автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.04, диссертация на тему:Разработка технологии хондроитинсульфат-белкового комплекса из хрящевых тканей рыб

004601266 На правах рукописи

СОРОКОУМОВ Иван Михайлович

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ХОНДРОИТИНСУЛЬФАТ-БЕЛКОВОГО КОМПЛЕКСА ИЗ ХРЯЩЕВЫХ ТКАНЕЙ РЫБ

Специальность: 05.18.04 - Технология мясных, молочных, рыбных продуктов и холодильных производств

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

2 2 АПР 2010

Москва-2010

004601266

Работа выполнена в лаборатории биохимии и технологии рыб, беспозвоноч ных и водорослей ФГУП «Всероссийский научно-исследовательский институт рыб ного хозяйства и океанографии» (ФГУП «ВНИРО»).

Научный руководитель: доктор технических наук, доцент

Немцев Сергей Владимирович

Официальные оппоненты: доктор технических наук, доцент

Боева Нэля Петровна

доктор химических наук, профессор Варламов Валерий Петрович

Ведущая организация: ОАО «Гипрорыбфлот»

Защита состоится «/#» мая 2010 года в // ч ¿?£> мин. на заседании диссе тационного совета Д 307.004.03 при ФГУП «Всероссийский научн исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии» Федерально агентства по рыболовству по адресу: 107140, г Москва, ул. Верхняя Красносельска д. 17.

Факс: (499)264-91-87, e-mail: fishing@vniro.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУП «ВНИРО».

Автореферат разослан ар апреля 2010 года

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат технических наук -^¡¡Г-—В.А. Татарников

Актуальность.

Рыбная отрасль Российской Федерации ставит такие задачи, как разработка технологий глубокой переработки гидробионтов с целью получения пищевых продуктов, биологически активных веществ нового поколения и кормовых продуктов из недоиспользуемых водных биологических ресурсов.

Исследования по комплексной переработке гидробионтов, поиску и выделению биологически активных веществ постоянно ведутся отечественными и зарубежными учеными: Албулов А.И., Боева Н.П., Варламов В.П., Мукатова М.Д., Немцев С.В., Пивненко Т.Н., Подкорытова A.B., Сафронова Т.М., Слуцкая Т.Н., Сухо-верхова Г.Ю., Эпштейн JI.M., Abdel F., Apinya A., Cho J., Larger L., Lee A., Prudden J., Folkman J., Sittiwat L. и др.

Для получения биологически активных продуктов перспективными представляются костно-хрящевые ткани, являющиеся отходами при разделке рыбы и в настоящее время используемые на получение кормовой муки. Аргументом в пользу привлечения рыбных отходов для получения биологически активных веществ является их значительный объем и высокое содержание биологически активных веществ, особенно хондроитинсульфата в отходах хрящевых рыб. Хондроитинсульфат - это высокомолекулярный полисахарид, принимающий ключевое участие в построении основного вещества костной и хрящевой ткани, а также тормозящее дегенеративные процессы последней и имеющий большое значение при разработке БАД хондропротекторного действия.

В связи с этим разработка технологии биоактивных препаратов из вторичного рыбного сырья, содержащего хондроитинсульфат в биокомплексе с сопутствующими природными компонентами (коллаген, аминокислоты, гексозамины, минеральные вещества и др.), является актуальной проблемой.

Разработанные технологии и выпуск продукции на их основе будут способствовать решению важных социальных задач, направленных на улучшение здоровья людей и животных.

Цель диссертационной работы: Разработка безотходной технологии переработки отходов от разделки рыб с высоким содержанием хрящевой ткани для полу-

чения хондритинсульфат-белкового комплекса.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Исследовать химический состав хрящевой ткани акулы катрана, бестера аква-культуры, ската звездчатого и отходов их переработки.

2. Обосновать рациональные параметры ферментативного гидролиза хрящевой ткани с применением коллагеназы и протосубтилина и рассчитать математическую модель процесса ферментолиза.

3. Разработать технологический процесс получения хондроитинсульфат-белкового комплекса.

4. Исследовать состав и качество хондроитинсульфат-белкового комплекса для установления возможности его применения в качестве компонента БАД;

5. Разработать рецептуру и технологию получения БАД к пище.

6. Исследовать возможность применения хондроитинсульфат-белкового комплекса в качестве компонента пленок ранозаживляющего действия.

7. Разработать способ получения и применения пленок ранозаживляющего действия.

8. Разработать проекты технической документации (ТУ и ТИ) на хондроитин-сульфат-белковый комплекс.

9. Рассчитать экономическую эффективность от внедрения разработанной технологии получения БАД.

Научная новизна работы.

1. Впервые применен способ обезжиривания хрящевой ткани в процессе получения хондроитинсульфат-белкового комплекса термообработкой в воде с поверхностно-активным веществом.

2. Обоснован способ снижения содержания высокомолекулярного белка в хонд-роитинсульфат-белковом комплексе методом его осаждения хитозаном.

3. Впервые созданы хитозан-хондроитинсульфат-белковые ранозаживляющие пленки для лечения кожных поражений культивируемых рыб.

Практическая значимость работы.

Определены перспективные источники сырья для получения хондроитинсульфат-белкового комплекса. Разработана технология ферментативных гидролизатов из отходов переработки хрящевых рыб. Результаты экспериментальных исследований апробированы в производственных условиях ЗАО «Биопрогресс» Щелковского района МО, пос. Биокомбинат. Разработана технология изготовления пленок на основе природного аминополисахарида хитозана и хондроитинсульфат-белкового комплекса. Разработан и апробирован в условиях аквакультуры способ лечения кожных поражений рыб. Разработаны проекты технической документации на хондроитинсуль-фат-белковый комплекс из хрящевой ткани рыб (ТУ № 9289-063-00472124-09 и ТИ) и на биологически активную добавку к пище «Хондроитинсульфат-белковый комплекс» (ТУ № 9283-117-00472124-10 и ТИ). Новизна технического решения подтверждена патентом РФ № 2361429.

На защиту выносятся следующие положения:

• Принцип выбора сырья (отходы переработки акул, скатов и осетровых рыб) по химическому составу, определяющему направленность технологического процесса получения хонроитинсульфат-белкового комплекса с заданным составом и свойствами.

• Технология хонроитинсульфат-белкового комплекса с обоснованием рациональных режимов и параметров ферментативного гидролиза хрящевых тканей рыб.

• Полифункциональность хондроитинсульфат-белкового комплекса, содержащего биологически активные вещества гексозамины, хондроитинсульфаты, коллаген, неколлагеновые белки, микроэлементы и возможность его использования в качестве компонента БАД и ранозаживляющих пленок.

Апробация работы.

Основные результаты диссертационной работы были представлены на первой международной научно-практической конференции «Повышение эффективности использования водных биологических ресурсов» (Москва, 2006); научно-практическом форуме «Здоровое питание - здоровье нации» (Москва, 2007); первой международной научно-практической конференции «Биотехнологические процессы

и продукты переработки биоресурсов водных и наземных экосистем» (Астрахань, 2008); девятой международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана» (Ставрополь, 2008); второй международной научно-практической конференции «Повышение эффективности использования водных биологических ресурсов» (Москва, 2008); Всероссийской научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы развития пищевой промышленности и общественного питания» (Челябинск, 2008); The XV seminar and workshop «New aspects of the chemistry and application of chitin and its derivatives» (Poland, Torun, 2009).

Публикации. Основные результаты диссертации изложены в 9 печатных работах, в том числе, 3 статьи в журнале перечня ВАК РФ, 6 печатных трудов в материалах конференций, получен 1 патент, оформлена 1 заявка на изобретение.

Структура и объем работы.

Диссертация изложена на 113 страницах, включает введение, обзор литературы, методическую часть, результаты исследований и их обсуждение, практическую реализацию результатов исследований, выводы и список литературы, содержащий 173 источника (в том числе 60 зарубежных). Работа содержит 23 таблицы, 22 рисунка и 8 приложений на 52 страницах.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность, научная новизна и практическая значимость работы.

В первой главе «Обзор литературы» проведен анализ отечественной и иностранной литературы о способах извлечения и применения биологически активных веществ хрящевой ткани гидробионтов и сельскохозяйственных животных. Проанализирован состав хрящевой ткани гидробионтов и отходов их переработки. Изучены методы применения аминополисахаридов из гидробионтов и современные БАД хондропротекторного действия. Установлено, что отходы от разделки хрящевых рыб содержат значительное количество хрящевой ткани и биологически активных веществ и могут быть использованы в качестве перспективного источника для получения биопрепаратов и различных материалов, обладающих хондропротекторным и

противовоспалительным действием. Сформулированы цели и задачи исследования.

Во второй главе «Материалы и методы исследований» представлена программно-целевая модель исследований (рис. 1), приведены материалы и методы исследований.

Материалы исследований. Для выделения хрящевой ткани использовали головы и плавники хрящевых рыб: акулы катран Squalus acanthias, ската звездчатого Raja clavaía, бестера Huso buso acipenser ruíbenus, а также русского осетра Acipenser guldenstadti, заготовленные на месте промысла и в экспериментальном рыбоводческом комплексе ВНИРО, хранившиеся при температуре -18 °С до 6 месяцев. При заготовке хрящевой ткани головы акул, скатов и осетровых рыб рубили на куски предельной массой 0,1 кг, удаляли жаберные крышки и жабры, срезали кожный покров и чешую; удаляли глаза и содержимое мозговой капсулы, отделяя хрящевую ткань. Позвоночные кости и плавники рубили на куски предельной массой 0,1 кг и зачищали хрящевую ткань от прирезей мяса.

