автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.01, диссертация на тему:Разработка рецептуры пробиотической кормовой добавки на основе CO2-шротов пряно-ароматического сырья



На правах рукописи

ХАМИТОВА Нелли Ринатовна

РАЗРАБОТКА РЕЦЕПТУРЫ ПРОБИОТИЧЕСКОЙ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ НА ОСНОВЕ С02-ШР0Т0В ПРЯНО-АРОМАТИЧЕСКОГО СЫРЬЯ

05.18.01 - Технология обработки, хранения и переработки злаковых, бобовых культур, крупяных продуктов, плодоовощной продукции и виноградарства

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

-9 ДЕК 2010

Краснодар - 2010

004616981

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Кубанский государственный технологический университет»

Научный руководитель: доктор технических наук, профессор

Тимофеенко Татьяна Ильинична Официальные оппоненты: доктор технических наук, профессор

Бархатова Татьяна Викторовна

доктор биологических наук, профессор Кощаев Андрей Георгиевич

Ведущая организация: «Краснодарский научно-

исследовательский институт хранения и переработки сельскохозяйственной продукции» Россельхозакадемии

Защита диссергации состоится 23 декабря 2010 г. в 15.00 часов на заседании диссертационного совета Д 212.100.05 в Кубанском государственном технологическом университете по адресу: 350072, г. Краснодар, ул. Московская, 2, ауд. Г-251

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Кубанского государственного технологического университета

Автореферат разослан 23 ноября 2010 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

канд. техн. наук

В.В. Гончар

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ 1.1 Актуальность темы. Современный уровень развития пищевой и

перерабатывающей промышленности и состояние их сырьевой базы требуют принципиально нового подхода к проблеме использования вторичных ресурсов. В этом плане представляют интерес вторичные продукты - шроты, получаемые после ССЬ-экстракции пряно-ароматического сырья, информация о химическом составе которых, имеет разрозненный, а порой и противоречивый характер. Разработка безотходных технологий их переработки с применением микробиологического синтеза позволит максимально использовать все ценные компоненты вторичного сырья и создать новые продукты, например пробиотической направленности. Проблема расширения сферы применения таких шротов актуальна в связи со значительным их объемом (только в Южном Федеральном округе более 600 тонн в год).

Конкурентоспособность и рентабельность отечественного птицеводства определяются высокой продуктивностью птицы, которая в настоящее время обеспечивается за счет импортных биофармацевтических препаратов. Вместе с тем, для замены кормовых антибиотиков, повышения перевариваемое™ корма, стимуляции роста и продуктивности птицы могут быть использованы отечественные кормовые добавки пробиотического действия, предназначенные для компенсации негативного влияния интенсивных приемов выращивания птицы и экологизации птицепродукции.

Актуальность работы заключается в необходимости создания специализированных высокоэффективных пробиотических кормовых добавок с применением методов биотехнологии на основе С02-шротов пряно-ароматического сырья, с учетом особенностей их химического состава в комплексе с молочнокислыми микроорганизмами.

Диссертационная работа выполнялась в соответствии с НТП Минобразования РФ «Научные исследования высшей школы по приоритетным направлениям науки и техники», № Госрегистрации 01200109253 и планом НИР КубГТУ.

Автор выражает искреннюю признательность и благодарность В. А. Ярошенко, к.с-х.н. А.И. Калашникову, д.е-х.н. проф. Л. И. Пстснко, к.т.н. проф. Т.Н. Прудниковой, к.т.н. доц. 11.В. Ильчишнной, H.H. Латину за консультации и помощь при выполнении работы.

1.2 Цель работы - разработка рецептуры пробиотической кормовой добавки на основе С02-шротов пряно-ароматического сырья.

1.3 Основные задачи исследований:

- анализ, систематизация научно-технической и патентной литературы по теме исследований;

- выявление пробиотического и технологического потенциала штаммов молочнокислых микроорганизмов (МКМО), составление их ассоциации;

- выбор технологических приемов подготовки шротов, обеспечивающих их стерильность с сохранением питательных веществ, необходимых для развития микроорганизмов;

- исследование перспектив использования шротов после С,02-экстракции плодов сельдерея, петрушки, укропа, розмарина, кориандра, тмина, мускатного ореха и перца душистого; коры корицы и почек гвоздики в качестве субстрата для твердофазной ферментации (ТФФ) молочнокислых микроорганизмов;

- выявление особенностей химического состава С02-шротов, полученных из семян кориандра, петрушки, тмина и укропа;

- исследование метаболической активности ассоциации МКМО в процессе ТФФ;

- изучение динамики накопления биомассы МКМО на С02-шротах и их смесях, оптимизация компонентного состава смеси шротов;

- выявление ростстимулирующего действия С02-шротов для составления смеси на МКМО;

- экспериментальная оптимизация компонентного состава производственной питательной среды для глубинного культивирования ассоциации МКМО;

- сравнительная оценка эффективности получения добавки в сухой и влажной формах;

- разработка рецептуры и изучение показателей качества кормовой добавки «Флоранорм»;

- получение и анализ электронных снимков поверхности влажной формы;

- опытно-промышленная апробация и разработка технической документации (ТУ и ТИ) на пробиотическую кормовую добавку «Флоранорм»;

- оценка эффективности использования созданной пробиотической кормовой добавки в кормлении цыплят-бройлеров;

- расчет экономической эффективности от производства и применения пробиотической кормовой добавки в птицеводстве.

1.4 Научная новизна. На основании анализа выявленных особенностей химического состава С02-шротов из пряно-ароматического сырья (семян тмина, кориандра, петрушки и укропа) теоретически и экспериментально обоснована целесообразность и эффективность применения их смеси в качестве сырья для получения кормовой добавки пробиотического действия.

Впервые для культивирования МКМО и их ассоциации применен метод твердофазной ферментации, который показал, что использование С02-шротов в качестве перспективного субстрата для развития ассоциации выбранных штаммов молочнокислых бактерий позволяет увеличить количество жизнеспособных клеток до 10' КОЕ/г и концентрацию основного метаболита бактерий - органических кислот.

Впервые для создания продукта с пробиотическими свойствами предложен новый методологический подход к культивированию молочнокислых микроорганизмов Lactococcus lactis xubsp.lactis I704-5, Lactobacillus acidophilus 43c с учетом их принадлежности к разным родам и штаммосовместимости в ассоциированном пробиотике (ассоциации).

Полученные электронные снимки поверхности продукта подтвердили предположение о том, что пробиотические бактерии находятся в виде микроколоний, обеспечивающих их высокую выживаемость в продукте и эффективность при применении, так как они адсорбированы на шротах, имеющих разрушенную клеточную структуру.

Впервые выполнен анализ динамики накопления сухих веществ и амин-ного азота в опытах на модельных средах, объясняющий ростстмулирующий эффект шротов (смеси) и интенсификацию продуцирования органических

кислот молочнокислыми бактериями в процессе ТФФ. Новизна технических решений подтверждена 2 патентами РФ на изобретение.

1.5 Практическая значимость. Разработанные рецептура и техническая документация на пробиотическую кормовую добавку «Флоранорм» внедрены в производство. Установлены гарантийные сроки хранения добавки, обеспечивающие жизнеспособность бактериальных клеток на уровне не менее 108 КОЕ/г. Предложена производственная питательная среда для глубинного культивирования МКМО на основе молочной сыворотки, в качестве эквивалентной замены коровьего молока. Показана эффективность использования добавки в кормлении птицы на примере цыплят-бройлеров.

1.6 Реализация результатов исследования. Разработанные технологические решения проверены и приняты к внедрению в условиях ООО «Биотехагро» (г. Тимашевск). Экономический эффект от производства продукта составит 1383 тыс. руб. в расчете на 300 тонн в год. Кормовая добавка апробирована на птицефабрике ЗАО «Агрокомплекс» ООО «Кубань» (Усть-Лабинский район). В расчете на годовой объем производства (50 тыс. голов птицы) дополнительная прибыль на птицефабрике за счет сохранности поголовья и прироста его живой массы, а также улучшения конверсии корма составит 502 тыс. руб.

1.7 Апробация работы. Результаты теоретических, экспериментальных исследований, доложены и обсуждены на Международной научно-практической конференции «Функциональные продукты питания: гигиенические аспекты и безопасность» (г. Краснодар, 2009 г.); на III научно-практической конференции «Качество продукции, технологий и образования» (г. Магнитогорск, 2008 г.); на 111 Всероссийской научно-практической конференции, с международным участием «Актуальные вопросы современной науки и образования» (г. Челябинск, 2009 г.); на Общероссийской научной конференции на основе интернет-форума (г. Красноярск, 2009 г.).

1.8 Публикации. По материалам выполненных исследований опубликованы монография, статья в журнале, рекомендованном ВАК РФ, 5 материалов конференций и получено 2 патента РФ на изобретения.

1.9 Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, аналитического обзора научно-технической и патентной литературы, методической части, экспериментальной части, списка литературных источников и 10 приложений. Основная часть работы выполнена на 137 страницах, включает 34 таблицы и 16 рисунков. Список литературных источников включает 180 наименований, в том числе 30 - иностранных авторов.

2 МЕТОДИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ 2.1 Объекты и методы исследований. Объектами работы были выбраны COi-шроты: семян сельдерея (Лршт graven lens l„), побеги розмарина (Rosmarinus officinalis)', плодов: мускатного ореха {Myristica fragrans) и перца душистого (Piper nigrum L.), почек гвоздики (Caryophyllus Aromalicus L.); коры корицы (Cinnamomum ceylanicum Br.), а также семян: петрушки (Petroselinum crispum), укропа (Anetlium graveolens), кориандра (Coriandrum sativum L.) и тмина (Carum carvi L.), выработанные на ООО «Компания Караван» (пос. Белозерный, Краснодарский край) в 2007-2009 гг., а также их смеси. В качестве штаммов пробиотиков использовали МКМО, депонированные во ВКПМ ФГУПГосНИИГенетика (г. Москва) Lactobacillus acidophilus 4ic В-3235 и Lactococcus. /actis 1704-5 В-3192, предоставленные филиалом ООО «Биотехагро» (г. Тимашевск) в 2007-2009 гг., их ассоциация, а также экспериментальные и опытно-промышленные образцы нового продукта и питательных сред. Лабораторные и производственные исследования проводили в соответствии с требованиями действующих стандартов и специальных методик микробиологии. Снимки поверхности готового продукта получали на сканирующем электронном микроскопе JEOL JSM-7500F в режиме детектирования вторичных электронов с ускоряющем напряжением 2,0 кВ. Опытно-промышленные образцы вырабатывали в условиях предприятия ООО «Биотехагро» в 2010 г. Эффективность продукта оценивали в 2010 г. в условиях

птицефабрики ЗАО «Агрокомплекс» ООО «Кубань» (Усть-Лабинский район) на цыплятах-бройлерах отечественного кросса «ИЗА».

