автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.07, диссертация на тему:Разработка технологии пищевой синбиотической добавки

На правах рукописи

Садовая Татьяна Николаевна

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПИЩЕВОЙ СИНБИОТИЧЕСКОЙ ДОБАВКИ

05.18.07 - биотехнология пищевых продуктов (из сырья животного и растительного происхождения)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

Ставрополь 2003

Работа выполнена в Кубанском государственном технологическом университете.

Научный руководитель: Кандидат технических наук, доцент

Бархатова Татьяна Викторовна

Официальные оппоненты: Доктор технических наук, профессор

Ведущая организация: Краснодарский региональный институт агробизнеса

Защита состоится «20>/ ноября 2003года в 14-00 часов на заседании диссертационного совета Д 212.245.05 при Северо-Кавказском государственном техническом университете (СевКавГТУ) по адресу: 350029, г. (Ставрополь, пр. Кулакова, 2, ауд. К 308.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке СевКав1 ТУ.

Отзывы на автореферат, заверенные печатью учреждения, просим направлять в адрес диссертационного Совета.

Автореферат разослан 19 октября 2002 г.

Оноприйко Алексей Владимирович Кандидат технических наук, с.н.с. Суюнчев Олег Азаматович

Ученый секретарь диссертационного совета, канд. техн.наук, доцент

А

Общая характеристика работы

Актуальность темы. «Концепция государственной политики в области здорового питания населения РФ на период до 2005 г» определяет биологически активные добавки к пище как важнейшие средства быстрого устранения дефицита в питании пищевых веществ и минорных компонентов пищи. Особое место в ассортименте этих продуктов занимают синбио-тические добавки, способные корректировать микробиоценоз кишечника как за счет колонизации внешними пробиотическими микроорганизмами, так и активизацией собственной полезной микрофлоры, и тем самым обеспечивать формирование и поддержание иммунного статуса человека. Расширение ассортимента и развитие технологии синбиотиков определяется, прежде всего, поиском, изучением и предложением к использованию новых пробиотических культур, совершенствованием условий их культивирования, подбором пребиотических факторов, исследованием степени их синергетического действия для конкретных пробиотических микроорганизмов. Известно, что бифидобактерии играют определяющую роль в нормобиоценозе, а пребиотический эффект в их отношении проявляют различные олигосахариды. Поэтому создание синбиотической пищевой добавки на основе бифидобактерий, растительных олигосахаридов или олигосахаридсодержащих продуктов представляется актуальным и перспективным.

Работа выполнялась в рамках проекта №03-06-00532а/ю, финансируемого Российским научным гуманитарным фондом.

Актуальность темы подтверждается включением её в НТП Минобразования РФ «Научные исследования высшей школы по технологии живых систем», № госрегистрации 1200004210 и тематику НИР кафедры технологии консервирования КубГТУ.

Цель и задачи исследований. Целью диссертационной работы является разработка технологии синбиотической пищевой добавки на основе бифидобактерий и растительных пребиотических олигосахаридов.

Для достижения этой "»"« чрупушггпт*"" рршенир следующих зарос. НАЦИОНАЛЬНАЯ дач БИБЛИОТЕКА

С-Оетв ОЭ

- определить бифидогенное действие растительных пребиотических олигосахаридов: инулина, раффинозы и стахиозы для пяти штаммов бифи-добактерий выделенных от людей видов;

- установить возможность и эффективность использования растительных олигосахаридов и продуктов, их содержащих, изолированно или в комплексе в составе синтетических сред для бифидобактерий отдельных штаммов;

- определить целесообразность применения комплекса олигосаха-ридсодержащих продуктов для обогащения естественной среды для получения биомассы бифидобактерий;

- оценить эффективность использования комплекса олигосахаридсо-держащих продуктов в рецептуре криозащитной среды для биомассы бифидобактерий при консервировании сублимацией;

- разработать технологию синбиотической пищевой добавки на основе бифидобактерий и растительных олигосахаридсодержащих продуктов, определить ее качество.

Научная новизна:

- установлена возможность применения инулина, раффинозы и стахиозы в качестве углеводных компонентов синтетических сред для культивирования B.longum В379М, В.adolescentes Г7513, В.breve 79-119;

- установлено бифидогенное действие растительных олигосахарид-содержащих продуктов (концентрата топинамбура (КТ) и сухой соевой сыворотки (ССС)) в отношении B.'ongum В379М, B.adolescentis Г7513, адекватное по уровню рафинированным пребиотическим олигосахаридам.

- определены комплексы растительных олигосахаридов и олигосаха-ридсодержащих, максимально стимулирующие B.adolescentis Г7513:

- подтверждены бифидогенные свойства соевой сыворотки, определены физиолого-биохимические свойства B.longum В379М, культивированного в ней, позволяющие рекомендовать ССС собственно как синтетическую среду, ее эффективного ингредиента или дополнительного стимулятора;

Í '...г-«./ .i*.' ; ,

- установлено, что соевая сыворотка оказывает корригирующее воздействие на микробиоценоз толстого кишечника крыс после курса анти-биотикотерапии и может быть рекомендована к дальнейшему изучению и применению в качестве пребиотического ингредиента в биотехнологии и микробиологии;

Практическая значимость. Разработана, апробирована в условиях ФГУП «Краснодарская биофабркка» и реализована в проекте ТУ 9389-08902067862-2003 технология синбиотической пищевой добавки на основе бифидобакгерий В.асЫезсепйз Г7513, в которой на разных стадиях эффективно использован комплекс растительных олигосахаридсодержащих продуктов. Определены показатели качества, пробиотические характеристики и антагонистическая активность полученной синбиотической пищевой добавки.

Апробация результатов исследований. Основные положения исследований докладывались на конференциях «Актуальные направления развития экологически безопасных технологий производства, хранения и переработки сельскохозяйственной продукции» (Воронеж, 2003), «Региональные производители: их место на современном рынке товаров и услуг» (Красноярск, 2003), Всероссийской научно-практической конференции «Молочные продукты лечебно-профилактического назначения - основа здорового питания» (Адлер, 2003), на заседаниях кафедры технологии консервирования КубГТУ.

Публикации. По результатам исследований опубликовано 7 научных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, грех глав, выводов, списка использованной литературы из 125 источников, в том числе 20 зарубежных авторов, 4 приложений. Работа изложена на 116 страницах машинописного текста, содержит 11 таблиц и 23 рисунка.

Краткое содержание работы

Во введении обоснована актуальность исследований, показана целесообразность и перспективность выбранного направления.

В главе 1 на основании современной отечественной и зарубежной литературы дана характеристика бифидобактерий, пробиотических препаратов с их использованием. Показана целесообразность применения лре-биотиков в технологии бифидосодержащих добавок, выдвинуто предположение о пребиотическом потенциале растительных олигосахаридсодержащих продуктов. Аргументирована перспективность создания синбиоти-ков, приведены основные тенденции их производства.

Глава 2 посвящена описанию постановки эксперимента. Схема исследований приведена на рисунке 1. На схеме: 1 - накопление биомассы, 2 — устойчивость к различным рН, 3 - устойчивость к NaCl, 4 -устойчивость к фенолу, 5 -- устойчивость к антибиотикам, 6 - медико-биологические испытания in vivo, 7- антагонистическая активность, 8 -выживаемость бифидобактерий, 9 - органолептические показатели, 10 -отсутствие посторонней микрофлоры, 11 - показатели безопасности по СанПиН 2.3.2.1078-01.

