8,0 34 V7b 5,5 6,2 6,2

3 9Ь* 4,4 5,4 5,0 35 V7c 4,6 5,1 5,5

4 И* 0,3 0,2 0,2 36 V7d 1,2 2,1 1,6

5 12* 0,3 0,8 0,7 37 V7e 1,2 1,2 1,5

6 13* 0,4 0,2 0,2 38 V8 1,6 2,5 2,5

7 14* 4,8 2,6 2,4 39 V9a 1,0 0,8 0,8

8 17* 0,2 0,9 1,0 40 V9b 4,8 7,8 8,6

9 19* 6,4 6,6 7,5 41 V9c 1,3 1,4 1,0

10 25* 0,8 1,6 1,4 42 V9d 1,7 3,8 3,5

11 P.guilliermondii Al* 3,7 3,1 3,1 43 V9e 5,0 5,4 5,4

12 А2* 0,8 0,5 0,4 44 V9f 1,0 2,1 2,0

13 P.guilliermondii 11* 4,8 6,2 5,5 45 V9g 0,7 0,6 0,6

14 Ll* 0,4 0,4 0,4 46 V9h 1,6 1,3 1,1

15 P.guilliermondii N1* 3,7 4,8 6,2 47 V9i 3,0 3,6 2,8

16 P.anomala 1*1 * 4,7 6,5 6,2 48 VlOa 1,7 1,4 1,3

17 TI* 1,6 2,4 1,8 49 VIOb 1,0 2,0 1,8

18 VI 4,0 4,4 3,8 50 VIOc 0,1 0,4 0,3

19 V2a 3,1 4,0 3,0 51 VIOd 4,8 6,6 6,2

20 V2b 0,9 0,9 0,9 52 VI la 0,7 1,3 1,0

21 V3 2,6 3,0 4,4 53 Vllb 1,0 1,5 1,1

22 V4a 2,9 3,2 4,2 54 VUc 2,9 4,8 4,6

23 V4b 0,3 0,4 0,8 55 V12a 1,1 2,3 2,1

24 P.guilliermondii V5-1 5,6 7,8 8,4 56 V12b 0,8 2,0 1,4

25 V5-2 2,5 3,4 3,2 57 V12c 0,7 1,2 1,5

26 V5-3 0,2 0,3 0,2 58 V13a 1,1 1,6 1,5

27 H26 1,2 3,0 4,1 59 V13b 1,1 1,7 1,1

28 V6a 1,1 1,2 1,0 60 V13c 1,2 1,9 1,6

29 V6b 3,9 3,6 3,5 61 V13d 2,0 1,3 1,3

30 V6c 2,4 2,7 2,5 62 R1 5,5 8,0 7,8

31 V6d 1,3 1,1 1,1 63 R2 2,5 5,0 5,0

32 V6e 1,5 2,2 1,7 64

* - дрожжи российской селекции (Горин, 2011)

В этой серии экспериментов более четко выявились возможности селекционировать продуценты как среди российских, так и вьетнамских изолятов.

Наиболее продуктивные российские и вьетнамские штаммы были сравнены и на других сырьевых композициях. Российский штамм Pichia anómala 9а показал некоторые преимущества в росте на разных субстратах. В связи с этим именно он был выбран для дальнейших работ, хотя возможность использовать вьетнамские штаммы также вполне реальна.

В молоке млекопитающих, в том числе и в ЖГМ, дрожжи присутствуют в ассоциации с молочнокислыми бактериями. На рис.1 достаточно четко видно, что далеко не каждая культура лактобактерий может успешно ассоциироваться с дрожжами. Некоторые из них могут стимулировать рост дрожжей P.anomala 9а (например штаммы В4 и В6), другие же достаточно заметно этот рост ингибируют. Хотя производственный штамм Lactobacillus acidophilus La5 таким активирующим действием не обладает, для дальнейших исследований совместного культивирования дрожжей и бактерий мы выбрали именно его, т.к. он обладает стандартными технологическими характеристиками и не требует специального изучения в ходе получения ферментированных продуктов.

ВЗ, В4, В5, ...В14

лактобактерии, выделеные из ЖГМ,

La5 - производственный штамм Lactobacillus acidophilus La5,

Н - Lactobacillus acidophilus 317/402 (Наринэ),

Б -Bifidobacterium bifidum,

9a-Pichia anomala 9a

Pichia anomala 9а на

Если оценивать эффективность биоконверсии по накоплению дрожжевых клеток на единицу массы сахаристого субстрата при глубинной и твердофазной биоконверсии, то накопление дрожжей например на комплексном субстрате арбуз-сенная мука в 4-5 раз выше, чем на жидкой среде из арбузной пульпы.

Значительное нарастание эффективности использования сахаристого субстрата микроорганизмами при твердофазном культивировании объясняется наличием экзоглюканазной и ксиланазной активностей у дрожжей Pichia anomala 9а (рис.2 и 3). Следовательно, целлюлозосодержащий компонент питательных сред является не просто пористым носителям, но сам может быть субстратом биоконверсии, и именно это делает ТФФ преимущественным способом для накопления дрожжевой биомассы в настоящей работе.

& ^ fi" У ^ f ^ ^ 4? V*" 4

с,*- Ч* Ч* ч» ч» с," -»* »•>* ор

Штамм □ 24 ч О 4S ч S 72 ч

Рисунок 1 - Влияние молочнокислых бактерии на рост дрожжей сахарном тростнике и рисовой мучке

Рисунок 2 - Экзоглюкаиазиая актив- Рисунок 3 - Ксилаиазная активность ность дрожжей Ріс її і a anómala 9а в ТФФ дрожжей Pichia anómala 9а в ТФФ на на сенной муке сенной муке

2.2.3 Конструирование питательных сред для твердофазной ферментации дрожжей на базе комплексного растительного сырья

В работе исследована возможность смешивать все использованные легкоферментируемые сахаристые субстраты со всеми трудноферментируемыми целлюлозосодержащими. Основные принципы конструирования сред приведены на примере некоторых комплексных субстратов. На рис.4 представлено влияние содержания сахарозы в отрубевой питательной среде, а на рис. 5 в среде из сенной муки на рост дрожжей Pichia anómala 9а. Из этих рисунков видно, что максимум в накоплении дрожжей наблюдается при добавлении 7% сахарозы в питательные среды на основе пшеничных отрубей и при 10% сахарозы в среды на основе сенной муки. При увеличении концентраций сахарозы в средах происходит ингибирование роста дрожжей. Такое ингибирование дрожжей и неэффективное использование сахарозы для процесса биоконверсии совершенно не приемлемо.

9 8.5

0123456789 1011121314151617181920

Сахароза, % л24ц ш4Нц

Рисунок 4 - Влияние содержания сахарозы на рост дрожжей Pichia anómala 9а на пшеничных отрубях

Рисунок 5 - Влияние содержания сахарозы на рост дрожжей Pichia anómala 9а на сенной муке

Более рациональным будет процесс биоконверсии первичного сахаристого сырья (вместе с целлюлозосодержащим компонентом), например сахарного тростника, с сенной мукой (рис.6) или с рисовой мучкой (рис.7).

О 10 20 3« 40 50 60 70 80 90 100 Сахарный тростник, %

■ 24ч 48ч и 72ч

Рисунок 6 - Продуктивность дрожжей Рисунок 7 - Продуктивность дрожжей Pichia a/iomala 9а на сахарном тростнике и Pichia anómala 9а на сахарном тростнике и сенной муке рисовой мучке

Если принять во внимание, что содержание сахарозы в сахарном тростнике колеблется на уровне 12-13%, то ее концентрация в комплексной твердофазной среде будет около 10%, т.е. соответствует оптимальному значению концентрации сахарозы в среде, что было выявлено ранее. Роль разных целлюлозосодержащих компонентов в

комплексных субстратах для стимулирования роста дрожжей неравноценна, но практически все они могут быть использованы в процессе твердофазного культивирования. Хорошим субстратом является сено, которое можно заготавливать, хранить традициоными методами и превращать в муку в процессе приготовления комплексных субстратов для микробной биоконверсии.

О 40 50 60 100 Содержание свекловичного жома, % »24 ч ш4Кч »72 ч

Рнсунок 8 - Продуктивность дрожжей Pichia anómala 9а на свекловичном жоме и сенной муке

Рисунок 9 - Продуктивность дрожжей Pichia anómala 9а па свекловичном жоме и рисовой мучке

В условиях Вьетнама с абсолютным доминированием риса в рационе населения рисовая мучка как вторичный продукт переработки риса будет самым интересным стимулятором роста дрожжей.

Если говорить о производстве сахарозы в России, то основным ее источником является сахарная свекла, а отходом является свекловичный жом.

Возможности использования жома в микробной биоконверсии представлены на рисунках 8 и 9. Данные этих рисунков свидетельствуют о рациональности комплексной переработки жома с целлюлозосодержащими компонентами, о возможности использования разных целлюлозосодержащих стимуляторов роста дрожжей и подчеркивают высокую ценность рисовой мучки в такой биоконверсии.

При конструировании комплексных твердофазных питательных сред из легко- и трудноферментируемых субстратов для производства функциональных продуктов питания могут быть использованы различные региональные сахаристые продукты. В южных областях России такими продуктами являются бахчевые (прежде всего арбузы).

Рисунок 10 - Продуктивность дрожжей Р. anómala 9а на арбузной пульпе и рисовой мучке

Рисунок 11 - Продуктивность дрожжей Pichia anómala 9а на арбузной выжимке и сенной муке

На рис. 10 представлены результаты ферментации арбузной пульпы с рисовой мучкой. Аналогичные исследования проводились и с другими целлюлозо-содержащими добавками. Все полученные данные подтверждают рациональность смешивания сахаристого субстрата с целлюлозосодержащими компонентами с целью накопления максимального количества микробной биомассы. Подобная же закономерность отмечается при биоконверсии и арбузной выжимки (рис. 11).На таком виде сырья достаточно высокая продуктивность дрожжей наблюдается при заметно более низком содержании целлюлозосодержащего компонента.

Кукуруза широко распространена по самым различным регионам планеты и является растительным сырьем, которое по содержанию сахара приближается к предлагаемым композициям (8-10%).

Поэтому зеленая масса кукурузы использовалась в качестве основы питательных сред для твердофазного культивирования дрожже-бактериальной ассоциации Р. anomala 9а и L. acidophilus La5. На рис. 12, 13 видно, что измельченная зеленая масса кукурузы является хорошим питательным субстратом для накопления дрожжевой биомассы, но особенно активно этот процесс идет при добавлении традиционных обогатителей — отрубей и рисовой мучки. В разных регионах планеты такой целлюлозосодержащий обогатитель может варьировать.