Статистическую обработку данных проводили методами регрессионного и корреляционного анализов с использованием компьютерных программ Statistika-6.0 и Microsoft Office Excel.

Структурная схема исследований представлена на рисунке 1.

3 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 3.1 Выявление пробнотического и технологического потенциала штамов молочнокислых микроорганизмов, составление ассоциации. Выбирая штаммы МКМО и создавая их ассоциацию, в качестве критериев для оценки эффективности исследовали: количество жизнеспособных клеток в культуральной жидкости, устойчивость к соляной кислоте (0,4; 0,5; 0,6 %), а также антибиотикоустойчивость. Оба штамма в условиях in vitro устойчивы к воздействию максимальной концентрации хлорводородной кислоты, а только совместное использование Lb. acidophilus 43с, L. lactis 1704-5 (ассоциации) обеспечивает устойчивость ко всем изученным антибиотикам (ам-пицилину, гемтамиципу, эритромицину, цефазолину, тетрациклину). Штаммы обладают достаточной технологичностью для промышленного производства, т.к. L. 1aclis обеспечивает активную кислотность 3,8 ед. рН, L. acidophilus 4,0 ед. рН в течение 38 ± 4 ч и 42 ± 5 ч соответственно.

Выявляя целесообразность совместного выращивания выбранных штаммов, планировали повышение продуктивности и устойчивости к неблагоприятным факторам в ассоциации по сравнению с монокультурами. Зависимость титра каждого из штаммов в процессе их совместного культивирования, а также изменение рН среды представлены на рисунке 2.

Показано, что штаммы имеют разную скорость роста, так в течение первых 24 ч преобладает L. lactis, а затем в результате смены рН-оптимума -Lb. acidophilus. При снижении рН ниже 3,96 заканчивается стационарная фаза и происходит отмирание бактериальных клеток обоих видов.

Рисунок 1 - Структурная схема исследований

Рисунок 2 -Зависимость

5,5 о, титра ^ V Lb. acidophilus.

L. Lactis в acco-

6

i' 3,5

i- 3

циации и рН сре-

8 12 16 20 24 28 32 36 40 4-1 18 52 56 Время вмр,-шатания, ч

ды в процессе

культивировании.

-»-riirpLb. acidophilus -я-титрЪ. lnctis " ' -рН

Установили, что наиболее оптимальными являются время совместного культивирования не более 36 ч и рН среды 4,2 - 4,0 обеспечивающие достижение титра на уровне 7,4 - 7,6 lg КОЕ/г.

3.2 Выбор технологических приемов подготовки шротов. Стерильный субстрат получали методом термической обработки (при температуре 121 °С в течение 20 ± 1 мин.). Предварительно сырье увлажняли (до 33,6 -35%), планируя равномерное распределение влаги в объеме сухого шрота при сохранении его сыпучести. Чрезмерное увлажнение смеси отрицательно сказывается на дальнейшей твердофазной ферментации, так как повышает общую влажность готового продукта.

3.3 Исследование перспектив использования СОг-шрогов в качестве субстрата для твердофазной ферментации (ТФФ) молочнокислых микроорганизмов. Оценивая эффективность твердофазной ферментации на различных шротах, определяли наиболее перспективные, тестируя их в качестве субстрата для роста молочнокислых микроорганизмов с получением продукта с влажностью 60-68%. Субстрат смешивали в равной пропорции с ассоциацией МКМО и культивировали при 37-38 °С в течение 4 суток. По окончании ферментации определяли тигры полученных влажных форм на селективных средах: гидролизио-молочный агар (ГМА) - для Lb. acidophilus, и среда (Lee) - для L. ¡aclis, и рН шротов.

По процессу накопления биомассы МКМО оценивали эффективность ТФФ на разных шротах, используя в качестве критерия титр жизнеспособных клеток в 1 г (рН среды практически не изменялась до и после ТФФ).

Результаты представлены в таблице 1. Таблица 1 - Титры ассоциации МКМО после ТФФ на С02-шротах пряно-

ароматического сырья

Селек- Титр, lg КОЕ/г рН С02-шротов

С02-шрот из сырья тивная среда ДО ТФФ после ТФФ

Сельдереи ГМА 8,50 5,90 5,63 ±0,24

Lee 8,20

Петрушка ГМА 8,96 6,28 6,03 ±0,17

Lee 9,12

Укроп ГМА 8,70 5,97 5,83 ± 0,07

Lee 8,95

Мускатный орех ГМА 4,70 5,65 5,01 ±0,5

Lee 4,85

ГМА 4,25

Перец душистый Lee 4,30 5,22 5,11 ±0,07

Гвоздика ГМА не обнаружено 4,39 4,38 ±0,01

Lee

Корица ГМА 3,60 5,10 4,96 ±0,13

Lee 3,85

Розмарин ГМА не обнаружено 5,62 5,61 ±0,06

Lee

Кориандр ГМА 9,15 5,85 5,73 ± 0,02

Lee 9,00

Тмин ГМА 8,78 6,15 5,40 ± 0,01

Lee 9,05

НСР05 0,2

С учетом выбранного критерия ССЬ-шроты пряно-ароматического сырья разделили на следующие группы:

1. Шроты, обладающие бактерицидным действием в отношении выбранной ассоциации - гвоздика, розмарин.

2. Шроты, проявляющие бактериостатическое воздействие в отношении выбранной ассоциации: мускатный орех, перец душистый, корица.

3. Шроты, на которых происходит бактериальный рост:

- лучший рост ¿./ас/и обеспечивают петрушка и укроп,

- лучший рост I,.аас1орЬИ113 - тмин,

- кориандр показал одинаково высокую эффективность для разных родов МКМО;

- сельдерей, обеспечивающий титр ¿./ос//.? и Lмcidophilus достоверно меньший, чем петрушка, укроп, кориандр и тмин.

Обосновывая выбор шротов группы № 3 (кроме сельдерея), провели оценку эффективности их твердофазной ферментации в сравнении с семенами до СОг-экстракции. Результаты приведены в таблице 3. Таблица 3 - Результаты сравнительной твердофазной ферментации семян и

их шротов отдельными штаммами и их ассоциацией

Объект исследования Титр lg КОЕ/г

Llactis Lb.acidophilus ассоциация

Кориандр семена 8,18 7,30 8,40

шрот 9,15 9,30 9,70

Петрушка семена 7,78 5,70 8,48

шрот 8,86 8,60 9,30

Тмин семена 7,48 7,90 8,10

шрот 8,65 8,90 9,00

Укроп семена 7,30 7,15 8,15

шрот 9,25 8,20 9,40

НСР05 0,9 0,9 0,9

Установили, что значения титра для монокультур на выбранных шротах выше, чем на семенах, а именно: на 12-27 % для L. lactis; на 13 - 50 % для Lb. acidophilus', на 10 - 16 % для их ассоциации, связанное, вероятно с содержанием эфирных масел в семенах, проявляющих, как известно, антистатический эффект, а, следовательно, угнетающих рост МКМО. Для ассоциации значения титров выше на 4 - 15 %, чем для отдельных культур, что свиде-

тельствует о преимуществе культивирования ассоциации МКМО на шротах (патент №2380107).

3.4 Выявление особенностей химического состава СОг-шротов, полученных из семян кориандра, петрушки, укропа. Руководствуясь данными о щадящих режимах С02-экстракции, предположили, что в шротах содержится значительное количество белков и углеводов. Результаты исследования химического состава СОгшротов, выбранных для получения кормовой добавки, приведены в таблице 4.

Таблица 4 - Химический состав СОг-шротов, %

Наименование показателя Кориандр Петрушка Тмин Укроп

Влага 8,03 7,82 7,20 9,00

Сырой жир 18,81 22,14 14,37 9,73

Общий азот 2,10 2,94 2,68 2,70

в т.ч. экстрагируемый аминный 0,27 0,13 0,22 0,19

Сахара 1,88 2,79 1,72 1,94

в т.ч. восстанавливающие 0,31 0,40 0,19 0,40

Сырая зола 6,42 6,64 9,73 7,51

Сырая клетчатка 28,30 18,92 14,51 30,00

Шроты содержат жиров 9,73 - 22,14 %, протеинов 13,12 - 18,38 %, минеральных веществ 6,42 - 9,73 %, Сахаров на уровне 1,72 - 2,79%, что позволяет считать данное сырье ценным питательным субстратом для МКМО.

3.5 Исследование метаболической активности МКМО в процессе твердофазной ферментации. Выявляя перспективность использования отдельных шротов для производства кормовой добавки, изучили метаболическую активность МКМО в процессе твердофазной ферментации по сравнению с глубинным культивированием, как наиболее распространенным в производстве пробиотических продуктов. Результаты приведены в таблице 5.

Таблица 5 - Содержание молочной кислоты в образцах, %

МКМО Твердофазная ферментация Глубинная культура

кориандр петрушка тмин укроп

/.,. \actis 2,6 4,4 2,8 4,6 0,92

1Ь.аас1ор1п1№ 5,3 2,7 3,0 4,3 1,44

Ассоциация 6,4 6,2 3,2 6,4 1,53

Использование шротов обеспечивает увеличение накопления молочной кислоты, как основного метаболита МКМО, максимальное при использовании ассоциации (в 1,5 - 4,2 раза больше по сравнению с глубинным культивированием). Таким образом, продукт во влажной форме следует отнести к натуральным кормовым ацидификаторам. Помимо молочной кислоты при культивировании ассоциации обнаруживаются уксусная и масляная кислоты (в глубинной культуре не обнаружены), наличие которых, по-видимому, объясняется их присутствием в шротах.

3.6 Выявление ростстимулирующего действия отдельных СОг-шротов для составления смеси. Динамику извлечения экстрактивных компонентов (сухие вещества), находящихся в доступной для усвоения МКМО форме, анализировали на модельных средах (среда и отдельные шроты, среда и смесь шротов, взятых в количестве 10 % к массе среды) в процессе ферментации. Таблица 6 - Массовая доля сухих веществ в модельных средах в процессе

экстрагирования, %

Продолжитель-

Наименование образца ность

24 ч. 48 ч.

Не опре-

Молоко коровье обезжиренное + вода -1:1 (среда) 5 деляли

Петрушка + среда 7,6 7

Кориандр + среда 8 7,6

Укроп + среда 9 7,6

Тмин + среда 8 8

Кориандр : петрушка: тмин '.укроп (1:1:1:1) + среда 9,2 9,2

Кориандр : петрушка : тмин : укроп (2:1:1:1) + среда 9,6 9,6

НСРоз...................~ """"".................... .................... .......... 0,5

Как нами показано экспериментально, максимальное количество экстрактивных компонентов переходит в жидкую фазу в течение первых суток. Наилучшие результаты были получены на модельном образце со смесью шротов кориандр, петрушка, тмим, укроп при их соотношении 2:1:1:1.

