автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.10, диссертация на тему:НАУЧНОЕ ОБОСНОВАНИЕ, РАЗРАБОТКА И ПРИМЕНЕНИЕ СПОСОБОВ АКТИВАЦИИ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ИНТЕНСИФИКАЦИИ ПРОМЫШЛЕННОГО БИОКАТАЛИЗА

та

АВДО»£№ в* К

мдаистн'ство ВЫСИВГО и среднего сшцшыюго

Московский ордене Трудового Красного Знамени технологический институт шнеевой промшленноста ;

На правах рукоаиои для служебного пользования Эй». * о Р9М

ХРАУЕЕНЕЕ5Т Светлана ^грньавна

I

ТЖ 677« 15.024:664

► *

научное обоснование, разработка и пршшэш спосовов активации <№гы5н,пшх вреиаратов дня штнгскзикши прсмлмшкяго шжагалкза

Сивциадьаость 05.18.10 - ««ШФЛогая витаминных,

фврниистяых к белковшс прваврвтоБ, чая и тебака

А В Т О.Р В Ф Е Р к Т

ОБРАЗОВАНИЯ РСФСР

джоеертацяя ка совскаяиз ученой степени доктора технических наук

Москва, 1985

Работа выполнена в Московской ордена Трудового Красного Знамени технологическом институте иищевой промышленности

• ' I

.Офивдальние ошоненты:

доктор технических тук, профессор А.И.Шотнер доктор технических наук Д.Б.Дифшиц ^ заслуженный деятель науки и техники, ' * доктор технических наук; профессор В.Л.Йровекко

Ведущая организация - кафедра микробиологии и технология

микробиологически! производств к кафедра биохимии Киевского технологического института пищевой промышленности ^^^ - ■

Эа^ма состоится 1985 г.

в -/О час. на заседании Специализированного совета^ Д 063 51 03 в Московском ордена Трудового Красного Знамена технологическом институте пищевой прошшленности {12Ю60 Ыооква, Волоколамское шоссе, Д.П). ' ^

О диссертацией можно ознакомиться в библиотека института.

- Автореферат разослан «/сг -¿Г- 1965 г.

Ученый секретарь Специализированного совета

к.т.н., доцент'Т.А.Сахарова

ОЭДШ ХАРАКТЕРИСТИКА. РАБОТЫ

. ♦ » Актуальность проблемы. ХХУ1 съегд КПСС, вхяэккуэ шарокуи программу повшеняя благосостояния советских лодзй, ка порзыЯ сдан поставил задач? улучшить снабжение населения продуктами сятаккя. Пути практического решения этой задача каиечеыы о Про-д ого льста ежой програшо страны, реалкзацкя которой в свето ра-шэгшй Епральского (1985 г.) Пленума Щ КПСС я ссзеязная в Центральном Комитета КПСС по вопросом ускорэЕНя научяз-тегаического прсгросоа <кшь 1985 г*} требует перевода отраслей агроирокшь-лэнн ого комплекса на путь интвнсяфихациЕ пронеэодства я повшо-еея ого эффективности па научгоЭ основа. Одаш ез направленна интенсивного раэзЕтля аяопоинкл аертЕк считает воеыерную экономия и рациональное использовенео материальных ресурсов в удуше-ешэ качзотза продукции.

Большой вклад а рсшонка задач ВрадоБодьсгв'Лшеа программы взос.тг ссояадовеши, вюзкакдде теордткчэскпа б практнчеодзз аспекта бкотехиоясгея.

Среда продуктов микробиологического снпгэза ваккая роль ср£2шдл0жат ферыэзпшм препаратам, цршвнеккв которых при переработке рестаталького а кизотпого онрья даэт больсжа преимущества, способствуя нитеасЕфдкацаи тегЕологкчвскжг процессов, улучшеняв качэстаа с: увеличении выхода продукции, наиболее эффективной переркботяе отходов производства, ,

На основании изучения комплекса ферментных препаратов, а таксе бкогныическвг превращений субстратов при воздействии ферментов разработана эффективные способы применения микробных ферментных препаратов в различных отраслях промышленности: хлебопекарной, мясной, рыбной, сыродельной; " "'

имени К.А. Тимирязева | 11НБ именн Н И. Железном 1 Фонд научный литературы

Одеако, ферментные препараты имеют относительно высокую стоимость, и« кроме того, спрос па них в большинстве отраслей про-ышдекноств ве удовлетворяется.

Проведенные исследования направлены на разработку новых эффективных способов повышения активности ферментных прешрвтоз для и рационального применения в народном хозяйстве, Ребота прозода-дась в рамках научио-есзлэдобзтельскях тем* выполняемых со Поото-кседонло Государств огшого Комитета Совета Миквсгрэз СССР по щуке и TQiJiiiKQ И 450 от 25009,75 у. , коордапацкаивоцу шкщ? НИ* jEH СССР на 1981-1965 г,г. но лроблшо филология я биохиыш ная-рооргалпамов. и входящих а псшлвпсную вдутао-техзичесгух» црог-paitay Минвуза FCICi* "Иродовой счадз ", шфр 02.04.01 а 04,25 (приказ Мшзуса РСФСР » 190 от 30.CS.33.)» что определяем актуальность данной работ,

ligjjb « яод^чд рсрлздвдрзря. Целью иаотояшей работы являлось научнее обосноЕснвз, рсерабогка к ЕрамеиекЕз споссбоэ аовюнекшк актпваоотп ферментных цзаиарзтои цугш некотооык фпэкчеегшг^ exs-ктрофазсчссках и хеузчсск^х когде£стзк£ для Еатексйфнгадив про-цэссов бкокатолава а технология: ряда отрасле® цршшлзшоеты,

В соответствия о поставленной цалью билв определены осаов-пкэ еедачк нсоледовакая:

- установяон&о ооаовлк ееаясшягатей узалячаныг к&таяетз-чсской активности амалолвтичэсдке фериеаткых препаратов под вязанием конвектввасго прогрева, мЕкроаолзовоЗ обработке» взлучешЕЯ гелий-неопового лазера, добавление некоторых хжюпеоквх веществ|

. - разработка на основания вкяалеюшх ъавзсвкостэЙ научко-обооновантле регниов актквакиа амыолзтичэсюп федаентгнх пре-

паратов для повышения эффективности лх применения при производстве хлебобулочных изделий, гяшози, мальтозвой патоки, спирта;

- применение разработанных режимов активации аыилолитичес-ферментных -препаратов для интенсификации биокатализа в технологических процессах хлебопекарной, крахмалопаточной ц спиртовой отраслей промышленности;

- применение тепловой и микроволновой обработки для повышения активности ферментных препаратов в процессе их производства;

- разработка на основании проведенных исследований практических рекомендаций для промышленности.

ратчнар новизна. Впервые разработаны научные основы интенсификации процессов, биокаталиэа в промышленности путем активаций аршвняетх ферментных препаратов.

Получены основные зависимости изменения каталитической активности амило литич а с ких ферментных препаратов различного про-исхоЕдешш и различной степени очистки под воздействием конвективного прогрева, микроволновой обработки, излучения гелвЛ-нво-иового лазера, ионов ряда металлов (С<я*+, 2л1* Ре** и др.), сахароз (глюкозы, нанноэы, галактозы, мальтозы), ыодкфицнровацио-го крахмала марки "В" и дано научное обоснованна применения исследованных воздействий для повышения активности ферментных ■

препаратов. Установлена условия обработки, при которых увеличе-

*

1ш9 ферментативной активности составляет 2&-60%. Повышение каталитической активности под влиянием исследовании* воздействий является общин Свойством ферментных препаратов, которое целесообразно испожвовелгь Аля более рационального и аффективного их применения.

С применением методов флуоресцентной спектроскопии, кругового дихроизма, исследования кинетики ферментативной реакции получены подтверждения, что изменение каталитической активности под влиянием указанных воздействий связано с конформационными

изменениями в молекуле белка фермента. Установлено, что при из»

ыенекин активности ферментов при тепловой обработке, добавлении некоторыхионов, воздействия лазерного излучения наблюдается изменение конфорыациоино-чувствитель пых параметров флуоресценции белковой глобулы - изменение интенсивности и смещение максимума флуоресценции. На основании изучения спектров кругового дихроизма рассчитано процентное содержание и-спирали во вторичной структуре .¿-амилазы век. вибШСз и Оярогуше и отмечено влияние тепловой обработки и некоторых конов ла изменение абсолютного значения молекулярной эллиптичности.

Изучение кинетики ферментативной реакции гидролиза крахмала на примере амилоризина ШОх позволило установить, что предварительная тепловая обработка раствора ферментного препарата и добавление ионов способствуют увеличению начальной скорости ферментативной реакции ¿£ , влияют на зависимость ох концентрации фермента и субстрата/Показано, что при проведения предварительной' активации ферментного препарата шхЗлддаэтся увеличение кажущейся максимальной скорости реакции ¿¡^кЭ.гжакШ ряде случаев панеляется" значение кажущейся константы Ыихаэласа

Показано, что проведение предварительной тепловой обработки растворов амилолитических ферментных препаратов в присутствии отабшшзируоЕих веществ (ионов металлов, Сахаров) повышает эффек-

тивность действия ферментов ври гидролизе пшеничного и кукурузного крахмала.позволяет оократить дозировку ферментных препаратов на 15-20{й без снижения интенсивности накопления редуцирующих Сахаров в процесса гидролиза.-

Установлено, что разработанные режимы предварительной тепловой и микроволновой обработок посевного материала

ЮЗ в С(*0- б способствуют повышению ско-

рости биосинтеза и увеличивают выход ферментов при последующем культивировании микроорганизмов.