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Зеленая биомасса кукурузы, % (по массе)

Я 24 ч Я 48 ч я 72 ч

Зеленая биомасса кукурузы, % (по массе)

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

1Ы, /о (по массе; ■ 24 ч Я 48 ч Я 72 ч

Рисунок 12 - Продуктивность дрожжей Рисунок 13 - Продуктивность дрожжей Pichia anómala 9а на зеленой биомассе Pichia anómala 9а на зеленой биомассе

Многие сахаристые субстраты как вторичные, гак и первичные являются скоропортящимися продуктами, и в естественных условиях могут подвергаться интенсивному микробному обсеменению. Поэтому для комплексных сахаристо-целлюлозных субстратов было применено консервирование высушиванием. На рис. 14 и 15 представлена интенсивность роста дрожжей на высушенных при 80°С комплексах биомассы арбуза и целлюлозосодержащих субстратов (сенной муки и отрубей) до остаточной влажности 10% после 30 сут хранения этих комплексов при комнатной температуре. Результаты этих исследований свидетельствуют о реальности такого приема сохранения твердых питательных субстратов и о наиболее рациональных соотношениях исходных субстратов, используемых для изготовления таких сухих композиций. Наиболее эффективным для роста дрожжей является соотношение 7:3 при смешивании арбузной пульпы как с сенной мукой, так и пшеничными отрубями. Подобный же способ получения смешанных субстратов и их последующего высушивания можно рекомендовать для заготовки и других сахаристых продуктов как первичных, так и вторичных, например для того же свекловичного жома в период массовой переработки корнеплодов сахарной свеклы на сахарных заводах и формирования больших количеств жома.

кукурузы и пшеничных отрубях

кукурузы и рисовой мучке

Рисунок 14 - Влияние влажности комплексного субстрата (арбуз и сенная мука) до сушки на рост дрожжей Р. anómala 9а на высушенном субстрате

ч я 48 ч » и '/ ■ ЧИ ч

Рисунок 15 - Влияние влажности комплексного субстрата (арбуз и пшеничные отруби) до сушки на рост дрожжей Р. anómala 9а на высушенном субстрате

2.2.4 Определение условий культивирования Picliia anómala 9а на комплексных растительных субстратах

Продуктивность дрожжей Pichia anómala 9а в зависимости от величины посевной дозы была исследована при культивировании на измельченном сахарном тростнике с рисовой мучкой (7:3) (рис.16). Из этого рисунка видно, что наращивание посевной дозы рационально до 30х107кл/г, а дальше начинается снижение выхода дрожжей, т.е. очевидно в таком случае биосинтетический тип метаболизма начинает сменяться на биоокислительный, для которого характерно некоторое снижение максимума количества дрожжей в культурах при более быстром достижении этого максимума.

Влияние времени стерилизации в автоклаве при температуре 120°С субстрата арбузная выжимка-сенная мука (7:3) на продуктивность дрожжей Р. anómala 9а представлено на рис. 17. Из этого рисунка достаточно четко видна ингибирующая роль длительной термической обработки на рост микроорганизмов. Поэтому были исследованы и более щадящие режимы обработки. На примере высушенного субстрата арбуз-пшеничные отруби (7:3) показано, что 30 минутная термическая обработка субстрата при более низких температурах, например 80-100°С, может приводить к более интенсивному росту дрожжей, чем стерилизация в автоклаве при 120°С (рис.18).

1 10 20 ЗО 40 50 60 70 80 90 100 Посевная юі:і х 107кл/г

и24ч Р4Яч □ 72 ч

Рисунок 16 - Влияние посевной дозы на рост дрожжей Р.апота1а 9а на сахарном тростнике и рисовой мучке (7:3)

Рисунок 17 - Влияние времени стерилизации в автоклаве при 120°С на продуктивность дрожжей Р.апотаїа 9а на субстрате арбузная выжимка-сенная мука (7:3)

Рисунок 18 - Влияние температуры обработки субстрата (влажность 15%) на рост дрожжей Р.апотаїа 9а на предварительно высушенном субстрате арбуз - пшеничные отруби (7:3)

Рисунок 19 - Влияние длительности культивирования на продуктивность дрожжей Р.апота1а 9а на сахарном тростнике и сенной муке (3:2)

Любой живой организм имеет какие-то оптимальные температурные параметры для максимальной активности его ферментов и всех присущих для него обменных процессов. Исходя из источника выделения используемых в настоящей работе дрожжей - продуцентов биомассы, выделенных из ЖГМ можно было бы надеяться на их определенную термотолерантность. Однако при исследовании роста дрожжей на субстрате арбуз-сенная мука (7:3) при разных температурах таким оптимумом

17

являются 30°С, хотя температурный диапазон достаточно интенсивного роста лежит в более широких пределах (25-35°С).

Что касается продолжительности культивирования, то на различных комплексных средах кривая роста дрожжей выходит на максимум уже к 48 ч, а далее продуктивность начинает снижаться (рис.19). На некоторых более трудноферментируемых субстратах рост дрожжей продолжается и до 72 ч.

2.2.5 Динамика роста дрожжей и бактерий на комплексном растительном сырье в процессе биоконверсии

| 0 24 48

й Время ферментации, ч

■ /.«5+ Р.апота1а9а + сахарный тростник + сенная мука

■ /.«5 + Р.анота1а9а + сахарный тростник + отруби

Ш1.а5 + Р.апота1и9а + сахарный тростник* рисовая мучка

Ш Р,'ф11оЬас(епчт Ыу'и/ит + Р.апота!а9а + сахарный тростник +рисовая .мучка

■ А.ас'и1орИии\"нарши" + Р.апота!а9а + сахарный тростник +рисовая мучка

Время ферментации, ч

' 1л5 + Р.анота1а9и + сахарный тростник + сенная мука

■ 1.и5 + Р.апота1а9а + сахарный тростник + отруби

• /.1/5 + Р.апота1а9а + сахарныи тростник + рисовая мучка

)' 1ИА<1оЬас1епнт Ы/Ышп + Р.анота!а9а + сахарный тростник + рисовая мучка

I" /. асМорНПт"парит " + Р.апотн1а9а 4- сахарный тростник ■+■ рисовая мучка

Рисунок 20 - Динамика роста Р.апотаїа 9а Рисунок 21 - Динамика роста бактерий на дрожжей на тростниксодержащих тростниксодержащих субстратах в субстратах в аэробной ферментации аэробной ферментации

В процессе аэробного культивирования на увлажненных твердых растительных субстратах наблюдается рост как аэробных дрожжей рода РісИіа, так и таких факультативных анаэробов как молочнокислые бактерии. На рис.20 представлен рост дрожжей, засеянных совместно с молочнокислыми бактериями, на тростниксодержащих субстратах с разными целлюлосодержащими добавками. Из этого рисунка видно, что продуктивность дрожжей на этих комплексных субстратах несколько варьирует в зависимости от внесенной пористой добавки, но все же она

достаточно высокая, составляет от 5 до 8,0x109 кл/г. Содержание бактериальных клеток в комплексных культурах после аэробной ферментации в несколько раз меньше чем дрожжей (рис.21). Следовательно при аэробной ферментации накапливается прежде всего дрожжевая биомасса.

Перевод процесса из аэробного в анаэробное культивирование может быть осуществлен разбавлением полученной в результате первого этапа твердофазной культуры водным раствором сахарозы (7%). Микробная составляющая при этом разбавляется пропорционально количеству добавляемой жидкости, однако на новом количественном уровне динамику роста дрожжей и бактерий проследить достаточно легко.

24 48 72

Время ферментации, ч

■ La 5 + P.anomala9a + сахарный тростник + сенная мука + раствор сахара

■ I.aS + P.anomala9a + сахарный тростник+ отруби + раствор сахара

и La5 + Р.анота1а9а + сахарный тростник л- рисовая мучка -

раствор сахара я Bifidobacteríum bifidum + P.anomala9a + сахарный

тростник + рисовая мучка + раствор сахара в Lacidophilus"наринэ" + Р.апота!а9а + сахарный тростни + рисовая мучка + раствор сахара_

Время ферментации, ч

• [.а5 + Р.апота1а9а + сахарный тростник + сенная мука + раствор сахара 1 И La5 + Р.анота1а9а + сахарный тростник ■'г отруби +

раствор сахари *»4)F**»La5 + Р. anomala9a + сахарный тростник+рисовая мучка + раствор сахара

...........Bifidobacteríum bifidum + Р.апота!а9а + сахарный

тростник + рисовая мучка + раствор сахара '"Ж"" /..acidophilus"нарию" + Р.анота1а9а + сахарный тростник+рисовая мучка + раствор сахара

Рисунок 22 - Динамика роста дрожжей Р. anómala 9а на тростниковых субстратах при анаэробной ферментации

Рисунок 23 — Динамика роста бактерий на тростниковых субстратах при анаэробной ферментации

На рис.22 представлена динамика роста дрожжей на тростниковых субстратах с разными целлюлозосодержащими добавками на первом этапе аэробной ферментации и после разбавления раствором сахарозы в анаэробных условиях на втором этапе. Обычно на втором этапе количество дрожжей резко падает. Что же касается

молочнокислых бактерий, то их содержание в жидких комплексных культурах напротив резко возрастает (рис.23), достигая концентраций, обычно не наблюдаемых в молочнокислых продуктах.

На основании всех проведенных исследований было предположено, что накапливающаяся на первом этапе дрожжевая биомасса является специфическим стимулирующим нутриентом для бактерий.

» /,ц5 + Р. аиота1а9а + сахарный тростник + сенная мука + раствор сахара

* 1.а5+ Р.анота1а9а + сахарный тростник + отруби + раствор сахара

* /.я5 + Р.апота1а9а + сахарный тростник + рисован мучка + раствор сахара

О 24 48 72

Время глубинного культивирования, ч.

—Ля5 + Р.апота1а9а + сахарный тростник-^ сенная мука +раствор сахара

™Га5 + Р.апота1а9а + сахарный тростник + отруби + раствор сахара

— 1.а5 + Р.апота!а9а + сахарный тростник + рисован мучка + раствор сахара

~В'фс1оЬнс1епит 1>[/и1нт + Р.апота!а9а + сахарный тростник + рисован мучка + раствор сахара

— 1..ис'н1ор1п1ив"нарит" + Р.апота!а9а + сахарный тростник + рисовая мучка + раствор сахара

Рисунок 24 — Динамика активной кислотности в процессе анаэробной глубинной ферментации дрожже-бактериальных культур на тростниковых субстратах

Рисунок 25 - Динамика титруемой кислотности в процессе анаэробной глубинной ферментации дрожже-бактериальных культур на тростниковых субстратах

В дрожже-бактериальных культурах на разных комплексных субстратах изучалась динамика активной кислотности (рис.24) и показано, что рН жидких культур в процессе анаэробной ферментации падает до 3,5-3,8. Титруемая же кислотность на сахаристых субстратах нарастает более или менее интенсивно в зависимости от характера сахаристого субстрата (рис.25).

2.2.6 Товароведная оценка разработанной категории продуктов

Принципиальная схема производства продуктов питания (напитков), путем биоконверсии комплексного растительного сырья представлена на рис.26.

