автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.04, диссертация на тему:Исследование влияния состава защитной среды на эффективность процесса криозамораживания микроорганизмов

Кузьмина Ольга Михайловна

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ СОСТАВА ЗАЩИТНОМ СРЕДЫ НА ВЫЖИВАЕМОСТЬ МИКРООРГАНИЗМОВ В ПРОЦЕССЕ КРИОЗАМОРАЖИВАНИЯ

Специальность 05.18.04 — Технология мясных, молочных, рыбных

продуктов и холодильных производств

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

1 8 НОЯ 2010

Москва-2010

004612966

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии)

Научный руководитель: академик РАСХН, доктор технических наук,

профессор Владимир Дмитриевич Харитонов

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Костенко Юрий Григорьевич

кандидат технических наук Каухчешвили Николай Эрнестович

Ведущее предприятие: Северо-Кавказский

государственный технический университет

Защита диссертации состоится «16» ноября 20 Юг в_час на заседании

Диссертационного совета ДМ 006.021.01 при Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт мясной промышленности им.В.М. Горбатова Россельхозакадемии (ГНУ ВНИМИ им.В.М. Горбатова Россельхозакадемии) по адресу: 109316, Москва, ул.Талалихина, 26.

Отзывы на автореферат в двух экземплярах, заверенные печатью, просим направлять в адрес ученого секретаря объединенного Диссертационного совета.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИМИ им.В.М. Горбатова Россельхозакадемии.

Автореферат разослан и размещен

на сайте www.vniimp.ru «_» октября 2010 г

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат технических наук, старший научный сотрудник

А.Н.Захаров

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы.

Обеспечение здоровья населения является одним из важнейших приоритетов в России. На федеральном и региональных уровнях поставлены задачи, связанные с продовольственной безопасностью страны.

Концепция оздоровления человека и предупреждения старения организма путем включения в рацион кисломолочных продуктов была впервые выдвинута И.И. Мечниковым, который исследовал свойства молока, ферментированного закваской, содержащей штаммы L.bulgaricum.

Впервые в России С.А. Королевым были применены закваски, т.е. чистые культуры молочнокислых бактерий, а также были проведены исследования микробиологических процессов по основным отраслям молочного производства. Под его руководством была основана первая школа отечественных микробиологов молочной промышленности. Его учениками, последователями и рядом других исследователей: Королевой Н.С., Банниковой JI.A., Богдановым В.М., Гудковым A.B., Лагодой И.В., Гуськовой Л.Д., Семенихиной В.Ф., Рожковой И.В., Ганиной В.И., Тихомировой H.A., Шевелевой С.А., Шендеровым Б.А. заложены основы производства заквасок и бактериальных концентратов.

Опыт отечественной и зарубежной молочной промышленности и анализ научных публикаций показывает, что производство кисломолочных продуктов прогрессирует, увеличивается спрос на бактериальные концентраты, и, как следствие, повышаются требования к заквасочным культурам, а именно они должны обеспечивать безопасность и качество, вырабатываемой продукции, обеспечивать необходимый баланс штаммов, обуславливать удобство внесения. Этим требованиям в большей степени соответствуют бактериальные концентраты прямого внесения (DVS), так как их использование исключает процедуру восстановления культур перед сквашиванием; стадию перевивки в процессе хранения, что обеспечивает устойчивость в соотношении видов и штаммов микроорганизмов.

На сегодняшний день, при производстве бактериальных концентратов применяются два способа их консервирования: лиофилизация и замораживание при сверхнизких температурах (-196°С). И если первый способ достаточно изучен и широко применяется в производстве, то сведения об использовании второго - носят ограниченный характер, он до сих пор не нашел промышленного применения в нашей стране. Несмотря на значительное количество исследований посвященных вопросам выживаемости микроорганизмов в процессе криоконсервирования, не имеется четких представлений о совокупности и взаимосвязях процессов, позволяющих применить технологию для промышленного производства бактериальных концентратов.

На российском рынке в настоящее время представлены дорогостоящие замороженные бактериальные концентраты импортного производства. Обеспечить молокоперерабатывающие предприятия отечественными

замороженными бактериальными концентратами не представлялось возможным, одной из причин являлось отсутствие технологии приготовления защитных сред обеспечивающих сохранность свойств и активности бактериальных концентратов. Следовательно, разработка технологии получения и способа применения криопротекторных сред, для получения бактериального концентрата прямого внесения, методом замораживания при сверхнизких температурах является актуальным вопросом, требующим систематического изучения.

Работа выполнена в ГНУ ВНИМИ в рамках темы РАСХН «Разработать комплекс экологически чистых энергосберегающих технологий для переработки молока на базе низких температур», а также Федеральной целевой программы "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники" на 2007-2012 годы по теме «Разработка технологий универсального быстропереориентируемого производства заквасок прямого внесения для биотехнологической промышленности».

Цели и задачи исследований.

Целью диссертационной работы является разработка технологии получения и способа применения криопротекторных сред, при производстве активных и стойких бактериальных концентратов молочнокислых бактерий, методом замораживания при сверхнизких температурах.

Для достижения полученной цели были сформулированы следующие задачи:

обосновать целесообразность использования криопротекторов, как компонентов защитной среды, для замораживания бактериальных концентратов;

разработать метод оценки выживаемости микроорганизмов на основе импедансной технологии;

разработать лабораторную методику криозамораживания микроорганизмов;

изучить влияние криозамораживания на морфологические, культуральные и биохимические свойства исследуемых бактерий;

изучить влияние вида и концентрации криопротекторов в составе защитных сред на эффективность криозамораживания микроорганизмов;

изучить динамику изменения свойств криозамороженных микроорганизмов в процессе хранения при различных температурах;

разработать защитные среды для молочнокислых и бифидобактерий, подлежащих криозамораживанию, а также соответствующую нормативную документацию.

Научная новизна.

В результате проведенных исследований получены научно-обоснованные данные о влиянии состава защитной среды на эффективность процесса криозамораживания молочнокислых микроорганизмов и бифидобактерий.

Установлены зависимости, характеризующие интенсивность изменения микробиологических, биохимических, физико-химических процессов,

протекающих в замороженных бактериальных концентратах в процессе хранения от состава защитной среды;

Показана высокая эффективность применения разработанных криозащигных сред для стабилизации свойств молочнокислых бактерий в процессе консервации (криозамораживания), а также повышение жизнеспособности в процессе хранения.

Практическая значимость работы.

Разработан лабораторный регламент (технологическая инструкция) использования криопротекторов в производстве заквасок прямого внесения. Определены физико-химические и микробиологические показатели, на основании которых обоснованы сроки и условия хранения и разработан лабораторный регламент хранения заквасок прямого внесения. Разработана методика определения количества молочнокислых бактерий и динамики их роста на основе импедансного метода. По результатам работы подана заявка на получения патента на способ замораживания молочнокислых бактерий с использованием разработанной криозащитной среды. Проведена выработка кисломолочного продукта «Ацидофилин» на ОАО «Кезский сырзавод» и ЗАО «Кировском молочном комбинате», где использовали криозамороженный бактериальный концентрат на основе культуры Lb. acidophilus, изготовленный с применением защитной среды КС-20 на участке научно-исследовательских и экспериментальных работ ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии. В результате выработки был получен кисломолочный продукт «Ацидофилин», полностью отвечающий требованиям нормативной документации.

Апробация работы и публикации.

Основные результаты работы доложены на Международном симпозиуме «Лактоза и ее производные» г.Москва (2007); Международной научно-практической конференции «Совершенствование технологий производства продуктов питания в свете государственной программы развития с-х на 20082012 гг." г.Волгоград(2008); на конференции-конкурсе научно-инновационных работ молодых ученых и специачистов «Отделения хранения и переработки сельскохозяйственной продукции» Россельхозакадемии, г.Москва (2008,2009); на международной научно-практической конференции «Передовые технологии и оборудование в производстве молока» г.Брсст (2009).

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 16 печатных работ и подана заявка на изобретение №2010120515 от 24.05.2010г. «Способ замораживания молочнокислых бактерий».

Структура и объем диссертации.

Диссертация состоит из введения, аналитического обзора литературы, методической части, экспериментальной части, выводов, списка использованной литературы, включающего 187 литературных источника, в том числе 46 зарубежных авторов. Основное содержание изложено на 152страницах машинописного текста, содержит 30 таблиц, 24 рисунка, 5 приложений.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснованы актуальность темы диссертации, сформулирована цель, научная новизна и практическая значимость работы.

Глава 1 Анализ особенностей технологии крнозамороженных бактериальных концентратов. Рассмотрены современные аспекты состояния здоровья населения России, представлены данные о приоритетных направлениях в производстве бактериальных концентратов. Отмечены ключевые факторы, влияющие на выживаемость микроорганизмов. Показано, что важным фактором, определяющим качественные показатели бактериальных концентратов, является состав защитной среды и используемый криопротектор. Проанализированы и обобщены современные представления о криопротекторах, механизме их действия на биологические объекты. На основании анализа и обобщения информации обзора литературы сформулированы цель и задачи диссертационной работы.

Глава 2 Объекты и методы исследований. Объектами исследований являлись: криопротекторы (глицерин (ГОСТ 6259), сахароза (ГОСТ 5833), лактоза (ТУ 6-09-2293-79), пектин, желатин, лимоннокислый натрий (ГОСТ 31227), защитные среды на различных основах, таких как фосфатный буфер, сыворотка молочная, MRS-бульон, гранулы криозамороженного бактериального концентрата, микробная биомасса, бактериальные концентраты различного типа. Культуры молочнокислых бактерий Streptococcus salivarius subsp. thermophilus, Lactobacillus acidophilus и бифидобактерий Bifidobacterium adolescentis из коллекции ГНУВНИМИ.

Структурно-логическая схема проведения исследований, представленная на рис. 1, предусматривает последовательную реализацию обозначенных в схеме этапов.

Основная часть исследований проводилась на участке научно-исследовательских и экспериментальных работ Всероссийского научно-исследовательского института молочной промышленности Россельхозакадемии. Экспериментальные и опытно-производственные выработки бактериальных концентратов осуществляли на участке научно-исследовательских и экспериментальных работ ГНУ ВНИМИ.

При выполнении экспериментальной части работы использовались стандартизированные и общепринятые методы микробиологических исследований.

Степень повреждения поверхности мембран клеток определяли по интенсивности освобождения УФ-поглощаюгцих веществ. Измерение проводили на спектрофотометре Multiscan (Финляндия) при длине волны 260нм. Результат выражали в единицах экстинкции.