Выявили ростстимулирующий эффект смеси шротов, который является косвенным подтверждением их пребиотического действия на МКМО в уело-

внях iii vitro. Совместное использование шротов и ассоциации позволяет рассматривать новый продукт как синбиотик (патент № 2375069).

Провели сравнительную оценку эффективности выбранной смеси на монокультурах и их ассоциации, о которой судили по количеству жизнеспособных клеток и концентрации экстрактивных компонентов в культуральной жидкости в сравнении с контролем (таблица 7).

Таблица 7 - Значения титра и концентрация сухого вещества в модельных

средах после ферментации

Наименование образца lg КОЕ/г %

Кориандр : петрушка : тмин : укроп (2:1:1:1) + среда (до ферментации) Lactobacillus acidophilus Lactococcus lactis 8,85 8,70 9,6 5 5

Ассоциация 9,30 5

Контроль (ассоциация на среде) 7,90 3,7

НСР05 0,1

Установили, что в процессе культивирования МКМО (монокультур и ассоциации) в срсде со смесью шротов более интенсивно перерабатываются сухие вещества. Так, в опытных образцах потребляется 48 % сухих веществ, и только 26 % в контроле, что отражается на повышении титра жизнеспособных клеток в модельной среде до 9,3 против 7,9 ^ КОЕ/г.

Оценивая перспективы совершенствования производственной питательной среды для глубинного культивирования, как первого этапа получения кормовой добавки, предложили новую среду, в которой молоко коровьего обезжиренное заменили на сыворотку молочную творожную.

3.7 Экспериментальная оптимизация компонентного состава питательной среды для глубинного культивирования ассоциации МКМО. Питательная среда (ПС), предназначенная для удовлетворения основных трофических потребностей МКМО, состояла из творожной сыворотки (95%), барды (5 %) или экстракта дрожжей (5%) и солей, г/л: MgS04 -1,0; К2НР04 - 1,0; С6Н7Ка07- 6,6.

Сравнительная оценка технологического потенциала предлагаемых сред приведена на рисунке 4.

8.6

8,4

и 8.2

Й

О

И г«

— г

я

7,4

'1

Основная ПО Основная ПС + 5°л Основная ПС + 5*4 Молоко коровье + барды экстракта дрожжей вода 1 1

Рисунок 4 — Значения титров ассоциации при глубинном культивировании в средах на основе сыворотки в сравнении с контролем Показано, что питательная среда, содержащая 5 % экстракта дрожжей на основе творожной сыворотки (титр 8,35 КОЕ/г) является полноценной заменой известной среды (с молоком - титр 8,30 КОЕ/г).

3.8 Разработка форм, рецептуры пробиотической кормовой добавки и технологической схемы. В зависимости от назначения, необходимости транспортирования, создавали кормовую добавку, определяя изменение титра в процессе хранения продукта в двух формах: с влажностью 60-68 % -влажная и 10-12 % - сухая.

Анализ изменения титра МКМО в процессе хранения, показал, что наиболее стабильно сохраняет качество (титр не ниже 8,00 КОЕ/г) продукт во влажной форме (ВФ), который после завершения процесса твердофазной ферментации хранили при температуре 2-4 °С (рисунок 5).

Сухую форму продукта получали двумя методами: принудительного высушивания в тонком слое при 46 °С в течение 72 часов (ВФ+{) и естественного высушивания, вводя бактерии в состояние анабиоза путем разбавления смесыо шротов до конечной влажности (ВФ+СШ). Сухие формы про-

дукта хранили при температуре 18-20 С.

Максимальная продолжительность хранения - 3 месяца была получена для ВФ продукта, сухая форма продукта, полученная методом разбавления смесью шротов, обеспечивает его сохранность в течение 1,5 месяцев.

Рисунок 5 - Изменение титра МКМО в процессе хранения разных форм кормовой добавки

-о-ВФ (исходная)

чз-ВФ + СШ

О 1 2 3 4 I

I

месяц |

I

Таким образом, с учетом условий хранения, необходимости транспортирования и назначения, создана рецептура пробиотической кормовой добавки в двух формах (влажной и сухой), приведенная в таблице 8. Таблица 8 - Рецептуры пробиотической кормовой добавки «Флоранорм»

Компоненты Количество компонентов, кг/1000 кг

влажная сухая

Шрот кориандровый, кг 200 380

Шрот тмина, кг 100 190

Шрот укропа, кг 100 190

Шрот петрушки, кг 100 190

Сыворотка творожная, л 475 47,5

Дрожжи кормовые, кг 3,8 0,38

Магний сернокислый, кг 0,06 0,006

Калий фосфорнокислый двузамещенный, кг Натрий лимоннокислый трехзамещенный, кг 1,0 3,3 0,1 0,33

Технология получения кормовой добавки включает основные стадии, предусмотренные в биотехнологии ферментированных кормовых добавок и включает следующие основные этапы: подготовка чистой культуры и сырьевых компонентов, глубинная и последующая твердофазная ферментация МКМО на СОг-шротах с получением влажной формы, а после высушивания методом разбавления смесью шротов - сухой формы (рисунок 6).

Кормовая добавка сухая Кормовая добавка влажная

(в крафт-мешках, 25 кг) (в полиэтиленовых пакетах, 05 кг)

Рисунок 6 — Принципиальная схема получения кормовой добавки «Флоранорм»

Для иллюстрации адсорбционной способности бактерий при использовании в качестве субстрата-носителя смеси шротов, получили снимки поверхности добавки (ее влажной формы) свежевыработанной и после хранения в течение 3 месяцев.

3.9 Результаты сканирующей электронной микроскопии влажной формы кормовой добавки. Обнаруженные искусственно созданные микро-

колонии бактерий, заключенные в остатках жидкой питательной среды и адсорбированные на поверхности шротов, вероятно, обеспечат высокую выживаемость при прохождении через кислую среду желудка, а также локальную колонизацию слизистых оболочек кишечника, тем самым нормализуя кишечную микрофлору, в том числе за счет пребиотического воздействия шротов пряно-ароматического сырья.

3.10 Опытно-промышленная апробация и разработки технической документации на кормовую добавку. В условиях ООО «Биотехагро» выработана опытно-промышленная партия кормовой добавки. Разработан и утвержден комплект технической документации па пробиотическую кормовую добавку «Флоранорм» ТУ 9291-010- 74267440-2010, ТИ 010-74267440-2010.

Требования к показателям качества пробиотической кормовой добавки «Флоранорм» сформулированы в таблице 9.

Таблица 9 - Показатели качества добавки

Наименование показателя Характеристика и значение показателей

влажная форма сухая форма

Запах Пряно-ароматический

Вкус Чистый, кислый Пряный

Цвет Коричневый, равномерный

Консистенция Однородная влажная Порошкообразная

масса

РН, в пределах 4,5 - 5,5 6,0 - 6,5

Количество жизнеспособных

бактерий каждого вида,

КОЕ/г, не менее:

свежевырабоганный

Ь./асП\ч 170г5. 2,0 х 109 2,0 х 108

ЬЬ. асШорЬНих 43,-. 2,0 х 109 2,0 х 108

после хранения

Ь./асИ.ч 170<-5, 1,0 х 108 1,0 х 108

ЬЬ. аайорЬИт 43с, 1,0 х 108 1,0 х I08

Микробиологическая чистота Должен быть бактерийно чистым

Подлинность При микроскопировании должен содержать

бактерии L. lactis 1704-5, Lb.acidophilus 43с,

Влажность, % 60-68 10-12

Направленное пробиотическое воздействие, обеспеченное титром МКМО не менее 100 млн. клеток в 1 г, проверяли в экспериментах на птице.

3.11 Оценка эффективности использования нробиотнческой кормовой добавки в составе комбикорма в кормлении пгицы. Исследования кормовой добавки проводили в условиях птицефабрики ЗАО «Агроком-плекс» ООО «Кубань» па 165 цыплятах-бройлерах в течение 39 дней, которые содержались в типовых клеточных батареях КБУ-3, доступ к воде и корму - свободный. Из цыплят, подобранных по живой массе, было сформировано 3 группы по 55 голов птицы: 1,2- контрольные, 3 - опытная. Цыплята всех групп получали основной рацион (ОР); второй группы - дополнительно к ОР ежедневно получали пребиотик (лактулозу) в количестве 0,41 г на голову, а третьей - дополнительно к ОР «Флоранорм» из расчета по 0,5 г на голову. Через 39 дней от начала эксперимента определяли влияние кормовых добавок на общее состояние организма цыплят-бройлеров (таблица 10).

Таблица 10 - Результаты испытаний добавки на цыплятах-бройлерах

Показатели Контрольные группы Опытная

1 2 3

Живая масса в 39-дневном

возрасте 2057,8 ± 27,57 2106,9 ±42,17 2138,3± 29,22

Валовой прирост живой

массы, г 2019,8 2068,9 2100,3

Среднесуточный прирост, г 51,8 53,0 53,8

Сохранность поголовья в

конце выращивания, % 94,5 98,2 98,2

Затраты корма на 1 кг при-

роста живой массы, кг 1,90 1,85 1,83

Масса потрошеных тушек, г 1506,3 ± 13,78 1542,6 ± 18,01 1582,9 ±36,00

Выход потрошеных тушек, % 73,20 73,22 74,02

Мышцы:

ножные, г 254,0 ±26,10 292,0 ± 20,00 299,0 ± 13,07

в % к массе потрошеной

тушки 16,79 19,30 19,84

грудные, г 323,0 ± 17,00 364,0 ± 9,25 381,0 ±21,28

в % к массе потрошеной

тушки 21,35 24,16 25,18

Эксперименты по применению «Флоранорм» в рационе птиц показали его эффективность, так как по основным зоотехническим показателям (прирост массы тела, сохранность, конверсия корма) опытная группа цыплят-бройлеров превосходила контрольные.

Экономический эффект от производства продукта составит 1383 тыс. руб. в расчете на 300 тони в год. В расчете на годовой объем производства (50 тыс. голов птицы) дополнительная прибыль на птицефабрике составит 475,0 тыс. руб. Увеличение сохранности поголовья птицы на 3 %, приведет к увеличению производства мяса птицы в год на 3150,45 кг, что позволит увеличить прибыль на 27,79 тыс. руб.

ВЫВОДЫ

Теоретически обоснована и экспериментально подтверждена эффективность использования СОгшротов пряно-ароматического сырья в качестве субстрата в производстве пробиотической кормовой добавки.

1. Выявлен пробиотический потенциал молочнокислых микроорганизмов L. Iactis 170r5, Lb.acidophilus 43г, в качестве пробионтов. Для создания кормовой добавки предложена их ассоциация в соотношении 1:1; оптимальными условиями для достижения Время совместного культивирования 32-36 ч, титр культур (7,4 - 7,6 lg КОЕ/г) и значением pH 4,0 - 4,2.

2. Экспериментально обоснованы режимы подготовки сырья к ТФФ (доведение до влажности 33,6-35%, стерилизация при 121 °С в течение 20 мин), обеспечивающие их стерильность, а также доступность и сохранность питательных веществ в субстрате.