Рисунок 26 - Принципиальная схсма получения продуктов питания из растительного сырья путем микробной биоконверсии

В результате реализации технологической схемы могут быть получены пищевые продукты, например напиток «Биоквас», представляющий собой мутную дрожже-бактериальную суспензию с хорошими органолептическими свойствами (табл.3 и рис.27).

Таблица 3 - Характеристика напитков «Биоквас», полученных путем микробной

Наименование показателя Напиток из тростника Напиток из арбуза

Органолеитнческне свойства Мутная жидкость от светло-коричневого до коричневого цвета, запах свойственный тростнику, кисло-сладкий вкус Мутная жидкость от светло-красного до красного цвета, запах свойственный арбузному, кисло-сладкий вкус

Массовая доля СВ, % не менее 10,0 10,0

Содержание сахара, г в ЮОсм^ 4,5 3,5

Содержание белка,% на СВ не менее 5,0 5,0

Активная кислотность, рН не менее 3,5 3,8

Титруемая кислотность, "Т не более 115 115

Микроорганизм, КОЕ не менее Лактобактерии 10<J, дрожжи 10' Лактобактерии 10У, дрожжи 10'

Внешний вид

4,5

4 3,63

3,5^

^^Г 2,5

^^ 2

Консистенция S 1,5 Вкус

1

\\

\\

ЗД / /

Á5

Цветность Запах/аромат

^^^Сахарный тростник + рисовая мучка + тростниковый сок * La 5 + P.anomala 9а

Арбузная выжимка + пшеничные отруби + арбузной сок + La 5 + P.anomala 9а

Рисунок 27 - Органолептическая оценка напитков «Биоквас», полученных путем биоконверсии различного растительного сырья

В то же время у таких продуктов довольно интенсивно выражена антитоксическая активность (табл.4), что позволяет отнести их к разряду уже известных парафармацевтиков. Кроме того разработанные продукты биоконверсии имеют повышенную по сравнению с исходным сырьем нутрициологическую ценность, например по содержанию аминокислот, в том числе незаменимых (табл.5 и 6), что позволяет причислить их к перспективным нутрицевтикам. Объединение двух этих свойств в одной категории продуктов позволяет отнести их в разряд нутрипарафармацевтиков.

Таблица 4 - Показатели роста и функциональных свойств токсино-образующих S. aureus FR1 722 при совместном выращивании с полученными комплексными

№ Штамм lg КОЕ/ см3(г) Концентрация токсина

б/р 1:10 1:50 1:100 1:200

1 Контроль S. aureus FR1 722 10,8 + + + - -

2 Контроль S. boulardii живые 9,5 + + + + -

3 Контроль S. boulardii инакт*. 10,0 + + + + +

4 Р. anómala 9а + La 5 живые 10,0 - - - - -

5 Р. anómala 9а + La5 инакт*. 12,3 + + + + -

инакт* - инактивированный (прогретый при 100°С 15минут)

Таблица 5 - Содержание аминокислот в арбузном соке и в проферментмрованном напитке (% от СВ)

Л* Показатели Арбузный сок Биоквас** Относительное изменение,*/»

1 Сухие вещества,% 6,91 10,25 +48,30

2 Аспарагиновая к-та 0,40 0,47 +17,50

3 Глутаминовая к-та 0,62 0,78 +25,80

4 Серин 0,15 0,22 +46,67

5 Гистидин* 0,07 0,13 +85,71

6 Глицин 0,12 0,19 +58,30

7 Треонин * - - -

8 Алании 0,18 0,23 +27,78

9 Аргинин* 0,61 0,69 +13,11

10 Тирозин 0,13 0,20 +53,85

И Цистеин - - -

12 Валин * 0,18 0,72 +300

13 Метиошш * 0,06 0,15 +150

14 Фенил ал анин* 0,04 0,09 +125

15 Изолейцин * 0,20 0,28 +40

16 Лейцин * 0,18 0,23 +27,78

17 Лизин * 0,63 0,69 +9,52

18 Пролин 0,27 0,34 +25,93

19 Общее количество аминокислот 3,84 5,41 +40,89

* - незаменимые аминокислоты

** - приготовление на основе арбузной выжимки, отрубей, арбузного сока с использованием P. anomala 9а и L. acidophilus La5.

Таблица 6 - Динамика нарастания количества аминокислот в процессе ферментации зеленой массы кукурузы

№ Название аминокислот Содержанке аминокислот, % Относительное изменение,% (КЗ/К1)

К1 К2 КЗ

1 Аспарагиновая к-та 0,758 0,834 0,872 +15,04

2 Глутаминовая к-та 0,760 0,976 0,993 +30,66

3 Серин 0,375 0,402 0,473 +26,13

4 Гистидин* 0,047 0,195 0,101 +114,90

5 Глицин 0,207 0,332 0,233 + 12,56

6 Треонин* 0,348 0,399 0,451 +29,60

7 Алании 0,463 0,531 0,560 +20,95

8 Аргинин* 0,317 0,433 0,395 +24,61

9 Тирозин 0,358 0,340 0,434 +21,23

10 Валин * 0,342 0,376 0,433 +26,61

11 Метионин * 0,109 0,111 0,137 +25,69

12 Фенил аланин* 0,313 0,384 0,472 +50,80

13 Изолейцин* 0,377 0,330 0,405 +7,43

14 Лейцин * 0,660 0,660 0,839 +27,12

15 Лизин * 0,279 0,325 0,286 +2,51

16 Пролин 1,391 1,455 1,829 +31,49

17 Общее количество аминокислот 7,104 8,083 8,913 +25,46

К1: Измельченная высушенная зеленая масса кукурузы.

К2: Проферментированная измельченная высушенная зеленая масса кукурузы с помощью дрожже-бактериальных ассоциаций Pichia anomala 9а и Lactobacillus acidophilus La5 после аэробной ферментации (первая фаза ферментации).

КЗ: Проферментированная измельченная высушенная зеленая масса кукурузы после аэробной и анаэробной ферментации с помощью дрожже-бактериальных ассоциаций Pichia anomala 9а и Lactobacillus acidophilus La5 (вторая фаза ферментации).

выводы

1. Установлена возможность производства продуктов питания путем дрожже-бактериальной биоконверсии различных видов растительного сырья.

2. Дрожжи рода РкЫа - продуценты микробной биомассы, хорошо ассоциирующиеся с лактобактериями, выделены из женского грудного молока представительниц России и Вьетнама.

3. Выбраны оптимальные для биоконверсии сахаристые растительные субстраты РФ и Вьетнама как первичные, так и вторичные.

4. Установлена большая перспективность для накопления дрожжей твердофазного культивирования на растительных субстратах.

5. Отмечено, что оптимальными для накопления микробной биомассы являются комплексные питательные среды из сахаристых и целлюлозосодержащих субстратов.

6. Показана возможность сохранения скоропортящегося сахаристого сырья для биоконверсии путем высушивания в комплексе с измельченными целлюлозосодержащими субстратами.

7. Подобраны рациональные условия культивирования дрожже-бактериальных ассоциаций на твердофазных комплексных растительных субстратах: температура 2832°С, влажность 40-60% (в зависимости от сырья), посевная доза дрожжей 20-40x10 кл/г, продолжительность культивирования 42-48 ч, содержание сахарозы в субстрате не более 10%.

8. Предложена технология твердофазно-глубинной микробной ферментации комплексных растительных субстратов, исследована динамика роста дрожжей и бактерий в ходе этого процесса.

9. Получены функциональные напитки на основе ассоциации дрожжей и лактобактерий, определен их химический состав, органолептические свойства и биологическая ценность.

ОПУБЛИКОВАННЫЕ РАБОТЫ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Публикации в изданиях, рекомендованных ВАК

1. Нгуен Чыонг Занг. Функциональные свойства дрожжей и бактерий, входящих в состав микробных корректоров пищевого и кормового назначения./ Е.Г. Борисенко, К.В. Горин, М.С. Каночкина, Чан Ван Ти, Е.А Борисенко, Ф.С. Флуер, А.Ю. Максимушкин. // Хранение и переработка сельхозсырья. - 2012. - №3. - С. 4649.

2. Нгуен Чыонг Занг. Исследование оптимальных условий культивирования перспективных штаммов дрожжей - источников биологически активных веществ на основе растительного сырья и отходов его переработки. / Е.Г. Борисенко, К.В. Горин, М.С. Каночкина, Чан Ван Ти, Е.А Борисенко, Л.А. Гулимова. // Производство спирта и ликероводочных изделий. - 2012. - №1. - С. 18-20.

3. Нгуен Чыонг Занг. Функциональные нутриенты на базе продуктов свеклосахарного и тростникового производств. / Е.Г. Борисенко, В.И. Тужилкин. // Сахар. - 2012. - №9. - С. 34-36.

Статьи н материалы конференции

4. Nguyen Truong Giang. The yeast-bacterial edible products based on the primary and secondary agroindustrial raw materials. / Borisenko E.G., Gorin K.V., Kanochkina M.S. // EurasiaBio 2nd International Congress-Partnering & Exhibition on Biotechnology and Bioenergy, Moscow, 2010. - P. 236-237.

5. Нгуен 4.3. Нутриенты - биокорректоры на базе нетрадиционного сырья. / Горин К.В., Каночкина М.С., Борисенко Е.Г. // Сборник докладов III межведомственной научно-практической конференции "Товароведение, экспертиза и технология продовольственных товаров"/ Отв. ред. Ю.И. Сидоренко. - М.: Издательский комплекс МГУПП, 2010. - С. 81-85.

6. Нгуен Чыонг Занг. Повышение питательной и биологической ценности растительных нутриентов с помощью микроорганизмов. / К. В. Горин, М.С. Каночкина, Л.А. Гулимова, Чан Ван Ти, Е.Г. Борисенко. // Живые системы и биологичесая безопасность населения: материалы IX международной конференции студентов и молодых ученых - М. : МГУПП, 2011- С. 380-382.

Summary

The problem of protein deficiency could be resolved by producing microbial nutrients. The yeast-bacterial associations which were isolated from human breast milk could be used to create varieties in nutrient production. The accumulation of yeast biomass that concludes complex of sugar and cellulose grew in a culture medium during solid aerobic fermentation. The process of bacteria biomass accumulating, their substances of metabolites and the taking shape of functional foods occurred in anaerobic submerged fermentation.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗОВАННЫХ В АВТОРЕФЕРАТЕ

ЖГМ - женское грудное молоко; БАД - биологически активная добавка; ГФ -глубинная ферментация; ТФФ - твердофазная ферментация; СВ - сухие вещества; КОЕ - колонии образующих единиц.

Автор выражает искреннюю благодарность и признательность своему научному руководителю д.т.н., профессору Борисенко Е.Г., заведующей кафедрой "Биотехнология" МГУПП д.т.н., профессору Ивановой Л.А., к.т.н., профессору Войно Л.И., заведующему кафедрой "Технология общественного питания" МГУПП д.т.н., профессору Дубцову Г.Г., заведующему кафедрой "Технология сахаристых, субтропических и пищевкусовых продуктов" МГУПП д.т.н., профессору Тужилкину В.И., д.т.н. профессору Сапронову А.Р., ' к.т.н. Клемешову Д.А., а также всем сотрудникам кафедры «Биотехнология» МГУПП.