Дракткческад допросд.рс\0оуц заключается в том, что на основания комплекса исследований, проведенных в лабораторных и производственных условиях, предложен новый подход к интенсифи-кавр процессов биокатализа в промышленности на оскош разработанных способов повышения активности применяемдас ферментных препаратов.

Разработаны способы повышения активности различных амило- ' литнческях ферментных препаратов для хлеботеекарной, крахыалопа-точноЗ и спиртовой отраслей промшлешостж (амилоризин ШОх, смилосубтилип ГЮх, глгокаваморип Г20х, омяжоризин Г10х, комплексный улутаитель качества хлеба УКХ-2, «шлоиеэентерин Гх-4&7, гляжаваморин Гх-466) путем предварительной «ендовой обработки их водных растворов в присутствии стабилигатсров.

Предварительная тепловая обработка в ярвсугствии попов дадофя дирова ян ого крахмала йаркй "В" позволяет сократить на расход различных амилолитическйх ферментных препаратов

и комплексеого улучшителя 1КХ-2, применяемых в хлебопекарном производствер и получить при отом хлеб более высокого каюства, пря внесении ферментных препаратов без'предварительной ях

- ь -

активации* Проведение тепловой активации амилориаина ПЮх и емилооубтилина Г10х при приготовлении жидких дрожжей позволяет сократить да 30$ расход амилориаина П10х и, кроме того,па 30& расход солода на ссахарившше заварок при одновременном улучшении качества хлеба по всем основным показателям. Комплексное применение амилоризина ПГОх, амидсоубтилина ПОх и некоторых од неральпых солей при тепловой активация хлебопекарных дрожжей позволяет сократить расход ферментов на 20-25^ и продолжительность процесса те от о ведения на 0,5-1,0 час при одновременном улучшении качества хлеба. -

Применение р'азработашшх способов активации ферментных препаратов дает возможность сократить на IO-I55S расход глюкаваморв-па Г20х при цроиэводство гяпкозы, ко 20-25$ расход амилоризина ЩЮх лря подучелгя ыаяъторной патоки, >

Тепловая акткваддя глшаааморина Гх-466, амидомезентерина Гх—467, солодового молока позволяет сократить их расход при производстве ятапола на 25-3:5$ и проводить при этом технологически^ процесс с нормативными показателями. На основании проведенных исследований разработан оригинальный способ подготовки крашало-содержащего сырья.

Реализация результатов исследований осуществлена путем разработки технологически! рекомендаций по активация ферментных препаратов при производстве различных сортов хлебобулочннх кзде лий, пра приготовлении зягдких дрожжей, пря ферментативном onocri-<3а получения глзпкозы и мгатозной патока, этилового спирта, Эяо исмцческяй эффект, подучпакый яа счет сохранения расхода ферши ттх препаратов, составляет только для хлебопекарной- я крпхшлч таточноВ отраслей промшвчениоети свше 1,0 млн.руб. п год. Кро (te того пргмопенва разра-отагомх рекомендаций позволяет щщ oj: „

ществушем объеме производства ферментных ар а паратов значительно увеличить количество продукции, выпускаемой о использованием ферментных препаратов, и повысить ее качество. Так, в хлебопекарной отрасли за счет более рационального использования амило-ризкна П10х можно ежегодно дополнительно выпускать с данным ферментным препаратом свыше 500тис.т хлебобулочных изделий, применение разработанных рекомендаций по активации глюкаваморина Г£0х в крахмаленаточной промышленности дает возможность сэкономить в год более 20 усл.т препарата, что позволяет получить дополнительно свыше 9,5 тыс.т кристаллической глюкозы, и может быть приравнено увеличению выпуска ферментных препаратов без дополнительных капитальных вложений.

Проведение предварительной тепловой обработки поселиого материала /03 и' м-45 способствует

увеличению выхода ферментов на 30-4Кй. разработан оригинальный способ подучешш ферментов с использованием предварительной теплев ой обработки посевного материала, который внедрен на Приволжском биохимическом заводе,

р^бот^. Результаты работы были доложены на Всесоюзном симпозиуме "Физкио-хиыия крахмала и крахмалопродуктов" ( Шсква, 1364), на. Воесоыэних конференциях "Технология и техника тиавьой и микробиологической промышленности и системы заготовок на основе современных технических методов и средств" (Москва, 1560"), "Пути совершенствования технологических процессов я оборудования для производства, хранения я транспортировки продуктов питания" {Москви, 150-1). на Республиканской научно-практической конференции (Грозный, 1982), на 7-ом Неячуна-родне-м ■■конгрессе но яерцу и хлебу (Прага, 1962), ежегодно на няуччнх ■конферйпцинх Ш'ШШ.

рубдууаиии. По материалам диссертадм опубликовано 46 работ, получено 2 авторских свидетельства.

Объем и структур^,дид^ертрщиу Диссертация состоит из введения, 7 глав, заключения, общих выводов и рекомендаций, списка литературы и приложения. Диссертация изложена на „285 страницах основного текста, содержит 03 рисунка и 79 таблиц, в'приложениях приведены копии документов с данными о результатах производственных испытаний и внедрения, технологические схемы, разработанные инструкции и рекомендации, раочет. экономической эффективности. Список литературы включает 600 источников отечественных и зарубежных авторов.

В работе обобщены результаты исследований, проведении* при личном участия автора и под его руководством на кафедре аналитической химии МТИПП на протяжении 1974-1985 гг. Работа выполнялась в.творческом содружестве со специалистами кафедр "Биотехнология микробного синтеза", "Технология хлебопекарного производства", Всесоюзным научно-исследовательским биотехническим институтом, НПО по крахмалопродуктам Цшшищапрома СССР, Всесоюзным научно-исследовательским институтом хлебопекарной промышленности, Всесоюзным научно-исследовательским институтом продуктов брожения, Институтом'литания АМН СССР, Московским опытным заводом ферментных препаратов, Приволжским биохимическим заводом, экспериментальным булочно-кондитерсним комбинатом "Звезд-ньй", хлебозаводом Л 5 (г.Москва), хлебокомбинатом (г.Щелково), крахмалопаточным комбинатом (г.Кострома) и др.

соантанив работы изучйш влияшк некоторых физически, элшткнйзишжюс

И ШШКЩ ВОЗДЕЙСТВИЙ НА АКТИВНОСТЬ АШЛ0ЛИГИЧИЖИ1 ФЕРМШШХ ПРЕПАРАТОВ

Для, разработки способов активации ферментных препаратов исследовали влияние на их каталитическую активность конвективного прогрева, микроволновой обработки, лазерного излучения, рдаа ионов металлов и Сахаров.

В работе использовали следующие промышленные ферментные'' препараты - амилосубтилии ГЮх, амнлосубтилин Г20х, вмклоризин НХОк, амилоризйн ГЮг, глюкаваморин Г20х, глшовндомикопсия ГЗх; высокаочищенные кристаллические препараты of-амилазн Ьас^иШСШ и (Ssp. огузае , полученные из ВЙНШптехника, а также ряд препаратов разной отепеки очистки, подученные в лабораторных условиях МТШП а ВНИИЕио те хнкка.

Влияние конвективного прогрева на ачтавносяь

Тепловую обработку водных растворов ферментных препаратов озушеотвдяли в ультратермостате при различных температурах Сот 40° до 70°С) и длительности воздействия от 10 до 120 минут.

Активность прогретых ферментных препаратов определяли при стандартных условиях и выражали в % от активности ферментного препарата, не подвергавшегося тепловой обработке (контроль). Проводили по* меное шести параллельных опытов, полученные данные под-вергкдй статистической обработке.

Результаты исследований показали, что при определенном

температурном режиме прогрева для всех иооледованных препаратов различного происхождения л различной степени очистки наблкщает-ся-изменение активности (рис. I), и при определенных условиях тепловой обработки ( ¿= 40-50°С; V - 15-30 мин.) активность увеличивается на &-255Й ( в зависимости от степени очистки). '

С далью получения большего эффекта увеличения активности были изучены условия тепловой активации ферментных препаратов в присутствии веществ, которые могут выполнять роль стабилизаторов - ряда ионов металлов и Сахаров.

Внбор ионов металлов был осуществлен на основании предварительного определения присутствующих в промышленных ферментных препаратах ионов металлов (методом перемеюш-токовсй полярографии) .

Проведенные исследования позволяли установить, что каталитическая активность всех мзучекных фзрментних препаратов в большей ели в меньшей сте^екк увеличивается при добавлении к их ре створам п опрэд&кешг ¿к концентрациях ясно б Со^^ , Ре3'*', /v, СЫ3^ активности пря оитимняьвкж езй-

центрацкях ионов составлю ,?т 10-4ВД.

Добавление ионов к г »створам прэпаратов срх ^аз-

човой обработка ир^код^- к докзлкйтэльксму уиолигсзкию ¿кг.^зго-*-ти (риа. 2). Кроме того, ^грсзтсузр.в ог'пеабствозала аомга-

(10 в ют сип ой акт^'с п[л: »дателыюи г'г'орря!^ при деки о«

Нлпрямар, П1 тмз р;;стгороз формен¡тал; ЬГ'Г! л т оч о я:; г> 1-Г1 ^ .'л; го ыис-тах слу^.пх к к'зго-

^п, и г;рис-утитрк.г1 кокв- лрл йт^ ^Е'гггч ¡"мгр^о ¡;;:б.г?у;.1 г п.™ т-м пгл^-; <лс: ггчгоо'г"... Отг-с^^::'-' '*:.•■■ л^СТВче. <'(■„№ 7(1 МЗ г>-

a ö в

i

Pec.I, йзыезение йктсьеосте ферментных препаратов при тепловой обработке: а — ашиюеубтшаи ГЮх, б - амилоризин ШЕЛ, в - аюигоризкн ПОх

температурах 60° и 70°С.

