автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.06, диссертация на тему:Комплексное исследование липопротеинов семян подсолнечника современной селекции при послеуборочной обработке и хранении

На правах рукописи

Берлина Анна Николаевна , ^

•¿г

КОМПЛЕКСНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЛИПОПРОТЕИНОВ СЕМЯН ПОДСОЛНЕЧНИКА СОВРЕМЕННОЙ СЕЛЕКЦИИ ПРИ ПОСЛЕУБОРОЧНОЙ ОБРАБОТКЕ И ХРАНЕНИИ

Специальность: 05.18.06 - Технология жиров, эфирных масел и

парфюмерно-косметических продуктов

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

о и > ■••'

Краснодар - 2009

003468296

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Кубанский государственный технологический университет»

Научный руководитель: кандидат технических наук, доцент

Ильчишина Нелли Викторовна

Официальные оппоненты: доктор технических наук, профессор

Ведущая организация: Краснодарский научно-исследовательский институт хранения и переработки сельскохозяйственной продукции Россельхозакадемии

Защита состоится «19» мая 2009 года в 1300 ч. на заседании диссертационного совета Д 212.100.03 при Кубанском государственном технологическом университете по адресу: 350072, г. Краснодар, ул. Московская, 2, ауд. Г-251

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Кубанского государственного технологического университета

Автореферат разослан «17» апреля 2009 г.

Учёный секретарь

Быкова Светлана Федоровна;

кандидат технических наук, Багалий Татьяна Михайловна

диссертационного совета

канд. техн. наук, доцент

М.В. Жарко

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1 Актуальность темы. Получение пищевых растительных масел и белков из современного подсолнечника требует технологических решений, исключающих снижение качества масличного сырья от уборки до технологической переработки. Для их решения необходимо изучение комплекса вопросов, связанных с выяснением строения и свойств липопротеинов, их изменений при послеуборочной обработке и хранении масличных семян. К сожалению, липопротеины масличных семян изучены недостаточно, хотя они являются обязательным структурным компонентом белкового комплекса растительной клетки. Перспективным также является выяснение возможности применения липопротеинов, содержащих гидрофильные белки и гидрофобные липиды, в качестве технологических поверхностно-активных веществ, в составе которых нет токсичных компонентов. Изменение комплекса липопротеинов семян подсолнечника сортов и гибридов современной селекции при послеуборочной обработке и хранении не исследовано, что определяет актуальность их изучения с целью выявления их функционально-технологических (поверхностно-активных) свойств и возможности применения в масложировой промышленности.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с Федеральной целевой программой «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технического комплекса России на 2007 -2012 гг.» и планом НИР КубГТУ.

1.2 Цель и задачи исследования. Целью работы являлось комплексное исследование липопротеинов семян подсолнечника современной селекции при послеуборочной обработке и хранении в условиях ускоренного старения.

В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи:

- сравнительное изучение особенностей химического состава липопротеинов семян сортового и гибридного подсолнечника современной селекции при созревании семян, их послеуборочной обработке и хранении в условиях ускоренного старения;

- разработка способа получения липопротеинов из семян подсолнечника;

- обоснование оптимальных условий послеуборочной обработки свежеубранных семян; экспериментальное подтверждение взаимосвязи поверхностно-активных свойств липопротеинов и соотношения липидного и белкового компонентов в их составе;

- выявление взаимосвязи между составом липопротеиновых комплексов и активностью гидролитических ферментов при хранении в условиях ускоренного старения;

- изучение влияния тепловой сушки семян на функционально-технологические свойства их липопротеинов;

- обоснование возможности применения препаратов липопротеинов, полученных по разработанному способу в качестве ПАВ при получении масложировых продуктов эмульсионной природы и опытная апробация ПАВ, полученных на основе липопротеинов.

1.3 Научная новизна. Впервые изучены липидные и белковые компоненты липопротеинов семян подсолнечника современной селекции и определены их изменения при созревании, послеуборочной обработке и хранении семян подсолнечника. Экспериментально подтверждена взаимосвязь между активностью гидролитических ферментов семян и поверхностно-активными свойствами их липопротеинового комплекса. Разработаны и обоснованы оптимальные условия послеуборочной обработки свежеубранных семян, подтверждена взаимосвязь качества

семян, функциональных свойств и состава липидного и белкового компонентов липопротеинов. Установлено достоверное повышение поверхностно-активных свойств липопротеинов при тепловой сушке семян, а также при потере семенами жизнеспособности в результате активирования гидролитических процессов в семенах при хранении.

1.4 Практическая значимость работы. Наряду с получением пищевого масла разработанный способ выделения липопротеинов позволяет получать ПАВ, с заданными эмульгирующими свойствами. Результаты исследований расширяют представления о белковом и липидном компонентах липопротеинов семян подсолнечника современной селекции и их изменений в условиях послеуборочной обработки и хранении масличного сырья.

1.5 Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены на VIII всероссийской конференции молодых ученых с международным участием «Пищевые технологии» (г. Казань, 2007г.), на 9-й Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса» (г. Краснодар, 2007 г.), на Всероссийской научно-практической конференции аспирантов, соискателей и докторантов (г. Майкоп, 2008г.), на IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (г. Новосибирск, 2008г.), на V Международной юбилейной научно-практической конференции «Пища. Экология. Качество» (г. Новосибирск, 2008 г.).

1.6 Публикации. По результатам диссертационной работы опубликованы 12 научных работ, в том числе: 4 статьи в научном журнале, рекомендованном ВАК, 7 статей и тезисов в сборниках трудов научных конференций различного уровня и получен 1 патент РФ на изобретение.

1.7 Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов и списка литературы. Основная часть работы изложена на 110 страницах

компьютерного текста и содержит 16 таблиц и 12 рисунков. Список литературы включает 120 научных публикаций российских и 20 зарубежных авторов.

2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1 Объекты и методы исследований. Объектами исследований служили семена подсолнечника гибридов Авангард, Юпитер и сортов Бородинский, Фаворит, Флагман урожаев 2006 и 2007 годов, выращенные на опытных полях ВНИИМК (г. Краснодар).

Структурная схема исследования приведена на рисунке 1.

На семенах гибрида Юпитер изучали изменения липопротеинового комплекса в процессе созревания семян. Отбор проб проводили на 10, 22, 37 и 58-й дни после окончания цветения. Тепловую сушку свежеубранных семян проводили в сушильном шкафу СЭШ - 3 при температуре теплоносителя 60, 90 и 120°С. Исследуемые семена подсолнечника с влажностью 5-6 % были заложены на ускоренное старение. Семена хранили в герметичных эксикаторах при 37°С, отбор проб проводили через каждые 3 недели до достижения семенами нулевой всхожести. Электрофоретические фракции белков и их аминокислотный состав определяли методом капиллярного электрофореза на анализаторе «Капель - 103Р», жирнокислотный состав - газожидкостной, а групповой -тонкослойной хроматографией. Активность липаз определяли по методике Ермакова А.И. Активность протеолитических ферментов -колориметрически по методу Ансена.

2.2 Методика получения липопротеинов из семян подсолнечника. В ходе экспериментальных исследований был разработан способ получения липопротеинов из семян подсолнечника, на который получен патент РФ № 2340625.

Схема получения липопротеинов представлена на рисунке 2.

Семена подсолнечника

Исходные семема

Гибриды: Авангард Юпитер

Сорта:

Бородинский

Фаворит

Флагман

Созреваияев полевых условшк

Дни после переопыления

10

37

58

Супнка

60С

кк;

ио»с

Ускоренное сгарепме

Хранение, недели

Функцноналыше свойства {ЖУС и ЖЭС)

3 б 9 12 15 15

Элгктрофоретпчесш е фракции белков

Активность

К

8 -е- = .о

С* 1 Е

■В с ^

о Г

X 9,

с

Рисунок 1 — Структурная схема исследования

Рисунок 2 - Схема получения липопротеинов

3. ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 3.1 Характеристика липопротеинов исследуемых семян подсолнечника. При исследовании липопротеинов, выделенных из семян подсолнечника, было установлено, что содержание белка в них составляет 2/3, а липидов 1/3 часть от массы липопротеина, что соответствует соотношению белок : липиды в липопротеинах высокой плотности плазмы крови.

Природные липопротеины составляют 1,7 - 2,1 % от общего содержания белка в исследуемых семенах. Результаты изучения электрофоретических фракций липопротеинов семян сорта Фаворит свидетельствуют о присутствии 15 белковых фракций, среди которых преобладающими являются 3 электрофоретически разнородные фракции. У липопротеинов, полученных из семян гибрида Юпитер, количество белковых фракций равно 12, доминируют 4, электрофоретические

подвижности которых близки, что говорит о более высокой однородности и электрофоретической подвижности белкового компонента липопротеинов гибридных семян, т.е. обуславливает их высокую способность к комплексообразованию и как следствие определяет отличие их свойств по сравнению с сортами. Кроме того был изучен аминокислотный состав липопротеинов гибридного и сортового подсолнечника (таблица 1).