Объектами исследований служили рафинированные растительные олигосахариды (инулин, раффиноза и стахиоза), сухая соевая сыворотка по ТУ 9199-072-02067862-2002 и концентрат топинамбура по ТУ9379-003-11866470-95, вновь созданные синтетические, питательные и защитные среды с их использованием, вновь созданная синбиотическая пищевая добавка на основе бифидобактерий и композиции растительных олигосаха-ридсодержащих продуктов.

Повторность анализов в экспериментах - четырехкратная. Данные, предешвленные для обсуждения, являются статистически обработанными результатами экспериментов и имеют среднее квадратич'еское отклонение не более 5 %.

При математической обработке отдельных результатов был применен регрессионный анализ, реализованный с помощью стандартных пакетов программ Microsoft Exel, "STATISTICА" и Mathcad 2000 Professional, подобраны математические модели, получены мультипликативные поверхности и уравнения, адекватно описывающие процессы.

Рисунок 1 - Схема исследований

В главе 3 приведены результаты экспериментов и их обсуждение.

3.1 Определение селективности бифидобактерий в отношении растительных пребиотических олигосаха ридов

Бифидобактерии достаточно требовательны к углеводному составу питательной среды, причем предпочтение конкретных углеводов является не только их видовым признаком, а зачастую отличается и для отдельных штаммов.

Нами исследовано культивирование бифидобактерий в синтетических средах, в которых в качестве источника углеводов применяли инулин, раффинозу и стахиозу. Синтетические среды составляли и готовили по аналогии с БС-средой, которую наряду с синтетической средой без углеводов, использовали в качестве контроля. Олигосахариды вносили в синтетические среды в количестве 2 %.

Получены данные, свидетельствующие, что добавление в синтетические среды инулина, раффинозы и стахиозы определяет рост культивируемых штаммов, а отсутствие приводит к снижению их популяции.

Динамика культивирования исследуемых штаммов в экспериментальных синтетических средах была подобна их росту на БС-среде, однако скорость культивирования была несколько ниже. График культивирования ВЛог^шп В379М (рис.2) имел вид классической кривой роста бактериальной популяции: в первые 6 часов наблюдается лаг-фаза, затем до 12 часов культивирования - фаза логарифмического роста и позже - стационарная фаза.

Подобную картину наблюдали при культивировании В.Ьгеуе 79-119 в средах с добавлением соевых олигосахаридов и В.ас1о1еясеп1:1;; Г 7513 с добавлением инулина.

На момент окончания эксперимента В.асМезсепНз Г 7513, ВЛогщит В379М и В.Ьгеуе 79-119 в синтетических питательных средах имели количество КОЕ, подобное при развитии на БС-среде, результаты для В.Ыйсклп 791 и В.МапЙБ 73-15 были значительно ниже. Приведенные характеристики мало зависели от вида применяемого в среде олигосахарида, кривые

роста бифидобактерий в присутствии инулина, раффинозы и стахиозы, в-основном, подобны.

Продолжительность культивирования, часы

—синтетическая среда с 2 % рафинозы синтетическая среда с 2 % стахиозы синтетическая среда 2% инулина -А- синтетическая среда без углеводов -Ж— БС-среда

Рисунок 2 - Результаты культивирования B.longum В379М в синтетических средах с добавлением пребиотических олигосахаридов

Для оптимизации концентраций олигосахаридов изучали культивирование B.adolescentis Г7513 в синтетических средах с вариацией концентрации каждого олигосахарида от 0% до 2%. Подобраны математические модели процессов, описываемые уравнениями:

Z = 6,402 + 0,065 X, - 0,309 У - 0,0018 X,2 + 0,008 Х,У + 0,016У2 (1) Z = 6,432 + 0,005 Х2 - 0,24 У + 0,004 Х22 + 0,007 Х2У + 0,014 У2 (2) Z = 6,377 + 0,019 Х3 - 0,245 У ь 0,016 Х32 + 0,005 Х3У + 0,014 У2 (3)

где Х1 - концентрация инуЛина, %; Х2 - концентрация раффинозы, %; Х3 -концентрация стахиозы, %; У - продолжительность культивирования, часы; 2 - количество бифидобактерий, ^ КОЕ/мл.

Анализ уравнений показывает, что тенденция культивирования В.асЫезсепиБ Г7513 подобна для инулина, раффинозы и стахиозы в варьируемых концентрациях. Увеличение концентрации олигосахаридов в среде несколько повышало рост КОЕ В.асЫезсепйв Г7513 в процессе культивирования. Однако, эти изменения мало значимы в изучаемых пределах концентраций олигосахаров.

С другой стороны, известно, что эффективность культивирования бифидобактерий на питательных средах, одновременно сочетающих фрукте-, глюко- и галактоолигосахариды значительно выше.

Исследовали культивирование В.аскЯезсепЙБ Г7513 в средах с их комбинированием в пределах 2%. По-результатам подобрана математическая модель, описываемая уравнениями 4,5, ее графическая интерпретация представлена на рисунке 3 (А, Б).

А) на момент 6 часов 2 = 5,74 + 1,75 X + 1,96 У - 0,57 X2 - 1,62 ХУ - 0,82 У2 (4)

¿Щ,

аыЧ о о»»

V ** 392

б бе;

И н

У л и

н

%

б <№»

«« \ *

5

■Ч О . О ^ О »в Л "

^«Чв 0»«' в б 439 6 <66Т «

6 7*6 6 «85 6 9-3«

Ч , 1

Раффиноза, % Б) на момент 24 часа 2 = 7,3 + 2,56 X + 1,42 У - 0,86 X2 - 1,23 ХУ - 0,4 У2 (5) Рисунок 3 - Графическая интерпретация модели культивирования В.асЫезсепйэ Г 7513 в среде с добавлением инулина, раффинозы и стахиозы

По рисунку видно, что зона максимума КОЕ на момент 6 часов культивирования соответствует следующим концентрациям олигосахаров: раффиноза -1,1-1,8%; инулин - 0,3 - 0%; стахиоза - 0,6 - 0,2%; на момент 24 часа: раффиноза -1,1-1,9%; инулин - 0,25 - 0%; стахиоза - 0,65 -0,1%. Это свидетельствует о том, что бифидогенный эффект исследуемой комбинации в большей степени зависит от концентрации соевых олигоса-харидов, а именно раффинозы. Наибольшее значение КОЕ В.а(к>1езсеп1лз Г7513 определено для раффинозы - 1,2%; инулина - 0,3%; стахиозы -0,5%.

3.2. Бифидогеннме свойства растительных олигосахаридсодержащих продуктов

Применение исследуемых рафинированны> олигосахаридов в пищевой биотехнологии как пребиотических ингредиентов достаточно дорого, поэтому целесообразен поиск олигосахаридсодержащих растительных

продуктов с подобными бифидогенными свойствами и более дешевых в использовании.

С этой целью изучали концентрат топинамбура (КТ) по ТУ9379-003-11866470-95 и сухую соевую сыворотку (ССС) по ТУ 9199-072-020678622002, которые использовали в синтетических средах для культивирования B.longum В379М, B.adolescentis Г7513, B.breve 79-119 в количестве 2%.

Примечательно, что для всех культивируемых штаммов КТ был предпочтителен в составе питательной среды в сравнении с чистым инулином, по окончании эксперимента во всех случаях опытного культивирования количество КОЕ приближалось к контрольному. В большей степени это характерно для B.longum В379М (рис.4).