Для глюкоамилаз в качестве факторов, влияющих на активность, был также наследован ряд Сахаров, так как известно, что глижоамилазы являются сложными белками и в их структуру входят углеводы. Проведенные нами исследования позволили установить, что некоторые сахара »определенных концентрациях*(глюкоза, манноза, галактоза, мальтоза) играют роль стабилизаторов при тепловой обработке растворов ферментных препаратов, способствуя, кроме того, значительному повышению активности (на 30-40?!).

Повышенная ферментативная активность, полученная при тепловой обработке растворов ферментных препаратов в присутствии некоторых ионов и Сахаров, сохраняется в течение нескольских часов, что говорит о возможности использования наблюдаемых зависимостей для повышения еффективностя действия ферментных препаратов при их применении. Кроме того, в условиях технологических процессов, когда проявляется защитное действие различных компонентов среды, повышенная активность может сохраняться н более длительное время. Это полностью подтвердилось при применении тепловой активации ферментных препаратов в присутствии стабилизаторов в условиях хлебопекарного производства, при получении

!

глюкозы, иальтозной патоки, зтияопого спирта.

Данные, подученные при исследовании кинетики ферментативной реакции на примере амилорвзииа ПЮх, широко применяемого в хлебопекарной промышленности, количественно оценивают возмод-иость интенсификации процесса ферментативного гидролиза крахмала путем проведения предварительной активации ферментного препарата. Анализ эависшостей начальной скорости рсокцаи 1С от концентрации ферментного арапарата и субстрата показал, что предварительная тепловая обработка раствора ферментного препа-

а)

Рйс.2. Изменение активности амилоризина ПЮ* (а) и

кмшгосуйталияа ГГОх (б) при тепловой обработке в присутствии ионов металлов.

рата, инкубация о ионами Са2+ и добавление етих ионов при тепловой обработке существенно увеличивает (рис. 3).

Результаты кинетических исследований позволила сделать &ак-лшение, что все исследованные способы предварительной обработки ферментного препарата увеличивают кажущувся максимальную скорость реакции ^пред.(каж) (рис* 3), наибольшее увеличений скорости ( v на 5ССй)' наблюдается в случае тепловоз обработки преиа-

п. я.

рата в присутствии ионов Св. При атом добавление ионов Са не изменяет величина кажущейся константы Иигаэяиса Кп^вю > а после тепловой обработки значение tfmfta&c.) увеличивается в -такой не степени» как и Vétpt¿i (каж.) С® 1.25 раза по отношенмо к контролю).

Эти дакЕые позволяет сделать предпалохэние о разном механизме активация форманта при тепловой обработке я пикубацаи с козами металлов и косвенно свидетэльсгвупт о том, что повышенае активности ферментов при исследованных воздействиях ножет быть обусловлено определенными козформадаоЕкыда изменениями з мэлэку-ла фермента, в результате чего увеличивается константа схсоростз каталитического распада фзрмэпт-субстрагного комплекса.

Полученные результаты явилкоь основой для разработав гаплологических рекомендаций по активации емилояйткческжг фврмзЕтжйх препаратов для интенскфажедкн процессов бяокаталяза в- тэжадо-гкях хлебопекарной, крахмалозаточаой и спиртовой отраслдЗ1 промышленности.

> аышшризином Щ0х: I - контроль; 2 - после инкубации

о нонами Са"+; 3 - поаде тепловоз обработкой 4 — коале тепловой обработки в присутствии ионов

Испо^эованде э^етс-уромргкитншс полей СрЧ-диапазона и иэ^чеирр геярй-нрокового лазера алд регулирования рагдтотзррой.рртивйрсти Моментов ]

Применение ферментных препаратов в условиях непрерывных технологических процессов ставит задачу разработки таких способов активации, которые позволяют получать существенное увеличение каталитической активности в течение короткого промежутка времени.

Для решения этой задачи мы исследовали условия активации ферментных препаратов под влиянием электромагнитных полей СВЧ-диапазояа в лазерного излучения.

Использование энергии микроволи.

Накопленный за последние годы обширный експериментальный материал показывает, что электромагнитные пола радиочастот выбывают разнообразные аффекты на всех уровнях организации биосистей. В настоящее время многие исследователи считают, что микроволны могут быть использованы для получения направленных эффектов в биохимии, зкзимологии, микробиологии, в пшцевой технология и т.д.

Обработку водных растворов ферментных препаратов проводили . на сверхвыеокочаототной установке, созданной в МТИШ1. В качестве источника влектромагнитвого излучения использован СЗЧ-геае-ратор с волновым трактом типа "Даруо". В генераторе цршенен магнитотрон М-81, работающий на частоте 2450 мГц и имеющий выходную мощность 2,5 кВт, Высокочастотный регулируемый ослабитель {аттенюатор) позволяет изменять мощность на выходе установки от 60 до 2500 Вт.

Аналнз ексЕарвмектальЕшх дашаех ползая, что микроволновая обработка растворов ферментных. препаратов приводят к увелнченкя кх активности. Зависимость ферментативной активности от величи-кы елеятрсмагвятной модности я длительности воэдзйотвяя дагеет схсшшЗ характер» и изменение- временя обработки всего на несколько секунд цри неизмеккшейся мощкоотя »ожет гризодкть к иэвь^егзу е даже отрицательному эффекту. СремшекЕе отабзьлкзато-роэ (вселадованнах выше конов мзтшдада к сахароз) - ксключает

еффек? я созвояяат получить стабвяшм увеличение активности ш зо-ео&.

УвадзчэЕяе активаости ферментов достегает-

сб при кратковременном воздействия (20-30 о)« что «одет, по мэра создашь? СЙЧ-&кергетзческих зсточееков, ерздетагодть больной практический кятерес, тек как даяг Богмоаа£»$1% проведать вкунвацаю фэривнтвих препаратов в услоекят «<йц«(мбных техко-яогжчвехах прогзесооз.

Вееязнз лазерного кэлученвя ад вдейшяоеть . фериеЕткзг преейрздчоэ

В качестве источника лэзеряаго «зяучвняя в работе еспользо-з£дя оятззескзЗ дебетовый гекаратор СКГ-12 с макешзяькой внход-еож кошеооть» 20 с длязез волка язлучекЕя 632,8 ем, а

таш гелхй-квеновкй лазер 2ГН-105 с максимальной выходной мощно стьв а мВт/см2длезоё волни йзлучепня 632,8 ем.

■Проведенные ясследввэшш показали, что воздеДсгвке лазерно- • го излучения ва растворы ферментных препаратов способствует увеличен«» их каталитической активности. Эффект увеличения активности зависит от длительности и интенсивности облучения и выражен

/

в большей степени, чем при тепловой обработке, при меньшей проч

додлительности воздействия, i

При использования гелий-неонового лазера ОКГ—12 наибольшее увеличение активности амилосубтилина ПОх (40-60%) наблюдалось при интенсивности излучения 3-5 мВт/см? и длительности воздействия б-Ю мин.

Заметное увеличение активности (па 25-35$) врсмыиленшг . амилолитических ферментных препаратов (ампяосубтилиха ГДОх, еми-лосубтилина Г20х, амилориэива ШОх) было достигнуто при воздействии излучения лазера ДГН-105 (время облучения 5 мин ), который является достаточно простым и компактным прибором, s поэтоад дакяый способ активации ферментных препаратов, как и шпсрсшолао-

вая обработка, является перссоктивашл.

\

Иатчен^ ро^ркЕрятуядиу иауе^а^^ н рол^ула flepvaSTS

{Ьлуорэсдэатной сректрос^опзи р рртгового ррурора^

Изменение активности ферментных препаратов при исслэдозгк-ннх воздействиях на основевея современных предстазлеак2 о строении белка можно объяснить с позиций определенных коЕфэрмавдоа-вых изменений, шеташях место пра этих воздействиях.

Для подтверждения «того предположения мы пршешш современные методы исследования конформацаояного соотоякия балков -фяуорвоцентную спектроскопию s метод кругового дгасроязня (ВД), Иввеотно, что флуоресценция белка, обусловленная остаткам^ срсъгатвчосккх шзиокяслот, сушеотвенно зависит от их овдгввная, Т.е. тех кошфвтанх атомов или групп атомов, которые s сяду

< 4

специфический срострякственкой структура белков соседствует о

ними. В связи с этим конфорыационныеперестройки в белковой макромолекуле под влиянием тех или иных воздействий долины оря-водить к изменению таких параметров лшинесценции, как штенсявность и положение максимума.

Спектры собственной флуоресценции амилолитическнх ферментных препаратов снимали на спектрофлуориыетре "НиасШ МРЕ-4".

В результате исследований было установлено, что спектры собственной флуоресценции водных растворов" препаратов ^-амилазы &сс и а$р.оъу*ае имеют максимум флуоресценции 334-335 нм, что характеризует триптофанил внутри белковой глобулы в нязкополярном гидрофобном окружении. Тепловая обработка растворов ферментных препаратов приводит к изменении в спектрах флуоресценции, причем увеличение активности соответствует увеличению интенсивности флуоресценции. В табл.1 в качестве примера представлены данные по изучении флуоресценции лая кристаллической «¿-амилазы Аас. после тепловой обработки при 40°С, Максимальная интенсивность флуоресценции для кристаллической «{ -амилазы аиИ^Сся наблюдается после прогрева ее растворами течение 30 и 90 мин. При этих яв режимах обработки наблпда-ется и наибольшее увеличение ферментативной активности,

Прогрзв растворов ферментных препаратов при высоких температурах, вря котором имеет место инактивация ферментов (100°С; 15 мин.}, приводит к заметным изменениям в спектрах флуоресценции: наблюдается уменьшение интенсивности, сдвиг максимума в длинноволновую область (рио.4), что говорит об увеличении гид-рофилькостя окружения остатков триптофана.