Подписано в печать 01.11.12. Формат 60x90 Vi6 Печ. л.1,2. Тираж 190 экз. Изд. № 81. Заказ 150. Издательский комплекс МГУПП 125080, Москва, Волоколамское ш., 11

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Растительная биомасса как источник продуктов питания для всего живого.

1.1.1 Пищевая цепь высших животных и человека.

1.1.2 Углеводы растительной биомассы.

1.1.2.1 Углеводы растительной биомассы трудноферментируемы.

1.1.2.2 Углеводы растительной биомассы легкоферментируемые.

1.1.3 Белки.

1.1.4 Липиды.

1.1.5 Нуклеиновые кислоты.

1.1.6 Олигоэлементы растительной биомассы.

1.2 Животная биомасса как источник наиболее ценных продуктов питания.

1.3 Микробная биомасса и ее метаболиты как компонент рационов человека и животных.

1.3.1 Продуценты микробной биомассы.

1.3.2 Химический состав микробной биомассы.

1.3.3 Микрофлора молока высших животных и ее роль в гомеостазе

1.3.4 Традиционные национальные продукты микробной ферментации в России и за рубежом.

1.3.5 Микробно-растительные нутриенты как регуляторы микробиоценозов желудочно-кишечного тракта.

1.4 Промышленное производство микробных продуктов на растительном сырье.

1.4.1 Сахаристые субстраты как сырье для производства микробных нутриентов.

1.4.1.1 Производство микробной биомассы.

1.4.1.2 Производство микробных метаболитов.

1.4.2 Производство микробной биомассы на целлюлозо-содержащих субстратах.

2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

2.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1.1 Материалы исследований.

2.1.1.1 Штаммы микроорганизмов, применявшиеся в работе.

2.1.1.2 Сырье, применявшееся в работе.

2.1.1.3 Реактивы, использованные в работе.

2.1.2 Методы исследования.

2.1.2.1 Метод приготовление питательных сред.

2.1.2.2 Методы обработки питательных сред перед засевом.

2.1.2.3 Методы засева микроорганизмов.

2.1.2.4 Методы культивирования микроорганизмов.

2.1.2.5 Поддержание чистых культур дрожжей и приготовление посевного материала.

2.1.2.6 Поддержание чистых культур молочнокислых бактерий и приготовление посевного материала.

2.1.2.7 Метод выращивания дрожжей на накопительных питательных средах.

2.1.2.8 Метод выращивания молочнокислых бактерий на накопительных средах.

2.1.2.9 Метод получения чистых культур молочных дрожжей.

2.1.2.10 Метод получения чистых культур молочнокислых бактерий

2.1.2.11 Определение физиологических признаков штаммов и идентификации дрожжей.

2.1.2.12 Метод определения антибактериальной активности выделенных молочнокислых бактерий.

2.1.2.13 Метод глубинного культивирования дрожжей на углеводсодержащих растительных средах.

2.1.2.14 Метод отбора дрожжей-суперпродуцентов биомассы на твердофазных субстратах.

2.1.2.15 Метод создания микробных консорциумов на основе дрожжей и лактобактерий для биоконверсии углеводосодержащих субстратов.

2.1.2.16 Метод ферментации первичных углеводсодержащих растительных субстратов с помощью отселекцио-нированных микробных ассоциаций.

2.1.2.17 Метод ферментации вторичного сырья пищевых предприятий с помощью отселекционированных ассоциаций.

2.1.2.18 Метод приготовление твердых полуфабрикатов функциональных пищевых продуктов и кормов с помощью отселекционированных микробных ассоциаций.

2.1.2.19 Метод приготовление твердых и жидких функциональных продуктов.

2.1.2.20 Метод фракционирования ферментированных жидких продуктов.

2.1.2.21 Определение количества дрожжей и плесневых грибов.

2.1.2.22 Прямой количественный учет дрожжевых клеток.

2.1.2.23 Определение содержания молочнокислых микро-организмов, в том числе лактобактерий.

2.1.2.24 Определение активной кислотности.

2.1.2.25 Определение титруемой кислотности.

2.1.2.26 Определение массовой доли сухих веществ.

2.1.2.27 Метод определения содержания редуцирующих веществ в питательных средах и продуктах.

2.1.2.28 Определение массовой доли белка.

2.1.2.29 Метод определения аминокислотного состава белков.

2.1.2.30 Определение содержания азота по методу Несслера.

2.1.2.31 Метод определения ксиланазной активности дрожжей.

2.1.2.32 Метод определения экзоглюканазной активности.

2.1.2.33 Метод определения пищевых волокон.

2.1.2.34 Органолептическая оценка образцов.

2.1.2.35 Проведение микробиологического контроля.

2.1.2.36 Повторность измерений и математическая обработка результатов.

2.2 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.2.1 Селекция молочных дрожжей - суперпродуцентов биомассы на растительном сырье.

2.2.1.1 Оценка рынка пробиотических продуктов.

2.2.1.2 Выделяемость дрожжей и лактобактерий из вьетнамских источников.

2.2.1.3 Продуктивность молочных дрожжей на сахаросодержащих субстратах.

2.2.1.4 Взаимодействие дрожжей и бактерий, выделенных из молока, при росте на сахаросодержащих субстратах.

2.2.1.5 Выбор способа культивирования для отселекционированых микроорганизмов.

2.2.2 Конструирование питательных сред для твердофазной ферментации на базе сахаросодержащего растительного сырья

2.2.2.1 Определение оптимальной концентрации сахара в твердофазной средах.

2.2.2.2 Использование первичного и вторичного растительного сырья как основы питательных сред.

2.2.2.3 Зеленая масса кукурузы как сырье для микробной биоконверсии.

2.2.2.4 Растительные азотсодержащие добавки как стимуляторы роста микроорганизмов.

2.2.2.5 Заготовка сахаристых субстратов для микробной биоконверсии.

2.2.3 Определение условий культивирования микроорганизмов на растительных субстратах.

2.2.3.1 Подбор посевных доз дрожжей.

2.2.3.2 Подбор оптимальных режимов стерилизации питательных субстратов.

2.2.3.3 Температурные режимы твердофазного культивирования микроорганизмов на растительных субстратах.

2.2.3.4 Продолжительность культивирования микроорганизмов.

2.2.4 Динамика роста дрожжей и бактерий на растительном сырье в процессе производства микробных продуктов.

2.2.4.1 Динамика дрожжей и бактерий на растительном сырье на этапе аэробного культивирования.

2.2.4.2 Динамика дрожжей и бактерий на растительном сырье на этапе анаэробного культивирования.

2.2.4.3 Динамика химических и органолептических показателей получаемых продуктов.

2.2.5 Товароведная оценка разработанной категории продуктов.

3. ВЫВОДЫ.

4. ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ.

Актуальность темы. Около половины 7 миллиардного населения Земли испытывает недостаток в тех или иных пищевых веществах. Это в первую очередь относится к развивающимся странам, в которых люди получают в 2 раза меньше растительного белка и в 5 раз меньше белков животного происхождения, чем в высокоразвитых странах.

Нехватка в рационе питания полноценных белков, витаминов, пищевых волокон, макро- и микронутриентов, полезных микробов вызывает рост социально опасных заболеваний, в том числе желудочно-кишечных. Часто причиной этих заболеваний является нарушение микробиоценозов желудочно-кишечного тракта. Возбудителями заболеваний нередко становятся условно-патогенные бактерии, приобретающие плазмиды токсигенности, колонизационной резистентности и антибиотико-устойчивости. Современное человечество перед этой угрозой становится все менее защищенным, о чем свидетельствуют вспышки микробных токсикоинфекций даже в относительно благополучной Европе в 2011 и 2012 году [179,180].

Вышеприведенные проблемы могут эффективно решаться путем включения в рацион питания продуктов с пробиотическими свойствами, получаемых с использованием микробной биоконверсии. При этом особенный интерес вызывает возможность использования в качестве производственных культур для биоконверсии растительного сырья микроорганизмов из натуральной микрофлоры человека.

Цель и задачи исследования: Целью настоящей работы стала разработка технологии новых продуктов, обладающих пробиотическими свойствами, путем биоконверсии растительного сырья с помощью микроорганизмов, выделенных из грудного молока и их товароведная оценка.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи:

- оценить женское грудное молоко (ЖГМ) из разных регионов планеты как возможный источник микроорганизмов-продуцентов биомассы на растительном сырье;

- определить способность к накоплению биомассы на растительном сырье дрожжевых изолятов из грудного молока из разных регионов и отобрать наиболее продуктивные;

- исследовать взаимное влияние микроорганизмов в дрожже-бактериальных ассоциациях;

- подобрать сахаристые растительные субстраты разных регионов, перспективные для микробной биоконверсии, с помощью отселекционированных культур;

- из сахаристых и целлюлозосодержащих субстратов сконструировать питательные среды для твердофазного культивирования микроорганизмов;

- подобрать оптимальные режимы культивирования микроорганизмов на отобранном растительном сырье;

- изучить динамику роста дрожжей и бактерий на разных комплексных растительных субстратах в ходе твердофазного и твердофазно-глубинного культивирования;

- исследовать показатели качества и биологической ценности функциональных продуктов, полученных путем дрожже-бактериальной биоконверсии растительного сырья.

Научная новизна работы;

- впервые женское грудное молоко представительниц РФ и Вьетнама оценено как возможный источник микроорганизмов-продуцентов биомассы на твердом растительном сырье;

- установлена способность дрожжевых изолятов из грудного молока представительниц разных регионов активно накапливать биомассу на твердом растительном сырье;

- определено, что наиболее активные продуценты биомассы из изолятов отнесены к роду Р\сЫа\

- установлены благоприятные возможности симбиоза дрожжей и лактобактерий в микробных сообществах из грудного молока;

- для микробной биоконверсии с помощью отселекционированных микробных ассоциаций подобраны перспективные тропические и российские сахаристые субстраты;

- выявлен выраженный стимулирующий эффект целлюлозосодержащих компонентов сред при культивировании микробных ассоциаций на сахаристых субстратах;

- установлена равноценность хранимых высушенных и свежих комплексных субстратов по накоплению на них дрожжевой биомассы;

- выявлена динамика взаимодействия дрожжей и бактерий на различных стадиях аэробно-анаэробного культивирования отселекционированных ассоциаций на растительных субстратах - интенсивное накопление дрожжевой биомассы на аэробном этапе, разрушение дрожжей и интенсивное накопление лактобактерий на анаэробном этапе;

- показано, что на стадии анаэробной ферментации формируются специфические органолептические и функциональные свойства новых напитков, которые по своим товароведным качествам могут быть отнесены к нутрипарафармацевтикам.