10,00 -,

I

I

>| 9,00--

а.

t>

У 8,00--

ю

о и

5 ш

о 7,00 -I-

s v;

VD

О —

" 6,00 1 S т\"

s !

| 5,00 ,-

* !

4,00 - - - - • - - -

0 6 12 18 24

Продолжительность культивирования, часы

-•- синтетическая среда с 2 % инулина —♦— синтетическая среда с 2% КТ -Л- БС-среда

Рисунок 4 - Результаты культивирования B.longum В379М в синтетических средах с добавлением инулина и концентрата топинамбура

ССС стимулирует B.longum 379 M (рис.5) и B.adolescentis Г 7513 в равной степени с чистыми соевыми олигосахаридами. Хотя темп роста

B.longum 379 M на средах с добавлением ССС и чистых соевых олигосаха-ридов подобен, B.adolescentis Г 7513 - несколько ниже, по окончании культивирования во всех исследуемых условиях эти штаммы имели сравнимые количества КОЕ с результатами на стандартной БС-среде.

В. breve 79-119 практически не дал рост на среде с ССС, что, видимо, определяется недостаточным для этого штамма количеством бифидоген-ных олигосахаридов и других стимуляторов в составе ССС.

Продолжительность культивирования, часы —♦— синтетическая среда с 2 % рафинозы -Ш- синтетическая среда с 2. % стахиозы -Ж- БС-среда

-А- синтетическая среда с 2% ССС

Рисунок 5 - Результаты культивирования B.longum 379 M в синтетических средах с добавлением соевых олигосахаридов и соевой сыворотки

Принимая во внимание присутствие в ССС различных бифидоген-ных стимуляторов (моно-, олигосахаридов, аминокислот, пептидов и др.)

исследовали возможность использовать ее собственно в качестве питательной среды для бифидобактерий.

Установлено (рис.6), что культиьирование В.ас1о1е5сепй.ч Г 7513 в 10%-ной соевой сыворотке дает высокие результаты, количество КОЕ после 24 часов соответствовало норме, определенной для лечебно-профилак-■гических продуктов.

« ^ s

° CL,

В а -S £ w

S »g и

§ 5 « .©.

я ю

оо

□ посевная доза

□ соевая сыворотка 10%

□ БС-среда

В БС-среда с добавлением 0,5 % ССС

Рисунок 6 - Результаты культивирования B.adolescentis Г 7513 в различных синтетических средах

Результаты также свидетельствуют о синергидном эффекте ССС при ее добавлении к БС-среде: биомасса B.adolescentis Г 7513 увеличилась на 5% в сравнении со стандартными условиями.

Во всех рассма гриваемых случаях бифидобактерии обязательно должны сохранять пробиотические свойства, способность к выживанию и жизнедеятельности в условиях желудочно-кишечного тракта.

Установлено, что при культивировании в ССС B.longum 379 M дает высокий рост (более 108) и не изменяет свои основные физиолого-биохи-мические свойства в сравнении с пассажем на ГМК-2: сохраняет устойчивость к 20% желчи, 0,4% фенола, 4 % NaCl, развивается при рН 7,0-9,0, в присутствии антибиотиков в дозах, аналогичных пороговым в контроле.

Для определения бифидогенного эффекта in vivo было исследовано влияние соевой сыворотки на микробиоценоз толстого кишечника крыс после курса ампициллина. Антибиотик в дозе 250 мг/кг массы животного, водили в течение 10 дней, после отмены - соевую сыворотку в дозах 0,5; 1,0; 2,0 г/кг в течение 21 дня.

Введение соевой сыворотки привело к снижению условно-патогенных бактерий и восстановлению индигенной аутомикрофлоры в кишечнике крыс: содержание бифидобактерий и эшерихий повысилось. Лучшая динамика отмечена в группе животных с дозой сыворотки 2 г/кг. Через 21 день приема соевой сыворотки в такой дозе содержание условно-патогенных бактерий снизилось до значений, характерных для интактных животных.

3.2.3 Создание бифидогенного комплекса растительных олигоса-харидсодержащих продуктов

Принимая во внимание синергидный бифидогенный эффект при комбинировании в синтетических средах рафинированных растительных олигосахаридов, исследовали эффективность комбинирования олигосаха-ридсодержащих продуктов для активизации бифидобактерий. В синтетические среды добавляли ССС и КТ в различных сочетаниях с уменьшением первого ингредиента и одновременным увеличением второго в пределах 02%. Результаты культивирования В.adolescentes Г 7513 представлены на рис. 7, где: X - количество КТ в синтетической среде, %, в которой присутствует ССС в количестве С = (2 - X), %; У - продолжительность культивирования, часы; Z - количество бифидобактерий, !g КОЕ/мл.

Анализ поверхности показывает, что в течение всего времени культивирования рост бифидобактерий зависел от соотношения олигосодер-жащих продуктов в среде. Установлено, что B.adolescentis Г7513 имел минимум популяции в средах с КТ в пределах 1,4-2% в течение первых 6 часов культивирования, и лагфаза в средах с 2% КТ более продолжительна в сравнении с 2% ССС. В дальнейшем количество КОЕ неоднозначно зависело от уменьшения доли КТ в среде. Популяция увеличивалась в средах с содержанием КТ в пределах 0,4-0,9% в течение 12 часов, в средах с 0,5 -1,0

% - в последующие 6 часов. Доля ССС в этих случаях соответственно составила 1,1-1,6%, 1,5 - 0,5 %. По окончании эксперимента (24 часа) отмечен максимум КОЕ (lg КОЕ = 9,4-9,64) при культивировании в средах с 0,5-1,1% КТ и 1,5%-0,9% ССС, причем величина максимума несколько превысила результаты культивирования на стандартной БС-среде (см. рис.7).

z=6,827+0,189*х+0,001 *у-0>18*х*х+0,008*х*у+0,004*у*у

■1 6,743

7,000

■1 7,257

яга 7,514

О 7,771

а 8,028

ИИ 8,285

■1 8,541

■1 8.798

9,055

■1 above

Рисунок 7 - Результаты культивирования B.adolescentis Г7513 в синтетической среде с добавлением КТ и ССС

Для выбора оптимального соотношения олигосахаридсодержащих продуктов определяли выживаемость выросших колоний B.adolescentis Г7513 в исследуемых средах, (табл.1)

Данные табл.1 определяют предпочтение комбинирование в среде 0,5% КТ и 1,5% ССС как бифидогенной композиции олигосахаридсодержащих продуктов, обеспечивающей эффективный рост и выживаемость B.adolescentis Г7513.

Таблица 1- Выживаемость выросших колоний В.асЫезсепЙБ Г7513 в синтетических средах с добавлением олигосахаридсодержащих продуктов

Наименование синтетических сред % выживаемости

2% КТ 14

1,5% КТ + 0,5% ССС 28

1%КТ+ 1%ССС 37

0,5% КТ+ 1,5% ССС 68

2% ССС 28

БС-среда 75

Среда без углеводов 2

3.3 Разработка технологии синбиотической пищевой добавки

В технологии использованы полученные нами данные о целесообразности применения растительных олигосахаридсодержащих продуктов в составе синтетических сред для бифидобактерий, сухая соевая сыворотка и концентрат топинамбура в установленных оптимальных соотношениях включены в органические синтетические среды для получения инокулята на стадиях I и II генерации. Среды имели следующий состав, г/л: сухая соевая сыворотка - 15; концентрат топинамбура - 5; гидролизат казеина - 30; экстракт пекарских дрожжей - 5; цистеин - 0,5; аскорбиновая кислота -0,25; твин- 80 - 1; К2НРО„ - 2; Мё80_, - 0,2; МпБ04 - 0,05; СН3СО(Жа -0,5; агар-агар - 0,75; дистиллированная вода - до литра.

