автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.07, диссертация на тему:Разработка технологии иодированных пробиотических препаратов

На правах рукописи

БАДЛУЕВА АЛЕКСАНДРА ВЛАДИМИРОВНА

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ИОДИРОВАННЫХ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ

Специальность 05.18.07 - Биотехнология пищевых продуктов

(перерабатывающие отрасли АПК)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

Улан-Удэ, 2003

Работа выполнена в Восточно-Сибирском государственном технологическом университете

Научный руководитель Официальные оппоненты

- доктор технических наук, проф. И.С. Хамагаева

- доктор технических наук, проф. С.И. Хорунжина

- кандидат технических наук, доц. Э.Б. Битуева

Ведущая организация - Институт общей и экспериментальной биологии СОРАН. г.Улан-Удэ.

Защита диссертации состоится « 21 » ноября 2003г в 10 часов на заседании диссертационного Совета К.212.039.01 в ВосточноСибирском государственном технологическом университете по адресу: 670013, г. Улан-Удэ, ул.Ключевская, 40в.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВСГТУ. Автореферат разослан 2003 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, к.т.н., доцент

Столярова А.С.

О-о&з-Ь

17148"

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Надежными средствами кардинального улучшения обеспеченности йодом является обогащение им продуктов питания и регулярный прием иодированных препаратов. Широкое распространение получило использование иодированной соли, хлеба и др. Однако известно, что в формировании тиреоидных гормонов участвует не только один компонент - йод, но обязательно и белок. Огромное значение при этом имеет его аминокислотный состав с обязательным содержанием тирозина и фенилаланина, необходимых для синтеза гормонов щитовидной железы. Поэтому на фоне белковой недостаточности профилактика антиструмином, иодированными солью, хлебом может оказаться неэффективной. Новый способ иодирования заключается в использовании пробиотических микроорганизмов, ферментная система которых играет большую роль в усвояемости микрбэлементов организмом.

Известно, что одной из причин гипотиреоза является недостаточная всасываемость йода в тонком кишечнике. Возможно, что пробиотические микроорганизмы помогут нормализовать деятельность желудочно-кишечного тракта и, тем самым, наладить механизм проникновения йода в щитовидную железу.

Сывороточные белки выполняют важные биологические функции и имеют большое значение, вследствие высокого содержания незаменимых и серосодержащих аминокислот. Содержание в их составе необходимых для иодирования тирозина и фенилаланина делает возможным использование этих белков в качестве основы для производства новых биологически активных добавок, содержащих йод.

Таким образом, решение проблемы йоддефицитных заболеваний не ограничивается использованием традиционных методов коррекции. Использование ферментной системы пробиотических микроорганизмов позволит более эффективно подойти к вопросу устранения йододефицита.

Цель и задачи исследований. Целью исследований являлась разработка технологии иодированных препаратов с использованием пробиотических микроорганизмов.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие

задачи:

1. Исследовать влияние иодида калия на биохимическую активность бифидобактерий и пропионовокислых бактерий.

2. Исследовать антимутагенную активность иодированных бактериальных концентратов.

РОС НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА СПстс| 9Э

3. Изучить влияние иодированных концентратов на показатели уровней тиреоидных гормонов и морфофункциональное состояние щитовидных желез крыс линии Вистар.

4. Разработать технологию получения иодированных концентратов бифидобактерий и пропионовокислых бактерий.

5. Подобрать оптимальные условия осаждения сывороточных белков пектином. '

6. Выявить возможность иодирования комплекса «белок -пектин».

7. Разработать технологию получения сухого иодированного препарата на основе сывороточных белков.

Научная новизна.

Изучена закономерность влияния йодистого калия на рост бифидобактерий и пропионовокислых бактерий. Подобраны оптимальные дозы йодистого калия при культивировании пробиотических микроорганизмов.

Установлено, что большая часть йода остается в биомассе, вследствие взаимодействия с тирозильными группами белков и адсорбции самой клеткой, а другая часть остается в культуральной жидкости. Выявлено, что пропионовокислые бактерии более устойчивы к действию иодида калия.

Изучена антимутагенная активность бифидобактерий и пропионовокислых бактерий при культивировании в молочной сыворотке. Показано, что пропионовокислые бактерии обладают более сильным ингибирующим действием, по сравнению с бифидобактериями, в отношении мутагенеза, вызванного 4-нитрохинолин -К- оксидом.

Установлено, что яблочный пектин увеличивает выход сывороточных белков. Выявлено, что иодирование сывороточных белков может проходить при их тепловой коагуляции.

Практическая ценность работы.

Основные результаты работы нашли практическое воплощение в разработке новых препаратов йодбифивита, йодпропиовита, йодмикровита. На производство йодбифивита разработана НТД (ТУ 9229-006-02069473-03). Производство этих препаратов освоено в лаборатории заквасок Восточно-Сибирского государственного технологического университета. Йодбифивит и йодпропиовит прошли клинические испытания в Иркутском государственном медицинском университете.

Апробация работы. Результаты работы были доложены и обсуждены на научных конференциях ВСГТУ (Улан-Удэ, 2000 -2003 гг),

Всероссийских научно-практических конференциях: IV региональной конференции молодых ученых «Проблемы экологии и рационального природопользования» (Владивосток, 2000г); «Биологически активные добавки и здоровое питание» (Улан-Удэ, 2001 г); «Актуальные проблемы адекватного питания в эндемичных регионах» (г. Улан-Удэ, 2002); международных научно-практических конференциях «Актуальные проблемы обеспечения здоровья международных путешественников» (Улан-Удэ 2001 г); «Перспективы производства ■ продуктов питания нового поколения» (г. Омск, 2003); «Пищевая промышленность на рубеже веков: Состояние, проблемы и перспективы»; (Алматы, 2001); IV международной научно-технической конференции «Пища. Экология. Человек» (г. Москва, 2001); международных научно-практических конференциях: «Пища. Экология. Человек.» (Москва, 2001 г), (Москва, 2003) «Потребительский рынок: качество и безопасность товаров и услуг» (Орел, 2001 г.), межрегиональных научно-практических конференциях: «Будущее Бурятии глазами молодежи» (г. Улан-Удэ, 2003);

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14

работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, аналитического обзора, методической части, результатов эксперимента и их анализа, выводов, списка литературы и приложений.

Основная часть работы изложена на страницах, включает 18 таблиц, 8 рисунков, 5 микрофотографий.

МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА

Экспериментальная часть исследований проводилась в лабораториях кафедры «Технология молочных продуктов. Товароведение и экспертиза товаров», Проблемной научно-исследовательской лаборатории Восточно-Сибирского

государственного технологического университета, кафедры «Микробиология» Московского государственного университета.

Объектом исследований служили бактериальные концентраты бифидобактерий, пропионовокислых бактерий и сывороточные белки.

Иодирование бактериальных концентратов проводили 10%-ным водным раствором йодистого калия. Содержание йода проводили роданидно-нитритным методом по Проскуряковой Г.Ф.

Для осаждения сывороточных белков использовали яблочный

пектин.

Для ферментации белковой массы использовали сухую закваску пропионовокислых бактерий.

Титруемую кислотность определяли по ГОСТ 3624-92.

Оптическую плотность определяли фотоколориметрическим методом на KF -77 при А.=550 нм

Массовую долю влаги определяли по ГОСТ 3627-73.

Индекс растворимости определяли по ГОСТ 8764-73.

Определение количества клеток бифидобактерий и пропионовокислых бактерий проводили методом предельных разведений по ТУ 10-10-02-789-192-95

Бродильный титр бактерий группы кишечной палочки определяли по ГОСТ 9225-84.

Контаминацию определяли по ГОСТ 9225-84.

Показатели безопасности продуктов определяли в соответствии с медико-биологическими требованиями, утвержденными комитетом Госсанэпиднадзора РФ.

Для определения антимутагенной активности применяли тест Эймса, а в качестве индикатора мутагенности — тест-штамм Salmonella typhimurium ТА 100. Принцип метода состоит в том, что под действием мутагена на селективной среде вырастают ревертанты по гистидину, по числу которых, определяют антимутагенный эффект. Соответственно антимутагены снижают число индуцированных ревертантов.

Для проведения гистоморфологических исследований использовались 70 половозрелых крыс линии Вистар массой 150-200 гр., полученных из питомника РАМН «Столбовая». Экспериментальные исследования проведены при соблюдении правил, сформулированных в приказах МЗ СССР № 1 от 10.10.1989 г. и № 1045-73 от 6.04.1973 г.

Уровень тиреоидных гормонов определяли трехфазным иммуноферментным методом с использованием стандартных наборов ИФА-ТТ4, ИФА- ТТ3 производства НВО «Иммунотех».