Для выделения высокомолекулярных фракций белка из гидролизата и получения пленок использовали хитозаны: хитозан пищевой (ТУ 9289-067-00472124-03), хитозан пищевой низкомолекулярный (ТУ 9289-002-11418234-99), а также хитозаны, полученные в лаборатории ВНИРО из панцирь содержащих отходов краба и омара по ТИ к ТУ 9289-067-00472124-03.

Для проведения ферментативного гидролиза использовали ферментные препараты: коллагеназа из гепатопанкреаса камчатского краба (ТУ 9281-004-1173412600), протосубтилин Г20Х (ТУ 64-13-16-88).

В качестве стандартов для калибровки спектрофотометра APEL (Япония) использовали фармпрепараты: «Хонсурид» (Россия), «Глюкозамин» (Россия).

Методики. Общую протеолитическую активность ферментов определяли по ГОСТ 20264.2-88, коллагенолитическую - по методу, описанному Пивненко Т.Н. (1998). Аминокислотный состав определяли на жидкостном хроматографе модель L-8800 фирмы «Hitachi» (Япония), анализ проводили в стандартном режиме анализа белковых гидролизатов. Накопление аминного азота - по ГОСТ 7636-85. Содержание общего и небелкового азота определяли по Кьельдалю на автоанализаторе

Kjeltec Foss - 2300 (Швеция), содержание жира по методу Сокслета в автоматическом экстракторе Сокслета фирмы VELP SER 148/6 (Италия). Определение влаги и минеральных веществ по ГОСТ 7636-85, содержание хондроитинсульфата- спек-трофотометрически, согласно методике фармакопейной статьи № 42-1286-99. Молекулярную массу хитозана определяли при помощи капиллярного вискозиметра Уб-белоде и рассчитывали по уравнению Марка-Хаувинка. Деформационно-прочностные характеристики пленок определяли на универсальной разрывной машине AGS-10 KNG «Hmodzu» (Япония) и атомно-силовом микроскопе фирмы НТ-МДТ на базе платформы «ИНТЕГРА Прима».

Рис. 1. Программно-целевая модель исследований

Биологические испытания раневых покрытий на основе смеси хитозана и хон-дроитинсульфат-белкового комплекса проводились на базе экспериментального рыбоводческого комплекса ВНИРО, Московская область, г. Дзержинский.

Показатели безопасности хондроитинсульфат-белкового комплекса определяли по токсичности и микробиологическим показателям, которые анализировали согласно существующим ГОСТам и в соответствии с СанПиН 2.3.2.1078-01.

Моделирование и оптимизацию технологических процессов осуществляли методом планирования эксперимента с применением ортогонального центрального композиционного плана (ОЦКП) второго порядка для двух факторов.

При статистической обработке данных результатов исследований и построения графических зависимостей использовали программы MathCAD 200Ii Professional, Origin 6.1 и Microsoft Office (Word, Excel).

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 3.1 Изучение техно-химических характеристик сырья для получения хондроитинсульфат-белкового комплекса

Проведена оценка выхода хрящевых и костно-хрящевых отходов, образующихся при разделке гидробионтов. Отходы в виде плавников для хрящевых рыб составляют до 6,1%, осетровых - 4,0%, лососевых - 3,3%; на головы для хрящевых рыб приходится 29,1%, осетровых - 22,3%, лососевых - 18,7%. Установленный нами выход собственно хрящевой ткани для хрящевых рыб составляет до 8,7%, осетровых - до 10,4%, лососевых - до 4,2%.

Для получения биологически активных веществ из отходов переработки гидробионтов ключевое значение имеет содержание в них непосредственно хрящевой ткани, а также ее соотношение с другими тканями, которые могут служить дополнительным источником биологически активных веществ и оказывать существенное воздействие на технологический процесс их получения. Исследования массового состава отходов переработки рыбы, содержащих хрящевую ткань, показали (табл. 1), что ее содержание в некоторых видах отходов доходит до 50%, содержание кожи достигает 40%, это является положительным фактором, так как кожа содержит

большое количество коллагеииодобных белков, что способствует повышению содержания активных компонентов в конечном продукте - БАД.

Ввиду большого содержания хрящевой ткани в отходах переработки рыб, целесообразно использовать их целиком, что значительно упрощает технологический процесс и приводит к получению полноценной композиции биологически активных веществ.

Одним из критериев оценки качества сырья для получения биологически активных веществ было содержание гексозаминов. Установлено, что наибольшее содержание гексозаминов характерно для хрящевой ткани акулы катран, ската звездчатого, бестера и составляет 2,5 - 2,8 % от массы хрящевой ткани и более низкое (порядка 1%) - в костно-хрящевой ткани лососевых рыб.

Таблица 1

Массовый состав отходов содержащих хрящевую ткань, % от массы сырья

Объект Вид отходов Кожа Жабры Мясо Хрящи

Катран Голова 16,1-24,2 12,1-16,3 24,5-31,2 21,2-29,2

Плавники Спинной 33,2-49,2 - 20,1-30,2 11,5-18,2

Грудные, анальный 29,1-47,1 - 25,5-40,6 18,5-27,0

Хвостовой плавник - - - 18,3-23,7

Осетр Голова 16,5-24,1 8,2-13,1 7,6-12,3 25,9-33,1

Скат Голова 17,0-25,1 8,5-12,4 9,1-14,7 20,1-27,0

Плавники (крылья) 35,0-47,2 - 5,1-8,6 40,3-50,3

Лосось Голова 19,3-25,6 10,9-14,7 28,3-38,1 4,3-4,7

Из полученных данных сделан вывод, что наиболее перспективным сырьем для выделения биологически активных веществ (хондроитинсульфата, гиалуроно-вой кислоты, аминокислот и др.) являются головы и плавники акулы катран, ската звездчатого и головы бестера, содержание хрящевой ткани в них, в среднем, в 4-5 раз больше, чем в лососевых рыбах.

3.2. Разработка технологии БАД «Хондроитинсульфат-белковый комплекс»

В хрящевой ткани гексозамины содержатся в виде слаборастворимых проте-огликановых комплексов. Следовательно, для получения комплексного препарата из хрящевых тканей гидробионтов необходимо разработать технологию, которая по-

зволяла бы максимально извлечь естественный комплекс компонентов хрящевой ткани, перевести их максимальное количество в растворимое состояние и сохранить активность.

Для получения более качественного продукта и предотвращения его порчи необходимо удалить жир из исходного сырья, так как его содержание в некоторых видах отходов доходит до 15%. Для удаления жира нами были выбраны методы экстракции растворителями и варка в воде с присутствием поверхностно-активного вещества (ПАВ).

Результаты по эффективности обезжиривания отходов от разделки хрящевых рыб и хрящевой ткани различными способами представлены в таблице 2.

Таблица 2

Содержание липидов в хрящевой ткани до и после обезжиривания, % к общей массе

сырья

Сырье До обезжиривания После обезжиривания

спирт этиловый спирт изо-пропиловый варка варка с ПАВ

Осетр 8,5 3,5 2,7 2,1 1,5

Акула 2,5 1,4 1,1 0,9 0,4

Из приведенных данных видно, что наиболее эффективно проводить обезжиривание хрящевой ткани рыб в процессе варки в воде при температуре 100°С и продолжительности 5 мин с добавлением 1-2% ПАВ, содержание жира при этом снижается до 1,5 - 0,5 %. Данный способ обезжиривания не требует применения химических реактивов, которые необходимо отправлять на регенерацию, а также использования специального оборудования. При этом образуется побочный продукт в виде бульона, который рекомендовано направлять на концентрирование и сушку для получения кормового концентрата белка и микро-, макроэлементов.

Для деструкции хрящевой ткани нами были выбраны два способа гидролиза -щелочной и ферментативный. В ходе опытов по деструкции хрящевой ткани при помощи ЫаОН с конц. 1 - 7% установлено, что выход гидролизата растет с увеличением концентрации щелочи. При использовании щелочей с концентрацией больше 3% происходит деструкция активных компонентов и уменьшение содержания хонд-

роитинсульфата (ХС), что отрицательно сказывается на качестве конечного продукта. Однако, повышение температуры реакции гидролиза до 50°С не оказывает отрицательного воздействия на выход хондроитинсульфата. Таким образом, продолжительность щелочного гидролиза хрящевой ткани в течение 4 ч при температуре 50°С и концентрации ЫаОН 3% являются наиболее предпочтительными. Серьезным недостатком щелочного гидролиза является образование большого количества соли (от 10 до 30%), образующейся при нейтрализации гидролизата и применение в связи с этим диализа.

Поэтому нами были разработаны рациональные параметры ферментативного гидролиза хрящевой ткани.

Ферментативный гидролиз приводит к дезинтеграции структуры хрящевой ткани гидробионтов за счет разрушения связей между белками и углеводами, при этом сохраняется структура биологически активных компонентов и их противовоспалительная активность. Поскольку основным белком хрящевой ткани является коллаген II типа, нами были выбраны два фермента: коллагеназа из гепатопанкреаса камчатского краба, так как хорошо известна его активность по отношению к коллагену, и протосубтилин Г20Х из-за его широкого применения, доступности и дешевизны. Мы проследили влияние предобработки хрящевой ткани путем варки с целью удаления избыточного жира на процесс гидролиза. В таблице 3 представлены данные о накоплении аминного азота в процессе гидролиза хрящевой ткани акулы катран до и после термообработки.

Таблица 3

Накопление аминного азота в ходе гидролиза в зависимости от типа обработки,

мг/100г

Объект Фермент

Коллагеназа Протосубтилин

Хрящевая ткань 349 150

Хрящевая ткань после термообработки 497 204

Из таблицы видно, что после термообработки хрящевая ткань подвергается более глубокому гидролизу по сравнению с исходной. Накопление продуктов гидролиза при ферментолизе хрящевой ткани после термообработки увеличивается в

1,5 раза из-за увеличения доступности белков для гидролиза.

Оценку эффективности гидролиза хрящевой ткани определяли по накоплению свободного аминного азота в гидролизатах (рис. 2).