Для приготовления биомассы бифидобактерий предпочтение отдают естественным питательным средам. Чаще всего стерилизованное обезжиренное молоко: стандартное, с повышенным содержанием сухих веществ с добавлением различных стимуляторов роста бифидобактерий. В своих исследованиях обогащали обезжиренное молоко 1,5% сухой соевой сывороткой и 0,5% концентрата топинамбура и изучали возможность использования его в качестве питательной среды для бифидобактерий.

Очевидно, что интенсивность роста В.асЫезсепйэ Г7513 в синтетической органической среде несколько выше, чем в обезжиренном молоке с добавлением олигосахаридсодержащих продуктов (рис.8).

Фаза логарифмического роста в обоих случаях наступает после 6 часов культивирования, но длится дольше в обезжиренном молоке: 12 часов по сравнению с 6 часами в синтетической среде. Продолжительность ста-

ционарной фазы во втором случае также несколько больше. Максимальное количество бифидобактерий обнаружено в первой среде на момент 18 часа (1ц КОЕ = 10,28 /г), во второй максимум достигнут на 24 часов культивирования (1§ КОЕ =9,52 /г). Отмечено, что после 30 часов в первом случае и 36 - во втором наступает фаза отмирания микроорганизмов, т.е. культивирование по достижении этого времени нецелесообразно

«

s &

<D

ю о

4 _

5 Щ •fo

ю о

со

tg

tr S ч

о «

00

5,50

0

48

6 12 18 24 30 36 42 Продолжительность культивирования, часы

синтетическая среда с 1,5% ССС + 0,5 % КТ —обезжиренное молоко с 1,5% ССС + 0,5% КТ

Рисунок 8 - Результаты культивирования B.adolescentis Г7513 в синтетической среде и обезжиренном молоке с добавлением КТ и ССС

Вместе с тем, скорость роста и количество биомассы B.adolescentis Г7513 на вновь полученной среде удовлетворяли требованиям, предъявляемым в технологических процессах культивирования пробиотических культур.

Эффективность предложенной питательной среды определяли, оценивая культивирование в ней в сравнении с обезжиренным молоком, с обезжиренным молоком с добавлением «Лактусана».

При культивировании в обезжиренном молоке с добавлением соевой сыворотки и концентрата топинамбура (рис.9) бифидобактерии имели бо-

лее динамичную лаг- и логфазы, достигали максимума в сравнении с другими условиями (на 24 часа - ^ КОЕ/г = 9,52), пребывали в стационарной фазе более длительно. Результаты указывают, что добавление пребиотиков к обезжиренному молоку стимулирует В.асЫезсепйз Г7513, причем комплекс растительных пребиотических продуктов более результативен.

Продолжительность культивирования, часы —обезжиренное молоко —♦— обезжиренное молоко с 1,5% ССС + 0,5% КТ обезжиренное молоко с 0,3% "Лактусана"

Рисунок 9 - Результаты культивирования B.adolescentis Г7513 в обезжиренном молоке с добавлением пребиотических ингредиентов

Новую пищевую добавку проектировали как сухую, применяя в ее технологии лиофильное консервирование, при котором обязательным условием является добавление к биомассе криозащитных веществ. Исследуемые олигосахаридсодержащие продукты испытывали в качестве компонентов криозащитных сред, дополнительных к стандартной сахарозо-желатозной среде (сахароза 10%, желатин 5%, натрий лимоннокислый 5%,

дистиллированная вода) или заменяющих равное количество сахарозы. Стерильные криозащитные среды смешивали с биомассой B.adolescentis Г7513 в соотношении 10:1, разливали в стерильные флаконы по 1-1,5 мл, замораживали при температуре минус 45 °С и лиофильно высушивали в аппарате «LZ-45» при температуре минус 40-45 °С и давлении 50 мкм рт.ст. в течение 45 часов.

Результаты, представленные в табл.2, свидетельствуют, что выживаемость бифидобактерий в исследуемых средах составила 84-96%.

Таблица 2 - Выживаемость бифидобактерий B.adolescentis Г751

при лиофильном высушивании в различных защитных средах

Наименование среды До высушивания, Ig КОЕ/мл После высушивания lg КОЕ/мл

Сахарозо-желатозная 8,5 ± 0,2 7,1 ±0,2

Сахарозо-желатозная + 1,5% ССС + 0,5% KT 8,5 ± 0,2 8,2 ± 0,2

Сахароза-желатозная -2% сахарозы + 1,5% ССС + 0,5% KT 8,5 + 0,2 7,7 ±0,2

Добавление исследуемых продуктов к стандартной сахарозо-желагозной среде максимально способствовало сохранению жизнеспособности В^окэсеп^Б Г751 и в конечном итоге обеспечило содержание бифидобактерий в пищевой добавке в пределах, нормируемых СанПиН 2.3.2.1078-01 (не менее 108 КОЕ/г).

Технология пищевой синбиогической добавки, основанная на результатах приведенных исследований и представленная на рис.10, была апробирована условиях ФГ'УП «Краснодарская биофабрика». Во всех применяемых средах: сишетической, питательной, защитной - был использован предложенный комплекс растительных пребиотических продуктов (0,5% концентрат топинамбура и 1,5% сухой соевой сыворотки).

По внешним показателям синбиотическая пищевая добавка представляла собой кристаллическую или пористую массу разных отгенков белого или кремового цвета, со скоростью растворения в воде -1-2 мин. Остаточная влажность не превышала 4,0 ± 0,2%.

Рисунок 10 - Технологическая схема получения пищевой синбиотической добавки

Готовую пищевую добавку хранили при температуре 4 + 2 °С в течение 1 года и оценивали жизнеспособность бифидобактерий в течение этого срока хранения (табл.3.)

Данные табл.3 позволяют утверждать, что срок хранения должен быть лимитирован 8 мес., т.к. после этого срока в партиях для анализа на-

ряду со стандартными, обнаруживались флаконы, в которых ^ КОЕ был ниже, нормируемого СанПиН 2.3.2.1078-02 (например, ^ КОЕ/г=7,8-7,9). Таблица 3 -Жизнеспособность В.асМезсеп^Б Г7513 в составе . синбиотической пищевой добавки в процессе хранения

Показатель Срок хранения, мес.

0 2 4 6 8 10 12

Lg КОЕ/г 8,4+0,2 8,4+0,2 8,4+0,2 8,2+0,2 8,2+0,2 8,0+0,2 8,0+0,2

Установлено, что по окончании рекомендуемого срока хранения а

синбиотическая пищевая добавка проявляет высокую антагонистическую активность по отношению к Е.соН и Б.аигеиз, подавляя их развитие в сравнении с контролем соответственно на 87 и 20%.

Нормируемые СанПиН 2.3.2.1078 -02 микробиологические и показатели безопасности не превышали установленных нормативов, следовательно, пищевая добавка отвечает гигиеническим требованиям, предьяв-ляемым к подобным продуктам.

ВЫВОДЫ

Выполнено экспериментальное исследование бифидогенных свойств растительных олигосахаридов и содержащих их продуктов в отношении пяти штаммов бифидобактерий выделенных от людей видов, по результатам которого обоснована, разработана и реализована в производственных условиях технология синбиотической пищевой добавки.