С помощью окуляр-микрометра определяли параметры фолликулов щитовидной железы: среднюю высоту фолликулярного эпителия (h), средний диаметр ядер тироцитов (d), средний диаметр фолликулов (D). Стереоскопическим методом точечного счета определяли на гистологических срезах относительную площадь тканевых компонентов щитовидной железы: фолликулярного эпителия, коллоида, интерфолликулярных островков, соединительной ткани и сосудистого русла.

Полученные экспериментальные данные статически обрабатывали методами математического и корреляционного анализа на ЭВМ, используя пакет стандартных программ.

Исследование влияния иодида калия на биохимическую активность бифидобактерий и пропионовокислых бактерий

_М_

Разработка технологии получения иодированных концентратов бифидобактерий и пропионовокислых бактерий

_6, 7, 8, 9,11_

Исследование антимутагенной активности иодированных бактериальных концентратов

_10_

Изучение влияние иодированных концентратов на показатели уровней тиреоидных гормонов и морфофункциональное состояние щитовидных желез крыс Вистар

_12, 13_

Подбор оптимальных условий осаждения сывороточных белков пектином

_4_

Разработка технологии получения сухого иодированного препарата на основе сывороточных белков. 2,3,4,5,7, 8, 9,11

_Обработка результатов

_Разработка НТД_

Показатели:

1. Оптическая плотность

2. Титруемая кислотность

3. Массовая доля влаги

4. Индекс растворимости

5. Содержание йода

6. Определение количества клеток бифидобактерий

7. Определение количества клеток пропионовокислых бактерий

8. Определение бактерий группы кишечной палочки

9. Контаминация

10. Определение антимутагенной активности

11. Показатели безопасности

12. Гистоморфологические исследования

13. Определение уровня тиреоидных гормонов

Рис. 1 Схема проведения эксперимента

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование возможности иодирования бактериальных концентратов бифидобактерий и пропионовокислых бактерий

Анализ экспериментальных данных показал, что иодирование может проходить как при синтезе, так и при расщеплении белков. В процессе метаболизма микроорганизмов создаются благоприятные для иодировании условия.

Внесение иодида калия проводили на стадии заквашивания. Дозы иодида калия были подобраны в соответствии с рекомендациями ВОЗ. Контролем служили бактериальные концентраты без добавления иодида калия. В первой серии опытов исследовали влияние иодида калия на биохимическую активность бифидобактерий и пропионовокислых бактерий. Данные, представлены в табл.1, 2 и на рис. 2, 3.

Таблица 1

Влияние иодида калия на рост бифидобактерий_

Доза йода, мкг/мл Продолжительность культивирования, час

4 8 18 24

52,58 8*103 6*10' 3*10у 4*10"

57,36 то* 3*107 5*108 8*101и

66,92 8*104 7*10" 9*10' 7*109

Контроль 8*105 8*10' 2*10* 4*10"

Продолжительность ферментации, час

■ Доза иодида калия 52,58 шгЫп ■ Доза иодида калия 57,36 мкг/мл б Доза иодида калия 66 92 «Тип □ Контроль

Рис. 2. Влияние иодида калия на наращивание биомассы бифидобактерий

Таблица 2

Влияние иодида калия на рост пропионовокислых бактерий

Доза йода, мкг/мл Продолжительность культивирования, час

6 12 18 24

57,36 3*107 1*10ш 6*10ш 8*1012

66,92 9*106 9*10у 1*Ю10 7*1012

76,48 1*106 4*10" 9*1 1*10"

Контроль 8*106 9*10у 5*10'° 7*1012

Продолжительность культивирования, час

■Доза иодида калия 57,36 мкг/мл В Доза иодида калия 66,92 мкг'мл ■Доза иодида калия 76,48 мкг/мл □ Контроль

Рис. 3. Влияние иодида калия на наращивание биомассы пропионовокислых бактерий

Анализ экспериментальных данных показал, что иодид калия в определенных дозах не влияет на развитие пробиотических микроорганизмов. Причем отмечено, что пропионовокислые бактерии более устойчивы к иодиду калия, чем бифидобактерии. Оптимальная доза иодида калия, не влияющая на развитие пропионовокислых бактерий, составила 66,92 мкг/мл (в пересчете на йод), что на 21% больше оптимальной дозы для бифидобактерий. Вероятно, что внесение раствора иодида калия вызывает повышение редокс-потенциала в среде и тем самым способствует замедлению биохимических процессов. Более высокую устойчивость пропионовокислых бактерий к действию йодистого калия можно объяснить их меньшей чувствительностью к изменению рН среды. Из литературных источников известно, что

пропионовокислые бактерии способны регулировать значения рН, сдвигая его в благоприятную для роста сторону.

Установлена корреляционная зависимость между дозой иодида калия и накоплением биомассы бифидобактерий, контролируемой по изменению оптической плотности. При дозе иодида калия 52,58мкг/мл уравнение функциональной зависимости имеет вид У=7,036х2+5,458х+9,4, коэффициент корреляции г составляет при этом 0,993. При дозе иодида калия 57,36 мкг/мл зависимость факторов описывается уравнением У=5,865х2+3,436х+2,36, г=0,989. При дозе иодида калия 66,92 мкг/мл уравнение имеет вид У=2,656х2+4,256х+2,96, г=0,997.

В следующей серии опытов исследовали содержание йода в бактериальных концентратах бифидобактерий и пропионовокислых бактерий. Результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3

Доза йода, мкг/мл Содержание йода, мкг/мл

Бифидобактерии Пропионовокислые бактерии

Бактериальный концентрат Биомасса Бактериальный концентрат Биомасса

52,58 40,15 43,36 { -

57,36 42,8 46,6 46,8 49,2

66,92 53,6 57,9 57,4 59,8

76,48 - - 55,6 57,1

Полученные результаты указывают на то, что большее количество йода концентрируется в биомассе и составляет примерно 83% для бифидобактерий и 85% для пропионовокислых бактерий. В бактериальном концентрате бифидобактерий содержится около 76% йода, а в бактериальном концентрате пропионовокислых бактерий содержание йода составило 77,5 %. Отмечено более высокое содержание йода в бактериальном концентрате пропионовокислых бактерий, что объясняется тем, что в процессе их метаболизма образуется пероксидаза, которая увеличивает скорость реакции и способствует более полному иодированию. Остальная часть йода взаимодействует с растворимыми пептидами сыворотки и остается в культуральной жидкости.

На следующем этапе исследовали сроки хранения иодированных концентратов. На рис.4 показана динамика концентрации йода в зависимости от сроков хранения.

60 - - ------- , - - --

и

'10 —

о ■ о

- - йодбифивит —*—йодпропиовит I

Рис. 4. Зависимость концентрации йода от сроков хранения

Как видно из рисунка 4 в течение трех месяцев происходит незначительное понижение концентрации йода в бактериальных концентратах. Содержание йода в бактериальном концентрате бифидобактерий снизилось на 10,2 %, а в бактериальном концентрате пропионовокислых бактерий на 9,9 %. Несущественные изменения количества йода можно объяснить тем, что йод в бактериальных концентратах находится в связанном состоянии, что препятствует его улетучиванию.

На основании проведенных исследований разработана технологическая схема производства иодированных препаратов на основе бактериальных концентратов бифидобактерий и пропионовокислых бактерий.

2 з

Продолжительность хранения мес

Качественная характеристика биологически активных добавок представлена в таблице 4.

Таблица 4.

Качественная характеристика иодированных концентратов

Наименование показателя Показатель

Иодбифивит Йодпропиовит

Органолептические

Консистенция и внешний вид Однородная. Допускается

отделение сыворотки

Цвет От белого до светло-желтого с

белыми вкраплениями

лоооо ол

Вкус и запах Чистый, слегка кисловатый, без

посторонних привкусов

Физико — химические

Предельные значения рН 5,5-8

Содержание йода, не менее мкг/мл 30

Температура при выпуске с

предприятия, °С, не более 6

Микробиологические

Количество бифидобактерий на

конец срока годности, КОЕ/см3, не

менее 1* 10"

Количество пропионовокислых

бактерий на конец срока годности, 10й

КОЕ/см3, не менее 1*

Объем продукта (см3), в котором

не допускаются

БГКП (колиформы) 10

S. aureus 10

Патогенные микроорганизмы (в

т.ч. сальмонеллы) 50

Дрожжи, КОЕ/см3, не более 10

Плесени, КОЕ/см3, не более 10

Таким образом, разработанные иодированные препараты на основе бактериальных концентратов пробиотических микроорганизмов содержат йод,

в биологически активной форме, с возможностью точной дозировки в зависимости от возраста и физиологического состояния организма. Кроме того, полученные препараты характеризуются высоким содержанием жизнеспособных клеток бифидобактерий и пропионовокислых бактерий.

Изучение антимутагенной активности бифидобактерий и пропионовокислых бактерий

Бактерии как источники антимутагенов представляют несомненный интерес как профилактические пищевые добавки для активации естественных систем репарации и для создания медицинских препаратов нового типа с антимутагенными свойствами.