Продолжительность гидролиза, ч Продолжительность гидролиза, ч

а б

Рис. 2. Влияние продолжительности гидролиза и концентрации ферментных препаратов на уровень накопления аминного азота в ходе гидролиза: хрящевая ткань хрящевых рыб (акулы катран, ската звездчатого) коллагеназой -(а), протосубтилнном - (б)

Установлено, что накопление аминного азота в процессе гидролиза хрящевой

ткани рыб прекращается спустя 8 ч. Определено, что степень гидролиза зависит от субстратной специфичности ферментного препарата. При гидролизе коллагеназой степень гидролиза в 2 -2,5 раза выше, чем при использовании протосубтилина.

Установлены и обоснованы рациональные параметры ферментативного гидролиза хрящевой ткани рыб, позволяющие получить выход сухого гидролизата — 10%: фермент коллагеназа (активность 773 ЕД/мг) - концентрация 0,2% к массе суспензии; время обезжиривания с 1%-ным ПАВ - 8 мин; рН - 7,2; температура - 42 °С; время - 8ч.

Установление оптимальных параметров процесса гидролиза хрящевой ткани бестера, основываясь на ранее полученных данных для хрящевых рыб (акулы катран, ската звездчатого), осуществляли путем планирования эксперимента с применением ОЦКП. В качестве частных факторов, подлежащих варьированию и оптимизации, использовали продолжительность ферментации т, (ч) и количество фермента С, (% массы суспензии). Параметром оптимизации математической модели была выбрана совокупная безразмерная характеристика у, объединяющая четыре различ-

ных по физическому смыслу частных отклика - выход продукта (Мпр) содержание ХС {Мхе), количество образующегося аминного азота в полуфабрикатах после ферментации (А/дг).

Реализация плана эксперимента и обработка его данных позволили получить уравнение, адекватно связывающее качество полуфабриката с изменяемыми факторами: у=0,6190+0,0593х|+0,0603х2-0,0107х1х2-0,0409х12-0,0318х22

Графическая интерпретация полученной модели (рис. 3) наглядно отражает влияние изменяемых факторов в интервалах их варьирования в области искомого оптимума. Оптимальные значения факторов: продолжительность ферментации - 8,9 ч; количество фермента - 0,28 % к массе суспензии.

Гидролизаты из хрящевой ткани характеризуются большим разнообразием веществ с различной молекулярной массой. Из литературных данных известно, что содержание высокомолекулярных белковых фракций может доходить до 30 %, но ввиду того, что в состав полученных гидролизатов хрящевой ткани входит в основном коллаген, то они не представляют высокой биологической ценности, так как в организме человека отсутствует фермент, гидролизующий их. Для повышения содержания гексозаминов в ферментативном гидролизате хрящевой ткани белок осаждали при рН 3-3,5 с помощью соляной кислоты с последующим отделением белкового осадка. Для ускорения процесса осаждения белка в качестве флокулянта использовали высокомолекулярный хитозан со степенью деацетилирования 85%.

Из данных рисунка 4 видно, что добавление 1%-го раствора хитозана в 0,2 М растворе соляной кислоты в количестве 10% от объема гидролизата является рациональным, так как при дальнейшем увеличении концентрации хитозана в гидролизате количество осажденного белка практически не увеличивается. Было отмечено, что

Рис. 3. Графическое представление математической модели исследуемого процесса ферментного гидролиза хрящевой ткани бестера

при осаждении хитозаном белок выпадает в виде крупных хлопьев. Его осаждение происходит в 2 - 2,5 раза быстрее, чем осаждение белка без хитозана. Полученный осадок после отделения может быть использован в качестве кормовой добавки.

После осаждения белка ферментативный гидролизат отправляли на распылительную или лиофильную сушку и получали сухой хондроитинсульфат-белковый комплекс (ХНБК).

3.2.1 Изучение состава хондроитинсульфат-белкового комплекса из хрящевой

ткани рыб

Хондроитинсульфат-белковый комплекс из хрящевой ткани рыб характеризуется по содержанию гексозаминов, хондроитинсульфатов, гиапуроновой кислоты, коллагена и неколлагеновых белков, аминокислот и минеральных веществ.

В таблице 5 представлены основные показатели химического состава ХНБК из хрящевой ткани рыб.

Таблица 5

Состав хондроитинсульфат-белкового комплекса из хрящевой ткани рыб, % от

воздушно-сухого гидролизата

Компоненты Хондроитинсульфат-белковый комплекс из:

Катран Скат Осетр

Гексозамины 6,1 6,2 6,8

Хондроитинсульфаты 8,5 8,7 8,1

Коллаген 27,1 26,2 25,6

Неколлагеновые белки 22,9 23,1 25,3

Сумма свободных аминокислот 18,8 19.0 17,0

Минеральные вещества 5,5 5,4 6,1

Вода 8,8 9,3 9,2

Данные таблицы 5 показывают, что хондроитинсульфат-белковый комплекс содержит значительное количество хондроитинсульфатов до 8,7% и гексозаминов-до 6,8% и может быть использован в качестве источника восполнения недостатка в

Концентрация хитозана, %

Рис. 4. Зависимость количества выделенного белка от количества хитозана в ферментном гидролизате хряща акулы

рационе биологически активных веществ (аминосахаров, коллагена, аминокислот), в форме БАД к пище, компонента кормов, а также при составлении композитов на его основе.

Был исследован аминокислотный состав хрящевой ткани катрана и хондро-тинсульфат-белкового комплекса из хрящевой ткани катрана. Аминокислотный состав хондроитинсульфат-белкового комплекса аналогичен хрящевой ткани, что указывает на сохранение природной сбалансированности и на гидролиз всех белков с одинаковой интенсивностью. В гидролизатах содержатся все заменимые и незаменимые аминокислоты. Сумма незаменимых аминокислот составляет 34 г/100г сухого гидролизата. В ХНБК содержание аммиака в 3 раза выше, чем в хрящевой ткани, что связано с большим содержанием аминополисахаридов в гидролизате.

Содержание минеральных веществ в исследуемом хондроитинсульфат-белковом комплексе из хрящевой ткани гидробионтов не превышает 5 - 8% и отличается природной сбалансированностью. Содержание тяжелых металлов в ХНБК из хрящевой ткани исследованных видов гидробионтов не превышает предельно допустимые концентрации и соответствует нормам СанПиН № 2.3.2.1078-01.

На основании проведенных исследований разработана технология хондрои-тинсульфат-белкового комплекса из отходов разделки хрящевых рыб и хрящевой ткани рыб, предлагаемых в качестве основы БАД, содержащей углеводные и белковые компоненты хрящевой ткани, обладающей противовоспалительной активностью и способствующей регенерации хрящевой ткани. Схема технологического процесса получения хондроитинсульфат-белкового комплекса представлена на рисунке 5.

В результате сравнительных исследований состава ХНБК из хрящевой ткани гидробионтов показано, что хондроитинсульфат-белковый комплекс, полученный по разработанному нами способу, является многокомпонентным и содержит такие биологически активные вещества как гексозамины, хондроитинсульфаты, коллаген, неколлагеновые белки, микроэлементы, а также аминокислоты.

На основе хондроитинсульфат-белкового комплекса была разработана рецептура (табл. 6) и технология БАД «ХНБК» (рис. 6).

Рис. 5. Технологическая схема получения хондроитинсульфат-белкового комплекса

Аскорбиновая кислота используется для предотвращения окислительной порчи. В комплексе с солями кальция, например глюконатом кальция и хитозаном с молекулярной массой до 49 кДа, хондроитинсульфат стимулирует срастание костей при различного рода травмах и переломах, устраняет воспалительные заболевания суставов, способствует регенерации хрящевой ткани, обеспечивает снижение уровня холестерина в крови.

Разработанная нами технология БАД «ХНБК» и ее рецептурный состав запатентованы (патент РФ №2361429).

Подготовка и введение компонентов

Рис. 6. Технологическая схема получения БАД «Хондроитинсульфат-белковый комплекс»

3.3. Разработка композиций на основе аминополисахаридов из гидробионтов

Болезни, вызываемые миксобактериями, широко распространены среди пресноводных и морских рыб. Вспышке заболеваний кожных покровов рыб способствуют высокие плотности посадки, низкая проточность воды, а также травмы рыб. Для профилактики кожных болезней рыб используют различные ванны и применяют антибиотики, красители, фосфорорганические соединения, растворы солей, однако эти процедуры сложны и могут вызывать побочные действия, например ожоги жабер.

Нами разработаны композиции для изготовления пленок, состоящие из хито-зана различной молекулярной массы и ХНБК, взятых в соотношении 70-80% к 2030% соответственно, и крахмала. Характеристика пленок на основе хитозана и хон-дроитинсульфат-белкового комплекса (ХитХНБК) представляет интерес с предполагаемым использованием их в качестве пленочных раневых покрытий. Толщина пленок составляет 50-60 мкм. Пленки обладают достаточной прочностью (ст ~ 19 МПа) и хорошей эластичностью (е ~ 60%) для использования их в качестве раневых покрытий.

Поверхность пленок ХитХНБК была исследована методом атомно-силовой микроскопии. Исследования показали, что для хитозановой пленки характерна

очень гладкая поверхность без наличия четкой структуры при данном разрешении. Поверхность пленок ХитХНБК характеризуется наличием значительно более крупных структурных элементов, что наглядно видно на трехмерном изображении. Этим и объясняется лучшая адгезионная способность пленок.

При исследовании поверхности сканирующей зондовой микроскопией появляется возможность оценить ее жесткость по силе прижатия зонда к исследуемой поверхности (глубине его погружения) и высоте рефлекса на получаемом трехмерном изображении. Чем светлее изображение поверхности и больше высота пиков, выраженная в единицах силы тока, тем большей жесткостью обладает поверхность. При сравнении данных рисунка 7 видно, что пленки ХитХНБК (б) значительно менее жесткие, чем пленки из ацетата хитозана (а). Пленки с меньшей жесткостью лучше прилегают к поверхности кожи рыбы, увеличивая тем самым площадь контакта пленки с пораженным участком.

