автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.04, диссертация на тему:Комплексная переработка опорно-каркасных и покровных тканей судака на функциональные продукты

На правах рукописи

ЗЕМЛЯКОВА Евгения Сергеевна

003484393 КОМПЛЕКСНАЯ ПЕРЕРАБОТКА ОПОРНО-КАРКАСНЫХ И ПОКРОВНЫХ ТКАНЕЙ СУДАКА НА ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ

ПРОДУКТЫ

05.18.04 Технология мясных, молочных, рыбных продуктов и холодильных производств 05.18.07 Биотехнология пищевых продуктов

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

6 НОЯ 2009

Калининград - 2009

003484393

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Калининградский государственный технический университет» (ФГОУ ВПО «ЮТУ»)

Научный руководитель почетный работник высшего

образования России, доктор технических наук, профессор Мезенова Ольга Яковлевна

Официальные оппоненты: заслуженный работник

рыбного хозяйства России, доктор технических наук, старший научный сотрудник Андреев Михаил Павлович

почетный работник рыбного хозяйства России, доктор технических наук, старший научный сотрудник Новикова Маргарита Владимировна

Ведущая организация Всероссийский научно-

исследовательский технологический институт биологической промышленности (ВНИИТИБП) РАСХН

Защита состоится «25» декабря 2009 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 307.007.01 при ФГОУ ВПО «Калининградский государственный технический университет» по адресу: 236000, г. Калининград, Советский проспект 1. Факс (4012) 91-68-46.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Калининградский государственный технический университет»

Автореферат разослан «/£•» ноября 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор технических наук, профессор

Н.Л. Великанов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность работы. Сегодня в России ситуация со здоровьем населения по данным Института медико-биологических проблем РАН приближается к критической - абсолютно здоровых людей насчитывается не более 4 %. При этом одним из наиболее распространенных заболеваний, обусловленным нарушением обмена веществ в хрящевой и костной тканях, является остеоартрит (остеоарт-роз), при котором разрушается суставный хрящ и прилегающая костная ткань. Им страдают 33-48% всего населения планеты. Для предотвращения этого заболевания рацион человека наряду с питательными веществами для восстановления деградирующих тканей должен содержать и другие биологически активные вещества, участвующие в их регенерации - витамины, минеральные вещества, ан-тиоксиданты, минорные компоненты.

По данным многочисленных исследований пища современного человека не может полностью обеспечить организм всеми необходимыми нутрнентами, поэтому использование специальных биопрепаратов в качестве концентратов природных биологически активных веществ, предназначенных для компенсации химических потерь, а также функциональных (обогащенных) продуктов является важной социальной задачей (Пилат, 2002; Тутельян, 2008 и др.).

Вторичное природное сырье, в том числе опорно-каркасные и покровные ткани (ОКиПТ) рыб (кожа, кости, чешуя, плавники, головы), многими учеными рассматриваются как источник таких полезных для человека веществ, как протеины, витамины, минеральные компоненты, липиды, гликозаминогликаны. Имеются точные сведения о положительном влиянии данных веществ на метаболизм и регенерацию тканей, поврежденных в результате нарушения обменных процессов при заболеваниях костно-хрящевых тканей человека (Алексеева, 1995; Гичев, 2001 и др.). Коллаген, гликозаминогликаны и минеральные вещества, содержащиеся в ОКиПТ, являются готовым «строительным материалом», который способен внедряться в очаги воспаления и уменьшать его интенсивность (Данилевская, 2002; Руденко, 2006 и др.). Потому они входят в состав многих медицинских и профилактических препаратов, поддерживающих функции опорно-двигательного аппарата человека (Пилат, 2002).

С учетом выше изложенного представляется перспективной разработка комплексной технологии переработки опорно-каркасных и покровных тканей кости-

стых рыб, богатых названными биологически активными компонентами, необходимыми для получения эффективных биопрепаратов, предназначенных для профилактики заболеваний опорно-двигательного аппарата человека. Принимая во внимание, что в Калининградском регионе в значительных количествах накапливаются ОКиПТ судака (до 50% массы вылавливаемой рыбы объемом 400-450 т в год), которые используются только для кормовых целей, является актуальной выработка из данного сырья пищевых функциональных биопрепаратов, полезных при остеоартритных заболеваниях.

Традиционным при лечении заболеваний опорно-двигательного аппарата человека является применение лекарственных растений, которые благодаря наличию комплекса многих биологически активных компонентов (витаминов, гли-козидов, флавоноидов, органических кислот, минеральных веществ и др.) способствуют повышению эффективности процесса восстановления больных тканей. С учетом биопотенциала данного сырья и рациональных способов его использования целесообразным видится применение популярных (например, шиповника) растений в виде водно-спиртовых фитоэкстрактов. Это позволяет не только обогатить продукт фитопарафармацевтиками, но и улучшить его органолептические качества, а также усовершенствовать технологию и избежать опасных консервантов в готовом продукте (Соколов, 2000).

Вопросами получения препаратов хондропротекторного и остеотропного действия из гидробионтов занимались многие ученые: Албулов А.И., Блинов Ю.Г., Бочаров JI.H., Быкова В.М., Варламов В.П., Вахрушев А.И., Дацун В.М., Ежова Е.А., Каленик Т.К., Ковалев H.H., Максимова С.Н., Мукатова М.Д., Мухин В.А., Немцев C.B., Новиков В.Ю., Пивненко Т.Н., Сафронова Т.М., Слуцкая Т.Н., Сорокоумов И.М., Суховерхова Г.Ю., Сытова М.В., Харенко E.H., Эшнтейн Л.М., Apinya A., Sittiwat L., Suthasinee N., Manop S. и др. Однако в их работах предложены технологии переработки хрящевых тканей таких рыб, как акулы, скаты, осетровые или морепродуктов (иглокожие беспозвоночные). Имеются также единичные данные по использованию биопотенциала твердых тканей костистых рыб (Суховерхова, 2006). Следует отметить, что известные работы преимущественно направлены на получение концентрированных препаратов хонд-роитинсульфата, что обуславливает потери значительной части биопотенциала других ценных нутриентов (минеральных веществ, глюкозамина, аминокислот и

др.), необходимых для регенерации костно-хрящевых тканей человека. Кроме того, известные технологии преимущественно основаны на химическом подходе к производству, при этом продукт не всегда имеет приятные сенсорные свойства.

Принимая во внимание изложенное, представляется актуальным разработать способ комплексной переработки ОКиПТ рыб с использованием экстрактов растений, позволяющий получить пищевые биологически активные препараты с си-нергическим остеотропным и хондропротекторным действием и обладающий улучшенными органолептическими характеристиками. Для этого целесообразно использовать биотехнологический метод деградации сырья путем его ферментации в среде фитокомпонентов, что позволит не только сохранить его биопотенциал, но и обогатить продукт фитодарафармацевтиками. При этом обеспечивается надежность, безотходность и экологичность производства.

Цель работы заключалась в разработке на примере судака комплексной переработки опорно-каркасных и покровных тканей рыб для получения пищевых функциональных препаратов хондропротекторного и остеотропного действия. Для достижения цели необходимо было решить следующие задачи:

• провести анализ научной литературы в области получения и применения биологически активных препаратов и функциональных продуктов;

• исследовать биопотенциал ОКиПТ балтийского судака и возможность их комплексной переработки;

• получить математическую модель и оптимизировать процесс ферментативного гидролиза ОКиПТ коллагеназой в среде фитоконсерванта;

• разработать схемы дообработки растворимого продукта гидролиза и высокоминерализованной части ОКиПТ судака;

• исследовать качество полученных биопрепаратов, отметить особенности орга-нолептических признаков готовых форм;

• оценить биологическую безопасность полученных препаратов, провести клинические испытания;

• разработать комплексную технологию переработки ОКиПТ судака;

• показать функциональность, обосновать рациональные схемы употребления и суточные дозы новых биопрепаратов;

• провести производственные испытания и оценить эффективность работы;

• подготовить проекты нормативной документации.

Научная новизна. Обоснована технология комплексной переработки опорно-каркасных и покровных тканей судака на пищевые функциональные препараты, предназначенные для людей с заболеваниями опорно-двигательного аппарата. Изучен химический состав рыбного вторичного сырья, на основании которого обоснован биотехнологический способ его ферментативной деструкции пищевой коллагеназой в водно-спиртовом экстракте плодов шиповника. Способ позволяет перевести в растворенное состояние из ОКиПТ основную массу биологически активных веществ хондропротекторного действия, эффективных в высушенном состоянии (препарат «Хондроэффектин») и получить мелкодисперсную высокоминерализованную композицию нерастворенных ингредиентов, активных в составе биопрепарата остеотропной направленности (препарат «Протеоминераль»). Разработана математическая модель ферментативного гидролиза биотканей, связывающая выход растворенной фракции БАВ, массовые доли в ней сухих веществ и аминного азота, органолептаческуго оценку биопрепарата «Хондроэффектин» с продолжительностью ферментации и количеством коллагеназы, позволившая оптимизировать их значения. Исследованы качественные характеристики готовых высушенных форм препаратов «Хондроэффектин» и «Протеоминераль», подтвердившие их функциональность. С применением профильного метода охарактеризованы особенности органолептических признаков вкуса и запаха новых биопродуктов. Определены минеральный и жирнокислотный составы препаратов, представленные ценными микроэлементами (кальций, фосфор, магний и др.) и эссенциальными жирными кислотами (класса соЗ и а>6), определено содержание аскорбиновой кислоты, биофлавоноидов. С применением инфузорий в1у1отсЫа туШиэ и мышей белых показана биологическая безопасность препарата «Хондроэффектин», в клинических испытаниях установлен положительный эффект его применения.

Новизна технологического решения подтверждена Патентом РФ №2355240 на «Способ получения препарата хондропротекторного действия».

Практическая значимость работы заключается в выявлении перспективных сырьевых источников для производства доступных функциональны?!: биопрепаратов, предназначенных для поддержания функции опорно-двигательного аппарата человека. На примере ОКиПТ судака разработан эффективный способ комплексной, безотходной, экологически безопасной переработки вторичного

сырья рыбоперерабатывающих производств. Результаты экспериментальных исследований положительно апробированы в производственных условиях ООО «Калининградский морепродукт» (г. Светлый). Разработаны проекты нормативной документации на сырье и готовые биопрепараты «Хондроэффектин» и «Про-теоминераль». Обоснованы исходные требования на оборудование по комплексной переработке вторичных рыбных отходов на биопрепараты хондропротектор-ного и остеотропного действия. Показана эффективность производства новых функциональных продуктов.

На защиту выносятся:

• результаты научного проектирования ферментативной переработки опорно-каркасных и покровных тканей судака;

• показатели качества препаратов «Хондроэффектин» и «Протеоминераль», обосновывающие их биологическую ценность, безопасность и функциональность (органолептические, физико-химические, биологические).

Апробация работы. Основные результаты исследований были представлены на IV Съезде Общества Биотехнологов России (Москва, 2006), международной научно-практическая конференции «Перспективные нано- и биотехнологии в производстве продуктов функционального назначения» (Краснодар, 2007), Ш международной научно-технической конференции "Низкотемпературные и пищевые технологии" (Санкт-Петербург, 2007), международной научно-практической конференции, посвященной 5-летию со дня основания факультета биотехнологии, товароведения и экспертизы товаров (пос. Персиановский, 2008), международной научно-практической конференции «Биотехнология. Вода и Пищевые продукты» (Москва, 2008), международной научной конференции «Исследования Мирового океана» (Владивосток, 2008), научно-практической конференции Общества Биотехнологов России "Пищевая и морская биотехнология: проблемы и перспективы" (Светлогорск, 2008), V съезде Общества Биотехнологов России (Москва, 2008), VI Юбилейной международной научной конференции, посвященной 50-летию пребывания КГТУ на Калининградской земле "Инновации в науке и образовании - 2008" (Калининград, 2008), Первой международной научно-практической конференции, посвященной 450-летию города Астрахани "Биотехнологические процессы и продукты переработки биоресурсов

водных и наземных экосистем" (Астрахань, 2008), международной научно-практической конференции «Олимпиада 2014: Технологические и экологические аспекты производства продуктов здорового питания» (Краснодар, 2009), Международной научно-технической конференции «Наука и образование - 2009» (Мурманск, 2009), VII международной научной конференции «Инновации в науке и образовании - 2009» (Калининград, 2009), VII международной научно-практической конференции «Производство рыбной продукции: проблемы, новые технологии, качество» (Светлогорск 2009), заседаниях кафедры пищевой биотехнологии (2006-2009 гг.).

Публикации: по теме диссертации опубликовано 21 научная работа, в том числе 3 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, 1 Патент РФ.

Структура и объем работы. Диссертация включает введение, обзор литературы, методическую часть, результаты и их обсуждение, выводы, литературу (210 источников, в т.ч. 47 зарубежных). Работа изложена на 233 стр. компьютерного текста, содержит 39 таблиц, 14 рисунков и 14 приложений.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, научная новизна, практическая значимость работы, положения, выносимые на защиту.

