автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.07, диссертация на тему:Разработка биотехнологии инкапсулированных форм пищевых красителей из отходов переработки иглокожих

На правах рукописи

Фищенко Евгения Сергеевна

РАЗРАБОТКА БИОТЕХНОЛОГИИ ИНКАПСУЛИРОВАННЫХ ФОРМ ПИЩЕВЫХ КРАСИТЕЛЕЙ ИЗ ОТХОДОВ ПЕРЕРАБОТКИ

ИГЛОКОЖИХ

Специальность 05.18.07 - Биотехнология пищевых продуктов

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

Владивосток - 2005

Диссертационная работа выполнена на кафедре товароведения и экспертизы продовольственных товаров Института пищевых технологий и товароведения (ИПТТ) Тихоокеанского государственного экономического университета (ТГЭУ)

Научный руководитель: доктор биологических наук,

профессор Каленик Татьяна Кузьминична

Официальные оппоненты: доктор технических наук, профессор

Доценко Сергей Михайлович кандидат биологических наук Советкина Татьяна Михайловна

Ведущая организация: Федеральное государственное унитарное

предприятие Тихоокеанский научно-исследовательский рыбохозяйственный центр

Защита состоится « Ж ноября 2005 года в 14 ч 00 мин на заседании диссертационного совета КМ 212 054 01 в Тихоокеанском государственном экономическом университете по адресу 690950, г Владивосток, Океанский проспект 19, ауд. 148.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Тихоокеанского государственного экономического университета

Автореферат разослан « /У » октября 2005 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат технических наук, доцент

Л О.Коршенко

//jTJV

с

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы Развитие прикладной биотехнологии в области поиска и создания натуральных пищевых красителей для обеспечения высоких органолептических и функциональных свойств продуктов является перспективным научным направлением.

Анализ литературных данных показывает, что производство

растительного сырья. При этом следует отметить, что красители животного происхождения применяются значительно реже, наиболее широко используется краситель красного цвета кармин

Известно, что в качестве красителей из гидробионтов животного происхождения предлагается использовать гемовые пигменты и каротиноиды из криля (Касьянов, 1999; Болотов, 2001)

В последний период XX века в научной литературе появились публикации по выделению каротиноидных пигментов из отходов переработки краба по технологиям, разработанным дальневосточными учеными (Купина 1998; Леваньков, 1999, 2000)

Согласно литературным данным, гидробионты морских и пресноводных акваторий выгодно отличаются от многих наземных и водных организмов значительным разнообразием вторичных метаболитов, среди которых доминирующая часть представлена функциональными соединениями, имеющими биологическую активность (Еляков, 1986, 1988; Лебская, 1998; Oshima, 1998, Jack, 1998). Несмотря на это, пигменты из морских организмов в пищевой промышленности применяются довольно ограничено.

В 80-е годы XX века в Тихоокеанском институте биоорганической химии ДВО РАН велись активные работы по поиску новых биологически

натуральных пищевых красителеи ведется в основном на основе

ГА Л UUI annJIUVD, V—A U1U

ЮС НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА

среди морских ежей (Уткина, 1979).

Установлено, что пигменты морских ежей имеют хиноидную природу и обладают антибиотической, антикоагулянтной, противоопухолевой активностью и могут служить перспективным источником натуральных пищевых красителей, в которых нуждается не только пищевая, но и фармацевтическая промышленность В химическом отношении эти пигменты представляют собой производные юглона и нафтазарина Среди морских животных в большом количестве они найдены только у иглокожих (Уткина, 1979; Скурихин, 1991).

В странах АТР морские ежи Strongylocentrotus intermedins и Strongylocentrotus nudus (тип иглокожие) являются промысловыми видами, их икра издавна считается деликатесом (Лебская, 1999). Панцири и внутренности животных, содержащие пигменты (до 95% от массы тела животного), как правило, оказываются отходами производства, и не используются в традиционных пищевых технологиях

Предложение использовать в качестве пигментсодержащего сырья местной сырьевой базы отходов переработки морских гидробионтов может решить проблему безотходных технологий на пищевых производствах.

Одной из основных биотехнологических проблем применения натуральных пищевых красителей является повышение их стабильности. В этой связи нами были проведены биотехнологические исследования по целесообразности применения липосом в качестве стабилизаторов пищевых красителей из морских гидробионтов.

Данная диссертационная работа посвящена разработке новых форм пищевых красителей из отходов переработки морских гидробионтов Str. intermedius и Str. nudus.

Цель и задачи исследования Учитывая вышеизложенное, целью настоящей работы явились разработка биотехнологии стабильных пищевых пигментов из отходов переработки морских ежей Str. intermedius и Str.nudus

и изучение их качества и безопасности при изготовлении пищевых продуктов

Достижение поставленной цели осуществляли путем решения следующих задач:

- выбор адекватных объектов и методов исследований;

> - оценка сырьевого потенциала морских гидробионтов Str. intermedins

и Str mtdus как продуцентов биологически активных пищевых пигментов f хиноидной природы на период до 2015 г;

- установление особенностей химического состава, влияния на живые системы пигментов морских гидробионтов Str.intermedius и St. nudus\

- обоснование и разработка биотехнологии стабильных липосом с пигментами;

- разработка технологии безалкогольных напитков с использованием пигментов морских ежей в качестве пищевых красителей, характеристика их качества и безопасности.

Научная новизна и практическая значимость

Дано комплексное научное обоснование применения отходов переработки морских ежей St.intermedius и St.nudus в качестве источников пищевых пигментов.

Разработана безотходная биотехнология получения стабильных пищевых красителей из отходов переработки морских ежей Str.intermedius и i Str. nudus

Дана оценка безопасности пигментов морских ежей биологическим методом на тест-культуре Tetrahymena pyriformis in vitro

Разработана биотехнология конструирования мультиламеллярных липосом с пигментами хиноидной природы как способа их стабилизации в процессе хранения.

Научно обоснована технология безалкогольных напитков на основе липосом с пигментами морских ежей и дана характеристика их качества и безопасности

В результате проведенных исследований разработана нормативная документация на «Экстракт концентрированный из морских гидробионтов» ТУ 9238 - 144 - 02067936 - 2005, получено положительное решение по заявке № 2004124260(026128), приоритет от 09 08 2004г на изобретение «Инкапсулированный пищевой краситель и способ его получения».

Результаты исследований внедрены в производство и учебный процесс на кафедрах товароведения и экспертизы продовольственных товаров и пищевой биотехнологии Института пищевых технологий и товароведения ТГЭУ

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1 Продукты переработки морских гидробионтов 81Шегте(Иш и

(панцири, иглы и внутренности) являются продуцентами натуральных пищевых пигментов и могут быть использованы в безотходных пищевых технологиях

2 Пигменты Бь-.ШегтесНия и 67г. пийт являются безопасными и не разрушаются в процессе производства и хранения безалкогольных напитков

3 Мультиламеллярные липосомы из фосфолипидов сои способствуют повышению стабильности пигментов из отходов переработки морских гидробионтов при хранении

Апробация работы Результаты настоящей работы были представлены и доложены на I и II Международном симпозиуме «Пищевые биотехнологии' проблемы и перспективы в XXI веке» (Владивосток, 2000, 2004); III Международной научно-практической конференции «Наука -Техника - Технология на рубеже третьего тысячелетия» (Находка, 2001),

Форуме молодых ученых и студентов «Экономика и экономические знания на рубеже веков» (Екатеринбург, 2001); V Международной научно-технической конференции «Пища. Экология Человек» (Москва, 2003); II Московском международном конгрессе «Биотехнология- состояние и перспективы развития» (Москва, 2003).

Публикации Результаты исследований отражены в 13 работах, три из них находятся в печати.

Структура и объем работы Диссертация состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания объектов и методов исследования (глава 2), результатов собственных исследований (главы 3-6), выводов, списка литературы и приложений Работа изложена на 150 страницах машинописного текста и содержит 27 таблиц, 37 рисунков и 7 приложений Список использованной литературы включает 172 наименования российских и зарубежных авторов.

Благодарности Выражаю глубокую благодарность кмн Шульгину Ю П и к.х.н Набережных Г.А за оказание помощи в проведении экспериментальных исследований.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении дано обоснование актуальности темы, сформулированы цель и задачи исследования, охарактеризованы научная новизна и практическая значимость работы, а также основные положения, выносимые на защиту.

В первой главе представлен аналитический обзор отечественной и зарубежной литературы, посвященный изучению пищевых красителей, особенностям получения, способам увеличения их эффективности и

удлинения сроков хранения. Дан анализ химического состава и особенностей функционального действия пигментов из морских организмов (Str.intermedius и Str.nudus), перспектив их применения в пищевых технологиях. Описаны способы и методы получения липосом, их применение в пищевых технологиях.

Во второй главе даны характеристики объектов и направления экспериментальных исследований Общая схема исследований приведена на рис 1 Научно-исследовательские экспериментальные работы проводились в лабораториях кафедр пищевой биотехнологии, товароведения и экспертизы продовольственных товаров, Инновационного технологического центра Института пищевых технологий и товароведения Тихоокеанского государственного экономического университета, Тихоокеанского института биоорганической химии, Института биологии моря ДВО РАН.

Объектами исследования служили отходы переработки (панцири, иглы, внутренние органы и полостная жидкость) серых Str.intermedius и черных Str. nudus морских ежей Эти два вида вышеуказанных гидробионтов являются промысловыми на Дальнем Востоке.

Морские ежи были выловлены в бухте Суходол Уссурийского залива в июле 2002 г. и предоставлены нам ныряльщиками ТИНРО-центра

Сразу после отлова панцири морских ежей отделяли от внутренностей, промывали пресной водой, измельчали до размера частиц 0,5 см, упаковывали в полиэтиленовые пакеты по 1 кг и хранили в морозильной камере в течение б месяцев при температуре -18+2°С. Внутренности упаковывали в полиэтиленовые пакеты по 0,5 кг и хранили в морозильной камере в течение 6 месяцев при температуре -18+2°С

Качество объектов исследований оценивали по совокупности органолептических, физико-химических, микробиологических показателей и показателей безопасности в соответствии с действующей нормативной документацией.

Рисунок 1 - Общая схема диссертационного исследования

Методы исследований сгруппированы нами по их характеру и приведены в табл. 1.