а б

Рис. 7. Характеристика жесткости поверхности пленок из ацетата хитозана (а) и

ХитХНБК (б)

Ранозаживляющая способность пленок ХитХНБК была исследована на кожных поражениях осетров, содержащихся в условиях аквакультуры. На рисунке 8 I представлены фотографии кожных поражений рыб до и после использования пленок.

пленки ХитХНБК

Из рисунка 8 видно, что при нанесении пленок достигается положительный эффект. Рана затягивается, опухоли спадают, на месте пораженной кожи начинается активная регенерация новой кожи. Данный способ легкоосуществим, не требует , применения агрессивных лекарственных средств, дезинфицирующих ванн и сложного оборудования.

ГЛАВА 4. ПРАКТИЧЕСКАЯ РЕАЛИЗАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

Полученные экспериментальные данные положены в основу следующей разработанной нормативно-технической документации:

- ТУ 9289-063-00472124-09 и ТИ Хондроитинсульфат-белковый комплекс

из хрящевой ткани рыб; I

- ТУ 9283-117-00472124-10 и ТИ Биологически активная добавка к пище «Хондроитинсульфат-белковый комплекс»;

Разработанные ТУ 9289-063-00472124-09 и ТИ были апробированы на опытном участке ЗАО «Биопрогресс». '

На основе хондроитинсульфат-белкового комплекса разработана рецептура БАД к пище «ХНБК», обладающая повышенной эффективностью в отношении профилактики ревматоидных заболеваний. Новизна технического решения подтверждена патентом РФ №2361429.

Разработана технология получения ранозаживляющих пленок ХитХНБК на основе хитозана и хондроитинсульфат-белкового комплекса, лечебный эффект которых апробирован при поражении кожных покровов у осетровых рыб на базе Экспериментальной модульной установки для выращивания осетровых ФГУП «ВНИ-РО». Пленки ХитХНБК рекомендованы в качестве ранозаживляющих покрытий для лечения рыб в аквакультуре. На данное техническое решение подана заявка № 2010104510 (10.02.2010) на патент РФ «Способ получения раневого покрытия для рыб, выращиваемых в искусственных условиях».

Произведен расчет технико-экономических показателей производства БАД «ХНБК», который показал, что рентабельность производства может составить 40 % при сроке окупаемости инвестиционных средств в течение 1 года.

ВЫВОДЫ

1. Обоснована и разработана технология безотходной переработки отходов от разделки рыб (акулы катран, ската звездчатого, бестера) с высоким содержанием хрящевой ткани для получения хондроитинсульфат-белкового комплекса и БАД на его основе.

2. На основании совокупных данных: массовой доли хрящевой ткани (4 - 10 % к общей массе сырья), содержания гексозаминов (2,3 - 2,8 г/100 г сырья) - выделены наиболее перспективные виды сырья (акула катран, скат звездчатый, бестер) для получения хондроитинсульфат-белкового комплекса.

3. Обоснованы рациональные параметры деполимеризации хрящевой ткани рыб, включающие основные стадии: варку в течение 5 мин с 1% ПАВ при 100 °С для эффективного удаления жировой фракции, последующий ферментативный гидролиз коллагеназой и протосубтилином Г20Х, при концентрации фермента 0,2% и 0,5%, соответственно и продолжительности 8 ч.

4. Процесс ферментации хрящевой ткани описан математической моделью, адек-

ватно связывающей технологические параметры и качество продукта на основе гид-ролизата хрящевой ткани с определяющими факторами ее биодеструкции. Решение математической модели позволило установить влияние и оптимальные значения продолжительности процесса и концентрации фермента (8,9 ч и 0,28 % к массе суспензии).

5. Установлены рациональные параметры процесса осаждения высокомолекулярных фракций белка 1%-ным раствором хитозана в 0,2 М НС1 в количестве 10% к суспензии.

6. Установлено, что состав хондроитинсульфат-белкового комплекса, содержащий хондроитинсульфаты (4 - 10 %), коллаген (16-30 %), а также свободные аминокислоты (10 - 20 %) соответствует требованиям к Б АД хондропротекторного действия.

7. Разработана рецептура и технология получения БАД к пище «ХНБК», предусматривающая последовательное смешивание компонентов, входящих в состав БАД, что обеспечивает получение функционального препарата хондропротекторного действия, содержащего хондроитинсульфат-белковый комплекс (84 %), хитозан (10 %), глюконат кальция (4 %) и аскорбиновую кислоту (2 %).

8. Обоснована и разработана технология получения нового ранозаживляющего средства (покрытия) в виде пленки для лечения рыб на основе ХНБК и хитозана, взятых в соотношении 70-80 % к 20-30 %, соответственно. Определены механо-прочностные и поверхностные свойства пленок: прочность 19 МПа, разрывное удлинение 61 %.

9. Проведены биологические испытания ранозаживляющего средства ХитХНБК на бестерах аквакультуры, показавшие 100 % эффективность при лечении кожных поражений различной этиологии.

10. Разработан проект технической документации (ТУ №9289-063-00472124-09 и ТИ) на «Хондроитинсульфат-белковый комплекс из хрящевой ткани рыб».

11. Расчет экономической эффективности технологии получения хондроитинсульфат-белкового комплекса и БАД «ХНБК» показал, что рентабельность производства может составить 40 % при сроке окупаемости инвестиционных средств в течение 1 года.

Основное содержание диссертации опубликовано в следующих работах: Публикации в изданиях перечня ВАК РФ:

1. Сорокоумов И.М., Ежова Е.А., Быкова В.М., Немцев C.B., Шмидт Е.А., Албу-лов А.И. Хондроитинсульфат из хрящей рыб // РЫБПРОМ. - 2007. - № 3. - С. 18 -20.

2. Немцев C.B., Ковачева Н.П., Загорская Д.С., Сорокоумов И.М., Панов К.Н. Панцирь акклиматизированного камчатского краба в разных линочных стадиях, как источник получения хитина и белковых продуктов // Рыбное хозяйство. - 2009. -№2. -С. 107-111.

3. Сорокоумов И.М., Строкова Н.Г., [Немцев OB] Хондроитинсульфат-белковый комплекс из хрящевой ткани рыб и ранозаживляющие покрытия на его основе // РЫБПРОМ.-2010.-№ 1.-С. 72-75.

Материалы конференций:

4. Быкова В.М., Ежова Е.А., Сорокоумов И.М., Немцев C.B. Перспективы использования мелких акул // Материалы первой международной научно-практической конференции «Повышение эффективности использования водных биологических ресурсов». -М.: ВНИРО, 2006. - С. 176 - 178.

5. Немцев C.B., Быкова В.М., Ежова Е.А., Сорокоумов И.М. Биологически активные добавки к пище на основе аминополисахаридов из водных биоресурсов // Материалы научно-практического форума «Здоровое питание -здоровье нации» - М.: 2007.-Т. 2.-Ч. 1.-С. 107-109.

6. Немцев C.B., Сорокоумов И.М., Быкова В.М. Хондроитинсульфат из хрящей рыб. Перспективы получения биологически активных аминополисахаридов из объектов отечественного промысла // Материалы первой международной научно-практической конференции «Биотехнологические процессы и продукты переработки биоресурсов водных и наземных экосистем». - Астрахань: АГТУ, 2008.- С. 111115.

7. Сорокоумов И.М., Строкова Н.Г., Немцев C.B. Современное состояние разработок пищевых пленок и покрытий на основе хитозана // Материалы девятой международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хи-

тозана».- M.: ВНИРО, 2008,- С.230-233.

8. Сорокоумов И.М., Немцев C.B., Семикова Н.В., Звездова Т.А., Албулов А.И., Шмидт Е.В. Перспективы получения хондроитинсульфат-белкового комплекса из хрящей рыб и БАД на его основе // Материалы второй международной научно-практической конференции «Повышение эффективности использования водных биологических ресурсов». - М.: ВНИРО, 2008. - С. 279-281.

9. Немцев C.B., Быкова В.М., Сорокоумов И.М., Панов К.Н. Биологически активные добавки к пище на основе аминополисахаридов из водных биоресурсов // Материалы всероссийской научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы развития пищевой промышленности и общественного питания»." Челябинск: Издательство Южно-Уральского ГТУ, 2008.- С. 25-27.

Патенты:

10. Патент 2361429 РФ Биологически активная добавка для профилактики ревматоидных заболеваний (20.07.2009 Бюл. №20).

11. Заявка на изобретение №2010104510 (006317) Способ получения раневого покрытия для рыб, выращиваемых в искусственных условиях (10.02.2010).

Подп. в печать 31.03.10. Объем 1.5 п.л. Тираж 100 экз. Заказ № 841 ФГУП «ВНИРО». 107140, Москва, В. Красносельская, 17.