В первой главе «Обзор литературы» проведен анализ отечественной и иностранной литературы в области получения и применения функциональных пищевых продуктов и биопрепаратов. Показан потенциал недоиспользуемых рыбных ресурсов, лекарственных растений и возможности их применения. Проанализированы существующие направления переработки ОКиПТ животного происхождения, роль ферментов в технологии биопрепаратов, перспективы их применения при комплексной переработке вторичного рыбного сырья.

Во второй главе «Материалы и методы исследований» представлена схема исследований (рис. 1), приведена характеристика объектов и методов анализов. Основные эксперименты проводили на судаке Куршского залива Балтийского моря. Для исследования у рыб выделяли ОКиПТ, которые предварительно проваривали, зачищали от прирезей мяса и жировой ткани.

Анализ литературных и патентных источников

Формулирование цели и задач исследований

Обоснование объектов и методов исследования

Рисунок 1 - Методологическая схема исследований

Органолептическую оценку целевых биопродуктов осуществляли с применением действующей БД разработанных 5-балльных шкал с учетом коэффициентов значимости отдельных показателей качества, а также описательного профильного метода. Массовую долю воды, золы, азотистых веществ, жира, аминно-го азота, флавоноидов, а также микробиологические показатели определяли стандартными методами. Жирнокислотный (ЖК) состав липидной фракции жидкой части гидролизата исследовали по стандартной методике Германии (L.06.00-12), в Бремерхафенском институте пищевой биотехнологии, путем высокоэффективной жидкостной хроматографии с идентификацией жирных кислот на колонках Fused-Silica. Минеральный состав образцов определяли на атомно-абсорбционном спектрометре С-115-М1 и «КВАНТ Z.3TA» с электротермической атомизацией. Содержание хондроитинсульфатов определяли спектрофото-метрически через анализ сульфат-ионов по фармакопейной статье (ФС № 421286-99). Массовую долю витамина С оценивали методом йодометрического титрования. Биологическую безопасность биопрепаратов определяли с применением инфузорий Stylonichia mytilus и мышей белых обоего пола в ФГУ «Калининградская межобластная ветеринарная лаборатория»; клинические исследования препарата «Хондроэффектин» проводили на базе ЦРБ «Славская поликлиника». Моделирование и оптимизацию ферментативного процесса осуществляли методом планирования эксперимента с применением ортогонального центрального композиционного плана (ОЦКП) второго порядка для двух факторов, Статистическую обработку экспериментальных данных проводили стандартными методами на ПЭВМ с пакетом программ Microsoft Office (Word, Excel) и Mathcad 2000.

В третьей главе «Результаты исследования и их обсуждение» в разделе «Характеристика вторичного рыбного сырья, предназначенного для изготовления биопрепаратов, поддерживающих функции опорно-двигательной системы», на основании собственных результатов и литературных данных оценены объем вылова судака, массовый и химический состав его ОКиПТ, в том числе содержание макро- и микроэлементов, тяжелых металлов (табл. 1-3).

В связи с наличием на достаточно высоком уровне функциональных веществ в ОКиПТ судака и их безопасностью можно считать рациональной комплексную переработка данного сырья на биопрепараты хондропротекторного и

остеотропного действия. Для максимального извлечения ценных ингредиентов из ОКиПТ целесообразно использовать биотехнологический метод их деградации.

Таблица 1 - Общий химический состав ОКиПТ судака

Компонент состава Массовая доля, %

Вода 30,30

Белки 28,75

Липиды 7,50

Мин. вещества 36,30

Хондроитинсульфат 0,60

Таблица 2 - Содержание тяжелых металлов в ОКиПТ судака

Допустимый В

Эле- уровень содер- ОКи

мент жания, мг/кг, не ПТ,

более мг/кг

РЬ 1.0 < 1

Ах 1.0 < 1

Сс1 0,2 0,2

Н§ 0,6 0,001

Таблица 3 - Содержание основных минеральных веществ в ОКиПТ судака

Вид сырья Состав п робы, % Состав пробы, ррт(10"4%)

Бе | Мп N3 К Са Мй Си Хп N1 Со Сг

ОКиПТ 0,05 | 0,0012 0,26 0,17 8,42 0,31 <5 370 14 <5 6

В разделе «Обоснование использования ферментов и фитоэкстрактов в технологии функциональных биодобавок» приводится анализ гидролитических ферментов и лекарственных растений, наиболее часто встречающихся в составе препаратов, поддерживающих функцию опорно-двигательного аппарата. Были проведены эксперименты по ферментации ОКиПТ судака пепсином, комплексом пищеварительных ферментов, протосубтилином Г10Х, коллагеназа пищевая. Анализ полученных результатов позволил выбрать в качестве основного «биологического ножа» коллагеназу гепатопанкреаса камчатского краба, обладающую наибольшей специфичностью к ОКиПТ, что сказалось на выходе растворимой фракции и ее органолептической характеристике. Рациональным источником эффективных фитокомпонентов из ряда лекарственных растений (календула, череда, чистотел и др.) были выбраны плоды шиповника. Они являются перспективным сырьём не только из-за повсеместного распространения и приятных органолептических свойств, но и наличия широкого спектра эффективных БАВ, целесообразных в составе биопрепаратов хондропротекторного и остеотропного действия. Высокое содержание витамина С (более 1% массы высушенных плодов), необходимого для образования основного компонента хряща - коллагена, а также наличие биоконсервантов (органических кислот, каротиноидов), ингибирующих септическое разрушение костно-хрящевых тканей и их; окисле-

ние, явилось решающим фактором выбора данного сырья. Анализ способов введения компонентов шиповника позволил остановиться на применении его водно-спиртового экстракта, являющегося одновременно и консервирующей средой ферментации ОКиПТ - ключевой операции при их комплексной переработке.

В разделе «Моделирование и оптимизация процесса ферментативного гидролиза ОКиПТ судака» устанавливали оптимальные параметры ферментации сырья коллагеназой гепатопанкреаса краба в водно-спиртовом экстракте плодов шиповника, обуславливающие свойства конечных биопрепаратов. Эксперименты проводили с использованием ОЦКП второго порядка для двух факторов. В качестве варьируемых частных факторов, подлежащих оптимизации, в проводимом эксперименте после априорных опытов и литературного анализа были выделены (табл. 4) продолжительность ферментации т, (ч) и количество вносимого фермента М, (% массы суспензии). Параметром оптимизации математической модели выбрана совокупная безразмерная характеристика >■ (обобщенный параметр оптимизации), объединяющая различные по физическому смыслу частные отклика - выход продукта (М„р, %), массовую долю сухих веществ (М^, %)., количество аминного азота, образующихся в полуфабрикатах при ферментации ОКиПТ {Маа, мл ЫаОН), балльная органолептическая оценка готовой продукции (О, баллы).

Таблица 4 - План эксперимента по моделированию и оптимизации процес-

са ферментации ОКиПТ судака и результаты его реализации

№ План эксперимента Частные отклики У

т,ч М,% % Мс.е.,% Мал, мл ТЧаОН О, баллы

1 18 1,00 44,91 8,0 9,9 10,5 0,0918

2 6 1,00 36,84 6,8 6,0 12,3 0,7482

3 18 0,02 36,32 7,0 8,8 11,5 0,3960

4 6 0,02 30,15 6,2 3,4 12,0 1,1927

5 18 0,51 42,31 7,7 9,3 12,0 0,0739

6 6 0,51 34,45 6,4 5,4 12,3 1,0743

7 12 1,00 41,53 7,5 8,3 13,0 0,5780

8 12 0,02 35,18 6,6 6,9 12,5 0,7409

9 12 0,51 39,80 7,4 7,7 14,5 0,5899

Примечание: * «идеалы» частных откликов, установленные по определению или в специальных. экспериментах: М„р= 45%; Мс.,=8%; МЛА~10мп; 0=15 баллов;

**-выход продукта относительно массы сырья, поступившего на ферментацию

С целью получения достоверных данных ряд показателей в эксперименте поддерживали на постоянных уровнях, рациональные значения которых были определены в специальных экспериментах. Это: соотношение в системе «сы-рье:водно-спиртовой экстракт пш-повника:вода = 1:3:6», температура гидролиза - 42°С, рН = 6,8 - 7,0.

Реализация плана эксперимента (табл. 4) и обработка полученных данных позволили рассчитать уравнение (1), адекватно связывающее обобщенный параметр оптимизации с изменяемыми факторами, которое позволяет прогнозировать качество продукта:

у =- 0,1099-0,1547х1-0,Ш)6х2+0,0971х1х2+0,2418х,2+0,2202х22 (1)

Графическая интерпретация полученной модели процесса ферментации ОКиПТ судака в натуральном виде приведена на рис. 2. Оптимальные значения факторов, установленные методом математического дифференцирования, представлены в виде координат точки экстремума: продолжительность ферментации - 12,7 ч; количество фермента - 0,82% к массе суспензии. Экспериментально полученные результаты были проверены на практике и послужили основанием для их внесения в нормативную документацию (Приложение Г, Д).

В разделах «Исследование состава и свойств растворенной фракции ферментированных гидролизатов ОКиПТ судака» и «Состав биопрепарата на основе плотного остатка гидролизата ОКиПТ» приводятся результаты оценки качества двух полученных препаратов - на основе растворенной профер-ментированной фракции ОКиПТ судака, названного «Хондроэффектин», и мелко суспензированного нерастворенного остатка, получившего название «Протеоми-нераль». Жидкий полуфабрикат, предназначенный для первого продукта, обезвоживали вакуумной сушкой при температуре 50-55°С и давлении Р = 1 - 1,5 кПа. Твердая часть системы, направляемая на получение второго продукта, сушилась при таких же параметрах вакуума и температуре 55-60°С. В обоих случаях сушка

Рисунок 2 - Графическое представление математической модели исследуемого процесса ферментации ОКиПТ судака

проводилась до конечного содержания воды в продукте 8-10%. Высушенные массы тонко измельчали и исследовали по органолептическим, физико-химическим и биологическим показателям (рис. 3-6, табл. 5).

вяленой рыбы вяленой рыбы

соленый

горький

острый

кислый

■специфический

гнилостный

Рисунок 3 - Пр о филогр амма вкуса препарата "Хондроэффекган"

вареных крабов

горький

соленый

шиповника

острый

кислый

специфический

ПП1ЛОСТИЫЙ

Рисунок 5 - Профилограмма вкуса препарата "Протеоминераль"

автолгаированяон рыбы

КИСЛЫЙ

Рисунок 4 - Профилограмма запаха препарата "Хондроэффектин"

вареных крабов

сладосгн

автолпзированнои рыбы

шпповшша

клеши

Рисунок б - Профилограмма запаха препарата "Протеоминераль"

На рис. 3-6 представлены профилограммы вкуса и запаха образцов высушенных форм обоих препаратов, сенсорно отражающие их качественно-количественную характеристику. Основные единичные составляющие вкуса (рис. 4, 6), выявленные в ходе дегустации и иллюстрированные на профилограм-мах, оказались следующими - шиповника, соленый, вареных крабов, вяленой рыбы, кислый, сладкий, специфический, острый, они выражены с различной степенью интенсивности, что количественно отражается в баллах от 0 до 5. Согласно профильной оценке, приведенной на рисунках 3 и 5, запах образцов препаратов можно представить как совокупность ароматов вареных крабов, кислого, сладо-

сти, вяленой рыбы, шиповника, также выраженных с различной степенью интенсивности. Следует отметить, что в обоих продуктах такие желательные вкусо-ароматические составляющие, как вареных крабов, шиповника, вяленой рыбы, проявляются отчетливо (2-4 балла), а нежелательные оттенки (кислый, автоли-зированной рыбы, горький, острый, гнилостный) либо полностью отсутствуют, либо выражены очень слабо.

Основные показатели качества биопрепаратов представлены в табл. 5.

Таблица 5 - Показатели качества образцов новых биопрепаратов

Показатели Характеристика показателя препаратов

«Хондроэффектин» «Протеоминераль»

Внешний вид и цвет Аморфный порошок цветом от светло-коричневого до темно-коричневого, однородный, без посторонних примесей Мелко дисперсный легко рассыпающийся порошок цветом от светло-бежевого до светло-коричневого, без посторонних примесей

Запах Свойственный данной продукции, с оттенком подвяленной рыбы, легким ароматом шиповника, без порочащих и посторонних запахов Свойственный данной продукции, с оттенками запаха сушеной рыбы, обогащенными ароматами плодов шиповника, приятно сбалансированный, слабо интенсивный

Вкус Свойственный, с привкусом внесенных компонентов шиповника, без посторонних оттенков

Выход готового продукта, (% массы сырья) 8 17

Массовая доля воды, % 10 10

Массовая доля жира, % 4,56 2,8

Массовая доля минеральных веществ, % 5,30 24,03

Сульфат-ионы, % 1,20 -

Общий азот, N 0бш..% 11,38 4ДЗ

Общий фосфор, Р о6щ, %. 0,65 6,98

Витамин С, % 2,37

Флавоноиды, мг% 0,5 -

Са, % 0,84 12,84

МВ, % 0,20 0,40

Бе, % 0,036 0,047

Мп, % 0,001 0,004

Ыа, % 1,27 0,65

1 к, % 1,44 0,11

Продолжение таблицы 5

Си, 10"4% <5 40

гп, ю■"% 35 162

№, 10"*% <5 14

Сг, 10"4% 2 2

Видно, что оба препарата содержат низкое количество воды, и этот факт предопределяет их потенциальную хранимоспособность. Интерес в составе биопрепарата «Хондроэффекган» представляют данные по наличию функциональных веществ - хондроишнсульфата (1,2%) и витамина С (2,37%), обуславливающие его эффективность как хондропротекторного средства Полученные значения были использованы для расчета суточных доз биопрепарата. Высокое содержание общего азота (11,38%) указывает на присутствие в препарате важных азотсодержащих веществ (глюкозамина, галакгозамина, аминокислот и пептидов), участвующих в строительстве поврежденных косгао-хрящевых тканей. Положительным моментом является факт количественного соотношения содержания кальция и фосфора, близкого к рекомендуемому Институтом Питания РАМН (Са : Р = 1:0,8). Важной составляющей качества этого продукта является присутствие ценных липидов (4,56%), стабилизированных фитофлавоноидами (0,5%).