Таблица 1 - Аминокислотный состав липопротеинов семян гибридов

и сортов подсолнечника

Содержание Юпитер Фаворит Запасные белки

аминокислот, % (липопротеины) (липопротеины) семян

Аргинин 6,7 10,6 8,2

Лизин 0,7 0,2 3,6

Фенил аланин 0,7 1,8 3,7

Гистидин 8,7 7,0 2,0

Лейцин 7,2 8,1 7,1

Метионин 6,6 9,6 2,0

Валин 3,3 3,5 5,3

Пролин 6,3 8,7 5,7

Треонин 11,9 15,6 3,7

Триптофан 0,6 0,2 -

Серин 3,7 4,3 4,9

Аланин 11,1 9,1 4,5

Глицин 9,2 12,2 6,2

Цистин 1,7 - 2,3

Аспарагиновая к-та 1,8 - 10,7

Глютаминовая к-та 20,4 9,3 21,4

Из полученных данных видно, что в белковом компоненте липопротеинов как сортов, так и гибридов преобладают метионин, аланин, треонин, гистидин и глицин. По сравнению с запасными белками белковый

компонент липопротеинов отличается более высоким содержанием незаменимых аминокислот - метионина, треонина, гистидина, а также заменимых - аланина и глицина. В липопротеинах сорта Фаворит аминокислота треонин имеет наибольшую концентрацию среди всех незаменимых аминокислот - 15,6 %. Кроме того, белки входящие в состав липопротеинов как сортовых, так и гибридных семян отличаются более высоким содержанием пролина, аргинина и глютаминовой кислоты. В целом аминокислотный состав липопротеинов характеризует их высокую биологическую ценность наряду с запасными белками семян.

Из полученных нами данных следует, что практически половина (7 из 16) аминокислот исследуемых липопротеинов подсолнечника -гидрофобные (аланин, лейцин, метионин, пролин, валин, фенилаланин и триптофан). В липопротеинах гибрида Юпитер содержание полярных аминокислот - 26,5 %, а «заряженных» - 37,7 %, что соответствует процентному содержанию данных групп аминокислот в запасных белках семян подсолнечника. Такой аминокислотный состав липопротеинов свидетельствует о гидрофильно - гидрофобных функциях структурных компонентов, благодаря чему происходит легкое встраивание белка в фосфолипидный бислой мембран клеток семян.

Липидный комплекс исследуемых липопротеинов семян подсолнечника включает следующие группы липидов: триацилглицеролы - 57,76 %, фосфолипиды - 23,61 %, жирные кислоты - 2,08 %, стеролы -2,81 %, диацилглицеролы - 3,11 %, каротиноиды - 4,67%, углеводороды -5,84 % и неидентифицированные липиды - 0,12 %.

Изучение жирнокислотного состава липопротеинов показало в целом его близость с жирнокислотным составом масла семян. Исследование проводили на семенах гибрида Юпитер, полученные данные представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Жирнокислотный состав масла семян подсолнечника гибрида Юпитер и липидного компонента их липопротеинов

Название жирной кислоты Содержание жирных кислот, %

В масле В липопротеинах

Пальмитиновая 7,0 7,3

Стеариновая 3,7 2,0

Олеиновая 23,0 39,5

Линолевая 64,6 47,7

Линоленовая 0,3 2,2

Арахиновая 0,4 0,3

Эйкозеновая 0,4 0,5

Бегеновая 0,6 0,5

Как следует, из данных таблицы 2, в составе липидного компонента липопротеинов преобладают ненасыщенные жирные кислоты - олеиновая и линолевая - 39,5 и 47,7 %, а также содержится отсутствующая в запасных липидах линоленовая кислота, относительная доля которой составляет 2 %. Высокое суммарное содержание ненасыщенных жирных кислот (90,2 %) в составе липопротеинов обеспечивает подвижность жидкокристаллической структуры фазового состояния биомембран клетки, необходимой для выполнения липопротеинами метаболических функций в клетке.

Результаты исследования аминокислотного и жирнокислотного состава липопротеинов семян подсолнечника позволил предположить наличие у них высоких поверхностно-активных свойств. Для изучения поверхностно-активных свойств липопротеинов и их влияния на формирование структуры водно-жировых эмульсий были исследованы их жироудерживающая (ЖУС) и жироэмульгирующая (ЖЭС) способности (рисунок 3).

Авангард Юпитер Бородинский Фаворит Флагман

Рисунок 3 - Поверхностно - активные свойства липопротеинов

исследуемых семян подсолнечника: Ц]ЖУС; ИЖЭС

Из рисунка 3 видно, что максимальные значения ЖУС и ЖЭС имеют липопротеины семян гибрида Авангард, а наименьшие - ссмян сорта Бородинский. У гибрида Юпитер, сортов Фаворит и Флагман величины ЖУС липопротеинов находятся в пределах 42—49 %, а значения величин ЖЭС колеблются в интервале 53 - 55 %. Как известно, растительные белки обладают высокими эмульгирующими и жиросвязывающими способностями и используются в составе белконо жировых эмульсий, на основе которых готовят майонезы, приправы и соусы.

Полученные данные свидетельствуют о том, что липопротеины гибридов и сортов семян подсолнечника, обладая высокой биологической ценностью и значительными эмульгирующими способностями, могут использоваться при производстве пищевых продуктов эмульсионной природы.

3.2 Изменение состава липопротеинов в процессе созревания семян подсолнечника. В процессе созревания семян происходит накопление не только основных запасных вешеств - жирного масла и белка, но и увеличивается массовая доля структурных липопротеинов.

Изучение электрофоретических спектров белкового компонента показало, что на 10-й день после окончания цветения в липопротеинах семян гибрида Юпитер присутствует 14 фракций, преобладающими являются две равновеликие, существенно отличающиеся по электрофоретической подвижности и составляющие 85 % от суммы всех белков. Белки липопротеинов семян, достигших уборочной спелости, имеют 17 электрофоретических фракций, количество основных фракций, увеличивается до 4 - х и на их долю приходится 92 % белка липопротеинов.

Таким образом, при созревании семян в составе липопротеинов появляются белки, имеющие близкие значения электрофоретической подвижности, что свидетельствует о росте однородности белкового компонента.

При созревании семян характер изменений жирнокислотного состава липидной части липопротеинов коррелирует с метаболическими процессами в запасных сферосомах. Известные взаимопревращения олеиновой и линолевой кислот в процессе созревания семян наблюдаются и в липопротеинах (таблица 3).

Таблица 3 - Изменение жирнокислотного состава липидного

компонента липопротеинов в процессе созревания

Название жирной кислоты Содержание жирных кислот в липопротеинах, %

День после окончания цветения

10 22 37 58

Пальмитиновая 8,9 8,7 8,5 7,3

Стеариновая 2,8 2,8 2,9 2,0

Олеиновая 43,6 42,7 42,2 39,5

Линолевая 40,6 42,1 42,9 47,7

Линоленовая 2,7 2,5 2,3 2,2

Арахиновая 0,3 0,3 0,3 0,3

Эйкозеновая 0,6 0,5 0,5 0,5

Бегеновая 0,5 0,4 0,4 0,5

Так при созревании семян подсолнечника в шло протеин ах происходит снижение содержания олеиновой, пальмитиновой, стеариновой и линоленовой кислот, одновременно с этим увеличивается массовая доля лилолевой.

Подтверждением нативности и стабильности липопротеиновых комплексов биомембран клеток семян является высокий уровень активности ферментов. Изменение активностей кислой и щелочной липаз (рисунок 4) в процессе созревания семян подчиняется обшей закономерности — увеличивается активность ферментов — синтетаз, что способствует накоплению запасных липидов.

Номер отбора пробы

Рисунок 4 - Изменение активности липаз в процессе созревания;

О кислой; В-щелочной 3.3 Характеристика липопротеинов семян подсолнечника подвергнутых тепловой сушке. Свежеубранные семена подсолнечника были подвергнуты тепловой сушке. Изменение электрофоретическнх фракций белкового компонента липопротеинов семян после сушки представлены в таблице 4.

Как следует из таблицы 4, тепловая сушка семян приводит к глубоким изменениям электрофоре™ чес ко го состава белкового компонента липопротеинов. Количество белковых фракций из-за тепловой денатурации уменьшилось с 17 до 4.