Поэтому в дальнейших исследованиях изучали

антимутагенную активность иодированных бактериальных

1 концентратов. Результаты исследований представлены в таблице 5.

1

р Таблица 5

Определение антимутагенной активности

бифидобактерий и пропионовокислых бактерий

^ ____

Вид микроорганизмов; среда Время культиви рования, час Среднее число ревертантов на чашку Ингибиро-ание, %

Бифидобактерии Среда для культивирования 48 885 20

Культуральная жидкость 48 710 30

Клетки 48 134 62

Пропионовокислые бактерии Среда для культивирования 48 885 20

Культуральная жидкость 48 628 35

Клетки 48 70 71,6

; В результате экспериментальных исследований установлено,

что культуральная жидкость и клетки пропионовокислых бактерий и I бифидобактерий обладают антимутагенным действием в отношении

| мутагенеза, индуцируемого 4-нитрохинолин-М-оксидом. Наиболее

сильное антимутагенное действие обнаружено у культуральной I жидкости и клеток пропионовокислых бактерий, достигающее

! соответственно 35% и 71,6% ингибирования. Возможно, это

объясняется тем, что пропионовокислые бактерии синтезируют значительные количества антиокислительных ферментов:

супероксиддисмутазы, пероксидазы и каталазы. Одновременное присутствие этих ферментов позволяет клетке удалять супероксидные и пероксидные радикалы, образованные в окислительных реакциях.

Изучение влияния иодированных концентратов на уровень тиреоидных гормонов и морфофункциональное состояние щитовидных желез крыс линии Вистар

Для подтверждения эффективности иодированных препаратов на основе бактериальных концентратов бифидобактерий и пропионовокислых бактерий была проведена экспериментальная проверка последних на крысах линии Вистар. О степени усвояемости йода судили по содержанию тиреоидных гормонов в сыворотке крови и гистоморфологическим исследованиям щитовидных желез крыс Вистар.

В экспериментах введение мерказолила в дозе 25 мг/кг в течение 14 дней привело к гипотиреозу. Полученные данные представлены в таблице 6.

Таблица 6

Влияние иодированных концентратов на уровень тиреоидных гормонов

в сыворотке крови крыс Вистар при экспериментальном мерказолиловом гипотиреозе

№ Группа животных Доза Уровень тиреоидных гормонов, нмоль/л

Т4 общий Т4св. Т3

1 Интактные 50 мкг 118,6 25,6 1,8

2 Мерказолил 25 мкг 61,5 15,92 0,95

3 Мерказолил +Иодбифивит 50 мкг 133,3 24,86 1,59

4 Мерказолил + Иодпропиовит 50 мкг 117,3 27,1 1,93

5 Мерказолил + «К1 200» 50 мкг 104,3 24,75 1,38

Как видно из таблицы, применение иодированных концентратов в течение 14 дней способствует восстановлению показателей тироксина и трийодтиронина в сыворотке крови до уровня таковых интактных животных при мерказолиловом гипотиреозе. Введение иодированных концентратов более эффективно по сравнению с введением «KI 200». Наличие данного эффекта, по-видимому, можно объяснить тем, что ферментная система микроорганизмов способствует более полному усвоению йода. Отмечено, что действие бактериального концентрата пропионовокислых бактерий более эффективно по сравнению с концентратом бифидобактерий. По, видимому, это объясняется тем, что пероксидаза, синтезируемая пропионовокислыми бактериями, катализирует реакцию присоединения йода.

На следующем этапе изучали изменение морфологического строения щитовидной железы животных различных экспериментальных групп. Результаты экспериментов отражены в таблицах 7 и 8.

Таблица 7

Площади тканевых компонентов щитовидных желез крыс (%), М±ш,

п=Ю

Группа Фол- Пара- Кол- Сосу- Сое- Фолли-

лику- фолли- лоид дистое ди- ку-

ляр- куляр- русло .ните- лярно-

ный ные льная колло-

эпите эндо- ткань идный

лий крино- индекс

циты

Интактные 45,86 14,15± 20,05 12,96± 7,39± 2,29±

± 0,34 ± 0,27 0,21 0,11

0,27 0,26

Мерказо-лил 49,56 24,96± 8,96± 16,12± 3,25± 5,53±

± 0,91 0,11 0,93 0,17 0,38

1,04

Мерказо-лил 46,02 15,18± 20,62 12,07± 6,11± 2,23±

+ ± 0,47 ± 0,81 0,27 0,24

Йодбифивит 1,17 0,68

Мерказолил + 45,89 15,12± 20,53 12,02± 7,68± 2,24±

Йодпропио- ± 0,36 ± 0,26 0,15 0,31

вит 0,25 0,45

Мерказолил -г 47,56 17,58± 18,26 14,06± 5,87± 2,6±

Калия иодид ± 0,41 ± 0,29 0,31 0,19

200 0,26 0,24

Таблица 8

Морфометрические показатели составных компонентов фолликулов щитовидной железы крыс, (мкм), М±ш, п=10

Группа Диаметр фолликула (D) Высота тироцита (Н) Диаметр ядра тироцита (d)

Интактные 22,62±0,28 6,58±0,29 3,24±0,68

Мерказолил 18,39±0,49 7,51±0,76 5,2±0,64

Мерказолил + Йодбифивит 22,02±0,47 6,91 ±0,11 3,84±0,14

Мерказолил + Йодпропиовит 22,59±0,34 6,95±0,58 3,45±0,25

Мерказолил + Калия иодид 200 20,87±0,25 7,03±0,33 4,23±0,36

Таким образом, установлено, что тиреостатическое действие мерказолила в дозе 25 мг/кг в течение 14 дней приводит к функциональному перенапряжению щитовидной железы, что возможно объясняется как прямым действием на тироциты, так и опосредованным, через гипоталамо-гипофизарную регуляцию. Результаты исследований выявили, что применение йодбифивита и йодпропиовита в дозе 50 мкг/мг в течение 14 дней восстанавливает у животных функциональную зависимость щитовидной железы до уровня интактных животных.

Таким образом, из вышеизложенного следует, что йод, содержащийся в иодированных бактериальных концентратах, хорошо усваивается организмом и участвует в образовании тиреоидных гормонов.

Разработка технологии сухой ферментированной добавки, обогащенной йодом

Так как при производстве бактериальных концентратов остается достаточно большое количество сывороточных белков, представилось интересным исследовать возможность иодирования этих белков. Для осаждения белков используются различные

комплексообразователи, содержащиеся в природных продуктах растительного и животного происхождения. Для этой цели наиболее удачно подходит пектин.

Поэтому в следующей серии опытов было изучено влияние дозы коагулянта и режима тепловой обработки на степень использования сывороточных белков. Для сравнения в качестве коагулянта использовался хлористый кальций. Сравнительный анализ показал, что наибольший выход сывороточных белков, осажденных в присутствии пектина, наблюдался при 1= 95°С и дозе пектина 0,15%. Наибольший выход белков, осажденных с хлористым кальцием, был при 1=90°С и дозе хлористого кальция 0,7%. Количество белков, выделенных с участием пектина, на 26% больше, чем при использовании хлористого кальция. Таким образом, используя пектин в качестве коагулянта сывороточных белков при тепловой коагуляции, можно не только добиться более полной степени использования белков по сравнению с другими способами, но и дополнительно обогатить их таким важным нутриентом, как пектин.

В дальнейших экспериментах исследовали возможность иодирования комплекса «белок-пектин». Так как при осаждении сывороточных белков происходит развертывание пептидных цепей и высвобождаются ранее недоступные группы что, возможно, будет способствовать иодированию тирозиновых остатков. В литературных источниках упоминается возможность сорбции пектином ионов тяжелых металлов. Поэтому нами была предпринята попытка изучения сорбционных возможностей пектина в отношении йода. Результаты исследований отражены в таблице 9.

Таблица 9

Влияние дозы пектина и йодистого калия на содержание йода в сывороточных белках

Доза йодистого калия, % Доза пектина, %

0 0,13 0,15 0,17

Содержание йода, мкг/г

0,5 96 147 159 152

1,0 124 165 170 168

1,5 146 164 164 163

Полученные результаты свидетельствуют о том, что наибольшее количество йода в белке обнаружилось при дозе пектина 0,15%, дозе йодистого калия 1%, которое составило 170 мкг/мл. Наибольшее содержание йода можно объяснить большим выходом

сывороточных белков при этой дозе. Возможно, что большее количество тирозиновых оснований способствовало большей степени иодирования. Выявлено, что количество йода в белке, осажденном пектином, по сравнению с контролем почти на 30% больше. Таким образом, было экспериментально подтверждено, что пектин способен сорбировать йод.

Установлена корреляционная зависимость между дозой иодида калия и содержанием йода. При дозе пектина 0,13 % уравнение функциональной зависимости имеет вид У=-14,5х2 + 64,5х + 95, коэффициент корреляции г составляет 0,993. При дозе пектина 0,15% зависимость факторов описывается уравнением У=-2,5х2 + 11,5х + 157, г = 0,95. При дозе пектина 0,17% уравнение имеет вид У=-10,5х2 + 47,5х +115, г=0,924.