В препарате «Протеоминераль» основными биологически активными компонентами являются минеральные вещества, при этом ключевое значение имеет кальций, присутствие которого достигает 12,8 %. Содержание фосфора на уровне 7%, азотистых веществ - 4,13 % при общем высоком выходе продукта (17%) предопределяет эффективность его получения и применения.

По результатам исследований на безопасность по содержанию тяжелых металлов (РЬ, Мб, С<3, Н§) в новых препаратах данные показатели не превышают нормативного уровня, препараты можно считать экологически безопасными.

Состав липидов препарата «Хондроэффектин», приведенный в табл. 6, показывает, что липидная фракция препарата включает значительное количество важных полиненасыщенных жирных кислот (ЖК) классов со 3 и со 6 (17,4% и 8,1% соответственно), витамина Б (линолевая, линоленовая, арахидоновая жирные кислоты), что свидетельствует о биологической ценности продукта по липо-тропно-хондропротекторному эффекту (Данилевская Н.Н. 2002;'Руденко В.Г., 2006 и др.). Химическая устойчивость и стабильность липидов обеспечиваются высоким содержанием в препарате- веществ стабилизаторов-антиоксидантов (табл. 5) - витамина С и биофлавоноидов (соответственно 2,37% и 0,5 мг%).

Таблица 6 фектин», %

Жирные кислоты (ЖК) Содержание в липидной фракции

Сумма насыщенных ЖК, в т. ч. 28,79

14:0 (миристиновая) 3,54

15:0 (пентадекановая) 0,75

16:0 (пальмитиновая) 21,16

17:0 (маргариновая) -

18:0 (стеариновая) 3,2

20:0 (арахиновая) 0,14

Сумма мононенасьпценных ЖК, в т.ч.: 38,62

14 1 (миристолеиновая) а 6 0,25

16 1 (пальмитолеиновая) ш 7 14,02

18 1 (олеиновая) со 9 23,13

18 1 (элаидиновая) ш 9 0,58

20 1 (гадолеиновая) со 9 0,46

Сумма полиненасыщенных ЖК, в т. ч. 24,98

18:2 (линолевая) со 6 4,96

18:3 (линоленовая) со 3 3,39

20:2 (эйкозодиеновая) со 6 0,26

20:4 (арахидоновая) со 6 2,62

20:5 (эйкозопентаеновая) со 3 4,50

22:5 (докозопентаеновая) со 3 1,67

22:6 (докозогексаеновая) со 3 7,58

Сумма со 3 ЖК 17,14

Сумма со 6 ЖК 8,09

Сумма со 9 ЖК 24,17

ПНЖК/НЖК 24,98/28,79

Анализируя химический состав и свойства препаратов «Хондроэффектин» и «Протеоминераль», можно сделать вывод, что они являются функциональными пищевыми продуктами, содержащими важные для опорно-двигательных тканей ингредиенты, которые участвуют в поддержании их постоянного химического состава. При этом «Хондроэффектин» обладает показателями по содержанию БАВ, ответственных за хондропротекторный эффект, а высокоминерализованный препарат «Протеоминераль» имеет состав, благотворный для остеотропного воздействия (Пилат, 2002).

В разделе «Оценка биологической безопасности, хранимоспособности и биологической активности» анализировали биологическую безопасность биопрепаратов двумя методами биотестирования - с применением в качестве тест-объекта инфузории 81у1опусЫа туШш (ГОСТ Р 52337-2005, «Хондроэффектин»)

- Содержание жирных кислот в липидах препарата «Хондроэф-

V? о4 100

«

15 о. 99

О м 98

& ■в- 97

N 9Б

ё 95

о г 94

о С1 93

В

й 92

а

я

г

0,1 0,2 0,4 0,7 0,9 1 1,1

Концагграция препарата* %

Рисунок 7 - Зависимости выживаемости инфузории 8(у1оп1сЫа туШш от концентрации препарата «Хондроэффектин»

и белых лабораторных мышей обоего пола (ГОСТ Р 52337-2005, оба препарата). Результаты первого испытания, свидетельствующие о благоприятном воздействии компонентов биопрепарата «Хондроэффектин» на простейшие организмы, представлены на рис. 7. Из данных рис. 7 видно, что с увеличением концентрации препарата

«Хондроэффектин» в пробе до 0,9% выживаемость 81у1ошсЫа туШш растет. Степень выживаемости инфузорий (95-100%), по которой делается заключение о безопасности продукта (80-100%), свидетельствует о нетоксичности данного препарата. При последующем повышении концентрации препарата до 1,1% выживаемость инфузорий несколько снижается, но значение показателя безопасности при апробированных дозировках остается на уровне «нетоксично».

По результатам арбитражных биологических испытаний на белых мышах оба препарата также оказались «нетоксичными».

Хранимоспособность новых препаратов определяли, оценивая их качество в течение 15 месяцев по изменениям органолептических характеристик, микробиологического показателя КМАФАнМ, сохранению функциональных свойств. Хранение сухих расфасованных форм осуществляли при температуре плюс 4-6 °С. Результаты исследования показали, что все показатели качества препаратов оставались стабильными на протяжении 12 месяцев наблюдений, далее проявлялись незначительные сенсорные дефекты. Это позволило регламентировать срок годности продуктов на уровне одного года.

Оценка биологической активности, проведенная путем клинических испытаний биопрепарата «Хондроэффектин» на добровольцах в условиях поликлиники г. Славска, подтвердила его эффективность как хондропротекторного средства (Приложение М).

Обоснование рекомендуемых суточных доз приема препаратов проведено путем анализа нормативных документов и экспериментально полученных

данных. По содержанию хондроитинсульфата («Хондроэффектин») и кальция («Протеоминераль»), как основных функциональных веществ, с учетом «Методических рекомендаций 2.3.1.2432-08 «Нормы физиологических потребностей в энергии и пищевых веществах для различных групп населения Российской Федерации» были установлены следующие суточные дозы и рекомендуемые схемы приема разработанных продуктов: биопрепарат «Хондроэффектин» - 30 г в сутки (3 раза по 10 г, расфасовка в пакетики по 10 г); белково-минеральный препарат «Протеоминераль» - 10 г в сутки (2 раза по 5 г, расфасовка в пакетики по 5 г). Данные биопрепараты рекомендуются лицам в возрасте старше 40 лет, находящимся в риске спортивной или профессиональной микротравматизации хряща, а также спортсменам и людям, деятельность которых связана с тяжелым физическим трудом. Препарат «Протеоминераль» целесообразно также применять в качестве обогащающей добавки в составе хлебобулочных, колбасных и других поликомпонентных изделий с низким содержанием минеральных веществ.

Результаты исследований позволили обосновать «Технологическую схему получения биопрепаратов «Хондроэффектин» и «Протеоминераль» из ОКиПТ судака», которая представлена на рис. 8. Сущность технологии заключается в предварительной ферментации подготовленных вторичных тканей судака, качество которых регламентируется разработанной документацией (Приложение Б), в среде водно-спиртового экстракта шиповника препаратом «Коллаге-наза пищевая» при обоснованных параметрах, после чего фермент инактивируют тепловой обработкой, систему фильтруют, разделяя ее на жидкую и плотную фракции.

Обе составляющие обезвоживают до массовой доли воды не более 10%. Для сушки жидкой части гидролизата, содержащей биоактивные компоненты хондропротекторного действия (хондроитинсульфат, гексозамины, витамин С, биофлавоноиды, аминокислоты и др.), необходимы щадящие условия, для чего рекомендуется использовать вакуумно-сушильный комплекс, распылительный метод или сублимационную установку (температура не должна превышать 55°С). Плотный остаток, включающий ценные минеральные вещества и белковые компоненты, эффективные при заболеваниях костной системы, рекомендуется сушить вакуумным способом, не допуская повышение температуры более 60°С. В итоге получают биопрепараты «Хондроэффектин» и «Протеоминераль», на изготовление которых подготовлены проекты нормативной документации (ТУ, ТИ, Приложение Г, Д, Е).

Прием и хранение мороженых ОКиПТ

Прием охлажденных ОКиПТ

Размораживание 1

Мойка, ^текание Проварка^ подсушка Отделение сопутствующих тканей -»-На переработку

Измельчение

Приготовление водно-спиртового экстракта

-*• Ферментация ■+■ Подготовка коллагеназы

шиповника (сух. вещ-ва=3,7%) (т= 12-16 ч., t = 42°С)

1

Инактивирование фермента (т= 15-20 мин, I = 70°С)

Жмых

на переработку

Фильтрование

Раствор гидролизата

I

Сушка при мягких условиях

Измельчение

Фасование, упаковывание, маркирование

Готовый продукт «Хондроэффектин»

Хранение

Плотный остаток

I

Сушка при мягких условиях

Измел1чение

Фасование, упаковывание, маркирование

Готовый продукт «Протеоминераль»

Хранение

Рисунок 8 - Схема комплексной переработки ОКиПТ судака на препараты «Хондроэффектин» и «Протеоминераль»

Разработанная технология положительно апробирована в условиях ООО «Калининградские морепродукты», где были переработаны производственные ОКиПТ судака. Качество промышленных партии биопрепаратов положительно оценили специалисты предприятия. Результаты испытания рекомендованы к внедрению (Приложение Н). Разработаны исходные требования на соответствующее технологическое оборудование (Приложение Ж).

В разделе «Эффективность применения результатов исследования» показаны ее основные составляющие (социальный и экономический). Расчетным путем определено значение уровня качества препарата «Хондроэффектин», равное 2,39, что эквивалентно приросту эффекта от повышения качества продукта данного типа на 2,39 %. Приведены калькуляции затрат на себестоимость и стоимость обоих препаратов (Приложение И), свидетельствующие о возможности их рентабельного выпуска по доступным ценам для многих социальных слоев населения.

ВЫВОДЫ

1. Разработаны теоретические и практические основы комплексной переработки опорно-каркасных и покровных тканей рыб на пищевые функциональные продукты. Показано, что комплексная переработка ОКиПТ судака позволяет безотходно, экологически безопасно и экономически рентабельно получать из вторичного рыбного сырья эффективные препараты хондропротекторного и остеотроп-ного действия.

2. Проведен анализ существующих технологий получения и применения функциональных продуктов и биологически активных композиций, под держивающих функции опорно-двигательной системы человека, показавший рациональность ферментативного подхода к комплексной переработке вторичного рыбного сырья в сочетании с фитотехнологиями.

3. Исследован биотехнологический потенциал ОКиПТ балтийского судака, свидетельствующий о наличии в них важных биологически активных веществ (кальция, фосфора, магния, полиненасыщенных жирных кислот, хондроитинсульфата и др.), которые активно участвуют в регенерации опорно-двигательных тканей человека; доказана химическая безопасность данных ОКиПТ.

4. Показана возможность ферментации вторичных отходов от разделки судака пищевой коллагеназой, в ходе которой эффективным консервантом-синергистом, а также источником дополнительных БАВ является водно-спиртовой экстракт

плодов шиповника. Обоснован состав данного экстракта, позволяющий достичь обогащения конечных биопрепаратов ценными функциональными ингредиентами при надежном антисептическом эффекте.

5. Получена математическая модель процесса ферментации ОКиПТ судака, адекватно связывающая обобщенный параметр оптимизации качества процесса и продукта на основе растворимого гидролизата с факторами биодеструкции тканей, позволившая установить характер влияния и оптимальные значения продолжительности и количества фермента.

6. Разработана схема дообработки растворенных продуктов гидролиза в водно-спиртовом экстракте шиповника и твердой высокоминерализованной части ОКиПТ судака, включающая их мягкую сушку при щадящей температуре, тонкое измельчение и формирование готовых форм.

7. Проведена оценка качества биопрепаратов по комплексу органолептических, физико-химических и биологических показателей, иллюстрирующая их рациональность применения и высокую пищевую ценность по содержанию минеральных веществ, полиненасыщенных жирных кислот липидов, антиоксидантов (витамина С, биофлавоноидов), сульфат-иона. Установлены особенности органолептических признаков вкуса и запаха новых продуктов.

8. С применением инфузорий 81у1ошсЫа туШиэ и белых мышей доказана биологическая безопасность препаратов. Клинические испытания препарата «Хонд-роэффекгин» показали его положительный биологический эффект.