Список сокращений Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Объекты водного промысла - рыбы и беспозвоночные - неисчерпаемый источник хрящевой ткани

1.2 Аминополисахариды в составе гидробионтов

1.3 Способы получения аминополисахаридов

1.4 Область применения аминополисахаридов

Глава 2. Материалы и методы исследований

2.1 Материалы исследований

2.2 Методики

Глава 3. Результаты исследований и их обсуждение

3.1 Изучение техно-химических характеристик сырья для получения хондроитинсульфат-белкового комплекса

3.1.1 Размерно-массовая характеристика сырья

3.1.2 Массовый состав отходов, содержащих хрящевую ткань

3.1.3 Определение химического состава хрящесодержащих отходов и очищенной хрящевой ткани

3.1.4 Определение содержания гексозаминов в хрящевой ткани рыб

3.2 Разработка технологии БАД «Хондроитинсульфат-белковый комплекс»

3.2.1 Обоснование параметров процесса предварительного обезжиривания хрящевой ткани

3.2.2 Обоснование параметров гидролиза хрящевой ткани

3.2.3 Моделирование и оптимизация процесса ферментативного гидролиза хрящевой ткани рыб

3.2.4 Обоснование стадии отделения высокомолекулярной фракции белков

3.2.5 Изучение состава хондроитинсульфат-белкового комплекса из хрящевой ткани рыб

3.3 Разработка рецептуры Б АД на основе хондроитинсульфат-белкового комплекса

3.4 Разработка композиций на основе аминополисахаридов гидробио-нтов

3.4.1 Исследование биологической активности композитов «ХитХНБК»

Глава 4. Практическая реализация результатов исследований

4.1 Технико-экономические показатели промышленного производства Б АД «ХНБК»

Выводы

Актуальность.

Рыбная отрасль Российской Федерации ставит такие задачи, как разработка технологий глубокой переработки гидробионтов с целью получения пищевых продуктов, биологически активных веществ нового поколения и кормовых продуктов из недоиспользуемых водных биологических ресурсов [Концепция развития рыбного хозяйства, 2003; Корельский, 2008].

Исследования по комплексной переработке гидробионтов, поиску и выделению биологически активных веществ постоянно ведутся отечественными и зарубежными учеными: Албулов А.И., Боева Н.П., Варламов В.П., Мукатова М.Д., Немцев С.В., Пивненко Т.Н., Подкорытова А.В., Сафронова Т.М., Слуцкая Т.Н., Суховерхова Г.Ю., Эпштейн JI.M., Abdel F., Apinya A., Cho J., Larger L., Lee A., Prudden J., Folkman J., Sittiwat L. и др.

Для получения биологически активных продуктов перспективными представляются костно-хрящевые ткани, являющиеся отходами при разделке рыбы и в настоящее время используемые на получение кормовой муки. Аргументом в пользу привлечения рыбных отходов для получения биологически активных веществ является их значительный объем и высокое содержание биологически активных веществ, особенно хондроитинсульфата в отходах хрящевых рыб. Хондроитинсульфат — это высокомолекулярный полисахарид, принимающий ключевое участие в построении основного вещества костной и хрящевой ткани, а также тормозящее дегенеративные процессы последней и имеющий большое значение при разработке БАД хондропротекторного действия.

В связи с этим разработка технологии биоактивных препаратов из вторичного рыбного сырья, содержащего хондроитинсульфат в биокомплексе с сопутствующими природными компонентами (коллаген, аминокислоты, гексозамины, минеральные вещества и др.), является актуальной проблемой.

Разработанные технологии и выпуск продукции на их основе будут способствовать решению важных социальных задач, направленных на улучшение здоровья людей и животных.

Цель диссертационной работы; Разработка безотходной технологии переработки отходов от разделки рыб с высоким содержанием хрящевой ткани для получения хондритинсульфат-белкового комплекса.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Исследовать химический состав хрящевой ткани акулы катрана, бестера аквакультуры, ската звездчатого и отходов их переработки.

2. Обосновать рациональные параметры ферментативного гидролиза хрящевой ткани с применением коллагеназы и протосубтилина и рассчитать математическую модель процесса ферментолиза.

3. Разработать технологический процесс получения хондроитинсульфат-белкового комплекса.

4. Исследовать состав и качество хондроитинсульфат-белкового комплекса для установления возможности его применения в качестве компонента БАД;

5. Разработать рецептуру и технологию получения БАД к пище.

6. Исследовать возможность применения хондроитинсульфат-белкового комплекса в качестве компонента пленок ранозаживляющего действия.

7. Разработать способ получения и применения пленок ранозаживляющего действия.

8. Разработать проекты технической документации (ТУ и ТИ) на хондроитинсульфат-белковый комплекс.

9. Рассчитать экономическую эффективность от внедрения разработанной технологии получения БАД.

Научная новизна работы.

1. Впервые применен способ обезжиривания хрящевой ткани в процессе получения хондроитинсульфат-белкового комплекса термообработкой в воде с поверхностно-активным веществом.

2. Обоснован способ снижения содержания высокомолекулярного белка в хондроитинсульфат-белковом комплексе методом его осаждения хитозаном.

3. Впервые созданы хитозан-хондроитинсульфат-белковые ранозаживляющие пленки для лечения кожных поражений культивируемых рыб.

Практическая значимость работы.

Определены перспективные источники сырья для получения хондроитинсульфат-белкового комплекса. Разработана технология ферментативных гидролизатов из отходов переработки хрящевых рыб. Результаты экспериментальных исследований апробированы в производственных условиях ЗАО «Биопрогресс» Щелковского района МО, пос. Биокомбинат. Разработана технология изготовления пленок на основе природного аминополисахарида хитозана и хондроитинсульфат-белкового комплекса. Разработан и апробирован в условиях аквакультуры способ лечения кожных поражений рыб. Разработаны проекты технической документации на хондроитинсульфат-белковый комплекс из хрящевой ткани рыб (ТУ № 9289063-00472124-09 и ТИ) и на биологически активную добавку к пище «Хондроитинсульфат-белковый комплекс» (ТУ № 9283-117-00472124-10 и ТИ). Новизна технического решения подтверждена патентом РФ № 2361429.

На защиту выносятся следующие положения: • Принцип выбора сырья (отходы переработки акул, скатов и осетровых рыб) по химическому составу, определяющему направленность технологического процесса получения хонроитинсульфат-белкового комплекса с заданным составом и свойствами.

• Технология хонроитинсульфат-белкового комплекса с обоснованием рациональных режимов и параметров ферментативного гидролиза хрящевых тканей рыб.

• Полифункциональность хондроитинсульфат-белкового комплекса, содержащего биологически активные вещества гексозамины, хондроитинсульфаты, коллаген, неколлагеновые белки, микроэлементы и возможность его использования в качестве компонента БАД и ранозаживляющих пленок.

Апробация работы.

Основные результаты диссертационной работы были представлены на первой международной научно-практической конференции «Повышение эффективности использования водных биологических ресурсов» (Москва, 2006); научно-практическом форуме «Здоровое питание - здоровье нации» (Москва, 2007); первой международной научно-практической конференции «Биотехнологические процессы и продукты переработки биоресурсов водных и наземных экосистем» (Астрахань, 2008); девятой международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана» (Ставрополь, 2008); второй международной научно-практической конференции «Повышение эффективности использования водных биологических ресурсов» (Москва, 2008); Всероссийской научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы развития пищевой промышленности и общественного питания» (Челябинск, 2008); The XV seminar and workshop «New aspects of the chemistry and application of chitin and its derivatives» (Poland, Torun, 2009).

Публикации. Основные результаты диссертации изложены в 9 печатных работах, в том числе, 3 статьи в журнале перечня ВАК РФ, 6 печатных трудов в материалах конференций, получен 1 патент, оформлена 1 заявка на изобретение.

Выводы

1. Обоснована и разработана технология безотходной переработки отходов от разделки рыб (акулы катран, ската звездчатого, бестера) с высоким содержанием хрящевой ткани для получения хондроитинсульфат-белкового комплекса и БАД на его основе.

2. На основании совокупных данных: массовой доли хрящевой ткани (4 — 10 % к общей массе сырья), содержания гексозаминов (2,3 - 2,8 г/100 г сырья) - выделены наиболее перспективные виды сырья (акула катран, скат звездчатый, бестер) для получения хондроитинсульфат-белкового комплекса.

3. Обоснованы рациональные параметры деполимеризации хрящевой ткани рыб, включающие основные стадии: варку в течение 5 мин с 1% ПАВ при 100 °С для эффективного удаления жировой фракции, последующий ферментативный гидролиз коллагеназой и протосубтилином Г20Х, при концентрации фермента 0,2% и 0,5%, соответственно и продолжительности 8 ч.

4. Процесс ферментации хрящевой ткани описан математической моделью, адекватно связывающей технологические параметры и качество продукта на основе гидролизата хрящевой ткани с определяющими факторами ее биодеструкции. Решение математической модели позволило установить влияние и оптимальные значения продолжительности процесса и концентрации фермента (8,9 ч и 0,28 % к массе суспензии).

5. Установлены рациональные параметры процесса осаждения высокомолекулярных фракций белка 1%-ным раствором хитозана в 0,2 М НС1 в количестве 10% к суспензии.

6. Установлено, что состав хондроитинсульфат-белкового комплекса, содержащий хондроитинсульфаты (4-10 %), коллаген (16-30 %), а также свободные аминокислоты (10 - 20 %) соответствует требованиям к БАД хондропротекторного действия.

7. Разработана рецептура и технология получения БАД к пище «ХНБК», предусматривающая последовательное смешивание компонентов, входящих в состав БАД, что обеспечивает получение функционального препарата хондропротекторного действия, содержащего хондроитинсульфат-белковый комплекс (84 %), хитозан (10 %), глюконат кальция (4 %) и аскорбиновую кислоту (2 %).

8. Обоснована и разработана технология получения нового ранозаживляющего средства (покрытия) в виде пленки для лечения рыб на основе ХНБК и хитозана, взятых в соотношении 70-80 % к 20-30 %, соответственно. Определены механо-прочностные и поверхностные свойства пленок: прочность 19 МПа, разрывное удлинение 61 %.

9. Проведены биологические испытания ранозаживляющего средства ХитХНБК на бестерах аквакультуры, показавшие 100 % эффективность при лечении кожных поражений различной этиологии.

10. Разработан проект технической документации (ТУ №9289-06300472124-09 и ТИ) на «Хондроитинсульфат-белковый комплекс из хрящевой ткани рыб».