Аналогичные изменения в спектрах флуоресценции набладалиоь после воздействия лазерного излучения.

Таблица I

Данные люминесцентного анализа «¿-амилазы (кр.) Але. при тепловой обработке

Длительность тепловой обработки ■ Интенсивность флуоресценции при 40 С, мин %

Контроль 100,0

15 105,5

30 109,6

45 101,4

75 104,2

90 107,2

Анализ спектров флуоресценции, снятых после инкубации растворов ферментных препаратов о ионами металлов, которая приводи-* ла к увеличении ферментативной активности, показал, что интенсивность флуоресценции при этом увеличивается, а максиму» свечения смещается в коротковолновую область на 2-3 ям, что указывает на увеличение гидроДюбности окружения остатков тргттофанй в молекуле фермента. Так, для кристаллической ./'-амилазы въ^аг. максимум флуоресценции соответствует ЗЭ5 нм, после инкубации с ионами максимум флуоресценции смещается к 332 нК а интенсивность свечения увеличивается почти на Аналогичные данные получены для амилориэина ЛЮх (рис.4).

Ионы свинца оказывают ингибируадее действие на ^-амилазу. • Цри этом наблюдаются значительные изменения в спектрах флуоресценции. Он имеет более четкий максимум, уменьшается

чт**

Рко.4. Спеггри йлуоресшнгш: а - ашдосубтаянз ПОх: I - контроль; 2 - после шкубаща с левами И3* ; 6 - аыидоризгга ШОх: I - контроль; 2 - посла искусают с ескшя Са2*; 3 - црсл^кмсвой обработка в присутствия ионов Са2*; 4 - посла тешшаой натур ашл •

' ' 1 ' , - 24 - ,

полуширина спектра (рио, 4). Это говорит о том, что овинец ока« яывает сильное действие ва макромолекулу белка в уменьшает чио-до колебательных уровней. .

Подтверждение» что изменение активности ферментных препаратов при исследованных воздействиях может бить обусловлено определенными коафорыащонвнми изменениями, было получзно тате с помошъп флуоресцентного зонда, в качестве которого использовали 3-метоксибензантрсн (3-НЕА). Анализ спектров флуоресценции 3-МШ, связанного о ферментом, показал, что предварительная хепяовая обработка растворов ферментных препаратов. инкубация о ионеш металлов, воздействие лазерного излучения влияют на положений максимума флуореощшция и ее ивте&скввооть* что указывает са изменение микроокружения флуоресцентного зовда (рио,5, в).

Одаим аз современных методов, поэволяшях изучать аторЕч- . аув структуру белков, является метод кругового дизровэыа (ЙЯК Вами было иэучепо влияние тепловой обработка в добавления некоторых ионов на спектры КД криоталлическлх препаратов «^-швгаац вас. ниШН* и О¡р. огугае.

Спектра КД снимали на дихротрафэ Маг к -их ыеп ",

врвядал). № подученных значвнкй молекулярной эллиптичности О при 222 нм по методу Чана раосчитывадд процентное содержание е/ -спирали во вторичной структуре данных белков, которое составило 24,24 и 26,34 соответственно для «¿-амилазы Вас. д/Й/Дгя СГзг/х <чу*ае.

Анализ слекторов ВД -амилазы показал, что добавление ионов Са**, Мл1* незначительно уменьшает содер-

жание «/-спирали (на £-4$), то есть несколько раскручивает молекулу фер*ента (табл. 2).

520 540 560 580 6 00 620 Х.вм

Peo.5, Спектры флуоресцентного зонда) I - аыилосубтидин ГЮх +

+QUE&; 2 - амжлосубтилвн ГЮх после воздействия лазерного

излучения (5 мВт/см2: 5 ыин) + ЭМИ» .3 - аыилооуОтилия

ГЮх после воздействия лазерного взлучения (20 «Вт/с»О 5 мин) + ЗМЕА

510 550 590 630 Х,н« Рис.6. Нормгроьакные спектры флуоресцентного зоада вбоШйЧеЯИя см.рис.&

Таблица 2

Влияние некоторых ионов на изменение содержания и -спирали во вторичной структуре кристаллической «¿-амилазы

*

Вариант оодыта Процентное содержание -спирали

Вез нона 9685 24,24

Са'* 6493 20,31

2п*+ • 8890 21,62

Ре3* 8963 21,85

М'п** 8746 20,90 '

СЫ** 8746 ( 20,30

В спектрах КД кристаллической -амилазы Аас. пооле тепловой обработки, приводящей к увеличению активности (40°С, 30 ышД.наОлвдается увеличение абсолютного значения едлиптичностр, что указывает на некоторое упорядочивание вторич- » вой структуры (рис.7). Для преларагов кристаллической ^-ашш* вы огуюе после тш -ювсй обработки в оптимальных уоловиях отмечалось уменьшение „эллиптичности.

Подученные данные косвенно свидетельствуют о том, что кон-формацяокнце изменения, проиоходяаавв молекуле фермента иод влиянием дсоледсванных воздействий, могут касаться в некоторой степени и вторичной структуры,

■ Спектры КД ферыонтов после кислотной и тестовой денатурация- отличаются существенно (рис.7), что говорит о глубоких структурных изменениях молекулы фермента.

220 240 260

260

1 - ЕОЕТрОЛЬ;

2 - пасха тешювой

денатурации;

3 - после kkcjwthoS

де&атурадаа

Рис. 7, Спедтрн дугового ящхШиа: а - м-ахглавы (гр.) <ö*r. s»líit¿s soez» тескшой обработки I - контроль; 2 - 4û»efî5 ииа; 3 - 40°с, 30.»шц 4 - 4Q°C, 45 iшц С- ¿-емвяавн ffsA «^«f

- 2в -

ТНШВАЯ АКТИВАЦИЯ АШШШШГПХЖИХ ФЯЕШШ ПРЕПАРАТОВ КАК ФАКТОР ПОБШШЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ

ИХ ПРШШНШ ига ПРОИЗВОДСТВЕ Ш ' 1

Известно, что применение амилолитичеоких ферментных препа- ^

ратов дает возможность ускорить биохимические в микробиологические процессы при теотоведенш, в результате чего интенсифицируется процесс гидролиза углеводов муки, спиртовое а молочнокислое брожение в тесте, повышается содержание веществ, обеоае-чивавдих ценные качества хлеба - его вкуо и аромат.

Разработка способов повышения активности ампяолаткческих ферментных препаратов о целью их более эффективного применения в хлебопекарном производстве включала следущие исследования:

- применение тепловой активации ферментных препаратов в присутствия ионов Са2+ и Ре3+ дам сокращения дозировок препаратов и улучшения качества хлеба;

- влияние модифицированного крахмала (ВДЩ) марки "В" на м активность ферментных препаратов и разработка режимов их тепловой активации в присутствии МЯК; ^

- применение тепловой активации ферментных препаратов а присутствии ОДс для сокращения дозировок ферментных препаратов и улучшения качества хлеба;

- проверка возможности сокращения дозировки ферментного препарата и дрожжей и интенсификации тестоцркготовления при проведении совместной активации ферментного препарата и дрожжей;

- составление композиции улучшителя качества хлеба путем добавления к ферментным препаратам и комплексному улучшителю УКХ-2 определенного количества МИК, хлорида или сульфата кальция

х проведение выпечек хлеба о использованием данного улучшитвля;

_ проведение выпечек хлеба о добавлением раствора ферментного препарата посла 4-х часов его хранения.

' В работе использовали ферментные препараты вдвлорязин ПГОх, емвлоргзш ГГОх, адалосубтщшн ГГОх, УКЗС-2 (адалоризин ИОх + + сульфат аммония).

Результата исследований показали, что тепловая обработка растворов ферментных препаратов перед внесением юс в оперу» тесто идя заварки при приготовлении жидких дрожжей позволяет сократить их дозировку на 2(Ь25£ ври одновременном улучшении качества хлеба. Так, удельный объем вше, чем в контроле,на 20-ЗС$, общая деформация схатш шшш - на 30-352, лучше были - показЕтели пористости и органолептической оценки, опытные образ-вд хлеба сохраняли свежесть более длительное время» чем контрольные.

Весьма целесообразным представляется применение модифицированного крахмала марки "В" при тепловой активации ферментных препаратов, так как ВДК является улучшителеи структурно-механических свойств теста и в настоящее время широко применяется на хлебозаводах.

Исследование процесса тепловой активации ферментных препа-

)

ратов в присутствия модифицированного крахыала марки "В" показало» что в результате тепловой обработка препарата при температуре 40°С в течение 20 мин активность его увеличивается но 25-30!?

(рио.8), что позволило сократить на 25-ЗОЯ дозировку ферментных

*

( препаратов и УК1-2 при проведении вшечек хлеба.

Для решения вопроса о возможности дозирования ферментных препаратов совместно с дрожжевым раствором било целесообразно

ч

-ЗО-

НД

АА,*

120

ПО

100

50 тг,»ия

50 г.ага

рис.В, Изменение активности амилориэина ОХОг и 7КХ-2 при тепловой обработке: I - амиларивип ПЮх? 2 - аодло-риэин ИОх + 3 - УКХ-2; 4 - ТКХ-2 + МДК{ е - т-2 + са * провести ттечкл хлеба при проведении совместной ектязацак фар-«ейтннх препаратов и дроотей.