9. Разработана схема комплексной переработки ОКиПТ судака, основанная на предварительной ферментации сырья коллагеназой в условиях биоконсервирования, инактивации фермента, разделении фракций, их сушке при мягких температурах, мелком диспергировании и приготовлении готовых форм.

10. Показана функциональность новых продуктов, обоснованы схемы их употребления, рекомендовано применение препарата «Протеоминераль» в технологиях обогащенных пшцевых продуктов.

11. Достоверность разработки доказана ее апробацией в промышленных условиях ООО «Калининградские морепродукты». На технологический процесс и продукты разработаны проекты нормативной документации (ТИ и ТУ «Биопрепарат «Хондроэффектин» и ТУ «Биопрепарат «Протеоминераль»).

12. Проведена оценка эффективности разработанной технологии, основанная на

принципах экономичности, безопасности, экологичности, свидетельствующая о

рациональности ее внедрения в практику.

Основное содержание диссертации отражено в следующих публикациях:

В изданиях, рекомендованных ВАК:

1. Мезенова О .Я. Биологически активный препарат хондропротекторного действия из отходов от разделки судака /О.Я. Мезенова, Е.С. Землякова // Известия вузов. Пищевая технология. - 2007. - № 3. - С. 32 - 34.

2. Землякова Е.С. Биопрепарат из отходов от разделки судака / Е.С. Землякова, О .Я. Мезенова II Рыбпром. - 2008. - № 2. - С. 31-32.

3. Землякова Е.С. Тест-объект для определения токсичности / Е.С. Землякова, П.П. Потапов, О Л. Мезенова // Рыбпром. - 2008. - № 3-4. - С. 32-33.

В других изданиях:

4. Землякова Е.С. О возможности получения препарата хондроитинсульфата из рыб балтийской акватории / Е.С. Землякова, О.Я. Мезенова // Материалы Четвертого съезда Общества Биотехнологов России (6-7 дек.) / Макс Пресс. - М., 2006. - С. 82 - 84.

5. Землякова Е.С. Биотехнологический способ получения БАД к пище хондропротекторного действия из отходов от разделки судака / Е.С. Землякова, О .Я. Мезенова // Проблемы и пути рациональной переработки сырья агропромышленного комплекса: сборник научных трудов / КГТУ. - Калининград, 2007. - С. 192-197.

6. Землякова Е.С. Получение препарата с противоостеоартрозным эффектом из отходов от разделки судака / Е.С. Землякова, О .Я. Мезенова И Рыбная промышленность. -2007.-№2.-С. 30-31.

7. Землякова Е.С, Биотехнология поликомпонентного продукта из отходов от разделки балтийского судака / Е.С. Землякова, О.Я. Мезенова // Перспективные нано- и биотехнологии в производстве продуктов функционального назначения: международная на-учно-пракшческая конференции (11 — 12 окт.): материалы /КубГТУ. - Краснодар, 2007.-С. 109-111.

8. Землякова Е.С, Технология БАД к пище из костно-хрящевой ткани судака Балтийского моря / Е.С. Землякова, О .Я. Мезенова // Низкотемпературные и пищевые технологии в XXI веке: Ш Международная научно-техническая конференция (13-15 ноя.): материалы. - С-Пб., 2007. - С. 314-316.

9. Землякова Е.С. Биотехнологический способ переработки рыбных отходов с целью получения поликомпонентаых пищевых препаратов / Е.С. Землякова, О .Я. Мезенова //Биотехнологические системы как один из инструментов реализации «Государственной программы развития сельского хозяйства и регулирования рынков сельскохозяйственной продукции, сырья и продовольствия на 2008-2012 годы»: международная научно-практическая конференция, посвященная 5-летию со дня основания факультета биотехнологии, товароведения и экспертизы товаров (янв.): материалы / ДонГАУ. -пос. Персиановский, 2008. - С. 31-34.

10. Мезенова О Я. Разработка технологии БАД к пище на основе коллагено-костно-хрящевых отходов рыб и экстрактов лекарственных трав /ОЛ. Мезенова, Е.С. Землякова // Биотехнология. Вода и Пищевые продукты: международная научно-практическая конференции (11-13 марта): материалы. - М., 2008. - С. 146.

11. Землякова Е.С. Технология пищевой профилактической добавки к пище на основе коллагенсодержащих рыбных отходов /Е.С. Землякова, О.Я. Мезенова // Пищевая и

морская биотехнология: проблемы и перспективы: научно-практическая конференция (2-3 июля): тезисы. - М., 2008. - С. 58 - 60.

12. Мезенова О Л. Биотехнологии пищевых продуктов, биологически активных веществ и композиций из водных биологических ресурсов / О Л. Мезенова, Н.Ю. Ключко, Е.С. Землякова, К.Г. Анашкина // Исследования Мирового океана: международная научная конференция (26-30 мая): материалы / Дальрыбвтуз. - Владивосток, 2008. - С. 377 - 380.

13. Мезенова О.Я. Пищевой препарат, поддерживающий функции опорно-двигательной системы человека / О Л. Мезенова, Е.С. Землякова // Пятый съезд Общества Биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова (2-4 дек.): материалы. - М., 2008. - С. 343 - 345.

14. Землякова Е.С. Технология полифункциональной обогащенной добавки к пище из непищевых тканей рыб /Е.С. Землякова, О Л. Мезенова // Инновации в науке и образовании— 2008: VI юбилейная международная научная конференция, посвященная 50-летию пребывания КГТУ на Калининградской земле (21-23 окт.): материалы /К1ТУ. -Калининград, 2008. - С. 294 - 297.

15. Мезенова О Л. Разработка эффективных биотехнологий пищевых продуктов и биологически активных композиций из недоиспользуемых гидробионтов Балтийского моря / О Л. Мезенова, Н.Ю. Ключко, Е.С. Землякова, К.Г. Анашкина // Биотехнологические процессы и продукты переработки биоресурсов водных и наземных экосистем: I Международная научно-практическая конференция, посвященная 450-летию города Астрахани (30 сен. - 3 окт.): материалы / АГТУ. - Астрахань, 2008. - С. 102-105.

16. Землякова Е.С. Моделирование и оптимизация процесса ферментации в технологии полифункциональной добавки / Е.С. Землякова, ОЛ. Мезенова // Наука и образование

- 2009: международная научно-техническая конференция (1-9 апр.): материалы / МГТУ. - Мурманск, 2009. - С. 396 - 399.

17. Землякова Е.С. Комплексное использование опорно-каркасных и покровных тканей судака в технологии биопрепаратов / Е.С. Землякова, ОЛ. Мезенова // «Инновации в науке и образовании - 2009»: VII Международная научная конференция (20-22 окт.): материалы / КГТУ. - Калининград, 2009. - С. 317-319.

18. Землякова Е.С. Моделирование и оптимизация процесса ферментации коллагено-костно-хрящевой ткани судака в технологии полифункциональной добавки / Е.С. Землякова, ОЛ. Мезенова // Вестника научной молодежи - 2009, КГТУ. - Калининград, 2009. -С. 223-228.

19. Землякова Е.С. Комплексная переработка вторичного сырья от разделки судака с получением биопрепаратов / Е.С. Землякова, О Л. Мезенова // Олимпиада 2014: Технологические и экологические аспекты производства продуктов здорового питания: Международной научно-практической конференции (1-3 июня): материалы / КубГТУ.

- Краснодар, 2009. - С. 119-121.

20. Мезенова ОЛ. Биотехнологии обогащенных пищевых продуктов и биологически активных композиций из недоиспользуемых гидробионтов / ОЛ. Мезенова, Н.Ю. Ключко, Е.С. Землякова, КГ. Анашкина // Олимпиада 2014: Технологические и экологические аспекты производства продуктов здорового питания: Международной научно-практической конференции (1-3 июня): материалы / КубГТУ. - Краснодар, 2009. -С. 209-211.

21. Пат. 2355240 РФ, МПК А 23 L 1/325, 1/30, 61 К 35/00. Способ получения препарата хондропротекторного действия / ОЛ. Мезенова, Е.С. Землякова (Россия). - № 2008101342

Землякова Евгения Сергеевна

КОМПЛЕКСНАЯ ПЕРЕРАБОТКА ОПОРНО-КАРКАСНЫХ И ПОКРОВНЫХ ТКАНЕЙ СУДАКА НА ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ПРОДУКТЫ

Подписано в печать 9.11.09.2009 г. Заказ И. объем 1 пл. Бумага 60x84 (1/16). Тираж 110 экз.

УОП ФГОУ ВПО «КГТУ» 236000, Калининград, Советский пр., 1

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Значение биопрепаратов и перспективы их использования

1.2 Недоиспользуемые рыбные ресурсы и перспективы их применения в 31 технологии биопрепаратов

1.3 Состояние и перспективы развития биотехнологий в перерабатываю- 39 щей промышленности

1.4 Фитокомпозиции и их применение в технологии биопрепаратов

1.5 Современные направления переработки опорно-каркасных и покровных тканей сырья животного происхождения

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1 Общая методологическая схема исследований

2.2 Сырье и материалы исследований

2.3 Методы исследований

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Характеристика вторичного рыбного сырья, направляемого для изго- 77 товления функциональных биопрепаратов,предназначенных для людей с заболеваниями опорно-двигательной системы

3.2 Обоснование использования фитоэкстрактов в технологии функцио- 84 нальных биодобавок

3.3 Моделирование и оптимизация ферментативного гидролиза сырья

3.4 Исследование состава и свойств растворенной фракции ферментиро- 94 ванных гидролизатов ОКиПТ судака

3.5 Состав биопрепарата на основе плотного остатка гидролизата ОКиПТ

3.6 Оценка биологической безопасности, хранимоспособности и биологи- 123 ческой активности

3.7 Обоснование рекомендуемых суточных доз приема препаратов «Хон- 129 дроэффектин» и «Протеоминераль»

3.8 Технология комплексной переработки сырья с получением функцио- 136 нальных препаратов

3.9 Производственные испытания разработанной технологии

3.10 Эффективность применения результатов исследования 144 ВЫВОДЫ 148 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 150 ПРИЛОЖЕНИЯ:

А. Шкала баллов при органолептической оценке качества биопрепарата 172 «Хондроэффектин»

Б. Проект ТУ «Пищевое вторичное рыбное сырье мороженое, предназна- 178 ченное для изготовления биопрепаратов»

В. Региональные нормы расхода сырья при производстве пищевой рыбной 182 продукции из охлажденного, мороженого сырья и соленого полуфабриката на береговых предприятиях

Г. ТУ «Биопрепарат «Хондроэффектин» (проект)

Д. ТУ «Биопрепарат «Протеоминераль» (проект)

Е. Технологическая инструкция по изготовлению биопрепарата «Хондро- 205 эффектин» биопрепарата «Протеоминераль» (проект)

Ж. Исходные требования к организации производства биопрепаратов

И. Расчет экономической эффективности

К. Нормы физиологических потребностей в энергии и пищевых веществах 222 для различных групп населения

Л. Патент РФ № 2355240 Способ получения пищевого препарата хондро- 225 протекторного действия

М. Отзыв на применение биопрепарата «Хондроэффектин»

Н. Акт производственных испытаний, проведенных на ООО «Калинин- 228 градские морепродукты»

П. Результаты исследований по экспертизам

Р. Санитарно-эпидемиологическое заключение на «Коллагеназу пищевую»

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

OA - остеоартороз (остеоартрит)

Б АД - биологически активные добавки

БАВ - биологически активные вещества

ОКиГТГ - опорно-каркасные и покровные ткани

ККХТ - коллагено-костно-хрящевые ткани

ГАГ - гликозаминогликаны

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт

ХС - хондроитинсульфат

ДС - дерматансульфат

ПГ - протеогликаны

ОЦКП - ортогональный центральный композиционный план

ПНЖК - полиненасыщенные жирные кислоты

ЖК - жирные кислоты

ПВРС - пищевое вторичное рыбное сырье

Выражаю искреннюю благодарность моему научному руководителю заведующей кафедрой биотехнологии ФГОУ ВПО «КГТУ», доктору технических наук, профессору Мезеновой Ольге Яковлевне за ценные советы и помощь в работе.

Благодарю также к.т.н., доцента Байдалинову Ларису Степановну, к.т.н., доцента Бессмертную Ирину Анатольевну, к.т.н., доцента Ключко Наталью Юрьевну, к.т.н., доцента Лысову Альбину Сергеевну, ведущего инженера Го-родниченко Людмилу Владимировну, заведующего лабораторией Пастулова Игоря Яковлевича и других сотрудников кафедры пищевой биотехнологии ФГОУ ВПО «КГТУ» за всестороннюю помощь и поддерэ/ску. Также выражаю благодарность сотрудникам Института океанологии им. П.П. Шершова РАН Адамович Анели Браниславовне и Лихиной Анастасии Александровне, заведую-гцему лабораторией ФГУП «АтлантНИРО» Шульжику Валерию Дмитриевичу и сотрудникам ФГУ «Калининградская межобластная ветеринарная лаборатория» за содействие в исследованиях.