Дальнейшие эксперименты были направлены на изучение биохимических процессов, происходящих в результате ферментирования иодированных сывороточных белков. Об активности протекающих биохимических процессов судили по титруемой кислотности и росту клеток. Из экспериментальных исследований установлено, что сывороточные белки, полученные тепловой денатурацией с пектином, в присутствии К1, активнее ферментируются пропионовокислыми бактериями по сравнению с контролем. По истечении 6 часов ферментации количество клеток пропионовокислых бактерий достигает 1*1010 к.о.е в 1 г. Высокое содержание жизнеспособных клеток пропионовокислых бактерий можно объяснить наличием пектина, который стимулирует рост пробиотических микроорганизмов.

С целью продления сроков хранения, ферментированные белки были подвергнуты лиофильной сушке. Экспериментальные исследования показали, что наибольшей растворимостью обладают белки, полученные тепловой денатурацией с пектином. Из литературных источников известно, что осаждение белка пектином происходит за счет образования комплексов между азотистыми основаниями и активными группами на поверхности пектинового сорбента. Благодаря этому белки не подвергаются сильным изменениям из-за воздействия высокой температуры, что способствует более высокому проценту растворения.

На дальнейших этапах исследовали влияние сроков хранения на содержание йода в сухой ферментированной добавке. Полученные результаты представлены на рисунке 5.

170 г

О 2 6 10 12

Продолжительность хранения, мес

Рис. 5. Зависимость концентрации йода от сроков хранения

На следующем этапе изучали влияние высушивания и сроков хранения на содержание пропионовокислых бактерий. В процессе лиофильной сушки произошли потери йода, которые составили 2,35%. Количество жизнеспособных клеток пропионовокислых бактерий после высушивания снизилось, по сравнению с первоначальным, на 3 порядка. Наибольшая гибель клеток произошла в результате' замораживания белковой смеси. Так как при кристаллизации воды во внеклеточной среде происходит образование на определенных этапах охлаждения гиперконцентрированных растворов солей и изменение рН среды, при этом происходит обезвоживание клеток, что приводит к уменьшению общего объема клеток и к нарушению структуры и функций биомакромолекул. В процессе хранения в течение 12 месяцев количество клеток снизилось на 1 порядок и составило 3*106 КОЕ/г.

На основании проведенных исследований разработана технология получения сухой ферментированной белковой добавки, обогащенной йодом, которую условно назвали йодмикровит.

Качественная характеристика йодмикровита представлена в таблице 10.

Таблица 10

Показатели Характеристика

1 2

Органолептические:

Консистенция и внешний вид Рассыпчатая

Цвет Белый с кремовым

оттенком

Вкус и запах Слегка кисловатый

Физико-химические:

Содержание йода, мкг/г 150

Массовая доля влаги, % 3

Масса нетто, г 0,4

Микробиологические:

Количество пропионовокислых

бактерий на конец срока годности, 106

КОЕ/г, не менее

Объем продукта (см3), в котором не

допускаются

БГКП (колиформы) 10

S. aureus 10

Патогенные микроорганизмы (в т.ч.

сальмонеллы) 50

Дрожжи, КОЕ/см3, не более 10

Плесени, КОЕ/см3, не более 10

Таким образом, полученная биологически активная добавка обладает широким спектром действия за счет содержания необходимого количества йода, жизнеспособных клеток пропионовокислых бактерий, незаменимых аминокислот и пектина.

Выводы:

В результате проведенных исследований разработан принципиально новый способ получения иодированных препаратов с использованием пробиотических микроорганизмов.

1. Подобраны оптимальные дозы иодида калия для получения

иодированных бактериальных концентратов бифидобактерий и

пропионовокислых бактерий.

2. Установлено, что при культивировании пробиотических микроорганизмов в среде, содержащей иодид калия, 76% йода переходит в бактериальный концентрат, 83 % йода переходит в биомассу бифидобактерий и 77,5 % в бактериальный концентрат, 85 % в биомассу пропионовокислых бактерий. Пропионовокислые бактерии более устойчивы к действию иодида калия.

3. Определены оптимальные сроки хранения иодированных концентратов

4. Теоретически обоснованы оптимальные технологические параметры производства иодированных концентратов.

5. При исследовании антимутагенной активности установлено, что антимутагенная активность пропионовокислых бактерий составляет 71,2%, бифидобактерий 62%.

6. Доказано, что йод, содержащийся в пробиотических концентратах, усваивается организмом и участвует в образовании тиреоидных гормонов.

7. Установлено, что применение пектина способствует повышению степени использования сывороточных белков.

8. Определено, что белок, полученный тепловой денатурацией с пектином, в присутствии KI, активнее ферментируется пропионовокислыми бактериями

9. Разработан способ коагуляции сывороточных белков пектином с последующим их иодированием.

По материалам диссертации опубликованы следующие работы:

1. Хамагаева И.С., Бадлуева A.B. Бактериальный концентрат бифидобактерий, обогащенный йодом. // Пищевая промышленность на рубеже веков. Состояние, проблемы и перспективы: Матер. 3-й междунар. науч.-прак. конф.-Алматы, 2001.

2. Хамагаева И.С., Бадлуева A.B. Бактериальный концентрат пропионовокислых бактерий, обогащенный йодом. // Пища. Экология. Человек : Матер. 4-й междунар. научн.—техн. конф. - Москва, 2001.

3. Хамагаева И.С., Мантатова Н.В., Бадлуева A.B. Иодированные бактериальные концентраты. // Матер. Междунар. науч.-практ. конф. Актуальные проблемы обеспечения здоровья международных путешественников: -Улан-Удэ, 2001.

4. Хамагаева И.С., Бадлуева A.B. Исследование биохимических свойств пропионовокислых бактерий при культивировании в сыворотке. //Сб. тр. ВСГТУ. - Улан-Удэ, 2000.

5. Хамагаева И.С., Бадлуева A.B. Влияние иодида калия на рост бифидобактерий. // Сб. тр./ВСГТУ. - Улан-Удэ, 2001.

6. Хамагаева И.С., Бадлуева A.B. Биологически активная добавка к пище - йодбифивит. // Потребительский рынок: качество и безопасность товаров и услуг: Тез. докл. междунар. науч.-прак. конф. -Орел, 2001.

7. Бадлуева A.B., Хамагаева И.С. Влияние иодида калия на биохимическую активность пробиотических микроорганизмов. // Пищевые продукты XXI века: Тез. докл. междунар. науч.-прак. конф. -Москва, 2001.

8. Бадлуева A.B., Хамагаева И.С. Влияние иодида калия на рост бифидобактерий. // БАД и здоровое питание: Всерос. науч. молодеж. конф. с междунар. участием. - Улан-Удэ, 2001.

9. Хамагаева И.С., Бадлуева A.B. Иодированные БАД на основе эубиотиков. // Сб. тр. ВСГТУ. - Улан-Удэ, 2002.

10. Бадлуева A.B., Хамагаева И.С. Эффективность применения иодированных БАД на основе бактериальных концентратов пробиотических микроорганизмов для лечения и профилактики йодцефицитных заболеваний. // Актуальные проблемы адекватного питания в эндемичных районах: Матер, всерос. науч. конф. - Улан-Удэ, 2002.

11. Бадлуева A.B., Хамагаева И.С. Разработка иодированных пробиотических препаратов. // Вестник ВСГТУ. - Улан-Удэ, 2003.

12. Бадлуева A.B., Хамагаева И.С. Сывороточные белки как основа для производства иодированных препаратов. // Будущее Бурятии глазами молодежи: Матер. 3-й межрегион.науч.-практ. конф. - Улан-Удэ, 2003.

13. Бадлуева A.B., Хамагаева И.С. Ферментированная биологически активная добавка на основе иодированных сывороточных белков. // Перспективы производства продуктов питания нового поколения: Междунар. науч. - практ. конф. - Омск, 2003.

14. Бадлуева A.B., Хамагаева И.С. Эффективность применения иодированных препаратов. // Живые системы и биологическая безопасность населения: Матер. 2-й междунар. науч. конф. - Москва, 2003.

Автор выражает благодарность проф. Жамсарановой С.Д. за помощь при выполнении гистоморфологических исследований и проф. Воробьевой Л.И. за помощь при выполнении экспериментальной части работы, посвященной антимутагенезу, проведенной на кафедре «Микробиология» МГУ им. М.В. Ломоносова.

¡

N*

2.©©?-А !'

Р17Н8 1

Редактор Т.Ю. Артюнина

Подписано в печать 13.10.03 г.

Формат 60x84 1/16. Усл.п.л. 1,39 уч. - изд.л. 1,0.

Тираж 70 экз.