11. Расчет экономической эффективности технологии получения хондроитинсульфат-белкового комплекса и БАД «ХНБК» показал, что рентабельность производства может составить 40 % при сроке окупаемости инвестиционных средств в течение 1 года.

1. Абдулин В.Ф. Технология и свойства биополимера хитозана из панциря речного рака: автореф. дисс. к.т.н.: 05.17.06 Технология и переработка полимеров и композитов. - Саратов: СГТУ, 2006. - 20 с.

2. Алексеева Л.И., Беневоленская Л.И, Насонов Е.Л. и др. Структум (хондроитинсульфат) новое средство для лечения остеоартроза // Терапевтический архив. - 1995. - № 5.- С. 5- 7.

3. Алексеева Л.И., Зайцева Е.М. Остеоартроз и остеопороз // Качество жизни. Медицина. 2006. - №5. - С. 2-7.

4. Афанасьев Ю.И., Юрина Н.А., Котовский Е.Ф. Гистология. М.: Медицина, 2002. - 744 с.

5. Баранов В.В., Бражная И.Э., Гроховский В.А., и др. Технология рыбы и рыбных продуктов: Учебник для вузов / Под ред. Ершова A.M. СПб.: ГИОРД, 2006. - 944 с.

6. Биологически активные вещества рыбы и морепродуктов / Т.А. Дубровская // Обзорная информация- М.: ВНИИСЭНТИ, 1990.-Вып. 2.- С. 58-59.

7. Боева Н.П. Состояние и перспективы развития производства кормовой муки из гидробионтов // Рыбная промышленность. — 2004. -№3. -С. 1415.

8. Боева Н.П. Технология кормовой муки из мелких рыб повышенной жирности // Рыбное хозяйство. 2002. - №3. - С. 53-55.

9. Бохан В.Н., Карпов В.И., Исаев В.А. О гранулировании кормовой муки из морепродуктов // Рыбное хозяйство. 1976. -№6. - С. 76-78.

10. Ю.Ванятинский В.Ф., Мирзоева Л.М., Поддубная А.В. Болезни рыб. М.: Пищевая промышленность, 1979. - 232 с.

11. П.Васильев М.П., Вольф Л.А. Биологически активные коллагеновые волокна и волокнистые материалы / Хим. Волокна. 1990. - № 6. - С. 39-41.

12. Воли. Тучные клетки виновники артрита (перевод к.м.н. Т. Акимова) // Наука и человечество «Доступно и точно о главном в мировой науке». Международный ежегодник. - М.: Знание, 1991. - С. 400.

13. Гамзазаде А.И., Шликмак В.М., Скляр A.M., Штыкова Э.В., Павлова С.А., Роговин С.В. Исследование гидродинамических свойств растворов хитозана // Acta polymerica. 1985. - Т. 36. - № 8. - С. 420 — 424.

14. И.Герасименко Д.В. Ферментативное получение низкомолекулярного хитозана и изучение его антибактериальных свойств. Дисс. к.б.н. 03.00.23. Щелково: 2005.-133 с.

15. Гордиевская B.C. Технохимическая характеристика акул тихого океана // Рыбное хозяйство. 1969. - №7. - С.71-73.

16. Городецкий В.К. Гликозаминогликаны. — 2008. www.golcom.ru.

17. Горяев М.И., Быкова Л.Н., Кодовбецкая В.Н., Бобровская Т.Г., Изатулаев Е.А. Биологическая ценность пептона, полученного из кератинсодержащего сырья // Прикладная биохимия и микробиология. 1981.-Т. 17.-Вып. 2.-С. 273-277.

18. ГОСТ 7636-85 Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Методы анализа. М.: 1985.-142 с.

19. Данилевская Н.В., Николаев А. А. Хондропротекторы и их использование в ветеринарии // Ветеринар. 2002. - № 3. - С. 45 - 49.

20. Демин А.С., Лукина И.В., Васюков С.Е. Применение ионообменных материалов в промышленности и аналитической химии. Воронеж: ВГУ, 1986.-С. 170-171.

21. Астрахань: АГТУ, 2009. С. 11-13. 23.3аводовский Б.В., Коваленко Е.А. и др. Связь уровня антител к гликозаминогликанам хряща у больных с остеоартрозом с эффективностью лечения хондропротекторами // Терапевтический архив. -1999.- №5.

22. Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П. Патофизиология. Общая патофизиология.

23. Иванкин А.Н., Неклюдов А.Д. // Прикладная биохимия и микробиология. 1998. - Т. 34. - № 6. - С. 692 - 697.

24. Иванкин А.Н., Васюков С.Е., Панов В.П. Получение, свойства и применение хондроитинсульфатов // Химико-фармацевтический журнал. 1984. - №3. - С. 192 - 202.

25. Игнатова Е.Ю., Гуров А.Н. Принципы извлечения и очистки гиалуроновой кислоты (обзор) // Химико-фармацевтический журнал.1990. Т. 24. - №3.-С. 42-46.

26. Канунго М. Биохимия старения. -М.: Мир, 1982. С. 136-166.

27. Карасева Т.А. Проблемы здоровья рыб в аквакультуре Севера России на примере Кольского полуострова. Дисс. к.б.н. Мурманск: 2003. -168 с.

28. Кизеветтер И.В. Биохимия сырья водного происхождения. М.: Пищевая промышленность, 1976. - 424 с.

29. Колосова И. Что поможет, если «добежали» до остеоартроза? // Домашняя аптека. 2004. - http://apteka.potrebitel.rU/data/7/20/36.shtml.

30. Кольман Я., Рем К.-Г. Гликозаминогликаны и гликопротеины // Наглядная биохимия. М.: Мир, 2000. - С. 50-51.

31. Комаров М.И. О химическом действии соляной кислоты и воды на гиалиновый хрящ. Дисс. д.м.н. СПб.: 1871.-31 с.

32. Константинов К.Г. Жизнь, промысел и использование акул. -Мурманск: ПИНРО, 1970. 102 с.

33. Концепция развития рыбного хозяйства Российской Федерации на период до 2020 года. М.: 2005. - 18 с.41 .Корельский В.Ф. Некоторые вопросы повышения эффективности рыбного хозяйства // Рыбное хозяйство. 2008. - № 3 - С. 7 - 9.

34. Костин И.И. Общая технология кожи. М.: Гизлегкопромиздат, 1951. -333 с.

35. Косягин Д.В. Аминокислотный состав белка протеогликанов суставного хряща человека в норме и при патологии // Украинский биохимический журнал. 1984.-Т. 56.-№5.-С. 549-551.

36. Кочетков Н.К., Бочков А.Ф., Дмитриев Б.А., Усов А.И. Химия углеводов. -М.: Химия, 1967. 671 с.

37. Куприна Е.Э., Козлова И.Ю., Тимофеева К.Г. Современные тенденции в способах получения и применения хитина и хитозана // Серия обработка рыбы и морепродуктов: инф. пакет ВНИПКИЭИАСУРХа. -М.: 1999. Вып. 3(1).- 60 с.

38. Куренков В.Ф. Химическая деструкция полимеров // Химия высокомолекулярных соединений. Казань: Бутлеровские сообщения, 2004. - 148 с.

39. Ленинджер А. Биохимия. М.: Мир, 1974. - 957 с.

40. Либинсон Г.С. Сорбция органических соединений ионитами. — М.: Медицина, 1979.- 180 с.

41. Мазуров В.И., Онищенко И.А. Остеоартроз // Клиническая ревматология (руководство для практических врачей) / Под ред. члена корр. РАМН проф. В .И. Мазурова. СПб.: Фолиант, 2001. - С. 338-371.

42. Максимов В.П. Акулы атлантического океана. М.: ВНИРО, 1969. - 68 с.

43. Мамонтов Ю.П. Основы ведения рационального осетроводства в России // Рыбоводство и рыболовство. М.: - 2001. - № 1. - С. 14-15.

44. Марри Р., Греннер Д., Мейес П, Родуэлл В. Биохимия человека.- М.: Мир, 1993.

45. Машковский М.Д. Лекарственные средства в 2-х томах. 13-е издание -М.: Медицина, 1998.-433 с.

46. Медицинская энциклопедия «Все, что нужно знать о болезнях». — М.: ACT, 2005. 969 с.

47. Мезенова О.Я., Лысова А.С., Григорьева Е.В., Вильт С.М. Технология получения хитин/хитозана из сушеного гаммаруса с применением автоферментолиза // Известия КГТУ: научный журнал. 2004. - № 5. -С. 72-76.

48. Мезенова О.Я. Биотехнология морепродуктов / О.Я. Мезенова, Л.С. Байдалинова, А.С. Лысова. М.: 2006. - 560 с.

49. Наседкина Е.А., Касьяненко Ю.И., Слуцкая Т.Н. Особенности химического состава мяса иглокожих // Рыбное хозяйство. 1973. - № 7.-С. 81-82.

50. Неклюдов А.Д., Иванкин А.Н. Биологически активные соединения из природных объектов. Свойства и структурно-функциональные взаимосвязи. М.: МГУ Л, 2003. - 480 с.

51. Неклюдов А.Д., Иванкин А.Н. Коллаген: получение, свойства и применение. М.: МГУЛ, 2007. - 334 с.

52. Немцев С.В. Комплексная технология хитина и хитозана из панциря ракообразных. М.: ВНИРО, 2006. - 134 с.

53. Несис К.П. Краткий определитель головоногих моллюсков Мирового Океана. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. - 360 с.

54. Николаева Н.Е. Глюкозамин лекарственное средство из панцирей ракообразных // Мировое рыболовство. - 1969. - Вып. 1. - С. 43 - 44.

55. Николаева Н.Е., Соболев В.Р., Молочаева И.С. Получение глюкозамина из панцирей креветок и его использование в медицине // Труды ВНИРО. М.: ВНИРО, 1967. - Т.63. - С. 165 - 169.