Температура активации фермеятных препаратов близка к температуре йктжвашш дрожжей, Ионы, примвняен&э'в качестве стабшгаза-

■ торов, оказывает положительное влияние па аЛввность дрожжевых клеток. Наконец, вмаяолиткческие ферментные препараты асаольвуют-сд в качества добавок при активации дрожжей в водно-мучной оус-

■ Яенвин. На основания итого можно предположить, что проведение такой активапаи позволит сократить не только дозировку фермзнт-

■ ного препарата, но и дратаей, что таете представляет несомнекпы^

■ практический интерес для хлебопекарного производства. Экспериментальная проверка подлость» подтвердила етЬ предаоло.т.ояиэ, чте хорошо шишстркруется дчнлвдя, представлении]«« в табл.Я,

Крше того, установлено, что проведение активации дрожжей в водао-мучной суспензии о добавлением аыилориэина ПГОх, амн-досубтилина ГЮх и рода минеральных солей_ ( CaSty , in ff(\, • з др.), увеличивая бродильную активность дрожжей,

способствует интенсификации процесса тестоприготовления и позволяет сократить его длительность на 15-20^ при Одновременной улучшении качества хлеба по всем основным показателям (удельный объем вше на 1Ь%, общая деформация сжатия мякиша - на 45~50£, лучше показатели орг&нолеитической оценки).

Данные лабораторных исследований полностью подтвердились в производственных условиях на хлебозаводе А 5 г,Москвы, экспериментальном булочно-коадитерском комбинате "Звездний", хлебо-' комбинате г.Щелково.. Применение разработанных способов актива" вди ферментных препаратов позволило: улучшить качество пшеничного хлеба; сократить дозировку ферментных препаратов на 25-30? при производстве различных видов хлебобулочных изделий} сократить на 30% дозировку ферментных препаратов для осахариваниа 86-варок при приготовлении жидких дрожжей; сократить ва 30% расход солода на осахаривание заварок при приготовлении жидких дрожжей.

Комплексное применение амилолитичесхих ферментных препаратов к минеральных солей при тепловой активации хлебопекарных дрожжей позволило, кроме сокращение дозировки ферментных препаратов, сократить на 0,5-1,0 час продолжительность процеооа тео-товедения при одновременной улучшении качества хлеба.

. 11а основании данных лабораторных исследований и производственных испитании разработаны практические рекомендация для повышения эффективности применения аиилолатическмх ферментных препаратов в хлебопекарной промышленности.

Тайшф 3

Влияние тепловой актсаации препарата емгяоризин ПЮк в присутствии модифицированного крахшла марки "В" (Ш) на качество хлеба из шоенгчной муки I сорта

Вариант выпечки Условия актива- Показатели качества хлеба

дай ферментного---------------------> -------

препарата Объем, Удельный Удельный Порис- &Е32ко-механкческЕ8

сьг объем, объем,> тость, свойства мтагаа.ед.пр.

см^ГООг L^111" • % -----------

лНобщ. лНпл. ^уцр.

1. Контроль Jí I - 1500 266 IDO 71 60 35 24

С добавлением 'ферментного препарата:

2. 4,5 ед АД/1С0 г ыукя - 1625 310 109 73 71. 41 '80 (контроль Jé 2)

3. 3,5 ел АА/100 г Муки + ЩК

40аС, 20 мин ' 2130 406 142 - 81 S9 61 38

4. 3,1 ед АА/ЮО г муки + ЩК+дрояяи

ЗбЧГ, 20 ¡ш 1675 316 1X0 76 69 53 25

5. 3,1 ед АД/ЮО г куки + ВД+дроии1'

35°С, 20 мин Х625 ,310 108 . 75 76 49 27

6. 3,1 ед АД/100 г ¡¿ухи + + *

+Ре3++дрокжих) 1700 324 113 78 90 50 40 ___35°С, 20 мш

Количество единиц активности дано в расчете на неактивированный ферментный препарат. ^ Коллчесгво дрожжей сокращено на 20%г

примшшиз тшлобой активации а?шолшчбскюс даентш препаратов в кражалсвжточной прсшшнвостн

Большие преимушеотва при переработке крахмала и крахмало-содержашего сырья для получения глюкозы в крахмальных па ток различного углеводного состава дает применение фермеиггккх про-сератов. ШО по кранлалопродуктам Ыишшепрома СССР разработаны ферментативные способы получения глшоэы с использованием глякаэачорта Г20х и мальтозяой патоки о испакввованием амило-ривина ПХОх.

Огаак.о в настоящее времк шшробиояогв»«ская проышавкность кз обеспечивает потребности крахмалопаточаах соибсиатов в этих ферментных препаратах.

Результаты исследований по тепловоз активации глюкавамори-яа ТгОх г амалориэияа П10г в присутствия ««которых ионов и сахароз звались основой для разработки рекснеядаций по повышению эффективности кх применения при фермеитатавнсм способе получе-ижя глюковы и магьтоано® патоки. ,

Исследования, проведенные в лабораторных и цроизводствен-■''шх условиях на крахмалосаточком ксмбикаге г.Коотровы, позволили устшовкть, 41*0 проведение предварительной активации ферментных препаратов при разработанных режимах повышает эффективность ах действия при гидролизе кукурузного крахмала, кукурузной муки и кукурузной крупке <табд.4,/5) н позволяет сократить их доза- . ровку при получении глюкозы и мальтозной патоки ла №~20%.

_ Таблица 4

Накопление глюкозы (%) при ферментативном гидролизе кукурузного крахмала (модельный опыт получения глюкозы)

Вариант опыта Условия актива- Время гидролиза, ч

■ дай ферментно- —————————— ——

го препарата 3 25 72

Гяпкаваморга Г20х 2,5 ед ГлА/г крахмала (контроль) - 47,46 66 ДЭ $4,57

Глкжаваморин Г20х 2,5 од ГлД/г крахмала 40°С, 20 мин + 49 ДО 87,80 54,58 .

Гяюкаваморвн Г20х 2,25 ед ГлД/г крахмала 40°С, 20 мин + г 47,34 85,30 94,86 '

Таким образом, проведение предварительной активация гявж-аваыорива Г20х % ьшлорнзша ЗПХЗ г мсхэт в определенное степекя

уменьшить таяввдайся е {фахзлаяоштотаоЯ отрасли промдалзЕаостн

»

дефицит в атих фЕркЕягптх п^^пэрФтлк*

Ткйлжва 5

Ферментативный гидролиз кудурувкой крутая (модельенЭ• опыт получения мальтозной патоки)

я и п тт с и п п ито Условия актява- Количество о и Р а в а 1 опыта ши ферментного редударушлх

препарата с&здэоз че-

рев 3 ч

ПВДр^ЛЗЗЕ),

АМТДОрИЗЕИ ШОх 1,5 ед АА/Г Крахмала (контроль) 27,32

ПЮх . «5^0,20 шя + 36,65

1,'о «д М/г зфахкажа Са®*

Амязгортоет Шйзс 1,25 ед 16/г жрахиаяа 40°С,20 шп + Са2+ 30,71

ПРШШЕНИЕ ТЕПЛОВОЙ АКТИВАЦИИ АМШЮШНЧЕСКИХ ФКРЩНТОВ ДЛЯ СОКРАЩЕНИЯ ИХ ДОЗИРОВОК ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ ЭТАНОЛА .

Этиловый спирт широко применяется в медицине и равличных отраслях народного хозяйства (химической, медицинской и др. отраслях промышленности). Для разработки рекомендаций во повышению эффективности применения амилолвтических ферментных препаратов и зернового солода при производстве этанола были проведв-/ ны следушие исследования:

- разработка способов поаишения активности ферментных препаратов путем использования тепловой обработки в присутствии стабилизаторов;

- применение тепловой активация ферментных препаратов в лабораторных и производственных условиях о цель» сокращения их

.дозировок при производстве этилового спирта;

- применена« тепловой активации для повышения эффективности использования зернового солода;

В работе использовали глшоамилаэу фирмы * * (ГлА * в 1300 ед/г), аммломвзентерин Гх-467 (АА = 20-40 ед/мл), гдик-• аваморвн Гх-4С6 (ГлА = 150-200 ед/>дл), ячменный, овсяный, просяной солода и их смесь.

На основании проведенных исследований били разработаны оптимальные режимы тепловой активации препаратов и солода для использования при производстве зтшюла:

- глюкоамилаза фирмы Vw», 'глюкаваморад Гх-4в6 - темпе-paiypa 45-50°C¡ длительность прогрева 30 мин; концентрация лоно» ¿н**~ 3*10~6 м. Прирост активности состанляет 30-Б0#;

- амиломезентерин Гх-4б? - температура 50°С; длиталънооть

прогрева - 30 мин; концентрация ионов Са2+ - 5,0 Прирост активности составляет 40?;

- солодовое молоко - температура 60°-55°С*;'длительность прогрева 40 мин; концентрация ионов Са2+(10~2-5*10~3М). Увеличение ам&лолитической активности составляет 35$.

Таблица 6

Применение тепловой обработки амиломеэентерина Гх-46?, глюкаваморина Гх-466 и солодового молока для сокращения их дозировки при получении этанола

Вариант опыта

Условия активации

Количество несброхенных углеводов в зрелой бражке, г/Г00 см3

Общие Раство- Нераст-римые воренный крашал

I, Осахариванве ферментными препаратами:

1. Контроль. Глюкавамошш Гх-4С6, 6 ед ГлА/100 г крахмала: амиломезенте-рин Гх-467, 1,5 ед

. МЛрО Г крахмала

2. Опыт. „ -Тжкаваыориа Гх-466 4,5 ед ГлА/100 г крахмала

ймиломеэентерин Гх--467, 1,5 ед ДДСЮ г крахмала

П. Осахаривание солодовым молоком

3. Контроль (нормативный . расход солода)

4. Сокращение расхода -солода на

60 С; 30 мин

50°С 30 мин

2+

+ Са'

50°С; 40 мин

0,46 0,34 0,11

0,43 0,31 0,11

0,54 0,35 0,17 0,51 0,34 0,15

.+ Са'

2+

Как видно из данных табл. 6, в бражка, полученной при использования активированных ферментных препаратов, несмотря на сокращение (на 2556) дозировки глтаваморина Гх—466, содержится меньше несброженных углеводов, то есть проведение предварительной активации препаратов дает возможность сократить их дозировку и при втом более глубоко провести растепление крахмала, что способствует более эффективному использованию сырья. Аналогичные результаты получены при проведении активации солодового молока.