1. Впервые определена селективность В.ЫЯс1ит 791, В.1опцшп В379М, В.асЫеэсепйз Г7513, В.Ьгеуе 79-119, В.тГапИв 73-15 в отношении инулина, раффинозы и стахиозы. Рекомендовано использование инулина, раффинозы и стахиозы в качестве углеводных компонентов синтетических : сред для культивирования В.1огщит В379М, В.а^езсепЙБ Г7513, В.Ьгеуе

79-119.

2. Установлено, что применение в синтетической среде инулина, раффинозы и стахиозы в соотношении 0,5:1,0:0,5 максимально стимулирует культивирование В.асЫеБсепгЬ Г7513.

3. Впервые определено бифидогенное действие концентрата топинамбура по ТУ9379-003-11866470-95 и сухой соевой сыворотки по ТУ 9199-072-02067862-2002 при культивировании B.longum В379М, B.adolescentis Г7513, В.breve 79-119. Установлено, что концентрат топинамбура предпочтителен в составе питательной среды в сравнении с инулином.

4. Установлено, что сухая соевая сыворотка в составе синтетических сред стимулирует B.longum 379 М и B.adolescentis Г 7513 в равной степени с соевыми олигосахаридами.

5. Показана возможность реализации бифидогенных свойств сухой соевой сыворотки: собственно как синтетической среды для бифидобакте-рий, ее эффективного ингредиента или дополнительного стимулятора к существующей среде.

6. Установлено, что при культивировании в сухой соевой сыворотке B.longum 379 М не изменяет свои основные физиолого-биохимические свойства: сохраняет антибиотикоустойчивость, устойчивость к 20% желчи, 0,4% фенола, 4 % NaCl, развивается при рН 7,0-9,0.

6. Медико-биологическими испытаниями доказано, что соевая сыворотка оказывает коррегирующее воздействие на микробиоценоз толстого, кишечника крыс после курса антибиотикотерапии и рекомендована к применению в качестве пребиотического ингредиента в биотехнологии и микробиологии.

7. Комбинирование 0,5% концентрата топинамбура и 1,5% сухой соевой сыворотки впервые определено как бифидогенная композиция олиго-сахаридсодержащих продуктов, обеспечивающая максимально эффективный рост и выживаемость B.adolescentis Г7513 в синтетических средах.

8. Установлена эффективность использования бифидогенной композиции растительных олигосахаридсодержащих продуктов при добавлении к обезжиренному молоку при накоплении биомассы B.adolescentis Г7513.

9. Впервые предложено применение концентрата топинамбура и сухой соевой сыворотки как добавок к сахарозо-желатозной криозащитной среде. Доказано, что такой прием обеспечивает сохранение жизнеспособ-

ности не менее 108 КОЕ/г В.асМезсепйэ Г751 при лиофильном высушивании и последующем хранении пищевой добавки в течение 8 мес.

10. Разработана, реализована в проекте ТУ 9389-089-02067862-2003, апробирована в промышленных условиях технология синбиотической добавки на основе бифидобактерий В.аёокзсепПБ Г751 и растительных оли-госахаридсодержащих продуктов, обладающей пробиотической и антагонистической активностью.

Основные положения диссертации опубликованы в следующих научных работах:

1. Бархатова Т.В., Садовая Т.Н. Питательные среды для бифидобактерий (учебное пособие для работников АПК) - Краснодар, Изд-во КРИА, 2003. -13 с.

2. Бархатова Т.В., Садовая Т.Н. Сухая соевая сыворотка как элемент питания бифидобактерий // Сборник научных трудов КРИА, 2003, вып. 12, с.231

3. Бархатова Т.В., Садовая Т.Н. Культивирование бифидобактерий на питательной среде с использованием соевой сыворотки // Материалы конференции «Актуальные направления развития экологически безопасных технологий производства, хранения и переработки сельскохозяйственной продукции», Воронеж, 2003.

4. Бархатова Т.В., Садовая Т.Н. Сравнительная характеристика бифидоген-ных свойств продуктов, содержащих олигосахариды //Материалы конференции «Региональные производители: их место на современном рынке товаров и услуг», Красноярск, 2003.

5. Бархатова Т.В., Садовая Т.Н. Оптимизация питательной среды в технологии синбиотической добавки //Изв.вузов.Пищ.технол., 2003 , №5-6,с. 124

6. Бархатова Т.В., Садовая Т.Н. Изучение селективности бифидобактерий в отношении растительных пребиотических олигосахаридов // Изв.вузов. Пищ.технол., 2003 , №5-6, с. 122

7. Садовая Т.Н., Бархатова Т.В. Некоторые технологические аспекты производства синбиотической пищевой добавки // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Молочные продукты лечебно-профилактического назначения - основа здорового питания», 6-11 октября 2003г, Адлер - с.37

Подписано в печать 16.10.03 Бумага офсетная Уел печ.л.1,0 Заказ №172 Тираж 100 экз. Отп ООО «Фирма Тамзи» г. Краснодар тел. 55-73-16

»17069

2.0ОЗ

\7

Введение

1 .Аналитический обзор

1.1 Пробиотики - эффективное функциональное питание 1.1.1 Бифидобактерии как основа пробиотиков 1.1.2. Бифидосодержащие пробиотические препараты 1.1.3 Технологические аспекты производства бифидосодержащих пробиотиков

1.2. Пребиотики, целесообразность их использования

1.2.1 Пребиотический потенциал сухой соевой сыворотки 1.3 Синбиотики - перспективная тенденция пробиотического питания

2. Постановка эксперимента

2.1 Цели, задачи исследования

2.2 Схема исследований

2.3. Объекты и методы исследований

3 Результаты экспериментов, их обсуждение

3.1. Определение селективности бифидобактерий в отношении растительных пребиотических олигосахаридов

3.2. Бифидогенные свойства растительных олигосахаридсодержащих продуктов

3.2.1 Инулинсодержащие продукты

3.2.2 Продукты на основе соевых олигосахаридов

3.2.3 Создание бифидогенного комплекса на основе растительных олигосахаридсодержащих продуктов

3.3 Разработка технологии синбиотической пищевой добавки

3.4 Промышленная апробация разработанной технологии и оценка качества синбиотической пищевой добавки на основе бифидобактерий и соевых олигосахаридов

Выводы

Широкое распространение дисбиотических состояний среди взрослых и детей, а также отсутствие перспективы кардинального улучшения в ближайшие годы условий биоэкологического существования для основной массы населения обуславливает реальные и потенциальные потребности отечественного рынка синбиотиков. Эти функциональные продукты способны корректировать микробиоценоз кишечника как за счет колонизации внешними пробиотическими микроорганизмами, так и активизацией собственной полезной микрофлоры, и тем самым обеспечивать формирование и поддержание иммунного статуса человека.

Расширение ассортимента и развитие технологии синбиотиков определяется поиском, изучением и предложением к использованию новых видов и штаммов пробиотических культур, совершенствованием условий их культивирования и концентрирования, также актуален выбор пребиотических факторов, исследование степени их синергетического действия для конкретных пробиотических композиций.

Пребиотические свойства растительных олигосахаридов определяют их использование при создании синбиотиков. Известны факты применения в этих целях фрукто-, галакто-, глюкоолигосахаридов, в виде как изолированных углеводов, так и продуктов, их содержащих. Эффективность использования пребиотических продуктов дифференцирована в зависимости содержания в них пребиотика и его свойств, других компонентов, от вида пробио-тического микроорганизма, степени синергизма про- и пребиотиков, но тем не менее такие ингредиенты синбиотиков экономически целесообразнее в сравнении с рафинированными веществами.