Практическая значимость результатов работы:

Отселекционированы высокопродуктивные и быстрорастущие на различных видах твердого растительного сырья штаммы дрожжей рода РшЫа.

Созданы дрожже-бактериальные ассоциации из дрожжей рода Р1сЫа и лактобактерий для биоконверсии растительного сырья.

Определен ряд первичных и вторичных сахаристых субстратов перспективных для микробной биоконверсии (сахарный тростник, свеклосахарная пульпа и жом, арбузная пульпа и выжимки, зеленая биомасса кукурузы, виноградные выжимки).

Для изготовления питательных сред, используемых в твердофазном культивировании микроорганизмов, предложен ряд перспективных целлюлозосодержащих субстратов (зерновые отруби, рисовая мучка, травяная, сенная мука) и определены их соотношения с сахаристыми материалами в средах.

Впервые для сохранения скоропортящегося сахаристого сырья для микробной биоконверсии предложено высушивать его вместе с целлюлозосодержащими добавками.

Разработаны основные параметры культивирования дрожже-бактериальных ассоциаций на твердых растительных субстратах.

Для комплексной биоконверсии сахаристого и целлюлозосодержащего сырья предложен метод аэробно-анаэробной ферментации с получением напитков для человека и кормовых добавок для животных, содержащих симбиотические ассоциации дрожжей и бактерий.

Разработаны лабораторные регламенты производства функциональных напитков из сахарного тростника с рисовой мучкой и из арбуза с пшеничными отрубями, полученных путем микробной биоконверсии. Оптовая цена таких напитков составляет около 25 руб за 1 л.

Апробация работы. Основные положения работы докладывались на российских и международных конференциях и симпозиумах: EurasiaBio 2nd International Congress-Partnering & Exhibition on Biotechnology and Bioenergy (Moscow, 2010), III межведомственной научно-практической конференции с международным участием "Товароведение, экспертиза и технология продовольственных товаров", (Москва, 2010); IX Международная научной конференции "Живые системы и биологическая безопасность населения" (Москва, 2011); Международная конференция "Биология-наука XXI века" (Москва, 2012); Конференция, посвященная 125-летию с дня рождения профессора П.М. Силина "Связь времен и поколений, из прошлого в настоящее" (Москва, 2012).

Публикации. По материалам диссертационного исследования опубликовано 6 печатных работ, в том числе 3 статьи в научных журналах, рекомендованных ВАК.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение

Потребность человечества в необходимом дополнительным высокоценном белке богатом незаменимыми аминокислотами для людей и животных на Земле на начало 21 века прогнозировалась на уровне 65 млн. тонн еще в 70-х годах прошлого века [184]. Дефицит пищевого белка в наши дни составляет не менее 20 млн в тонн [52].

Вопрос, как прокормить быстрорастущее человечество (около 2 млрд в 1900 году и 7 млрд сегодня) и прежде всего обеспечить его белком; становится все более актуальным, особенно в целом ряде развивающихся стран. К тому же по данным ООН к 2050 г. численность населения достигнет 11 млрд. человек, а значит мировая потребность в пище и белке еще возрастёт [109]. Недавно созданый международный проект Билла и Мелинды Гейтс «Суперъеда» предполагает эффективно решать проблему голода с помощью генномодифицированных сортов маниока, сорго, кукурузы [207]. Однако новые продукты не являются высокобелковыми, да и белки их по содержанию незаменимых аминокислот все-таки весьма далеки от эталона (животного белка). К тому же эти культуры районированы для тропических регионов, а их модифицированный геном вызывает определенные опасения у значительной части человечества. Нужны более эффективные натуральные обогатители пищи и кормов нерастительного происхождения, например микробные. Именно такую задачу мы попытались решить в настоящей работе. Причем разрабатываемые новые продукты должны быть не только нутрицевтиками, т.е. решать проблему дефицита ценных питательных веществ, но и парафармацевтиками, т.е. активно влиять на микробиоценозы желудочно-кишечного тракта человека и животных.

2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Исследования проводились на кафедрах "Биотехнология", "Технология сахаристых, субтропических и пищевкусовых продуктов", "Технология общественного питания" МГУПП; в лаборатории «Молекулярные основы патогенности» ФГБУ «НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздравсоцразвития России; а также в лабораториях Иститута животноводства Вьетнама, в отделе "Технология ферментации" Государственного технологического и научного института Вьетнама.

2.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1.1 Материалы исследований

2.1.1.1 Штаммы микроорганизмов, применявшиеся в работе

Объектом исследования были различные штаммы дрожжей и бактерий, выделенные нами из натурального молока млекопитающих (животных и человека), микробиоценозов молочнокислых продуктов, производственных заквасок и пробиотических продуктов.

В работе использован штамм дрожжеподобных грибов Candida famata Т8 из коллекции кафедры «Биотехнология» МГУПП. Данный штамм выделен из первичного виноматериала в Таджикистане и идентифицирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ФГУП ГосНИИГенетики) как Candida famata (Harrison) Meyer et Yarrow.

Этот штамм является анаморфой (несовершенной стадией) широко распространенных в природе дрожжей Debaryomyces hansenii и обладает следующими морфологическими и биохимическими признаками: форма клеток полиморфна, чаще встречаются овальные клетки или удлиненные, иногда яйцевидные, треугольные или серповидные. Размеры клеток 1,5-4,0x3,0-5,0 цм. Трехсуточная культура на полной дрожжевой среде при 28°С образует круглые, гладкие, блестящие, слегка выпуклые колонии белого цвета, па кукурузном агаре под покровным стеклом образует псевдомицелий. Дрожжи сбраживают глюкозу и сахарозу, не ассимилируют крахмал, нитраты и нитриты, растут на среде без витаминов, выдерживают температуру до 37°С, не образуют спор [137].

Данный штамм ранее был исследован на безопасность и в настоящее время используется в производстве БАД «Фервитал» и «Фервистим». Кроме того, на кафедре «Биотехнология» МГУПГТ под руководством профессора Борисенко Е.Г. была проведены многочисленные исследования, посвященные использованию этого штамма дрожжей в производстве обогатителей пищи и кормов [69,101,137]. Поэтому в настоящей работе данный штамм дрожжей был взят в качестве эталона.

В работе также использовали бактериальные закваски прямого внесения промышленного изготовления в лиофильно-высушенной форме: термофильную моноштаммовую Lactobacillus acidophilus (Chr. Hansen, Дания), многоштаммовую: Lactobacillus lactis subsp. lactis, L. lactis subsp. cremoris; Lactobacillus acidophilus 317/402 (Нарииэ); Bifidobacterium bifidum (Bifidumbacterin forte) [55,80].

Некоторые физиологические свойства бактериальных заквасок и их микробиологическая спецификация приведены в таблице 14.

1. Аверьянова Е.В., Митрофанов Р.Ю. Пектин. Получение и свойства -Бийск: Изд-во Алт. гос. тех. ун-та, 2006. 44 с.

2. Алешина Е.А., Беленчук В.И., Крылова Н.П. и др. Кормовые ресурсы и их использование за рубежом. М.: - ВАСХНИЛД990. - 58 с.

3. Альбер Сассон. Биотехнология: Свершения и надежды/ Пер. с англ., под ред. В.Г. Дебабова. М.: Мир, 1987.-411 с.

4. Андреев A.A., Брызгалов Л.И. Произовдство кормовых дрожжей.- М.: Лесная промышленность, 1986. 249 с.

5. Артамонов В.И. Биотехнология агропромышленному комплексу. - М.: Наука, 1989.- 158 с.

6. Артюхова С. И., Гаврилова Ю. А. Использование пробиотиков и пребиотиков в биотехнологии производства биопродуктов. Омск : ОмГТУ, 2010.-115 с.

7. Артюхова, С.И. Разработка биотехнологических основ производства продуктов синбиотиков // Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: Сб. мат-лов конф. Москва, 2004.-е. 168 - 169.

8. Ауэрман Т.Л., Генералова Т.Г., Суслянок Г.М. Методические указания к выполнению лабораторных работ по биохимии. М.: МГУПП, 2004. - 57 с.

9. Ашмарин И.П. Воробьев A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Мед. лит., 1962. - 115 с.

10. Бабицкая В.Г., Стахеева И.А., Плавская А.И. Мицелиальные грибы -продукты белка на целлюлозе. // Микробиология и фитопатология. 1979. -T. 13.-N.2.-C. 118- 122.

11. Бабицкая В.Г., Щерба В.В., Осадчая О.В. Деградация лигнина и природных полимеров мицелиальными грибами // Химия древесины, 1990. -№6-с. 83-89.

12. Бабьева И.П., Голубев В.И. Методы выделения и идентификации дрожжей. -М.: Пищевая промышленность, 1979. 120 с.

13. Бабьева И.П., Чернов И.Ю. Биология дрожжей. М.: Товарищество научных изданий КМК, 2004. - 221 с.

14. Бакай С.М. Биотехнология обогащения кормов мицелиальным белком. -Киев: Урожай, 1987. 168 с.

15. Балдаев Н.С. Разработка технологии переработки растительного сырья методом твердофазной ферментации. Дисс. на соиск. учен, степ. канд. техн. наук.-М., 1988.- 193 с.

16. Банникова JI.A. Микробиологические основы молочного производства. -М.: 1987.-104с.

17. Безбородов A.M. Биологические основы микробиологического синтеза. М.: Легкая и пищевая пром-ть, 1984. - 304 с.

18. Безбородов A.M. Биотехнология продуктов микробного синтеза. М.: Агропромиздат, 1991. -238 с.

19. Бекер М.Е. Биотехнология кормопроизводства и переработки отходов/ Под. ред. М.Е. Бекера Рига: Зинате, 1987. - 221 с.

20. Бекер М.Е. Введение в биотехнологию. М.: Пищевая промышленность, 1978.-231 с.

21. Бекер М.Е. и др. Трансформация продуктов фотосинтеза. Рига,: Зинатне, 1984.-252 с.

22. Бекер М.Е. Использование микробной биотехнологии в кормопроизводстве и утилизации отходов/ Биотехнология. 1985. - №6 - с. 14-24.

23. Бекер М.Е. Микробная биоковерсия растительного сырья и перспективы ее использования // Вестник АН СССР, 1983. №6 - с. 89-98.

24. Бекер М.Е., Лиепиньш Г.К., Райпулис Е.П. Биотехнология. М.: Агропромиздат, 1990. - 334 с.

25. Белова С.М. Мясо и молоко: ресурсы, потери, резервы. М.: Юнити, Авиценна, 1992. - 320 с.

26. Биоконверсия целлюлозсодержащего сырья. Тр. Коми научного центра УрО РАН. Сыктывкар, 1992. - №125.

27. Бирюков В.В. Основы промышленной биотехнологии. М.: КолосС, 2004. - 296 с.

28. Бобнева С.М. Биомасса гриба Blakeslea trispora источник каротина, белка и липидов// Использование биомассы микроорганизмов для пищевой целей. - Пущино, 1985. - с.61-72

29. Богомолов A.B. Переработка продукции растительного и животного происхождения / Под ред. A.B. Богомолова и Ф.В. Перцевого. СПб.: ГИОРД, 2001.-336 с.