Издательство ВСГТУ. г. Улан-Удэ, ул.Ключевская, 40в Отпечатано в типографии ВСГТУ

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. СОСТОЯНИЕ ВОПРОСА И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ

1.1. Биологическая роль йода в организме.

1.2. Химическое иодирование

1.3. Антимутагенная активность пробиотических микроорганизмов

1.4. Влияние белков на состояние щитовидной железы при недостаточности йода

В организме человека нет ни одной жизненно важной функции, которая бы не зависела от тиреоидных гормонов, осуществляющих свое универсальное действие с помощью йода. Надежными средствами кардинального улучшения обеспеченности йодом является обогащение им продуктов питания и регулярный прием иодированных препаратов. Широкое распространение получило использование иодированных соли, хлеба и др. Однако известно, что в формировании тиреоидных гормонов участвует не только один компонент -йод, но обязательно и белок. Огромное значение при этом имеет его аминокислотный состав с обязательным содержанием тирозина и фенилаланина, необходимых для синтеза гормонов щитовидной железы. Поэтому на фоне белковой недостаточности профилактика антиструмином, иодированной солью может оказаться неэффективной.

Новый способ иодирования заключается в использовании пробиотических микроорганизмов, ферментная система которых играет большую роль в усвояемости микроэлементов организмом.

Из литературных источников известно, что реакция иодирования может проходить как при расщеплении, так и при синтезе белков. Питательная среда для культивирования микроорганизмов содержит белки с необходимыми аминокислотами. Ферменты, выделяемые пробиотическими микроорганизмами расщепляют белки и, тем самым, могут способствовать более полному иодированию тирозильных остатков. Кроме того, можно добиться повышения степени усвоения йода и предотвращения его передозировки.

Известно, что одной из причин гипотиреоза является недостаточная всасываемость йода в тонком кишечнике. Возможно, что пробиотические микроорганизмы помогут нормализовать проблемы всасывания и, тем самым, наладить механизм проникновения йода в щитовидную железу.

При производстве бактериальных концентратов остается достаточно большое количество сывороточных белков. Они выполняют важные биологические функции и имеют большое значение, вследствие высокого содержания незаменимых и серосодержащих аминокислот. Содержание в их составе необходимых для иодирования тирозина и фенилаланина делает возможным использование этих белков в качестве основы для производства новых биологически активных добавок, содержащих йод.

Таким образом, решение проблемы йоддефицитных заболеваний не ограничивается использованием традиционных методов коррекции. Возможно, что использование ферментной системы пробиотических микроорганизмов позволит более эффективно подойти к вопросу устранения йоддефицита.

Выводы:

1 • Подобраны оптимальные дозы иодида калия для получения иодированных бактериальных концентратов бифидобактерий и пропионовокислых бактерий.

2. Установлено, что при культивировании пробиотических микроорганизмов в среде, содержащей иодид калия, примерно 76% йода переходит в бактериальный концентрат, 83 % йода переходит в биомассу бифидобактерий и 77,5 % в бактериальный концентрат, 85 % в биомассу пропионовокислых бактерий. Отмечено, что пропионовокислые бактерии более устойчивы к действию иодида калия.

3. Определены оптимальные сроки хранения иодированных концентратов.

4. Теоретически обоснованы оптимальные технологические параметры производства иодированных пробиотических концентратов.

5. При исследовании антимутагенной активности установлено, что ингибирующая способность пропионовокислых бактерий составляет 71,2%, бифидобактерий 62%.

6. Доказано, что йод, содержащийся в пробиотических концентратах, усваивается организмом и участвует в образовании тиреоидных гормонов.

7. Установлено, что применение пектина способствует повышению степени использования сывороточных белков.

8. Определено, что белок, полученный тепловой денатурацией с пектином активнее ферментируется пропионовокислыми бактериями.

9. Разработан способ коагуляции сывороточных белков пектином с последующим их иодированием.

1. Алекперов У.К. Антимутагенез: теоретические и практические аспекты.- М.: Наука, 1986.-100 с.

2. Ассонов Н.Р. Микробиология. 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Колос, 1997. - 352 е.: ил. - Учебники и учебные пособия для студентов высш. учеб. заведений.

3. Авдеенко Ю.А., Хмельницкий O.K. Морфологическая характеристика щитовидной железы взрослых жителей Санкт-Петербурга // Архив патологии. -2001.-Т. 63, №4.-С. 22-26.

4. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. — М.: Медицина, 1990.283 с.

5. Аксенова Н.П. Возрастные особенности локализации С-клеток щитовидной железы человека // Морфология, 1996. №2. - С. 18-21.

6. Алехин Е.К. Иммунотропные свойства лекарственных средств / Алехин Е.К., Лазарева Д.Н., Сибиряк C.B. Уфа: БГМУ, 1993. - С. 127-129.

7. Алешин Б.В., Губский В.Н. Гипоталамус и щитовидная железа. М.: Медицина, 1983.- 184 с.

8. Алешин Б.В., Мамина В.В. Воспроизведение основных симптомов эутиреоидного зоба в эксперименте // Проблемы эндокринологии и гормонотерапии, 1961. Т.7.- № 4. - С. 3-18.

9. Андроник В.И., Мельник Б.Е. Качественно-количественная структура тиреоцитов / Под ред. Н.П. Дмитриевой. Кишинев: Штиница, 1986. - 134 с.

10. Ашудаева З.Д. Химические реакции пектиновых веществ. Фрунзе.: Илим, 1984. -186 с.

11. Балаболкин, М.И. Эндокринология: Учебное пособие. М.: Медицина, 1998.-416 с.

12. Берзин Т.Н. Биохимия гормонов. М.: Медицина, 1964. - 396 с.

13. Биологические мембраны. // Под ред. Дж.Б. Финдлея, У.Г.Эванза. -Медицина, 1990. С. 190-192.

14. Биологическая химия. В.И. Добрынина. М.: «Медицина», 1976.- 504с.

15. Богданов В.М., Банникова Л.А. Производство и применение заквасок в молочной промышленности.- М.: Пищевая промышленность, 1978. 60 с.

16. Бомаш Н.Ю. Морфологическая диагностика заболеваний щитовидной железы. -М.: Медицина, 1981. 176 с.

17. Борзин В.А. и др. Тиреоглобулин / Борзин В.А., Гербильский Л.В., т Корниловская И.К. // Проблемы эндокринологии, 1993. № 4. - С.54-59.

18. Борисов А.Г., Новиков О.П., Степанятов Н.Е. Методы извлечения белковых веществ из творожной сыворотки. М.: Молмясопром СССР, 1989. -34 с.

19. Бронштейн М.Э. Морфологическая диагностика заболеваний щитовидной железы // Проблемы эндокринологии, 1999. Т. 45. - № 5. - С. 3438.

20. Буховец В.И. О возможности возникновения эндемического зоба в * условиях достаточного содержания йода во внешней среде // Микроэлементы вмедицине: Тез. докл. Иваново, 1969. - С. 30.

21. Воробьева Л.И. Пропионовокислые бактерии.- М.: МГУ.-1995.-288с.

22. Воробьева Л.И., Алтухова Е.А., Наумова Е.С., Абилев С.К. Микробиология, 1993. -Т. 60.- Вып. 6.-С. 1093.

23. Воробьева Л.И., Стоянова Л.Г., Алексеева М.А. Микробныеметаболиты.- M.: Изд-во МГУ, 1979. 88 с.

24. Л.И. Воробьева, С.К. Абилев. Антимутагенные свойства бактерий (обзор) // Прикладная биохимия и микробиология, 2002. -Т. 38.- №2.- С. 115127.

25. Воспроизведение заболеваний у животных для экспериментально-терапевтических исследований / Под ред. Л.В. Лазарева. — Л.: Наука, 1954. С. 356-384.

26. Гайтан Эдуардо. Зобогенные факторы окружающей среды // Болезни щитовидной железы: Пер. с англ. / Под ред. Л.И. Бравермана. М.: Медицина, 2000.-С. 359-377.

27. Герасимов Г.А. Всеобщее йодирование пищевой поваренной соли для профилактики йоддефицитных заболеваний: преимущества значительно превышают риск // Проблемы эндокринологии, 2001. Т.47.- №3. - С. 22-26.

28. Горбатова К.К. Химия и физика белков молока. М.: Колос, 1993.-192с.: (Учебники и учебные пособия для студентов высш. учеб. заведений).

29. Гуссаковский Е.Е., Бадаев Т.А. и др. Структурно-функциональная взаимосвязь в йодпротеинах. Ташкент: Фан, 1990 г-130 с.

30. Гуссаковский Е.Е., Бадаев Т.А. Иодированные белки и аминокислоты. -Ташкент: Фан, 1985 -126 с.

31. Глазер В.М., Зинченко В.В., Каменева C.B.: Большой практикум по генетике микроорганизмов. -М.: Мир, 1979. -Т. 1-3.