Таблица 4 - Изменение электрофоретических фракций белкового

компонента липопротеинов семян после сушки

Доля Номер белковой зоны

фракции и температура сушки 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

60°С Доля фракции от общего количества, % 8,31 - 8,97 35,31 10,32 - 9,03 11,28 - 16,68 -

90°С Доля фракции от общего количества, % 6,92 1,16 0,14 13,60 12,86 42,98 - 4,17 18,17 - -

120°С Доля фракции от общего количества, % - - 12,40 - - - 4,26 - - 21,71 61,63

Прослеживается четкая зависимость глубины денатурации от температуры сушки. При относительно низких температурах сушки (60°С и 90°С) наблюдается равномерный выход фракций, начиная с 5 по 20-ю минуты электрофореза. Это свидетельствует о варьировании размеров и величины подвижностей фрагментов белковых молекул липопротеинов. Высокотемпературная сушка при 120°С характеризуется снижением числа фракций до 4, причем, основные фракции появляются, с 19-й минуты анализа. В тоже время эти фракции в сумме составляют 83,34 % общей массы белка, что свидетельствует о глубокой денатурации белковых глобул липопротеинов. Под влиянием повышенных температур происходит изменение атакуемости и вязкости белкового компонента липопротеинов в результате объединения белковых фракций в крупные агрегаты. В теории тепловой сушки масличных семян этот процесс, по предположению В.П. Ржехина, получил название «электрофорегической

гомогенизации» и характеризует изменения в глобулинах запасных белков подсолнечника.

При тепловой сушке семян происходят изменения в групповом и жирнокислотном составе липидного компонента липопротеинов (таблицы 5, 6).

Таблица 5 - Изменение группового состава липидного компонента

липопротеинов семян, в процессе их тепловой сушки

Группы лшгадов, % от общей суммы липидов Температура сушки, °С

До сушки 60 °С 90 °С 120 °С

Фосфолипиды 23,61 10,61 10,31 8,72

Каротиноиды 4,67 1,31 1,17 1,68

Стеролы 2,81 2,65 2,90 3,07

Диацилглицеролы 3,11 5,97 6,51 9,60

Жирные кислоты 2,08 13,37 11,05 7,74

Триацилглицеролы 57,76 56,76 57,67 58,15

Неидентифицированные

липиды 0,12 3,97 6,37 7,16

Углеводороды 5,84 5,29 4,02 3,88

Таблица 6 - Изменение жирнокислотного состава липидного

компонента липопротеинов в процессе сушки семян

Название жирной кислоты Содержание жирных кислот в липопротеинах, %

До сушки семян 60 °С 90 °С 120 °С

Пальмитиновая 7,3 7,4 7,5 7,8

Стеариновая 2,0 1,9 1,7 1,6

Олеиновая 39,5 40,1 41,5 42,2

Линолевая 47,7 47,5 47,2 46,5

Линоленовая 2,2 1,8 1,0 0,8

Арахиновая 0,3 0,3 0,2 0,2

Эйкозеновая 0,5 0,5 0,4 0,4

Бегеновая 0,5 0,5 0,5 0,5

В процессе тепловой обработки в семенах существенно Снизилось количество фосфолипидов и возросло количество свободных жирных кислот, кроме того возросла доля неидентифицированных липидов за счет образования окисленных форм каротиноидов и углеводородов. Как видно из таблицы б содержание отдельных ненасыщенных кислот по мере роста температуры сушки изменяется, возрастает относительное содержание олеиновой кислоты, несколько снижается доля линолевой.

В результате проведенных исследований установлено, что по мере увеличения температуры сушки происходит заметное увеличение содержания липопротеинов в семенах за счет образования связей между различными формами липидов и белками, особенно денатурированными. Извлечение липидов семян с возрастанием доли липопротеинов снижается.

При тепловой сушке изменяются поверхностно-активные свойства липопротеинов по сравнению со свежеубранными семенами (рисунок 5),

° досушки 60"С 90"С 120°С

Температура нагрева семян Рисунок 5 - Изменение поверхностно-активных свойств липопротеинов после сушки семян: & ЖУС; ИЖЭС Высокая температура приводит к разворачиванию белковых глобул, с увеличением их реакционной способности, что ведет к росту поверхностно-активных свойств липопротеинов. Однако, рост ЖУС и

ЖЭС наблюдается в основном при более мягких режимах сушки (1 = 60°С), повышение температуры до 120 °С вызывает глубокую денатурацию белковых молекул, что приводит к снижению поверхностно-активных свойств липопротеинов.

3.4 Изменение липопротеинов семян подсолнечника при ускоренном старении. Семена подсолнечника, заложенные на ускоренное старение, полностью потеряли жизнеспособность после 18 недель хранения. Результаты изменения электрофоретического состава белкового компонента липопротеинов после ускоренного старения семян представлены в таблице 7.

Таблица 7 - Изменение электрофоретических фракций белкового

компонента липопротеинов семян после старения*

Номер белковой зоны Доля электрофоретической фракции липопротеинов от общего количества, %

До старения После старения

1 3,00 -

2 1,55 3,38

3 32,57 -

4 6,69 -

5 11,58 -

6 19,92 -

7 23,66 80,44

8 - 5,83

9 - 5,99

10 - 2,02

* В таблице приведены фракции, превышающие по массовой доле 1 %

Изменения, происходящие в белковом комплексе липопротеинов семян подсолнечника при хранении в условиях ускоренного старения, свидетельствуют о процессах деструкции, которые характеризуется

сближением электрофоретических зон, укрупнением белковых глобул и снижением их подвижности.

Одновременно с белковым компонентом липопротеинов изучали изменения их липидного компонента. Изменения группового состава липидов липопротеинов при ускоренном старении семян, аналогичны изменениям состава липидного компонента при тепловой сушке. Данные исследования жирнокислотного состава липопротеинов после ускоренного старения семян представлены в таблице 8.

Таблица 8 - Изменение жирнокислотного состава липидного

компонента липопротеинов после ускоренного старения семян

Жирная кислота Содержание жирных кислот в липопротеинах, %

Исходных семян После старения

Пальмитиновая 7,3 8,6

Стеариновая 2,0 2,9

Олеиновая 39,5 40,2

Линолевая 47,7 46,6

Линоленовая 2,2 0,3

Арахиновая 0,3 0,6

Эйкозеновая 0,5 0,1

Бегеновая 0,5 0,7

Из полученных данных видно, что в процессе хранения семян в условиях ускоренного старения, в липидном компоненте липопротеинов снижается содержание ненасыщенных жирных кислот (линолевой и линоленовой) за счет окисления липидов, что свидетельствует о разрушающих процессах, происходящих в мембранах.

С целью выявления взаимосвязи между изменениями компонентного состава липопротеинов и активности ферментов в семенах при хранении (в

условиях ускоренного старения) определяли активность гидролитических ферментов (таблицы 9-10).

Таблица 9 - Изменение активности кислой липазы при хранении семян

Гибрид/сорт Кислая липаза, см5 0,1 и КОН/10 г семян за 1 час

Продолжительность хранения, недели

0 3 6 9 12 15 18

Авангард 13,50 13,42 13,00 12,82 12,55 11,18 10,48

Юпитер 10,47 9,83 8,73 8,02 7,51 6,90 6,39

Бородинский 20,00 18,15 17,86 17,21 17,00 16,86 16,47

Фаворит 10,00 9,78 9,13 8,92 6,81 6,56 5,99

Флагман 15,70 14,45 13,54 12,37 11,09 10,75 10,18

Таблица 10 - Изменение активности щелочной липазы при хранении

семян

Гибрид/сорт Щелочная липаза, см3 0,1н КОН/10 г семян за 1 час

Продолжительность хранения, недели

0 3 6 9 12 15 18

Авангард 3,70 3,97 4,12 4,64 4,98 5,14 5,70

Юпитер 2,20 2,94 3,28 3,76 3,98 4,09 4,30

Бородинский 4,19 4,87 5,35 6,47 7,28 8,39 9,19

-фаворит 5,59 5,76 6,14 6,58 6,94 7,11 7,79

Флагман 2,10 2,92 3,46 4,08 4,76 5,07 5,69

Полученные результаты подтверждают известные закономерности -снижение активности кислой липазы коррелирует с возрастанием щелочной, хотя снижение активности кислой липазы всегда более существенно по сравнению с одновременным ростом щелочной.

Изменение активности липаз предположительно можно объяснить процессом гидролиза запасных белков, протекающим под действием протеолитических ферментов и приводящим к накоплению пептидов, пептонов и свободных аминокислот, и как следствие к росту рН. В результате в цитоплазме клеток создается оптимум для действия щелочной липазы. Для подтверждения этого предположения и выяснения роли протеолитических ферментов в изменении характера работы липаз в семенах нами были проведены исследования активности протеолитических ферментов семян в процессе их хранения (таблица 11).

Таблица 11 - Изменение активности протеолитических ферментов

при ускоренном старении семян

Гибрид/сорт Активность протеолитических ферментов, усл. ед.