Таблица 1 - Группы и методы исследований

№ Группы Методы исследований

1 2 3

1 Показатели безопасности 1 Определение содержания токсичных элементов методом атомно-адсорбционной спектроскопии (Пилипенко, 1990) на приборе «Hitachi» (Япония). 1 1. Подготовка проб по ГОСТ 26929 1.2. Свинец по ГОСТ 26932 1.3. Мышьяк по ГОСТ 26930 1.4. Кадмий по ГОСТ 26927 1 5. Ртуть по ГОСТ 26927 2. Определение содержания радионуклидов на приборе УСК «Гамма Плюс» (цезий-137 и стронций -90) по МУК 2 6 1 717

2 Микробиологические показатели 1 Определение уровня санитарно-показательных микроорганизмов 1.1. КМАФАнМ по ГОСТ 10444.15; 1 2 БГКП (коли-формы) по ГОСТ Р 30518, 1.3. St.aureus по ГОСТ 10444.2; 1.4.Патогенные, в том числе Salmonella и L.monocytogenes по ГОСТ Р 30519; 1.5. Сульфитредуцирующие клостридии по ГОСТ 29185

3 Технологические 1 Выделение пигментов из отходов переработки морских гидробионтов осуществлялось с учетом рекомендаций Н.К.Уткиной (1976) 2 Выделение и очистка липидного носителя из отходов производства соевого масла с учетом рекомендаций Т.К. Каленик (1997). 3 Количественное определение классов фосфолипидов (Mangold, 1960; Кейтс, 1975) 4. Разработка технологии безалкогольных напитков с использованием пигментов морских ежей, в том числе в инкапсулированной форме (Ковальская, 1999)

4 Показатели качества и характеристики пигментов как пищевых красителей 1 Органолептические и физико-химические показатели определяли с учетом рекомендаций И.С Лурье (2001) 2. ИК - спектроскопическое исследование пигментов по Р Сильверстейну (1977) на спектрофотометре UR-20 (Karl Zeiss, Германия). 3 Гидрофобность (в системе вода - н-окганол) с учетом рекомендаций В.В.Иванова (2003).

5 Оценка безопасности пигментов из морских гидробионтов биологическим методом 1 Культивирование микроорганизмов проводили с учетом рекомендаций А Д Игнатьева (1980)

1 2 3

на модели тест - системы Те&аЪутепа руп/огтк 2.Уровень ПДК, ингибирующей дозы, летальной дозы определяли с учетом рекомендаций С.Н Эглина(1987)

6 Биотехнологические методы 1 Конструирование ненагруженных липосом (Huang, 1974). 2. Определение среднего размера липосом на микроскопе NU-2 (Karl - Zeiss Jena, Германия) с микрометрическими приспособлениями и цифровой фотокамерой Nikson D-lx (Szoka, 1978) 3. Конструирование липосомапьных комплексов с пигментами (Патент США № 4687762, 1987). 4. Определение коэффициента депонирования пигментов в липосомы (Мельников, 1990)

7 Органолептическая оценка Установление профилей напитков -дескрипторами, характерными для данной группы продуктов OSO 11035:1994; Родина, Вукс, 1994)

8 Статистический анализ, и графическое оформление 1 Методы статистической обработки материалов проводили с учетом рекомендаций A.A. Воробьева (1962), И.Ф.Шишкина (1990). 2. Пакет прикладных программ Microsoft Word, Microsoft Excel, Statisticaé.O.

В третьей главе дано обоснование использования потенциала

сырьевых и технологических ресурсов переработки отходов морских гидробионтов для получения пигментов, а также их оценка безопасности

Серые (,Згг.МегтесИш) и черные (Аг.пис1ш) морские ежи, составляют основу прибрежных поселений При проведении учетных траловых работ у берегов Приморья были обнаружены плотные скопления морских ежей на глубинах от 30 до 300м Запасы промысловых особей колеблются от 9 до 13 тыс т в разные годы в зависимости от площади исследуемого района (Викторовская, 1997; Мясников, 1997, 2001).

Для оценки запасов пигментсодержащего сырья нами был составлен прогноз возможных уловов морских ежей на период до 2015 г по данным изучения литературы (Каредин, 2001) Прогноз основан на оценке ожидаемых тенденций в состоянии морских экосистем дальневосточных морей, составе сырьевой базы и наиболее вероятном изменении численности массовых промысловых видов. Согласно ему вылов морских ежей к 2015 г. (по сравнению с 2000г ) в 9 раз

Таким образом, дальневосточные моря обладают достаточным сырьевым запасом морских ежей.

Для оценки безопасности отходов переработки иглокожих были проведены исследования на соответствие гигиеническим требованиям СанПиН 2.3.2.1078-01. В ходе исследований определяли содержание тяжелых металлов, радионуклидов, оценивали уровень микробиологических показателей во внутренностях, панцирях и иглах морских ежей Str.intermedius и Str.nudus.

Результаты анализов исследуемых объектов на содержание токсичных элементов (Pb, As, Cd, Hg) не превышают показатели санитарных норм в СанПиН 2.3 2.1078-01.

Содержание Cs-137 и Sr-90 определяли методом измерения активности радионуклидов на сцинтиляционном гамма - спектрометре Уровень содержания цезия-137 составил 17%, стронция - 90 0,65% от требований СанПиН 2.3.2.-1078-01.

Анализ результатов микробиологических исследований показал, что в исследуемых образцах количество КМАФАнМ находится ниже допустимых гигиенических требований более чем в 125 раз. Полное отсутствие БГКП, патогенных микроорганизмов, St aureus. сульфитредуцирующих клостридий указывает на биологическую безопасность используемого сырья

Таким образом, результаты проведенных нами исследований показывают, что отобранные объекты полностью удовлетворяют общим гигиеническим требованиям и безопасности и могут быть использованы в качестве сырья для производства натуральных красителей в целях использования в пищевой и перерабатывающей промышленности.

В четвертой главе исследовали химический состав выделенных пигментов с помощью ИК-спектроскопии (Сильверстейн, 1977) и

оценивали безопасность на модели тест-системы ТеГгаНутепа руг^огт'к, изучали физико - химические показатели как для пищевых красителей.

Результаты ИК - спектроскопии позволили сделать вывод, что экстракт морских ежей содержит функциональные группы, характерные для эхинохрома, спинохромов, что согласуется с данными Н.К Уткиной (1979) и Е.А.Кольцовой (1983).

По органолептическим экстракт морских ежей представляет собой густую сиропообразную жидкость темно-красного цвета с запахом, напоминающим морской (Лурье, 2001)

Стандартными методами оценивали такие физико-химические показагели выделенных пигментов (Лурье, 2001). Полученные данные сравнивали с фитолакковым красителем, традиционно используемым в пищевой промышленности (табл 2).

Таблица 2 - Физико-химические показатели пигментов, выделенных из отходов переработки морских ежей

Наименование показателя Значение показателя для:

фитолаккового красителя пигментов морских ежей

Относительная плотность при 20°С не менее 1,145 1,300+0,001

Активная кислотность (рН) не более 4,5 4,5+0,1

Растворимость в воде полная частичная

Концентрация красящих веществ (по СоБО., * 7Н20), г/л не менее 60,0 60,0+0,03

Массовая доля сухих веществ (по рефрактометру), % не менее 35,0 10,0+0,005

Из табл 2 следует, что относительная плотность пигментов морских ежей составляет 1,300+0,001, что немного выше по сравнению с фитолакковым красителем Активная кислотность и концентрация красящих веществ находятся в пределах одних значений Таким образом,

пигменты морских ежей имеют физико-химические показатели, сравнимые с таковыми у традиционно используемых красителей в пищевой промышленности, но есть некоторые отличия. Растворимость пигментов морских ежей частичная, массовая доля сухих веществ в 3 раза ниже, чем у фитолаккового красителя.

Активная кислотность пигментов составляет 4,5, при этом значении рН образуется водный раствор красного цвета.

Известно, что температуры плавления всех исследуемых пигментов находятся в диапазоне от 100 до 320°С (Кольцова, 1978), т.е при традиционной технологической обработке пищевых производств (60-100°С) они не будут изменять свою структуру и свойства

Оценку безопасности пигментов из морских гидробионтов биологическим методом осуществляли на модели тест-системы Те&акутепа руп/огт!.?. Будучи одновременно клеткой и организмом, тетрахимена позволяет оценивать разнообразные воздействия, как на клеточном, так и на более высоком уровне

По прошествии не менее 5 дней производили подсчет числа микроорганизмов Те ¡гаку те па руп/оггп1з в пробирках с растворами пигментов и сравнивали с контрольными пробирками (рис 2).

1 250

1 200 •

с -* 3 150-

х С

§ в § £, в- Й1 100 -

X 50-

о

1Г 0 •

1 I-1—

2 3 4 Концентрация пигментов, мг/смЗ

Рисунок 2 - График зависимости числа Те1гаИутепа руп/огт!.^ от

концентрации пигментов морских ежей Установлено, что зависимость числа инфузорий от концентрации

пигментов морских ежей (рис 2) описывается уравнением

у = Ш^Зе"0'067*, R2= 0,8879.

Из рис 2 видно, что зависимость между количеством инфузорий и концентрацией пигментов, представляет собой экспоненциальную функцию, и достоверность полученных результатов достаточна высока.

Ингибирующую дозу СПда рассчитывали из уравнения, представленного на рис 2, путем вывода из формулы неизвестного значения дг 96,2 = 179,83 е"°,067х, отсюда х = 9,55, это и есть показатель ингибирующей дозы СП» Следуя дальнейшим вычислениям, рассчитывали показатели LC50, LD50, ПДК:

LC» = (8,82 + 5,55 * 9,55) * 1000 = 61822,5 мг/м3 LD50= 802,23 + 645,59 * 9,55 = 6967,6 мг/кг lg ПДК = 1,15 + 0,75 * 9,55 * lg 9,55 = 703,075 мг/м3 Исходя из вышеизложенных расчетов, на 100 кг продукта мы рекомендуем использовать ЗООг пигментов морских ежей, что в два раза ниже летальной концентрации LD».

В пятой главе приведены два способа стабилизации красителей из отходов переработки морских ежей: химический и биотехнологический в целях обогащения и стабилизации напитков. Суть химического способа.