Выражаю признательность инженеру Хохшуле Бремерхафен (г. Бремер-хафен, Германия) фрау Гэбауэр за помощь в получении данных по жирнокис-лотному составу липидов.

Выражаю особую благодарность руководству ООО «Калининградские морепродукты» - генеральному директору Вассеру Юрию Евгеньевичу и директору Сыромятину Александру Михайловичу за содействие в проведении производственных испытаниях. Признательна хирургу Славской поликлиники ЦРБ Ля-шиной Елене Сергеевне за помощь в проведении клинических испытаний.

Благодарна всем, кто содействовал или был причастен к данной работе.

Актуальность работы. Исследования по совершенствованию использования биопотенциала вторичного сырья агропромышленного комплекса постоянно ведутся учеными многих стран мира [3, 6, 7, 12, 23, 26-28, 59, 60, 91, 133, 157, 165, 166, 169,176- 178, 180, 184,191].

В настоящее время подготовлен проект Основ политики Российской Федерации в области здорового питания населения на период 2006—2020 г.г., в котором обозначены приоритетные направления государственной политики в данной области. К ним относятся: улучшение питания детского населения; профилактика микронутриентной недостаточности; алиментарная профилактика нарушений и заболеваний, связанных с питанием, прежде всего, среди групп риска из групп населения с низкими доходами; безопасность пищи, образование специалистов и населения в вопросах здорового питания.

Государственная политика здорового питания населения России определяет также стратегию достижения таких приоритетов, как научное обеспечение новейших технологий глубокой переработки продовольственного сырья и производства пищевых продуктов нового поколения; совершенствование государственной системы контроля качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов; усиление государственного надзора и производственного контроля; увеличение производства дефицитных, в том числе обогащенных витаминами и минеральными веществами, получение белка и биологически активных добавок к пище (БАД) из нетрадиционных источников [2а, 53].

По данным Института медико-биологических проблем РАН сегодня в России ситуация со здоровьем населения приблизилась к критической - абсолютно здоровых людей насчитывается около 4 % [142]. С каждым годом рацион современного человека теряет природные биологически активные компоненты, замещая их искусственными, часто вредными и чуждыми организму веществами. На сегодняшний день актуально использование природных добавок, как доступного источника жизненно необходимых элементов пищи, так как последняя при традиционном питании не может обеспечить организм необходимым материалом. Острее встает вопрос при нарушении обменных процессов, когда отсутствие необходимых веществ ведет к необратимым последствиям для организма [143, 144].

Примером такого нарушения является остеоартрит (остеоартроз — OA), проблема которого в последнюю четверть века приобрела огромное общемедицинское и социальное значение, определяемое широкой распространенностью болезни, быстрым развитием функциональных нарушений при поражении несущих суставов нижних конечностей — коленных, тазобедренных. По данным патологоанатомических исследований глубокие изменения хряща встречаются у 95% людей старше 40 лет и у 100% - старше 60 лет. Данное заболевание (OA) сопровождается разрушением суставного хряща и прилегающей костной ткани, и поражает крупные суставы. В этиологии этого заболевания играют определенную роль повышенная функциональная нагрузка на суставы (в том числе вследствие избыточного веса), травмы и нарушения работы клеток хряща [1, 31, 52, 67, 71, 92, 121, 127, 128].

Важнейшим моментом патогенеза OA является формирование протеог-ликановой недостаточности, заключающейся в деполимеризации белково-полисахаридных комплексов с образованием более мелких соединений, которые покидают хрящ. При этом также нарушается функция хондроцитов, они синтезируют менее стабильные протеогликаны, развивается утрата физиологических свойств хряща, что сопровождается образованием в хряще эрозий и трещин. OA редко угрожает жизни, но характеризуется длительным и прогрессирующим характером течения, высокой частотой формирования инвалидности. В схеме лечения OA и других болезней суставов (артритов) применяется симптоматическое лечение противовоспалительными препаратами, которые до сих пор остаются основным средством лечения дегенеративных поражений суставов [52, 67, 159, 189, 194].

В последнее время в лечебной практике находят все большее применение комплексные пищевые препараты, позволяющие воздействовать на нарушенные процессы обмена, исходя из особенностей протекания заболевания. Их состав должен удовлетворять потребностям организма в период заболевания. Помимо «строительного материала» хрящевой ткани рацион человека должен содержать повышенное количество минеральных веществ и антиоксидантов. Особое место отводится кальцию, основному минеральному веществу костной ткани, находящемуся непосредственно под суставным хрящом, так как изменения в хряще сказываются и на состояние костной ткани. Также при OA для нейтрализации свободных радикалов, неизбежно появляющихся в очаге хронического воспаления, необходимо присутствие в рационе больного достаточного количества веществ-антиоксидантов, способствующих замедлению дегенерации хрящевой и костной ткани [17].

В настоящее время для получения препаратов, поддерживающих функции опорно-двигательного аппарата, используются преимущественно кост-но-хрящевые ткани крупного рогатого скота (трахеи, легкие, хрящи и т.д.). В последнее время популярными стали биодобавки из тканей акул, разработаны также технологии переработки опорных тканей хрящевых рыб, а также хрящевых участков костистых рыб [1, 33, 36, 93, 100, 101, 164]. Однако данных препаратов чрезвычайно не хватает для потребностей нашей страны, где OA является прогрессирующим заболеванием, при этом следует отметить, что основные препараты имеют импортное происхождение и высокие цены. Следует также подчеркнуть, что потребители данных продуктов относятся, как правило, к малообеспеченному классу людей (пожилые люди), которые не могут позволить себе приобретать дорогие препараты и функциональные биопродукты.

С учетом сказанного перспективной для получения эффективных биопрепаратов, предназначенных для профилактики заболеваний опорно-двигательных тканей человека, представляется разработка комплексной технологии переработки костно-хрящевых и покровных тканей костистых рыб Балтийского региона (судак, лещ, салака и др.), богатых необходимыми активными компонентами. Данное сырье, которое в значительных количествах накапливаются на действующих рыбоперерабатывающих предприятиях региона, используется преимущественно для кормовых целей, то есть недоиспользуемым остается его природный биопотенциал, что предопределяет актуальность его направления на переработку для получения функциональных биопрепаратов пищевого назначения [83, 89].

Перспективным для данных целей представляется судак балтийский -традиционный объект лова в Калининградском регионе. Объемы вылова судака стабильны и составляют 400-450 тон в год. Судак является одной из наиболее ценных промысловых рыб. Мышечная ткань судака обладает высокими органолептическими и диетическими свойствами, поэтому основное направление реализации судака - производство филе. Согласно Региональным нормам расхода сырья при производстве пищевой рыбной продукции из охлажденного, мороженого сырья и соленого полуфабриката на береговых предприятиях [114], твердые отходы, а именно опорно-каркасные и покровные ткани судака (кожа, кости, головы, чешуя, плавники), получаемые при разделке рыбы на филе, имеют высокий удельный вес и поэтому вопрос реализации их в условиях Калининградского региона является актуальным.

Опорно-каркасные и покровные ткани рыб (кожа, кости, головы, чешуя, плавники) рассматриваются многими учеными как источники полезных для организма человека веществ, таких как протеины (прежде всего, коллаген и продукты его гидролиза), минеральные вещества (кальций, фосфор, калий, магний и др.), липиды, гликозаминогликаны. Имеются многочисленные сведения о положительном влиянии данных веществ на метаболизм и регенерацию тканей, поврежденных при нарушении обменных процессов при артритах и артрозах [1, 17, 187, 188]. Коллаген, глюкозаминогликаны и минеральные вещества являются "готовым строительным материалом" и способны накапливаться в очагах воспаления [1, 24, 40, 121, 125, 193]. Они входят в состав ряда медицинских и профилактических препаратов, поддерживающих функции опорно-двигательного аппарата.

Вопросами получения препаратов поддерживающих функции опорно-двигательного аппарата из гидробионтов занимались многие ученые: Албу-лов А.И., Блинов Ю.Г., Бочаров JI.H., Быкова В.М., Варламов В.П., Вахрушев А.И., Дацун В.М., Ежова Е.А., Каленик Т.К., Ковалев Н.Н., Максимова С.Н., Мукатова М.Д., Мухин В.А., Немцев С.В., Новиков В.Ю., Пивненко Т.Н., Сафронова Т.М., Слуцкая Т.Н., Сорокоумов И.М., Суховерхова Г.Ю., Сытова М.В., Харенко Е.Н., Эпштейн JI.M., Assavanig Apinya, Lertsiri Sittiwat, Nilsang Suthasinee, Suphantharika Manop и др. Однако в их работах рассмотрены преимущественно технологии переработки твердых тканей хрящевых рыб (акул, скатов. ) или морепродуктов (кукумарии, трепанга). Имеются также единичные исследования по прикладному использованию биопотенциала хрящевых тканей костистых рыб [133]. Однако имеющиеся работы в основном направлены на получение высококонцентрированных препаратов по функциональному веществу - хондроитинсульфату, что требует сложной переработки нестабильного в хранении сырья для его выделения, очистки и консервирования. В итоге теряется значительная часть биопотенциала природных тканей, богатых другими эффективными макро- и микронутриентами (минеральными веществами, глюкозамином, аминокислотами, полиненасыщенными жирными кислотами и др.). Разработанные технологии трудны для внедрения, так как требуют специального оборудования, а готовые препараты получаются дорогими и малодоступными для населения с невысоким уровнем дохода.

В связи со сказанным представляется перспективным разработка препаратов из вторичного рыбного сырья, содержащих хондроитинсульфат в биокомплексе с сопутствующими природными эффективными компонентами (кальций, фосфор, магний, жирные кислоты класса омега 3 и омега 6, аминокислоты и др.), надежно стабилизированными функциональными веществами растений, которые зарекомендовали себя в профилактике названных заболеваний и недостаточно используются в биотехнологии гидробионтов.

Например, установлено, что биофлавоноиды, витамин С природного происхождения, помимо своих антиоксидантных свойств принимают участие в обеспечении синтеза костной ткани, коллагеновых волокон, аминогликанов хрящей [67], поэтому для повышения функциональности препараты хондро-протекторного действия помимо "строительного материала" должны содержать выше указанные ингредиенты. Обоснованным выше требованиям, предъявляемым к фитодобавке, удовлетворяют плоды шиповника, традиционно применяемые в фитотерапии при лечении и профилактике многих заболеваний, включая болезни опорно-двигательного аппарата человека [108, 129, 146]. Ценность данного сырья заключается в химическом составе плодов растения и их фармакологических свойствах. Плоды шиповника содержат сахара, пектины, дубильные вещества, органические кислоты, флавоноиды, аскорбиновую кислоту, витамины В^ В2, Р и РР, К, каротин, соли железа, марганца, фосфора, магния, кальция. По существу определяет активность плодов растения аскорбиновая кислота. Плоды шиповника и лечебные препараты из них значительно повышают окислительно-восстановительные процессы в организме, так как аскорбиновая кислота и дегидроаскорбиновая кислота, образующаяся при ее окислении, участвует в окислительном деза-минировании ароматических аминокислот, активируют ряд ферментных систем, стабилизируют содержание адреналина, стимулируют сопротивляемость организма к вредным воздействиям внешней среды. Плоды шиповника, кроме того, усиливают синтез гормонов, регенерацию тканей, обладают противовоспалительными свойствами. Данные свойства предопределяют их консервирующий эффект, что позволяет их применять при ферментации опорно-каркасных и покровных тканей рыб, сопровождающейся процессами микробиологического обсеменения.

Таким образом, актуальными и целесообразными являются сегодня исследования, направленные на разработку способа комплексной переработки вторичного сырья рыбной промышленности с использованием экстрактов растений, направленные на получение пищевого препарата, поддерживающего функции опорно-двигательного аппарата и обладающего улучшенными органолептическими характеристиками, стойкостью в хранении и действенным биологическим эффектом. Целесообразно для этого использовать биотехнологические методы деградации сырья (ферментация в среде фитоком-понентов), позволяющие не только сохранять его биопотенциал, но и обеспечить надежность, безотходность и экологичность производства, получить доступные для широкого потребителя ценные биопродукты. Данная разработка в итоге будет способствовать решению важных социальных задач, направленных на обеспечение здоровья нации и внедрение в производство эффективных комплексных экологически безопасных биотехнологий на рыбоперерабатывающих производствах.

Цель работы заключалась в разработке на примере судака комплексной переработки опорно-каркасных и покровных тканей рыб для получения пищевых функциональных препаратов хондропротекторного и остеотропного действия. Для достижения цели необходимо было решить следующие задачи:

• Провести анализ научной литературы в области получения и применения биологически активных препаратов и функциональных продуктов.

• Исследовать биопотенциал ОКиПТ балтийского судака и возможность их комплексной переработки.

• Получить математическую модель и оптимизировать процесс ферментативного гидролиза ОКиПТ коллагеназой в среде фитоконсерванта.

• Разработать схемы дообработки растворимого продукта гидролиза и высокоминерализованной части ОКиПТ судака;

• Исследовать качество полученных биопрепаратов, отметить особенности органолептических признаков готовых форм.

• Оценить биологическую безопасность полученных препаратов, провести клинические испытания.

• Разработать комплексную технологию переработки ОКиПТ судака'.