Данные производственных испытаний на Мгапаовицком спиртовом заводе (Тернопольское объединение) и Московском опытном спиртовом звзодз ШИШрБ подтвердили, что проведение предварительной тепловой активации глюкаваморкаа Гх-466,^ амиломезентерина Гх-46? к солодового молока позволяет сократить их расход па 25-35$ яри производстве этилового спирта.

Кошевке иослгдоваяий, проведенных в лабораторных и произ-водотвекЕях условиях позволял предложить споооб подготовка крах-кажосодэржзщего сырья с применением предварительной активации амкломезеЕТЭрила Гх-467, глюкаваморина Гх-466 и солода, который защитен авторским свидетельством СССР Й 948X32 и нашел отраженна в технологической инструкция.

пршшэше некоторых воздействий дла повшшия

ДЯТШОСТИ ФЕРМЕНТОВ В ПРОЦЕССЕ ПОЛУЧЕНИЙ - «ЕРМЕГПШХ ПРЕПАРАТОВ

Объектами исследования были штамм ХОЗ, проду

дант «¿-Емклаэы, подученный во ВНШЕио техника и применяемый на предприятиях Главмикробиопрома в качестве продуцента «/-амилазы

штамп Osp fetiidug M-45, подученный во ШЖБиотехника и применяемый на предприятиях главмикробяопрома в качестве продуцента пектолитичеокого комплекса ферментов.

Культпвирование микроорганизмов вели при регламентирован-янх условиях. .

жи^осту! и аосевного Материала

Результаты проведенных нами исследований показали, что активность ^ -амилазн культуральной жидкости увеличивается при тепловой обработке. Наибольший прирост ферментативной активности ( - на 20%) культуральной жидкости ffuéiiéi'g 103 наблг>-дался при температуре 40°с и времени инкубации раствора 15-30 мин, то есть иря тех же примерно тепловых режимах, которые приводила: к повышению активности при прогреве водных растворов фермзктках ' препаратов.

Добавление ионов Саг*, ¿»е*, &3*, ъ др. к культуральной жидкости способствовало дополнительному повыкакяю актнэяэа-ти и увеличение стабильности фермента, как п в случае тепловой обработки ферментных препаратов, .

Проведенные нами исследования позволили виявдть влияние предварительного прогрева посевного материала #«<-. ^£ù ЛуЮЗ и /ее&с/ьгзЧЯ-45 на последующий биосинтез ферментов при культивировании микроорганизмов и определять оптимальные режимы тепловой обработки для увеличения активности.фермектоэ в культуральной яиякости на 30-40& ( 40-50°С, претил обработки -30 мри).

Аквлгз дмгежгки бтескнтеза ферментов в процессе культкзи-

рования позволил сделать заключение, что увеличение ферментативной активности культуральной жидкости обусловлено более высокой скоростью Оносинтеза ферментов в результате предварительной тепловой обработки посевного материала.

Показано, что повышенная активность сохраняется и в ферментных препаратах, подученных путем сублимационной сушки культура льной жидкости.

Данные лабораторных исследований подтверждены в произвол -ствеиных условиях на Московском опытном заводе ферментных препаратов и Приволжском биохимическом заводе.

11а способ получения фермонтов с использованием тепловой обработки посевного материала получено авторское свидетельство (Л 786331), данный способ внедрен на Приволжском биохимическом заводе.

Стадия предварительной тепловой активации посевного материала включена в промышленный регламент производства пектофое-тидияа ГЗх на Приволжском биохимическом заводе (Л 062,36-60, утвержден Главмикробиопромом 17.12.1960 г.).

Цримеда^иа ^ирроиоднома обработки

Исследования вели в двух направлениях:

- микроволновая обработка культуральной жидкости;

- микроволновая обработка посевного материала,

В обоих случаях било установлено, что на величину активности ферментов в культуральиой жидкости влияет как величина подводимой электромагнитной мощности, так и длительность воздвйот-аия. оиредалешшк режшах обработки прирост активности составляет 20—

Однако установление оптимальных режимов обработки представляет довольно трудную задачу, так как при одной в той не мощности незначительное изменение времени воздействия микроволн приводит в ряде случаев к существенному изменению активности. Это связано с тем, что при СВЧ-обработке имеет место сложное вэаимо-действие целого ряда факторов (времени воздействия, температуры нагрева, скорости нагрева, подводимой электромагнитной мощности), которое оказалось вовможным учесть путем статистической обработки данных с помощью ЭВМ. Математическая обработка экспериментальные данных позволила выявить корреляционные связи, определить и проанализировать регрессионные зависимости и установить оптимальные режимы обработки в СВЧ-поле: для культуры Л «л 103 - время 45-60 о, температура - 45-55°С, прирост амилолити-ческой активности - 40-70^; для кулътуральной жидкости 103 -.время - 30-40 с, температура - 40-45°С, прирост ашлсли-тической активности - 30-40$.

Результаты проведенных исследований позволяют сделать вывод о возможности активации Ферментных систем при микроволновой обработка. Время активации ферментов при воздействии микро-„ волн меньше по сравнению со временем активации ферментных сис-

тем при тепловой обработке. В связи с этим можно говорить о перспективности использования ОВД-облучения при производства ферментных препаратов.

ОЩИЕ ВЫВОда И РШИЕВДАЦИ

В настоящем исследовании разработаны научные и пракигчес-кие основы интенсификации процессов биокатализа в ряде отраслей промышленности путем активации применяемых ферментных препаратов.

/■ ' •

I. Изучены условия активации амилолитичёских ферментных препаратов различного происхождения и различной степени очистки при воздействии конвективного прогрева, микроволновой обработки лазерного излучения.

Установлено, что проведение предварительной тепловой обрабо тки водных растворов ферментных препаратов способствует изменению их ферментативной активности, при определенных условиях прогрева (40°С, 20-30 мин) увеличение активности препаратов составляет 9-25$ (в зависимости от степени очистки).

Показано, что эффективным способом повышения активности ферментных препаратов является воздействие лазерного излучения и микроволновая обработка. Эффект увеличения активности зш;е, чем при конвективном прогреве, при мекъшдй продолжительности воздействия и составляет при микроволновой обработке 30-6С$, при воздействии излучения гелий-неонового лазера (СШГ~Х2, ЛГН-105) 25-50%,

Установлено, что некоторые шнн металлов к сахара в о поделенных конце нтрацадх ( С;/"", А и др„, маяътеэ,-!, глгал-зе и др.) с ясс о 6 от ¿уют увелипег'™.! пк.гюгаостп •¿-и Х'жкоа^^лазя^х ферм^нттг/ '.¡реп^ра^ой коп т»ш:ого£] я ровеш;о;Х'?! ос'р,чк)ткс- их яодтах -'дствомв {МЙ IГ—60Й) я ( к,;1. • «>• от Бэхе* с:тсй:-итэмру 101;!о« дд!. -гвис, Повцйениал актк.:1;:ост(■ <;о-хр^илятся ч иплкчго р- - .свор:! Б течэ!1;к: 3- Ь чн'-О'!.

Йзч ».«этодо;? Флу; ■ ^ецз.тшой спа^трс^г-ч'р. г; р ггу-

ГОЛОГО ЛО.ГТ- -ОЯ^ч^Н, ЧТО !!'!(

Т1! ф^р^)::;: 11 !■:»;.. *'-'"ЦЩ'Гг;! п.од р ■ ИЗОЛПДОЬЗГИ!!"' У^'ДгГс:

Изучение спектров собственной флуоресценции ферментных препаратов и флуоресцентного зонда показало, что в результате тепловой обработки, добавления ионов металлов, воздействия излучения гелий-неонового лазера происходит изменение копформацк-онно-чувствительных параметров флуоресценции белковой глобулы -изменение интенсивности и смешение максимума флуоресценции.

На основании изучения спектров кругового дихроизма рассчитано процентное содержание и-спирали во вторичной структуре , <>< -амилазы и огурсге я установлено незначи-

тельное изменение абсолютного значения молекулярной эллиптичности после инкубации исследуемых ферментных препаратов с некоторыми ионами, а также после тепловой обработки.

3. Изучено кинетика.ферментативной реакции гидролиза крахмала на примере амилоризина ПЮх. Показано, что добавление ио~

о,

нов Са и предварительная тепловая обработка раствора ферментного препарата способствуют'увеличению начальной скорости реакция , влияют на зависимость К от концентрации ферментного препарата и субстрата; при проведении предварительной активации увеличивается кажущаяся максимальная скорость ферментативной реакции, при некоторых способах активацяа (тепловая обработка, тепловая обработка в присутствии ионов изменяется значение кажущейся константы Михаэлиса.

Установлено, что проведение предварительной активсции амиде лит ячесаих фзрметшшх препаратов повышает рффектшпгость их действия при гидролизе кативного и клейстеразовгжого гавеккчяо-гг> и кут-уруэкого крахмалов, способствуя увеличению нетсеялоккя ркдушрусщих Сахаров на 20-305?.