32. Гусев М.В., Минеева Л.А. Микробиология: М.: Изд-во Моск. Ун-та1992.-320 с.

33. Данн Джон. Отрицательные эффекты йодной недостаточности // Болезни щитовидной железы: Пер. с англ, / Под ред. Л.И. Бравермана. М.: Медицина, 2000. - С. 378-391.

34. Де Мейер E.H. Борьба с эндемическим зобом / Лонденстейн, Ф.У., Тийи К.Г. // Всемирная организация здравоохранения, Женева, 1981. 54 с.

35. Доломатов С.И. и др. Способность эритроцитов депонировать тиреоидные гормоны: регуляторная роль физико-химических факторов in vitro / Доломатов С.И., Пишак В.П., Слипенюк Т.С. и др. // Вопросы медицинской химии, 1998.-С. 534-540.

36. Дьяченко П.Ф. Исследование белков молока. М.: Пищепромиздат, 1969.-83 с.

37. Дьяченко П.Ф. Коагуляция белков молока // Труды ВНИМИ. М., 1959.-Вып. 9.-с. 62-80.

38. Дудкин М.С., Щелкунов Л.Ф. Новые продукты питания. М.: МАИК Наука, 1998 .-304 с.

39. Жолондз М.Я. Щитовидная железа: Выход из тупика. СПб.: ИД «ВЕСЬ», 2001. - 302 е., ил.

40. Залашко М.В. Биотехнология переработки молочной сыворотки. -М.: Агропромиздат, 1990 192 е.: ил.

41. Зимина С.А. Морфофункциональные особенности щитовидной железы при экспериментальном гипоселенозе: Автореф. канд. мед. наук. -Иркутск, 2000. 20 с.

42. Иммунологические механизмы формирования патологии щитовидной железы / Потемкина Е.Е., Ведихина и.А., Попова И.Л. и др. // Первый Российский конгресс по патофизиологии: Тез. докл. конгресса. 17-19 октября 1993 г.-М., 1996.-С. 157.

43. Иммунофармакология микроэлементов / Кудрин A.B., Скальный A.B., Жаворонков A.A. и др. М.: КМК, 2000. - 537 с.

44. Изучение и применение лечебно-профилактических препаратов на основе природных биологически активных веществ / по ред. Беспалова И.Г. и Некрасовой И.Б. -Спб.: Эскулап, 2000. 55 с.

45. Инихов Г.С. Биохимия молока и молочных продуктов М.: Пищевая промышленность, 1970. -318 с.

46. Йодказеин ликвидирует йодную недостаточность. // Молочная промышленность, 2000.-№6. С. 45-48.

47. Кашин В.К. Биогеохимия, фитофизиология и агрохимия йода. JL: Наука, 1987.-216 с.

48. Кофтунова JI.E., Бушуева И.Г., Пенаева А.И. Основные направления переработки сыворотки в СССР и за рубежом. М.: Наука, 1985. - 39 с.

49. Коен С. Тиреоидит как модель аутоиммунного расстройства у человека / Уорд П.А., Мак-Класки Р.Т. // Механизмы иммунопатологии: Пер. с англ. / Под ред. Ю.М. Зарецкой. М.: Медицина, 1983. - С. 184-203.

50. Ленинджер А. Биохимия. М.: Мир, 1974 957 с.

51. Лидский А.Т. Эндемический зоб. Свердловск.: Свердловское книжное издательство, 1954. - 59 с.

52. Литвин И.И., Луцик М.Д. Видовые различия в строении белковой части тиреоглобулина // Биологическая роль йода. М., 1972. - 182 с.

53. Машковский М.Д. Лекарственные средства: Пособие для врачей. 12-е изд., перераб. и доп. — М.: Медицина, 1993. — Ч. 1. - С. 644-645.

54. Мельниченко Г.А. Гипотиреоз // Русский медицинский журнал, 1999. -№ 7.-С. 302-308.

55. Меркулов М.Ф. Исследование механизма фармакологического действия антитиреоидных веществ: Автореф. докт. мед. наук. М., 1962. -21с.

56. Методические материалы по экспериментальному (фармакологическому) и клиническому испытанию иммуномодулирующего действия фармакологических средств (Издание официальное). М., 1986. - Ч. 6. - С. 159-195.

57. Микроэлементозы человека: этиология, классификация и органопатология / Авцын А.П., Жаворонков A.A., Риш М.А., Строчкова Л.С. -М.: Медицина, 1991. С.237-254.

58. Нечаев А.П., Таубенберг С.Е., Кочеткова А.А, Кобелева И.Б. Пищевая химия: конспект лекций. — М.: Изд. Комплекс МГУПП, 1998. 155 с.

59. Молочников В.В., Нестеренко П.Г. Производство и использование белков молочной сыворотки. М.: ЦНИИТИ молмясопром СССР, 1983. - 47 с.

60. Николаев О.В. Эндемический зоб. -М.: Медгид, 1955. 259 с.

61. Новое в производстве молочно-белковых концентратов и переработке сыворотки / по ред. Ставровой Э.Р. Минск: Наука и техника, 1979. - 153 с.

62. Ноздрюхина Л.Р. Биохимическая роль микроэлементов в организме человека и животных. — М.: Наука, 1977. 184 с.

63. Обеспеченность йодом и распространенность зоба среди детей организованных коллективов г. Кемерово / Зинчук С.Ф., Гореликова Г.А., Маюрникова Л.А., Зинчук В.Г., Воронцова И.А., Никитина И.И. // Вопросы питания, 1999. №3. - С.28-30.

64. Овчинникова А.И., Горбатова К.К. Биохимия молока и молочных продуктов. -Л., 1974 -260 с.

65. Онищенко Г.Г. О дополнительных мерах по профилактике йод-дефицитных состояний / Петухов А.И., Свяховская И.В. // Вопросы питания, 1998. №2.-С. 9-11.

66. О пролонгации Республиканской целевой программы на 2001-2005 годы «Профилактика йоддефицитных заболеваний в Республике Бурятия» // Пояснительная записка к проекту постановления Правительства Республики Бурятия. Улан-Удэ, 2001. - С. 1-3.

67. Оценка йодной недостаточности в отдельных регионах России / Дедов И.И., Свидоренко Н.Ю., Герасимов Г.А. и др. // Проблемы эндокринологии, 2000. Т.46.- №6. - С. 3-7.

68. Панков Ю.А. Гормоны регуляторы жизни в современной молекулярной эндокринологии // Биохимия, 1998. - № 12. - С. 1600-1615.

69. Получение и использование белков молока / под ред. Ставровой Э.Р. — Минск: Наука и техника, 1973. 210 с.

70. Подколзин A.A., Донцов В.И. Иммунитет и микроэлементы. М.: Медицина, 1994. - 142 с.

71. Позняковский В.М. Гигиенические основы питания и экспертизы продовольственных товаров. Новосибирск, 1996. - 432 с.

72. Порошенко Г.Г., Абилев С.К. Антропогенные мутагены и природные антимутагены. ВИНИТИ, Итоги науки и техники. Общая генетика, 1988. -Т. 12,-С. 5-176.

73. Правила доклинической оценки безопасности фармакологических средств // Руководящий нормативный документ. М., 1992. - С. 21-31.

74. Прегер С.М. Микроэлементы и иммунологическая реактивность организма. Томск: ТГУ, 1979. - 168 с.

75. Проскурякова Г.Ф., Никитина, Д.Н. Ускоренный вариант кинетического роданидно-нитритного метода определения микроколичеств йода в биологических объектах // Агрохимия. 1976. - №7. - С. 140-143.

76. Проскурякова Г.Ф. Оптимизация условий определения йода кинетическим роданидно-нитритным методом // Агрохимия, 1975 -№8.-С. 26-30.

77. Протасова H.A. Микроэлементы: биологическая роль, распределение в почве, влияние на заболевания человека и животных // Соровский образовательный журнал, 1998. № 12. - С. 32-37.

78. Работнова ИЛ. Роль физико-химических условий в жизнедеятельности микроорганизмов. М.: Изд-во АН СССР, 1957.- 124 с.

79. Рачев P.P., Ещенко Н.Д. Тиреоидные гормоны и субклеточные структуры. М.: Медицина, 1975. - 295 с.

80. Розен В.Б. Основы эндокринологии. 3-е изд., перераб. и доп. - М.: МГУ, 1994.-384 с.

81. Сенкевич Г., Руд ель К. Молочная сыворотка: переработка и т использование в АПК. М.: Агропромиздат, 1989 . - 248 с.

82. Смоляр В.И. Гипо и гипервитаминозы. Киев.: Здоровье, 1989 . - 185с.

83. Соколов A.A., Горностайская H.A., Алексеева Н.Ю. Технология производства и использование растворимых молочно-белковых концентратов. -М.: ЦНИИТИ молмясопром СССР, 1976 г. 32 с.

84. Смирнова B.C., Фрейдлин И.С. Иммунодефицитные состояния-СПб.: Фоллиант, 2000. 568 с.