30. Бондаренко В.М., Грачева Н.М. Пробиотики, пребиотики и синбиотики в терапии и профилактике кишечных дисбактериозов // Фарматека. 2003. -№7.-с. 56-63.

31. Борисенко Е.Г. Разработка комплексной технологии белковых препаратов на основе нетрадиционного сырья и дрожжей: дисс. док. тех. наук.-М., 1990.-471с.

32. Борисенко Е.Г., Горин К.В. Альтернативное производство продовольствия в условиях кризиса. // Пищевая промышленность. 2009 -№6. - с.28-29.

33. Борисова C.B., Решетник O.A., Мингалеева З.Ш. Использование дрожжей в промышленности. СПб.: Гиорд, 2008. - 216 с.

34. Бутова С.Н. Биотехнологическая деградация отходов растительного сырья. М.: Россельхозакадемия, 2004. - 320 с.

35. Быков В.А., Манаков М.Н., Панфилов В.И. и др. Производство белковых веществ. -М.: Вышая школа, 1987. 141 с.

36. Вецозова А.О., Пенцеле Г.А. и др. Биоконверсия коричневого сока растений в белковую добавку кормового назначения// Биоконверсия вторичного растительного сырья в белковые кормовые продукты: Тез. докл. респ. конф. Тбилиси, 1987. - с.25.

37. Вечер A.C., Проказов Г.Ф. Получение белков из отходов при производстве картофельного крахмала//В сб. Картофель-Минск, 1966 -68 с.

38. Виестур У.Э. и др. Система ферментации. Рига: Занатне, 1986. - 174 с.

39. Войно Л.И. Методические указания к выполнению лабораторных работ по разделу «Дрожжи» курса «Микробиология». М.: МГУПП, 1999. - 19 с.

40. Войно Л.И., Матреничева В.В. Методические указания к выполнению лабораторных работ по общей микробиологии (для студентов специальностей 070100 «Биотехнология» и 271500 «Пищевая биотехнология»), М.: МГУПП, 2005. - 46 с.

41. Волков В.А. и др. У истоков советской микробиологической промышленности. Биотехнология. 1985. - №1.

42. Волков Н.И., Несен Э.Н. Биохимические основы жизнедеятельности организма человека. М : Мир, 2000. - 503 с.

43. Воробьева Г.И., Выслоух В.А., Тихонов И.Д., Катруш Р.В. Обогащение крахмал- и целлюлозосодержащего сырья белком микроорганизмов.// Биоконверсия растительного сырья: Тез.докл. Рига: Зинатне, 1982.- с. 186.

44. Воробьева Л.И. Наиполезнейшие из анаэробов. Пропионовокислые бактерии для биотехнологии.// Химия и жизнь. 1984. - №5. - с. 19-22.

45. Воробьева Л.И. Промышленная микробиология. М.: Изд-во МГУ, 1989.-294 с.

46. Востриков С.В., Маркина Н.С., Мальцева О.Ю., Новикова И.В. Основы дегустации напитков. Воронеж, гос. тех. акад.: ВГПУ, 2008. - 251 с.

47. Гаврилова Н.Б. Биотехнология комбинированных молочных продуктов. -Омск, 2004.-223 с

48. Генетические основы классификации и идентификации дрожжей (1986-1988)//ВНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов. М., 1989.- 164 с.

49. Глушанкова Л.Н., Монахова Н.И., Семушина Т.Н., Токарев Б.И. и др. Способ получения биомассы кормовых дрожжей: A.c. 114697 СССР: М.КлЗ C12N1/16, А23К 1/12. Опубл. 23.09.84. Бюд. № 35.

50. Головлена Л.А., Грекова Г.А., Черменский Д.Н., Гаврилов A.B. Биоконверсия соломы и опилок, предобработанных различными физическими и химическими методами// Приклад, биохим. и микробиол. -1986. №5,-с. 715-720.

51. Голубев В.Н., Жиганов И.Н. Пищевая биотехнология. М.: ДеЛи принт, 2001.- 123 с.

52. Горбатова К.К. Биохимия молока и молочных продуктов. СПб.: ГИОРД, 2004. - 320 с.

53. Гореликова Г.А. Основы современной пищевой биотехнологии. -Кемерово: Кемеровский технологический институт пищевой промышленности, 2004. 106 с.

54. Горин К.В. Разработка технологии микробных нутриентов-биокорректоров на базе целлюлозосодержащего сырья: дис. кан. тех. наук. МГУПП. -М. -2011. -201с.

55. Горлов И.Ф., Доскоч Я.Е., Осадченко И.М. и др. Химико-технологические основы безотходной переработки растительного сырья / Под ред. И.Ф. Горлова. М.: Вестник РАСХН, 2004. - 136 с.

56. Грачева И.М., Гаврилова H.H., Иванова Л.А. Технология микробиологических белковых препаратов, аминокислот и жиров. М.: Пищевая промышленность, 1980. -436 с.

57. Грачева И.М., Иванова Л.А. Биотехнология биологических активных веществ. М.: Элевар, 2006. - 453 с.

58. Грачева И.М., Иванова Л.А., Кантере В.М. Технология микробных белковых препаратов, аминокислот и биоэнергия. М.: Колос, 1992 - 383 с.

59. Гребинский С.О. Биохимия растений. Изд-во Львовского университета, 1967.-263 с.

60. Давиде В.Э. Анаэробная ферментация отходов фракционирования зеленой массы растений// Современные проблемы биотехнол. микроорганизмов: Тез. докл. конф. мол. ученых. Рига, 1987. - с. 21.

61. Девис П.А., Гетефорс Л.А. Бактериальные инфекции плода и новорожденного: Пер. с англ. М.: Медицина, 1987. - 494с.

62. Домарецкий В.А. Производство концентратов экстрактов и безалкогольных напитков. Справочник. Киев: Урожай, 1990. -244 с.

63. Доронин А.Ф., Шендеров Б.А. Функциональные питания. М.: Гранть, 2002.-296 с.

64. Дроздова Т.М. Физиология питания. Новосибирск, 2007.- 352 с.

65. Евдокимова O.A. Технологические аспекты производства и применения съедобных грибов// Тр. Второго съезда Общества биотехнологов России. -М.: Дельта, 2005.

66. Егоров Н.С. Промышленная микробиология/ Под ред. Н.С. Егорова. -М.: Высш. шк, 1989. 688 с.

67. Ермакова А.И. Методы исследования растений. Л.: Колос, 1972. -с.136-141.

68. Ерофеев П.Ю. Разработка технологии дрожжевых лечебно-профилактических продуктов на базе растительного сырья: дис. канд. тех. наук. М., 1999.- 141с.

69. Жолик Г.А.,Козлов H.A. Технология переработки растительного сырья. Часть 1 Белорусская государственная сельскохозяйственная академия, 2004. - 204 с.

70. Жолик Г.А.,Козлов H.A. Технология переработки растительного сырья. Часть 2 Белорусская государственная сельскохозяйственная академия, 2004.- 140 с.

71. Закордонец Л.А., Супрун С.М., Пустовалова Л.И. Использование фузариев для обогащения кормов //Биотехнология, 1989. Т.5. - №3. - с. 39.

72. Зарочинцев Ф.Н., Хахов A.A. и др. Профилактико-лечебная эффективность дрожжевых препаратов при диарее у поросят.// Функциональная морфология болезней плодов и новорождённых животных. -М., 1993. с.78-80.

73. Зябрева Н.В. Прямая биоконверсия целлюлозосодержащих материалов термофильными анаэробами: дис. канд. техн. наук. -М, 2001. 198 с.

74. Ибрагимова С.А. и др. Морфологические и физиологические особенности гриба при культивировании с целыо получения кормового белка.// «Биотехнология на рубеже двух тысячелетий»: сб. материалов научно-техн. конф. Саранск, 2001. - 278 с.

75. Иванова JT.A., Войно Л.И.- Пищеввая биотехнология. М.: КолосС, 2008.-472 с.

76. Иванова JT.A., Войно Л.И., Строева С.С. Лабораторный практикум по общей биотехнологии. -М.: МГУПП, 2009. 148 с.

77. Калунянц К.А., Яровенко В.Л., Домарецкий В.А., Колчева P.A. Технология солода, пива и безалкогольных напитков. М.: Колос, 1992. -446 с.

78. Каночкина М.С. Разработка технологии активных полимикробных посевных материалов для производства дрожже-бактериальных функциональных продуктов: дисс.кан. тех. наук. МГУПП. -М. 2012. -174 с.

79. Квасников Е.И., Щелокова И.Ф. Дрожжи. Биология. Пути использования. Киев: Наука думка, 1991.- 328 с.

80. Кирсанов А.Ф., Хайсанов Д.П. и др. Технология производства, хранения, переработки и стандартизации продукции животноводства. М.: Колос, 2000. - 208 с.

81. Кислухина O.B. Витаминные комплексы из растительного сырья. М.: ДеЛи принт, 2004. - 308 с.

82. Кислухина О.В., Кюдулак И.И. Биотехнологические основы переработки растительного сырья. -Кунас: Технология, 1997. 183 с.

83. Клесов A.A. Целлюлазы третьего поколения// Биотехнология. 1987. -Т.З. -№2.-с.132-138.

84. Колбальская Л.П. и др. Технология пищевых производств. М.: Колос, 1999.-752 с.

85. Колосков С.П. Оборудование предприятий ферментной промышленности. М.: Пищевая промышленность, 1969. - 386 с.

86. Коновалов С.А. Биохимия дрожжей. М.: Пищ. пром-ть, 1980. - 271с.

87. Коршунов, В.М. Проблемы регуляции микрофлоры кишечника// Микробиология. 1995. - № 3. - с. 48 - 53.

88. Кретович В.Л. Биохимия растений. 2 изд., перераб. и доп. - М.: Высш. школа, 1986. - 503 с.

89. Кретович В.Л. Основы биохимии растений. М.: Вышая школа, 1971. -464 с.

90. Кэмпбелл Дж., Маршалл Р.Т. Производство молока. М.: Колос, 1980. -654 с.

91. Ле Ван Ньонг. Микробиологические и биохимические основы технологии вьетнамских традиционных ферментированных пищевых продуктов: дисс. док. тех. наук. МТИПП. -М., 1981. 366с.

92. Ле Нгок Ту, Ла Ван Тьу, Данг Тхи Тху и др. Промышленная биохимия. -Ханой: Наука и техника, 2005. 443 с.

93. Леонов П.А. Биотехнология в действии.// Достижения науки и техники АПК. 1987.-№6.-с. 31-32.

94. Леснова О.П. Эффективный способ получения высокобелкового корма.// Зоотехния. 2001. - № 10. - с. 15-16.

95. Лобанок А.Г., Бабицкая В.Г Микробиологический синтез белка на целлюлозе. М.: Наука и техника, 1976. - 232 с.