• Показать функциональность, обосновать рациональные схемы употребления и суточные дозы новых биопрепаратов.

• Провести производственные испытания и оценить эффективность работы'

• Подготовить проекты нормативной документации.

Научная новизна. Обоснована технология комплексной переработки опорно-каркасных и покровных тканей судака на пищевые функциональные препараты, предназначенные для людей с заболеваниями опорно-двигательного аппарата. Изучен химический состав рыбного вторичного сырья, на основании которого обоснован биотехнологический способ его ферментативной деструкции пищевой коллагеназой в водно-спиртовом экстракте плодов шиповника. Способ позволяет перевести в растворенное состояние из ОКиПТ основную массу биологически активных веществ хондропротектор-ного действия, эффективных в высушенном состоянии (препарат «Хондро-эффектин») и получить мелкодисперсную высокоминерализованную композицию нерастворенных ингредиентов, активных в составе биопрепарата ос-теотропной направленности (препарат «Протеоминераль»). Разработана математическая модель ферментативного гидролиза биотканей, связывающая выход растворенной фракции БАВ, массовые доли в ней сухих веществ и аминного азота, органолептическую оценку биопрепарата «Хондроэффек-тин» с продолжительностью ферментации и количеством коллагеназы, позволившая оптимизировать их значения. Исследованы качественные характеристики готовых высушенных форм препаратов «Хондроэффектин» и «Протеоминераль», подтвердившие их функциональность. С применением профильного метода охарактеризованы особенности органолептических признаков вкуса и запаха новых биопродуктов. Определены минеральный и жирно-кислотный составы препаратов, представленные ценными микроэлементами (кальций, фосфор, магний и др.) и эссенциальными жирными кислотами (класса соЗ и саб), определено содержание аскорбиновой кислоты, биофлаво-ноидов. С применением инфузорий Stylonichia mytilus и мышей белых показана биологическая безопасность препарата «Хондроэффектин», в клинических испытаниях установлен положительный эффект его применения.

Новизна технологического решения подтверждена Патентом РФ №2355240 на «Способ получения препарата хондропротекторного действия».

Практическая значимость работы заключается в выявлении перспективных сырьевых источников для производства доступных функциональных биопрепаратов, предназначенных для поддержания функции опорно-двигательного аппарата человека. На примере ОКиПТ судака разработан эффективный способ комплексной, безотходной, экологически безопасной переработки вторичного сырья рыбоперерабатывающих производств. Результаты экспериментальных исследований положительно апробированы в производственных условиях ООО «Калининградский морепродукт» (г. Светлый).

Разработаны проекты нормативной документации на сырье и готовые биопрепараты «Хондроэффектин» и «Протеоминераль». Обоснованы исходные требования на оборудование по комплексной переработке вторичных рыбных отходов на биопрепараты хондропротекторного и остеотропного действия. Показана эффективность производства новых функциональных продуктов.

На защиту выносятся:

• Результаты научного проектирования ферментативной переработки опорно-каркасных и покровных тканей судака.

• Показатели качества биологически активных препаратов «Хондроэффектин» и «Протеоминераль», обосновывающие биологическую ценность, безопасность и функциональность продуктов (органолеп-тические, физико-химические, биологические).

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

ВЫВОДЫ

1. Разработаны теоретические и практические основы комплексной переработки опорно-каркасных и покровных тканей рыб на пищевые функциональные продукты. Показано, что комплексная переработка ОКиПТ судака позволяет безотходно, экологически безопасно и экономически рентабельно получать из вторичного рыбного сырья эффективные препараты хондропро-текторного и остеотропного действия.

2. Проведен анализ существующих технологий получения и применения функциональных продуктов и биологически активных композиций, поддерживающих функции опорно-двигательной системы человека, показавший рациональность ферментативного подхода к комплексной переработке вторичного рыбного сырья в сочетании с фитотехнологиями.

3. Исследован биотехнологический потенциал ОКиПТ балтийского судака, свидетельствующий о наличии в них важных биологически активных веществ (кальция, фосфора, магния, полиненасыщенных жирных кислот, хондроитинсульфата и др.), которые активно участвуют в регенерации опорно-двигательных тканей человека; доказана химическая безопасность данных ОКиПТ.

4. Показана возможность ферментации вторичных отходов от разделки судака пищевой коллагеназой, в ходе которой эффективным консервантом-синергистом, а также источником дополнительных БАВ является водно-спиртовой экстракт плодов шиповника. Обоснован состав данного экстракта, позволяющий достичь обогащения конечных биопрепаратов ценными функциональными ингредиентами при надежном антисептическом эффекте.

5. Получена математическая модель процесса ферментации ОКиПТ судака, адекватно связывающая обобщенный параметр оптимизации качества процесса и продукта на основе растворимого гидролизата с факторами биодеструкции тканей, позволившая установить характер влияния и оптимальные значения продолжительности и количества фермента.

6. Разработана схема дообработки растворенных продуктов гидролиза в водно-спиртовом экстракте шиповника и твердой высокоминерализованной части ОКиПТ судака, включающая их мягкую сушку при щадящей температуре, тонкое измельчение и формирование готовых форм.

7. Проведена оценка качества биопрепаратов по комплексу органолептиче-ских, физико-химических и биологических показателей, иллюстрирующая их рациональность применения и высокую пищевую ценность по содержанию минеральных веществ, полиненасыщенных жирных кислот липидов, антиок-сидантов (витамина С, биофлавоноидов), сульфат-иона. Установлены особенности органолептических признаков вкуса и запаха новых продуктов.

8. С применением инфузорий Stylonichia mytilus и белых мышей доказана биологическая безопасность препаратов. Клинические испытания препарата «Хондроэффектин» показали его положительный биологический эффект.

9. Разработана схема комплексной переработки ОКиПТ судака, основанная на предварительной ферментации сырья коллагеназой в условиях биоконсервирования, инактивации фермента, разделении фракций, их сушке при мягких температурах, мелком диспергировании и приготовлении готовых форм.

10. Показана функциональность новых продуктов, обоснованы схемы их употребления, рекомендовано применение препарата «Протеоминераль» в технологиях обогащенных пищевых продуктов.

11. Достоверность разработки доказана ее апробацией в промышленных условиях ООО «Калининградские морепродукты». На технологический процесс и продукты разработаны проекты нормативной документации (ТИ и ТУ «Биопрепарат «Хондроэффектин» и ТУ «Биопрепарат «Протеоминераль»).

12. Проведена оценка эффективности разработанной технологии, основанная на принципах экономичности, безопасности, экологичности, свидетельствующая о рациональности ее внедрения в практику.

1. Алексеева Л.И. Структум (хондроитинсульфат) новое средство для лечения остеоартроза / Л.И. Алексеева, Л.И. Беневоленская, Е.Л. Насонов // Терапевтический архив. - 1995. - № 5. - С. 25-30.

2. Антипова Л.В. Получение коллагеновых субстанций на основе ферментативной обработки вторичного сырья мясной промышленности/ Л.В. Антипова, И.А. Глотова // Известия вузов. Пищевая технология. 2000. - № 5-6. - С. 1721.

3. Артюхова С.А. Технология продуктов из гидробионтов. / Учебник под редакцией Т.М. Сафроновой и В.И. Шендерюка / С.А. Артюхова, В.Д. Богданов, В.М. Дацун и др. -М.: Колос, 2001. 496 с.

4. Бассейновые нормы отходов, потерь, выхода готовой продукции и расхода сырья при производстве мороженой продукции из рыб Дальнего Востока. М.: Государственный комитет Российской Федерации по Рыболовству, 2003. - 70 с.

5. Белая О. В. Обоснование и разработка технологии рыбного концентрата для функциональных продуктов питания в профилактике остеопороза: автореф. дисс. канд. техн. наук./ Тихоокеан. гос. экон. ун-т; О.В. Белая. Владивосток, 2005. - 26 с.

6. Белоусова С.В. Переработка малоценной рыбы ферментативными методами / Белоусова С.В., Запорожский А.А //Известия вузов. Пищевая технология. -2007.-№3.-С.48-49.

7. Биотехнология морепродуктов: учеб. пособие / Л.С. Байдалинова, А.С. Лысова, О.Я. Мезенова, Н.Т. Сергеева и др. М.: Мир, 2006. - 560 с.

8. Богданов В.Д. Структурообразователи и рыбные композиции / В.Д. Богданов, Т.М. Сафронова. М.: ВНИРО, 1993. - 171 с.

9. Ю.Боева Н.П. Технология кормовой муки из мелких рыб повышенной жирности / Н.П. Боева // Рыбное хозяйство. 2002. - №3. - С. 53-55.

10. П.Боева Н.П. Состояние и перспективы развития производства кормовой муки из гидробионтов / Н.П. Боева // Рыбная промышленность. 2004. - №3. - С. 1415.

11. Браудо Е.Е. Повышение пищевой ценности белков люпина методом ограниченного ферментативного гидролиза/ Е.Е. Браудо, А.Н. Даниленко, Л.Г. Еисее-ва, И.А. Махотина // Известия вузов. Пищевая технология. — 2006.-№2-3.- С. 69-70.

12. Н.Волошина (Белая) О.В. Концентрат рыбный белковый для профилактики и лечения остеопороза/ О.В. Волошина (Белая), М.В. Палагина, А.А. Набокова и др. // Рыбная промышленность. 2005. - №3. - С. 46-48.

13. Воробьев В.В. Проблемы и перспективы развития биотехнологий в рыбной промышленности / В.В. Воробьев // Рыбное хозяйство. 2006. - №2. - С. 8587.

14. Гичев Ю. Ю. Руководство по биологически активным пищевым добавкам/ Ю.Ю. Гичев, Ю.П. Гичев. М: Триада-Х, 2001. - 224 с.

15. Глотова И. А. Новые полифункциональные коллагеновые полуфабрикаты / И.А. Глотова, Е.М. Сушкова, Т.А. Бредихина // Матер. 35 Отчета науч. конф. Воронеж, гос. технол. акад. за 1996 г. Воронеж, 1997. - С. 48.

16. ГОСТ 2116-2000. Мука кормовая. -Минск.: Национальные стандарты, 2003.12 с. * (

17. ГОСТ Р 52349-2005 Продукты пищевые функциональные. Термины и определения М.: Госстандарт, 2005. - 19 с.20 а. ГОСТ Р 52337-2005 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения общей токсичности. — М.: Госстандарт, 2005. — 19 с.

18. Грачева И.М. Технология ферментных препаратов / И.М. Грачева, А.Ю. Кривова. — М.: Колос, 2000. 512 с.

19. Гусев Н.Б. Внутриклеточные Са-связывающие белки. Классификация и структура / Н.Б. Гусев // Соросовский образовательный журнал. 1998.-№ 5.- С. 10-16.

20. Давидович В.В. Биотехнология биологически активной добавки к пище «Моллюскам»: дисс. канд. техн. наук / ФГУП «ТИНРО-центр»; В.В. Давидович. Владивосток, 2005.-166 с.

21. Данилевская Н.В. Хондропротекторы и их использование в ветеринарии / Н.В. Данилевская, А.А. Николаев // Ветеринар. 2002. - № 3. - С. 45-49.

22. Демина Н.С. Коллагенолитические ферменты, синтезируемые микроорганизмами (обзор) / Н.С. Демина, С.В. Лысенко // Микробиология. 1996. - Т. 65, вып. 3. - С. 293-304.

23. Долганова Н. В. Концепция комплексного использования вторичных ресурсов предприятий рыбной промышленности / Н.В. Долганова // Вестн. Астра-хан. гос. техн. ун-та. 2000. - С. 150-155.

24. Дроздова Л.И. Коллагеновые концентраты из тканей гидробионтов и их использование в функциональных продуктах/ Л.И, Дроздова, М.В. Орлова, Т.Н. Пивненко //Рыбное хозяйство. 2008. - №3. - С. 97 - 100.

25. Дубровская Т. Образование отходов при переработке морепродуктов и возможности их использования / Т. Дубровская // Рыб. хозяйство. -1995.-№ 6.-С. 52

26. Зайцев В.П. Комплексное использование морских организмов./ В.П. Зайцев, И.С. Ажгихин, В.Г. Гандаль. -М.: Пищевая промышленность, 1980. -279 с.31 .Зайчик А. Ш. Патофизиология. Общая патофизиология / А.Ш. Зайчик, Л.П. Чурилов. СПб.: Элби, 2001. - 624 с.

27. Заявка РФ № 95110213/14. Способ получения пористого коллагенсодержаще-го материала / Е.А. Подорожко, В.К. Кулакова, Е.А. Курская, В.И. Лозин-ский//БИ, 1995.

28. Иванкин А.Н. Получение гепарина и хондроитинсульфата из животной ткани ионообменным методом / А.Н. Иванкин, А.Д. Неклюдов // Прикладная биохимия и микробиология. 1998. - №6. - С. 692-697.

29. Игнатова Е.Ю. Принципы извлечения и очистки гиалуроновой кислоты (обзор) / Е.Ю. Игнатова, А.Н. Гуров // Химический фармацевтический журнал. -1990. -Т. 24, №3. С. 42-46.