Продолжительность хранения, недели

0 3 6 9 12 15 18

Авангард 1,48 1,30 1,02 0,84 0,60 0,51 0,43

Юпитер 0,90 0,83 0,78 0,61 0,53 0,42 0,30

Бородинский 0,68 0,60 0,57 0,54 0,50 0,47 0,40

Фаворит 0,85 0,81 0,76 0,70 0,64 0,59 0,53

Флагман 0,93 0,89 0,84 0,79 0,72 0,67 0,60

Анализ полученных данных (таблицы 9, 10, 11) показывает высокую корреляцию между активностью всех изученных ферментов - кислых и щелочных липаз и протеолитических ферментов, и подтверждает наше предположение о характере их взаимодействия.

Процессы старения оказывают влияние и на поверхностно-активные свойства семян подсолнечника, в частности, на их жироудерживающую (ЖУС) и жироэмульгирующую (ЖЭС) способности (таблица 12).

Таблица 12 - Изменение ЖУС и ЖЭС липопротеинов семян после ускоренного старения

Гибрид/сорт До старения семян После старения семян

ЖУС, % ЖЭС, % ЖУС, % ЖЭС, %

Авангард 55,80 60,94 62,07 69,02

Юпитер 48,91 55,38 59,78 66,56

Бородинский 33,69 51,80 59,91 60,05

Фаворит 44,76 54,89 58,96 63,32

Флагман 42, 04 53,48 54,64 61,72

Как следует из полученных данных, в процессе ускоренного старения семян, происходит повышение ЖУС и ЖЭС липопротеинов. Это обусловлено процессом деструкции молекул белка, в результате чего происходит разворачивание белковых глобул, сопровождающееся увеличением их гидрофобной поверхности, что приводит к росту ЖУС и ЖЭС липопротеинов.

3.5 Применение липопротеинов в пищевых продуктах. Учитывая высокую жироудерживающую и жироэмульгирующую способности подсолнечных липопротеинов, нами было обосновано их применение в хлебопекарной промышленности при производстве хлебобулочных изделий, а также в масложировой промышленности при производстве майонезов. Проведенные исследования показали возможность и эффективность применения липопротеинов вместо традиционных эмульгаторов в хлебопечении, что улучшило реологические свойства клейковины теста и позволило получить готовый продукт высокого качества. Одновременно, замена яичного порошка подсолнечными липопротеинами позволяет получить майонез, не содержащий холестерина. Стендовая апробация применения липопротеинов показала, что по жироудерживающей и жироэмульгирующей способности подсолнечные липопротеины превышают аналогичные показатели яичного

порошка, и позволяют получать пищевые функциональные продукты по себестоимости сравнимой с себестоимостью традиционного майонеза.

ВЫВОДЫ И РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Впервые проведено сравнительное изучение липопротеинов семян гибридов и сортов подсолнечника современной селекции при созревании, послеуборочной обработке и хранении. Изучен химический состав белкового и липидного компонентов липопротеинов.

2. Разработан способ получения из семян подсолнечника препарата липопротеинов с высокими поверхностно-активными свойствами. Способ защищен патентом РФ.

3. Определена оптимальная температура послеуборочной обработки свежеубранных семян гибридов и сортов, которая находится на уровне 60°С. Использование более высоких температур в процессе сушки приводит к нежелательным изменениям в белковом и липидном компонентах липопротеинов: в белковом компоненте снижается количество электрофоретических фракций и их подвижности за счет тепловой денатурации (деструкции); в липидном компоненте уменьшается содержание фосфолипидов и каротиноидов, растет содержание диацилглицеролов.

4. Тепловая сушка семян при рекомендуемых режимах (60°С) сопровождается возрастанием функционально - технологических свойств липопротеинов - жироудерживающей (ЖУС) и жироэмульгирующей (ЖЭС) способностей. Повышение температуры приводит к глубокой денатурации белковых молекул, что сопровождается снижением поверхностно-активных свойств липопротеинов.

5. При хранении семян происходит изменение активности гидролитических ферментов: кислых и щелочных липаз и протеаз. При этом поверхностно-активные свойства липопротеинов возрастают.

6. Установлено, что изменение липопротеинового комплекса семян при созревании, послеуборочной обработке и хранении коррелирует с изменениями активности гидролитических ферментов, образованием в клетках семян продуктов гидролиза и накоплением токсичных продуктов окисления, нарушающих нативную структуру биомембран клеток. Изменение структуры биомембран клеток продуктами гидролиза белков и липидов, а также продуктами окисления липидов сопровождается нарушением работы ферментов и потерей жизнеспособности семян.

7. На основании проведенных исследований теоретически и экспериментально обоснована возможность получения подсолнечных липопротеиновых продуктов. Экспериментально обоснованы рекомендации по их использованию в качестве поверхностно-активных веществ в технологии жировых продуктов эмульсионной природы и хлебопекарном производстве. Апробация ПАВ, на основе липопротеинов полученных из семян подсолнечника по разработанному нами способу, подтвердила их эффективность.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Бердина А.Н. Физиолого-биохимическая характеристика семян новых сортов и гибридов подсолнечника / Бердина А.Н., Ильчишина Н.В., Прудникова Т.Н., Францева Т.П. // Известия ВУЗа. Пищевая технология. -2007. - № 2. - С.10-12.

2. Бердина А.Н. Накопление сухой массы семенами гибрида Юпитер при созревании и перестое / Бердина А.Н., Ильчишина Н.В. // Известия ВУЗа. Пищевая технология - 2007. - № 5-6. - С. 111.

3. Бердина А.Н. Аминокислотный состав липоротеинов подсолнечника и пшеницы / Бердина А.Н., Ильчишина Н.В., Безверхая Н.С. // Известия ВУЗа. Пищевая технология - 2008. - № 2-3. - С. 26-28.

4. Бердина А.Н. Биологическая ценность семян подсолнечника и продуктов их переработки / Бердина А.Н., Ильчишина Н.В., Безверхая Н.С. // Известия ВУЗа. Пищевая технология - 2008. - № 5-6. - С. 44-45

5. Бердина А.Н. Перспективные исследования гибридных и сортовых семян подсолнечника новой селекции / Щербаков В.Г., Лобанов В.Г., Францева Т.П., Бердина А.Н., Прудникова Т.Н., Ильчишина Н.В., Зыкина

A.M. // Материалы международных научных конференций «Фундаментальные исследования» - 2006. - № 6. - С. 63

6. Бердина А.Н. Биологическая ценность масел из новых сортов и гибридов семян подсолнечника / Берлина А.Н., Ильчишина Н.В., Прудникова Т.Н., Безверхая Н.С. // Сборник тезисов VIII всероссийской конференции молодых ученых с международным участием «Пищевые технологии» в Казане, 9-10 апреля 2007г. - Казань - 2007. - С. 53

7. Берлина А.Н. Активность липазы при созревании и ускоренном старении гибридного подсолнечника / Берлина А.Н., Ильчишина Н.В., Безверхая Н.С. // Научное обеспечение агропромышленного комплекса: Материалы 1-ой всероссийской науч.-практ. конф. молод, ученых. -Краснодар: КубГАУ. - 2007. - С. 150-151.

8. Берлина А.Н. Аминокислотный и жирнокислотный состав липопротеинов подсолнечника / Берлина А.Н. /У Материалы всероссийской научно-практической конференции аспирантов, соискателей и докторантов. - Майкоп: Изд-во ООО «Аякс». - 2008. - С. 87-89.

9. Берлина А.Н. Активность липаз и протеиназ семян подсолнечника гибрида Юпитер при созревании на растении и после тепловой сушки / Берлина А.Н., Ильчишина Н.В., Безверхая Н.С. // Материалы IV съезда Российского общества биохимиков и молекулярных биологов. Новосибирск: издательство «Арта». - 2008. - С. 370.

10. Берлина А.Н. Жироудерживающая и жироэмульгирующая способность липопротеинов подсолнечника / Берлина А.Н., Ильчишина Н.В., Безверхая Н.С. // «Пища. Экология. Качество». Труды V Международной научно-практической конференции / РАСХН. Сибирское отделение ГНУ СибНИПТИП. - Новосибирск, 2008. - С. 243-244.

11. Берлина А.Н. Исследование биохимического состава липопротеинов семян подсолнечника / Берлина А.Н., Ильчишина Н.В., Ефименко С.Г. // Масличные культуры. Научно-технический бюллетень Всероссийского научно-исследовательского института масличных культур -2008.-Вып. 2 (139).-С. 15-18.

12. Патент РФ № 2340625 Способ получения липопротеинов из семян подсолнечника / Берлина А.Н., Ильчишина Н.В. (РФ). - Заявка № 2007122517 от 15.06.2007 г.

Подписано в печать 15.04.2009. Формат 60x84 1/16. Усл. Печ. Л. 1. Тираж 100. Заказ № 488.