Микроскопию препаратов проводили на микроскопе Levenhuk 345 под иммерсией и увеличении хЮОО.

Морфологические, культуральные и биохимические свойства микроорганизмов( 1,2)

Криорезистентность микроорганизмов; определение эквилибрации (1,2,3,4)

Вид и концентрация криопротектора (1,2,3)

Влияние основы защитной среды (1,2,3,5)

Влияние защитной среды (1,2,3,13)

Разработка технологии подготовки и способа применения криопротекторных сред для молочнокислых микроорганизмов

Разработка документации на способ получения и хранения бактериальных концентратов, с применением разработанной защитной среды Изучаемые показатели: 1-Количество молочнокислых микроорганизмов^ КОЕ/см3; 2- количество бифидобактерий, КОЕ/см3; 3-выживаемость, %; 4-эквилибрация, мин; 5-акгивная кислотность, рН; 6-титруемая кислотность, °Т; 7-выделение УФ-поглощающих веществ; 8-БГКП, КОЕ/см3; 9- дрожжи плесени, КОЕ/см3; 10- 5.аигеиз в 1 см3; 11 -БакиапеНа в 10 см3; 12- массовая доля сухих веществ, %; 13-эффеетивная вязкость. Па с;

Рис. 1 Структурная схема исследований

Исследование органолептических, физико-химических, микробиологических характеристик готового продукта (1,2.5.7.8,9,10.11)

Активность кислотообразования определяли по времени достижения рН среды 5,5 при культивировании в 10%-ном восстановленном обезжиренном молоке с исходным значением рН 6,8.

С помощью импедансного метода определяли количество жизнеспособных бактерий до и после криозамораживания, для этого предварительно были рассчитаны калибровочные коэффициенты для определения количества L. acidophilus и Str.thermophilus. На рисунке 2 представлены уравнения регрессии.

"у = -О.ИМк » 0,9028

10 15

Время определения, ч

а)

i:

—у*-0.Ь544* + 9Л024— R!* 0.7693

Время определения, ч б)

Рис. 2 Графики регрессии импедансного метода определения количества L. acidophilus(a) и Str.thermophilus(6)

Время эквилибрации определяли, изучая активность клеток после внесения биомассы в защитные среды, содержащие максимально допустимое количество криопротектора с помощью импедансного метода.

При проведении экспериментов, использовали установку для получения гранул в криозамороженном состоянии ЗГ-40, разработанную и изготовленную специалистами ГНУ ВНИМИ. Производительность установки 16 л/ч, скорость охлаждения 400 °С/мин.

Выращенные культуры, после бактофугирования, смешивали с защитными средами в соотношении 1:1, выдерживали в течение 15-20 минут и подавали на установку ЗГ-40. Полученные гранулы бактериального концентрата расфасовывали в полистирольные стаканы объемом 150 мл. Промаркированные стаканы с бактериальным концентратом закладывали на хранение.

Исследования сохранности клеток и изменения их свойств проводили через 24 часа, один, три, шесть месяцев. Хранение замороженных гранул проводили при температурах минус 25°С и минус 40°С в морозильниках марки NS 400/40 VV фирмы "Фригера" (Frigera, Чехия). Размораживание бактериальных концентратов проводили внесением в стерильное обезжиренное молоко, нагретое до температуры 37-40°С.

При проведении исследований использовали методы математической статистики. Эксперименты проводили в 3-7-кратной повторности.

Глава 3 Экспериментальное изучение технологии получения криозаморожснных бактериальных концентратов с использованием криопротекторов. Изучение морфологических, культуральных и ферментативных свойсгв микроорганизмов до и после замораживания показало, что в процессе криозамораживания без использования криопротекторов наблюдалось статистически достоверное снижение выживаемости клеток в выделение УФ-поглощающих веществ, что говорит о разрушении мембран клеток.

Результаты микроскопии не выявили существенных изменений морфологических свойствах бактерий. Изменения спектра сбраживаемых углеводов после криозамораживания не наблюдалось.

В процессе работы была выявлена зависимость выживаемости от времени культивирования бактерий, что не противоречит данным других исследователей по оценке этого показателя при получении бактериальных концентратов полученных традиционным способом (без криозамораживания) с использованием сублимационной сушки.

Ввиду ограниченности данных по применению криопротекторов в процессе замораживания молочнокислых бактерий и бифидобактерий нами были проведены эксперименты, которые в дальнейшем позволили определить влияние используемых криопротекторов на выживаемость бактерий. Для этого использовали культуру L. acidophilus. Для приготовления защитных сред применяли фосфатный буфер, содержащий 5, 15 и 40% криопротектора. Контрольным являлся образец, в котором в качестве защитной среды был фосфатный буфер без добавления криопротектора. Полученные результаты представлены на рис. 3.

о 5 15 «3

______концентрация криопротектора в защитной среде, %________

t ЕЗполиэтиленгшколь Еле^тин □ сахароза ■ лактоза И глицерин

Рис.3 Влияние различных криопротекторов на выживаемость L. acidophilus

Установлено, что применение глицерина в концентрации 15% позволяет сохранить 72% жизнеспособных клеток. Четко видно снижение выживаемости бактерий при увеличении концентрации глицерина до 40%, что вероятно объясняется токсическим воздействием глицерина на бактериальные клетки.

Следующим этапом работы, было определение эквилибрации т.е. времени взаимодействия проникающего криопротектора, а именно глицерина и полиэтиленгликоля на клетки от момента смешивания биомассы с защитной средой и до замораживания. Для этого готовили защитные среды на основе фосфатного буфера (рН=7,2), содержащие максимально допустимое количество проникающего криопротектора. После смешивания биомассы L. acidophilus с защитными средами через каждые 20 минут проводили отбор проб. Определяли активность клеток, с последующим анализом кривых роста микроорганизмов (рис.4).

Отчетливо прослеживается влияние времени эквилибрации на активность бактериальных клеток до замораживания. С увеличением времени эквилибрации на 20 минут происходит задержка роста бактерий на 2-3 часа, что говорит о подавляющем воздействии глицерина на клетки. Тем не менее, после криозамораживания, было установлено, что в образце, который подвергся криозамораживанию сразу после смешивания биомассы клеток с защитной средой, содержащей глицерин, выживаемость бактерий ниже, чем в образцах замороженных после 20 и 40 минут выдержки. Это объясняется тем, что в течение 10 минут криопротектор, не полностью проникает в клетки и не успевает срабатывать его защитный механизм. В образце, где время эквилибрации составило 60 минут, количество клеток уже до замораживания снижено, что объясняется токсическим воздействием глицерина на бактериальные клетки. Поэтому в дальнейшем при использовании в составе защитной среды глицерина, время эквилибрации составляло 20 минут, а весь

Рис. 4 Влияние времени эквилибрации на выживаемость клеток

Кроме этого в литературе имеются данные, что для стабилизации окислительно-восстановительных процессов в составе защитных сред используются лимоннокислый натрий или аскорбиновая кислота в концентрации 2-6%.

Поэтому были проведены дополнительные исследования, в результате которых в защитную среду планировалось вносить лимоннокислый натрий в концентрации 4%.

Обобщенный анализ полученных данных позволил провести направленную работу по оптимизации технологии криозамораживания с целью повышения выживаемости бактерий.

Для определения оптимальных концентраций криопротекторов в защитной среде, согласно построенному плану эксперимента было проведено криозамораживание бактерий с различными концентрациями криопротекторов.

Математически обработанные результаты исследований влияния концентрации криопротектора в защитной среде представлены в виде мультипликативной поверхности (рис. 5)

На рисунке 5а представлена зависимость выживаемости Str. thermophilus от концентрации криопротекторов в защитной среде.

с)

Рис.5 Влияние концентрации криопротекторов на Str. thermophilus (а), L. acidophilus (б), В. adolescentis(c).

Данную зависимость описывает уравнение:

у1 = 8,9593 + 4,3293*1 + 2,0815х2 - 0,0893х2 - 0,018х,х, - 0,034х22 Коэффициент корреляции, для представленной модели равен 0,9204. Область максимальной выживаемости Sir. thcrmophilus наблюдалась при совместном воздействии глицерина в концентрации от 15 до 25% и сахарозы от 15 до 20%.

На рис. 56 область максимальной выживаемости клеток 89- 93 % четко выражена на поверхности отклика и соответствует выбранным параметрам: концентрация глицерина 20%; концентрация сахарозы 20%, причем прослеживается зависимость выживаемости L. acidophilus от соотношения криопротекторов в защитной среде, которая может быть описана уравнением: у2 = 16,24 + 3,56х, + 2,37х2 - 0,07.x,2 - 0,02х,х2 - 0,04

Коэффициент корреляции, равный 0,9021, указывает на наличие сильной зависимости выживаемости от перечисленных выше показателей.

При рассмотрении зависимости выживаемости В. adolescentis (рис. 5с) отмечено смещение области оптимума. Максимальная выживаемость наблюдалась при концентрации глицерина 15% и концентрации сахарозы 25%.

у3 = 29,9+2,19*! -0,06л:,2 +2,6х, -0,05л:2 -0,01х,х2

Коэффициент корреляции, равен 0,8936.

Таким образом, проведенные исследования позволили установить оптимальные значения концентрации криопротекторов, а также определить их соотношение в защитной среде. Полученные данные подтверждают наше предположение об улучшении криопротекторных свойств защитной среды при комбинировании экзо- и эвдоцеллюлярных криопротекторов.

Для определения влияния основы защитной среды на выживаемость молочнокислых бактерий и бифидобактерий были приготовлены защитные среды, содержащие 20% глицерина, 15% сахарозы, 4% лимоннокислого натрия, в качестве основ защитных сред были апробированы фосфатный буфер, восстановленная сыворотка и MRS-бульон.

Криозамораживанию подвергали культуры L. acidophilus, В. adolescentis, Str. thermophilus.

Как представлено на рис. 6 выживаемость клеток, суспендированных в средах на основе фосфатного буфера, и MRS-бульоне, после замораживания составляла 84-93%.

Наиболее выраженным защитным действием при криоконсервации бифидобактерий обладала среда на основе MRS-бульона. Среда на основе фосфатного буфера также проявляла хорошие протекторные свойства при замораживании.

Результаты проведенных экспериментов подтвердили предположение о положительном влиянии использования среды культивирования в качестве защитной среды в процессе криозамораживания на выживаемость микроорганизмов (L. acidophilus, В. adolescentis, Str. thermophilus), в большей степени эффект сказался на В. adolescentis.