56. Павлова В.Н., Копьева Т.Н., Слуцкий Л.И., Павлов Г.Г. Хрящ. М.: Медицина, 1988.-320 с.

57. Пат. 1831298 SU А 23 L 1/31, А 61 К 35/12 / Ларцев С.Н., Потапов К.А., Пак М.Ф., Душичкина И.В. и др. Способ получениямукополисахаридных концентратов. №5037744/13. Заявл. 21.05.92. Опубл. 30.07.93.

58. Пат. 2038095 РФ А 61 К 35/60 / Казаков А.Л., Самокиш И.И., Компанцев В.А., Лобова Е.И. и др. Способ получения глюкозамина гидрохлорида, обладающего противоартрозной активностью. №5037787/14. Заявл. 1991.09.05. Опубл. 1995.06.27.

59. Пат. 2061485 РФ А 61 К 35/22 / Васюков С.Е., Кирьянов Н.А., Лукина И.В., Шульгина А.А. и др. Способ выделения хондроитинсульфата из животных тканей. №92014708/14. Заявл. 1992.12.28. Опубл. 1996.06.10.

60. Пат. 2089557 РФ С 08 В 37/08 / Стекольников Л.И., Корнилова А.А. Способ получения хондроитинсульфата А. №93041847/04. Заявл. 1993.08.23. Опубл. 1997.09.10.

61. Пат. 2250047 РФ А 23 L 1/325 / Пивненко Т.Н., Клычкова Г.Ю., Ковалев Н.Н., Эпштейн Л.М. и др. Пищевой общеукрепляющий профилактический продукт из хрящевой ткани гидробионтов и способ его получения. №2003133633/13. Заявл. 2003.11.18. Опубл. 2005.04.20.

62. Пат. 3002038. ФРГ // Chem. Abstr. 1981. - V. 94. - № 20424.

63. Пат. 40502. Япония // Chem. Abstr. 1982. - V. 97. - № 28639.

64. Пат. 74796. Япония // Chem. Abstr. 1980. - V. 93. - № 111223.

65. Пат. № 2046801 РФ / Стекольников Л.И., Рыльцев В.В., Вирник Р.Б., Григорьева И.А., Гамаюнов Ю.И. Способ получения гиалуроновой кислоты. Опубл. 27.10.1995.

66. Пат. № 2161002 РФ / Пивненко Т.Н., Эпштейн Л.М., Позднякова Ю.М., Ковалев Н.Н., Гажа А.К., Апанасевич В.И., Беседнова Н.Н. Пищевой общеукрепляющий лечебно-профилактический продукт из хрящевой ткани акул и способ его получения. Опубл. 27.12.2000.

67. Пат. 2108114 РФ А 61 L15/28. Биологическая композиция для лечения ран "КОЛЛАХИТ" / Фрончек Э.В., Кригер А.Г., Адамян А.А. и др. Опубл 10.04.1998.

68. Пат. 2154497 РФ А 61 L 15/32. Перевязочный материал / Адамян А.А., Голованова П.М., Добыш С.В. Опубл 20.10.1997. Бюл. № 29.

69. Пат. 2252787 РФ А 61 L 15/28. Способ получения искусственной матрицы кожи / Большаков И.Н., Насибов С.М., Еремеев А.В. и др. Опубл 27.05.2005.

70. Пат. 2201757 РФ Средство профилактики и лечения дегенеративно-дистрофических изменений суставов и способ его получения / Десятниченко К.С, Матвеева Е.Л., Талашова И.А. // Опубликовано ИСМ, 2003.-№8. -С. 23

71. Пинчук В.И. Определитель акул. М.: ВНИРО, 1968. - 44 с.

72. Подкорытова А.В. Морские водоросли макрофиты и травы. М.: ВНИРО, 2005.- 175 с.

73. Подсевалов В.Н., Филатов А.Н. Использование акул для пищевых и технических целей // Рыбное хозяйство. 1965. - №2. — С.70-72.

74. Подсервалов В.Н. Заготовка акул для пищевых целей. Калининград: Калининградское книжное издательство, 1966. - 46 с.

75. Регистр лекарственных средств России / Под ред. Крылова Ю.Ф. М.: Ремако, 1997. - 864 с.

76. Регистр лекарственных средств России. М.: PJIC+, 2008. - Вып. 171440 с.

77. Риггз Б.Л., Мелтон Л.Дж. Остеопороз. СПб.: БИНОМ, 2000. - 560 с.

78. Руденская Г.П. Брахиурины сериновые коллагенолитические ферменты крабов // Биоорганическая химия. - 2003. - Т. 29. - № 2. - С. 117-128.

79. Сафронова Т.М. Аминосахара промысловых рыб и беспозвоночных и их роль в формировании качества продукции. — М.: Пищевая промышленность, 1980. 109 с.

80. Серов В.В., Шехтер А.Б. Соединительная ткань. М.: Медицина, 1981. -312 с.

81. Слуцкий Л.И. Биохимия нормальной и патологически измененной соединительной ткани. Л.: Медицина, 1969. — 375 с.

82. Слуцкий Л.И. Современные представления о коллагеновых компонентах хрящевой ткани // Вопросы медицинской химии. 1985. -Т.31.-С. 10-17.

83. Соловьев В.И., Кузнецова Г.И. Определение компонентов соединительной ткани мяса: Экспресс-информация // ЦИНТИ пищепром. М.: 1963.-С. 25-27.

84. Справочник Антарктический криль / Под ред. В.М. Быкова. М.: ВНИРО, 2001.-208 с.

85. Справочник по химическому составу и технологическим свойствам морских и океанических рыб. М.: ВНИРО, 1998. - 224 с.

86. Стейси М., Баркер С. Углеводы живых тканей. М.: Мир, 1965. - 324 с.

87. Степаненко Б.Н. Химия и биохимия углеводов (полисахариды). М.: Высшая школа, 1978. - 256 с.

88. Суховерхова Г.Ю. Биохимическая характеристика хрящевой ткани гидробионтов и технология БАД к пище: Дисс. к.т.н. 05.18.07, 03.00.04.-М.: 2006.-157 с.

89. Телишевская Л.Я. Белковые гидролизаты. Получение, состав, применение / Под ред. А.Н. Панина. М.: 2000. - 295 с.

90. Титов Е.И., Апраксина С.А. Коллагенсодержащее сырье и пути его переработки. М.: АГРОПИИТЭИПП, 1995. - С. 35.

91. Тишин В.Е. Использование акул для пищевых, кормовых и технических целей. -М.: ВНИРО, 1969.- 106 с.

92. Тюкавкина Н.А., Бауков Ю.И. Биоорганическая химия. М.: Медицина, 1991. - 526 с.

93. ФГУ «Центр системы мониторинга рыболовства и связи» http://www.ncmc.ru/

94. Федеральный реестр биологически активных добавок к пище / Под ред. Егорова В.Н., Симкаловой JI.M. М.- СПб.: 2005. - 544 с.

95. Франченко Е.С., Тамова М.Ю., Сорокоумов И.М. и др. Получение хитозана из панциря речных рачков // Известия высших учебных заведений. Сер. Пищевая технология. 2005. - 5-6(288-289). -С. 125-126.

96. Хасигов П.З., Подобед О.В., Кцоева С.А., Гагонова Т.М., Грачев СВ., Шишкин С.С. Березов Т.Т. Металлопротеиназы матрикса нормальных тканей человека: обзор // Биохимия. 2001. - Т. 66. - Вып. 2.-С. 167-179.

97. Хелминен Х.Ю., Сээмэнен A.M., Кивиранта И., Юрвелин Ю. Секреты суставного хряща (перевод д.м.н. П. Мульдияров) // Наука и человечество «Доступно и точно о главном в мировой науке». М.: Знание, 1991.-400 с.

98. Хитин и хитозан: Получение, свойства и применение / Под ред. К.Г. Скрябина, Г.А. Вихоревой, В.П. Варламова. М.: Наука, 2002. -368 с.

99. Чумаков А.А., Комнова З.Д. // Стоматология. 1985. - № 5. - С. 6 -9.

100. Шварц. М.И. О продукте, получаемом действием едкой щелочи, щелочных земель и хлористого натрия на гиалиновый хрящ и хондрин. -СПб.: 1884.- 8 с.

101. Шитов Г.Г. Новые подходы к созданию лекарственных средств с хондропротекторными свойствами // Вестник Российской АМН. 1992. - №5.-С. 26-30.

102. Юданова Т.Н. Полимерные раневые покрытия с ферментативным и антимикробным действием. Дисс. д.х.н. -М.: 2004. 409 с.

103. Abdel Fattah W., Hammad Т. Chondroitin sulfate and glucosamine: a review of the safety profile // JANA. 2001. - V. 3. - № 4. - P. 16-23.

104. Alves M.L, Straus A., Takahashi H., Michelacci J.M. Prodaction and characterization of monoclonal-antibodies to shark cartilage proteoglycan // Brazilian journal of medical and biological research. 1994. - V. 27. - № 9. -P. 2103-2108.

105. Anderson H.C. Matrix vesicles of cartilage and bone // Biochemistry and physiology of bone / Ed. G.H. Bourne. NY: 1976. V. 4. - P. 135-136.

106. Azad A., Sermsintham N., Chandrkrachang S. Chitosan membrane as a wound-healing dressing: characterization and clinical application // J. of Biom. Materials. Research. B. - 2004. - № 69 В (2). - P. 216-222.

107. Balazs E.A. The amino sugars: the chemistry and biology of compounds containing amino sugars. -NY: 1965. P. 401- 460.

108. Bekesi J.G., Winzler R.J. Inhibitory effect of D-glycosamine on the growth of Walker 256 carcinosarcoma and on protein, RNA and DNA synthesis // Cancer research. 1970. - V. 30. - № 12. - P. 2905-2912.