Инулин, пребиотические свойства которого хорошо изучены и популяризируются в настоящее время, является биологически ценным началом концентрата топинамбура и составляет 90% сухих веществ этого продукта.

Соевые олигосахариды (раффиноза и стахиоза) определены в сыворотке, образующейся в производстве белковых концентратов. Кроме того, сухая соевая сыворотка по ТУ 9199-072-02067862-2002 содержит пептиды, свободные аминокислоты.

Такой химический состав позволяет классифицировать названные продукты как имеющие пребиотический потенциал, реализация которого возможна в технологии синбиотических продуктов.

Изложенные факты дают основание для исследований с целью разработки технологии нового синбиотического продукта и определения целесообразности использования в ней растительных олигосахаридсодержащих продуктов,в частности концентрата топинамбура и соевой сыворотки.

1 .АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР

выводы

Выполнено экспериментальное исследование бифидогенных свойств растительных олигосахаридов и содержащих их продуктов в отношении пяти штаммов бифидобактерий выделенных от людей видов, по результатам которого обоснована, разработана и реализована в производственных условиях технология синбиотической пищевой добавки.

1. Впервые определена селективность B.bifidum 791, B.longum В379М, B.adolescentis Г7513, B.breve 79-119, B.infantis 73-15 в отношении инулина, раффинозы и стахиозы. Рекомендовано использование инулина, раффинозы и стахиозы в качестве углеводных компонентов синтетических сред для культивирования B.longum В379М, B.adolescentis Г7513, B.breve 79-119.

2. Впервые установлено, что применение в синтетической среде инулина, раффинозы и стахиозы в соотношении 0,5:1,0:0,5 максимально стимулирует культивирование B.adolescentis Г7513.

3. Впервые доказано бифидогенное действие концентрата топинамбура по ТУ9379-003-11866470-95 и сухой соевой сыворотки по ТУ 9199-07202067862-2002 при культивировании B.longum В379М, B.adolescentis Г7513, B.breve 79-119. Установлено, что концентрат топинамбура предпочтителен в составе питательной среды в сравнении с инулином.

4. Впервые установлено, что сухая соевая сыворотка в составе синтетических сред стимулирует B.longum 379 М и B.adolescentis Г 7513 в равной степени с соевыми олигосахаридами.

5. Показана возможность реализации бифидогенных свойств сухой соевой сыворотки: собственно как синтетической среды для бифидобактерий, ее эффективного ингредиента или дополнительного стимулятора к существующей среде.

6. Установлено, что при культивировании в сухой соевой сыворотке B.longum 379 М не изменяет свои основные физиолого-биохимические свойства: сохраняет антибиотикоустойчивость, устойчивость к 20% желчи, 0,4% фенола, 4 % NaCl, развивается при рН 7,0-9,0.

6. Медико-биологическими испытаниями доказано, что соевая сыворотка оказывает коррегирующее воздействие на микробиоценоз толстого кишечника крыс после курса антибиотикотерапии и рекомендована к применению в качестве пребиотического ингредиента в биотехнологии и микробиологии.

7. Комбинирование 0,5% концентрата топинамбура и 1,5% сухой соевой сыворотки впервые определено как бифидогенная композиция олигосахаридсодержащих продуктов, обеспечивающая максимально эффективный рост и выживаемость B.adolescentis Г7513 в синтетических средах.

8. Установлена эффективность использования бифидогенной композиции растительных олигосахаридсодержащих продуктов при добавлении к обезжиренному молоку при накоплении биомассы B.adolescentis Г7513.

9. Впервые предложено применение концентрата топинамбура и сухой соевой сыворотки как добавок к сахарозо-желатозной криозащитной среде. Доказано, что такой прием обеспечивает сохранение жизнеспособности не о менее 10 КОЕ/г B.adolescentis Г751 при лиофильном высушивании и последующем хранении пищевой добавки в течение 8 мес.

10. Впервые разработана, реализована в проекте ТУ 9389-09902067862, апробирована в промышленных условиях технология синбиотиче-ской добавки на основе бифидобактерий B.adolescentis Г751 и растительных олигосахаридсодержащих продуктов, обладающей пробиотической и антагонистической активностью.

1. Концепция государственной политики в области здорового питания населения РФ на период до 2005 г: Постановление Правительства РФ №917 от 10.08.98 г.

2. Тихомирова Н.А. Технология продуктов функционального питания. М.ЮОО «Франтера», 2002, 213 с

3. Определение безопасности и эффективности БАД к пище: Методические указания МУК 2.3.2.721-98 М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 1999 - 87 с.

4. Доронин А.Ф., Шендеров Б.А. Функциональное питание М.: ГРАНТЪ, 2002.-296 с.

5. Каширская Н.Ю. Значение пробиотиков и пребиотиков в регуляции кишечной микрофлоры//Русский медицинский журнал, 2000 №13-14 v

6. Лучшев В., Шахмарданов М, Корнилова И. Шигеллез Флекснера. Конспект врача //Наука, 2000 №46

7. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. В 3-х томах -М.: Изд-во ГРАНТ, 1998.

8. Ганина В.И. Пробиотики. Назначение, свойства и основы биотехнологии -Монография. М.: МГУПБ, 2001 169 с.

9. Collins J.K., Thornton G., Sullivan G.O. Selection of probiotic strains for human app!ications//Internetinal dairy journal 1998, 8 - p.324-328

10. Probiotics: mechanisms and establiched effects /C.Ouweehand, Pirkka V.Kirjavainen, Colette Shortt, Seppo Salminen//Internetinal dairy journal 1999, 9 -p.43-52

11. Sanders Mary Ellen. Ovirview of functional foods: emphasis on probiotic bacteria // International dairy journal 1998, 8 -p.341-347

12. Sanders Mary Ellen. Probiotics //Food Nechnologe 1999 - vol.53 -N11-p.69-76

13. Л.В.Красникова, И.В.Салахова, В.И.Щаробайко, Т.М.Эрвольдер. Бифидобактерии и использование их в молочной промышленности: Обзорная информация. М.:АгроНРШТЭИММП, 1991, 32 с.

14. Дисбактериоз кишечника /В.В.Лебедев, В.Н.Городин, Л.И.Солодухина, В.П.Голенский: Учебное пособие Краснодар - «Советская Кубань», 1999 — 64 с.

15. Беюл Е.А., Куваева И.Б. Дисбактериозы кишечника и их клиническое значение. // Клин. мед. 1986. -№11.- С.37-44.

16. Фрампольская Т.В. Бифидобактерии и их использование в технологии молочных продуктов: Учебное пособие Краснодар, Изд-во КРИА, 2001 - 40 с.

17. Выделение, идентификация и некоторые биологические свойства бифидобактерий из кишечника человека. Карпушина С.Г., Тюрин М.В., Иванов А.А.Левшиц В.А///Биотехнология, 1998 с.28-36

18. Бифидобактерии: биология, роль в жизнедеятельности человека и животных. Производство бифидосодержащих продуктов./А.В.Гудков, С.А.Гудков. М.Я.Козловская, Г.Д.Перфильев: Углич, 1999 64 с.

