автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.07, диссертация на тему:Получение и применение коллагенсодержащих пленкообразующих композиций в технологии мясных продуктов

На правах рукописи

СЮ3492823

ПОЛУЧЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ КОЛЛАГЕНСОДЕРЖАЩИХ ПЛЕНКООБРАЗУЮЩИХ КОМПОЗИЦИЙ В ТЕХНОЛОГИИ МЯСНЫХ ПРОДУКТОВ

05.18.07 - Биотехнология пищевых продуктов

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

Воронеж-2009

Работа выполнена на кафедре технологии мяса и мясных продуктов ГОУ ВПО «Воронежская государственная технологическая академия»

Научный руководитель:

доктор технических наук, доцент Глотова Ирина Анатольевна (ГОУ ВПО «Воронежская государственная технологическая академия»)

Официальные оппоненты:

: доктор технических наук, профессор Григоров Василий Степанович

(ГОУ ВПО «Воронежская государственная технологическая академия»)

кандидат технических наук,

доцент Базарнова

Юлия Генриховна

(ГОУ ВПО «Санкт-Петербургский

государственный университет

низкотемпературных и пищевых

технологий», г. Санкт-Петербург)

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Московский государственный

университет прикладной биотехнологии», г. Москва

Защита состоится "30" декабря 2009 года в 14 часов 00 минут на заседании диссертационного совета Д 212.035.04 при ГОУ ВПО «Воронежская государственная технологическая академия» по адресу: 394036, г. Воронеж, проспект Революции, 19, ауд. 035.

Отзывы на автореферат (в двух экземплярах), заверенные гербовой печатью учреждения, просим присылать в адрес совета академии.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Воронежской государственной технологической академии.

Автореферат размещен на официальном сайте ВГТА www.vgta.vrn.ru

Автореферат разослан "27" ноября 2009 г. Ученый секретарь \У Е.И. Мельникова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Современный этап развития техники и технологий ставит как одну из наиболее актуальных проблему надежности биологических систем, что непосредственно связано со здоровьем человека в современных условиях урбанизации, экологической и социальной напряженности, хронического стресса и других неблагоприятных факторов. Важнейшая задача биотехнологии - обеспечение здоровья человека через питание. Другой немаловажной задачей является экологическая безопасность продуктов и производств, решение которой состоит в разработке рациональных и эффективных способов утилизации вторичных ресурсов в отрас-ix перерабатывающего сектора АПК. Для мясной промышленности первое место по объемам занимает коллагенсодержащее сырье.

В работах JI.B. Ангиповой, А.И. Жаринова, H.H. Липатова (мл.), Г.И. Касьяно--а, Ю.И. Ковалева, А.И. Мглинца, И.А. Рогова, Э.С. Токаева, С.А. Каспарьянца, .И. Сапожниковой, G.N. Ramachandran, Р. Borstein, др. отечественных и зарубеж-ых ученых обоснованы подходы к рациональному использованию коллагенсодер-ащего сырья в пищевых технологиях с учетом медико-биологических требований нутриентно адекватному питанию и пищевой комбинаторики. Результатами ис-ледований JI.B. Антиповой, Э.Г. Розанцева, А.Г. Снежко, О.П. Дворяниновой, '.Г. Ибрагимовой и др. доказана эффективность биотехнологических подходов по ыделению из тканей животных и рыб коллагеновых субстанций, способных к само-грукгурированию. Однако потенциальные возможности коллагеновых белков как омпонентов самоорганизующихся биополимерных систем с полифункциональны-и свойствами изучены и реализованы в виде технологических решений и рекомен-аций мясоперерабатывающей промышленности крайне недостаточно. При этом нтерес и перспективу представляет реализация возможностей коллагеновых белков ак носителей биологически активных веществ, что обусловлено уникальным гроением этого природного биополимера и наличием большого количества реакци-нноспособных групп.

Практика промышленно развитых стран показывает приоритет барьерных тех-ологий в получении безопасных продуктов питания. Имея в виду маркетинговые ценки потребительского рынка, привлекают внимание мясные полуфабрикаты и улинарные изделия из мяса птицы как объекты для эффективного использования иотехнологического потенциала растительного сырья, многие виды которого отли-ают выраженные бактериостатические свойства в сочетании высоким уровнем ан--юксидантной активности.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР кафедры ехнологии мяса и мясных продуктов Воронежской государственной технологиче-кой академии «Теория и практика производства биологически полноценных, ком-инированных, аналоговых и функциональных продуктов питания на основе рацио-ального использования сельскохозяйственных ресурсов с привлечением методов иотехнологии» (2006-2010 гг., № г. р. 012.006.037.63).