85. Содержание йода в питьевой воде, пищевых продуктах и его экскреция с мочой у школьников Новосибирска / Селятицкая В.Г., Сухинина С.Ю., Поздняковский В.М., Пальчикова H.A., Шорин Ю.П., Бондарев Г.И. // Вопросы питания. 1996. - №1. - С.27-29.

86. Старкова А.Т. Фармакотерапия в эндокринологии. М.: Медицина, 1989.-288 с.

87. Талантов B.B. Эндемический зоб. Сущность. Экология и генетика в этиологии. Дефиниция // Проблемы эндокринологии, 1989. № 4. - С. 43-46.

88. Тепел А. Химия и физика молока. М.: Пищевая промышленность, 1979.-624 с.

89. Толстогузов В.Б. Новые формы белковой пищи. (Технологические проблемы и перспективы производства) -М.: Агропромиздат, 1987.-303с.

90. Толстогузов В.Б. Искусственные продукты питания.- М.: Наука, 1978.-231с.

91. Тумунова С.Б. Разработка технологии производства сухого концентрата бифидобактерий: Дис. канд. техн. наук. Улан-Удэ, 1995 . - 139 с.

92. Тутельян В. А. Стратегия разработки, применения и оценки эффективности БАД к пище. // Вопросы питания, 1996.- №6. С. 3-11.

93. Тепперман Дж., Тепперман X. Физиология обмена веществ и эндокринной системы. М.: Мир, 1989. - С.274-315.

94. Туракулов Я.Х. Обмен йода и тиреоидные гормоны в норме и при патологии // Проблемы эндокринологии, 1989. № 5. - С. 78-85.

95. Функциональное питание / под общ. Ред. Баранова В.Г. // Вопросы питания, 1996,- №9. С. 12-14.

96. Храмцов Ф.Г. Молочная сыворотка.-2-e изд., перераб. и доп.-М.: Агропромиздат, 1990.-240с. :ил.

97. Храмцов А.Г., Молчанов Г.И., Жидков Н.В., Луньков Л.В. Производство и использование белков молочной сыворотки в лечебно -диетическом питании. М.: АгроНИИТЭ молмясопром, 1993 -32 с.

98. Хэм А., Кормак Д. Гистология. М: Медицина, 1983. - Т. 2. - 254с.

99. Физико-химические аспекты переработки белков в пищевые продукты (Толстогузов В.Б., Е.Е. Браудо, В.Я. Гринберг, А.Н. Гуров) // Успехи химии, 1985, т.44, С. 250-300.

100. Чин Ульям У., Йен Пол М. Молекулярные механизмы внутриядерного действия тиреоидных гормонов // Болезни щитовидной железы: Пер.англ. / Под ред. Л.И. Бравермана. М.: Медицина, 2000. - С. 1-17.

101. Шадлинский В.Б. Структурная организация и морфофункциональные особенности щитовидной железы в норме и при струмогенном воздействии. -М.: ОАО «Внешторгиздат», 1998. 170с.

102. Шауцукова Л.К. и др. Влияние йодо-бромной воды на динамику йода и функциональное состояние щитовидной железы / Шауцукова Л.К., Урусова С.Х., Шауцукова Л.З. // Вестник КБГУ. Серия: Медицинские науки. Нальчик.: 1996.-Вып. 2.-С. 9-10.

103. Шевелева С. А. Пробиотики, пребиотики и пробиотические продукты. Современное состояние вопроса // Вопросы питания, 1999. №2. -С. 32-39.

104. Шендеров Б.А., Манвелова М.А. Микробиологические аспекты функционального питания // Мед. аспекты микробной экологии / Под ред. Шендерова Б.А.- М.: 1994.- Вып. 7/8. С. 10-19.

105. Штенберг А.И., Окорокова Ю.И. Значение фактора питания в развитии эндемического зоба. М.: Медицина, 1968. - 212 с.

106. Ames B.N. // Antimutagenesis and Anticarcinogenesis. Mechanisms. Ed. Shankel D.M., Hartman Ph.E., Kada T., Hollaender A. N-Y: Plenum Press. 1986. -P. 735.

107. Antimutagenesis and Anticarcinogenesis Mechanisms / Eds Shankel D.M. et. al. N.Y.; L.: Plenum Press, 1986. -P. 573.

108. Abdelali H., Cassand P., Soussottee V. Koch-Boca-beille 5., Narbounee J.B.//Mutation Res. 1995.-V. 331.-№ 1.-P. 133-141.

109. Anderson R.R., Turner c. W. Effect of decreased dietary protein on the rat of thyroid hormone secretion and food consumption in rats. "J. Endocr.", 1971. V. 50-N3.-P. 445-450.

110. A new approach to combating iodine deficiency in developing countrier: the controlled release of iodine in water by a silicone elastomer / Fich A., Pichard E., PrazuckT. et al. //Am. J. Public Health. 1993. - Vol. 83. - P. 540-545.

111. Bach J.F., Dardenne N. Antigen recognition by T-limphocytes. II Similar effects of azatioprin, antilimphocyte serum and-O-serum on rosette-forming limphocytes in normal and neonatally thymectomized mice // Cell. Immunol. -1972,-V.3.-P. 11-21.

112. Bodana A.R„ Rao D.R. // J. Dairy Sci. 1990. V. 73,- № 12. -P. 33793384.

113. Barnes J., Borrows E.T. The synthesis of thyroxin and related substances // J. Chem. Soc. 1950. - P. 2824-2826.

114. Braverman L.E., Ingbar S.H. Changes in thyroid function during adaptation to large doses of iodide // J. Clin. Invest. 1963. - Vol. 42. - P. 12161231.

115. Bread iodization for micronutrient supplementation in iodine deficient region of Russia / Gerasimov G., Nazarov A., Maiorova N. et al. // Program of the 11-th International Thyroid Congress. Toronto, Ontario. - 1995. - P. 5-40.

116. Britko J., Knorr J. Rat thymus: demonstration of sprcific thyroxine receptors in nuclear extract // Endocrinol. Exp. 1983. - Vol. 17. -№ 1. - P. 3-9.

117. T 113. Cheng C., Nagasava T/ Growth stimulans for bifidobacteria produced bylactobasillus casei. / New strateg. Improv. Hum. Welfare.// World conf. Tokio. -1983.

118. Comsa J. et al. Effect of thymectomy on the endocrine glands of the rats / Comsa J., Phillip E.M., Leonhardt H. // Isr. J. Med. Sci. 1977. - Vol. 13- № 4. - P. 357-362.

119. Comsa J. et al. Hormonal coordination of the immune response / Comsa * J., Leonhardt H., Wekerle H. // Rev. Physiol., Biochem. and Pharmacol. 1982.1. Vol. 92.-P. 115-191.

120. Cornes J.S. Number, size and distribution of Peyer's patches in human small intestine. I. The development of Peyers patches // Gut. 1965. - Vol.6. - P. 230-233.

121. Delandge F. Cassava and thyroid / Gaitan G. Environmental Goitrogenesis // CRC, Boca Raton, 1989. P. 173-194.

122. Ding J.E., Chan-Ching L. Multiple mechanisms of lymphocyte mediated killing // Immunol. Today. 1988. - Vol. 9.-№ 5. - P.140-145.

123. Dunn J.T. et al. Iodized oil in the treatment and prophylaxis of IDD / The prevention and control of iodine deficiency disorders // Dunn J.T., Hetzel B.S. et al-Elsevier, 1987.-P. 127-134.

124. Frieden E. A survey of the essential biochemical elements // Biochemistry of the essential ultratrace elements / Ed. E. Frieden. New-York, London: Plenum Press, 1984.-P. 1-16.

125. Goldin B.R.I I Ann. Rev. Microbiol., 1986. -V. 40. -P. 367-393.

126. Gibson G.R., Beaty E.R., Waney X., Cummins J.H. // Gastroenterology.t 1995. № 4,- V. 108.- P. 975-982.

127. Gagoyan A.A. Brain and the immune system (neurochemical problems). // Neurochemistry, 1998.-V.15 (1). P. 3-11.

128. Gaitan E. Flavonoids and the thyroid // Nutrition.- 1996. № 12. - P. 127129.

129. Gaitan E. Goitrogenesis in food and water // Annu Rev. Nutr. 1990. - № 10.-P. 21-39.

130. Grey H.M. Structurel characteristic of peptides required for theirinteraction with lA/Molecular basis of the immune response / Grey H.M., Sette A., Soren B. // Ann N-Y. Acad. Sei. 1988. -Vol. 546. - P.72-79.