3. С учетом воздействия на ассоциацию выбранных МКМО в процессе ТФФ, выявлен технологический потенциал различных шротов пряно-ароматического сырья. Наиболее перспективными для выращивания ассоциации выбранных штаммов являются шроты, полученные в процессе С02-экстракции семян кориандра, петрушки, укропа и тмина.

4. Благодаря особенностям химического состава шроты соответствуют сложным трофическим потребностям МКМО так как содержат аминный азот на уровне 0,189 - 0,218 % и растворимые и легкогидролизуемые углеводы 1,723 - 2,793 % при концентрации минеральных веществ в пределах 6,4 ^ 9,7%, что позволяет считать данное сырье ценным питательным субстратом.

5. Выявленный росгстимулирующий эффект смеси шротов в глубинной культуре повышает титр жизнеспособных клеток (в модельной среде до 9,3 против 7,9 ]g КОЕ/г в контроле). В процессе твердофазной ферментации МКМО использование шротов в качестве субстрата повышает метаболическую активность, увеличивая выход молочной кислоты в 4 раза по сравнению с глубинным культивированием.

6. По результатам сравнительной оценки динамики накопления МКМО на отдельных шротах и их смесях, оптимизирован состав смеси шротов кориандр: петрушка: укроп: тмин в соотношении 2:1:1:1, обеспечивающий количество жизнеспособных клеток на уровне 109 КОЕ/г. Сформулированы требования к смеси шротов, которая должна содержать аминного азота не менее 1,9 %, растворимых углеводов не менее 2 %.

■ 7. Разработана новая питательная среда для глубинного культивирования выбранной ассоциации МКМО, позволяющая полностью заменить ценное сырье - молоко коровье: творожная сыворотка (95%), экстракт дрожжей (5%), соли, г/л: MgS04 -1,0; К2 НР04 - 1,0; С(1Н7№0,-6/>.

8. Полученные электронные снимки поверхности продукта показали, что пробиотические бактерии находятся в виде микроколоний, сорбированных на шротах; обеспечивая их высокую выживаемость в продукте и эффективность при применении.

9. Разработана рецептура пробиотической кормовой добавки «Флора-норм» для производства в двух формах - влажной и сухой. В результате оценки эффективности различных приемов сушки для получения сухой

формы рекомендован наиболее перспективный - метод разбавления влажной формы смесыо шротов, обеспечивающий титр не менее 108 КОЕ/г.

10. Определены показатели качества кормовой добавки «Флора-норм» и сроки ее гарантийного хранения (в течение 1,5 месяцев при температуре 18-20 °С для сухой формы и 3 месяца при температуре 2 - 4 °С для влажной).

11. Разработана техническая документация на производство пробио-тической кормовой добавки «Флоранорм» - ТУ 9296 - 010 - 74267440 - 2010 и ТИ 010-74267440-2010.

12. Опытно-промышленная апробация подтвердила эффективность производства в условиях ООО «Биотехагро» (г. Тимашевск).

13. В условиях прицефабрики ЗАО «Arpoкомплекс» «Кубань» Усть-Лабинского района выявлена эффективность применения кормовой добавки «Флоранорм» при кормлении цыплят-бройлеров.

14. Экономический эффект от производства продукта составит 1383 тыс. руб. в расчете на 300 тонн в год. В расчете на годовой объем производства (50 тыс. голов птицы) дополнительная прибыль на птицефабрике за счет сохранности поголовья и прироста его живой массы, а также улучшения конверсии корма составит 502 тыс. руб.

Список публикаций по теме диссертации:

1. Хамитова Н.Р. Перспективные направления использования растительного сырья в производстве пробиотиков [Текст] / Н.Р. Хамитова, Т.И. Тимофеенко, A.C. Стукало, ООО «Издательский дом-ЮГ», Краснодар, 2010,- 116 с.

2. Хамитова Н.Р. Сравнительная оценка эффективности применения СОг-шротов пряно-ароматического сырья для твердофазной ферментации молочнокислых микроорганизмов [Текст] / Н.Р. Хамитова, Т.А. Шахрай, Т.И. Тимофеенко // Известия ВУЗов. Пищевая технология, №1, 2010. - С. 44-45.

3. Хамитова Н.Р. Выбор штаммов молочнокислых микроорганизмов для получения пробиотической добавки [Текст] / Н.Р. Хамитова, Т.А. Шах-

рай, Т.И. Тимофеенко // Современное состояние и перспективы развития пищевой промышленности и общественного питания: Материалы Ш Всероссийской научно-практической конференции, с международным участием, Челябинск, 2009. - С. 206-208.

4. Хамитова Н. Р. Результаты исследования влияния субстратов на метаболическую активность молочнокислых микроорганизмов [Текст] / Н.Р. Хамитова, Т. А. Шахрай, Т. И. Тимофеенко // Актуальные вопросы современной науки и образования: Материалы Общероссийской научной конференции на основе интернет-форума, Красноярск, 2009. - С. 1129-1132.

5. Хамитова Н.Р. Сухой пробиотический продукт для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта [Текст] / Н.Р. Хамитова, Т.А. Шахрай, A.C. Стукало // Качество продукции, технологий и образования: Материалы III научно-практической конференции, Магнитогорск, 2008 г. - С. 206207.

6. Хамитова Н.Р. Научные основы разработки нового синбиотика [Текст] / Н.Р. Хамитова, Т.А. Шахрай, Т.И. Тимофеенко, Н.Ф. Гринь // Функциональные продукты питания: гигиенические аспекты и безопасность: Международная научно-практическая конференция, Краснодар, 2009. - С. 64.

7. Лобода A.B. Технология биологически активной добавки из нетрадиционного растительного сырья [Текст] / A.B. Лобода, Л.А. Тарабаричева, Л.В. Филиппова, Н.Р. Хамитова // Функциональные продукты питания: гигиенические аспекты и безопасность: Международная научно-практическая конференция, Краснодар, 2009. - С. 65.

8. Способ получения сухого пробиотического препарата. Патент РФ № 2380107 по заявке № 2008117214. Опубл. 27.01.2010. Бюл. № 3. МПК: А61К 35/66; А23К 1/165. / Н.Р. Хамитова, Т.А. Шахрай, А.И. Петенко, A.C. Стукало, Н.Ф. Гринь.

9. Способ получения сухого синбиотического препарата. Патент РФ № 2375069 по заявке № 2008117212. Опубл. 10.12.2009. Бюл. № 34. МПК: А61К 35/66; А23К 1/165. / Н.Р. Хамитова, Т.А. Шахрай, Т.И. Тимофеенко, A.C. Стукало, A.B. Гринь.

Подписано в печать 22.1 1.2010. Печать трафаретная. Формат 60x84 1/16. Усл. печ. л. 1,35. Тираж 100 экз. Закат № 398. ООО «Издательский Дом-Юг» 350072, г. Краснодар, ул. Московская 2, корп. «В», оф. В-120 тел. 8-918-41-50-571

e-mail: olfomenko@yandex.ru Сайт: http://icl-yug.namd2.ru

ВВЕДЕНИЕ.

1 АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКОЙ И ПАТЕНТНОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Основные проблемы коррекции нормофлоры человека и животных

1.2 Пути воздействия микроорганизмов на физиологические функции кишечника.

1.2.1 Микроорганизмы, применяемые в качестве пробиотиков.

1.2.2 Свойства основных метаболитов молочнокислых бактерий.

1.3 Пряно-ароматическое сырье - источник биологически активных веществ.

1.4 С02-шроты пряно-ароматических культур - перспективное сырье для получения продуктов пробиотического назначения.

1.5 Использование вторичных сырьевых ресурсов в микробиологическом синтезе.

1.5.1 Твердофазная ферментация - перспективное направление переработки вторичных отходов растениеводства.

1.6 Проблемы повышения качества мяса птицы.

1.7 Теоретические предпосылки создания пробиотических продуктов для коррекции нормофлоры кишечника птицы.

2 МЕТОДИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ.

2.1 Объекты исследования.

2.2 Методика проведения экспериментов.

2.2.1 Методика глубинного культивирования МКМО.

2.2.2 Методика выявления технологических и пробиотических свойств МКМО.

2.2.3 Методика твердофазной ферментации МКМО.

2.3 Методы исследования сырья и готовой продукции.

2.3.1 Методы исследования С02-шротов.

2.3.2 Методы исследования микроорганизмов.

2.3.3 Методы исследования влажной формы продукта.

2.3.4 Методика получения электронных снимков.

2.3.5 Методы исследования готового продукта.

2.4 Методика проведения опытно-промышленных испытаний.

2.5 Методика проведения опытов на птице.

2.6 Методика обработки результатов исследований.

3 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

3.1 Выявление технологического и пробиотического потенциала штаммов молочнокислых микроорганизмов.

3.2 Оценка штаммосовместимости МКМО для составления ассоциации.

3.3 Выбор ССЬ-шротов в качестве субстрата при получении кормовой добавки.

3.3.1 Определение режимов стерилизации шротов перед твердофазной ферментацией.

3.3.2 Обоснование выбора твердофазной ферментации МКМО для создания пробиотической кормовой добавки.

3.3.3 Тестирование СОг-шротов в качестве субстрата для ТФФ.

3.4 Изучение химического состава С02-шротов.

3.5 Выявление ростстимулирующего эффекта С02-шротов и их смесей

3.5.1 Исследование динамики накопления сухих веществ в модельных средах.

3.5.2 Выявление влияния смеси шротов на развитие МКМО.

3.6 Оценка метаболической активности МКМО.

3.7 Разработка производственной питательной среды для глубинного культивирования МКМО.

3.8 Сравнительная оценка эффективности получения в различных формах.

3.9 Разработка рецептур и принципиальной технологической схемы производства Б АД «Флоранорм».

3.10 Обсуждение результатов сканирующей электронной микроскопии 85 4 ОПЫТНО-ПРОМЫШЛЕННАЯ АПРОБАЦИЯ КОРМОВОЙ

ПРОБИОТИЧЕСКОЙ ДОБАВКИ.

4.1 Выработка опытных партий и разработка документации.

4.2 Оценка эффективности действия пробиотической кормовой добавки при выращивании цыплят-бройлеров.

4.3 Расчет экономической эффективности от производства пробиотической добавки «Флоранорм».

Объем производства мяса птицы в России за I квартал 2010 года составил 893,4 тыс. т. в живой массе, чго на 14,6% больше, чем за аналогичный период 2009 года [1]. Новые среднесрочные (до 2012 года) решения в области регулирования импорта мяса и живого скота и соглашения по новому Таможенному союзу ознаменовали вступление отечественной мясной отрасли в новую стадию развития. Согласно утвержденной «Доктрины продовольственной безопасности России», через 10 лет более 80 % продовольс1 вия в стране будет отечественным, при этом доля импорта мяса птицы предполагается на уровне 15 %. Сейчас на рынке доминирующее положение занимает мясо птицы. Эго связано в первую очередь с ценой на мясо крупного рогатого скога, а также с восприятием продуктов из птицы как более диетические, содержащие меньше жира.