В качестве модельных образцов для окрашивания были выбраны следующие пищевые системы: 1) вода; 2) смесь 10% водного раствора сахарозы и 0,2% водного раствора лимонной кислоты; 3) 10% водный раствор сахарозы. Краситель вводили в концентрации 1%. В качестве критерия, характеризующего стабильность красителя в пищевых системах, была выбрана оптическая плотность, измеряемая на приборе КФК-3 в видимой части спектра (Хайрутдинова, 2003).

Окрашенные растворы хранились при нормальных условиях (температура 20°С, давление 1 атмосфера) в течение 30 суток

Водный раствор пигментов морских ежей имеет максимальную длину волны ^^=390 нм, что соответствует соединениям с красной окраской. С

течением времени оптическая плотность уменьшается, а следовательно окраска становится менее интенсивной (рис. 3)

Время, суг.

Рисунок 3 - Зависимость оптической плотности водного раствора пигментов морских ежей от времени хранения (X = 390 нм) при нормальных условиях Окраска, придаваемая пигментами, достаточно нестабильна (рис 3)

За 30 суток хранения оптическая плотность уменьшается на 98,64%

Зависимость является логарифмической и описывается следующим

уравнением:

у = 0,9401Ьп (х) + 3,4806, И2 = 0,8581.

Достаточно высокое значение коэффициента аппроксимации (0,8581) позволяет сделать вывод о достоверности полученных результатов

Оптическая плотность пигментов с использованием растворов сахарозы и лимонной кислоты меньше почти в 3 раза по сравнению с водным раствором. Свежеприготовленный водный раствор имеет оптическую плотность^;,* = 390 нм), равную 3,9 в присутствии лимонной кислоты и сахарозы - 0,978 По-видимому, присутствие этих веществ оказывает значительное влияние на образование и стабилизацию окраски пигментов (рис.4).

Время, сут

Рисунок 4 - Зависимость оптической плотности водного раствора пигментов морских ежей в присутствии 10% р-ра сахарозы и 0,2% р-ра лимонной кислоты от времени хранения (X = 390 нм) при нормальных условиях Зависимость описывается логарифмическим уравнением:

у = -0,13491л1(х) + 1,0111, И2 =0,7706.

По истечении месяца окраска раствора из ярко-красной превратилась

в светло-красную с оранжевым оттенком. Таким образом, за 30 суток

хранения оптическая плотность раствора уменьшается на 37,22%.

В присутствии сахарозы и лимонной кислоты Хщ^ имеет два значения

- 390нм и 480нм Причем, при 390 нм оптическая плотность со временем не

уменьшается, а даже немного увеличивается с 1,176 до 1,363 (на 13,72%).

При 480 нм оптическая плотность уменьшается на 24% (с 1,2 до 0,912).

Зависимость оптической плотности от времени хранения носит

логарифмический характер (рис 5) и описывается уравнением:

У= -0,1055 Ьп(х) + 1,266, К2 = 0,7808.

Таким образом, краситель более стабилен в присутствии сахарозы, хогя интенсивность его окраски несколько ниже, чем в нейтральной среде Мы предполагаем, что краситель стабилизируется за счет образования О-гликозидов.

1,4

ё 1,2

2 к 1

1 0,8

к г 0,6

о ? 0,4

X Ё 0,2

О 0

О 5 10 15 20 25 30 35

Время, сут

Рисунок 5 - Зависимость оптической плотности водного раствора пигментов морских ежей в присутствии 10% р-ра сахарозы от времени хранения (при X = 480 нм) в нормальных условиях Следовательно, стабильность красителя возрастает в ряду:

система 3 > система 2 > система 1.

Проведенные исследования показали, что применение пигментов

морских ежей для окрашивания безалкогольных напитков представляется

нам перспективным.

Суть биотехнологического способа

В качестве липидной основы для получения липосом с целью инкапсулировать в них пигменты из отходов переработки морских ежей были выбраны соевые фосфолипиды Это сравнительно недорогое и доступное сырье В наибольшем количестве в фосфолипидах сои содержится фосфатидилхолин (38,1+1,9) и фосфатидилэтаноламин (23,9+1,0), главные компоненты модельных липидных мембран

Для определения среднего размера липосом и характера дисперсности липосомальной суспензии использовали метод электронной микроскопии

Состав липосом: 59,5 % фосфолипиды, 40,5% холестерин Состав нагруженных пигментами липосом: фосфолипиды 59,5%, 27,8% холестерин, 12,7% пигменты.

По величине диаметра все фосфолипидные везикулы были разделены нами на 3 класса' мелкие (от 61,1 до 184,5 нм), средние (от 450 до 1000 нм) и крупные (свыше 1000 нм). Наблюдения за изменением размера липосом и

характера распределения по фракциям велось в течение 4 месяцев Липосомальная суспензия хранилась при +4°С без добавки дополнительных стабилизаторов. Для оценки стабильности липосом во времени использовали коэффициент стабильности липосом (Кст), рассчитываемый по формуле (Каленик, 1997):

К-т = размер свежеприготовленных липосом

размер липосом во время I Через 4 месяца хранения липосомы, не содержащие пигменты, разрушаются По-видимому, с течением времени происходит перекисное окисление фосфолипидов, что оказывает сильное влияние на мембрану липосом и в конечном итоге приводит к ее разрушению (Каленик, 1997) В то же самое время липосомы, содержащие пигменты, не разрушаются, а лишь агрегируют в более крупные Этот факт можно объяснить тем, что пигменты морских ежей обладают антиоксидантными свойствами и тормозят процесс перекисного окисления (Богуславская, 1990).

Липосомы, содержащие пигменты, претерпевают некоторые изменения' содержание мелких и крупных липосом становится почти одинаковым, а средних возрастает до 40,2+1,25%. Наиболее сильно изменяются размеры у средней фракции, величина Кст снижается до 0,19 (табл.3).

Таблица 3 - Характер распределения липосом, содержащих пигменты, по фракциям в процессе хранения

Срок хранения Содержание фракции, М_+т, % Коэффициент стабильности липосом

мелкие средние крупные мелкие средние крупные

Свежие 83,2+0,5 18+0,8 - - - -

1 месяц 80,1+1,6 22,9+1,1 0,6 -Ю,1 0,56 0,49

2 месяца 55,01+1,9 36,9+1 10,1+1,02 0,5 0,39 0,86

3 месяца 50,2+1,01 30,7+1,07 26,3+0,86 0,41 0,21 0,64

4 месяца 34,1+1,01 40,2+1,25 35,1+0,86 0,33 0,19 0,62

Из данных, приведенных в табл 3, видно, что содержание мелких липосом мало меняется в первый месяц хранения (83,2+0,5 против 80,1+1,6) В целом содержание мелкой фракции в течение 4 месяцев падает

в 2,43 раза, содержание средней фракции увеличивается в 2,23 раза Самое большое увеличение наблюдается для крупной фракции - 58,5 раза.

Стабильность всех фракций липосом снижается при хранении, но неодинаково (рис. 6).

0 1 2 3 4 5

Время хранения, мес.

—мелкие липосомы средние липосомы —а—крупные липосомы

Рисунок 6 - Изменение коэффициента стабильности со временем у нагруженных липосом Наиболее стабильными оказались мелкие липосомы, значение их Кст

снижается на 0,23 за 4 месяца хранения, для средних липосом этот

показатель снижается на 0,3 за тот же период, доя крупных - на 0,44.

Таким образом, по характеру стабильности для всех 3 классов

липосом можно построить ряд: мелкие < средние < крупные.

Характер дисперсности липосомальной суспензии также

преобразуется. Так, если свежеприготовленная суспензия представляет

собой по сути монодисперсную систему, то через 4 месяца пустые

липосомы разрушаются, а среди нагруженных преобладают крупные по

размеру. Следует отметить, что содержание мелких по размеру липосом

(самой стабильной фракции) у нагруженных липосом больше, чем у пустых

(рис.7).

100

* 80 j'

1

х 60 •

3. 40-

<D

f 20-

О

0 ---

0 05

1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 Время хранения, мес

—♦— пустые липосомы • » • нагруженные липосомы

Рисунок 7 - Содержание мелких по размеру липосом в процессе хранения Из рис. 7 следует, что через 4 месяца мелкие пустые липосомы разрушаются, а содержание нагруженных мелких липосом (самой стабильной фракции) уменьшается на 49,1%.

Коэффициент депонирования пигментов морских ежей в липосомы определяли спектрофотометрическим методом (Р.Д.Мельников, 1990), он составил 12,7%.

Гидрофобность (lgP) пигментов морских ежей определяли спектрофотометрически на приборе Quant (Bio-Tek Instrument, США). Для исследуемых веществ lgP = 1,02, такое значение говорит о том, что пигменты морских ежей гидрофобны и при депонировании в липосомы локализуются в фосфолипидном бислое липосом, хорошо его прокрашивая В шестой главе приведены технологические схемы, рецептуры напитков с использованием инкапсулированных форм пигментов морских ежей и без них, проведено исследование качества напитков в процессе хранения Органолептические показатели качества оценивали с помощью профильного метода.

Следует отметить, что все образцы напитков имели приятный аромат Профилограммы вкуса двух образцов напитков (рис. 8) распределены неравномерно, следовательно, присутствует различие в характеристиках вкуса продуктов Вкус всех образцов не имеет отрицательных для потребителя свойств.

горький

послевкусие

кисло-ела..

'сладкий

кислый

—•— напиток с использованием пигментов морских ежей —»—напиток с использованием инкапсулированного красителя

Рисунок 8 - Профили характеристики вкуса напитков

Интенсивный сладкий вкус отмечен у образца с использованием инкапсулированного красителя Кислый и кисло-сладкий вкус несколько интенсивен у образца без использования инкапсулированного красителя

Внешний вид (рис 9) образцов не имеет проявления отрицательных для потребителя свойств Однородность достаточно высока у всех образцов Напиток без использования инкапсулированного красителя имеет ярко выраженный красный цвет, повышенную вязкость (из-за использования стабилизатора) и прозрачность.

Рисунок 9 - Профили для характеристики внешнего вида напитков Напиток с использованием инкапсулированного красителя имеет приглушенный красный цвет, интенсивную мутность, однако менее вязок, чем другой образец.