19. Halpin Dohnalek M.I., Hillty M.D. Bynum D.G. Способ и препарат для предупреждения диареи: Патент США № 5902578 А. Опубл. 11.05.99

20. Штамм бактерий Bifidobacterium breve, используемый для приготовления лечебно-диетических продуктов питания: Пат.2078814 Россия МКИ6 е12 № 1/20, А23 С 9/12//(С 12№ 1 /20, СК1:01)/Лянная A.M., Левченко Т.А., Сильчен-ко Н.А., Лисунова С.А.

21. Вербина Н.М., Каптерева Ю.В. Микробиология пищевых производств -М.: Агропромиздат, 1988.- 256 е.- (учебники и учеб. пособия для учащихся техникумов)

22. Микробиологические основы молочного производства: Справочник/ Л.А.Банникова, Н.С.Королева, В.Ф.Семенихина; под ред. канд.техн.наук Я.И.Костина М.:Агропромиздат, 1987 - 400 с.

23. Нецепляев С.В., Панкратов А.Я. Лабораторный практикум по микробиологии пищевых продуктов животного происхождения — М.: Агропромиздат, 1990-223 с.

24. Меджидов М., Султанов 3. Использование непищевого сырья в производстве микробиологических питательных сред Махачкала: Даг.кн.изд-во, 1986,-72 с.

25. Максимов В.И. Углеводные стимуляторы бифидобактерий // Биотехнология, 1991, №6, с.3-7

26. Биохимия растительного сырья /В.Г.Щербаков, В.Г.Лобанов, Т.Н.Прудникова и др. Под ред. В.Г.Щербакова 0 М.: Колос, 1999 376 с.

27. Плешков Б.П. Биохимия сельскохозяйственных растений 5-е изд., доп. И перераб - М.: Агропромиздат, 1987 - 494 с.

28. Степаненко Б.Н. Химия и биохимия углеводов (полисахаридов): учеб. Пособие для вузов М.:Высш.школа, 1987 - 256 с.

29. Hayakawa К., Mizutani J., Wada К. et al. Effects of soybean oligosaccharideson human faecal microflora//Microb. Ecol. Health Dis., 1990, v/3, 293-303

30. Mitsuoka Т., Hidaka H., Eida T. Effect of FOS on intenstinal microflora//Die Nahring 1987, 31 p.427-436

31. Лунев A.M. Разработка рациональной утилизации соевой сыворотки. -Дисс.на соиск. учен, степ.канд.техн. наук Краснодар, 2002 -125с.

32. С.А.Шевелева Пробиотики, пребиотики и пробиотические продукты. Современное состояние вопроса. //Вопросы питания, 2, 1999 -с.32-39

33. Г.И.Гончарова. Изучение бифидобактерий, разработка препарата «Сухой бифидумбактерин» и его эффективность при кишечных заболеваниях детей первого года жизни.: Автореферат дисс. на соиск. уч. степ, канд.техн.наук: М., 1970,24 с

34. Бархатова Т.В., Садовая Т.Н. Питательные среды для бифидобактерий: Учебное пособие для работников лабораторий молочной промышленности и биотехнологов- Краснодар, Изд-во КРИА, 2003 25 с.

35. Иванова Е.В.Разработка технологии пищевой добавки с пробиотическими свойствами Автореферат дисс.на соискание уч. степ. канд. техн. наук - Москва, 2003, 23 с

36. Разработка питательной среды для культивирования и накопления ацидофильной палочки/В.В.Молочников, Н.М.Гостищева, О.В.Чаблин, Т.Г.Степанова // Биотехнология, 1999, №3,с.56

37. Бевз Н.И.Новый препарат-эубиотик на основе двух видов бифидобактерий (B.bifidum, В.1оп§шп):Дисс.на соиск. ученой степени канд.биол.наук, Москва, 1991 -210 с

38. Лагода И.В. Исследование основных факторов при сублимационной сушке, влияющих на качество и стойкость заквасок молочнокислых бактерий.: Дисс.на соиск. уч. степ.канд техн.наук, М., 1972г. -250 с.

39. Тумунова С.Б. Разработка технологии производства сухого концентрата бифидобактерий Автореферат дисс.на соиск. уч. степ, канд.техн.наук, Улан-Удэ, 1995

40. Актуальные проблемы криобиологии /Под общ. Ред. Н.С.Пушкаря и А.М.Белоуса-Киев: Наукова думка, 1981 608 с.

41. Беккер М.Е. Введение в биотехнологию М.: Пищ. пром-сть, 1978, - 230 с.

42. Fuller R., Gibson G.R. Probiotics and prebiotics: microflora management for improved gut health. Clin Microbiol Infect 1998; 4: 477-480

43. Gibson G.R., Fuller R. Aspects of in vitro and in vivo research approaches directed toward identifying probiotics and prebiotics for human use. J Nutr 2000; 130 (2)Suppl: 391S-395S.

44. Van Loo, J.A Cummings, J.A Delzenne, N.A Englyst et al. Functional food properties of non-digestible oligosaccharides: a consensus report from the ENDO project (DGXII AIRII-CT94-1095). Br J Nutr 1999; 81(2): 121-32.

45. Алибаев P.M. «Астролин» против диабета.//Парафармацевтика, 2002, №8 - c.45

46. Yun J.W. Fructooligosaccharides — Occurrence, preparation and application. Enzime a microbial Nechnol 1996, 19 — p.107-117

47. Gibson G.R., Beatty E.R., Wang X., J.H. Cumming Selective stimulation of Bifidobacteria in the human colon by oligifructose and inulin // Gastroenterology, 1995, v. 108, 20-24

48. Jenkins D.J., Kendall C.W., V.Vuksan. Inulin, oligofructose and intestinal function//J.Nutrition, 1999, v.129 (№7 Suppl), 1431-1433.

49. B.Klessen, B.Sykura, H.-J.Zunft, M.Blaut. Effects of inulin and lactose on fecale microflora, microbial activity, and bowel habit in elderly constipated persons1-3// Am. J. Clin. Nutr. 1997, v. 65, p.1397-1402

50. M. B.Roberfroid. Functional fibres. Inulin and oligofructose.// International food ingredients, 2000, N3, p. 31-33

51. Голубев B.H., Волкова И.В., Кушалаков X.M. Топинамбур. Состав, свой ства, способы переработки, области применения.-Астрахань: Издательско полиграфический комплекс «Волга», 1995.-81 с.

52. Использование топинамбура в консервной промышленности./Г.Г.Снапян, З.А.Ченченко, С.С.Абовян, Т.А.Мкртчян, Н.А.Саркисян, Г.А.Никогосян, С.Г.Геворкян //Хранение и переработка сельхозсырья, 1998, №6 с.27-29

53. Кочнев Н.К. Топинамбур (земляная груша) — биоэнергетическая культура. Иркутск: ТОО «Биотек», 1997 - 31 с.

54. Материалы 1-ой Международной научно-практической конференции «Растительные ресурсы для здоровья человека (возделывание, переработка, маркетинг), Москва Сергиев Посад, 23-27 сентября 2002 г. - М.: «Арес»,2002. - 456 с.

55. Бредихина В.А. Разработка технологии производства профилактических пюреобразных консервов на основе топинамбура: Дисс. на соиск. уч.степ. канд. техн. наук / КубГТУ-Краснодар, 1997.-164 с.

56. Мамедова Э.И. Биохимическое обоснование разработки профилактических напитков на основе топинамбура: Дисс. на соиск. уч.степ, канд. техн. наук / КубГТУ.-Краснодар, 1998.-165 с.