□ В. а(ао1е5сепй5 051г. ГЬегторЫ1и5 121.. эс|с!орЫ1и&

Фосфатный буфер

МЯБ-бульон

Сыворотка

основы защитной среды

на

выживаемость

Рис.6 Влияние микроорганизмов

Для комплексной оценки влияния защитных сред на выживаемость бактерий провели ряд экспериментов с использованием различных концентраций криопротекторов в подобранных ранее основах. В таблице 1 приведен состав защитных сред на основе фосфатного буфера и МЯЗ-бульона. В средах №2,4 и 6 сахароза была замещена лактозой.

Таблица 1

Состав защитных сред

« о ж н 8 _ а л « Э 2 <3 V О. о £ я я г? « я * я я « 5? я" '5 5 £ я .. и >я

л в, О. О в о Я £ — я X я % £ я о. х н

% о а и о я и * ч И | я я Ч

1 Фосфатный буфер 15 20 - - 3 -

2 Фосфатный буфер 20 - 5 20 - 4

3 Фосфатный буфер 25 15 5 - - 4

4 МПЗ-бульон 25 - - 15 3 -

5 М1?Б-бульон 20 20 5 - - . 4

6 МИЕ-бульон 15 - - 20 3 -

Для стабилизации суспензии и лучшего структурирования гранул в среды вносили желатин и пектин. Сразу после криозамораживания упакованные, и маркированные образцы бактериальных концентратов закладывали на хранение. Размораживание бактериальных концентратов проводили внесением в стерильное обезжиренное молоко, нагретое до температуры 37-40°С.

Полученные данные по выживаемости микроорганизмов через 24 часа после криозамораживания и хранения при температуре минус 45°С представлены на рис. 7.

i

У

§

№ защитной среды

□ В. adolescentis □ Str [hemophilus О L. acidophilus

Рис.7 Влияние состава защитных сред на выживаемость

Таким образом, проведенный этап исследований позволил выявить ряд перспективных криопротекторов (глицерин, сахароза, лактоза, желатин, пектин, лимоннокислый натрий), оценить их рациональные сочетания в защитных средах и установить их наиболее приемлемые базовые основы.

Глава 4 Опытная проверка и оценка режимов хранения и использования криозамороженных бактериальных концентратов. Не менее важным условием, влияющим на выживаемость бактерий, является температурный режим хранения. При изучении влияния режимов хранения на выживаемость использовали два температурных режима, которые наиболее оправданны с экономической точки зрения: -25°С и -45°С. Выживаемость бактерий анализировали через сутки после замораживания и после тридцати, девяноста и ста восьмидесяти суток хранения.

В процессе хранение L. acidophilus при температуре минус 25°С выживаемость снижалась в среднем на 7%, такая же тенденция отмечена при хранении Str. thermophilus и В. adolescentis. Температурный режим минус 45°С в меньшей степени оказывал влияние на выживаемость, снижение составило не более 2-3%.

Полученные результаты выживаемости микроорганизмов показали, что лучшая выживаемость 86-93% достигнута в образцах криозамороженных с применением криозащитной среды № 2, для удобства обозначения среде №2 присвоили наименование КС-20.

В целях проверки эффективности использования защитной среды КС-20 были проведены дополнительные исследования влияния криозамораживания на качественные признаки исследуемых микроорганизмов.

Результаты исследования протеолитической активности, активности кислотообразования, освобождения УФ-поглощающих веществ представлены в таблице 2.

Таблица 2

Влияние состава защитной среды КС-20 на сохранность

Тесты Контроль Вид исследуемых микроорганизмов

Ь. ас1(1орЫ1и5 В. асЫезсепЙБ Бй. ЛегторИПиз

Выживаемость, % 100 92,45±3,3 85,87±3,3 90,07±2,7

Освобождение УФ-поглощающих веществ* - 0,016±0,00 2 0,014±0,004 0,017±0,002

Протеолитическая активность, % от контроля 100 97,4±1,3 92,3 ±2,4 95,8±2,1

Активность кислотообразования, % от контроля 100 92,8±2,7 89,4±3,2 90,3±3,1

Примечания: * - прирост поглощения при 260нм в единицах экстинкции;

Вопрос влияния состава защитных сред на выживаемость и сохранность свойств бактерий тесно связан с поиском защитных веществ или криопротекторов. Результаты показали, что из выбранных веществ, обладающих криопротекторными свойствами, наиболее эффективным оказалось использование глицерина. При мгновенном замораживании клеток максимальную (78-92%) выживаемость обеспечивало добавление в защитную среды 20% глицерина. Меньшая (48-70%) выживаемость при данном режиме наблюдалась при использовании 15%-ного глицерина. При замораживании клеток в растворе 10- и 15%-ной лактозы и сахарозы сохранность клеток снижалась до 39-44%.

Выживаемость молочнокислых бактерий может в значительной степени определяться скоростью отогрева. К факторам, повреждающим клетки в ходе отогрева можно отнести процессы вне- и внутриклеточной рекристаллизации.

Использование предложенного нами метода быстрого отогрева замороженных культур в молоке, подогретом до температуры 37-40°С, не выявило статистически достоверных отклонений в выживаемости и функциональной активности исследуемых бактерий. Очевидно, что при быстром отогреве кристаллы льда не успевают достичь значительных размеров, что снижает вероятность повреждения клеток.

Для того чтобы иметь достаточно полное представление об эффективности применяемых защитных сред, необходимо комплексное изучение морфофункциональных свойств бактерий после замораживания и хранения при различных условиях.

Согласно литературных данных выживаемость молочнокислых бактерий не претерпевает существенных изменений при их замораживании в среде жидкого азота. В нашей работе также было показано, что выживаемость бактерий, определяемая импедансным методом по количеству жизнеспособных

клеток, с использованием предложенных защитных сред, снижалась не более чем на 14-20% в процессе замораживания и последующего хранения, что обеспечивает сохранение производственно-ценных свойств культур.

На основании полученных результатов при сравнении с контрольными образцами установлено, что после криозамораживания с применением разработанной защитной среды КС-20 происходит возрастание освобождения УФ-поглощающих веществ, что говорит о незначительных повреждениях мембран клеток. Ввиду того, что существенных изменений протеолитической активности и активности кислотообразования исследуемых микроорганизмов не обнаружено, можно рекомендовать данную среду для производства бактериальных концентратов.

Бактериальные концентраты, полученные с использованием предложенной защитной среды КС-20 соответствовали требованиям соответствующей нормирующей документации. Характеристика бактериальных концентратов представлена в таблице 3.

Таблица 3

Характеристика бактериальных концентратов_

Показатели Полученные Нормируемые по ФЗ-88

Внешний вид, консистенция Гранулы В виде таблеток, гранул или порошкообразной массы

Цвет Молочно-кремовый с коричневым оттенком Молочно-кремовый с коричневым оттенком

Растворимость, сек 55±2 Не более 60

Количество молочнокислых бактерий, КОЕ/см3 2,5-Ю10 Не менее Ю10

Бифидобактерии, КОЕ/см3 1,1-10ш Не менее Ю10

Содержание дрожжей и плесневых грибов, КОЕ/см3 Не обнаружены Не более 5,0

БГКП в 1,0 г Не обнаружены Не допускаются

S. aureus в 1,0 г Не обнаружены Не допускаются

Патогенные микроорганизмы, в т.ч. сальмонеллы, в 10,0 г Не обнаружены Не допускаются

Ми кроскопический препарат Для бактериальных концентратов содержащих: - бифидобактерии - палочки мелкие зернистые прямые или изогнутые, иногда с утолщением; допускаются цепочки из двух-трех палочек. - термофильные молочнокислые палочки- крупные и средней длины, одиночные и в коротких цепочках. - термофильные молочнокислые стрептококки -диплококки, цепочки.

Полученные замороженные бактериальные концентраты были апробированы в производственных условиях ОАО "Кировский молочный комбинат" и ОАО «Кезский сырзавод».

Для производства кисломолочного продукта «Ацидофилин» замороженный бактериальный концентрат, без предварительной подготовки вносили в пастеризованную и охлажденную до температуры заквашивания 37°С нормализованную смесь в количестве 5%. Время сквашивания составило 5 часов до образования сгустка кислотностью 75-80°Т.

Физико-химические, микробиологические, органолептические и реологические показатели свежевыработанных образцов «Ацидофилина», полученного в условиях промышленного производства представлены в таблице 4.

Таблица 4

Физико-химические и микробиологические показатели кисломолочного

продукта «Ацидофилин», полученного в условиях промышленного

производства

Наименование показателя Продолжительность хранения

фон 5 сутки

Физико-химические показатели:

Массовая доля жира, % 3,2+0,10 3,2±0,1

Массовая доля белка, % 2,8±0,02 2,8+0,02

Массовая доля СОМО,% 7,8±0,02 7,8+0,02

Кислотность, °Т 75±2,00 105+3,00

Микробиологические:

Количество молочнокислых микроорганизмов, КОЕ/см3 4,54-10® 3,76-107

Бактерии группы кишечных палочек, в 0,1 см3 Отсут. Отсут.

Патогенные микроорганизмы, в том числе сальмонеллы, в 25 см3 Отсут. Отсут.

Коагулазо-положительные S.aureus, в 1,0 см3 Отсут. Отсут.

Дрожжи и плесени, КОЕ/см3 Отсут. Отсут.

Бактерии L. Monocytogenes Отсут. Отсут.

Данные экспериментов показывают, что использование предложенной защитной среды КС-20, при производстве бактериальных концентратов приводит к повышению количества микробных клеток в криозамороженных концентратах в среднем на 18-22%, сохранность клеток составляет 87-94%.

Исходя из этого, проведен расчет стоимости замороженного бактериального концентрата на 1 тонну готового продукта (в ценах 20 Юг). Проведено сравнение с импортными аналогами, результаты представлены в таблице 5.

Таблица 5

Сравнение замороженных бактериальных концентратов

Показатель Полученные бактериальные концентраты Импортные бактериальные концентраты

Количество молочнокислых микроорганизмов, КОЕ/г Ю10 10"

Расход замороженного бактериального концентрата на 1т сквашиваемого молока, кг 0,16 0,035

Стоимость замороженного бактериального концентрата на 1 т сквашиваемого молока, руб 250 330

Биобезопасность страны депонированы ли штаммы в госколлекциях России + -

зависимость пищевых производств страны от импорта - высокая

Полученные результаты были использованы при разработке принципиальной схемы участка по криозамораживанию и гранулированию (рис.8) и при создании технической документации (ТУ, ТИ).