однородность

наличие осадка

(вет красный

—•— напиток с использованием пигментов морских ежей

напиток с использованием инкапсулированного красителя

По микробиологическим показателям, содержанию токсичных элементов и радионуклидов напитки удовлетворяют требованиям СанПиН 2.3 2 1078-01 (п 1.8.5.). Мышьяк, кадмий, ртуть, радионуклиды в напитках не обнаружены, содержание свинца находится на очень низком уровне и составляет 3,3% от нормы.

Хранение напитков в течение 30 суток при температуре от 0 - 20°С показало, что они не изменяют своих органолептических свойств и уровня микробиологической безопасности

Приготовленные напитки обладают высокой устойчивостью к микробиологической порче, за 30 суток хранения их микробиологические показатели не изменились Этот факт можно объяснить антимикробными и антиоксидантными свойствами пигментов морских ежей. Однако у напитка с использованием инкапсулированных форм красителей наблюдается выпадение осадка на 20-е сутки хранения По-видимому, это связано с агрегацией и оседанием липосом.

ВЫВОДЫ:

1 Отходы переработки дальневосточных видов морских ежей Str.intermedius и Str.nudus являются перспективными источниками натуральных пищевых красителей красного цвета.

2 Изучение органолептических и физико-химических характеристик пигментов морских ежей Str.intermedius и Str.nudus показало, что они близки к таковым у традиционно используемых пищевых красителей красного цвета.

3 Установлено влияние пигментов на живые системы на тест-культуре Tetrahymena pyriformis in vitro. Определены летальная концентрация (LC5o = 6882,5 мг/м3), летальная доза (LD50 = 6967,6 мг/кг) и ПДК (IgnflK = 703,075 мг/м3).

4. Разработаны химический и биотехнологический способы стабилизации пигментов морских ежей Str. intermedius и Str. nudus.

5. Доказано, что лнпосомы, содержащие пигменты морских ежей более стабильны, чем пустые. После четырех месяцев хранения пустые липосомы разрушаются, а липосомы, содержащие пигменты, остаются стабильными, увеличиваясь при этом в размерах.

6. Предложены рекомендации по использованию пигментов морских ежей Str.intermedius и Str. nudus в пищевой промышленности, а также принципиальные технологические схемы производства безалкогольных напитков на основе липосом, содержащих пигменты морских ежей и без них.

Перечень опубликованных работ по материалам диссертации:

1. Каленик, ТК Технология пищевых биологически активных добавок из трепанга японского как комплексных биостимуляторов/ Т К. Каленик, Н.С. Мотавьсина, Е.С. Горицкая (Фищенко) // Известия вузов. Пищевая технология - 2000. - №4 - С. 55-58

2. Каленик, Т.К. Возможности использования липосомальных форм биологически активных веществ в пищевых технологиях / ТК. Каленик, Е.С. Горицкая (Фищенко), Т.О. Ефимова, П.А. Лукьянов, Т.Н. Слуцкая // Пищевая биотехнология- проблемы и перспективы в 21 веке: -материалы докл. I Междунар. симпоз. - Владивосток, 2000 г. -С. 114.

3. Каленик, Т.К. Перспективы использования красителей из морских гидробионтов в пищевой промышленности / Т.К. Каленик, Ю.М. Колмогоров, Е.С. Горицкая (Фищенко), Н Ф Кушнерова // Наука-Техника - Технология на рубеже третьего тысячелетия: материалы 3 Междунар. научно - практич конф., Находка, 2001. - С. 55.

4. Каленик, Т.К. Перспективы использования соевой муки в жировых эмульсиях у лиц, проживающих в экологически неблагоприятных условиях / Т.К. Каленик, Л.В. Ленцова, Ю.В. Приходько, OB. Табакаева, Е.С. Горицкая (Фищенко), Л.В. Ленцова // Низкотемпературные и пищевые технологии в 21 веке: материалы Междунар. научно - практич. конф. - СПб, 2001. - С. 419.

5. Табакаева, OB. Актуальные проблемы качества эмульсионных продуктов / О.В. Табакаева, Е С. Горицкая (Фищенко) // Экономика России и экономические знания на рубеже веков: материалы Форума молодых ученых и студентов Ч 4 , Екатеринбург, 2001 - С 66

6. Каленик, Т.К. Использование ингибитора из белка куриного яйца для улучшения качества пресервов из горбуши / Т К. Каленик, Т.В. Швец, ЮМ. Колмогоров, Т.О. Ефимова, Е.С. Фищенко, Д.Н. Прищепа // Известия вузов. Пищевая технология. - 2002. - № 4. - С. 22-23.

7. Каленик, Т К Морские гидробионты как источник пищевых красителей / Т.К Каленик, Е.С. Фищенко // Пища. Экология. Человек: материалы Пятой междунар. научно-техн. Конф,- М., 2003. - С. 32.

8. Каленик, Т К Биотехнология стресспротективных продуктов питания с активными добавками из морских гидробионтов / Т.К. Каленик, С.Н. Павлинич, Е.С. Фищенко, Н.Ф. Тимченко // Биотехнология: состояние и перспективы развития' материалы Второго Междунар. конгресса -М., 2003. - С. 159-160.

9. Фищенко, Е.С. Использование отходов переработки гидробионтов Японского моря в качестве пищевых красителей/ Е.С. Фищенко, Т К Каленик // Известия вузов. Пищевая технология. - 2004. - № 1. - С. 37-38.

10 Фищенко, ЕС Перспективы использования красителей из морских гидробионтов в пищевых продуктах / Фищенко Е.С. // Проблемы и перспективы в 21 веке: - материалы докл. II Междунар симпоз. -Владивосток, 2004 - С. 64-65.

Работы, находящиеся в печати:

1. Фищенко, Е.С. Исследование стойкости нового пищевого красителя для безалкогольных напитков / Е.С Фищенко, ТК Каленик, Т.В. Парфенова, JI. А Теньковская // Пиво и напитки. - 2005 (в печати).

2. Каленик, Т.К. Проектирование новых функциональных продуктов питания с использованием БАВ из морских гидробионтов / ТК Каленик, Н.Ф. Тимченко, С.Н. Павлинич, Е.С. Фшценко, JI.H. Федянина // Оптимальное питание - здоровье нации: материалы VIII Всероссийского конгресса. - М.; 2005 (в печати)

3. Каленик, Т.К Морские гидробионты Дальневосточных морей -источники БАВ для проектирования новых функциональных продуктов питания / Т.К Каленик, Н Ф Тимченко, С.Н. Павлинич, Е С Фищенко // Региональные аспекты развития рынка потребительских товаров: материалы докл. Всероссийской очно-заочной научно - практ конф. - Хабаровск, 2005 (в печати)

Евгения Сергеевна Фищенко Разработка биотехнологии инкапсулированных форм пищевых красителей из отходов переработки иглокожих

Подписано в печать 30 09 05. Формат 60x84/16 Усл. - печ. л. 1. Уч.- изд. л. 1 Тираж 100 экз Заказ № 223 Издательство Тихоокеанского государственного университета Участок оперативной полиграфии 690950, г Владивосток, Океанский проспект, 19

t

I

I

V

It

»1911;

РНБ Русский фонд

2006г4 18531

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1 ПИЩЕВЫЕ КРАСИТЕЛИ, ОСОБЕННОСТИ ПОЛУЧЕНИЯ, СПОСОБЫ УВЕЛИЧЕНИЯ ИХ ЭФФЕКТИВНОСТИ И УДЛИНЕНИЯ СРОКОВ ХРАНЕНИЯ.

1.1 Технологии получения, стабилизации пищевых красителей и требования к их качеству.

1.2 Химический состав и особенности функционального действия пигментов из морских организмов (Strongylocentrotus intermedins и Strongylocentrotus nudus), перспективы их применения в пищевых технологиях.

1.3 Липосомы как экспериментальные модели для транспорта и удлинения сроков хранения биологически активных веществ.

1.4 Эффективность и задачи липосом в пищевых технологиях.

ГЛАВА 2 ОБЪЕКТЫ, НАПРАВЛЕНИЯ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1 Объекты и направления экспериментальных исследований.

2.2 Выбор стандартных и общепринятых методов исследований.

2.3Статистическая обработка данных.

2.4 Верификация закона распределения вероятности Пирсона.

ГЛАВА 3 ОБОСНОВАНИЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ СЫРЬЕВЫХ И ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ - ОТХОДОВ ПЕРЕРАБОТКИ МОРСКИХ ГИДРОБИОНТОВ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПИГМЕНТОВ.

3.1 Анализ морских сырьевых ресурсов как продуцентов пигментов для пищевой промышленности.

3.2 Характеристика безопасности отходов переработки морских ежей, используемых для получения пигментов.

ГЛАВА 4 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА И ОЦЕНКА БЕЗОПАСНОСТИ ПИГМЕНТОВ МОРСКИХ ЕЖЕЙ.

4.1 Спектроскопическое исследование состава выделенных пигментов.

4.2 Товарная экспертиза пигментов морских ежей.

4.3 Оценка безопасности пигментов из морских гидробионтов биологическим методом на модели тест — системы

Tetrahymena pyriformis.

ГЛАВА 5 РАЗРАБОТКА ХИМИЧЕСКОГО И БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКОГО СПОСОБОВ СТАБИЛИЗАЦИИ ПИГМЕНТОВ В ПРОЦЕССЕ ХРАНЕНИЯ И ВЫБОР ТЕХНОЛОГИИ ДЛЯ ОБОГАЩЕНИЯ И СТАБИЛИЗАЦИИ ПИЩЕВЫХ СРЕД (НАПИТКОВ).

5.1 Разработка химического способа стабилизации красителя из отходов переработки морских ежей.

5.2 Выбор и характеристика липидной мембранной основы для получения липосом с целью инкапсулирования в них пищевых пигментов из отходов переработки морских ежей.

5.3 Изучение размеров и стабильности фосфолипидных носителей липосом в сравнении с липосомальными комплексами пигментов морских ежей.

5.3.1 Определение гидрофобности и коэффициента депонирования пигментов морских ежей в липосомы.

ГЛАВА 6 ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПИГМЕНТОВ МОРСКИХ ЕЖЕЙ В КАЧЕСТВЕ ПИЩЕВЫХ КРАСИТЕЛЕЙ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА БЕЗАЛКОГОЛЬНЫХ НАПИТКОВ.

6.1 Разработка технологий безалкогольных напитков с использованием пигментов морских ежей.

6.2 Органолептическая экспертиза качества безалкогольных напитков с использованием пигментов морских ежей.