Цель работы - обоснование барьерных технологий мясных полуфабрикатов и родуктов кулинарной готовности за счет целенаправленного использования колла-еновых белков животных тканей и биологически активных веществ растений.

В рамках поставленной цели решались задачи:

- выбор объектов животного и растительного происхождения для получения пленкообразующих композиций с барьерными свойствами;

- обоснование условий модификации биополимерных систем соединительных тканей животных для использования их компонентов в качестве носителей биологически активных веществ растений;

- обоснование рецептурного состава пленкообразующих композиций для реализации барьерных технологий и разработка технологической схемы их получения;

- комплексная оценка их свойств;

- обоснование рекомендаций по использованию в частных технологиях мясных продуктов;

- разработка проектов технической документации на мясные полуфабрикаты и продукты кулинарной готовности в коллагеновых покрытиях; оценка экономической эффективности предлагаемых технических решений.

Часть экспериментальных исследований проводилась в сотрудничестве с учеными и специалистами кафедр ядерной физики и аналитической химии Воронежского государственного университета, аналитического центра ВГТА, кафедры физики Высшей школы милиции г. Воронежа.

Научные положения, выносимые на защиту.

Структурная характеристика методами рентгенофазового анализа, ИК-спектроскопии, электрофореза, ионообменной хроматографии продуктов биомодификации жилок и сухожилий крупного рогатого скота (КРС).

Гипотетическая квантово-механическая модель взаимодействия флавоноидов и пегггидов, характерных для продуктов биомодификации коллагена ферментным препаратом «Коллагеназа пищевая».

Комплекс свойств коллагенсодержащих пленкообразующих композиций с использованием С02-экстрактов растительного сырья.

Рецептурный состав пленкообразующих композиций и обоснование применения в частных технологиях мясных продуктов.

Научная новизна. Обоснован выбор объектов животного и растительного происхождения для получения пленкообразующих композиций с барьерными свойствами.

Определены условия модификации биополимерных систем соединительных тканей животных (на примере жилок и сухожилий крупного рогатого скота в сравнении с базовым объектом - гольевым спилком шкур) для использования в качестве носителей биологически активных веществ.

Методами рентгенофазового анализа, ИК-спектроскопии, БОБ-электрофорез; идентифицированы структурные особенности продуктов модификации коллагено вых белков и изучен их молекулярно-массовый состав.

Проведена оценка сорбционной способности биополимерной системы в состав! продуктов модификации жилок и сухожилий крупного рогатого скота по отноше нию к ароматическим веществам СОг-экстрактов растительного сырья.

На основе квантово-механического моделирования разработана гипотетическа) модель взаимодействия продуктов модификации коллагеновых белков с биологиче ски активными веществами экстрактов растительного происхождения на пример! флавоноидов.

Обоснованы режимы получения пленкообразующих композиций и проведена комплексная оценка их свойств. Подтверждено предпочтительное действие аскорбиновой кислоты на структурообразование коллагеновых дисперсий на основе отходов жиловки говядины по сравнению с уксусной кислотой. Подтверждены барьерные свойства пленкообразующих композиций в результате использования СО?-экстрактов растений и специй в качестве их рецептурных компонентов.

Практическая значимость. Обоснованы режимы двухстадийного пероксидно-щелочного и ферментативного гидролиза жилок и сухожилий крупного рогатого скота применительно к получению пищевых пленочных покрытий. Разработана технологическая схема получения пленкообразующих композиций с использованием биомодифицированных коллагеновых белков и биологически активных веществ лекарственных растений и специй.

Предложены модифицированные технологические схемы производства мясных рубленых полуфабрикатов и кулинарных изделий из мяса птицы в пищевых пленочных покрытиях с пролонгированными сроками годности. Модифицированная технология мясных рубленых полуфабрикатов позволяет в 1,9 раза снизить пероксид-ное число при хранении в течение 30 суток при температуре минус 18 °С, улучшить органолептические показатели, на 5-8 % повысить массовый выход изделий при кулинарной обработке.

Модифицированная технология изделий кулинарных из мяса птицы обеспечивает стабильность микробиологических показателей (КМАФАнМ и БГКП) на уровне санитарно-гигиенических требований, в течение 10 суток, по сравнению с 3 сутками для контрольных образцов, а также увеличение массового выхода на 10 % и высокую органолептическую оценку.