В последнее время в птицеводстве особое внимание уделяется препаратам, обладающим профилактической эффективностью. Широко применяют ферменты, препараты на основе нуклеиновых кисло г, пробиотики (нарине, бак-тисубтил, максилин, лактобифадол, энтеробифидин, бифитрилакт и др.), биологически активные вещества, кормовые добавки. Они оказывают позитивное влияние на организм птицы: улучшают кишечный и микробный баланс и, следовательно, повышают устойчивость организма к действию неблагоприятных факторов внешней среды, сохранность и продуктивносгь [2]. Применение про-биотиков позволяет ускорить рост молодняка и уменьшить его отход (Карпуть, Бабина, 1996; Корочкин, 1996, 1997; Субботин и др., 1999; АЛ. Шурыгин и др., 1996; Тараканов, 1987, 2000; Поздрин и др., 2001, 2002, 2003, 2005; Шендеров, 2001; Панин, 2007; Герасименко, 2008).

Разработки различных форм пробиотиков, адсорбированных на шротах (подсолнечный, соевый, рапсовый), подсолнечной лузге, шелухе проса и гречихи или отрубях, ведутся на протяжении более 20 лет (Л.К. Эрнст, Г.Ю. Лаптев, А.И. Петенко, А.Г. Кощаев, В.В. Солдатова).

Побочные продукты зернопереработки (шелуха проса и гречихи), а также лузгу подсолнечника используют в кормлении после предварительной твердофазной ферментации бактериями-продуцентами целлюлозолитических ферментов. Оптимальным для твердофазной ферментации (ТФФ) таких отходов является применение смешанных бактериальных заквасок из целлюлозолитических, пептозосбраживающих молочнокислых и пропионовокислых бактерий [3]. Вместе с тем, в настоящее время интенсивно развивается технология уклекислотной экстракции биологически активных компонентов из различного, в том числе пряно-ароматического сырья.

По данным производителя ССЬ-экстрактов ООО «Кампания Караван» (г. Краснодар), благодаря мягкому тепловому режиму (температура 20-28 °С, давление до 7,0 МПа) и предварительному удалению кислорода, вторичные продукты переработки - С02-шроты являются высокоцепными продуктами и обладают следующими общими свойствами [4]:

- в соответствии с требованиями технологии, при сбросе давления достигается частичный или полный разрыв клеток; клетки вскрыты и их содержимое более доступно для дальнейшего использования;

- кислород вытеснен углекислотой, который консервирует сырье, препятствуя образованию вредных радикалов, перекисей и т.д.;

- весь биоактивный, в основном водорастворимый, витаминный, микроэлементный и другие комплексы, а также белок остаются в неизменном нативном состоянии.

Разработка безотходных технологий, в том числе с применением микробиологического синтеза, позволит максимально использовать все ценные компоненты таких шротов, и создать продукты, например пробиотической направленности. Проблема расширения сферы применения такого сырья актуальна не только в связи со значительным его объемом (только в Южном Федеральном округе 600 тонн в год), но и благодаря новым свойствам, которые оно приобретает в процессе С02-экстракции.

Создание импортозамещающих кормовых добавок с использованием С02-шротов актуально, так как комплекс их питательных компонентов может обеспечить накопление биомассы молочнокислых бактерий в виде и количестве, достаточном для достижения пробиотического воздействия.

Целью настоящей работы является разработка рецептуры пробиотиче-ской кормовой добавки на основе ССЬ-шротов пряно-ароматического сырья.

В результате выполненных исследований теоретически обоснована и экспериментально подтверждена эффективность использования ССЬ-шротов пряно-ароматического сырья в качестве субстрата в производстве пробиоти-ческой кормовой добавки.

Выявлен пробиотический потенциал молочнокислых микроорганизмов (МКМО) Lactococcus lactis subsp. lactis 1704-5, Lactobacillis acidophilus 43c, в качестве пробионтов. Для создания кормовой добавки предложена их ассоциация в соотношении 1:1.

Экспериментально обоснованы режимы подготовки сырья к ТФФ, обеспечивающие его стерильность, а также доступность и сохранность питательных веществ в субстрате.

С учетом воздействия на ассоциацию выбранных МКМО в процессе ТФФ, выявлен технологический потенциал различных шротов. Наиболее перспективными для выращивания ассоциации выбранных штаммов являются шроты из семян кориандра, петрушки, укропа и тмина.

Показано что, благодаря особенностям химического состава, а именно: по содержанию аминного азота; растворимых и легкогидролизуемых углеводов при высокой концентрации минеральных веществ шроты соответствуют сложным трофическим потребностям МКМО.

Выявлено в экспериментах на модельных средах в процессе глубинного культивирования ростстимулирующее действие смеси шротов (повышение титра жизнеспособных клеток). В процессе твердофазной ферментации МКМО использование шротов в качестве субстрата интенсифицирует метаболическую активность, значительно увеличивая выход молочной кислоты.

По результатам сравнительной оценки динамики накопления МКМО на отдельных шротах и их смесях, предложен оптимизированный состав смеси шротов из семян кориандра, петрушки, укропа и тмина в соотношении 2:1:1:1, обеспечивающий количество жизнеспособных клеток не менее 109 КОЕ/г. Сформулированы требования к смеси шротов, которая должна содержать аминного азота не менее 1,9 %, растворимых углеводов не менее 2 %.

Впервые получены электронные снимки поверхности продукта, которые показали, что пробиотические бактерии находятся в виде микроколоний, сорбированных на шротах, обеспечивая их высокую выживаемость в продукте и эффективность при применении.

Предложена новая производственная питательная среда для глубинного культивирования выбранной ассоциации МКМО с полной заменой ценного сырья (молоко) на творожную сыворотку.

Разработана рецептура пробиотической кормовой добавки «Флоранорм» для производства продукта в двух формах - влажной и сухой, определены показатели качества и сроки ее гарантийного хранения. Разработана техническая документация на производство пробиотической кормовой добавки «Флоранорм» - ТУ 9296 - 010 - 74267440 - 2010 и ТИ 010 - 74267440 - 2010.

По результатам проведенной апробации рецептуры добавки в производственных условиях ООО «Биотехагро» (г. Тимашевск) принято решение о внедрении, расчеты экономической эффективности подтверди целесообразность ее производства. Экономический эффект от производства продукта составит 1383,34 тыс. руб. в расчете на 300 тонн в год. В расчете на годовой объем производства (50 тыс. голов птицы) дополнительная прибыль на птицефабрике составит 475,0 тыс. руб.

В условиях прицефабрики «Кубань» (Усть-Лабинский район) подтверждена целесообразность применения пробиотической кормовой добавки «Флоранорм» в составе комбикорма при выращивании цыплят-бройлеров.

Внедрение в производство и реализация в птицеводстве пробиотической кормовой добавки «Флоранорм» будет способствовать решению проблем птицеводческой отрасли, продукция которой занимает лидирующие положение на мясном рынке страны.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

МКМО - молочнокислые микроорганизмы ТФФ - твердофазная ферментация

НСР05 - наименьшая существенная разница для 5%-ного уровня значимости

СС - стандартная среда

ОПС — основная питательная среда

КОЕ - колони еобразующие единицы

L. — Lactococcus

Lb. - Lactobacillus

ВФ - влажная форма

СШ - сухие шроты

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт

ОР - основной рацион

ВЫВОДЫ И РЕКОМЕНДАЦИИ

Теоретически обоснована и экспериментально подтверждена эффективность использования СОг-шротов пряно-ароматического сырья в качестве субстрата в производстве пробиотической кормовой добавки.

1. Выявлен пробиотический потенциал молочнокислых микроорганизмов L. lactis 1704-5, Lb.acidophilus 43с, в качестве пробиошов. Для создания кормовой добавки предложена их ассоциация в соотношении 1:1. Время совместного культивирования 32 - 36 ч, титр культур (7,4-7,6 lg КОЕ/см ) и значением рН 4,0-4,2.

2. Экспериментально обоснованы режимы подготовки сырья к ТФФ (доведение до влажности 33,6 — 35,0 %, стерилизация при

121 °С в течение

20 мин), обеспечивающие их стерильность, а также доступность и сохранность питательных веществ в субстрате.

3. С учетом воздействия на ассоциацию выбранных МКМО в процессе ТФФ, выявлен технологический потенциал различных шротов. Наиболее перспективными для выращивания ассоциации выбранных штаммов являются шроты из семян кориандра, петрушки, укропа и тмина.

4. Благодаря особенностям химического состава шроты соответствуют сложным трофическим потребностям МКМО так как содержат аминный азот на уровне 0,189 - 0,218 %, а также растворимые и легкогидролизуемые углеводы 1,723 - 2,793 % при концентрации минеральных веществ в пределах 6,4 - 9,7%, что позволяет определить ценность сырья в качестве питательного субстрата.

5. Выявленный ростстимулирующий эффект смеси шротов в глубинной культуре повышает титр жизнеспособных клеток (в модельной среде до 9,3 против 7,9 lg КОЕ/г в контроле). В процессе твердофазной ферментации МКМО использование шротов в качестве субстрата повышает метаболическую активность, увеличивая выход молочной кислоты в 4 раза по сравнению с глубинным культивированием.

6. По результатам сравнительной оценки динамики накопления МКМО на отдельных шротах и их смесях, оптимизирован состав смеси шротов кориандр: петрушка: укроп: тмин в соотношении равном 2:1:1:1, обеспечивающий количество жизнеспособных клеток на уровне 109 КОЕ/г. Сформулированы требования к смеси шротов, которая должна содержать аминного азота не менее 1,9 %, растворимых углеводов не менее 2 %.

7. Предложена новая питательная среда для глубинного культивирования выбранной ассоциации МКМО, позволяющая полностью заменить ценное сырье — молоко коровье: творожная сыворотка (95%), экстракт дрожжей (5%), соли, % - MgS04 - 0,1; К2 НРО} - 0,1; натрий лимоннокислый - 0,66.

8. Полученные электронные снимки поверхности продукта свидетельствуют о том, что пробиотические бактерии находятся в виде микроколоний, сорбированных на шротах, обеспечивая их высокую выживаемость в продукте и эффективность при применении в качестве пробиотика.

9. Разработана рецептура пробиотической кормовой добавки «Флоранорм» для производства продукта в двух формах - влажной и сухой. В результате оценки эффективности различных процессов сушки показано, что для получения сухой формы, взамен принудительного высушивания влажной формы продукта, рекомендован метод разбавления влажной формы продукта шротами на стадии получения сухой формы добавки, о обеспечивающей сохранность титра не менее 10 КОЕ/г.