6.3 Показатели безопасности и качества безалкогольных напитков.

ВЫВОДЫ.

Развитие прикладной биотехнологии в области поиска и создания натуральных пищевых красителей для обеспечения высоких органолептических и функциональных свойств продуктов является перспективным научным направлением.

Известно, что высококачественные пищевые продукты гармонично сочетают форму, вкус, аромат и окраску. Без любой из этих составляющих продукт перестает быть привлекательным для потребителя.

В середине XX века бурное развитие химической промышленности привело к появлению большого количества красителей различной химической природы, которые по своим характеристикам (интенсивность окраски, свето-, кислото- и термостойкость) и относительно невысокой себестоимости превосходили натуральные (Фетисов, 2001). В результате произошло вполне понятное снижение спроса на натуральные красители (Позняковский, 1999; Кудряшева, Шокина, 2000; Кацерикова, Туричев, 2002).

Однако, развитие исследований в области безопасности и токсикологии пищевых красителей и выявление среди них вредных и потенциально опасных для человеческого организма веществ позволило сделать вывод о необходимости ограничения их использования. К тому же синтетические красители являются типичными представителями посторонних добавок в продукты питания (Сарафанова, Васекина, 2001).

В связи с этим возникает вопрос о целесообразности применения искусственных красителей в производстве пищевых продуктов (Бакулина, 1999; Архипова, 2000, 2001; Поваляева, 2003).

Следует отметить, что используемые в пищевой промышленности природные пигменты, в основном растительного происхождения, обладают и значительной физиологической, антиоксидантной, радиопротекторной, генопротекторной, антимикробной активностью и применяются как лечебно профилактические средства (Дубодел, 1995; Кацерикова 1998, 2001; Ляшенко, 1998; Алексеева, 2000; Шубина, 2000).

Анализ литературных данных показывает, что производство натуральных пищевых красителей ведется в основном на основе растительного сырья. Красители животного происхождения применяются значительно реже, наиболее широко применяется краситель красного цвета кармин.

Известно, что в качестве красителей животного происхождения предлагается использовать гемовые пигменты и каротиноиды из криля (Касьянов, 1999; Болотов, 2001).

В последний период 20 века в научной литературе появились публикации по выделению каротиноидных пигментов из отходов переработки краба по технологиям, разработанным дальневосточными учеными (Купина, 1998; Леваньков, 1999, 2000).

Согласно литературным данным, гидробионты морских и пресноводных акваторий выгодно отличаются от многих наземных и водных организмов значительным разнообразием вторичных метаболитов, среди которых доминирующая часть представлена функциональными соединениями, имеющими биологическую активность (Еляков, 1986, 1988; Лебская, 1998; Oshima, 1998; Jack, 1998). Несмотря на это, пигменты из морских организмов в пищевой промышленности применяются довольно ограничено.

В 80-е годы 20 века в Тихоокеанском Институте Биоорганической Химии ДВО РАН велись активные работы по поиску новых биологически активных природных пигментов среди морских организмов, в частности среди морских ежей (Уткина, 1979).

Показано, что пигменты морских ежей обладают антибиотической, антикоагулянтной, противоопухолевой активностью и могут служить перспективным источником натуральных пищевых красителей, в которых нуждается не только пищевая, но и фармацевтическая промышленность. В химическом отношении эти пигменты представляют собой производные юглона и нафтазарина. Среди морских животных в большом количестве они найдены только у иглокожих (Уткина, 1979; Скурихин, 1991).

В странах Дальнего Востока морские ежи Strongylocentrotus intermedins и Strongylocentrotus nudus (тип иглокожие) являются промысловыми видами, их икра издавна считается деликатесом (Лебская, 1999). Панцири и внутренности животных, содержащие пигменты (до 95% от массы тела животного), как правило, оказываются отходами производства, и не используются традиционной пищевой промышленностью.

Мировой рынок красителей постоянно растет вместе с технологическими и социальными изменениями, которые приведут к росту производства комбинированных продуктов во всем мире. Рынок натуральных красителей будет расти в глобальных масштабах быстрее, чем синтетических красителей из-за постоянного давления со стороны потребителей в пользу «натуральности» (Даунхэм, 2001).

Предложение использовать в качестве пигментсодержащего сырья местной сырьевой базы отходов переработки морских гидробионтов может решить проблему безотходных технологий на пищевых производствах.

Одной из основных биотехнологических проблем применения натуральных пищевых красителей является повышение их стабильности. В этой связи нами были проведены биотехнологические исследования по целесообразности применения липосом в качестве стабилизаторов пищевых красителей из морских гидробионтов. Липосомы — фосфолипидные самоорганизующиеся системы, применяются в основном в медицине для повышения эффективности транспорта и действия лекарственных препаратов.

Данная диссертационная работа посвящена экспериментальному обоснованию и разработке новых форм пищевых красителей из отходов переработки морских гидробионтов Str. intermedins и Str. nudus.

Цель и задачи исследования Учитывая вышеизложенное, целью настоящей работы явились разработка биотехнологии стабильных пищевых пигментов из отходов переработки морских ежей Str. intermedins и Str. nudus и изучение их качества и безопасности при изготовлении пищевых продуктов.

Достижение поставленной цели осуществляли путем решения следующих задач:

- выбор адекватных объектов и методов исследований;

- оценка сырьевого потенциала морских гидробионтов Str. intermedins и Str. nudus, как продуцентов биологически активных пищевых пигментов хиноидной природы на период до 2015 года;

- установление особенностей химического состава, влияния на живые системы морских гидробионтов Str. intermedins и Str. nudus;

• - обоснование и разработка биотехнологии стабильных липосом с пигментами;

- разработка технологии безалкогольных напитков с использованием пигментов морских ежей в качестве пищевых красителей, характеристика их качества и безопасности.

Научная новизна и практическая значимость Дано комплексное научное обоснование применения отходов переработки морских ежей Str. intermedins и Str. nudus в качестве источников пищевых пигментов.

Разработана безотходная биотехнология получения стабильных пищевых красителей из отходов переработки морских ежей Str. intermedins и Str. nudus.

Проведена оценка безопасности пигментов морских ежей с использованием тест-культуры Tetrahymena pyriformis in vitro.

Разработана биотехнология конструирования мультиламеллярных липосом с пигментами хиноидной природы как способа их стабилизации в процессе хранения.

Научно обоснована технология безалкогольных напитков на основе липосом с пигментами морских ежей и дана характеристика их качества и безопасности.

В результате проведенных исследований разработана нормативная документация на «Экстракт концентрированный из морских гидробионтов» ТУ

9238 - 144 — 02067936 - 2005, получено положительное решение по заявке № 2004124260(026128), приоритет от 09.08.2004г. на изобретение «Инкапсулированный пищевой краситель и способ его получения».

Результаты исследований внедрены в учебный процесс на кафедрах пищевой биотехнологии и товароведения и экспертизы продовольственных товаров Института пищевых технологий и товароведения ТГЭУ.

Основные положения диссертации выносимые на защиту

1. Продукты переработки морских ежей Str.intermedins и Str.nudus (панцири, иглы и внутренности) являются продуцентами натуральных пищевых пигментов и могут быть использованы в безотходных пищевых технологиях.

2. Пигменты Str.intermedins и Str.nudus являются безопасными и не разрушаются в процессе производства и хранения безалкогольных напитков.

3. Мультиламеллярные липосомы из фосфолипидов сои способствуют повышению стабильности пигментов из отходов переработки морских гидробионтов при хранении.

Апробация работы Результаты настоящей работы были представлены и доложены на I и II Международном Симпозиуме «Пищевые биотехнологии: проблемы и перспективы в XXI веке» (Владивосток, 2000, 2004); III Международной научно-практической конференции «Наука — Техника -Технология на рубеже третьего тысячелетия» (Находка, 2001); Форуме молодых ученых и студентов «Экономика и экономические знания на рубеже веков» (Екатеринбург, 2001); V Международной научно- технической конференции «Пища. Экология. Человек» (Москва, 2003); II Московском Международном Конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2003).

Публикации Результаты работы отражены в 13 печатных работах, три из них находятся в печати.

Структура и объем работы Диссертация состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания объектов и методов исследования (глава 2), результатов собственных исследований (главы 3-6), выводов, списка

ВЫВОДЫ

1. Отходы переработки дальневосточных видов морских ежей Strongylocentrotus intermedius и Strongylocentrotus nudus являются перспективными источниками натуральных пищевых красителей красного цвета.

2. Изучение органолептических и физико-химических характеристик пигментов морских ежей Strongylocentrotus intermedius и Strongylocentrotus nudus показало, что они близки к таковым у традиционно используемых пищевых красителей красного цвета.

3. Установлено влияние пигментов на живые системы на тест - культуре Tetrahymena pyriformis in vitro. Определены летальная концентрация (LC50 = 6882,5 мг/м3), летальная доза (LD50 = 6967,6 мг/кг) и ПДК (^ПДК = 703,075 мг/м3).

4. Разработаны химический и биотехнологический способы стабилизации пигментов морских ежей Strongylocentrotus intermedius и Strongylocentrotus nudus.

5. Доказано, что липосомы, содержащие пигменты морских ежей более стабильны, чем пустые. После четырех месяцев хранения пустые липосомы разрушаются, а содержащие пигменты остаются стабильными, увеличиваясь при этом в размерах.

6. Предложены рекомендации по использованию пигментов морских ежей Strongylocentrotus intermedius и Strongylocentrotus nudus в пищевой промышленности, а также принципиальные технологические схемы производства безалкогольных напитков на основе липосом, содержащих пигменты морских ежей и без них.

1. А.с. 566870 (СССР), Максимов О.Б., Кольцова Е.А., Уткина Н.К. и др. -С 11В 5/00. Бюл.изобрет., 1977, № 28.

2. А.с. № 1080819 СССР. Среда для разбавления спермы сельскохозяйственных животных / Милованов В.К., Соколовская И.И., Абилов А.И. и др.-заявл. 11.10.82; опубл. 23.03.84, Бюл. № 11.

3. Алексеева, Т.Н. Использование меланинового красителя из гречихи/ Алексеева Т.Н., Огарков Б.Н., Орещенко А.В. // Пиво и напитки. 2000.- № 5.- С. 66-67.