Отпечатано в типографии «Жираф» 350004, г. Краснодар, ул. Алма-Атинская, 139

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Липопротеины, как структурные компоненты клетки

1.1.1 Липопротеины животного происхождения

1.1.2 Липопротеина растительного происхождения

1.1.3 Соотношение белковых и липидных компонентов в липопротеинах животного и растительного происхождения

1.2 Биологическая роль липопротеииов

1.3 Значение липопротеинового комплекса при послеуборочной обработке и хранении семян подсолнечника

1.4 Роль эмульгаторов в пищевой промышленности

Получение пищевых растительных масел й белков из современного подсолнечника требует технологических решений, исключающих снижение качества масличного сырья от уборки до технологической переработки.

Липопротеины - сложные белки, в состав которых входят липиды различного строения. Липопротеины являются обязательным структурным компонентом биологических мембран клеток всех живых организмов. В то же время, результаты многочисленных исследований липопротеинов человека и животных свидетельствуют об их решающей роли в метаболических процессах, в том числе при развитии и старении, а также при различных нарушениях жизнедеятельности и патологических состояниях организма. Липопротеины растений, в отличие от хорошо изученных липопротеинов крови человека и животных, практически не изучены, но бесспорно их влияние на технологические качества промышленных семян. Кроме того, своеобразный химический состав — единый комплекс взаимосвязанных липидов и белков, включающий гидрофобное ядро и гидрофильную оболочку предполагает наличие у липопротеинов поверхностно - активных свойств. В последние годы исследования липид-белковых соединений - как липопротеинов протоплазмы клеток семян, так и липопротеинов, образующихся при технологических воздействиях на семена подсолнечника, приобрели большое значение, когда российскими селекционерами были созданы новые сорта и гибриды подсолнечника. В связи с этим особую актуальность приобретают исследования состава и свойств липопротеинов семян подсолнечника современной селекции, как перспективного источника эмульгирующих веществ используемых в технологии пищевых продуктов.

Анализ уже выполненных исследований показывает, что многие процессы, определяющие качество семян взаимосвязаны с изменениями в их липо-протеиновом комплексе, коррелирующими с уровнем жизнеспособности, химическим составом и биохимическими характеристиками семян, а также условиями послеуборочной обработки, хранения и технологической переработки.

К сожалению, подобные исследования липопротеинов семян гибридов и сортов подсолнечника современной селекции, подвергнутых внешним воздействиям, не проводились и взаимосвязь биохимических процессов при созревании семян, послеуборочной обработке и хранении с состоянием и их свойствами липопротеинового комплекса, остаются неисследованными.

В связи с этим, целью исследования являлось комплексное исследование липопротеинов семян подсолнечника современной селекции при послеуборочной обработке и хранении. Результаты исследования позволят получить новые данные о липопротеиновых комплексах подсолнечника современной селекции и на этой основе теоретически обосновать и усовершенствовать способы послеуборочной обработки и переработки подсолнечных семян современной селекции, а также расширить возможности их использования в пищевой промышленности при получении продуктов функционального назначения повышенной биологической ценности.

Эффективное промышленное использование новых сортов и гибридов подсолнечника невозможно без продолжительного сохранения семенами жизнеспособности и технологического качества после уборки и при хранении семян. Перспективным также является выяснение возможности применения липопротеинов масличных семян в качестве технологических поверхностно-активных веществ, в составе которых нет нежелательных и токсичных компонентов.

В соответствии с Губернаторской Программой «Здоровье - функция питания», которая разрабатывает функциональные продукты и БАД, действующей до 2010 г. предусмотрено создание сортов подсолнечника богатых протеинами и липидами, в связи с дефицитом белка и полиненасыщенных жирных кислот в продуктах питания населения РФ. Для этого необходимо, помимо создания новых сортов и гибридов, на основе углубленных теоретических и экспериментальных исследований, совершенствование технологий уборки урожая, послеуборочной обработки и технологических операций при производстве масла и белка, которые способны улучшить качество семян при снижении затрат, что позволит получать одновременно с маслом поверхностно-активные вещества бесхолестериновой природы и использовать их в масложировой промышленности.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1 Липопротеины, как структурные компоненты клетки

Липопротеины - это группа сложных белков, локализованных в протоплазме клетки, в состав которых входят липиды. Связь между белками и ли-пидами осуществляется посредством различных взаимодействий - преимущественно гидрофобных и электростатических [39]. Согласно работам [11, 12, 14, 35, 37] липопротеины подразделяют на свободные - белки протоплазмы, или растворимые в воде, и нерастворимые, или структурные - липопротеины биомембран клеток митохондрий и других органоидов растений. Не-ковалентные связи в липопротеинах между белками и липидами обуславливают возможность свободного обмена липидов и изменение свойств липопротеинов в живом организме. При взаимодействии липидов с белками определенную роль играют также электростатические силы притяжения, при этом двухвалентные положительные ионы могут служить связующим звеном между отрицательно заряженными группами липида и белка. Существенное значение в образовании комплексов липид-белок имеют также силы Ван-дер-Вальса и силы гидрофобного взаимодействия, так фосфолипиды взаимодействуют с белком своими фосфатными группами и четвертичными атомами азота (фосфотидилхолины и фосфотидилэтаноламины); свободные жирные кислоты взаимодействуют карбоксильными группами. Фосфолипиды проявляют сродство к аминокислотам, содержащим -ОН; =NH; -NII2; =S группы [39].

Одно из первых наблюдений Дж. Финеана [104] состояло в том, что растворимый белок, введенный под слой фосфолипида, распределенного на поверхности воды, изменяет поверхностное давление монослоя; это означает, что некоторые боковые цепи белка взаимодействуют с монослоем и частично проникают в него. Был сделан вывод, что белок образует монослой, прилегающий к полярной поверхности фосфолипидов, а взаимодействие обусловлено как полярными, так и неполярными силами. Растворимый белок влиял также на свойства липидных бислоев; в частности, резко понижал удельное сопротивление такого слоя.

Взаимодействие липидов с преимущественно неполярными и поэтому нерастворимыми белками изучалось в гораздо меньшей степени; однако, по данным [104] было показано, что структурный белок, выделенный из митохондрий, взаимодействует с фосфолипидом и образует комплекс, содержащий около 25 % фосфолипида; последний сохраняет способность связываться с цитохромом с, причем степень связывания соответствует той, какую можно было ожидать, если бы заряженные группы фосфолипида оставались свободными. Такого рода наблюдения подчеркивают, что в биологических структурах между липидными и белковыми компонентами возможно как электростатическое, так и неполярпое взаимодействие. Характер связи белков и липидов в липопротеинах может быть различным, а прочность ее варьируется в зависимости от природы липидов простетических групп [59, 65].

Липиды в комплексе с белком входят в состав внешней и внутренней мембран митохондрий. Благодаря этому создаются условия для нормального хода окислительно-восстановительных процессов. Отмечено, что липидные и особенно липопротеиновые комплексы участвуют в биосинтезе белка [103].

В результате исследований Института математических проблем биологии РАН в сотрудничестве с Медицинским Университетом Фрайбурга (Германия), Университетом Нанси (Франция) и Институтом Генетики и Молекулярной и Клеточной Биологии в Страсбурге (Франция) установлена пространственная структура липопротеина, определенная методом рентгеност-руктурного анализа (рисунок 1). На рисунке светлый фон - белковая оболочка липопротеина, темный фон - липидное ядро [128].

Рисунок 1 - Пространственная структура липопротеина

Согласно исследованиям [39, 103, 121, 128] липопротеины протоплазмы животного происхождения представляют собой сферические частицы большой молекулярной массы, состоящие из гидрофобного ядра и гидрофильной оболочки [51]. Ядро содержит в основном триацилглицерол и эфиры холестерина. Гидрофильная оболочка образована монослоем более полярных молекул - фосфолипидов и неэтерифицированного, свободного холестерина. Полярные группы на поверхности стабилизируют частицу и делают возможным транспорт негюлярных липидов в водной фазе. Каждая такая частица, согласно современным представлениям [51], содержит один вид специфических белков - аполипопротеинов.

Интерес биохимиков и биофизиков к исследованиям липопротеинов обусловлен многими причинами. Во-первых, в организме человека и животных они являются основной транспортной формой холестерина, триацилгли-церолов и фосфолипидов. Как известно, состав липидного бислоя мембраны во многом определяет их функциональную активность. Кроме липидов, липопротеины переносят и другие гидрофобные молекулы, например, такие, как токоферолы [135] и бензпирены [138]. Во-вторых, липопротеины участвуют в регуляции ряда физиологических процессов; в организме - иммунных реакций [24, 123, 127], удаления из крови токсинов бактерий [129, 136], нейтрализации онкогенных вирусов [126]. В-третьих, интерес к изучению липопротеинов обусловлен многочисленными данными о решающей роли нарушения их обмена и структуры в развитии таких распространенных заболеваний, как ишемическая болезнь сердца, церебральный атеросклероз, диабет, гепатиты. В-четвертых, липопротеины протоплазмы — один из самых удобных природных объектов для исследования белок-липидных взаимодействий и их комплексов [100]. Внимание к липопротеинам.в последнее десятилетие усилилось в связи с вопросами старения живых организмов, которое обусловлено изменениями ферментного и липид-белкового комплексов. Как известно, старение организма - многофакторный биохимический процесс, включающий сложные молекулярно-генетические, клеточные и субклеточные механизмы [65, 86].