10. Определены показатели качества кормовой добавки «Флоранорм» и сроки-ее гарантийного хранения (в течение 1,5 месяцев при температуре 18-20 °С для сухой формы и 3 месяца при температуре 2 - 4 °С для влажной).

11. Разработана техническая документация на производство пробиотической кормовой добавки «Флоранорм».

12. Опытно-промышленная апробация подтвердила эффективность производства добавки в условиях ООО «Биотехагро» (г. Тимашевск).

13. В условиях прицефабрики «Кубань» Усть-Лабинского района выявлена эффективность применения кормовой добавки «Флоранорм» в рационах цыплят-бройлеров.

14. Экономический эффект от производства продукта составит 1383,34 тыс. руб. в расчете на 300 тонн в год. В расчете на годовой объем производства (50 тыс. голов птицы) дополнительная прибыль на птицефабрике составит 475,0 тыс. руб.

1. Сазонова, Н.В. Анализ и прогноз ситуации на мясном рынке России. Интервью с Мушегом Мамиконяном Текст. / Н.В. Сазонова // Птица и птицепродукты. 2010. - № 4. - С. 38-40.

2. Шурыгин, А.Я. Использование молочнокислых микроорганизмов и продуктов их метаболизма Текст. / А.Я. Шурыгин, Э.И. Злищева, М.Ю. Мыринова, А.З. Газарян. Краснодар: «Советская Кубань», 1996. - 304 с.

3. Ткаченко, Е.И. Питание, микробиоценоз и интеллект человека Текст. / Е.И. Ткаченко, Ю.П. Успенский. СПб.: СпецЛит, 2006. - 590 с.

4. Пинегин, Б.В. Дисбактериоз кишечника Текст. / Б.В. Пинегин. -М., 1984.- 178 с.

5. Урсова, Н.И. Современные технологии в коррекции дисбактериозов у детей: Учебное пособие Текст. / Н.И. Урсова. Кафедра педиатрии ФУВ Московского областного научно-исследовательского клинического института им. М.Ф.Владимирского. - М., 2003. - С. 2-15.

6. ОСТ 91500.11.0004 «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника» введен 09.06.2003 г.

7. Барановский, А.Ю. Дисбактериоз кишечника Текст. / А.Ю. Барановский, Э.А. Кондрашина. 3-е изд. - СПб.: Питер, 2008. - 240 с.

8. Дисбактериоз кишечника: пути решения проблемы Текст. / Под ред. В.А. Алешкина. Государственное учреждение «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского». - М., 2004. - С. 1-9.

9. Хавкин, А.И. Биохимические аспекты метаболизма кишечной микрофлоры Текст. / А.И. Хавкин // Детская гастроэнтерология. Материалы IV Всероссийской школы по детской гастроэнтерологии и нутрициологии. -2006. -№ 5. -С. 3-14.

10. Коршунов, В.М. Дисбактериозы кишечника Текст. / В.М. Коршунов, В.В. Володин, Б.А. Ефимов // Детская больница. 2000. — № 1. -С. 66-74.

11. Баранов, А.А. Бифилиз в комплексном лечении и профилактике дисбактериоза кишечника Текст.: пособие для врачей / А.А. Баранов, И.А. Коровина, Э.Г. Щербакова и др. М., 2002. - 22 с.

12. Бондаренко, В.М. Дисбактериозы желудочно-кишечного тракта Текст. / В.М. Бондаренко, Б.В. Боев, Е.А. Лыкова [и др.] // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1999. - № 1. - С. 66-70.

13. Lilly, D.M. Probiotics. Growth promoting factors produced by microorganisms Текст. / D.M. Lilly, R.H. Stillwell // Science. 1965. - № 147. -C. 747-748.

14. Watkins, D.A. In vivo inhibitory effects of Lactobacillus acidophilus against pathogenic Escherichia coli in gnotobiotic chicks Текст. / D.A. Watkins, B.F. Miller, D.H. Neil // Poultry Science. 1982. - № 61. - C. 1298-1308.

15. Fuller, R. Probiotics Текст. / R. Fuller // J. Appl. Bacteriol. Symposium Supplment. 1986. - C. 1-7.

16. Fuller, R. Probiotics in man and animals Текст. / R. Fuller // J. Appl. Bacteriol. 1989. - № 66(5). - C. 365-378.

17. Турищев, C.H. Фитотерапия: Учеб. пособие для студ. высш. мед. учеб, заведений Текст. / С.Н. Турищев,- М.: Издательский центр « Академия», 2003. 304с.

18. Похлебкин, В.В. Все о пряностях. Виды, свойства, применение Текст. / В.В. Похлебкин. М., Пищевая промышленность. - 2007. - 175 с.

19. Рудавская, А.Б. Биокорректоры — обязательны компонент современных продуктов питания Текст. / А.Б. Рудавская // Пищевая промышленность. 2001. - № 5. - С. 54-55.

20. Чернова, Е.В. Русская национальная кухня и функциональное питание Текст. / Е.В. Чернова, В.Н. Красильников // Пищевая промышленность. 2001. — № 8. - С. 64-65.

21. Хавкин, А.И. Иммуномодулирующее действие пищевых волокон и пребиотиков Текст. / А.И. Хавкин, Е.С. Киселева // Лечащий врач. 2002. -№ 12.-С. 22-27.

22. Сергеев, В.Н. Биологически активное растительное сырье в пищевой промышленности Текст. / В.Н. Сергеев, Ю.И. Кокаев // Пищевая промышленность. -2001. — № 6. — С. 28-30.

23. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: В 2 т. Т. 2. Текст. / М.Д. Машковский 14-е изд. — М.: ООО «Издательство Новая Волна»: Издатель С.Б. Дивов, 2003. - 608 с.

24. Быков, В.А. Микробиологическое производство биологически активных веществ и препаратов Текст. / В.А. Быков [и др]. М.: Высшая школа, 1987.-С. 88-100.

25. Сазыкин, Ю.О. Биотехнология: Учеб. пособие Текст. / Ю.О. Сазыкин, С.Н. Орехов, И.И. Чакалева; под ред. А.В. Катлинского. 3-е изд., стер. - М.: Издательский центр «Академия», 2008. - 256 с.

26. Hunter, J.O. A review of the role of the gut microflora in irritable bowel syndrome and the effects of probiotics Текст. / J.O. Hunter, J.A. Madden // Br.J.Nutr. 2002. - № 88. - C. 67-72.

27. Lee, Y.K. Quantitative approach in the study of adhesion of lactic acid bacteria to intestinal cells ant their competition with enterobacteria Текст. / Y.K. Lee, C.Y. Lim, W.L. Teng [et al] // Appl. Envir. Microbiol. 2000. - № 66(9). -C. 3692-3697.

28. O'Sullivan, D.J. Screening of intestinal microflora for effective probiotic bacteria Текст. / D.J. O'Sullivan // J. Ag. Food Chem. 2001. - № 49. -C. 1751-1760.

29. Greene, J.D. Factors involved in adherence of lactobacilli to human Caco-2 cells Текст. / J.D. Greene, T.R. Klaenhammer // Appl. Envir. Microbiol. -1994. № 60. - C. 4487-4494.

30. Tannock, G.W. Molecular assessment of intestinal microflora Текст. / G.W. Tannock II Am.J. Clin. Nutr. 2001. - № 73. - C. 410-414.

31. Урсова, Н.И. Пробиотики в комплексной коррекции дисбактериоза кишечника у детей Текст. / Н.И. Урсова // Лечащий врач. Медицинский научно-практический журнал. 2002. - № 2. - С. 20-24.

32. Бондаренко, В.М. Пробиотики и механизмы их лечебного действия Текст. / В.М. Бондаренко, Р.П. Чупринина, Ж.И. Аладышева [и др.] // Эксперим. клин, гастроэнтерол. 2004. - № 3. - С. 83-87.

33. Бондаренко В.М. Дисбиозы и препараты с пробиотической функцией Текст. / В.М. Бондаренко, А.А. Воробьев // Журн. микробиол. -2004.-№ 1,-С. 84-92.

34. Фирсов, Н.Н. Микробиология: словарь терминов / Н.Н. Фирсов. -М.: Дрофа, 2005. 256 с. - (Биологические науки: Словари терминов).

35. Урсова, Н.И. Хилак форте: новое направление в коррекции дисбактериоза кишечника у детей Текст. / Н.И. Урсова, Г.В. Римарчук, К.И. Савицкая II Фарматека. 2005. - № 2. - С. 25-28.

36. Kandler, О. Regular, non-sporing gram-positive rods Текст. / О. Kandler, N. Weiss // In Bergey's Mannual of System Bacteriol. 1986. - № 21. C. 1208-1234.

37. Smulders, F.G.M. Lactic acid:considerations in favour of its acceptance as a mean decontaminant Текст. / F.G.M. Smulders, P. van Logtestijn Barendsen // J. Food Technol. 1986. -№ 21. - C. 419-436.

38. Corlett, D.A. pH and acidity Текст. / D.A. Corlett, M.N. Brown // Microbial Ecology of Food. 1980. - № 3. - C. 92-111.

39. Зинченко, E.B. Иммунобиотики в ветеринарной практике Текст. / Е.В. Зинченко, А.Н. Панин. Пущино: ОНТИ ПНЦ РАН, 2000. - 164 с.

40. Adams, M.R. Growth inhibition of food-born pathogens by lactic and acetic acids and their mixtures Текст. / M.R. Adams, С.J. Hall // Int. J. Food Sci. Technol. 1988. -№. 23. - C. 287-292.

41. Soomro, A.H. Role of Lactic Acid Bacteria (LAB) in Food Preservation and Human Health Текст. / A.H. Soomro, T. Masud, A. Kiran // A Review Pakistan Journal of Nutrition. 2002. - № 1(1). - C. 20-24.

42. Лушников, K.B. Органические кислоты: свойства и спектр применения в сельском хозяйстве. 03.01.2006. URL: http://www.agroros-company.ru/library/article/?nid=14.

43. Грачева, Н.М. Хилак форте в комплексном лечении больных ОКИ и хроническими заболеваниями ЖКТ с явлениями дисбактериоза кишечника Текст. / Н.М. Грачева, Н.И. Леонтьева, О.С. Партии [и др.] // Consilium Medicum. 2004.-№1.-С. 31-34.

44. Colum, D. Probiotics: from myth to reality. Demonstration of functionality in animal models of disease and in human clinical trials Текст. /

45. D. Colum, L. Murphy // Antonie van Leeuwenhoek. 1999. -№ 76. - C. 279-292.

46. Белобородова, H.B. Метаболиты анаэробных бактерий (летучие жирные кислоты) и реактивность макроорганизма Текст. / II.B. Белобородова, С.М. Белобородов // Антибиотики и химиотерапия. 2000. -№2.-С. 28-35.

47. Савченко, С. В испытаниях подкислителей на «Омском беконе» победил «Селацид» С. Савченко, Д. Дрожжачих // Животноводство России. -2003.-№4.-С. 15-18.