(1а основяятл лабораторных исследований и гг; о я з в одс т вез-

внк испытаний на хлебозаводе А 5 г.Иоокви, экспериментальном Сулочно-кондитерском комбинате "Звездный", хлебокомбинате г,Щелково разработаны способы активации амилолитических ферментных препаратов при их применении в хлебопечении, составлены технологические рекомендации для промышленности. Показано, что применение этих рекомендаций позволяет сократить на 25-30^ дозировку ферментных препаратов при производстве различных видов хлебобулочных изделий «з пшеничной муки и улучшить их качество по воем основным показателям: удельному объему, формоустойчивости, пористости, структурно-механическим свойствам мякиша, органолеп-тической оценке. При производстве хлеба о добавлением жидких дрожжей, приготовленных на осахаренных заварках, проведение тепловой активации аьлимризщш ПЮх и акшлосубтилина Г10х в присутствии стабилизирующих вещеотв ( Са2+, ЦДК марки "В") дает возможность сократить дозировку амилоризша ШОх на и кроме того, уменьшить при отом расход солода на осахаривание па ЗОЛ при одновременном улучшении качества хлеба.

Установлено, что комплексное применение амилолитических ферментных препаратов и минеральных солей ,Щ,

при тепловой активации хлебопекарных дрожжей в водно-мучной суспензия [35°С; 30 мин) способствует увеличению бродильной активности дрожжей, позволяет оократить расход ферментные препаратов на 20-25$ и продолаигельяооть брожения опары на 0,5-1,0 чао при одновременном улучшении качества пшеничного хлеба,

5. Лабораторными исследованиями и производственной проверкой на крнхшлопаточноы комбинате г.Костромы показана целесообразность проведения предварительной тепловой активации гликава-

*

морина Г20х и амилоризина ШОх а присутствии стабилизаторов для повышения эффективности гидролиза кукурузного крахмала и крах-малосодеркаЛцего сырья при ферментативном способе получения глюкозы и мальтоэной патоки. Разработаны технологические рекомендации по активации этих ферментных препаратов для, кх ращсналь-кого и эффекткакого применения в крахмалопатсчксй-промикленнос-ти. Применение зтих рекомендаций позволяет сократить на 10-15$ расход хтпозсаваморила Г20х при производстве глшсзи, на 20-25^ расход амилоризина ПЮх при получении мальтозной патоки.

С. Разработаны способы тепловой активации амилсмезентеркиа -Гх-467, глюкавокоркна Гх-406, глюкоамияази фкрш "л^^о " и солодового молока для повышения эффективности их применения при производстве этанола. Показано, что проведение предварительноЯ актива да-л аидломеэентеряиа Гх-46? и глюкаваиорина Гх-4С5 в присутствии ионов Са2+ п ¿и'* дает возможность сократить дозировку ферментных препаратов на 30-35л и получить при атом нормативные технологические показатели зрелой бражки (количество нерастворенного крахмала 0,11 г/100 см3). Показана возмоги!ость сокращения расхода солода на 25?! путем предварительной тепловой обработки солодового молока в присутствии исков кальцин.'

Лапине лабораториях исследования подтверждена л производственных условиях на Московском опытном спиртовом апвсдо ЬНЖПрЕ, Мшнковидоом спиртовом заводе.

7. Показана возможность повышения активности ферментов в процессе производства ферментных пропиратод путем тепловой и микроволновой обработки культуральноК жидкости и посевного териала. Проведение тепловой ©обработки культурялъно,1 жидкости и водной суспензии посевного материала Дд*. «ибОИз 103 и

QV/>. ¿eeéfctuf м-45 при 40-50°C в течение 20-30 мин приводит к увеличений ферментативной активности зрелой культуральной жидкости на S0-4DÍ3. Повшенная активность сохраняется в ферментном препарате, полученном путем сублимационной сушки культуральной жидкости.

Олытно-прсмыгалешше испытания ка Московском опытном заводе ферментных препаратов и на Приволжском биохимическом эеводо, подтвердили целесообразность предварительной тепловой обработки посевного материала для получения глубинной культуры с повышенной активностью ферментов.

Разработанные рекомендации включены в промышленный регламент производства ^ормеитного препарата пектофоезсщщн ГЭх на Приволжском биохимическом заводе (№ GG2.

Показано, что персиоктавиим способом повышения активности ферментных препаратов в процессе их получения является CB7i-o6-работка культуральмой жидкости и посевного материала. Путем статистического анализа с применением ЭВМ выявлены корреляционные связи, определены и проанализирована регрессионные зависимости и установлена оптимальны« рвжиил удкроволповой обработки, использование которых позволяет увеличить ферментативную активность на 50-70$.

х к к

Полученные экспериментальное результата, подтвержденные в производстве шшх условиях, imti^ueajo-r целесообразность разработки способов активация для пс«у пмпуекгкшмх микробиологической промшлекностяч ^.■ег^и-га^к: t^i* -.грятор с целью их рационального

и эффективного применения в народном хозяйстве. Использование. разработанных в настоящем исследовании рекомендаций только, в хлебопекарной и крахмалопаточной отраслях промышленности позволяет получить экономический эффект более 1,0 млн.руб. в год, экономия ферментных препаратов глюкаваморина Г20х и амилориэпна ПДОх в год составляет более 25 усл.т, что позволяет дополнительно получить более 9,5 тыс.т.глюкоза, выпустить дополнительно более 500 тыо.т кяебсбулочных изделий улучшенного качества.

СШСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. A.c. (СССР) if 786331. Способ получения ферментов / Попадич И.А., Траубенберг С.Б., Куликова Л.С. и др. - Без публикации.

2. A.c. (СССР) К 948132. Способ подготовки крашалосодержа-шега сырья для спиртового брожения / Попаднч И.А.. Гстишшкоа Б.А., Траубенберг C.B. и др. - Без публикации.

3. Попадич И.А., Мирович А.И., Кривова A.D., Траубенберг С.Е., Лысюк Ф.А. Влияние термической обработки па активность амилолити-ческого комплекса ферментов ячменного солода. - ЩИИТЭИптаесром. Спирт, пром-сть, 1975, К 8, с. 5-10.

4. Федорова И.о., Траубенберг C.B., Попадич И.А., Теренгье-ва Л.С. Активация хлебопекарных дрожжей минеральными солями. -Хлеб, и конд. прои-сть, 1977, X 8, с.32-34.

5. Куликова Л.С., Траубенберг С.В., Тульская S.U., Попадич И.А. Влияние термической обработки глкжоамилазных ферментных препаратов на изменение их каталитической активности. - В кп.: Улучпштели качества пищевых продуктов, Ыежвузов.сб.иаучн.тр., 11., 1977, с.25-28.

6. Федорова И.Ю., Траубенберг C.B., Фролова О.П.,Попадич И.А. Выбор оптимального комплекса минеральных солей для активация хлебопекарных дрожжей. - В кн.: Улучшители качества пищевых продуктов, Кажвуэов.еб.паучп.тр., Ы., 1977, с.107-109.

7. Федорова И.В., Траубенберг С.Е., Попадич И.А., Грибовс-кая И.Ф., [¿ахова H.H.. Шеачковп Л.В. Минеральный состав хлебопекарных дрожжей. - Хлеб и конд.прои-сть, 1978, № I, 0.34-35.

в. Куликова Л.С., Андреева М.А., Траубенберг C.B. Влияние тепловой обработки бактерий Вас. SuSHtiá 103 na оыилоллтичес-вуа активность ферментов едтьтурадьной жидкости. - В кн.; Интенсификация суаествуших и разработка новых технологических процессов в пищевой промышленности. Медвуз.сб.паучп.гр., II., 1978, О.Ие-120.

9. Куликова Л.С,, Траубецберг C.B., Тульская B.U..Попадич И.А. Ьхаяшь водов некоторых металлов на изыепение каталитической вктиькоегд ^ферментного препарата глюкопигрвл Г20х. - В кн. : ЛитеясиФикацяя существующих и разработка новых техыологичео-

1 -48-

ких процессов в пищевой промышленности. Меквуз.сб.научн.тр., M., 1978, С.120-122.

10. Куликова Л.С., Траубенберг С.Е., Попадет Л.А. Влияние некоторых Сахаров на изменение активности глшоамилаэных ферментных препаратов при тепловой обработке. - В кн.: Интенсификацш1(существующих и разработка новых) технологических процессов в пищевой промышленности. Шжвуз.сб.паучн.тр., M., 1978, с.126-129.

11. Федорова И.Ю., Траубенберг С.Е., Лысюк Ф.А. Влияние прогрева дрожжей на бродильную активность и показатель t//a среды при брожении, - Известия вузов СССР. Пищ.технология, 1978, № 2, с.165-167., )

12. Траубенберг С.Е., Федорова И.Ю., Лысюк Ф.А. .Попадич H.A. Возможность интенсификации тестоприготовленил при активации дрожжей минеральными солями. - В кн.: Совершенствование технологии и создание новых продуктов повышенной биологической ценности на'основе максимального использования традициошшх и новых видов сырья. Меяшуз.сб.научн.тр., U., 1979, с.8-14,

13. Куликова Л.С., Траубенберг С.Е., Деревянно Т.С. Изучение условий активации ei -амилазы культуральной жидкости

ХОЗ. - кн.: Повыпение интенсификации технологических процессов получения витаминных препаратов н биологически активных веществ. Межауз.сб.паучк.тр., М., 1979, с.40-47. ,

14. Федорова И.Ю., Траубенберг С.Е. Десслер Т.В.,Попадич И.А. ■ Влияние иопов на величину ОВП в полуфабрикатах хлебопекарного производства. - Известия вузов СССР. Пш.технология, 1979, Ä 5,

с.133-136.

15. Попадич H.A., Траубенберг C.B. Использование некоторых физико-химических воздействий для активации ферментных систем а микроорганизмов. - В кн.: Теа.докл.Всесошн.научн.конф, "Технология и техника пищевой и микробиологической про медленности и системы заготовок на основе современных технических методов и средств", Ц,, 1980, с,70.

16. Еачурсн А.П., Траубенберг С.Е., Куликова A.C., Барсукова H.A., Попадич U.A. Тепловая активация ферментного препарата глюконигрип Г20х - Фермент.и спирт.пром-сть, i960, » 6,о.29-32.