ВЫВОДЫ

1. Впервые проведено сравнительное изучение липопротеинов семян гибридов и сортов подсолнечника современной селекции при созревании, послеуборочной обработке и хранении. Изучен химический состав белкового и липидного компонентов липопротеинов.

2. Разработан способ получения из семян подсолнечника препарата липопротеинов с высокими поверхностно-активными свойствами. Способ защищен патентом РФ.

3. Определена оптимальная температура послеуборочной обработки свежеубранных семян гибридов и сортов, которая находится на уровне 60°С. Использование более высоких температур в процессе сушки приводит к нежелательным изменениям в белковом и липидном компонентах липопротеинов: в белковом компоненте снижается количество электрофоретических фракций и их подвижности за счет тепловой денатурации (деструкции); в липидном компоненте уменьшается содержание фосфолипидов и карогинои-дов, растет содержание диацилглицеролов.

4. Тепловая сушка семян при рекомендуемых режимах (60°С) сопровождается возрастанием функционально - технологических свойств липопротеинов - жироудерживающей (ЖУС) и жироэмульгирующей (ЖЭС) способностей. Повышение температуры приводит к глубокой денатурации белковых молекул, что сопровождается снижением поверхностно-активных свойств липопротеинов.

5. При хранении семян происходит изменение активности гидролитических ферментов: кислых и щелочных липаз и протеаз. При этом поверхностно-активные свойства липопротеинов возрастают.

6. Установлено, что изменение липопротеинового комплекса семян при созревании, послеуборочной обработке и хранении коррелирует с изменениями активности гидролитических ферментов, образованием в клетках семян продуктов гидролиза и накоплением токсичных продуктов окисления, нарушающих нативную структуру биомембран клеток. Изменение структуры биомембран клеток продуктами гидролиза белков и липидов, а также продуктами окисления липидов сопровождается нарушением работы ферментов и потерей жизнеспособности семян.

7. На основании проведенных исследований теоретически и экспериментально обоснована возможность получения подсолнечных липопротеиновых продуктов. Экспериментально обоснованы рекомендации по их использованию в качестве поверхностно-активных веществ в технологии жировых продуктов эмульсионной природы и хлебопекарном производстве. Апробация ПАВ, на основе липопротеинов полученных из семян подсолнечника по разработанному нами способу, подтвердила их эффективность.

8. Статистическая обработка экспериментальных данных подтвердила достоверность выявленной зависимости поверхностно - активных свойств (жироудерживающей и жироэмульгирующей способностей) липопротеинов от степени жизнеспособности семян и уровня активности в семенах гидролитических ферментов.

1. Азаркович М.И. Синтез и накопление запасных белков в изолированном эндосперме семян: Автореф. канд. дис. М., 1985. - 24 с.

2. Азарова В.М. Фракционный состав липидов гороха. Сб.: Химия липидов зерновых и бобовых культур. - Оренбург. - 1970. - С. 42.

3. Алимова Е.К. Биосинтез глицеридов в различных тканях животного организма/УЛипиды. Структура, биосинтез, превращения и функции. М.: Наука, 1977.-С. 5-15.

4. Аминокислотный состав белков высокобелковой формы подсолнеч-ника/В.К. Морозов, Е.П. Букин, Л.У. Чемоданов, Г.И. Стадник//Сб. научн.-техн. информации НИИСХ Юго-Востока. 1975. - С.62.

5. Артемьева Н.К. Биохимическая характеристика запасных белков подсолнечника и их изменение при технологической переработке: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Краснодар, 1985. -24 с.

6. Бартон Л. Хранение семян и их долговечность. Пер. с англ. М.: Колос, 1964.-240 с.

7. Безингер Э.Н., Сисакян Н.М., Симакова И.М. Биохимия, 1959, 24, 876.

8. Беккерель П. Скрытая жизнь, ее природа и отношение к некоторым теориям современной биологии. М.: Вестник знания, 1917. - 249 с.

9. Белицер Н.В. К вопросу о синтезе запасного белка и его внутриклеточной локализации в семенах высших растений // Материалы ко II Всесоюз. симпозиума по применению электронной микроскопии в ботанических исследованиях. Киев, 1967- С.92-95.

10. Белова Т.Е. Липид-белковые комплексы пшеницы: Автореф. дис. . канд. техн. наук. М., 1981. -23 с.

11. Бергельсон Л.Д. Биологические мембраны. Факты и гипотезы. М.: «Наука». 1975, 184 с.

12. Бергельсон Л.Д. Мембраны, молекулы, клетки. М.: Наука, 1982. -С. 16-126.

13. Биология семян и семеноводство. Под ред. и с предисловием доктора с.-х. наук профессора Г.Ф. Никитенко. М.: «Колос». 1976. — 464 с.

14. Биохимические функции клеточных структур. Н.М. Сисакян//У Международный биохимический конгресс. Функциональная биохимия клеточных структур. Симпозиум II. — М.: 1961, С. 3-9.

15. Биохимия / В.Г. Щербаков, В.Г. Лобанов, Т.Н. Прудникова и др. Под ред. В.Г. Щербакова. Издание 2-е, перераб. и доп. СПб.: ГИОРД, 2003. -440 е.: ил.

16. Божко М.Ф. Биологическая убыль сухого вещества семян подсол-нечника.//Масложировая промышленность. 1981. - № 10. - С. 17-21.

17. Боровиков В.П., Ивченко Г.И. Прогнозирование в системе STATISTICA в среде Windows. Основы теории и интенсивная практика на комптьютере. — М.: Финансы и статистика, 2000. - 382 с.

18. Бородулина А.А., Харченко Л.Н. Накопление и метаболизм жирных кислот в семенах высокоолеинового мутанта подсолнечника//Физиология растений. 1975. - Т. 23, вып. 5. - С. 952-957.

19. Брагинский Л.П., Методологические аспекты токсикологического биотестирования на Daphnia magna Str. и других ветвистоусых ракообразных.// Гидробиологический журнал, т. 36, 2000. с. 50-70.

20. Буглович С.Ю. Химические вещества и качество продуктов/С.Ю. Буглович, М.М. Дублецкая//Минск: Урожай. — 1986.

21. Васильев Д.С. Подсолнечник. М.: Агропромиздат, 1990. - 174 е.:ил.

22. Введение в биомембранологию/Под ред. А.А. Болдырева. М.: МГУ, 1990.-208 с.

23. Вознесенский В.А. Статистические решения в технологических задачах. Кишинев: Картя Молдовеняскэ, 1968. - 196 с.

24. Галер Г., Ганефельд М., Ярое В. Нарушения липидного обмена. М.: Медицина, 1979. 335 с.

25. Гаманченко А.И. Физиолого-биохимические изменения в семенах подсолнечника при старении: Дис. . канд. техн. наук. Краснодар, - 1995, 130 с.

26. Главное управление ветеринарии МСХ СССР. Микрометод определения биологической ценности продуктов и кормов. Из-во «Колос», 1977.

27. Глицеридный состав масел семян подсолнечника с различным содержанием линолевой и олеиновой кислот/JT.H. Харченко, В.Н. Григорьева, А.Н. Миронова//Масложировая промышленность. 1978. - № 10. - С. 13-14.

28. Голдовский A.M., Мирзоев A.M. Протеолитическая активность семян в производстве растительных масел.//Масложировая промышленность. -1979.-№7. с. 17-19.

29. Голубев В.Н. Пищевые и биологически активные добавки: Учеб. для студ. высш. учеб. завед. / В.Н. Голубев, Л.В. Чичева-Филатова, Т.В. Шлен-ская. М.: Издательский центр «Академия», 2003. - 208 с.

30. ГОСТ 12038 84 - Методы определения всхожести.

31. ГОСТ 10856 96. Семена масличные. Метод определения влажности.

32. ГОСТ 10847 74. Семена масличные. Метод определения зольности.

33. ГОСТ 10857 86. Семена масличные. Метод определения масличности.

34. ГОСТ 10842 89. Семена масличные. Метод определения массы 1000 семян.

35. Гудвин Т., Мерсер Э. Введение в биохимию растений. В 2-х томах/Пер. с англ. Т. 1.-М.: Мир, 1986.-393 с.

36. Гудвин Т., Мерсер Э. Введение в биохимию растений (в 2-х томах). Под ред. чл.—корр. АНСССР В.Л. Кретовича. М.: «Мир». 1986.

37. Гумилевская Н.А. Синтез белка в созревающих и прорастающих семенах // В кн.: Растительные белки и их биосинтез М.: Наука, 1975.-С.220-234.