48. Околелова, Т. Ферменты и подкислители в комбикормах для бройлеров Текст. / Т. Околелова, С. Щукина // Комбикорма. 2006. — № 1. -С. 67-68.

49. Кузнецова, Т.С. Кормовые антибиотики, пробиотики, подкислители и их комплексы с ферментами при производстве яиц Текст. / Т.С. Кузнецова // Ветеринария. 2007. - № 2. - С. 51-52.

50. Кузнецова, Т.С. Пробиотики и подкислители в кормлении кур несушек Текст. / Т.С. Кузнецова // Комбикорма. 2007. - № 7. - С. 73-74.

51. Корсун, В.Ф. Руководство по клинической фитотерапии. Лекарственные растения в гастроэнтерологии Текст. / В.Ф Корсун, К.А Пупыкина, Е.В. Корсун. М.: Практическая медицина, 2008. - 464 с.

52. Петрушевскнй, В.В. Справочник биологически активных веществ пищевой промышленности Текст. / В.В. Петрушевскнй. М.: Техника, 1985. -С. 51-59.

53. Кротова, И.В. Возможности рационального использования эфирномасличных растений Текст. / И.В. Кротова, A.A. Ефремов // Химия растительного сырья. 2002. -№ 3. - С. 29-33.

54. Дудченко, Л.Г. Пряно-ароматические и пряно-вкусовые растения: Справочник Текст. / Л.Г. Дудченко, A.C. Козьяков, В.В. Кривенко. Киев: Наукова думка. - 1989. - 304 с.

55. Сокольский, И. Пряности и мировая история Текст. / И. Сокольский // Наука и жизнь. 2008. - № 3. - С. 122-124.

56. Каден, H.H. Этимологический словарь научных названий сосудистых растений дикорастущих и разводимых в СССР / H.H. Каден, H.H. Терентьева. Вып. 1. - М.: изд-во МГУ, 1979. - С. 57.

57. Дудченко, Л.Г. Пряно-ароматические и пряно-вкусовые растения Текст. / Л.Г.Дудченко, A.C. Козьяков, В.В. Кривенко. — Киев: Наукова думка, 1989. 304 с. - 100 ООО экз. - ISBN 5-12-000483-0.

58. Муравьёва, Д. А. Тропические и субтропические лекарственные растения Текст. / А.Д. Муравьева. М.: Медицина, 1983. - С. 114-116.

59. Барштейн, В.Ю. Создание функциональных продуктов на основе использования углекислотных экстрактов Текст. / В.Ю. Барштейн // Проблеми харчу вання. -2004. № 3. - С 10-12.

60. Соколова, Т.В. Состояние и перспективы биотехнологического производства Текст. / Т.В. Соколова // Пищ. пром-сть. 2001. - № 6. - С. 58.

61. Кочергин, В.В. Производство натуральных биокоерректоров на базе дрожжевой промышленности Текст. / В.В. Кочергин // Пищевая промышленность. 2001. - № 2. - С. 42.

62. Кудряшева, A.A. Натуральные биокорректоры: качество, биологическая ценность, безопасность продовольственных ресурсов Текст. / A.A. Кудряшева. Пищевая промышленность. - 2001. - № 9. - С. 62-65.

63. Сассон, А. Биотехнология: свершения и надежды Текст. / А. Сассон. М.: Мир, 1987. - 205 с.

64. Агеев, Н.М. Применение препаратов винных дрожжей для детоксикации соков и вин Текст. / Н.М. Агеев, Т.И. Гугучкина // Тезисыдокладов V Международного симпозиума «Экология человека: пищевые технологии и продукты на пороге XXI века». М.: Пятигорск, 1997.

65. Соловьева, И.В. Использование биологических препаратов, нормализующих микрофлору в комплексной терапии гинекологических больных Текст. / И.В. Соловьева // Антибиотики и микроэкология человека и животных. — М., 1988.

66. Борисенко, Е.Г. Разработка комплексной технологии белковых препаратов на основе нетрадиционного сырья и дрожжей Текст. : Дис. д-ра тех. наук. -М., 1990.

67. Борисенко Е.Г., Самойленко И.И., Василевич JI.H. и др. Способ профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных. Патент SU 1805965 A3, 1993.

68. Сассон, А. Биотехнология: свершения и надежды Текст. / А. Сассон. М.: Мир, 1987. - 205 с.

69. Шамсутдинова, В.Р. Новые продукты на основе кислой молочной сыворотки и дрожжей Текст. / В.Р. Шамсутдинова, О.П. Мазаева, Е.Г. Борисенко // Хранение и перераб. сельхозсырья. 2008. - № 10. - С. 46-51.

70. Юрин, В.Н. Процессы пищевой биотехнологии в производстве молочной основы для напитков Текст. / В.Н. Юрин, Ю.В. Космодемьянский, С.А. Бредихин, A.B. Кулаков // Пищевая пром-ть. 2001. - № 11. - С. 24-25.

71. Горбатова, K.K. Биохимия молока и молочных продуктов Текст. / К.К. Горбатова. СПб.: Гиорд, 2001. - 320 с.

72. Комаров, В.И. Вторичные сырьевые ресурсы пищевой промышленности — источник получения кормовых и пищевых биологически активных добавок Текст. / В.И. Комаров, Т.А. Мануйлов // Пищевая промышленность. 2001. — № 5. — С. 52-53.

73. Гаврилов, Г.Б. Комплексная переработка сыворотки с целью создания продуктов нового поколения Текст. / Г.Б. Гаврилов // Молочная промышленность. 2005. — № 12. — С. 42.

74. Нечаев, А.П. Пищевая химия Текст. / А.П. Нечаев, С.Е. Траубенберг, A.A. Кочеткова. — СПб.: Гиорд, 2004. 640 с.

75. Гаврилова, Н.Б. Низколактозный кисломолочный напиток Текст. / Н.Б. Гаврилова, C.B. Мяло // Молочная пром-ть. 2005. - № 12. - С. 44.

76. Волчатова, И.В. Углеродсодержащие отходы — перспективы переработки и использования / И.В. Волчатова // Экология и пром-ть России. -2009.-№9.-С. 56-57.

77. Жукова, И.Л. Сорбенты на основе целлюлозосодержащих материалов и их утилизация / И.Л. Жукова, С.Е. Орехова, Л.И. Хмылко // Экология и пром-ть России . 2009. - № 6. - С. 30-33.

78. Антимонов, C.B. Пшеничные отруби в технологии получения экструдированных экологически чистых кормов из отходов крупяных предприятий / C.B. Антимонов, С.Ю. Соловых, Е.В. Ганин // Изв. Вузов. Пищевая технология. 2008. - № 4. - С. 8-10.

79. Егорова, Т.А. Основы биотехнологии Текст. / Т.А.Егорова, Е.А. Живухина, С.М. Клунова. М.: Academia, 2005. - С. 93-96.

80. Неверова, O.A. Пищевая биотехнология продуктов из сырья растительного происхождения Текст. / O.A. Неверова, Г.А. Гореликова, В.М. Позняковский. Новосибирск: Сиб. Унив. Изд-во, 2007. - 415 с.

81. Белоус, A.M. Научные основы технологии сублимационного консервирования Текст. / A.M. Белоус, Ц.Д. Цветков. Киев: Научная думка, 1985.-206 с.

82. Бондаренко, В.М. Дисбиотические состояния и лечебные мероприятия при них Текст. / В.М. Бондаренко, Н.М. Грачева // Вести. РАМН. — 2005. -№ 12.-С. 23-29.

83. Волова, Т.Г. Биотехнология Текст. / Т.Г. Волова. Новосибирск: Изд-во Сибирского отделения Российской Академии наук, 1999. — 252 с.

84. Готтшалк, Г. Метаболизм бактерий Текст. / Г. Готтшалк. М.: Мир, 1982.-С. 194-201 .

85. Белясова, H.A. Биохимия и молекулярная биология Текст.: Учебник / H.A. Белясова. Мн.: Книжный Дом, 2004. - 416 с.

86. Савченко, С. В испытаниях подкислителей на «Омском беконе» победил «Селацид» С. Савченко, Д. Дрожжачих // Животноводство России. -2003.-№4.-С. 15-18.

87. Кощаев, А.Г. Биотехнология производства и применение функциональных кормовых добавок для птицы Текст. : дис. . доктора биол. наук : 16.00.04: защищена 26.12.2008 / Кощаев Андрей Георгиевич. -г. Краснодар, 2008. 355 с.

88. Зинченко, Е.В. Иммунобиотики в ветеринарной практике Текст. / Е.В. Зинченко, А.Н. Панин. Пущино: ОНТИ ПНЦ РАН, 2000. - 164 с.

89. Егоров, И. Эффективность пробиотика герацид Текст./И. Егоров,

90. Ш. Имангулов, К. Харламов и др. // Птицеводство. — 2007. № 6. - С. 56. (

91. Бессарабов, Б. Пробиотики эффективны и безвредны Текст. / Б. Бессарабов и др. // Животноводство России. 2006. - № 5. - С. 28-29.

92. Лысенко, С. Пробиотики для цыплят-бройлеров Текст./С. Лысенко, А. Бараников, А. Васильев // Птицеводство. 2007. - № 5. - С. 31 -32.

93. Крюков, О. Коррекция кишечного микробиоценоза у бройлеров Текст. / О. Крюков // Птицеводство. 2005. - № 5. - С. 33-34.

94. Стейнер, Т. Здоровый пищеварительный тракт ключ к продуктивности животных Текст. / Т. Стейнер // Комбикорма. — 2007. — № 3. — С. 95-96.

95. Панин, А.И. Пробиотики как неотъемлимый компонент рационального кормления животных и птицы Текст. / А.И. Панин // Птица и птицепродукты. 2008. -№ 3. — С. 13-15.

96. Степаненко, П.П. Микробиология молока и молочных продуктов: Учебник для ВУЗов Текст. / П.П. Степаненко. Сергиев Пасад: ООО «Все для Вас-Подмосковье», 1999. -415 с.

97. Сорокина, Н.П. Бактериальные концентраты и их ротация Текст. / Н.П. Сорокина // Переработки молока. 2006. - № 2. - С. 19-21.

98. Перфильев, Г.Д. Производство и применение бактериальных концентратов Текст. / Г.Д. Перфильев, Ю.Я. Свириденко // Сыроделие и маслоделие. 2006. - № 3. - С. 24-29.

99. Яркина, Я.А. Бакконцентрат бифидобакгерип и ЬасШЬасПиз сазе1 Текст. / Я.А. Яркина // Молочная пром-ть. 2005. - № 2. - С. 34-35.

100. Вторичные сырьевые резервы пищевой и перерабатывающей промышленности АПК России и охрана окружающей среды: Справочник Текст. / Под ред. Е.И. Сизенко. М.: Пищепромиздат, 1999. - 243 с.