57. Зеленков В.Н., Шаин С.С. Многоликий топинамбур в прошлом и настоящем //Химия и компьютерное моделирование. Бутлеровские сообщения. 2001, №5

58. Перспективные направления использования топинамбура в пищевой промышленности / Л.Д.Бобровник, В.Г.Высоцкий, И.С.Гулый, Н.В.Ремесло и др. //Изв.вузов. Пищевая технология, 1990, №4. с.12-13

59. Родионова Н.С. Развитие физико-химических и биотехнологических основ производства функциональных молочных продуктов: Автореферат дисс. на соиск. уч. степ. докт. техн. наук, Воронеж, 2000, 41 с.

60. Полянский К.К, Родионова Н.С., Глаголева Л.Э. Топинамбур в молочных продуктах лечебно-профилактического назначения //Молочная пром-сть, 1997, №4 с.23-24

61. Глаголева Л.Э. Исследование и разработка технологии комбинированных молочных продуктов с модифицированным углеводным составом: Дисс. на соиск. уч.степ. канд.техн.наук, Воронеж, 1998.- 218 с.

62. Шендеров Б.А. Пробиотики и функциональное питание М., Изд-во «Грант», 2001, т. 1 -3

63. Saito Y. Metabolism of soybean oligosaccharides in the intestine//J. germfree life gnotobiol, 1992, v.22, N1, 13-17

64. Niness K.R. Inulin and oligofructose: what are they?//J.Nutrition, 1999,v.l29, №7 (Suppl), 1402-1406

65. Fook Laura J., Roy Fuller, Glenn R. Gibson. Prebiotics, probities and human gut microbiology //Internanional dairy journal.-1999, v.9 p.53-61.

66. Beneficial Bacteria Breakthrough in New "Optiflora" Technology; Freindly Bacteria Promote Colon Healt // Business Wire, (12 Novembre 1998)? Pp.0270/

67. Сборник ГОСТов «Молоко. Молочные продукты и консервы молочные», 1989 -М: Изд-во стандартов, 437с.

68. Инихов Г.С., Врио Н.П. Методы анализа молока и молочных продуктов.-М.: Пищ. пр-сть, 1971.-432 с.

69. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов. Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы. СанПиН 2.3.2.1078-01.- Москва: ФГУП «ИнтерСЭН», 2002 168 с.

70. ГОСТ 30178-96 «Сырье и продукты пищевые. Атомно-абсорбционный метод определения токсичных элементов. Межгосударственный стандарт»

71. ГОСТ 26927-86 «Сырье и продукты пищевые. Методы определения ртути».

72. ГОСТ 26930-86 «Сырье и продукты пищевые. Методы определения мышьяка»

73. ГОСТ 26932-86 «Сырье и продукты пищевые. Методы определения свинца»

74. ГОСТ 26933-86 «Сырье и продукты пищевые. Методы определения кадмия»

75. МУ 5178-90 «Методические указания по определению ртути в пищевых продуктах»

76. ГН 1.1546-96 «Гигиенические нормативы содержания пестицидов в объектах окружающей среды»

77. ГОСТ 23452-79 «Молоко и молочные продукты. Методы определения остаточных количеств хлорорганических пестицидов»

78. ГОСТ 51331-99 «Продукты молочные. Йогурты. Общие технические условия» (в части определения молочнокислых микроорганизмов, определения бифидобактерий в йогурте).

79. ГОСТ 30519-97 (ГОСТ Р 50480-93) «Продукты пищевые. Методы определения бактерий рода Salmonella»

80. ГОСТ 30347-97 «Молоко. Метод выявления и определения Staphylococcus aureus»

81. ГОСТ 10444.12-88 «Продукты пищевые. Методы определения дрожжей и плесневых грибов»

82. ГОСТ 10444.15-94 «Продукты пищевые. Методы определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов»

83. ГОСТ 10444.2-94 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества Staphylococcus aureus»

84. ГОСТ 30518-97 (ГОСТ Р 50474-93) «Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформ-ных бактерий)

85. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. Т.2: Пер. с англ. / Под ред. Дж. Хо-улта, Н. Крига, П. Смита, Дж. Стейли, С. Уилльямса.-М.: Мир, 1997.-268 с.

86. Жвирблянская А.Ю., Бакушинская О.А. Микробиология в пищевой промышленности М.: 1966, - 452 с.

87. Исследование воздействия олигостимулина и лактулака на микробиоценоз толстого кишечника крыс: Отчет о НИР Иваново, 1992 - 13 с.

88. Бактериологическая диагностика дисбактериоза: Методические рекомендации для врачей. Казань, 1989. - 25 с

89. Львовский Е.Н. Статистические методы построения эмпирических фор-мул.-М.: Высшая школа, 1998.-239 с.

90. Селиванов М.Н., Фридман А.Э., Кудряшова Ж.Ф. Качество измерений: Метрологическая справочная книга Л.: Лениздат, 1987.-295 с.

91. Тойберг П. Оценка точности результатов измерений: пер. с нем.-М.: Энер-гоатомиздат, 1988.-88 с.

92. Пиотровский Я. Теория измерений для инженеров: Пер. с польск М.: Мир, 1989.-335 с.

93. Федеров В.Г. Планирование и реализация экспериментов в пищевой промышленности / В.Г. Федоров, А.К. Плесконос, М.: Агропроиздат 1980.-240с.

94. Боровиков В.П. Программа STATISTICA для студентов и инженеров -2-е изд. -М.: КомпьютерПресс, 2001 301 с.

95. Додж М., Кината К., Стинсон К. Эффективная работа с Microsoft Exel 97 -СПб: Питер, 1998- 1072 с.

96. Сборник инструкций по селекции молочнокислых бактерий и бифидобактерий и подбору заквасок для кисломолочных продуктов. Москва, 1986

97. Питательная среда для производства жидкого концентрата бифидобактерий /Андреева М.А., Байбаков В.И., Молокеев А.В., Яцентюк P.M., Каих Т.Л., Криницина Э.В., Ильина P.M. //Биотехнология, 1998, №4 с. 76-80

98. Критская И.В. Разработка питательных сред и процесса непрерывного культивирования бифидобактерий: Автореф. дисс.на соиск. уч.степ.канд. техн. наук-М.: Изд-во моск.мед.акад.тим.И.Мсеченова,1997, 37 е.

99. Российская лактулоза XXI век. Научные основы, производство и использование /Под редакцией академика РАСХН А.Г.Храмцова. - М.:, 2000 -107 с.

100. Эрвольдер Н.Ю. Разработка кисломолочного продукта для питания детей школьного возраста: Автореф. дисс. на соиск. уч. степ, канд.техн.наук, -М., 2000-21 с.

101. Гордиенко Е.А. Количественный анализ механизмов криоповреждения и криозащиты при низкотемпературном консервировании биологических суспензий: Автореф. дисс.канд.биол.наук. Киев, 1980 0 25с.

102. Влияние низких температур (-196 °С) и криопротекторов на некоторые виды бактерий /Цуцаева А.А., Сафонова Т.С., Микунский Ю.Е., Воробьева И.И., Иткин Ю.А //Микробиология 1978 - т.47 -№3, с.446-449

103. Сергеев Г.Б., Батюк В.А. Криохимия М.: Химия, 1978 - 296 с.

104. Дузу П. Криобиохимия. Введение. /Пер. с англ. Б.М.Сергеева М.: Мир, 1980.-286 с.

105. Ztimer С. J., Gibson G.R. An overview of probities, prebiotics and simbiotics in the functional food concept: perspectives and futire strategies//Inter. Dairy J.-1998- -Vol.8 N 5/6 - p.437-479