96. Лобанок А.Г., Бабицкая В.Г., Богдановская Ж.Н. Микробный синтез на основе целлюлозы. Белок и другие ценные продукты. Минск: Наука и техника, 1988.-260 с.

97. Лобанок А.Г., Залашко М.В., Аписимова Н.И. и др. Биотехнология -сельскому хозяйству. Минск: Ураджай, 1988. - 199 с.

98. Лобанок А.Г., Залашко М.В., Анисимова Н.И. и др. Переработка целлюлозосодержащих отходов в ценные продукты с помощью микроорганизмов. Минск: Ураджай, 1988. - 200 с.

99. Лыско К.А. Разработка технологии дрожжевых обогатителей пищи на базе молочной сыворотки и растительного сырья: дисс. канд. тех. наук. М., 2007.- 193с.

100. Малков A.M. Технология хлебопекарных и кормовых дрожжей. М.: Пищепромиздат, 1962. - 236 с.

101. Мамедья М.А., Ганбаров Х.Г. и др. Биоконверсия обрезков виноградной лозы с применением целлюлолитических ферментных препаратов// Биотехнология . 1988. - №3. - с.99-103.

102. Мейсель М.Н. Функциональная морфология дрожжевых микроорганизмов. -М.: Изд. АН СССР, 1950. 368 с.

103. Микулович Т.П. Растительный белок. -М.: Агропромиздат, 1991 684с.

104. Мингалеева З.Ш, Старовойтова О.В., Решетник O.A. Влияние антиоксидантов на клетки дрожжей. Казань, КГТУ, 2010. - 260 с.

105. Миронов П.В., Величко H.A., Ерменко О.Н., Громовых Т.И., Репях С.М. Технология биоконверсии растительного сырья: 4.2. Перспективные технологии микробиологической конверсии растительной биомассы. -Красноярск: СибГТУ, 2002. 150 с.

106. Морозова Г.Р., Паправко С.А., Макарова М.А. и др. Биоконверсия углеводов грибами для получения белка пищевого назначения// Использование биомассы микроорганизмов для пищевых целей. Пущино, 1985.-с. 21-39.

107. Нгуен Ким Зунг. Разработка технологии получения дрожжевых лечебно профилактических препаратов на твердых растительных субстратах: дисс. кан. тех. наук. МГАПП. -М. - 1996. - 151 с.

108. Нгуен Тхи Тхань Ха. Разработка технологии дрожжевых ферментированных продуктов на основе рисовой мучке: дисс. кан. тех. наук. МГАПП. -М. 1996. - 115 с.

109. Неверова O.A., Гореликова Г.А., Позняковский В.М. Пищевая биотехнология продуктов из сырья растительного происхождения. -Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2007. -415 с.

110. Нетрусов А.И., Бонч-Осмоловская Е.А., Горленко В.М. и др. Экология микоорганизмов. М.: Академия, 2004. - 272 с.

111. Нечаев А.П., Траубенберг С.Е., Кочеткова A.A. и др. Пищевая химия/ Под ред. А.П. Нечаева. 5-е изд., испр и доп. - СПб.: ГИОРД, 2012. - 672 с.

112. Обгольц А. А. Иммунология и микробиология грудного молока. Омск, 2000.- 108с.

113. Овчаров К.Е. Витамины растений. -М.: Колос, 1969. -238 с.

114. Овчинников Ю.А. Биоорганическиая химия. М.: Просвещение, 1987. -816 с.

115. Панфилов В.И. Биотехнологическая конверсия углеводсодержащего растительного сырья для получения продуктов пищевого и кормового назначения: дисс. док. тех. наук. -М., 2004. -371с.

116. Парфенов А.И. Профилактика и лечение запоров пробиотиками// Фарматека. 2006. - № 12. - с. 23 - 24.

117. Петровская В.Г., Марко О.П. Микрофлора человека в норме и патологии. -М., 1976 -232 с.

118. Пири Н.У. Белки из листьев зеленых растений. М.: Колос, 1980. - 192с.

119. Плешков Б.П. Биохимия сельскохозяйственных растений. М.: Колос, 1975.-496 с.

120. Полыгалина Г.В., Чередниченко B.C., Римарева JI.B. Определение активности ферментов: справочник. М. : ДеЛи принт, 2003. - 376 с.

121. Пузанков А., Мхитарян Г. Техника для повышения питательной ценности кормов // Свиноводство 2000. - №6. - с. 25-26.

122. Рахимов М.М., Марьяновская И.Г. и др. Отходы производства хлопка -перспективное сырьё для ферментативного получения глюкозы. Получение и применение продуктов гидролиза растительного сырья: обзор./ ЦБНТИМинмедбиопром. М.,1987. - Вып.З- с. 19-2 3.

123. Рогов И.А., Антипова Л.В., Дунченко Н.И. Химия пищи. М.: КолосС, 2007.- 853 с.

124. Рогов И.А., Антипова Л.В., Шуваева Г.П. Пищевая биотехнология: В 4 кн. Кн.1. Основы пищевой биотехнологии. -М.: КолосС, 2004. -440 с.

125. Роговин З.А. Химия целлюлозы. М., 1972. 519 с.

126. Рубин Б.А. Проблемы физиологии в современном растениеводстве. -М.: Колос, 1979.-302 с.

127. Рубин Б.А., Арциховская Е.В., Аксенова В.А. Биохимия и физиология иммунитета растений. М.: Высш. школа, 1975. - 320 с.

128. Саловарова В.П., Козлов Ю.П. Э ко лого-биотехнологические основы конверсии растительных субстратов. М.: Энергия, 2007 - 544 с.

129. Синицын А.П., Гусаков A.B., Черноглазов В.М. Биоконверсия лигно-целлюлозных материлов. М.: МГУ, 1995. -224 с.

130. Скрябин Г.К. Промышленная микробиология и успехи генетической инженерии. -М.: Мир, 1984. 176 с.

131. Скурихин И.М. Химический состав пищевых продуктов. Кн.2. Справочник. -М.: Агропромиздат, 1987. 360 с.

132. Скурихин И.М. Химический состав российских пищевых продуктов. Под ред. проф. И.М. Скурихина и проф. В.А. Тутельяна. М.: ДеЛи принт, 2002.-236 с.

133. Солдатова С.Ю. Разработка технологии биологически активного полуфабриката пищи и корма на основе растительного сырья и дрожжей: дис. канд. техн. наук. -М., 2004. 170 с.

134. Стахеев И.В. Культивирование дрожжей и грибов-продуцентов протеина на отходах переработки картофеля. Минск: Наука и техника, 1978.-81с.

135. Стеганцева Е.М. Морфофизиологическая характеристика и технология глубинного культивирования съедобного базидиомицета Pleurotus ostreatus. Автореф. диссер. на соиск. уч. степ. канд. техн. наук. -М., 1991.-15 с.

136. Степаненко, П.П. Микробиология молока и молочных продуктов: Учебник для ВУЗов. Сергиев Посад: ООО «Все для Вас Подмосковье», 1999.-415 с

137. Стефании Д.В., Вельтищев Ю.Е. Клиническая иммунология детского возраста. Л.: медицина, 1977. - 280 с.

138. Сушкова В.И., Воробьева Г.И. Безотходная конверсия растительного сырья в биологически активные вещества. М.: ДеЛи принт, 2008. - 216с.

139. Сытник С.И. Антибиотикочувствительность стафилококков -представителей аутофлоры кожи молочных желез здоровых женщин // Антибиотики и мед. биотехнол. 1987. - Т.32 - №6. - с. 460-463.

140. Сытник С.И. Бактериальная обсемененность кожи молочных желез беременных женщин // Акушерство и гинекол. 1987. - №8,- с.41-45.

141. Сытник С.И. Коринебактерии в кожном микробиоценозе молочных желез здоровых женщин // Детские инфекции. 1987. - №17. - с. 64-67.

142. Сытник С.И. Популяционные характеристики и биологические свойства микрококков, населяющих кожу молочных желез // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1988. - №6. - с. 16-20.

143. Тимощенко Л.В., Чубик М.В. Основы микробиологии и биотехнологии. -Томск: Томский политехнический университет, 2009. 195 с.

144. Тихомирова H.A. Технология продуктов функционального питания. -М.: ООО «Франтэра», 2002.-213 с.

145. Толстогузов В.Б. Исскуственные продукты питания. М.: Наука, 1978. -232 с.

146. Тужилкин В.И., Доронин А.Ф., Кочеткова A.A., Шендеров Б.А. и др. Функциональные пищевые продукты стратегия современного питания.//Сб. докладов Международной конференции «Технологии и продукты здорового питания».-М.,2003.-с. 3-10.

147. Тутельян В. А, Шевелева С.А, Ефимочкина Н.Р. и др. Метод определения стафилакокковых энтеротоксинов в пищевых продуктах// Методические указания МУК 4.2.2429-08. М.: Роспотребнадзор, 2009 -18 с.

148. Тырсин Ю.А., Иванова Л.А., Кривова АЛО. Методические указания к выполнению лабораторных работ по курсу «Специальная биохимия». М.: Изд. Центр МГАПП, 1993. - 66 с.

149. Уголев A.M. Естественные технологии биологических систем. Л.: Наука, 1987.-317с.

150. Ульянова О.В. Разработка технологии и оценка потребительских свойств биологически активной добавки на основе семян и выжимок арбуза: Автореферат дисс. к.т.н. Краснодар, 2006. - 24с.

151. Ушанова В.М., Лебедева О.И., Девятловекая А.Н. Основы научных исследований Ч.З: Исследование химического состава растительного сырья-Красноярск: Сиб ГТУ, 2004. 382 с.

152. Федорова Г.Г., Барахнина В.Б. Трофические цепи и сети в экосистеме. Учебное пособие по экологии. Уфа, 2008. с. 4-10.

153. Филиппович Ю.Б. Основы биохимии. -М.: Агар, 1999. -512 с.

154. Филипцова Г.Г. Смолич И.И. Основы биохимии растений: курс лекций. Минск:БГУ, 2004. - 136 с.

155. Фицев А.И. Проблемы и перспективы производства кормового белка в России//Кормопроизводство, 2003. -№10. с.25-31.

156. Холькин Ю.И. Технология гидролизных производств. М.: Лесн. пром-сть, 1989.-496 с.

157. Христич Т.Н. Микробиоценоз кишечника: механизм развития, клиника дисбиоза и возможная коррекция его нарушений // Сучасна гастроэнтерология . 2010. - № 1 (51). - с. 86-91.

158. Шамсутдинова В.Р. Глубинное культивирование дрожжей на молочной сыворотке и разработка технологий ферментированных продуктов: дис. канд. техн. наук. -М., 2008. 181 с.

159. Щербаков В.Г. Химия и биохимия переработки масличных семян. М.: Пищ. пром-ть, 1977. - 167 с.

160. Щербаков В.Г., Лобанок В.Г. Биохимия и товароведение масличного сырья. -М.: КолосС, 2003. 360 с.