17. Попадич U.A., Траубенберг С.Е.,Федорова И.Ю.,Лыспк Ф.А. Влияние предварительной активации дрожжей на качество хлеба. -Известия вузов СССР, Пик. технология, i960, M I, с.50-61.

18, Попадич H.A., Траубепберг С.Б. Активация ферментких систем в микроорганизмов. - В кн. : Совершенствование пшовой технологов в техники. Сб.паучн.тр. ИГИПП, M., I98X, о.10-17.

■ 19. Фролова Т.Т., Траубепберг С.Е., Попвдич H.A. Стабилизация кальцием щелочной протеазы. - Фермент, и спирт, пром-сть, X9GI, Я 5, о.36-38.

20. Андреева М.А., Куликова Л.С.» Троубенберг С.Б., Величко Б. А. Тепловая обработка бактерий бае.. $иШШ 103 для повышения активности «¿-шялаэи культуральной дадкости. - ФзриеЕт. и спирт, проа-огь, 1981, JÎ 2, 0.32-35.

SI. Траубенберг O.S., Еачурин А.П., Лысюк Ф„А., Тараразва К.В. Гвдроляз пшеничного крахмала под действием окпшировшшнх фарыеш>- | пых препаратов. - Фермент.и спирт.пром-сть. 1962, Ä I, о.32-34.

22. Осташепкова Н.В., Траубепберг C.S, О возможности тепловой" ахтвзацав некоторых ферментных препаратов, кспольвуешт а юшоде-хня. - В кк.: Тез.докл. Расцубл.паогчно-практ.конф., ГрогныЙ, 1992, 0.96-97,

23. Траубенберг С.Б., Куликова «i.e., Еачурин А.П,,Сорокина Л.А., ^ПоиадЕЧ И.А. Условия тепловой активации ферментного препарата юли-

лосуСтнлян ПОх. - Известия вузов СССР. Пищ.технология, 1902, Jâ 5, о. 153, Рук.деи.ЕЭШЭКпишепром, 1982, № 489.-10 о.

24. Еопадгч И.А,, Траубенбзрг С.Е., Шуб И.С. Камнгепснсе прп-ыазеахэ улучшшталей при производства пищевых продуктов. - В кв.: Таа.докяЛ-го Мэкдукарод.конгресса по зерну и хлебу, Прого, 1982, '0.186.

25. Траубенберг C.B., Еачурин А.П., Лазарева В.В., Лолепхо Н.П. Вякание предварит а льной термоаятнващщ емллояатических ферментных препаратов на качество пшеничного хлеба. - Деп.ЦВИИГЭИпяшепром, 1932, В 516, - II с.Роф.опубл.в Ь1бл.указ. "Депонир.рукописи" (ВШИТИ), И., 1982, & 8, 0.86.

26. Еачурин А.П.. Зубкова С.И., Михайлова Л.Б., Траубенберг С.Б. Вкнзнкд некоторых физико-химических воздействий на активность вми-лосубтвлгна ПОх. - Фермент, в спирт, прои-сть, 1982,* 2, 0.34-38.

2?. Траубеяберг С.Е. .Тесслер Т.В. ,Маслова Л .Г. .Кононова А.И., Попадич И.А. Исследование действия различных ферментных препаратов Ша стадия активация хлебопекарных дрожжей.. — Деп, ВДШТЭИлииепром, . 1982, Л 562.-9 с. Реф.опубл.в Еибл.указ."Депонир.рукоппсЕ"(ВИНИЩ), И., 1983, ft 2. о.вЗ.

- so -

28. Ооташепкова S.S., Чернышева E.B,, Траубенберг С.Б. Исследование термоактивации адалоризкна ШОх в присутствии модифицированного крахмала при производства хлеба. - Деп.ШКИТЭИпиаепрон, I9Ö3, Ii £27. - 9 о» Реф. опубл.в Библ.указ. "Депошф.рукопкеи" (ВИНИТИ), H., 1983, В 3, с.119. '

29. Траубенберг С.К., Осташонкова Н.В., Чернышева Е.В» Пркиэ-нение тепловой обработки для активации амилоризина П10х к хлебопекарных дрожкей в присутствии некоторых ионов. - Дес.ЩИИТЭКзиаэ- ■ прон, 1983, Л 679. - 8 с. Реф.опубл.в Еибл.указ,' " Депоняр.рукописи" (ВИНИТИ), M., 1983, й 7, с,99.

30. Траубенберг С.Б., Полаидова Р.Д., Лысюк Ф.А., Оотаззвко-ва К.В. Применение термоактивации ферментных препаратов ашлоризкн niOz и глкщшакорип Г20х при производстве хлеба. - Деп.ВДИИТЗИп»-щедром, 1983, J6 680, - ÎI с. Реф.опубл.в Библ.указ. "Дзномар.рукописи" (ВИНИТИ), Ы,, 1983, JS.7,' с.99,

31. Popadic J.O, Txauêenitxg ffW У. У, MomoStxni vyit&iii ttépsovçcUfi ptostiedkù pxi vgto&é poixavin. - {¡r<s -pûtdivtfffy ptûmysâ, t$SS, "J.p. 'S-/S.

32. Траубенберг C.E., Андреева М.Д., Блинова Д,С., Волеч-ко Б.Д Зависимость синтеза пекгалитического комплекса фармзазгав от предварительной тепловой актпвадш посевного иатернаяа. -Форызцт. и спирт, цроьнсть, 1963, Ji I, 0.34-3S.

33. Посади1! И.Д., Траубенберг C.B., Куликове Л.С.,Щтесоз So0. Вяийкне микроволновой обработки па активность ферментных препаратов. - Известия вузов СССР. Нищ.технология, 1983, Й 3» о.72-74о

34. Андреева М.А., Бондарева Н.М., Куликова Л.С, t Трзубзз-<Jepr С.Е. Тепловая активация пактофозтидша ГЗх а нрвоутстзнн ось-нов ряда иеталлов. - Фермент, в сшфт. проы-сть, 1983, & 3,0.31-34«

35. Попадет U.A., Траубенберг С.Б.t Тарараова Бородина 3.13. Аативацад аыилолитпческих ферментных препаратов как. фжгор повышения эффективности ферментативного гидролиза кр&хыалос одераен пего сырья. — В кз. : Tes .докл. IX Воесоюза.симпозиум "Физико-тйая . крахмала а краи4алопродуетов", И.» 1964, с.72-73.

36. Траубенберг С.К. Изучение ковфорыационных кэшкаэий «¿-smb-лазн при некоторнх воздействиях методами кругового дигрокзэд s ф^уореоцйнтной спектроскопкз. - В кг.: Тез »докл.Бовоошн.геучз. ковф. "Пути совершенствования технологических процессов 0 оборудования для производства, хранения я транспортировки продуктов питают*, в., 1984» о.Кв.

37. Траубенберг С.Б., Лыст Ф.А., Тараравва 11,В. Изучение уо-ловий тепловой ективашш ферментного препарата ьиилоривив ПЮх. -В кн.; Тез.дохл,Ввевопзн»научи.конф. "Пути совершенствования тех*

fcoiora4ecKmjÉfcipooop и оборудования для производства, хранения транспорти^Вкв продуктов питания", Ы., 1984, о. 169.

38. Траубенберг C.B., Осташенкова Н.В. Изменение активности ферментных препаратов ^-амилазы &ас. suite tus и Gï/* oiftze развой степени очистки при тепловой обработке. - В кн.! Таз.докл. - -Всесоюзн.научн.конф. "Пути совершенствования технологических процессов и оборудования для производства, хранения а транспортировки " проектов питания", M., 1984, с. 169.

39. Траубенберг C.B., Бачурип ¿.П., Лнсюк Ф.А., Попадич И.А. Изменение активности амилолитических ферментных препаратов при тепловой обработке. - Фермент, и спирт, пром-сть, 1984,8 S, о.29-33.

40. Траубенберг C.B., Осташенкова Н.В., Чернышова Е.В. Условия тепловой активации ферментного препарата амидоризина HIOx. -Хлеб, и конд. пром-сть, 1984, № 12, с.19-20.

41. Тарараева И.В., Траубенберг C.B..Куликова Л.С..Попадет U.A. Применение тепловой обработки для повышения активности глпкоамшш-зы. - Фермент, и спирт, пром-сть, 1985, Л 2, о.16-17.

42. Траубенберг C.B., Осташенкова Н.В,, Зубкова C.U., Попа-пич И.А. Спектры флуоресценции аыилосубтилша ГЮх - Фермент, в

((¡аирт. npOi'J^», 1985, Я 3, с.32-33.

43. Траубенберг C.B., Осташенкова Н.В., Попадич U.A. Изучение спектров флуоресценции .¿-амилазы Аяе. , - Изв.ьузов СССР. Пщ,твхнологвя, 1985, * 4 , 0.31-35. •

44. Траубенберг С.Б., Осташенкова Н.В., Попадич И.А. Влияние тепловой обработка на активность препаратов <* -амилазы. - Фермент, и спирт, пром-сть, 1985, » 4, с.34-3?,

45. Траубенберг C.B., Осташенкова П.В., Попадич И.А. Изучение {информационных изменений <-амилазы методом кругового дихроизма. - Известия вузов СССР. Пиш.технология, 1985, * 5, C.24-2Û.

46. Траубенберг C.B. Влияние температуры и ионов металлов на активность ферментов, - Пищевая и перерабатывающая пром-оть» 1985, * 9, S <*л

Подписано в печать 5.{185г . Тярак № Заказ

Бумага типографская № 2. Ротапринт. Бесплатно. ■рмогрМия МТЮТТ, Волоколамском иоосе, д, II,