Разработанные и модифицированные технологии прошли промышленную апробацию на ОАО «Хладокомбинат», г. Воронеж, ОАО «Комбинат мясной «Калаче-евский» (г. Калач Воронежской обл.). На новые полуфабрикаты и продукты разработаны проекты технической документации («Композиции коллагенсодержащие пленкообразующие», «Полуфабрикаты мясные замороженные», «Изделия кулинарные. Окорочка куриные в коллагеновом покрытии»).

Апробация работы. Основные положения и результаты диссертационной работы доложены и обсуждены в период 2006+2009 гг. на ежегодных отчетных научных конференциях Воронежской государственной технологической академии; международных и всероссийских научных и научно-практических конференциях: «Перспективные нано- и биотехнологии в производстве продуктов функционального назначения» (Краснодар, 2007); «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва, 2007); «Потребительский рынок: качество и безопасность товаров и услуг» (Орел, 2007); «Биотехнология. Вода и пищевые продукты» (Москва, 2008); «Пищевая и морская биотехнология: проблемы и перспективы» (Светлогорск, 2008); «Современные проблемы науки» (Тамбов, 2008); «Инновационные технологии переработки сельскохозяйственного сырья в обеспечении качества жизни: наука, образования и производство» (Воронеж, 2008); «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва, 2008); «Биотехнология. Вода и пищевые продукты» (Москва, 2008); «Инновационные технологии переработки сельскохозяйственного сырья в обеспечении качества жизни: наука, образование и производство» (Воронеж, 2008); «Инновационные технологии в пищевой промышленности» (Самара, 2009); пятом Московском международном конгрессе «Биотехнология: состояние и

перспективы развития» (Москва, 2009) и др.

Разработки экспонировались на научно-технических выставках: 25 межреги нальной специализированной выставке «Продторг» (Воронеж, 2008), конкурсе и новационных проектов «Воронежский агропромышленный промышленный форум (Воронеж, 2009) и удостоены дипломов трех дипломов в составе коллективной к федрапьной экспозиции.

Публикации. По результатам проведенных исследований опубликовано 25 р бот, из них 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК, 14 статей в научн технических журналах и материалах конференций, 9 тезисов докладов.

Структура и объем работы. Диссертационная работа включает введение, о зор литературы, характеристику объектов и методов исследований, три главы эксп риментальной части, выводы, список использованных источников и приложени Работа содержит 254 страницы машинописного текста, в том числе 73 страни приложений, 30 таблиц, 60 рисунков. Библиография включает 160 наименований.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цели и зада исследований.

Глава I. Аналитический обзор литературы. Осуществлен обзор данных учно-технической литературы, касающихся состава, структуры, свойств коллаге содержащего сырья. Проанализированы различные способы выделения и модиф кации коллагена соединительной ткани животных как объекта моделирования на структур с заданными свойствами.

Охарактеризованы классы соединений из различных источников растительна сырья с точки зрения использования для антиоксидантной защиты пищевых систе

Рассмотрены барьерные технологии как совокупность факторов, обеспечива щих безопасность и качество пищевых продуктов. Показана эффективность испо зования пищевых покрытий, как одного из важных элементов технологии барьер применительно к производству мясных продуктов различных ассортиментных груп

Глава II. Объекты, материалы и методы исследований.

В соответствии с целью и задачами работы объектами исследования служи жилки и сухожилия, выделенные при жиловке говядины, как исходное сырье , получения пленкообразующих композиций; продукты их химической и фермен тивной модификации; С02-экстракты лекарственных растений и специй произв ства компании ОАО " Караван": зверобоя (ТУ 9169-048-10140736-03); календ^ (ТУ 9169-026-10140736-03); ромашки (ТУ 9169-001-10140736-03); гвозд: (ТУ 9169-025-10140736-03); гвоздики (ТУ 9169-025-10140736-03); корицы (ТУ 91 031-10140736-03); тыквы и виноградных косточек (ТУ 9169-011-10140736-03); г рушки (ТУ 9169-076-10140736-03); коллагенсодержащие пленкообразующие ком зиции с их использованием; полуфабрикаты мясные рубленые в традиционной нировке и пищевых коллагеновых пленках; окорочка куриные запеченные в плен ном покрытии и без него. По показателям безопасности и микробиологическим казателям все сырье соответствовало требованиям СанПиН 2.3.2.1078 - 2001.

Порядок проведения эксперимента, объекты и методы исследований преде лены на рис. 1.