Рис.8 Принципиальная схема участка по криозамораживанию, гранулированию и сушке.

1 -устройство для хранения жидкого азота, 2 - криостат, 3 - стенд для гранулирования и криозамораживания, 4 - асептическая емкость, 5 -сублимационная сушилка, 6 - перистальтический насос, 7 - стенд для стерилизации защитных сред, 8 - контейнер.

ВЫВОДЫ

1. На основе систематизации видов криопротекторов экспериментально обоснована значимость использования для криозамораживания молочнокислых бактерий и бифидобактерий таких веществ, как: глицерин, лактоза, сахароза, лимоннокислый натрий, желатин, пектин; Установлено их влияние на выживаемость молочнокислых и бифидобактерий и экспериментально определена их рациональная концентрация в составе защитной среды. Наибольшая выживаемость бактерий после замораживания/оттаивания достигалась при содержании в защитной среде глицерина 15%, сахарозы 40%, лактозы 40%;

2. Разработана методика определения количества молочнокислых бактерий и динамики их роста на основе импедансного метода. Данная методика апробирована в условиях промышленной лаборатории;

3. Разработан метод криозамораживания и подана заявка на изобретение на получение патента «Метод замораживания молочнокислых бактерий».

4. Определен состав криопротекторных сред для молочнокислых и бифидобактерий обеспечивающий их выживаемость после замораживания/оттаивания на уровне 87-94%. По результатам проведенных исследований рекомендована защитная среда КС-20, приготовленная на основе фосфатного буфера с добавлением 20% глицерина, 20% лактозы, 4% лимоннокислого натрия и 5% желатина;

5. Доказана незначительность изменения морфологических, культуральных и биохимических свойств исследуемых бактерий при осуществлении криозамораживания/хранения молочнокислых и бифидобактерий;

6. Установлено что, при хранении бактериального концентрата, изготовленного с применением рекомендованной защитной среды КС-20 в течении 6 месяцев при температуре не выше минус 40°С не отмечается существенных изменений морфологических и биохимических свойств, выживаемость бактерий снижается на 2-3%;

7. На участке научно-исследовательских и экспериментальных работ ГНУ ВНИМИ выработаны опытные партии замороженного бактериального концентрата и изучены его физико-химические, микробиологические свойства в процессе хранения. Проведены опытные выработки готового продукта из полученных бактериальных концентратов, о чем имеются соответствующие акты.

По материалам диссертации опубликованы следующие работы:

1. Кузьмина О.М. Использование метода измерения электрического сопротивления (импеданса) для определения общего количества микроорганизмов / О.М. Кузьмина, Д.В.Харитонов // Молочна промисловость. -Киев 2007. - №9. - с.40-41

2. Кузьмина О.М. Влияние содержания лактозы на развитие молочнокислых микроорганизмов / О.М. Кузьмина, Д.В.Харитонов// Материалы конференции молодых ученых и аспирантов в рамках ФНЦТП 2002-2006гг. «Современные пищевые технологии» Кемерово 2006. - с.38-41.

3. Кузьмина О.М. Изучение влияния антиоксидантных и пребиотических добавок на интенсивность роста мезофильных и термофильных стрептококков / О.М. Кузьмина, Д.В.Харитонов// Материалы конференции молодых ученых и аспирантов в рамках ФНЦТП 2002-2006гг. «Современные пищевые технологии» Кемерово 2006. - с.43-45.

4. Kuzmina О.М. Oligosaccharides of chitosan in yoghurt technology: today and tomorrow / L.R. Alieva, E.A. Perlik, S.S. Aliev, O.M. Kuzmina// Theses of proceedings of the 27 IDF World Dairy Congress. Shanghai, China 2007. - p.57.

5. Kuzmina O.M. Study of lactulose ciyoprotective propertiets / O.M. Kuzmina, Dr. D.V. Kharitonov // Theses of IDF symposium «Lactose and its Derivatives» Moscow 2007.-p.l 17.

6. Кузьмина O.M. Определение активности заквасок и бактериальных концентратов импедансным методом / О.М. Кузьмина, A.B. Леонов // Молочная промышленность. - 2007. - №5. - с. 94-95.

7. Кузьмина О.М. Сравнение методов определения общей бактериальной обсемененности молока / О.М.Кузьмина, Е.А. Юрова // Материалы Международной научно-практической конференции «Современный взгляд на производство творога и сыров:расширение ассортимента, совершенствование технологии и оборудования» Ставрополь 2008. -с.198-201.

8. Кузьмина О.М. Исследование спектральных характеристик молочнокислых микроорганизмов и некоторых составляющих молока / О.М.Кузьмина, В.Ф.Гвоздь // Материалы Международной научно-практической конференции «Совершенствование технологий производства продуктов питания в свете государственной программы развития с-х на 2008-2012 гг." Волгоград, часть 2 - Переработка с-х сырья и пищевая технология. - М.: Из-во Вестник РАСХН. ,2008г.-с.135-138.

9. Кузьмина О.М. Изучение факторов, влияющих на жизнеспособность лактобактерий после криозамораживания./ О.М. Кузьмина // Материалы конференции молодых ученых и специалистов институтов Отделения «Хранения и переработки сельскохозяйственной продукции» Россельхозакадемии Москва 2008. - с.68-70.

10. Кузьмина О.М. Новые методы микробиологического контроля / О.М. Кузьмина // Молочная промышленность. - 2009. - №1. - с. 105.

11. Кузьмина О.М. Оперативные методы контроля качества молока / О.М. Кузьмина // Сборник материалов международной научно-практической конференции «Передовые технологии и оборудование в производстве молока» Брест 2009. - с.45-46.

12. Кузьмина О.М. Актуальное решение в области микробиологического контроля / О.М. Кузьмина // Переработка молока. - 2009. - №8. - с. 17.

13. Кузьмина О.М. Конструирование защитных сред для криозамораживания молочнокислых бактерий / О.М. Кузьмина // Научное обеспечение молочной промышленности (ВНИМИ - 80 лет): Сб. науч. трудов. М.: ГНУ ВНИМИ, 2009. - с.228-232.

14. Кузьмина О.М. Применение импедансного метода для определения качества молока / О.М. Кузьмина // Материалы 3-й Конференции молодых ученых и специалистов институтов Отделения "Хранения и переработки

сельскохозяйственной продукции" Россельхозакадемии. ВНИИМП им В.М. Горбатова. 2009 - с.144-145.

15. Кузьмина О.М. Новый метод определения количества молочнокислых микроорганизмов / О.М. Кузьмина, В.Д. Харитонов // Сборник трудов молодых ученых и специалистов к 80-летию ВНИМИ «Эстафета поколений» с. 9-11.

16. Кузьмина О.М. Научно-инновационный подход при моделировании технологического процесса производства заквасок прямого внесения / В.Д. Харитонов, В.Ф. Семенихина, В.Г. Будрик, И.В. Рожкова, Д.В. Харитонов, П.Н. Сперанский, О.М. Кузьмина // Сборник материалов всероссийской научно-практической конференции «Принципы пищевой комбинаторики - основа моделирования поликомпонентных пищевых продуктов» Углич 2010. - с.284.

Подписано в печать 14.10.2010 г. Заказ № 4994 Тираж: 100 экз.

Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ni

Введение.

Глава 1. Анализ особенностей технологии криозамороженных бактериальных концентратов.

1.1 Роль функциональных продуктов в питании человека.

1.2 Основные направления производства бактериальных концентратов прямого внесения.

1.3 Факторы, влияющие на выживаемость замороженных микроорганизмов.

1.4 Виды защитных сред и криопротекторов.

1.5 Методы оценки выживаемости микроорганизмов.

1.5.1 Применение импедансного метода для определения выживаемости бактерий.

1.6 Цель и задачи исследований.

Глава 2. Объекты и методы исследований.

2.1 Объекты исследований.

2.2 Общепринятые и стандартные методы исследований.

2.3 Оригинальные и модифицированные методики.

2.3.1 Приготовление защитных сред.

2.3.2 Получение бактериальной массы для криозамораживания.

2.3.3 Оценка выживаемости микроорганизмов импедансным методом.

2.3.4 Методика криозамораживания.

2.4 Методы математической обработки экспериментальных данных.

Глава 3. Экспериментальное изучение технологии получения криозамороженных бактериальных концентратов с использованием криопротекторов.

3.1 Изучение влияния концентраций криопротекторов в защитной среде на выживаемость микроорганизмов.

3.2. Экспериментальное обоснование выбора криопротекторов.

3.3 Влияние криозамораживания на морфофункциональные и биохимические свойства исследуемых микроорганизмов.

3.4 Влияние основы защитной среды на выживаемость микроорганизмов.

3.5 Исследование реологических характеристик биомассы при смешивании ее с защитными средами.

Глава 4. Опытная проверка режимов хранения и использования криозамороженных бактериальных концентратов.

4.1 Изучение влияния режимов и сроков хранения на выживаемость.

4.2 Экспериментальная технология использования защитных сред в процессе криозамораживания.

4.3 Апробация замороженных бактериальных концентратов в промышленных условиях.

4.4 Экономическая и социальная значимость.

Выводы.

Обеспечение здоровья населения является одним из важнейших приоритетов в России. На федеральном и региональных уровнях поставлены задачи, связанные с продовольственной безопасностью страны. /14,23,35,39, 59,82,85,98,114,129,137/

Концепция оздоровления человека и предупреждения старения организма путем включения в рацион кисломолочных продуктов была впервые выдвинута И.И. Мечниковым, который исследовал свойства молока, ферментированного закваской содержащей штаммы L.bulgaricum.