131. Guadano A., deLAPenaE., Gonzales-ColomaA. //Mu-tagenesis. 1999. V. 14. T. 4. P. 415.

132. Hara Y., Asai H. Hakamura K. // Antimutagenesis and Anticarcinogenesis. Mechanisms / Eds Shankel D.M., Hartman Ph.E., Kada T., Hollaender A. N-Y: Plenum Press, 1986. P. 556

133. Hadden J. W. Immunostimulants // Immunol. Today. 1993. - Vol. 14.1. P. 275-280.

134. Handbook of Mutagenicity Test Procedures / Eds Kibey B.J. et. al. 2-nd ed. Elsevier Sei Publ. BV. 1984. P. 95.

135. Hirono I. II CRC Crit. Rev. Toxicol. 1981.- V. 8.- P. 235-277

136. Hosoda M., Hoshimoto M., Morita H. Chiba M., HosonoA. //J. Dairy Sei. 1992. -V. 75. -№4. -P. 976-981.

137. HosonoA., Sagal S., TokitaF. 11 Milchwissenschaft. -1986.-V.41.-P. 142.

138. Hosono A., Sagae S., Tokita F. // Milchwissenschaft. -1986. -V. 41.- № 3. P. 142-144.

139. Hosono A. Kashina T., Kada T. // J. Dairy Sei. 1986. -V. 69. -№ 9. -P. 2237-2242.

140. Hosoda M. Hashimoto H., Morita H., Chiba M., Hosono A.J. Dairy Sei. 1992. -V. 59.- № 4. P. -543-549.

141. Lazarus J.H. Endocrine and metabolic effects of lithium // Plenum, New York, 1986.

142. Lemarchand-Berand F. et al. Triiodthyronine and thyroxine receptors in lymphocytes from normal, hyper- and hypothyroid subjects / Lemarchand-Berand F., Holm A.C., Scazzida B.R. //Acta Endocrinol. 1977. - Vol. 85.-№ 1. - P. 44-45.

143. Matar C., Nadathur S., Bakalinsky A.T. // J. Dairy Sei. -1997. -V. 80. -№ 9,- P. 1965-1970.

144. Miller J.F. The cellular basis of immune response in immunological diseases // Scand. J. Immunol. V.l.-1978.- p.35-54.

145. Monier J.C. et al. Les hormones thymiques / Monier J.C., Anger C., Fabien W. // Arch. Int. Physiol, et Biochim. 1988. - S. 6. - № 3.-P. 2-26.

146. Nunoshiba T., Nishiokal F. Mutation Res.- 1987. -V. 184. -№ 2,- P.99

147. Nishioka H., Nunoshiba T. // Antimutagenesis and Anticarcinogenesis. Mechanisms / Eds Shankel D.M., Hartman Ph.E., Kada T., Hollaender A. N-Y: Plenum Press, 1986. -P.143-151.

148. NovickA., S-.illardL. // Nature. -1952. -V. 170. -№ 4355.- P. 926-927.

149. Neutrophil function in hypothyroid patients / Palbland J., Adamson U., Rosengvist U. et al. // Acta Med. Scand. 1981. - Vol. 210. - P. 287-291.

150. Penninckx MJ., Eiskens M.T. // Adv. Microb. Physiol. 1993. -V. 34. -P. 239-301.

151. Prior WA. I Antimutagenesis and Anticarcinogenesis. Mechanisms / Eds Shankel D.M., Hartman Ph.E., Kada T., Hollaendwer A. N-Y: Plenum Press, 1986.* P. 115-120.

152. Pavonen T. Enhancement of human B-lymphocyte differentiation in vitro by thyroid hormones // Scand. J. Immunol. 1982. - Vol. 15. - № 2. - P. 211-215.

153. Pearce R. Termal denaturation of whey protein // Bulletin of the IDF, 1989.-№ 238.

154. Peyers patches: morphological studies / Faulk W.P., Mc Cormic J.N., Goodman et al. // Cell. Immunology. 1971. - Vol.l.-№4. - P.500-520.

155. Pierpaoli W. Integrated phylogenetic and autogenetic evolution of * neuroendocrine and kentity-defence immune functions // Psychoneuroimmunology.

156. New-York: Academic Press.-1981. P. 575-602.

157. Poupard F., Husain I., Norris R. Biology of the bifidobacteria // Bacteriol. Rev. 1973. -№37.-p. 136.

158. Prevention and treatment of iodine-deficiency goiter by iodination of water supply / Squatrito S., Vegneri R., Runello F. et al. // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1986. - Vol. 63. - P. 368-375.

159. Prosser C.L. Comparative Animal Physiology / Fourth Eddition: In 2 Vol. -USA, Willey-Liss/- 1991.

160. Protein measurement with Folin phenol reagent / Lowry O., Rosebroungh N.J., Fair A.L. et. al.//J. Biol.Chem. 1951.-V. 193, № l.-P. 265.

161. Rossman T.O., Goncharova E.I. //Mutation Res. 1998 -.№ l.-P. 103-106.

162. Silvio De Flora // Mutation Res. 1998. -V. 402,-№ l.-P. 151-158.

163. Shirai T., Sato A., Chida K., Hayakawa H., Akiyama J., Iwata M., Taniguchi M., Reshard K., Hara Y. // Ann Allergy Asthma Immunol. 1997. -V. 79. -№ 1. -P. 65-69.

164. SedlakJ.,LindsayR. //Anal. Bioch. 1968.- V. 25.- P. 192.

165. Sugimura T., Nagao M. // New Horizons in Genetic Toxicology/Ed. HeddleJA. N.Y.: Acad. Press, 1982,- P. 73-88. ^ 166. Stick H.F., Rosin M.P. // Nutr. Toxicol. Aspects of Food Safety/Ed.

166. Friedman M. N-Y: Plenum Press, 1984.- P. 1-29.

167. Sporn M.B., Roberts A.B. // Cancer Res. 1983,- V. 43.- № 7.-P.30343039.

168. Simple technology provides effective IDD control at the village level in Thailand / Suwanik P., Pleehachinda R., Pattanachak C. et al. // IDD Newsletter. -1989. -№ 5.-P. 1-6.

169. Stimulating effect of triiodthyronine on cellmediated immunity / Balazs C., Leevey A., Szabo N., Bako G. // Europ. J. Clin. Pharmacol. 1980. - Vol. 17.- № l.-P. 19-23.

170. Survey on the results of prevention and treatment of endemic goiter with iodized brick tea / Li J., Xin Z., Shu L., Yin B. // IDD Newsletter. 1989. -Vol. 5. -P. 11-12.

171. Tada M., Tada M. //Nature. 1975. V. 255. P. 510.

172. Tanaka R., Mutai M. Improved medium for selective isolation and enumeration of Bifidobacterium // Appl/ Environ. Microbiol. 1980. Vol. - 40. - p. 866-869.

173. The use of iodized sugar as a vehicle for iodine fortification in endemic iodine deficiency / Eltom, M., Elnagar, B., Sulieman, A. et al. // J. Food Sci. Nutr. -1995.-Vol. 46.-P. 283-289.

174. Underwood, E.G. Trace elements in human and animals nutrition. New-York: Acad. Press, 1977. - Vol. 28. - P. 169-170.

175. Use of the plasma iodine assay for diagnosing thyroid disorders / Allain P., Berre S., Krari N. et al. // J. Clin. Pathol. 1993. - Vol. 46, № 5. - P. 453-455.

176. Zhang X.B., Ohta Y. Hosono A. // J. Dairy Sci. 1990.- V. 73,- №10. P. 2702-2710.

177. Wattenberg L.W. // Environmental Carcinogenesis / Eds Emmelot P.,

178. Kriek E. Amsterdam: Elsevier / North-Holland Biomedical Press, 1979.-P. 241-264.

179. Wattenberg L.W. // Cancer Res. 1985. -V. 45. -№ 1. -P. 1-8.

180. В научно-производственной лаборатории ВСГТУ была проведена опытно-промы ни с иная проверка производства и лабораторные испытания иодированного концентрата бифидобактерий «Йодбифивит».

181. Лаборатория по производству бакпрепаратов соответствует требованиям СанПиН "Произволстзо молока и молочных продуктов", что подтверждается санитарно-гигиеническим заключением ЦГСЭН по РБ от 24.07.98 г.

182. Опы1 но-промышленная проверка технологии иодированного бактериального концентр на предусматривает:1. 11олучение активного инокулята бифидобактерий.

183. Приготовление специально подобранной среды для культивирования бифидобактерий.

184. Внесение раствора иодида калия.4. 11олучение иодированного концентрата бифидобактерий и проверка качества.

185. В предлагаемой технологии используется ферментативный способ иодирования, что позволяет получить иодированный пробиотический препарат с содержанием йода 30 мкг/мл п с высоким содержанием жизнеспособных клеток бифидобактерий (1*10п КОЕ/1 см :)

186. Проверка технологического процесса производства иодированного бактериального концентрата «Йодбифивит» показала, что технологические параметры, разработанные в экспериментальных условиях стабильно воспроизводятся в условиях производства.

187. Органолелтические, физико-химические и микробиологические показатели препарата соответс I ну ют требованиям нормативно-технической документации.