4. Аминов, М.С. Пищевой краситель из плодов боярышника/ Аминов М.С., Даудова Т.Н., Абдуллатипова Д.М., Ахмедов И.Э., Мурадов М.С.// Хранение и переработка сельхозсырья. -1998. -№2.- С.47-48.

5. Антонов, В.Ф. Липидные мембраны при фазовых превращениях / Антонов В.Ф., Смирнова Е.Ю., Шевченко Е.В. М.: Наука, 1992.- 136 с.

6. Арзамасцев, И.С. Атлас промысловых беспозвоночных и водорослей Дальнего Востока России / Арзамасцев И.С., Яковлев Ю.М., Евсеев Г.А. и др. // Тихоокеанский ин-т географии ДВО РАН,- Владивосток: Аванте, 2001.192 с.

7. Архипова, А.Н. Пищевые красители их свойства и применение / Архипова А.Н. // Пищ. пром.- 2000.- №4.- С. 66-69.

8. Архипова, А.Н. Натуральные пищевые красители для мясной и молочной индустрии / Архипова А.Н. // Пищевые ингредиенты, сырье и добавки. -2001.-№ 1.-С. 12-13.

9. Архипова, А.Н. Натуральные пищевые красители для мясной и молочной индустрии / Архипова А.Н. // Пищ. пром.- 2001. № 4. - С. 44-45.

10. Ашмарин, И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / Ашмарин И.П., Воробьев А.А. -Л: Медицина, 1962. -188 с.

11. Багирян, Э.А. Повышение биологической активности пищевых продуктов с помощью СОг-экстрактов / Багирян Э.А., Кузнецова С.Ю. // Пищевая промышленность. 1999. №8. С. 60-61.

12. Бакулина, О. Натуральные красители / Бакулина О. // Пищ. пром.- 1999.-№8.- С. 46-47.

13. Барсуков, Л.И. Липосомы / Барсуков Л.И. // Соросовский образовательный журнал. -1998. -№ 10.-С.2-9.

14. Бергельсон, Л.Д. Биологические мембраны / Бергельсон Л.Д. -М.: Наука, 1975.- 183 с.

15. Бергельсон, Л.Д. Мембраны, молекулы, клетки / Бергельсон Л.Д. М.: Наука, 1982.- 182 с.

16. Бланк, Т.А. Натуральные пищевые красители, полученные микробным синтезом / Бланк Т.А., Паценкер Е.С., Иголкина Е.В. // Хранение и переработка сельхозсырья,- 1998. -№ 7.- С. 28-30.

17. Богуславская, Л.В. О кинетике низкотемпературного окисления этилбензола, ингибированного полигидроксинафтохинонами / Богуславская Л.В., Максимов О.Б., Храпова Н.Г., Кулеш Н.И. // Известия АН СССР. Сер. Хим.- 1988.- № 2. -С. 283-287.

18. Богуславская, Л.В. Полигидроксинафтохиноны — новый класс природных антиоксидантов / Богуславская Л.В., Храпова Н.Г., Максимов О.Б. // Известия АН СССР. Сер. хим.- 1985. -№7.- С. 1471-1476.

19. Богуславская, Л.В. Синергетическое влияние фосфолипидов на антиоксидантную активность природных полигидроксинафтохинонов / Богуславская Л.В., Бурлакова Е.Б., Кольцова Е.А., Максимов О.Б., Храпова Н.Г.// Биофизика. -1990. -Т. 35. -Вып. 6.- С. 928-932.

20. Болотов, В.М. Пищевые красители / Болотов В.М., Нечаев А.П. // Пищевые ингредиенты, сырье и добавки.- 2001. -№ 1. -С. 4-11.I

21. Бриттон, Г. Биохимия природных пигментов / Бриттон Г. -М: Мир, 1986,422 с.

22. Булдаков, А.С. Пищевые добавки: справочник / Булдаков А.С. — СПб.: Ut, 1996.- 240 с.

23. Викторовская, Г.И. Особенности размножения и ресурсы палевого морского ежа у берегов Приморья / Викторовская Г.И., Мясников В.Г., Павлючкова В.А. // Рыбное хозяйство. -1997. -№ 6. -С. 32-33.

24. Виноходов, Д.О. Токсикологические исследования кормов с использованием инфузорий / Виноходов Д.О. СПб.: 1995. — 80 с.

25. Вихрук, Т.И. Сравнительная оценка содержания бетаина в красных свекольных красителях/ Вихрук Т.И., Печерский В.И., Газина Т.П. // Хранение и переработка сельхозсырья. 2001. - №1. - С.36-37.

26. Влияние двухкомпонентной системы а-токоферол — холестерин на параметры липосом из фосфолипидов растительного происхождения / Каленик Т.К. // Биоантиоксидант: материалы V Международной конф.- М.:-1998.-С. 46.

27. Головин, А.Н. Контроль качества и безопасности продукции из гидробионтов и ее сертификация / Головин А.Н. // Рыбное хозяйство.- 1995.-№ 1.- С. 54-55.

28. ГОСТ 26927-86 «Сырье и продукты пищевые. Метод определения ртути».- М.: Изд-во стандартов, 1986. — 47 с.

29. ГОСТ 26928-86 «Продукты пищевые. Метод определения железа». -М.: Изд-во стандартов. — 1996. — 45 с.

30. ГОСТ 26930-86 «Сырье и продукты пищевые. Метод определения кадмия».- М.: Изд-во стандартов. 1986. — 45 с.

31. ГОСТ 26930-86 «Сырье и продукты пищевые. Метод определения мышьяка». -М.: Изд-во стандартов. 1986. — 42 с.

32. ГОСТ 26932-86 «Сырье и продукты пищевые. Метод определения свинца». -М.: Изд-во стандартов. — 1986. — 38 с.

33. ГОСТ 29929-86 «Сырье и продукты пищевые. Подготовка проб. Минерализация для определения токсичных элементов». -М.: Изд-во стандартов. 1986. -45 с.

34. Даунхэм, Э. Пищевые красители нового тысячелетия / Даунхэм Э. // Пищевые ингредиенты, сырье и добавки.- 2001.- № 1.- С. 14-17.

35. Догадова, Л.П. Изучение лечебного действия нового класса антиоксидантов на глазные формы сосудистой патологии / Догадова Л.П., Тихомирова Н.М., Шульгина Н.А. и др. // Материалы VII съезда офтальмологов России.- М, 1994.- С. 138.

36. Дубодел, Н.П. Получение натурального пищевого красителя из томатопродуктов / Дубодел Н.П., Справник Е.В., Сикорская Н.Л. // Пищ. пром.- 1995.- №1.- С. 16-22.

37. Дудкин, М.С. Новые продукты питания / Дудкин М.С., Шелкунов Л.С. — М.: Наука, 1998.- 340 с.

38. Евдокимов, В.В. Пополнение численности морских ежей в сообществах / Евдокимов В.В., Викторовская Г.И., Бирюкова И.В. // Рыбное хозяйство. — 1996.-№4.-С. 48-50.

39. Еляков, Г.Б. Морская биохимия и биотехнология: достижения и перспективы / Еляков Г.Б., Стоник В.А., Кузнецова Т.А., Михайлов В.В.// Вестник РАН.- 1993.- Т. 63.- № 9. с. 797-802.

40. Еляков, Г.Б. Стероиды морских организмов / Еляков Г.Б., Стоник В.А. — М.: Наука, 1988,-208 с.

41. Еляков, Г.Б. Терпеноиды морских организмов / Еляков Г.Б., Стоник В.А. -М.: Наука, 1986,- 272 с.

42. Зобкова, З.С. Ароматизаторы и красители в молочных продуктах / Зобкова З.С., Шелагинова И.Р. // Молочная промышленность.- 1999. -№ 3.- С. 9-13.

43. Иванов, В.В. Расчетные методы биологической активности органических соединений / Иванов В.В, Слета JI.A. -Харьков: ХНУ, 2003.- 71 с.

44. Игнатьев, А.Д. Использование инфузорий Тетрахимены пириформис как тест-объекта при биологических исследованиях в сельском хозяйстве / Игнатьев А.Д., Шаблий В.Я. М., 1978.- 10 с.

45. Игнатьев, А.Д. Модификация метода биологической оценки пищевых продуктов с помощью реснитчатой инфузории Тетрахимена пириформис / Игнатьев А.Д., Исаев М.К., Долгов В.А., Шаблий В.Я., Нелюбин В.П. // Вопросы питания. 1980. - №1. - С.70-71.

46. Ильченко, Г.П. Интенсификация процесса ССЬ-экстракции с помощью переменного магнитного поля / Ильченко Г.П., Касьянов Г.И., Бутто С.В., Савин В.Н. // Пищ. пром. -2002.- № 1- С. 36.

47. Каредин, Е.П. Сырьевая база рыбной промышленности дальневосточного бассейна на период до 2015г / Каредин Е.П., Борец Л.А. // Рыбное хозяйство. -2001.-№6. -С. 18-19.

48. Касьянов, Г.И. Применение диоксида углерода для интенсификации процессов переработки / Касьянов Г.И. // Хранение и переработка сельхозсырья.- 1999.-№3.- С. 17-20. 4» Касьянов, Г.И. Пути формирование цвета мясных продуктов / Касьянов

49. Г.И., Алешкевич Ю.С. // Пищевая промышленность.- 1999.- №4.- С. 41.

50. Кацерикова, Н.В. Природные пигменты в качестве пищевых добавок / Кацерикова Н.В., Ильина Н.Г. // Пищевая промышленность.- 1998.- №4.- С. 18-19.

51. Кацерикова., Н.В. Природные пищевые красители: обзорная информация / Кацерикова Н.В., Позняковский В.М. Новосибирск: Изд-во «ЭКОР», 1999. -58с.

52. Кейтс М. Техника липидологии / Кейтс М. М.: Мир, 1975.- 322с.

53. Кольцова, Е.А. Исследование химического строения и биологической функции хиноидных пигментов морских ежей: дис. . канд.хим.наук / Кольцова Е.А. Владивосток: ТИБОХ ДВО АН СССР, 1983.- 140 с.

54. Кольцова, Е.А. Пигменты морского ежа Strongylocentrotus Drobachiensis / Кольцова Е.А., Денисенко В.А., Максимов О.Б // Химия природных соединений.- 1978. -№ 4. -С. 438-441.