Впервые в России С.А. Королевым были применены закваски, т.е. чистые культуры молочнокислых бактерий, а также были проведены исследования микробиологических процессов по основным отраслям молочного производства. Под его руководством была основана первая школа отечественных микробиологов молочной промышленности. Его учениками, последователями и рядом других исследователей Королевой Н.С., Банниковой JI.A., Богдановым В.М., Гудковым A.B., Лагодой И.В., Гуськовой Л.Д., Семенихиной В.Ф., Рожковой И.В., Ганиной В.И., Тихомировой H.A., Шевелевой С.А., Шендеровым Б.А. заложены основы производства заквасок и бактериальных концентратов на основе таких культур как лактобактерии (L.acidophilus, L.bulgaricus, L.casei, L.rhamnosus), бифидобактерии (B.bifidum, B.infantis, В.breve, B.adolescentis, B.longum, B.animals), грамположительные кокки (Str.salivarius, Str.thermophilus, Str. diacetylactis, Lac.lactis sp.cremoris), дрожжи(8.Ьои1а^Н, S.cerevisiae) обладающих пробиотическими свойствами. /10,15,21,24,26,41,44,45,63,72,78, 88,96,101,104,109,130,136,137,141,161/

Кисломолочные продукты, изготовленные с применением специально подобранных и выделенных в результате селекции культур, являются эффективным средством для лечения и профилактики многих патологических состояний, что подтверждено многочисленными исследованиями/13,24,26,34,40,63,71,72,78,96,99,101,110,124,136,149,152,161/

Опыт отечественной и зарубежной молочной промышленности и анализ научных публикаций /40,47,85,100,110,121,178,179,182,187/ показывает, что производство кисломолочных продуктов прогрессирует, увеличивается спрос на бактериальные концентраты, и как следствие повышаются требования к заквасочным культурам, а именно они должны обеспечивать безопасность и качество, вырабатываемой продукции, обеспечивать необходимый баланс штаммов, обуславливать удобство внесения. Этим требованиям в большей степени соответствуют бактериальные концентраты прямого внесения (БУБ), так как их использование исключает процедуру восстановления культур, перед сквашиванием; стадию перевивки в процессе хранения, что обеспечивает устойчивость в соотношении видов и штаммов микроорганизмов; более эффективно в борьбе с бактериофагами.

На сегодняшний день, при производстве бактериальных концентратов применяются два способа их консервирования: лиофилизация и замораживание при сверхнизких температурах (-196°С). И если первый способ достаточно изучен и широко применяется в производстве, то сведения об использовании второго — носят ограниченный характер, он до сих пор не нашел промышленного применения в нашей стране. Несмотря на значительное количество исследований посвященных вопросам выживаемости микроорганизмов в процессе криоконсервирования, не имеется четких представлений о совокупности и взаимосвязях процессов, позволяющих применить технологию для промышленного производства бактериальных концентратов. Следовательно, разработка технологии получения и способа применения криопротекторных сред, для получения бактериального препарата прямого внесения, методом замораживания при сверхнизких температурах является актуальным вопросом, требующим систематического изучения.

Работа выполнена в рамках темы РАСХН «Разработать комплекс экологически чистых энергосберегающих технологий для переработки молока на базе низких температур», а также Федеральной целевой программы "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники" на 2007-2012 годы по теме «Разработка технологий универсального быстропереориентируемого производства заквасок прямого внесения для биотехнологической промышленности».

В результате проведенных исследований получены научно-обоснованные данные о влиянии состава защитной среды на эффективность процесса криозамораживания молочнокислых микроорганизмов и бифидобактерий.

Разработан метод оценки выживаемости бактерий после замораживания, основанный на использовании импедансного метода.

Установлены зависимости, отражающие влияние параметров низкотемпературного замораживания и температуры хранения на выживаемость бактерий и их физиологическую активность.

Разработана «Лабораторная методика подготовки и использования защитных сред для криоконсервирования микроорганизмов».

Разработана методика определения количества молочнокислых микроорганизмов на основе импедансной технологии и внесена в ГОСТ.

Экспериментальная часть работы выполнена в Центральной лаборатории микробиологии и на участке научно-исследовательских и экспериментальных работ ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института молочной промышленности Россельхозакадемии.

выводы

1. На основе систематизации видов криопротекторов экспериментально обоснована значимость использования в их качестве таких веществ, как: глицерин, лактоза, сахароза, лимоннокислый натрий, желатин, пектин; Установлено их влияние на выживаемость молочнокислых и бифидобактерий и экспериментально определена их рациональная концентрация в составе защитной среды. Наибольшая выживаемость бактерий после замораживания/оттаивания достигалась при содержании в защитной среде глицерина 15%, сахарозы 40%, лактозы 40%;

2. Разработан состав криопротекторных сред для молочнокислых и бифидобактерий обеспечивающий их выживаемость после замораживания/оттаивания на уровне 87-94%. По результатам проведенных исследований рекомендована защитная среда КС-20, приготовленная на основе фосфатного буфера с добавлением 20% глицерина, 20% лактозы, 4% лимоннокислого натрия и 5% желатина;

3. Разработана методика определения количества молочнокислых бактерий и динамики их роста на основе импедансного метода;

4. Изучено влияние криозамораживания на морфологические, культуральные и биохимические свойства исследуемых бактерий. Доказана незначительность изменения этих свойств при осуществлении криозамораживания молочнокислых и бифидобактерий;

5. Установлено что, при хранении бактериального концентрата, изготовленного с применением рекомендованной защитной среды КС-20 в течении 6 месяцев при температуре не выше минус 40°С не отмечается существенных изменений морфологических и биохимических свойств, выживаемость снижается на 2-3%;

6. На участке научно-исследовательских и экспериментальных работ ГНУ ВНИМИ выработаны опытные партии замороженного бактериального концентрата и изучены его физико-химические, микробиологические свойства в процессе хранения. Проведены опытные выработки готового продукта из полученных бактериальных концентратов.

1. Адлер Ю.П., Маркова Е.В., Грановский Ю.В. Планирование эксперимента при поиске оптимальных условий// М.:«Наука» 1976. — 279с.

2. Актуальные проблемы криобиологии / Под общ. ред. Н.С.Пушкаря,

3. A.М.Белоуса. К.: Наук, думка, 1981. - 608с.

4. Алибаев P.M. «Астролин»-против диабета.// Парафармацевтика, 2002, №8-с.45

5. Антибиотические вещества ацидофильных бактерий/ Полонская С.М.// Микробиология 1952. - t.XXI, вып.ХХИ. - с.303-310

6. Аркадьев З.А. Факторы, влияющие на жизнеспособность и свойства микроорганизмов при различных методах хранения. Научн. докл. высш. школы. Сер. биол. науки М.: 1983, №4

7. Базовые методы работы с эукариотическими клетками.// Смирнова О.// http://molbiol.edu.ru/protocol/a3

8. Бактериальные препараты и закваски: Методическое пособие. Углич: изд-во ВНИИМС, 1998 - 20с.

9. Бактериоциногенные высокоантагонистические штаммы лактобацилл / Ю.

10. B. Червинец, В. М. Бондаренко, Н. А. Шабанова и др.; Медицинская академия и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии : двухмесячный научно-практический журнал. 2006. - N 7 . - С. 78-82.

11. Банникова JI.A., Селекция молочнокислых бактерий и их применение в молочной промышленности.- М.: Пищевая промышленность, 1975.-255с.

12. Белоус A.M., Гордиенко Е.А., Розанов Л.Ф. Замораживание и криопротекция// М.: «Высшая школа» 1987. 80с.

13. Биопродукты продукты будущего / Стенфельдт Э., Шаманова Г. // Мол. пром-сть. - 2000. -№11.- С.20-21.

14. Богданов В.М., Микробиология молока и молочных продуктов. М. «Пищевая промышленность»-1969. 367с.

15. Боровиков В.П. Программа STATISTICA для студентов и инженеров 2-е изд. -М.: КомпьютерПресс, 2001 - 301с.

16. Вирник А.Д., Хомяков К.П., Скокова И.Ф., Декстран и его производные Успехи химии, 44, 1280 (1975).

17. Влияние различных методов сушки и хранения культур на свойства молочнокислых стрептококков/ Гибшман М., Банникова JL, Дерябина Е.// Мол. Пром-ть. 1940. —№8. -с.5-9

18. Вольф Дж. и Брайант Г. Криобиология и биология обезвоживания клеток.2004. Университет Нью-Саус-Уэлса, Сидней, Австралия, на англ.яз. / J.Wolfw and G.Bryant. Cryobiology and anhydrobiology of cells. 2004.

19. Гайсенюк JI.A. Изучение полиэтиленоксида-400 при низкотемпературном консервировании и трансплантации костного мозга в онкологичесокй клинике. Канд. диссер. Харьков. 1972. 217с.

20. Ганина В.И. Пробиотики. Назначение, свойства и основы биотехнологии — Монография. М.:МГУПБ, 2001.- 169с.

21. Ганина В.И., Сониева М.М. Влияние различных криопротекторов на выживаемость пробиотических культур.// Кафедре технологии молока и молочных продуктов МГУПБ 60 лет: Научное издание. — М.:МГУПБ,2005. 187 с.

22. Гаппаров М.М.Г., Войткевич Н.Д. Функциональные пищевые продукты: теория и практика, http://www.medinform.su/healthyfeed/s006/

23. Григоров Ю.Г., Козловская С.Г. Питание и феномен долголетия — М.: Наука, 1988

24. Додж М., Кината К., Стинсон К. Эффективная работа с Microsoft Exel 97 -СПб: Питер, 1998 1072с.

25. Доронин А.Ф., Шендеров Б.А. Функциональное питание М.:Грантъ, 2002.-296с.

26. Дузу П./ Криобиохимия// Москва 1980, с. 127

27. Инихов Г.С„ Брио Н.П. Методы анализа молока и молочных продуктов.-М.: Пищ.пр-ть, 1971.-432с.

28. Инновационные решения в области микробиологического контроля на предприятиях молочной промышленности/ Степаненко И.// Переработка молока. 2007. - №3. - с. 14

29. Каширская Н.Ю. Значение пробиотиков и пребиотиков в регуляции кишечной микрофлоры// Рус.мед.журнал-2000.-№13-14.-с.22-29.

30. Кисломолочные напитки// Пер. Бережной A.B. М.: Молочная промышленность, № 6. 2004 с.46-47

31. Кисломолочные продукты нового поколения / Семенихина В.Ф., Рожкова И.В., Сундукова М.Б. / Мол. пром-сть. 1999. - №7. С.29-30.

32. Кочеткова A.A. Функциональные продукты в концепции здорового питания// Пищевая промышленность.- 1999.- №3. с.4-5.

33. Княжев В.А., Суханов В.П., Тутельян В.А., Правильное питание. Биодобавки, которые вам необходимы. -М.:1998. 208с.

34. Коваленко Н.К. Кисломолочные продукты, их качество и влияние наздоровье человека// http://www.uaua.info/content/articles/1030.html

35. Козлова Ю.И., Уринюк В.М., Баранова И.П., Сухорева H.H., Егоров Н.С./ Состав липидной фракции Streptococcus lactis штамм МГУ// Антибиотики, 1979, 24, №10 с.733-736

36. Концепция государственной политики в области здорового питания населения России

37. Концепция сбалансированного питания и ее значение в изучении механизмов лечебного действия пищи / Самсонов М.А. // Вопр. пит. -2001. Т.70, №5. - С.3-9.