38. Доморощенкова М.Л., Демьяненко Т.Ф., Тарасова Л.И., Тагиева Т.Г., Завадская И.М., Радыгина А.Ф. Новые соевые добавки для масложировых продуктов. // Масложировая промышленность. № 4, 2008. С. 27-30.

39. Дубцова Г.Н. Липид-белковые комплексы пшеницы, их формирование и роль в технологических процессах: Дис. . д-ра техн. наук. М., -1999.

40. Ефименко С.Г. Использование мутаций состава токоферолов и жирных кислот в селекции подсолнечника на качество масла: Дис. . канд. биол. наук. Краснодар, - 2003. - 119 с.

41. Жизнеспособность семян. Пер. с англ. М.: Колос, 1978. - 415 с.

42. Жуков А.В., Верещагин А.Г. Современные методы экстракции, очистки и предварительного фракционирования полярных липидов расте-ний//Физиология растений. 1980, - Т. 27. - Вып. 1. - С. 171-187.

43. Зиновьев А.А. Химия жиров. М.:Пищепромиздат, 1952. - 426 с.

44. Игнатьев И.Д. Использование инфузорий тетрахимена пириформис как тест-объекта при биологических исследованиях в сельском хозяйстве/ И.Д. Игнатьев, В.Я. Щаблий//М.: Колос. 1978.-е. 1-51.

45. Ильинова С.А. Теоретическое и экспериментальное обоснование создания пищевых эмульсий функционального назначения с применением фракционных фосфолипидных продуктов. Дис. . докт. техн. наук. Краснодар, 2007.-240 с.

46. Ильчишина Н.В. Влияние функциональной активности митохондрий на отложение запасных липидов в семенах подсолнечника и качество масла. Дисс. . канд. техн. наук. Краснодар, 1992. - 124 с.

47. Ильяшенко Т.Н. Биохимическая характеристика липопротеинов подсолнечника и их изменения при технологической переработке семян: Дис. . канд. техн. наук. Краснодар, - 1990.

48. Карманский И.М., Левитова Е.Н., Шпикитер В.Д. Свойства, строение и роль липопротеинов сыворотки крови//В кн.: Успехи биологической химии -М.: Наука, 1975.-Т. 16.-С. 89-114.

49. Каталог сортов и гибридов масличных культур технологий возделывания и средств механизации. ВНИИМК. Краснодар. - 2004. - 27 с.

50. Кейтс. М. Техника липидологии. Выделение, анализ и идентификация липидов. М.: «МИР», 1975.-323 с.

51. Климов A.IT. В кн.: Дислипопротеидемии и ишемическая болезнь сердца/Под ред. Е.И. Чазова, А.Н. Климова. М.: Медицина, 1980, с. 10-26.

52. Климов А.Н. Липопротеиды в организме животных и человека // В сб.: Липопротеиды, дислипопротеидемии и атеросклероз. — М.: Медицина, 1974.-С. 133-142.

53. Копейковский В.М., Костенко В.К. Изменение кислотного числа масла семян подсолнечника высокомасличных сортов в процессе сушки// Мас-лобойно-жировая промышленность. 1961. —№3. —С. 12-17.

54. Костенко В.К. Исследование в области сушки высокомасличных семян подсолнечника: Афторер. дисс. . канд. техн. наук. Краснодар, 1962. -32 с.

55. Красильников В.Н. Лецитины: проблемы качества пищевых добавок/Материалы VII Всероссийской научно-практической конференции «Синергизм пищевых добавок», г. Санкт-Петербург, 11.04.2006 г. - СПб, 2006.-С. 41-49.

56. Кретович В.Л. Техническая биохимия. М.: Высшая школа, 1973. -548 с.

57. Крокер В., Бартоп Л. Физиология семян. Изд. Иностранная литература, 1955.

58. Ксандопуло С.Ю. Теоретические и экспериментальные основы рациональной технологии послеуборочной обработки (послеуборочного дозревания) масличных семян и плодов кориандра. автореф. дисс. . докт. техн. наук. - Краснодар, 1993. - 43 с.

59. Ленинджер А. Биохимия. М.: Мир, 1974. - 958 с.

60. Ленинджер А.Л. Основы биохимии. В 3-х томах. Т. 1/Пер с англ. -М.: Мир, 1985.-367 с.

61. Литвинов Е.В. Лечебно-профилактические майонезы серии «Здоро-вье»/Е.В. Литвинов, А.Д. Дуриев, А.В. Орещенко, А.Б. Лиси-цин//Масложировая пром-сть. 2002. - № 1. - С. 40-41.

62. Лихачев Б.С. Сила роста семян как один из факторов их долголе-тия.//Доклады ВАСХНИИЛ. 1978.-№ 9. - С. 14-16.

63. Лихачев Б.С. Сила роста семян: Автореф. дисс. . докт. с.-х. наук. -Краснодар, 1986.

64. Лихачев Б.С., Мусорина Л.И., Шевченко З.Н. и др. Использование экстремальных условий хранения семян в моделировании процессов их ста-рения.//Бюл. ВИР. 1978. - Вып. 77. - С. 57-62.

65. Лобанов В.Г., Шаззо А.Ю., Щербаков В.Г. Теоретические основы хранения и переработки семян подсолнечника. М.: Колос, 2002. - 592 с.

66. Методические рекомендации по биологической оценке продуктов животноводства и кормов с использованием тест-организма тетрахимена пи-риформис. Москва-1975. 15 с.

67. Методы биохимического исследования растений / А. И. Ермаков, В. В.Арасимович, Н. П. Ярош и др.; Под ред. А. И. Ермакова.- 3-е изд., перераб. и доп. Л.: Агропромиздат. Ленингр. отд-ние, 1987.- 430с., ил.

68. Минакова А.Д. Исследование белкового комплекса семян высокомасличного подсолнечника с целью повышения пищевой ценности растительных белков: Автореф. дисе. . канд. техн. наук Краснодар, 1981 - 25с.

69. Михайлова Г.П. Применение модифицированного соевого белка при выработке майонеза/Г.П. Михайлова, А.Н. Петрова//Пищевая технология. -1999. -№ 10.-С. 19-20.

70. Мустафаев С. К. Развитие научно-практических основ бионизиро-ванных технологий послеуборочной обработки масличных и эфирномасличных семян: Автореф. Дис. док. тех. наук, Краснодар,2005.-51с.

71. Надыкта В.Д. Опыт и проблемы хранения семян масличных культур.//Серия 27. Экономика и организация заготовок сельскохозяйственнойпродукции: Обзорная информация. М.: АгроНИИТЭИП, 1988, вып. 6. - С. 1-40.

72. Николаев А.Н. Биологическая химия. М.: Высшая школа, 1989, — 425с.

73. Олифсон JI.E., Осадчая Н.Д. Химический состав «связанных» липидов сорго. Сб.: Химия липидов зерновых и бобовых культур. - Оренбург. -1970.-С. 37.

74. Осик Н.К. Качественный состав белкового комплекса семян подсолнечника в процессе их формирования и в зависимости от условий выращивания растений: Дисс. . канд. биол. наук. Краснодар, 1975. - 122 с.

75. Плешков Б.П. Практикум по биохимии растений 3-е изд., доп. и перераб. - М.: Агропромиздат, 1985. - 255 е., ил.

76. Полевой В.В., Саламатова Т.С. Физиология роста и развития растений.-Л.: ЛГУ, 1991.-С. 240.

77. Практическая химия белка/Пер. с англ./Под ред. Дарбре А. М.: Мир, 1989.-623 с.

78. Проскуряков М.Т. Биохимия (краткий курс). Краснодар, КубГТУ, 2002.- 199 с.

79. Пустовалова Л.М. Практические работы по биохимии Ростов н/Д: Феникс, 2004. - 320 с.

80. Растительные белки и их биосинтез. М.: Наука, 1975. - 544 с.

81. Растительный белок / Пер. с фр. В.Г. Долгополова; под ред. Т.Н. Ми-кулович. М.: Агропромиздат, 1991. - 684 с.

82. Реймерс Н.Ф. Популярный биологический словарь. М.: Наука, 1990.-С. 544.

83. Ржехии В.П., Красильников В.Н. К изучению взаимодействия липидов с белковыми веществами.//Прикладная биохимия и микробиология. М., 1965.-с. 618-623

84. Робертис Э.Де, Новинский В., Саэс Ф. Биология клетки. М.: «Мир». 1973, 479 с.

85. Розанцев Э.Г. Химия старения организма. — М.: Знание, 1978. 64 с.

86. Розанцев Э.Г., Черемных Е.Г., Кузнецова Л.С. Автоматизированный биотест для токсикантов пищевых продуктов. // Мясная индустрия. № 6, 2001.