101. Калошина, E.H. Производство сухого кормопродукта из спиртовой барды Текст. / E.H. Калошина // Хранение и переработка сельхозсырья. — 2006. № 6. — С. 75-77.

102. Квасников, Е.И. Молочнокислые бактерии и пути их использования Текст. / Е.И. Квасников, O.A. Нестеренко. М.: Наука, 1975.- 394 с.

103. Балдаев, Н.С. Твердофазная ферментация Текст. / Н.С. Балдаев.- Улан-Удэ: ВСГТУ, 2000. 94 с.

104. Ермаков, Е.И. Методы биохимического исследования растений Текст. / Е.И. Ермаков, В.В, Арасимович, Н.П. Ярошин Ленинград: Агропромиздат. - 1987. - 430 с.

105. Рядчиков, В.Г. Улучшение зерновых белков и их оценка Текст. / В.Г. Рядчиков. М.: Колос, 1978. - 367 с.

106. Арутюнян, Н.С. Лабораторный практикум по химии жиров Текст. / Н.С. Арутюнян, Е.П. Корнена, Е.В. Мартовщук [и др.] СПб.: ГИОРД, 2004. - 264 с.

107. Руководство по методам исследования, технохимическому контролю и учету производства в масложировой промышленности Текст. / Под ред. В.П. Ржехина и А.Г. Сергеева Л.: ВНИИЖ, 1967. - Т. 1- кн. 1, 2 - 1040 с.

108. Виноградова, A.A. Лабораторный практикум по общей технологии пищевых производств / A.A. Виноградова. М., 1991. - С. 56-72.

109. Рекомендация ИСО Р 1871 —71. Продукты сельскохозяйственные пищевые растительного и животного происхождения. Общие правила определения азота методом Кьельдаля.

110. Щербаков, В.Г. Лабораторный практикум по биохимии и товароведению масличного сырья Текст. / В.Г. Щербаков, С.Б. Иваницкий, В.Г. Лобанов М.: Колос. - 1999. - 128 с.

111. Методы анализа пищевых, сельскохозяйственный продуктов и медицинских препаратов Текст. / Под ред. В. Горвица. М.: Пищевая промышленность, 1974. — 743 с.

112. Славин, У.П. Атомно-абсорбционная спектрометрия Текст. / У.П. Славин. Ленинград: Химия. - 1971. - 352 с.

113. Мармузова, Л.В. Основы микробиологии, санитарии и гигиены в пищевой промышленности Текст. / Л.В. Мармузова. — 2-е изд., стер. — М.: Издательский центр «Академия», 2004. 136 с.

114. МУК 4.2.577-96. Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов.

115. Коваленко, Н.К. Бактериоциногенная лизоцимсинтезирующая активность молочнокислых бактерий Текст. / Н.К. Коваленко, Л.Н. Немировская // Микробиол. журн. 1999. - Т. 61. - № 6. - С. 42-50.

116. Решедько, Г.К. Особенности определения чувствительности микроорганизмов диско-диффузионным методом Текст. / Г.К. Решедько, О.У. Стецюк // Клинич. микробиол. и антимикр. химиотерапия. 2001. - № 4 (З).-С. 348-354.

117. Методика М 03-06-2010. Определение водорастворимых форм неоранических и органических анионов.

118. ОСТ 10 201-97. Силос из зеленых растений. Технические условия. Введен 01.01. 1998 г.

119. ГОСТ 27548-97. Корма растительные. Метод определения влаги.

120. ГОСТ Р 51417-99. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Определение массовой доли сырого протеина. Метод Кьельдаля. От 22.12.1999 г.

121. ГОСТ Р 52839-2007. Корма. Методы определения содержания сырой клетчатки с применением промежуточной фильтрации. От 01.01,2009г.

122. ГОСТ 26226-95. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения сырой золы. От 01.01.1997 г.

123. ГОСТ 13496.15-97. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения сырого жира. От 01.01.1999 г.

124. ГОСТ 26570-95. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения кальция. От 01.01.1997 г.

125. ГОСТ 26657-97. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения фосфора. От 01.01.1999 г.

126. ГОСТ 26176-91. Корма, комбикорма. Методы определения растворимых и легкогидролизуемых углеводов. От 01.01.1993 г.

127. ГОСТ Р 51637-2000. Премиксы. Методы определения массовой доли микроэлементов (мараганца, железа, меди, цинка, кобальта). От 01.07.2001 г.

128. ГОСТ 13496.21-87. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения лизина и триптофана. От 01.07.1988 г.

129. ГОСТ 10442.16 94 «Продукты кормовые. Методы определения количества мезофильных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

130. Киркман, М.Ф. Контракт с кишечником. Микробиология кишечного тракта и пробиотики Текст. / М.Ф. Киркман, JI. Седгард. Пер. с англ. - М.: Арнебия, 2004. - 160 с. - 1000 экз. - ISBN 5-9244-0023-9.

131. Стасьева, О.Н. Совершенствование технологий получения и применения СОч-экстрактов из растительного сырья Текст. : дис. . канд. техн. наук : 05.18.10 : защищена 28.10.2005 / Стасьева Оксана Николаевна. г. Краснодар,2005.- 156с.-С. 95-97.

132. Ананьева, Н.В. Изучение процесса культивирования молочнокислых палочек на питательных средах различного состава Текст. / Н.В. Ананьева // Переработка молока: технология, оборудование, продукция. -2007. -№ 2. -С. 20-21.

133. Анохина, И.В. Поверхностные адгезины лактобацилл рыхло связанные с клеточной стенкой и элимирирующиеся во внешнюю среду при выращивании в питательных средах Текст. / И.В. Анохина // Бюл. эксп. биологии и медицины. 2006. — Т. 142, № 11. - С. 557-561.

134. Москаленко, B.C. Кориандр Текст. / B.C. Москаленко, Н.М. Сербина, А.Р. Резников // Масличные и эфирномасличные культуры. Киев, 1984.-С. 70-80.

135. Викторов, П.И. Методика и организация зоотехнических опытов Текст. / П.И. Викторов, В.К Менкин.- М.: ВО Агропромиздат, 1991.- 110 с.

136. Фисинин, В.И. Производство бройлеров Текст. / В.И. Фисинин, Г.А. Столяр. М.: Агропромиздат, 1989.- 184 с.

137. Касьянов, Г.И. Технологические основы С02-обработки растительного сырья Текст. / Г.И.Касьянов М.: Русоз, 1994. - 132 с.

138. Касьянов, Г.И. Сверхкритическая С02-экстракция ароматических и вкусовых веществ Текст. / Г.И.Касьянов, О.И. Квасенков // Хранение и прераб. сельхозсырья. 1994. - № 1. - С. 11-13.

139. Кошевой, Е.П. Экстракция двуокисью углерода в пищевой технологии Текст. / Е.П. Кошевой, Х.Р.Блягоз. Майкоп: Майк. гос. тех. унт, 2000.- 495с.

140. Латин, H.H. СОг-экстракт продукт XXI века Текст. / H.H. Латин, В.М. Банашек, О.Н.Стасьева // Пищевые ингредиенты и добавки. -2003. - № 1.-С. 26-27.

141. Гарабаджиу, A.B. Использование пробиотиков в промышленном птицеводстве Текст. / A.B. Гарабаджиу, В.Н. Федоров, Г.В. Козлов // Архив ветеринарных наук. 2004. - № 52. - С. 21-28.

142. Сидоренко, О.Д. Микробиология: Учебник для агротехнологов Текст. / О.Д. Сидоренко, Е.Г. Борисенко, A.A. Ванькова, Л.И. Войно. М.: ИНФРА-М, 2010.-287 с. - 10000 экз. - ISBN 978-5-16-02422-6.

143. Тараканов, Б.В. Методы исследовании микрофлоры пищеварительного тракта сельскохозяйственных животных и птиц Текст. / Б.В. Тараканов. М.: Научный мир, 2006. - 188 с. - 1000 экз.

144. Домарецкий, В.А. Производство концентратов, экстрактов^ и безалкогольных напитков, справочник: Справочник Текст. : Справочное издание / В.А. Домарецкий. Киев: Урожай, 1990. - 245 с. - 4600 экз.

145. Глушанова, Н.А. Питательная среда для приготовления жидкого лактобактерина Текст. / Н.А. Глушанова, А.И. Блинов : бюллетень / ВСНЦ СО РАМН. М., 2005, № 1 (39). - С. 153-157.

146. Jose, М. Use of Probiotics in Pediatrics: Rationale, Mechanisms of Action, and Practical Aspects Текст. / M. Jose // Nutr. Clin. Pract. 2007. - № 22.-C. 351.

147. Schrezenmeir, J. Probiotics, prebiotics, and synbiotics—approaching a definitionl Текст. / Jurgen Schrezenmeir, Michael de Vrcse // Am. J. Clin. Nutr. 2001.-№ 73.-C. 361-364.

148. Craig, W. Health-promoting properties of common herbs Текст. / Winston J Craig //Am. J. Clin. Nutr. 1999. - № 70. - C.491-499.

149. Vrese, M. Probiotics and Prebiotics: Effects on Diarrhea Текст. / Michael de Vrese, Philippe R. Marteau // The Journal of Nutrition. 2007. - № 137.-C. 803-811.

150. Katharina, E. Prebiotics, Probiotics, and Synbiotics Affect Mineral Absoiption, Bone Mineral Content, and Bone Structure Текст. / Katharina E.

151. Scholz-Ahrens, Peter Ade, Berit Marten, Petra Weber // J. Nutr. 2007. - № 137. -C. 838-846.

152. Lukas, M. Relationship between fecal crude protein concentration and diet organic matterdigestibility in cattle Текст. / M. Lukas, K.H. Siidekum, G. Rave, K. Friedel // J. Dairy Sci. 2007. - № 89. - C.1390-1399.

153. Reid, G. The Scientific Basis for Probiotic Strains of Lactobacillus Текст. / Gregor Reid // Applied and Environmental Microbiology. 1999. - № 65 (9). - C. 3763-3766.

154. Collins, D. Probiotics, prebiotics, and synbiotics: approaches for modulating the microbial ecology of the gut Текст. / M David Collins, Glenn R Gibson // Am. J. Clin. Nutr. 1999. - № 69. - C. 1052-1057.

155. Omar, S. Microbial biomass and protein production from whey Текст. / S. Omar, S. Sabry // J. of Islamic Academy of Sciences. 1991. - № 4:2. -C. 170-172.

156. Kent, L. Probiotic Immunomodulation in Health and Disease Текст. / L. Kent, Neil E. Hubbard // J. of Nutrition. 2000. - № 130. - C. 403-409.

157. Liong, M. Effects of a Lactobacillus casei Synbiotic on Serum Lipoprotein, Intestinal Microflora, and Organic Acids in Rats Текст. / M. Т. Liong, N. P. Shah // Am. Dairy Science Association. 2006. - 140 c.