109. Blumenkrants N., Asboe-Hansen G. Hydroxyproline to hydroxy lysine molar ratio indicates collagen type // Acta dermatovener. 1978. - № 58. — P. 111-115.

110. Chekmareva I.A. Experimental study of reparative regeneration processes in the wound treated with bioactive dressing // Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 2002. - V. 133. - № 2. - P. 192 -195.

111. Cho J., Kim Y. Sharks: a potential source of antiangiogenic factors and tumor treatments // Marine biotechnology. 2002. - V. 4. - № 6. - P. 521 -525.

112. Choi Y.S., Hong S.R., Lee Y.M. et al. Studies on gelatin-containing artificial skin. Preparation and characterization of cross-linked gelation-hyaluronate sponge // J. of Biomedical Materials Research. 1999. - V. 48. -№ 5. - P. 631 -639.

113. Choi Y.S., Hong S.R., Lee Y.M. et al. Studies on gelatin-containing artificial skin. Preparation and characterization of novel gelatin-alginate sponge // Biomaterials. 1999. - V. 20. - № 20. - P. 409 - 417.

114. D'Arcy S.M., Carney S.L., Howe TJ. Preliminary investigation into the purification, NMR analysis, and molecular modeling of chondroitin sulfate epitopes // Carbohydrate research. 1994. - V. 255. - P. 41-59.

115. Denuziere A., Ferrier D., Damour O., Domard A. Chitosan-chondroitin sulfate and chitosan-hyaluronate polyelectrolyte complexes: biological properties //Biomaterials. 1998. - №3.-P. 1275 - 1285.

116. Doyle J. Aging changes in cartilage from Squalus acantithias // Comparative biochemistry and physiology. 1968. - V. 25. - № 1. - P. 201206.

117. Dumitriu S. Polysaccharides structural diversity and functional versatility. - NY: 2005. - 1204 p.

118. Grzybowski J., Kolodziej W., Trafny E., Struzyna J. New antinfective collagen dressing containing antibiotics // J. of Biomedical Materials Research. 1997. - V. 36. - № 2. - P. 163 - 166.

119. Hunt S. Polysaccharide-protein complexes in invertebrates London, NY: Academic press, 1970. - 329 p.

120. Hascall V.C., Hascall G.K. Proteoglycans // Cell biology of extracellular matrix / Ed. E.D. Hay. NY - London: 1983. - P. 39-63.

121. Information materials of F.E.A.P. The Federation of European Aquaculture Producers. Production and price reports of member associations of the F.E.A.P 2001- 2008. Prepared by the FEAP Secretariat May 2008.

122. Keith D.A., Paz M.A., Gallop P.M., Glimcher M.J. Histologic and biochemical identification and characterization of an elastin in cartilage // J. Histochem. Cytochem. 1977. - V. 25. - № 10. - P. 1154 - 1162.

123. Kittur F.S., Kumar A.B., Tharanathan R.N. Low molecular weight chitosans preparation by depolymerization with Aspergillus niger pectinase and characterization // Carbohydr. Res. - 2003. - V. 338. - P. 1283 - 1290.

124. Khan T.A. Reporting degree of deacetylation values of chitosan: the influence of analytical methods / T.A. Khan, K.K. Peh, H.G. Ching // J. Pharm Pharmaceut Sci. 2002. - 5 (3). - P. 205-212.

125. Kumar A.B., Gowda L.R., Tharanathan R.N. Non-specific depolymerization of chitosan by pronase and characterization of the resultant products // Eur. J. Biochem. 2004. - V. 42. - P. 3569 - 3580.

126. Lee A., Langer R. Shark cartilage contains inhibitors of tumor angiogenesis // Science. 1983. -V. 221. - P. 1185-1187.

127. Liang J.H., Wong K.P. The characterization of angiogenesis inhibitor from shark cartilage // Advanced Experimental Medical Biology. 2000. -V. 476. - P. 209-232.

128. Maroudas A. Biophysical chemistry of cartilaginous tissues // Biorheology. 1975. - V. 12. - № 3/4. - P. 233 - 248.

129. Masumura Y. Changes with age of water-binding capacity and acid mucopolysacharide content in the rat skin // Journal gerontology. 1971. -V. 26-№3.-P. 386-390.

130. Milner J.M., Elliot S.F., Cawston Т.Е. Activation of collagenases is a key control point in cartilage collagen matrix degradation // International journal of experimental pathology. 2000. - V. 81. - P. 14-15.

131. Muir H. Proteoglycans as organizers of the intercellular matrix // Biochem. Soc. Trans. 1983. - V. 13. - № 6. - P. 613 - 622.

132. Muir H. The chemistry of the ground substance of joint cartilage // The joint and synovial fluid / Ed. Sokoloff. NY. - 1980. - V. 2. - P. 27-94.

133. Muzzarelli R.A.A. Chitin / R.A.A. Muzzarelli. Oxford: 1977. - 3091. P

134. Muller J. Annalen der Physik u. Chemie. 1836. Bd. XXXVIII. - P. 295.

135. Ottani V., Raspanti M., Ruggeri A. Collagen structure and functional implications // Micron. 2001. - № 32. - P. 251-260.

136. Palmieri L., Conte A. Metabolic rate of exogenous chondroitin sulfate in the experimental on the animals // Drug Research. 1990. - V. 40. - № 3. -P.17-23.

137. Ponton A., Coulombe В., Skup D. Decreased expression of tissue inhibitor of metalloproteinases in metastatic tumor cells leading to increased levels of collagenase activity // Cancer research. -1991. V. 51. - P. 21382143.

138. Pool R. Proteoglycans in health and disease: structure and function // Biochemistry journal. 1986. - V. 236. - P. 1-14.

139. Prodi G. Data on dermis mucopolysaccharides and their evolution in growing animals // Biochemistry et physiology tissue. 1966. - P. 33-39.

140. Quintarelli G., Ippolito E., Roden L. Age-dependent changes in the state of aggregation of cartilage matrix // Lab. Invest. 1975. - V. 32. - № 1. -P. 111-123.

141. Rhoades J., Roller S. Antimicrobial actions of degraded and native chitosan against spoilage organisms in laboratory media and foods // Appl. Environ. Microbiol. 2000. - V. 66. - № 1. - p. 80 - 86.

142. Rise J., Willamson M., Price P. Isolation an sequence of the vitamin-K depended matrix Gla protein from the calcified cartilage of Soupfin shark // Journal an bone and mineral research. 1994. - V. 9. - № 4. - P. 567-576.

143. Rosenberg L., Johnson В., Schubert M. Proteinpolysacharides from human articular and costal cartilage // Journal clinical investigation. 1965. -V. 44.-№10. -P. 1647-1656.

144. Ruizcardon L., Sanzgiri Y., Benedetti L. et al. Application of benzyl hyaluronate membranes as potential wound dressing evolution of water-vapor and gas permeabilities // Biomaterials. - 1996. — V. 17. - № 16. - P. 1639- 1643.

145. Ruoslahti E. Proteoglycans in cell regulation // The Journal of biological chemistry. 1989. - V. 264. - P. 13369-13372.

146. Setnikar, Pacini. Antireactive properties of Glucosaminoglicane Sulfate. // Arzeim. Forsch. / Drug Res. 1991. - № 2. - P. 41.

147. Setnikar, Giacchetti. Pharmacokinetiks of Glucosamine in Dog and Man // Arzeim. Forsch / Drug Res. 1986. - №4. - P. 59-63.

148. Susumu H., Hidetaka Y., Kiyoshi T. Use of Fourier transform С nuclear magnetic resonance spectroscopy for sulfate placement in chondroitin sulfates // Journal of Biochemistiy. 1974. - V. 76. - P. 209-211.

149. Tanaka K. Physicochemical properties of chondroitin sulfate // Journal biochemistry. 1978. - V. 83. - P. 647-659.

150. Timothy E, Michael P. at all. Glucosamine and chondroitin for treatment of osteoartritis // JAMA. 2000.-V. 283. - № 11.- P. 73-75.

151. Tryggvason К., Hoythya M., Salo Т. Proteolytic degradation of extracellular matrix in tumor invasion I I Biochemistry Biophysical Acta. 1987. -V. 907.-P. 191-217.

152. Venn M.F. Chemical composition of human femoral head cartilage // Ann. Rheum. Dis. 1979. - V. 38. - № l.-P. 57-62.

153. Wallace D. The role of hydrophobic bonding in collagen fibril formation // Biopolymers. 1985. - № 24. - P. 1705-1720.

154. Wallel Abdel Fattah, Tarek Hammad. Chondroitin sulfate and Glucosamine: a reviwe of the Safety Profile // JAMA.- 2001. V. 3. - № 4 . - P. 110-112.

155. Wilhelms T.A. Neuartige hydrophile makromolekulare Netzwerke: Dissertation. Hamburg: Universitat Hamburg, 2005. - 276 s.

156. Yip D., Ahmad A., Karapetis C., Hawkins C., Harper P. Matrix metalloproteinase inhibitors: applications in oncology // Investigational new drugs. 1999.-V. 17.-P. 387-399.

157. Yoshida K., Azuma H. Contents and composition of glycosaminoglycans in different sites of the human hip joint cartilage // Ann. Rheum. Dis. 1982. - V. 41. - № 5. - P. 512 - 519.

158. Zaceone G. Histochemical analisis of epitelial mucosubstances in the inkgland of Lophotes cepedianus biomo (Teleostei:Lophotidae) // Bulletin of Zoology. 1973.-V. 40.-P. 355-359.

159. Zhong S.P., Campoccia D., Doherty P.J. et al. Biodegradation of hyaluronic acid derivatives by hyaluronidase // Biomaterials. 1994. - V. 15.-№ 5.-P. 359-365.

160. Zotkin M.A. Thermal modification and study of the structure of chitosan films // Fiber Chemistry. 2004. - № 1. - P. 16 - 20.