55. Кольцова, Е.А. Хиноидные пигменты иглокожих. Минорные пигменты морского ежа Strongylocentrotus nudus / Кольцова Е.А., Чумак Г.Н., Максимов О.Б. // Химия природных соединений.- 1977. -№ 2. -С. 202-207.

56. Кострова, Е.И. Применение натуральных пищевых ингредиентов в масложировой промышленности / Кострова Е.И., Гринько И.А., Уварова О.А. // Пищевая промышленность.- 2002. -№ 10.- С.56-66.

57. Красильников, В.Н. Липосомы в пищевой промышленности: перспективы использования / Красильников В.Н., Несмелов А.И. // Пищевая промышленность. -1999. -№ 12.- С. 46.

58. Красникова, Е.В. Совершенствование технологии получения пищевого красителя из ягод аронии / Красникова Е.В., Филиппов В.И., Кременская М.И. // Пищевые ингредиенты, сырье и добавки.- 2002.- № 1.- С. 24-26.

59. Крепе Е.М. Липиды клеточных мембран / Крепе Е.М. — Л.: Наука, 1981.-339с.

60. Кристиансен, К. Несомненно надо окрашивать в красный / Кристиансен К., Берншторф М. // Пищевые ингредиенты, сырье и добавки.- 2000.- № 2.- С. 62-63.

61. Кричман, Е.С. Натуральные пищевые красители и их применение в пищевой промышленности / Кричман Е.С. // Пищевые ингредиенты, сырье и добавки.- 2001.- № 1.- С. 20-21.

62. Кудряшева, А.А. Пищевые добавки и продовольственная безопасность / Кудряшева А.А., Шокина Л.И.// Пищевые ингредиенты, сырье и добавки. -2000.-№ 1.-С. 4-8.

63. Кузьмина, А.Б. Экстракция пищевого красителя из аронии / Кузьмина А.Б., Доронин А.Ф., Кислухина О.В. // Пищ. пром.- 1995. -№ 1. -С.21-22.

64. Купина, Н.М. Использование отходов от разделки крабов / Купина Н.М., Леваньков С.В. // Рыбное хозяйство. -1998. -№ 4.- С. 56-57.

65. Лебедев, А.В. Кислотные свойства и взаимодействие с супероксид анион-радикалом эхинохрома А и его структурных аналогов / Лебедев А.В., Иванова М.В., Красновид Н.И., Кольцова Е.А. // Вопросы медицинской химии.- 1999. -т. 45. -Вып. 2.- С. 123-129.

66. Лебедев, А.В. Механизмы ингибирования Fe2+- индуцированного окисления фосфатидилхолина полигидроксинафтохинонами / Лебедев А.В., Богуславская Л.В., Левицкий Д.О., Максимов О.Б. // Биохимия. -1988.- Т. 53. -Вып.4.- С. 598-602.

67. Лебская, Т. Целебные свойства морских ежей / Лебская Т., Двинин Ю., Шаповалова Л., Бойцов В. // Рыбное хозяйство.- 1999.- №2.- С.55.

68. Леваньков, С.В. Использование протеиназ печени краба в технологии извлечения каротиноидных пигментов из панцирсодержащих отходов переработки краба / Леваньков С.В., Купина Н.М. // Хранение и переработка сельхозсырья.- 1999.- №12.

69. Леваньков, С.В. Комплексная переработка отходов производства пищевой продукции из камчатского краба / Леваньков С.В., Касьянов С.П., Купина Н.М., Кучеравенко К.М. // Хранение и переработка сельхозсырья. -2000. -№ 3.- С. 36-41.

70. Липиды биологических мембран / под ред. Бергельсона Л.Д. — Ташкент: Изд-во: «ФАН» Узбекской ССР, 1982. 112с.

71. Липосомы в биологических системах: Пер с англ. / под ред. Г. Грегориадиса , А. Аллисона. М.:Медицина, 1983.- 384с.

72. Липосомы и их взаимодействие с клетками и тканями. / под ред. Антонова В.Ф. -М.: Наука, 1981. 163с.

73. Липосомы. Применение в биологии и медицине / под ред. Антонова А.Ф., Торчилина В.П.- М.: Наука, 1985.- 89с./

74. Лихацкая, Г.Н. Сравнительное изучение антиоксидантных свойств спинохромов морских ежей / Лихацкая Г.Н., Кольцова Е.А., Ким Н.Ю., Красовская Н.П. // Биоантиоксидант, V Международная конф., М., 1998.- С. 101.

75. Лурье, И.С. Технохимический контроль сырья в кондитерском производстве / Лурье И.С., Шаров А.И. М.: Колос, 2001. — 352с.

76. Ляшенко, Е.П. Перспективы применения концентратов натуральных красящих веществ для производства профилактических продуктов питания / Ляшенко Е.П., Макаренко Г.Г., Гром Л.Л. // Хранение и переработка сельхозсырья. -1998.- №2.- С.31.

77. Максимов, О.Б. Природные антиоксиданты / Максимов О.Б., Горовой П.Г., Кольцова Е.А., Кулеш Н.И. // Вестник ДВО РАН. -1996.- №1. -С.40-51.

78. Марголис, Л.Б. Липосомы и их взаимодействие с клетками / Марголис Л.Б., Бергельсон Л.Д. М.: Наука, 1986.- 240с.

79. Мельников, В.Р. Лечение липосомальным интерфероном экспериментального герпеса / Мельников В.Р., Кобринский Г.Д., Львов Н.Д. // Вестник АМН СССР. -1990. -№ 8.-С. 35-37.

80. Милованов, В.К. Применение эхинохрома при искусственном осеменении овец / Милованов В.К., Максимов О.Б., Кольцова Е.А. и др. // Животноводство.- 1983.-№ 3.- С. 42-43.

81. МУК 2.6.2.717-98 Радиационный контроль. Стронций -90 и цезий — 137. Пищевые продукты. Отбор проб, анализ и гигиеническая оценка. Методические указания по методам контроля. — М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 1998. 60 с.

82. Мурадов, М.С. Экстракция красящих веществ из растительного сырья / Мурадов М.С., Даудова Т.Н., Рамазанова JI.A. // Хранение и переработка сельхозсырья. — 2000. №4. - С.21-27.

83. Мясников, В.Г. Промысловые иглокожие и моллюски северо-западной части Японского моря / Мясников В.Г. // Рыбное хозяйство. — 2001. №1. — С.36-39.

84. Мясников, В.Г. Состояние и распределение ресурсов глубоководного ежа у берегов Северного Приморья / Мясников В.Г. // Рыбное хозяйство. 1997.- №6. С.27-28.

85. Оборотова, Н.А. Методы управления доставкой противоопухолевых препаратов и их использование при создании современных лекарств / Оборотова Н.А., Лопатин П.В. // Химиотерапия опухолей в СССР. — М., 1990.- Вып.55. С. 4-10.

86. Особенности биотехнологии липосомальных комплексов БАВ и биостимуляторов на основе природного Дальневосточного сырья: дис. . д. биол. Наук / Каленик Т.К. М., 1997-392 с.

87. Пат. РФ № 1821023. Способ получения 2,3,5,6,8- пентагидрокси-7-этил-1,4-нафтохинона / Ануфриев В.Ф., Новиков В.Л., Балашева Н.Н. и др. -заявл. 12.10.92.; опубл. 19.04.1993, Бюл. №21.

88. Патент РФ № 2203265. Способ получения 5,8-дигидрокси-2,3,6-триметокси-7-этил-1,4-нафтохинона / Кочергина Т.Ю., Ануфриев В.Ф. -заявл. 18.07.2001, опубл.27.04.2003.

89. Поваляева, Н.А. Каротиноидные красители / Поваляева Н.А.// Пищевая промышленность.- 2003.- № 5. -С. 52-53.

90. Применение пищевых добавок: технические рекомендации / Сарафанова JI.A. -4-е изд., расш. и доп. СПб.: ГИОРД, 2001. - 176с.

91. Родина, Т.Г. Сенсорный анализ продуктов / Родина Т.Г., Вукс Г.А. -М: Колос, 1994.-С.65-70.

92. СанПиН 2.3.2.1078-01. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов. Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы. М.: ФГУП «ИнтэрСЭН», 2002. - 168 с.

93. Сарафанова, JI.A. Синтетические пищевые красители: многообразие товарных форм для удобства применения / Сарафанова JI.A., Васекина И.В. // Пищевые ингредиенты, сырье и добавки. -2001.- № 1.- С. 22-23.

94. Сборник важнейших материалов по санитарным и противоэпидемиологическим вопросам СанПиН, гигиенические нормативы и перечень методических указаний и рекомендаций по гигиене питания / под ред. В.М.Подольского. М.: Рарог, 1992. - 386с.

95. Сейфулла, Р.Д. Проблемы фармакологии антиоксидантов / Сейфулла Р.Д., Борисова И.Т. // Фармакология и токсикология. -1990. -Т.53.- №6.- С.З-10.

96. Сильверстейн, Р. Спектрометрическая идентификация органических соединений / Сильверстейн Р., Басслер Г., Моррил Т. — М.: Мир, 1977. — 590с.

97. Симовьян, С.В. Микроволновый способ получения пищевого красителя из чайного сырья / Симовьян С.В., Благоразумова О.В. // Известия вузов. Пищевая технология. 1987. - № 4. — С. 52-53.

98. Скурихин И.М. Все о пище с точки зрения химика: справ. Издание / Скурихин И.М., Нечаев А.П. М.: Высш.шк., 1991. - 288с.

99. Смирнов, Е.В. Еще раз о пищевых красителях / Смирнов Е.В. // Пищевые ингредиенты, сырье и добавки. -2001. -№ 2. С. 38-40.

100. Стехова, С.И. Антимикробные вещества морских ежей / Стехова С.И., Шенцова Е.Б., Кольцова Е.А., Кулеш Н.И. // Биологически активныевещества при комплексной утилизации гидробионтов: материалы Всесоюзного совещания, Владивосток: ТИНРО, 1998, С. 82-83.

101. Туричев, В. Тартразин или p-каротин? Выбор между опасным и полезным оставлен за предприятием / Туричев В. // Пищевая промышленность.- 2002.-№5.- С.58.

102. Уткина Н.К. Химическое исследование хиноидных пигментов иглокожих: Дис. . канд. хим. наук. / Уткина Н.К. Владивосток, 1979.