161. Щербаков В.Г., Лобанок В.Г., Прудникова Т.Н., Минакова А.Д. Биохимия/ Под ред. В.Г. Щербакова. СПб.: ГИОРД, 2009. - 472 с.

162. Щербаков В.Г., Лобанок В.Г., Прудникова Т.Н., Федорова С.А. Биохимия растительного сырья/ Под ред. В.Г. Щербакова. М.: Колос, 1999. -376 с.

163. Юдина С.Б. Технология продуктов функционального питания. М.: ДеЛи принт, 2008. - 280 с.r

164. Alvaro B Serafini; Maria Claudia D.P. and etc. Microbiological quality of human milk from a Brazilian milk bank // Revista de Saude Publica, 2003. -Vol.37.-N.6.-P. 775-779.

165. Antonia Heredia, Ana Jimenez, Rafael Guillen. Composition of plant cell walls// Z. Lebensm. Unters. Forsch. 1995. - N.200. - P. 24-31.

166. Araujo Alberto, D'Souza Joe. Production of biomass from enzymatic hydrolysate of agriculture waste// J. Ferment. Technol. 1980. - Vol.58 -N4. - P. 399-401.

167. Ashima Vohra, Parvinder Kaur, T. Satyanarayana. Production, characteristics and applications of the cell-bound phytase of Pichia anomala // Antonie van Leeuwenhoek. -2011. -N.99. -P.51-55.

168. Ashima Vohra, S.K. Rastogi and T. Satyanarayana. Amelioration in growth and phosphorus assimilation of poultry birds using cell-bound phytase of Pichia anomala // World J. of Microbiology and Biotechnology. 2006. - N.22. - P. 553558.

169. AshimaVohra, T. Satyanarayana. Phytase production by the yeast, Pichia anomala // Biotechnology Letter. Netherlands, 2001. -N.23. - P.551-554.

170. Balmer S.E., Wharton D.A. Diet and faecal flora in the newborn: breast milk and infant formula//Archives of Disease in Childhood 1989. - Vol.64 - P.1672-1677.

171. Barnett J.A., Payne R.W., Yarrow D. Yeasts. Characteristics and Identification. Cambridge Univ. Press, 1990. - 1002 p.

172. Bates C.J., Prentice A. Breast milk as a source of vitamins essential minerals and trace elements//Pharmacol Ther. 1994. - Vol.62. -N.I.- P. 193-220.

173. Chi-Jung Wu, Po-Ren Hsueh,Wen-Chien Ko. A new health threat in Europe: Shiga toxin producing Escherichia coli 0104:H4 infections. // Journal of Microbiology, Immunology and Infection. -2011. - Vol.44. - P. 390-393.

174. Dale Bruce E. Lignocellulose conversion and the future of fermention biotechnology//Trends Biotechnol. 1987. - Vol.5 -N. 10. - P. 287-291.

175. Dijkstra J. Quantitative Aspects of Ruminant Digestion and Metabolism (2nd Edition). CABI Publishing. Wallingford, 2005. 736 p.

176. DoKyoung Lee, Vance N. Owens, Arvid Boe, Peter Jeranyama. Composition of Herbaceous Biomass Feedstocks. South Dakota State University, June 2007. -16 c.

177. El-Mohandes A.E., Keiser J.F., Johnson L.A. et al. Aerobes isolated in fecal microflora of infants in the intensive care nursery relationship to human milk use and systemic sepsis. Am J. Infect. Control. 1993. - Vol.21 -N.5. - P. 231-234.

178. El-Mohandes A.E., Schatz V., Keiser J.F., Jackson B.J. Bacteria contaminants of collected and frozen human milk in an intensive care nursery // Am J. Infect. Control. 1993.-Vol.21.-N. 5. - P. 226-230.

179. Energy and protein requirements// Report of joint FAO/WHO and Hoc. Expert Committee. Geneva. 1973.- Ser.2.- № 52.- P. 64-65.

180. Fredlund E., Broberg A., Boysen M.E., Kenne L., Schnurer J. Metabolite profiles of the biocontrol yeast Pichia anomala J121 grown under oxygen limitation. // Appl. Microbiol, Biotechnol. 2004. -N.64. - P. 403-409.

181. Fuller R. Probiotics in man and animals. //J. of Appl. Bacteriol. 1989-Vol.66.-P. 365-378.

182. Gallopini С., Fiorentini R. Leaves as protein sourse// Tob. protein util. perspect. Proc. Round Table Salsomaggiore Terme, Oct. 29, 1985. Roma, - 1986. -P. 3-20.

183. Giec A., Scupin J. Singel cell protein as food as feed// Nahrung. 1988. -Vol. 32.-N3.-P. 219-229.

184. Gissen A.S. Off Probiotics, Prebiotics & Synbiotics.//VRP's Inc. Vit. Res. Prod. Newsletters, Sept. 1995. P.56-66.

185. Graeme M. Walker. Pichia anomala: cell physiology and biotechnology relative to other yeasts // Antonie van Leeuwenhoek 99 2011. - P. 25-34.

186. Han Y.W. Microbial utilization of straw. Adv. App. Microbiol. 1978. -Vol.23.-P. 119-153.

187. Hanssen J.T. Nutritional experience on feeding pigs with the pecilo.// Research. Rep. Perilo: Symp. Tikkurila. 1979. - P.54-64.

188. Javier Rodriguez, Jose A. Perez, Teresa Ruiz, Luis Rodriguez. Characterization of the invertase from Pichia anómala // Biochem. J. 1995. -N.306. - P. 235-239.

189. Jean-Paul Aubert, Pierre Béguin, Jacqueline Millet. Biochemistry and genetics of cellulose degradation. London: Academic Press, 1988. - 428 p.

190. Kirsop B.H. Food wastes.//Progr. Ind. Microbiol.-1986.-Vol.23.-P. 285-306.

191. Kreger-van-Rij. The yeasts. A Taxonomic Study. Ed. N.J.W. Amsterdam: Elsevier Ski.Publ.B.V., 1984.- 1082 p.

192. Li Jing, Chi Zhenming, Wang Xiaghong, Wang Lin, Sheng Jun, Gong Fang. Occurrence and diversity of Pichia spp. in marine environments// J. Ocean Univ. Chin. August 30, 2008. - Vol.7, N.3 - P. 281-286.

193. Marín M.L., Arroyo R., Jiménez E., Gómez A., Fernández L., Rodriguez J.M. Cold storage of human milk: effect on its bacterial composition // J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2009. - Vol.49. - N.3. - P. 343-348.

194. Mayer P.S., Du-Preez J.C., Kilian S.G. Effect of temperature and pH on Candida blankii in chemostat culture // World J. Microbiol., 1992. Vol.8. - N.4. -P.434-438.

195. Nigam Roonam, Pandey Ashok, Prabhu K.A. Cellulase and ligninase production by bacidiomycete culture in solid-state fermentation // Biol.Wastes. -1987.-Vol.20.-Nl.-P. 1-9.

196. Oddy W.H. The impact of breastmilk on infant and child health // Breastfeed Rev. 2002. - Vol. 10. -№3.-P. 5-18.

197. Rachel A.B., Michael J.G. and Geoffrey B.F. Heterogeneity in the chemistry, structure and function of plant cell walls// Nature chemical biology. 2010. -Vol.6-P. 724-732.

198. Robert M. Lawrence, Camille A. Pane. Human breast milk: current concepts of immunology and infectious diseases// Curr Probl Pediatr Adolesc Health Care. -January, 2007. P.7-35.

199. Roberts A.K., Harzer G., Drazer B.S., Hill M.J. The effect of diet on the bacterial flora of the infant gut.//Microecological Therapy-1984-Vol.l4-P. 12-19.

200. Roger L.C., Costabile A., Holland D.T., Hoyles L., McCartney A.L. Examination of faecal Bifidobacterium populations in breast- and formula-fed infants during the first 18 months of life // Microbiology Sep 2010.- N.156. -Vol.11.-P.3329-3341.

201. Romond M.B., Ais A., Yazourh A., Romond C. Cell-free wheys from Bifidobacteria fermented milks exert a regulatory effect on the intestinal microflora of mice and humans.//Anaerobe. 1997. -N.3. - P. 137-143.

202. Roostita R., Fleet G.H. Growth of yeasts in milk and associated changes to milk composition. // International Journal of Food Microbiology. 1996. - N.31. -P. 205-219.

203. Sasson A. Les biotechnologies et la bioindustrie. Recherche. 1987.- Vol. 18.- № 188.- p. 726-734.

204. Sawant A.D., Abdelal A.T., Ahearn D.G. Anti-Candida albicans activity of Pichia anomala as determined by a growth rate reduction assay.// Appl Environ Microbiol. 1988.-N.54.-P. 1099-1103.

205. Shah Nadendra P. Functional foods from probiotics and prebiotics.//Food Technol. 2001. -Vol.55 -Nil.- P.46-53.

206. Silva M. Jacobus N.V. Denek C. Antimicrobial substance from a human Lactobacillus strain. Antimicrobial Agents and Chemother. 1987. - Vol. 71. -N.8.-P. 1231-1233.

207. Solis G., de los Reyes-Gavilan C.G., Fernandez N., Margolles F., Gueimonde M. Establishment and development of lactic acid bacteria and bifidobacteria microbiota in breast-milk and the infant gut.// Anaerobe.-2010.-N.16.-P. 307-310.

208. Sproule-Willoughby K.M., Stanton M.M., Rioux K.P., McKay D.M., Buret A.G., Ceri H. In vitro anaerobic biofilms of human colonic microbiota // J Microbiol Methods. 2010. - Vol.83(3) - P. 296-301.

209. Stoltz D.R. Suspected cyclopopiazonic acid of quail in Indonesia. First Asia-Pacific Congr on Animal, Plant and Microbial. Toxins 24 37 June 1987, Toxicon - 1988. - Vol. 26. - N1. - P. 39-40.

210. Tannock G.W. The normal microflora: a new concepts in health promotion.//Microbial sci. 1988. - Vol.5. - N. 1. - P.4-9.

211. Vernon R.Y., Peter L.P. Plant proteins in relation to human protein and amino acid nutrition.//Am. J. Clin. Nutr. 1994.-N.59.-P.1203-1212.

212. Volfova O., Kislinkova E. Selection of yeast strain with optimal utilization of straw hydrolyzates// Folia microbial. 1979. - Vol.24 - N.2. - P. 157-162.

213. Walker A. Breast milk as the gold standard for protective nutrients // J Pediatr. 2010. - Vol. 156. - № 2. - P.3-7.

214. Ydav J.S. Influence of nutritional supplementation of solid substrate fermentation of wheat straw with alkalifitic white rot fungus. Appl. Microbiol and Biotechnol. 1987. - Vol 26. - N.5. - P. 474-478.

215. Young F.M. Microbiology and Biochemistry of soy sauce fermentation. Adv. Appl. Microbiol. 1974. - Vol. 17. - P. 157 -194.