38. Королева Н.С., Техническая микробиология кисломолочных продуктов. М. «Пищевая промышленность»-1966.248с.

39. Кочеткова A.A., Колесное А.Ю. Научно-техническое сотрудничество в области производства и использования пектина //Пищевая промышленность, №6,1992.

40. Красильников H.A., Определитель бактерий и актиномицетов. M.-JL, Изд-во АН СССР, 1949. 830с.

41. Красникова JI.B., Салахова И.В., Шаробайко В.И., Эрвольдер Т.М. Бифидобактерии и использование их в молочной промышленности: Обзорная информация. М.: АгроНИИТЭИММП, 1991,32с.

42. Крашенин П.Ф., Гаврилова Н.Б., Скрипникова JI.B. Ассоциации молочнокислых культур и бифидобактерий в кисломолочных продуктах.// Молоч. пром-ть, 1995 №7, с.25

43. Кретинин В.К. Микробиология молока и молочных продуктов. Орел: Изд-во ОрелГАУ, 2003.- 249с.

44. Криоконсервация пробиотических микроорганизмов: научные основы практического использования// Рахуба Д.В., Новик Г.И.// Сборник трудов «Микробные биотехнологии: фундаментальные и прикладные аспекты» Минск 2007 T.lc.268-275

45. Криосохранение крупных биологических объектов // Артюхов И.В.,А.В. Карнаухов// http://bio. lseptember.ru/articlef.php?ID=200304301

46. Крючкова B.B. Автореф. дисс. на соиск. уч. ст. ктн. «Разработка технологии функциональных кисломолочных напитков с применением комплексного пребиотика» Ставрополь 2004

47. Кукушкин В.Ю., Кукушкин Ю.Н. Теория и практика синтеза координационных соединений. JL: Наука, 1990.

48. Кузнецова Г.А. Создание нового бактериального препарата и его использование для интенсификации технологии сырокопченых колбас. Автореф. на соис. уч. степ, к.т.н. М.:ВНИИМП, 2000-23с.

49. Кутузов Р. Бактерии, приносящие миллиард// «Ведомости» №50(613). — 2000.

50. Лиофилизация молочнокислых бактерий // Шершнева В.И., Лагода И.В.// «Труды ВНИМИ», 1970. вып.27, с.58-63

51. Липатов H.H., Сажинов Г.Ю., Башкиров О.И. Функциональные кисломолочные продукты для грудных детей// Пищ. пром-ть, 2001,№8, сЗО-ЗЗ.

52. Львовский E.H. Статистические методы построения эмпирических формул. — М.: Высшая школа, 1998. 239с.

53. Малдрю Кен . Краткий курс криобиологии. 1999. Университет Калгари. Канада, на англ.яз. / Ken Muldrew. Cryobiology A Short Course. 1999

54. Матвеев B.E. Основы асептики в технологии чистых микробиологических препаратов. -М.: Легкая и пищевая промышленность, 1981, -311с.

55. Машенцева Н.Г., Хорольский В.В. Функциональные стартовые культуры в мясной промышленности. — М.:ДеЛи принт, 2008. — 336с.

56. Методика прогноза стойкости сухой закваски / Лагода И.//Мол. Пром-ть. -1969.-№6.-с. 16-1861 .Методические указания МУК 4.2.590-96 «Бактериологические исследования с использованием микробиологического экспресс

57. Микробиологические основы производства: Справочник/ Л.А. Банникова, Н.С. Королева, В.Ф. Семенихина; под ред. Канд.техн. наукЯ.И. Костина — М.: Агропромиздат. 1987. 400 с.

58. Молочные продукты для профилактики остеопороза / Донская Г.А., Скобелева Н.В., Королев A.A. /Мол. пром-сть. 2000. - №9. - С. 10-11.

59. Неберт A.B. Научное обоснование обратимого консервирования молочнокислых бактерий при производстве бактериальных концентратов для сыра. Дисс.канд.техн.наук, Углич, 1994.

60. Неводные растворители / Под ред. Т. Ваддингтона. М.: Химия, 1971.6 6. Некоторые факторы, влияющие на качество и стойкость сухих заквасок/Лагода И., Банникова Л.//Мол. Пром-ть. — 1970. -№2. -с. 11-15

61. Никитин Е.Е. Звягин И.В., Замораживание и высушивание биологических препаратов.- «Колос» Москва -1971.-342с.

62. Низкотемпературная кристаллизация в биологических системах/ Н.С. Пушкарь, A.M. Белоус, В.И. Вишневский, Ю.А. Иткин, Л.Ф. Розанов// Киев-1977, с. 56

63. Новик Г.И., Астапович Н.И., Кадникова Н.Г., Рябая Н.Е., Сохранение жизнеспособности и физиологических свойств бифидобактерий при криоконсервации и лиофилизации. Микробиология, 1998, №5.

64. Новое в организации производственно-микробиологического контроля/ Свириденко Г.М.// Переработка молока. 2008. - №5. - с.42

65. Новое в производстве сухих бакконцентратов и биологически активных добавок / Шабетник Г.Д., Кузьмин В.М. // Мол. пром-сть. 1999. - №8. -С.27-29.

66. Новое поколение стартерных культур для молочных продуктов / Приданникова И.А. // Мол. пром-сть. 2001. - №10. - С.35.

67. Новые продукты (разработки ВНИМИ в 2000.2001 гг., рекомендуемые к освоению на предприятиях России и других стран — членов СНГ) // Мол.пром-сть. 2001. - №7. - С.35-36.

68. Новые тенденции в области техники и технологий/ Рожкова Т.В., Гиринович O.A.// Мол. Пром-ть. 2006. -№8. -с.72

69. Определение активности заквасок и бактериальных концентратов импедансным методом/ Кузьмина О.М., Леонов А.В// Мол. Пром-ть. — 2007. —№5. -с.94

70. Оценка безопасности и функциональной эффективности пробиотических продуктов и биологически активных добавок / С. А. Шевелева // Новые лекарственные препараты : экспресс-информация. 2004. - N 3 . - С. 26-38.

71. Пектины универсальная добавка к молочным продуктам / Соснина H.A. // Мол. пром-сть. - 1999. - №9. - С.33-35.

72. Петухов В.М. Опыт применения глицерина при глаукоме. — Тр.Куйбышев.мед.ин-та, 1969, с.127.

73. Повышение эффективности терапевтического действия пробиотиков / Т. И. Карпунина, Э. С. Горовиц, А. Н. Чиненкова, А. Я. Перевалов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1998. - N 2 . - С. 104-107.

74. Потиевский Э.Г., Садыкова А.Н., Мухитдинов И.М. Опыт экспериментального и клинического исследования пектина. Науч.-практ.конф. Актуальные вопросы кишечных инфекций: Тез. докл. Ташкент 1990; 119-120.

75. Предпосылки и факторы формирования региональной политики в области здорового питания в России/ Тутельян В.А., Суханов Б.П., Керимова М.Г.//Вопросы питания. 2007. - №6.

76. Пробиотические и кисломолочные продукты в питании детей раннего возраста / И. Я. Конь // Лечащий врач : медицинский научно-практический журнал. —2007.—N 1 . — С. 8-12.

77. Пробиотические продукты в комплексной терапии детей с хронической неинфекционной патологией / Чередеев А.Н., Семенихина В.Ф., Рожкова И.В., Харитонов В.Д. // Мол. пром-сть. 2001. - №3. - С.52-54.

78. Пробиотический кисломолочный продукт для школьников / Эрвольдер Н.Ю. // Мол. пром-сть. 1999. - №11. - С. 17 - 19.

79. Применение замораживания-высушивания в биологии./ под ред. Р.Харриса.- М.: Иностр. лит., 1956.-534с.

80. Пушкарь Н.С., Шраго М.И., Белоус A.M., Калугин Ю.В. Криопротекторы. Киев: Наук, думка, 1978. - 204.

81. Пушкарь Н.С., Шраго М.И., Калугин Ю.В. О путях создания новых криопротекторов. Пробл. Гематологии и переливания крови, 1977. —№ 2,с.18-19.

82. Пушкарь Н.С., Шраго М.И., Черепнев A.C. и др. Устройство для определения реологических свойств биологических жидкостей. A.c. 667865 СССР, МКИ 01 N 11/08. Опубл. 30.05.79, Бюл. №22.

83. Работнова И.Л. Общая микробиология. -М.: Высшая школа, 1966.-270с.

84. Различные условия сохранения молочнокислых бактерий/ Банникова Л.А.// «Труды ВНИМИ», 1953. вып. 15, с.57-61

85. Разработка научных подходов создания пробиотических продуктов на основе молочнокислых бактерий / Коваленко Н.К. // Пром. теплотехника. 2002. - Т.24, прил. к №4. - С.24-26.

86. Ревко В.А. К вопросу о консервировании костного мозга. — Пробл. Гематологии и переливания крови,, 1961, №9, с.35-40.

87. Рогов И.А., Титов Е.И., Ганина В.И., Нефедова Н.В., Семенов F.B., Роговi

88. С.И. Синбиотики в технологии продуктов питания: Монография. -М.: МГУПБ, 2006. 218с.: ил.

89. Роль молочных продуктов в питании пожилых людей / Радаева H.A., Петров А.Н., Галстян А.Г. // Мол. пром-сть. 2001. - №5. - С.34-36.

90. Роль пребиотиков и пробиотиков в функциональном питании детей/ Коровина Н. А., Захарова И. Н., Малова Н. Е., Скуинь Н. А.//Ж «Лечащий врач» 2005. -№2. -с.3-7

91. Роль пробиотических продуктов в питании / С. А. Шевелева // Качество жизни. Медицина. 2004. - N 2 . - С. 79-80.

92. Рэ Л., Смит О., Консервация жизни холодом, пер. с франц., М., 1962;

93. Сарафанова Л.А. Пищевые добавки: энциклопедия// СПб: ГИОРД, 2003.-688с.

94. Семенихина В.Ф. Развитие микробиологии кисломолочных напитков//Мол. Пром-ть. 1994. -№1. -с.9-11

95. Серов A.B. Химия и физика лактозы и ее производных. Монография С 32 Ставрополь: СевКавГТУ, 2003.-116с.

96. Сидоренко А.В., Новик Г.И. Влияние сверхбыстрого охлаждения на жизнеспособность бактерий рода Bifidobacterium/ Сборник тезисов международной научной конференции «Микроорганизмы и биосера» Москва 2007- 108с.