30. Касьянов Г.И. Технология переработки рыбы и морепродуктов. / Г.И. Касьянов, Е.Е. Иванова, Н.А. Студенцова и др. Ростов-на-Дону: Март, 2001. - 416 с.

31. Касьянов Г.И. Ферментативный гидролиз коллагенового сырья животного происхождения/ Г.И. Касьянов, Н.Ю. Герасимова, В.А. Бирбасов, Ч.Ю. Шам-ханов.// Известия вузов. Пищевая технология.-2008. № 4. - С. 17-20.

32. Касьянов Г.И. Нанобиотехнология переработки рыбного сырья / Г.И. Касьянов, О.В. Сарапкина, С.В. Белоусов. Краснодар: КрасНИИРХ, 2006. - 150 с.

33. Кизеветтер И.В. Биохимия сырья водного происхождения / И.В. Кизеветтер. -М.: Изд-во «Пищевая пром-ть», 1973. 423 с.

34. Киладзе А.Б. Рыбные отходы ценное сырье / А.Б. Киладзе // Рыбное хозяй-ство.-2004.-№3.-С. 58.

35. Ким Г.Н. Аминосахара и полисахариды в сырье и пище из гидробионтов: учеб. пособие / Г.Н. Ким, С.Н. Максимова, Т.М. Сафронова. Владивосток: ДГТРУ, 2007. - 85 с.

36. Кисиль Н.Н. Аминокислоты как существенные факторы питания/ Н.Н. Кисиль // Пищевые ингредиенты: сырье и добавки. 2007. - №2. - С. 52 -53.

37. Кисиль,Н.Н. Аминокислоты эффективные пищевые добавки/ Н.Н. Кисиль, Э.М. Тер-Саркисян // Пищевая промышленность. - 2008. - №2. - С. 47.

38. Кисиль Н.Н. Исследования биологически активных добавок к пище / Н.Н. Кисиль // Пищевые ингредиенты: сырье и добавки. 2007. - №1. - С. 52 - 53.

39. Кислухина О.В. Ферменты в производстве пищи и кормов/ О.В. Кислухина. -М.: Дель принт, 2002. 335с.

40. Клиническая фармакология по Гудману и Гилману // Практика. М. — 2006.-С. 1316-1340.

41. Комов В.П. Биохимия /В.П Комов, В.П.Шведова. М.: Дрофа, 2004. - 640 с.

42. Корельский В.Ф. Некоторые вопросы повышения эффективности рыбного хозяйства / В.Ф. Корельский //Рыбное хозяйство. — 2008. №3 — С. 7 -9.

43. Косягин Д.В. Аминокислотный состав белка протеогликанов суставного хряща человека в норме и при патологии / Д.В. Косягин // Украинский биохимический журнал. 1984. - Т. 56, № 5. - С. 549-551.

44. Кравченко Ю. В. БАД под контроль / Ю. В. Кравченко // Стандарты и качество. - 2007. - № 8. - С. 9.

45. Крылова Н.Н. Физико-химические методы исследования продуктов животного происхождения / Н.Н. Крылова, Ю.Н. Лясковская. -М., 1965. С 49-55.

46. Кудряшева А.А. Сравнительная характеристика аминокислотного состава белковых ресурсов/ А.А. Кудряшева, Е.В. Оникиенко, Р.С. Гусова // Пищевая промышленность. 2007. - № ю. - С. 72 - 73.

47. Кузнецов Ю. Н. Обоснование биотехнологической модификации отходов от разделки минтая: дисс. канд. техн. наук/ Ю.Н. Кузнецов. Владивосток, 2002. - 139 с.

48. Купина Н. М. Технологическая характеристика шкур кеты и их первичная обработка / Н.М. Купина, Н.Т. Поваляева, Н.А. Герасимова // Известия ТИН-РО. -1997.-Т. 120.-С. 53-60.

49. Лашутин С.В. Фосфорно-кальциевый обмен в норме. // Диализный альманах. Под ред.: Е.А.Стецюка. СПб.: «ЭЛБИ-СПб», 2005.- С.244-271.

50. Ленинджер А. Биохимия / А. Ленинджер. М: Изд-во «Мир», 1974. - 957 с.

51. Луценко С.М. Молекулярные механизмы опухолевого ангиогенеза (обзор) / С.В. Луценко, С.М. Киселев, С.Е. Северин // Биохимия. 2003. - Т. 68, вып. 3. -С. 349-365.

52. Мазуров В.И. Биохимия коллагеновых белков / В.И. Мазуров. М.: Медицина, 1974.-258 с.65 а. Мазур И.И. Управление качеством / И.И. Мазур, В.Д. Шапиро. М., 2005. - 400с.

53. Максименко А.В. Антитромботическое действие производных каталазы и хондроитинсульфата при артериальном поражении у крыс / А.В. Максименко, Е.Г. Тищенко, В.Л. Голубых // Вопросы медицинской химии. 1999. - Т. 45, № 6.-С. 48-51

54. Мезенова О .Я. Биотехнология гидробионтов: Монография // О.Я. Мезенова, В.П.Терещенко, Н.Т.Сергеева и др. Калининград: КГТУ, 2006. - 461 с.

55. Мезенова О.Я. О возможности получения препарата хондроитинсульфата из рыб балтийской акватории / О.Я. Мезенова, Е.С. Землякова// Четвертый Съезд Общества Биотехнологов России (6-7 дек.): материалы. М., 2006. - С. 82-84.

56. Мезенова О.Я. Получение препарата с противоостеортрозным эффектом из отходов от разделки судака / О.Я. Мезенова, Е.С. Землякова//Рыбная промышленность. 2007. - № 2.- С. 30-31.

57. Мезенова О.Я. Биологически активный препарат хондропротекторного действия из отходов от разделки судака / О.Я. Мезенова, Е.С. Землякова // Известия вузов. Пищевая технология. 2007. - №3. - С. 32-34.

58. Мезенова О.Я. Биопрепарат из отходов от разделки судака / О.Я. Мезенова, Е.С. Землякова // Рыбпром. 2008. - № 2. - С. 31-32.

59. Мезенова О.Я.Тест-объект для определения токсичности / О.Я, Мезенова, Е.С. Землякова, П.П. Потапов// Рыбпром. 2008. - №3-4. - С.32-33.

60. Мезенова О.Я. Пищевой препарат, поддерживающий функции опорно-двигательной системы человека / О.Я. Мезенова, Е.С. Землякова// Пятый съезд Общество Биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова: материалы (2-4 дек.). -М., 2008.-С. 343-345.

61. Методические рекомендации 2.3.1.1915-04 Рекомендуемые уровни потребления пищевых и биологически активных веществ. М, 2004. - 37с.

62. Методические рекомендации 2.3.1.2432-08 Нормы физиологических потребностей в энергии и пищевых веществах для различных групп населения Российской Федерации.-М, 2008. 41С.

63. Мухин В.А. Ферментативные белковые гидролизаты тканей морских гидробионтов: получение, свойства и практическое использование / В.А. Мухин, В.Ю. Новиков. Мурманск: Изд-во ПИНРО, 2001. - 97 с.

64. Неклюдов А. Д. Пищевые волокна животного происхождения. Коллаген и его фракции как необходимые компоненты новых и эффективных пищевых продуктов / А.Д. Неклюдов // Прикладная биохимия и микробиология. 2003. - Т. 39, № 3. - С. 261-272.

65. Нечаев А.П. Пищевая химия./ А.П. Нечаев, С.Е. Траубенберг, А.А. Кочеткова и др./. М.: ГИОРД., 2003. - 640 с.88 а. Никольский Г.В. Частная ихтиология / Г.В. Никольский. М.: Высшая школа, 1971.-471 с.

66. Новикова М. В. Биологически активные добавки из гидробионтов/ М.В. Новикова, Т.В. Беседина, Ю.И. Чимиров Ю. И. // Ваше питание. М. - 2001. -№ 2. - С. 34

67. Новиков Ю.В. Использование растворов хитозана для обезжиривания и осветления белковых гидролизатов / Ю.В. Новиков, В.А. Мухин // Прикладная биохимия и микробиология. 2001. - Т. 31, № 6. - С. 733-738.

68. Палагина М.В. Продукты функционального питания на основе вторичного сырья рыбопереработки / М.В.Палагина, О.В.Волошина (Белая), А.А. Набокова и др.// Рыбная промышленность. 2005. - №1. - С. 28-30.

69. Павлова В.Н. Хрящ / В.Н. Павлова, Т.Н. Копьева, Г.Г. Павлов. М.: Медицина, 1988.-210с.

70. Пат. 2082416 РФ, МГЖ А 61 К 35/32. Способ получения комплексного препарата, содержащего мукополисахариды и коллаген из животного сырья / Т.В. Аршинова, В.И. Рыкова, Л.Я. Кучумова, О.М. Сидоркина (Россия). № 93050185/14.

71. Пат. 2157695 РФ, МПЕС А 61 К 35/60. Экстракты хрящей акулы, способ их получения и применения/ Э. Дюпо (СА), П. Бразо (СА), К. Жюно (СА), Д. X. Mac (FR), К. Маренус (US). № 97114752/14.

72. Пат. 2106095 РФ, МПК А 23 В 4/027 Способ производства обогащенной продукции или полуфабрикатов./В.А.Краснова, А.И. Краснов (Россия). № 93016181/13.

73. Пат. 2153812 РФ, МПК А 23 К 1/16. Кормовая добавка для сельскохозяйственных животных / Н.В. Тимошенко, А.И. Сницарь, А.А. Влезько, A.M. Кобозев, М.И. Берешполов, Ю.В. Мельников, Н.П. Перевышин, Н.И. Стрекозов,

74. М.П. Кирилов, А. А. Яхин, В. А. Крохина, К.Н. Сон (Россия). № 2000100457/13.

75. Пат. РФ 2162331 Способ получения сульфатированных гликозаминоглика-нов / А.Ф. Панасюк, С.Ю. Иванов, Е.В. Ларионов, В.О. Левин, Д.А. Саващук (Россия). -№l 2000109785714.

76. Пат. 2201757 РФ, МПК А 61 К 35/32, 38/08, А 61 F 9/00, А 61 Р 19/02. Средство профилактики и лечения дегенеративно-дистрофических изменений суставов и способ его получения/ К.С. Десятниченко, Е.Л. Матвеева, И.А. Талашова (Россия). № 2001130971/13.

77. Пат. 2156132 РФ, МПК А 61 К 35/60. Экстракты акульего хряща, обладающие антиангиогенной активностью и оказывающие влияние на регенерацию опухоли, способы их получения/ Э. Дюпон, П. Бразо, К. Жюно (США). № 96123763/14.

78. Пат. 20030162744 US, МПК А 61 К 031/737, С08В 037/00. Salmon-origin chondroitin sulfate / М. Takai, Н. Kono (US). № 220539.

79. Пат. 2287959 РФ, МГЖ 8 А 23 L 1/325. Способ производства натуральных структурообразователей из рыбных отходов / JI.K. Петриченко, Т.П. Титова, Н.В. Чернега (Россия). № 2004124285/13.

80. Пат. 2065707 РФ, МПК 6 А 23 L 1/305. Лечебно-профилактический продукт для людей и животных/ Эпштейн Л. М., Боровская Г. А., Беседнова Н. Н. (Россия).- № N 94011649/13.

81. Пат. . 2089557 РФ, МПК С08 В 37/08. Способ получения хондроитинсульфата А. (Россия). -№: 93041847/04.

82. Позднякова Ю.М. Технология биологически активных добавок к пище на основе ферментативного гидролиза гонад гидробионтов: дисс. .канд. техн. Наук/ФГУП «ТИНРО-центр»; Ю.М. Позднякова. -Владивосток, 2003. 126 с.

83. Поздняковский В.М. Биологически активные добавки в питании современного человека / В.М. Поздняковский // Пищевые ингредиенты: сырье и добавки. 2008. - №2. - С. 66 - 67.

84. Прозоровский В. А. Аминокислоты пептиды - лекарства. Записки со съезда фармакологов/ В. А. Прозоровский//Наука и жизнь. - 2008. - №3. -* С. 24-26.

85. ПЗ.Ребров В.Г. Витамины и микроэлементы / В.Г. Ребров, О.А. Громова. — М.:АЛЕВ-В, 2003.- 670 с.

86. Региональные нормы расхода сырья при производстве пищевой рыбной продукции из охлажденного, мороженого сырья и соленого полуфабриката на береговых предприятиях. -М.: Изд-во ВНИРО, 2004. 265 с.

87. Риггз Б.Л. Остеопороз: пер с англ./ Б.Л. Риггз, JI. Дж. Мелтон. М. - СПб.: ЗАО «Изд-во БИНОМ», «Невский диалект», 2000. - 560 с.

88. Рисман М. Биологически активные пищевые добавки: неизвестное об известном: пер. с англ. / М. Рисман. М.: Арт-Бизнес-Центр, 1998. — 494 с.

89. Рогожкнн В.В. Практикум по биологической химии: учебно-метод. пособие / В.В. Рогожкин. -М.: СПб., 2006. 255 с.

90. Рослянова Н.А. «Суставит» жизнь в движении /Н.А. Рослянова // Будь здоров.-2008. -№11.-С. 38-43.