87. Руководство по методам исследования, технологическому контролю и учету производства в масложировой промышленности. Л.: ВИИИЖ. - Т. 1, кн. 1, 1967.-585 е.; Т. 1,кн. 2, 1967.-342 с.

88. Рыжова Л.М., Суханова Г.А., Ковалев И.А., Филиппов Г.П. Липиды плазматических мембран лимфоцитов у больных атеросклерозом и их детей. Клин. лаб. Диагностика 2001; 3: 10-2.

89. Свешникова И.Н., Асикритова М.А. Локализации и накопление запасных веществ в плодах и семенах масличных растений // В кн.: Биохимия и физиология масличных растений. Майкоп. - Вып. 2. - С. 140-157.

90. Свойства, строение и роль липопротеидов сыворотки крови. И.М. Карманский, Е.Н. Левитова, В.О. Шпикитер.//Успехи биологической химии, т. 16. М.: 1975, с. 89-114.

91. Сисакян Н.М., Мелик-Саркисян С.С. Биохимия, 1956, 21, 329.

92. Сисакян Н.М., Мелик-Саркисян С.С. Биохимия, 1958, 23,-728.

93. Сисакян Н.М., Мелик-Саркисян С.С., Безингер Э.Н. Биохимия, 1952, 17, 626.

94. Соболев A.M. Запасание белка в семенах растений. М.: Наука, 1985,- 112 с.

95. Стародубцева А.И. Биохимические основы хранения масличных семян: Автореф. дисс. . канд. техн. наук. М., 1953. - 22 с.

96. Степуро М.В. Влияние структурной модификации белков подсолнечника на биологическую ценность и функциональные свойства получаемых на их основе высокобелковых пищевых продуктов: Дис. . канд. техн. наук. Краснодар, - 2006. - 140 с.

97. Строна И.Г. Общее семеноведение полевых культур. М.: Колос, 1966.-464 с.

98. Структура и функции биологических мембран. М., «Наука», 1975 г. -345 с.

99. Сывороточные липопротеиды человека в норме и патологии. В.Е. Формазюк, А.И. Деев, Ю.А. Владимиров.//Успехи биологической химии, т. 26. М.: 1985, с. 218-245.

100. Тарасова Л.И. Использование пищевых ПАВ в производстве майо-неза/Л.И. Тарасова, Г.П. Михайлова, А.В. Стеценко//Пищевая промышленность. 1994.-№ 9.-С. 5-7.

101. Уильяме Б., Уилсон К. Методы практической биохимии. Под ред. С.Е. Северена, А.Д. Виноградова. М.: Издательство «Мир», 1978. 268 с.

102. Филиппович Ю.Б. Основы биохимии. Издательство «Высшая школа». М.:- 1969-576 с.

103. Финеан Дж. Биологические ультраструктуры. М.: 1970. - 325 с.

104. Фрей-Висслинг А., Мюлеталер К. Ультраструктура растительной клетки. Перевод с английского Н.Л. Клячко и Н.В. Цингер. Изд-во «Мир» Москва, 1968, 454 с.

105. Функциональные свойства белковых продуктов из семян кунжута. Альван Амин, А.Д. Минакова, В.Г. Щербаков//Известия вузов. Пищевая технология,-№ 2-3, 1999. - С. 17-18.

106. Харченко Л.Н., Солдатов К.И. Накопление жирных кислот в липи-дах семян высокоолеинового мутанта подсолнечника в процессе созрева-ния//Физиол. и биохим. культ, растений. — 1976. № 8. — С. 508—513.

107. Холестерин и липопротеины низкой плотности как эндогенные им-муномодуляторы. Доценко Э.А., Юпатов Г.И., Чиркин

108. AAV/Иммунопатология, аллергология, инфектология, № 3, - 2001. - с. 615.

109. Шарапов Н.И. Масличные растения и маслообразовательный процесс. М.-Л.: Изд-во АН СССР, 1959. - 440 с.

110. Шульвинская И.В. Биохимические и функциональные особенности модифицированных белков рапса и сурепицы Дис. . канд. техн. наук. -Краснодар, 2005. - 134 с.

111. Щербакова Е.В. Применение биотехнологических методов при переработке растительного масличного сырья. Монография. — Краснодар: Изд-во «Ризограф», 2006. 288 с.

112. Щербаков В.Г., Артемьева Н.К., Минакова А.Д., Иваницкий С.Б. Качественная характеристика белкового комплекса семян подсолнечни-ка//Изв. вузов. Пищевая технология. 1984. -№ 4. - С. 13-15.

113. Щербаков В.Г. Биохимия и товароведение масличного сырья. 4-е изд., прераб.и доп. - М.: Агропромиздат, 1991. -304 с.

114. Щербаков В.Г., Иваницкий С.Б. Производство белковых продуктов из масличных семян. М.: Агропромиздат, 1987. - 152 с.

115. Щербаков В.Г. Исследование процесса созревания и послеуборочного дозревания семян высокомасличного подсолнечника в связи с условиями их производственного хранения: Автореф. дисс. . канд. техн. наук. -Краснодар, 1956. 19 с.

116. Щербаков В.Г., Лобанов В.Г. Биохимия и товароведение масличного сырья. -5-е изд., перераб. и доп. М.: КолосС, 2003. - 360 е.: ил.

117. Щербаков В.Г. Технология получения растительных масел. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Легкая и пищевая пром-сть, 1984, 144 е., ил. 76.

118. Щербаков В.Г. Химия и биохимия переработки масличных семян. -М.: Пищевая пром-сть, 1977. С. 73-86.

119. Юдина Т.П. Формирование структуры эмульсионных продуктов при использовании растительных экстрактов и гидроколлоидов/ Т.П. Юдина,

120. Е.И. Черевач, Е.И. Цыбулько, Ю.В. Бабин//Хранение и переработка сельхоз-сырья. 2006. - № 4. - С. 34-36.

121. Якушева А.А. Жизнеспособность и технологическое качество семян подсолнечника при хранении в низкокислородной газовой среде. Авреф. дисс. . канд. техн. наук. Краснодар, 1992. - 25 с.

122. Allan D., Crumpton M.J. Preparation and charaaterization of the plasma membrane of pig lymphocytes. Biochem.J 1970; 120: 133-143.

123. Anores C. Fat, emulsifier and protein systems are «keys» to developing analogues//Food Processing. 1978. - Vol. 39. - № 3. - P. 80-81.

124. Curtiss L. 1С., Engington T. S.-J. Clin. Invest., 1978, 61, p. 1298-1308.

125. Gage S.H., Fish P. A. Amer. J. Anat., 1924, 34, p. 1.

126. Harrington J.T. Biochemical bases of seed longevity. Seed schience and technology, 1973, vol. 1,9, 17-29.

127. Kane J. P., Hardman D. A., Dimpel J. C. et al. Proc. Nat. Acad. Sci. US, 1979, 76, p. 5957-5961.

128. KostnerG., Holasek A. Biochemistry, 1972, 11, p. 1217-1223.

129. Margolis S. In: "Structural and Functional Aspects of Lipoproteins in Living Systemes". E. Tria, and A. M. Bcanu. (Eds.). London, N. Y., 1969, p. 370.

130. Munford R. S., Hall C. L., Dietachy J. M. Infect, and Immun, 1981, 34, p. 835-843.

131. Oncley J., Scatchard G., Brown A.-J. Phys. Chem., 1947, 51, p. 184.

132. Phillips G. B. J. Clin. Invest., 1959, 38, 489.

133. Romero Jeanne, Kyan Dale S. Susceptibility of the major storage protein of the bean Phaseolus vulgaris L. to in virto enzymatic hydrolysis. J.Adr. and Food Chem., 1978, vol.28, № 4. P.784- 788.

134. Scanu A. M., Wisdom Ch. Annual Rev. Biochem., 1969, 38,113.

135. Schwenke K.D., Schulz M., Linow K.J. Uber Samenproteine. 5 Mitt. Dissoziationsverhalten des 1 lS-globulins aus Sonnenblumensamen//Nahrung. -1975. -Bd. 19-№ 5-6. S. 425-433.

136. Scott M. L. Fed. Proc., 1980, 39, p. 2736-2739.

137. Seganti L., Valenti P., Mastromarino P. et. al. Ann. Sclavo, 1980, 22, p. 719-728.

138. Shu H. P., Nichols A. V.-Fed. Proc., 1979, 38, ref. 1615.

139. Skipski V. P., Barclay M., Barclay R. K., Fetzer V. A., Good J. J., Archibald F. M. Biochem. J., 1967, 104, 340.

140. Skipski V.P. In: "Blood Lipids and Lipoproteins: Quantitation, composition and Metabolism". G. J. Nelson (Ed.). N. Y., London, 1972, p. 471.

141. Wood P., Imaichi K., Knowles J., Michaels G., Kinsell L. J. Lipid Res., 1964, 5, 225.приложен™1. ОСЖЙСЖАШ ФВДИПРАЩШй