97. Сизенко Е.И. Некоторые вопросы создания отечественных продуктов питания нового поколения// Пищ. пром-ть, 1998,№12, с44-45.

98. Симоненко С.В. Конценция функционального питания// Сборник научных трудов «Научное обеспечение молочной промышленности». — М.: ГНУ ВНИМИ, 2009. 495с.

99. Совершенствование способов приготовления заквасок и методов-микробиологического контроля в молочной промышленности //Сб. научн. Трудов под ред. В.Ф. Семенихиной М: 1989г.

100. Соловьева Е., Карагодина В. Новые заквасочные культуры для кисломолочных продуктов и сыров— М.: Молочная промышленность,№ 9. 2005 с.14-15

101. Сохранение жизнеспособности и физиологических свойств бифидобактерий при криоконсервации и лиофилизации/Г.И. Новик и др./ Микробиология 1998 Т 67, №5 - с.637-642.

102. Снятковский М.В., КарычевР.З., Шаманова Г.П. Закваски прямого внесения фирмы «Хр. Хансен» для производителей кисломолочных продуктов в России. Молочная промышленность №10.2004. с.30-31

103. Стабильные закваски — качественные и безопасные молочные продукты / Ганина В.И. // Мол. пром-сть. 1999. - №8. - С.25-26.

104. Стейниер Р., Эдельберг Э., Ингрэм Дж. Мир микробов, 2-ой том: Пер. с англ. д-ра биол. наук E.H. Кондратьевой и д-ра биол. наук C.B. Шестакова. М.: Мир, 1979.-331с.

105. Степаненко П.П. Микробиология молока и молочных продуктов: Учебник для ВУЗов.- Сергиев Посад: ООО «Все для Вас-Подмосковье»,1999.- 415с.

106. Сублимационная сушка производственно-ценных штаммов молочнокислых бактерий// Лагода И.В., Банникова Л.А.//Мол. Пром-ть. -1973. -№3. -с.4-7

107. Сублимационная сушка производственно-ценных штаммов молочнокислых бактерий// Лагода И.В., Банникова Л.А.//Мол. Пром-ть. -1973. -№3. -с.4-7

108. Тамим А.И., Робинсон Р.К., Йогурты и аналогичные кисломолочные продукты: научные основы и технологии/ пер. с англ. Под науч. Ред Л.А. Забодаловой. СПб:Профессия, 2003. - 664с.

109. Техническая микробиология пищевых продуктов/ Под ред. А.Я. Понкратова М: Пищевая промышленность 1968. - 743с.

110. Технология лактулозы / Учебное пособие. М.: ДеЛи принт, 2003.-232с.

111. Тихомирова H.A. Технология продуктов функционального питания

112. М.:000 «Франтера»,2002. 213с.

113. Тутельян В.А. Сбалансированное питание — основа процветания нации// Доклад на VI Всероссийской конференции «Здоровое питание: воспитание, образование, реклама». — М.:БАД-Бизнес, 2001

114. Ушакова H.A. Изменение в клеточных липидах при отмирании культуры Streptococcus diacetilactis. В книге: Свободнорадикальное окисление липидов в норме и паталогии. М: Наука, 1976, с. 181-183

115. Фарант Д. Пересмотр некоторых криобиологических концепций// Криобиология и криомедицина. — 1977. — Вып.З. с. 12-20.

116. Фармакологические аспекты применения пробиотиков/ Данилевская Н.В.// «Ветеринария», №11 2005.

117. Функциональные молочные продукты пища будущего / Дьяченко Д.В. // Мол. дело. - 2002. - №1. - С. 12-13.

118. Хамагаева И.С., Качанина JI.M., Тумурова С.М./ Биотехнология заквасок пропионовокислых бактерий // Улан-Удэ: Изд-во ВСГТУ — 2006. 172с.

119. Харитонов Д.В., Райдна Е.И. Изучение некоторых аспектов криозамораживания микробной биомассы // Хранение и переработка сельхозсырья, 2003, №9, с.64-66

120. Хотимченко Ю.С., Кропотов A.B. "Применение энтеросорбентов в медицине", Тихоокеанский медицинский журнал, 1999, №2, с. 84-89

121. Храмцов А.Г. Молочный сахар. М.: Агропромиздат, 1987.-224с.

122. Цуцаева A.A., Аграненко В.А. Криоконсервирование клеточных суспензий. Киев: Наук.думка, 1983. — 240 с.

123. Чуйков В.А. Механизм криозащитной эффективности и фармакологические свойства диметилсульфоксида// Криобиология.-1989.- №1.- с. 3-10.

124. Шаззо Р.И., Касьянов Г.И. Функциональные продукты питания. М.: Колос, 2000.-248с.

125. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональноепитание, в 3-х томах М.: Грантъ, 2001

126. Шинода К., Накагава Т., Тамамуси Б., Исемура Т. Коллоидные поверхностно-активные вещества. М., «Мир»,1966. — 319с.

127. Экспресс-методы контроля качества/ Кравченко Э.Ф.// Мол. Пром-ть. — 2008. —№2. -с.28

128. Ярцев М.Я. Показатель роста микроорганизмов в управляемых процессах культивирования// Ветеринария 2000 №4. - 25-28.

129. An overview of probiotics, prebiotics and synbiotics in the functional food concept: perspectives and future strategies// Ziemer C.J., Gibson G.R.// Int. Dairy 1998. - №8 - 473-479.

130. A study of the optimum conditions of freezing and storing concentrated mesophilic starters// Stadhouders J., Jansen L.A.,Hup,G.// Neth. Milk and dairy J. 1971. v.25 - №4 - 229-239.

131. Biochemical characteristics of fermented milk produced by mixed-cultures of lactic starters and bifidobacteria// Martine Barona Denis Roy - JeanChristophe Vuillemard// Lait 80 (2000) 465-478

132. Citti I.E., Sandine W.E., Elliker P.R. Some observations on the Hull metod for measurement of proteolysis in milk. J.Dairy Sci. — 1963, 46, p.337.

133. Death of Lactobacillus bulgaricus Resulting from Liquid Nitrogen Freezing/ R.B. Smittle et al// Applied Microbiology 1972. Vol. 24. - №4 - 551-554.

134. Effects of inulin and lactose of fecale microflora, microbial activity, and bowel habit in elderly conspirated persons.// B. Klessen, B. Sykura, H.-J. Zunft,

135. M. Blaut.// Am.J.Clin.Nutr. 1997,v.65, p.1397-1402.

136. Fayed E.O., Sultan N.E., Yassein N.I. and Shehata A.E., Egiptian Journal of Dairy Science, 1985.- 149.

137. Fermentation pH and Temperature Influence the Cryotolerance of Lactobacillus acidophilus RD758// Y. Wangl, G. Corrieul and C. Béai// J. Dairy Sci.American Dairy Science Association -2005.- Vol. 88. p.21-29

138. Fook L.J., Fuller R., Gibson G.R. Prebiotics, probiotics and human gut microbiology/Anter Dairy J. 1999. - Vol.9. - №1. -P.53-61.

139. Font de Valdez G., Savoy de Giori G., Pesce de Ruiz Holgado and Oliver G., Crybiology, 1993. 329.

140. Futschik K., Pfiitzner H., Nussaaum C. Selective detection of microorganisms by use of electrode Impedance. — IX International conference on electrical bio-impedance. Heidelberg, Germani, 1995. — P.79-82.

141. Gibson T., Abd-el-Malek I.// The formation of carbon dioxide by lactic acid bacteria and Bacillus licheniformis and a cultural method of detecting the process. — «Dairy Res», 1945, v. 14, N 1-2, p.35

142. Growth and survival of bifidobacteria in milk// Klaver F.A.M., Kingma F., Weerkcamp A.H.//Neth. Milk Dairy 1993. - №47 - 151-164.

143. Guttmann R.D., Perry V.P., Acquired tolerance to homografts induced with dimethylsulphoxide-protected and frozen splenic cells. Criobiology, 1965, p.212-218.

144. Holcomb J.E., Frank J.F., Mcgregor J.U. Viability of Lactobacillus acidofillus and Bifidobacterium bifidum in soft-serve frozen yogurt// Cult.Dairy Prod.J. 1991. - Vol. 26(3). - P.4-5.

145. Hull M.E. Studies on milk protein. Colorimetric determination of the partialhydrolysis of the protein in milk. J.Dairy Sci. - 1947, 30, p.881-884.

146. Husmann K. Steffens K.-J. Impedance Measurement to detect Airborne Viable Microorganisms. APV Kongreb, Paris 25-28 Mai 1998.

147. Imai M. and Kato M., Journal of Agricultural Chemical Society Japan, 1975, p.93.

148. Kiselev K.V., Odintsova N.A., Ageenko N.V., Sanina N.M., Kostetsky E.Y. Analysis of marine hydrobiont lipid extracts as possible cryoprotective agents// International Journal of Refrigeration (2006). 29(3). p. 387-395.

149. Kleberger K.E. An ophtalmological evalution of DMSO. -Ann.N.Y.Acad.Sci. 1967, p.381-385.

150. Kroyer G. Futschik, K. The Impedance Splitting Metod for Microbiologic Analysis of Food Preservatives. An Evaluation. Biotech Lab International Vol.2, %2, 3-4, 8a-10d, 1997.

151. Lactic acid bacteria: inhibition of angiotensin converting enzymes in vitro and in vivo// Fuglsand A., Rattray F.P., Nilsson D., Nyborg N.C.B.// Antonie Leeuwenhoek 83 2003. - 27-34

152. Lovelock J.E., Bishop M.W. Prevention of freezing damage to living cells by DMSO. Nature, 1959, №4666, p. 1394-1395.

153. McNeil H. P., Chesterman C. N., Krilis S. A. Immunology and clinical importance of antiphospholipid antibodies // Adv. Immunol. — 1991. — Vol. 49. —p. 193—280.

154. Meryman H.T. Cryoprotective agents// Cryobiology. 1971. -8,№2. -p.173-183.

155. Methods for Conservation of Industrial Microorganisms// Todor Donev// National Bank For Industrial Microorganismsand Cell Cultures, Sofia2001 -91p.

156. Morawetz H.A., Hughes W.L. The interaction of protein with synthetic poly electrolyte. J.Phis.Chem., 1952 - p.64-69.

157. Odintsova N.A., Kiselev K.V., Sanina N.M., Kostetsky E.Y. Cryopreservation of primary cell cultures of marine invertebrates // Cryoletters 22: 299-310.