91. Руденко В.Г. Хондропротекторы основа конструктивной терапии заболеваний суставов / В.Г. Руденко // Медфарм Холдинг, 2005. - 6 с.

92. Сергеева Н.Т. Биологически активные вещества: учеб. пособие / Н.Т. Сергеева.- Калининград: КГТУ, 2005. 306 с.

93. Сергеева Н.Т. Биохимия витаминов и минеральных элементов / Н.Т. Сергеева. Калининград: КГТУ, 1998. - 117 с.

94. Серов В.В. Соединительная ткань / В.В. Серов, А.Б. Шехтер. М.: Медицина, 1981.-312 с.

95. Слуцкий Л.И. Современные представления о коллагеновых компонентах хрящевой ткани: обзор / Л.И. Слуцкий // Вопросы медицинской химии. 1985. -Т.31.-С. 10-17.

96. Соколов С.Я. Фитотерапия и фитофармакология: руководство для врачей / С.Я. Соколов. -М., 2000. 976 с.

97. Сорокоумов И.М. Хондроитинсульфат из хрящей рыб / И.М. Сорокоумов, Е.А. Ежова, В.М. Быкова и др. // Рыбпром. 2007. - № 3. - С. 18 - 20.

98. Справочник по химическому составу и технологическим свойствам морских и океанических рыб. М.: Изд-во ВНИРО, 1998. - 224 с.

99. Справочник по химическому составу и технологическим свойствам рыб внутренних водоемов / под редакцией В.П. Быкова. М., 1999. - 207с.

100. Суховерхова Г.Ю. Биохимическая характеристика хрящевой ткани гидробионтов и технология БАД к пище: дисс. канд. техн. наук / ФГУП «ТИНРО-центр»; Г.Ю. Суховерхова. Владивосток, 2006 - 157 с.

101. Теплов В.И. Физиология питания: учебное пособие/ В.И. Теплов, В.Е. Боряев. М.: Дашков и К, 2006. - 451 с.

102. Титов Е.И. Коллагенсодержащее сырье и пути его переработки/ Е.И, Титов, С.А. Апраксина М.: АГРОНИИТЭИПП, 1995. - < 35с.

103. Трещева В.И. Химический состав кожи океанических рыб / В.И. Трещева, Л.Ф. Соломатина. //Рыбное хозяйство, 1978. № 11. - С. 67 - 68.

104. ТУ 9283-243-00472012-09 Артротин. Биологически активная добавка к пище.

105. ТУ 9358-022-23089787-96 Хондрамин.

106. ТУ 9280-055-02698170-00 Коллагеназа краба пищевая,

107. ТУ 9283-130-02067936-2004 Концентрат рыбный белковый.

108. Тутельян В.А. БАД к пище: современные подходы к обеспечению качества и безопасности / В.А. Тутельян, Б.П. Суханов // Вопросы питания. 2008. - Т.77. №4.-С. 4-15.

109. Тутельян В.А. Концепция оптимального питания / В.А. Тутельян // VII Всероссийский конгресс «Государственная концепция «Здоровое питание населения России» (12-14 нояб.): материалы. М., 2003 - С. 524-525.

110. Тутельян В.А. Микронутриенты в питании больного и здорового человека: справочное руководство по витаминам и минеральным веществам / В.А. Тутельян, В.Б. Спиричев, Б.П. Суханов. М.: Колос, 2002 г. - 424 с.

111. Фармакопейная статья № 42-1286-99 "Хонсурид"

112. Федеральный реестр биологически активных добавок к пище. М.: Коге-лет, 2001.-431 с.

113. Шабров А.В. Биохимические основы действия микрокомпонентов пищи / А.В. Шабров, В.А. Дадали, В.Г. Макаров. М.: Наука, 2003. - 184 с.

114. Якубова О. С. Чешуя как источник получения ихтиожелатина / О.С. Якубова, A.JI. Котенко //Вестн. Астрах, гос. техн. ун-та. 2004. - № 2. - С. 130-135.

115. Barret A/J. Families and clans of serine proteinase / A/J Barret, N.D. Rawlings// Arch. Biochem. Biophys. 1995. - V.318.,No. 2.-P. 247-250.

116. Benjakul Soottawat Белковые гидролизаты из отходов переработки тихоокеанских рыб. Protein hydrolysates from pacific whiting solid wastes. / Benjakul Soottawat, Morrissey Michael T. // J. Agr. and Food Chem.- 1997. 45, N 9, - P. 3423,

117. Bornstein P. The Chemistry and biology of collagen. The Proteins / P. Bornstein, W. Traub // Edn. N.Y.: Acad.Press/ 1979. - P. 411-632.

118. Cheow C. W. Preparation and characterisation of gelatins from the skins of sin croaker (Johnius dussumieri) and shortfin scad (Decapterus macrosoma)/ C. W. Cheow, M.S. Norizah, Z.Y. Kyaw// Food Chem. 2007. -101, №1. - P. 386-391.

119. Cheung Wing S. Rabbit skin comprising biological active sustance and its use.

120. Заявка 155771 ЕПВ, МПК 7 A 61 К 35/12. VanWorld Pharmaceutical (Rugao) Co. Ltd. N 03770855.9; Заявл. 30.10.2003; Опубл. 27.07.2005.

121. Cohen-Maurel E. Ценный источник биостимуляторов. Le cracking des coproduits ole la peche Process/Е. Cohen-Maurel. 2001, N1174. - P. 46-47.

122. Doyle J. Aging changes in cartilage from Squalus acantithias / J. Doyle //Comparative biochemistry and physiology. 1968. - Vol. 25, № 1. - P. 201-206.

123. Fosang A. Degradation of cartilage aggrecan by collagenase-3 (MMP-I3)/ A. Fosang, K. Last, V. Knauper // FEBS Letters. 1996. - Vol. 380. -P. 17-20.

124. Gerstcnfeld L. C., Chipman S. D., Kelly C. (1988) J. Cell Biol. 106, 779-989.

125. Grzesik W.J. Osteoblast-bone matrix interactions Osteoblast / W.J. Grzesik, G. Pluijm, P. Gehron Robey // Italic Journal Mineral Elect. Metabolism. 1993. - Vol. 7. - P. 253-255.

126. Hunter G.K. (1983) Biochemistry 22, 831-837.

127. Kachi Gasho. Mucopolysaccharides and process for producing the same. Заявка1475392 ЕПВ, МПК 7 С 08 В 37/08, А 23 L 1/312. Nippon Barrier Free Co. Ltd. N 03737444.4; Заявл. 30.01.2003; Опубл. 10.11.2004; Приор. 05.02.2002, N 2002027932 (Япония).

128. Kim J. S. Partially purified collagen from refiner discharge of pacific whiting surimi processing / J.S. Kim, J.W. Park // J. Food Sci. 2005.- 70, № 8. - P. 511-516.

129. Lafont F. In vitro control of neuronal polarity by glycosaminoglycans/ F. Lafont, M. Rouget, A. Treller // Development. 1992. - Vol. 144, №1. -P. 17.

130. Lyon M. A study of equilibrium binding of link protein to hyaluronate./ Lyon M., Nieduszynski I.A. //Printed in Great Britain. 1983. - №213. - P. 445-450.

131. Maingault Martine. Procede de preparation d'une composition a base de collagene issu de peaux de poissons Заявка 2806415 Франция, МПК 7 С 09 H 1/04, С 08 L 89/06. Biovaleur SA. N 0003292; Заявл. 15.03.2000; Опубл. 21.09.2001.

132. Mashburn Т.А. The presence of collagen in proteinpolysaccaride from shark cartilage/ T.A. Mashburn, J. Hoffman // Biochemical and biophysical research communications. -1967. Vol. 29, №5. - P. 686-691.

133. Masumura Y. Changes with age of water-binding capacity and acid mucopolysa-charide content in the rat skin ГУ. Masumura// Journal gerontology. 1971. - Vol. 26, №3.-P. 386-390.

134. Mignatti P. In vitro angiogenesis on the human amniotic membrane: requirement for basic fibroblast growth factor induced proteinases / P. Mignatti, R. Tsuboi, E. Robbins // Journal Cell Biology. - 1989. - Vol. 108. - P. 671-682.

135. Miller E.J. Characterization of notochord collagen as a cartilage-type Collagen/ E.J. Miller // Biochemical and biophysical research communications. 1974. - Vol. 60, №1. -P. 424-430.

136. Milner J. M. Activation of collagenases is a key control point in cartilage collagen matrix degradation/ J.M. Milner, S.F. Elliot, Т.Е. Cawston// International journal of experimental pathology. 2000. - Vol. 81. - P. 14-15.

137. Mullally M.M. Zimogen activation in pancreatic endoproteolytic preparations and influence of some whey protein hydrolysate characteristics /М.М. Mullally, D.M. O' Callaghan, R.J. Fitzgerald// J. Food Sci. 1995. - V. 60. № 2. -P. 227-232.

138. Muyonga J. H. Characterisation of acid soluble collagen from skins of young and adult Nile perch (Lates niloticus) / J.N. Muyonga, C.G. B. Cole, K. G. Duodu //Food Chem. 2004.- 85, № 1, P. 81-89.

139. Nagai T. Isolation of collagen from fish waste material skin, bone and fins / T. Nagai, N. Suzuki // Food Chem. -2000.- 68, N 3, P. 277-281.

140. Onarheim H. Markedly increased lymphatic removal of hyaluronan from skin after major thermal injury/ H. Onarheim, B.T.Brofeldt, R.A.Cunther// -1996. -Vol.22. P. 212-216.

141. Prof. Fisherman Использование отходов рыбной промышленности. Sows ears into silk purses / Prof. Fisherman.- 2004. -27, N 2, P. 34

142. Prudden J. The acceleration of wound healing with cartilage / J. Prudden // Surgeon Gynecology. 1957. - P. 105-283.

143. Pool R. Proteoglycans in health and disease: structure and function / R. Pool// Biochemistry journal. 1986. -Vol. 236. -P. 1-14.

144. Rama S. Distribution of different molecular species of collagen in the vertebral cartilage of shark (Carcharius acutus) / S. Rama, G. Chandrakasan// Connect Tissue Research. 1984. - Vol. 12. - P. 11-19.

145. Regenstein Тоет. О полном использовании рыбы. Total utilization of fish/ Regenstein Toem. //Food Technol.- 2004. -58, N 3. P. 28-30.

146. Rosenberg L. Proteinpolysacharides from human articular and costal cartilage / L. Rosenberg, B. Johnson, M. Schubert // Journal clinical investigation. 1965. - Vol. 44, № 10. -P. 1647-1656.

147. Rosenberg L. Macromolecular models of proteinpolysaccharides from bovine nasal cartilage based on electron microscopic studies / L. Rosenberg, W. Hell-mann, A.K. Kleinschmidt// J Biol Chem. 1970/ - Vol. 245.- P. 4123-4130.

148. Ruoslahti E. Proteoglycans in cell regulation/ E. Ruoslahti // The Journal of biological chemistry. 1989. - Vol. 264. - P. 13369-13372.

149. Setnikar A. Pharmacokinetics of Giucosamine in Dog and Man/ A. Setnikar, C. et a I Giacchetti // Drug Research. 1986. - Vol. 3.6, № 4. - P. 70-73.

150. Sorgente N. Isolation of a cartilage factor that inhibits tumor neovascularisation/ N. Sorgente, K. Keuttner, L. Soble, R. Eisenstein // Science. 1976. - Vol. 93. - P. 70-71.

151. Stein G.S. Are glycoproteins and glycosaminoglycans components of the eu-karyotic genome?/ G.S. Stein, R.M. Roberts, J.L. Davis, W.J. Head// Nature. -1975. Vol. 258. P. 639-641.

152. Susumu H. Use of Fourier transform С nuclear magnetic resonance spectroscopy for sulfate placement in chondroitin sulfates/ H. Susumu, Y. Hidetaka, T. Kiyoshi // Journal of Biochemistry. 1974. - Vol. 76, №1. - P. 209-211.

153. Takamatsu Minori Fischkollagen und Verfahren zur Herstellung desselben

154. Заявка 19934120 Германия, МПК 7 С 07 К 14/46. Hokkaido Government, Sapporo, Hokkaido, JP, Ihara & Co. N 19934120.6; Заявл. 21.07.1999; Опубл. 25.01.2001.

155. Termine J.D. Osteonectin, a bone-specific protein linking mineral to collagen/ J.D. Termine, H.K. Kleinman, S.W. Whitson // Cell. 1981. - Vol. 26. - P. 99105.

156. Timothy E. Glucosamine and Chondroitin for Treatment of Osteoarthritis/ E. Timothy, P. Michael// JANA. 2000. - Vol. 283, № 11. - P. 33-37.

157. Toole B.P. (1979) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 76. P. 6299-6303.

158. Vogel K.G., Dolde J (1979) Biochim. Biophys. Acta 552. P. 195-200.

159. Vogel K.G., Peterson D.W. (1981) J. Biol. Chem. 256. P. 13235-13242.

160. Wallel Abdel Fattah Chondroitin Sulfate and Giucosamine: a reviwe of the Safety Profile/ Wallel Abdel Fattah, Tarek Hammad // JANA.-2001. Vol 3, № 4.