103. Уткина, Н.К. Антрахинононовые пигменты морской звезды Echinaster Echinophorus / Уткина Н.К., Максимов О.Б. // Химия природных соединений. -1977.-№5.-С. 636-639.

104. Уткина, Н.К. О новом бинафтохиноне из Strongylocentrotus intermedius / Уткина Н.К., Щедрин А.П., Максимов О.Б. // Химия природных соединений. -1976.- №4. -С. 439-441.

105. Уткина, Н.К. Хиноидные пигменты иглокожих. Антрахиноны морской звезды Henricia Leviuscula / Уткина Н.К., Максимов О.Б.// Химия природных соединений.- 1979.-№ 2.-С. 148-151.

106. Хайрутдинова, А.Д. Натуральные красители для пивобезалкогольных напитков / Хайрутдинова А.Д., Денк М.В., Один А.П., Болотов В.М. // Пиво и напитки. 2003. -№ 6. -С. 24-25.

107. Шаблий, В.Я. Методические рекомендации для использования экспресс-метода биологической оценки продуктов и кормов / Шаблий В.Я., Долгов В.А., Нелюбин В.П., Суханов Б.П., Беленьков Н.Г. — М.: Высшая школа. — 1990.- Юс.

108. Шаззо, Р.И. Технология СОг-экстракции обработки сырья растительного и животного происхождения / Шаззо Р.И., Касьянов Г.И. // Хранение и переработка сельхозсырья.- 1999.- №3. С. 10-13.

109. Швец, В.И. Липиды в лекарственных препаратах / Швец В.И., Краснопольский Ю.М. // Вестник АН СССР.- №6.- 1990. С. 19-27.

110. Швилкин, А.В. Исследование протективного действия полигидрокси-1,4-нафтохинонов на модели экспериментальной окклюзии — реперфузиимиокарда / Швилкин А.В, Афонская Н.Н., Черпаченко Н.И. и др. // Кардиология. 1995.-Т.31.-№ 10.-С. 81-82.

111. Шубина, О. Функциональные добавки в напитках / Шубина О., Околелова Ю. // Пиво и напитки.- 2000. -№2. -С.48-49.

112. Шуляк, В.А. Натуральный пищевой краситель / Шуляк В.А., Березюк Д.И. // Хранение и переработка сельхозсырья. -1998. -№ 2. -С. 33-34.

113. Этлин, С.Н. Изучение токсичности химических веществ для инфузорий Tetrahymena pyriformis и животных / Этлин С.Н., Лахонина Г.М., Ирлина И.С., Попова Л.А., Малыгин С.А. // Гигиена и санитария. -1987. № 9. - С. 80-82.

114. Этлин, С.Н. Окружающая среда и здоровье населения / Этлин С.Н., Ирлина И.С., Попова Л.А.-Таллин, 1984. С. 187-188.

115. O 11035:1994. Дегустационный анализ. Идентификация и выбор дескрипторов для установления влияния сенсорного профиля при многостороннем подходе.

116. Allison A. Liposomes as immunological adjuvants / Allison A., Gregoriadis G. // Nature. 1974. - vol. 252.- № 32.-P. 252.

117. Alving C.R. Lipopolysccharide, lipid A and liposome cantaming lipid A as immunological adjuvants / Alving C.R. // Immunobiol.- 1993.- vol.187.- P. 430446.

118. Antimisiaris S.G. Liposomes as vaccine carriers: incorporation of soluble and particulate antigens in giant vesicles / Antimisiaris S.G., Jayasekera P., Gregoriadis G. // J. Imm. Meth.- 1993.- vol. 166.- P. 271-280.

119. Bangham A.D. Diffusion of univalent ions across the lamelae of swollen phospholipids / Bangham A.D., Standish M.M., Watkins I.C. // J. Mol. Biol.-1965.- vol.13.- P. 238-252.

120. Bangham A.D. Negative staining of phospholipids and their structured modification by surface agents as observed in the electron microscope / Bangham A.D., Hote R.W. // J. Mol. Biol.- 1964.- vol.8.- P. 660-668.

121. Buiting A.M.J. Liposomes as antigen carriers and adjuvant in vivo / Buiting A.M.J., van Rooijen N., Claasen E. // Res. Imm.- 1992.- vol.143. P. 541-548.

122. Dapergolas E. Penetration of target areas in the rat by liposome — assotiated bleomycin glucose oxidase and insulin / Dapergolas E., Neerunium D.E., Gregoriadis G. // FEBBS Lett. 1976. - vol.63. - P.235-239.

123. Driessen A.J.M. Insertation of lipids and protein into bacterial-membrans by fusion with liposomes / Driessen A.J.M., Konings W.N. // Meth. Enz.- 1993.- vol. 221.- P.394-408.

124. Dunnick J.K. Lipid vesicle interaction with MT-6 tumor cells and effect on subsequent cell growth / Dunnick J.K., Kallman R.F., Kriss J.P. // Biochim. Biophys. Res. Communs. 1976. - Vol.73. - P.619-621.

125. Euouz F. Minimal sirnctural requipments for adjuvant activity of bacterial peptidoglycan derivatives / Euouz F., Adam A., Cirbaru R., Lederer E. // Biochem. Biophys. Res. Comm.- 1974.- vol.56.- P.1317-1325.

126. Fox D.L. Biochemical and biophisical perspectives in marine biology.- N. Y.: Acad.Press, 1974.- vol.1.- ch.2.- P. 169-211.

127. Grasset E. Anavenoms and their use in the preparation of antivenoms sera / Grasset E. // Trans. Royal Soc. Trop. Med. Hyq.- 1985.- vol.38.- P. 463-488.

128. Gregoriadis G. Liposomes in biological systems / Gregoriadis G., Allison A.C. // Chichester N. Y.: John Willey and sons, 1980.- 398p.

129. Gregoriadis G. Carriers potential of liposomes in biology and medicine / Gregoriadis G. // N. Engl.J.Med.- 1976. Vol.95. - P.704-740.

130. Gregoriadis G. Control of the rate of hepatic uptake and catabolism in liposome entrapped proteins injected in rats. Possible therapeutic applications /Gregoriadis G., Neerunium D.E. // Eur. J. Biochem. - 1974. - Vol.47. - P. 179-185.

131. Gregoriadis G. Liposomal localization of p-fructofuranosidase containing liposomes injected into rats — implications in the treatment genetic disorders / Gregoriadis G., Ryman B.E. // Biochem. J. 1972. - Vol.129. - P.123-133.

132. Gregoriadis G. Liposomes for drug vaccines / Gregoriadis G. // Trend Biotechnol. 1985. - Vol.3, №9. - P.235-241.

133. Gregoriadis G. Liposomes in drug delivery. Clinical, diagnostic and ophthalmic / Gregoriadis G., Florens A.T. // Drugs.- 1993.- vol.45. P. 15-28.

134. Hirotsuka M. Calcium fortification of soy milk with calcium — lecitin liposome system / Hirotsuka M., Taniguchi H., Narita H., Kito M. // J. Food. Sci. 1984. -Vol.49.-P. 1111-1112.

135. Jack D. Combing the oceans for new therapeutic agents / Jack D. // Lancet. — 1998.-Vol.352.-P.704.

136. Jonah M.M. Tissue distribution of EDTA encapsulated within liposomes of varying surface properties / Jonah M.M., Cerny E.A., Rahman Y.E. // Biochim. Biophys. Acta. 1975.- vol. 401. - P.336-348.

137. Kheadr E.E. Acceleration of cheddar cheese lipolysis by using liposome — entrapped lipases / Kheadr E.E., Vuillemard J.-C., El- Deeb S.A. // J. Food. Sci. — 2002. №2. - Vol 67. - P. 485-492.

138. Kirby C.J. Accelerating ripening of cheese using liposome — encapsulated enzyme / Kirby C.J., Brooker B.E., Low В .A. // Int. J. Food. Sci. Technol. 1987. -Vol.22.-P. 355-375.

139. Matsuzaki M. The effect of cholesterol content of phospholipid vesicles on the encapsulation and acid resistance of p-galactosidase from E. Coli / Matsuzaki M., Mc Cafferty F., Karel M. // Int. J. Food. Sci. Technol. 1989. - Vol.24. - P. 451460.

140. Moran A.P. Structure — bioactivity relation ships of bacterial endotoxins. Journal of Toxicology / Moran A.P. // Toxin Rev.- 1995. vol.14. - P. 47-83.

141. Nabisco Brands Inc., PCT/US WO 90/ 15 537, 1990.

142. Oshima T. Recovery and use of nutraceutical products from marine resources/ Oshima T. // Food technology. 1998. - Vol.52. - №6. - P. 50-54.

143. Perrin P. Liposomes et vaccines // Les liposomes aspects technologiques, biologiques et pharmacologiques / Eds Delattre F., Couvreur P., Puisieux F., Philipot J.R., Shubert F.- P: Press, 1993.

144. Santaella C. Extended in vivo blood circulation time of fluorinated liposomes / Santaella C., Frezard F.,Vierlind P., Riess J.G. // Fed. Eur. Biochem. Soc. Letters.-1993.-vol.336.-P.481-484.

145. Scheuer P.J. Marine Natural Products. -N.Y.: Acad.Press, 1973.- P. 92-114.

146. Sessa G. Phospholipid spherules (liposomes) as a model for structure — linked latency / Sessa G., Neismann G. // J. Biol. Chem. 1970. - Vol.9- №2. - P.310-318.

147. Szoka F. Procedure for preparation of capture by reverse — rhase evaporation / Szoka F., Papahadjopoulos D. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1978.- vol.75.- P. 4194-4198.

148. Szoka F.J. Comparative properties and methods of preparation of lipid vesicles (liposomes) / Szoka F.J., Papahadjopoulos D. // Annual. Rev. Biophys. Bioenerg. 1980. - Vol.9 - №3. -P. 467-508.

149. Tan L. Incorporation of reconstituted influenza virus envelops into liposomes: studies of the immune response in mice / Tan L., Loyter A., Gregoriadis G. // Biochem. Soc. Transactions. 1989 - vol.17. - P. 129-130.

150. Taylor K.M.C. The Lecitins: Properties, functions, and application in biology and medicine / Taylor K.M.C., Taylor G., Kellaway I.W. / Eds. I.E.Liener, N.Sharon, I.J.Goldenshtein.- Orlando Fla: Academic Press, 1986.- .600p.