158. Ordonez G.A., Jeon I.J., Roberts H.A. Manufacture of frozen yogurt with ultrafiltered milk and probiotic lactic acid bacteria// J. of Food Processing and Preservation. 2000.- Vol. 24.- №2.- P.163-175.

159. Preservation techniques increase viability of dairy starter culture // Landerkin G.B.// Canada Agriculture J. 1958. - V. 13 №4 - 30-31.

160. Proteolytic enzymes of lactic acid bacteria// Law J., Haandrikaman A.// Int. Dairy 1997.-№7-1-11.

161. Protectant used in the cryopreservation of microorganisms/ Z. Hubalek// Cryobiology. 2003. -Vol.46 - 205-229.

162. Rasic Y.L., Kurmann I.A. Bifidobacteria and their role. Microbiological, nutritional-physiologal, medical and technological aspects and bibliography.-Borknauser Verlag, Rasel. Boston. Stuttgart, 1983.- 1222p.

163. Role of lactic acid bacteria (LAB) in food preservation and human health — A review // Soomro A.H.T., Masud A., Kiran A.//Pak. J. Nutr. 2002. - №1 -20-24.

164. Rostand J. Glicerine de la resistance du sperme aux basses temperature. — C.r.Acad.sci., 1946, p.222

165. H Song Miao, Susan Mills, Catherine Stanton, Gerald F. Fitzgerald, Yrjo Roos and R. Paul Ross// Effect of disaccharides on survival during storage of freeze dried probiotics// J. Dairy Sci. Technol. 2008 - Vol.88 - p. 19-30

166. Spray drying of yogurt and related cultures// Porubcan R.S. and Sellers

167. R.L.// Journal of Dairy Science 1975. - №58 - 787.

168. Stiff P.J., Koester A.R., Weidner M.K. et al. Autologous bone marrow transplantation using unfractionated cells cryopreserved in dy methyl sulfoxide and hydroxyethyl starch without controlled-rate freezing// Blood.- 1987.-Vol.70.- N 4.- p.974-978.

169. Van der Berg L., Soliaman F.S. Effect of glycerol and dimethylsulfoxide on changes in composition and pH of buffer salt solution during freezing. -Criobiology, 1969, p.93-97.

170. Yee B., Tsuymu Sh., Adams B.G. Bilogical effects DMSO on yeast. — Biochem. and Biophis. Res. Communs, 1972, p.1336-1342.

171. Yi D., Youg P., Wenkui L. Chinese Functional Food. 1999. Beijing, New World Press. -19-20.

172. Zeimer C.J., Gibson G.R. An overview of probotics, prebiotics and synbiotics in the functional food concept perspectives and future strategies// Inter. Dairy J. 1998. - Vol. 8 - №5/6. -P.437-479.

173. РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности

174. Использование метода измерения электрического сопротивления (импеданса) для определения количества молочнокислых бактерий в заквасках и молочных продуктах.1. Методические рекомендации1. Москва 2009

175. Результаты измерений количества молочнокислых бактерийимпедансным методом.

176. АП1 разв 2 обр ОШ ст мол 5,25 6.0Е+7 15.07.200714:04:28

177. АП1 разв 4 обр ОШ ст мол 5,42 5.4Е+7 15.07.200714:04:34

178. АП1 разв 5 обр ОШ ст мол 6,23 3,0Е+7 15.07.200714:04:37

179. АПЗ обр ОШ ст мол 7,06 1.8В7 15.07.200714:34:40

180. АП5 обр ОШ ст мол 5,68 4.5Е+7 15.07.200714:34:46

181. АП9 обр ОШ ст мол 8,09 9.0&6 15.07.200714:34:52

182. АП11 обр ОШ ст мол 6,38 2.8В7 15.07.200714:34:58

183. АП12 обр ОШ ст мол 8,75 5,8В6 15.07.200714:35:01

184. АП13 обр ОШ ст мол 9,15 4.4Е+6 15.07.200714:35:04

185. АПЗ ОШ ст мол 6,39 2,8В7 25.07.200719:49:11

186. АП5 ОШ ст мол 5,83 4.1В7 25.07.200719:49:14

187. АП9 ОШ ст мол 1035 1.3В6 25.07.200719:49:17

188. АП13 ОШ ст мол 8,52 6,8В6 25.07.200719:57:16

189. АП1 разв ОШ ст мол 5,28 5,9В7 08.08.2007 17:03:47

190. АП2 разв ОШ ст мол 7,81 1,1 В7 08.08.200717:03:50

191. АПЗ ОШ ст мол 5,21 6,2В7 10.08.2007 22:28:10

192. АП4 ОШ ст мол 5,84 4.1В7 10.08.2007 22:28:16

193. АП5 ОШ ст мол 6,09 3,4Е+7 10.08.200722:28:19

194. АПс 1 ОШ ст мол 5,14 6.5В-7 10.08.2007 22:28:52

195. АП6 ОШ ст мол 4,68 8,8Е+7 10.08.2007 22:28:58

196. АП1 ОШ ст мол 5,24 6.1&7 10.08.2007 22:29:01

197. АПс2 ОШ ст мол 5,24 6,0В7 10.08.2007 22:38:43

198. АПсЗ ОШ ст мол 5,39 5.5Е+7 10.08.2007 22:38:46

199. АП с4 ОШ ст мол 5,33 5,7В7 10.08.2007 22:38:49

200. АПс 6 ОШ ст мол 4,83 8.0Е+7 10.08.200722:38:55

201. АП 1 1 разв ОШ ст мол 6,08 3.5&7 07.09.200714:19:51

202. АП2 1 раза ОШ ст мол 5,78 4,2Е+7 07.09.200714:19:54

203. АПЗ 1 разв ОШ ст мол 5,41 5.4В7 07.09.200714:19:57

204. АП4 1 разв ОШ ст мол 5,70 4.5В7 07.09.200714:20:00

205. АП5 1 разв ОШ ст мол 6,06 3.5Е+7 07.09.200714:20:03

206. АП2 разв ОШ ст мол 7.71 1,2В7 24.09.200717:26:45

207. АПЗ разв ОШ ст мол 9,37 3.8В6 24.09.200717:34:391. УТВЕРЖДАЮ1. НИМИ

208. РАЗРАБОТАНО: ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии Зам. Директора^'' .к^- В.Г. Будрик1. Личная полнись *2010 г.

209. Заведующая Центральной лабораторией микробиологис .^^УУУ-'О В.Ф.Семенихина ""2010 г.

210. Зам. зав. Центральной лабораторией микробиологии- ) И.В.Рожкова ""2010г.

211. Заведующий сектором научно-исследовательских и экспериментальных работ- Д-В. Харитонов " 2010г.1. Инженер-микробиолог1. О.М. Кузьмина2010г.г. Москва 20101. Утверждаю1. АКТ

212. О внедрении научно-исследовательской работы

213. В производственных условиях ОАО «Кезский сырзавод» внедрены результаты диссертационной работы инженера ГНУ ВНИМИ Кузьминой Ольги Михайловны «Исследование влияния состава защитной среды на выживаемость микроорганизмов в процессе криозамораживания».

214. Закрытое акционерное общество «Кировский молочный комбинат»1. АКТ09 сентября 2010 г. № Киров

215. О внедрении научно-исследовательской работы

216. Составлен комиссией в составе:

217. В результате проведённой проверки установлено.

218. Выработки проводились по утвержденной технологической инструкции ТИ ТУ 9222-388-00419785.В качестве закваски использовали бактериальный концентра КАоксп, приготовленный методом криозамораживания с использование защитной среды КС-20.

219. Количество молочнокислых бактерий в готовом продукте определяли с помощью импеданского метода по разработанной в ходе диссертационной работы методике. Данная методика позволяет обеспечить ежедневный контроль качества сырья и выпускаемой продукции.

220. По результатам проведенных испыташш запланировано использование криозамороженного бактериального концентрата КАэкСП при производстве кисломолочных продуктов на 2011 год.

221. Предложенная методика обеспечивает простоту приготовления и внесения образцов, существенно сокращает время исследований, что особенно важно при производстве продуктов питания с небольшим сроком годности

222. Комиссия рекомендует предложенную методику для применения в производственных лабораториях предприятий молочной промышленности.

223. Составлен в 2-х экземплярах:1 экз. -дело№11-052 экз. инженеру ГНУ

224. Председатель Члены комиссии1. УТВЕРЖДАЮ

225. Генеральный-дэректор ЗАО'Жирдвмолкомбинат» Д// ~„ -у В.К Сураев «¿•56 20/£Г.1. ВНИМИ Кузьминой О.М.1. В.А. КалининафМ/.1. С-6-'/1. Л.И. Лебедева1. Шуклина

226. ЗАО «Кировский молочный комбинат» Производственная лаборатория§<«,/ Kiipoacxn

227. Sol на®лреиwiaftTBCHHOH лаборатории Га «ОМвина^Ш J1. Г °:Л Калинина

228. W^^A документов /*■»■ ч// •по качеству 1. АКТо проведении выработки кисломолочного продукта с использованием криозамороженного бактериального концентрата1. Мы, нижеподписавшиеся

229. Инжененр ГНУ ВНИМИ Кузьмина Ольга Михайловна Ведущий врач-микробиолог Шуклина Ирина Николаевна Микробиолог Стяжкина Юлия Анатольевна Составили настоящий акт о следующем:

230. РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ГОСУДАРСТВЕННОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ МОЛОЧНОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ (ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии) ОКП92 29** Группа Ж 71. ОКС 67.100.10)1. СОГЛАСОВАНО

231. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человекасанитарно-эпидемиологическоезаключение1. Лг»от1. УТВЕРЖДАЮ1. Дире Рос.1. НИМИ и1. Харитонов 2010 г.

232. ЗАКВАСКИ ПРЯМОГО ВНЕСЕНИЯ ШТАММОВ1.ctobacillus acidophilus NK1, Bifidobacterium bifidum 791,

233. Bifidobacterium longum В 379M и консорциума микроорганизмов (Lactobacillusacidophilus NK1, Bifidobacterium bifidum 791, Bifidobacterium longum В 379M)1. ТУ 9229-00419785-2010

234. Дата введения в действие-РАЗРАБОТАНО: ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии Зам. Директора^'1. В.Г. Будрик1. Личная мо.ишсь2010 г.

235. Заведующая Центральной лабораторией микробиологии1. В.Ф.Семенихина ~2010 г.

236. Зам. зав. Центральной лабораторией микробиологии —" ( И.В,Рожкова "и2010г.

237. Заведующий сектором научно-исследовательских и экспериментальных работ