Объекты исследования

Ферментные препараты |Коллагенсодержащее сырье

Выбор, обоснование применения Характеристика, обоснование применения

Пероксидно-щелочная обработка Ферментативный гидролиз i Модификация структуры соединительной ткани ' 1

Источники антиоксидангов - - ; -

СОг-экстракты лекарственных

Продукты гидролиза коллагена

растений^и специй

УФ-спектроскоскопия

Оценка антиоксидантной активности

ШС-спектроскопия

Рекггенофазовый анализ

SDS-электрофорез

Идентификация структуры продуктов гидролиза

I -

Выбор, обоснование применения компонентов

Сорбционная способность

Квангово-механическое моделирование

I

Разработка технологии пленкообразующих композиций

Комплексная оценка качества

Физико-химические показатели

Органолептические показатели

I

Бактериостатическая активность

Безвредность и биологическая активность - I

Модифицированные частные технологии

Рубленые полуфабрикаты

Кулинарные изделия из мяса птицы

X

Физико-химические показатели

Органолептические^показатели

Пищевая и биологическая ценность

Микробиологические показатели

Проекты технической документации

Оценка экономической эффективности

Производственная апробация

Рис. 1. Схема экспериментальных исследований

Анализ химического состава сырья полуфабрикатов и продуктов проводили в лабораторных и производственных условиях в соответствии с рекомендациями: массовую долю влаги - по ГОСТ 9793; жира - методом Сокслета и рефрактометрически (JI.B. Антилова, 2001); золы - по ГОСТ 15113.8; общего белка - методом Кьельдаля, (Л.В. Антипова, 2001); pH - потенциометрически, (Л.В. Антипова, 2001); реологические свойства - на приборе RHEOTEST (Германия), вибровискозиметре SV-10, (Л.В. Антипова, 2001); пероксидное число - по ГОСТ 8285; аминокислотный состав - методом ионообменной хроматографии на аминоанализаторе ААА-881; оценку аминокислотной сбалансированности и биологической ценности сырья и продуктов - согласно рекомендациям (Липатов H.H., 1995); безвредность и биологическую активность но-

вых продуктов - на тест-культуре Paramecium caudatum (Бузлама B.C. и др., 1997); органолептические показатели качества готовых изделий - в соответствии ГОСТ 9793; функционально-технологические свойства: влагосвязывающую способность по методу Грау и Хамма в модификации В.П. Воловинской и Б.И. Кельман; влагоудер-живающую - согласно рекомендациям (JI.B Антипова, 2001); переваримость белков исследуемых продуктов пищеварительными ферментами «in vitro» - методом По-кровского-Ертанова; рентгенофазовый анализ продуктов гидролиза коллагенсодер-жащего сьфья - на установке ДРОН 4-07; сорбционную способность - методом пьезо-кварцевого микровзвешивания на установке «Электронный нос» (Я .И. Коренман, Т.А. Кучменко, 2002); идентификацию фенольных соединений - методом ультрафиолетовой спектроскопии на установке UVMini-1240 "Shimadzu"; SDS-электрофорез - на приборе вертикального электрофореза (VE-1M, ООО «Биоклон» по методу Лэммли; содержание флавоновдов в пленкообразующих композициях - фотоколориметрическим методом (Будавева В.В., 2004); антиоксидантную активность -на установке «Цвет Яуза-01-AA» по ТУ МЕКВ. 414538.001; оценку структурных изменений продуктов гидролиза соединительной ткани - методом ИК-спектроскопии на спектрофотометре ИКС-29 в области 4000-650 см"1; для квантово-химического моделирования использовали квантово-химическую и молекулярно-динамическую программу HyperChem, Release 8.0. Повторность опытов трехкратная. Обработка экспериментальных данных - методами математической статистики (программа Statistica 7, IBM PC.Pentium-4).

Глава III. Исследование условий получения пленкообразующих композиций с использованием модифицированных коллагеновых белков и биологически активных веществ растений.

Выбор С02-экстрактов лекарственных растений и специй в качестве источников БАВ обусловлен их концентрированной формой при высоком уровне целевой активности за счет технологии получения; исключением дополнительной микробной контаминации продукта в случае их использования; высокой хранимо-

способностью. По дифференциальным спектрам поглощения нами идентифицированы следующие вещества в составе перечня С02-экстрактов растительного сырья: гидроксикоричные кислоты (230-240 нм и 290-320 нм); флавоны и флавонолы (200-270 нм и 350-390 нм); флавононы (270-290 нм); изофлавоны (250-270 нм); токоферолы (280-300 нм). Установленный состав фенольных соединений обусловливает антиоксид антную активность С02-экстракгов растительного сырья, которая убывает в ряду (мг/см3): гвоздика (19,50) > петрушка (10,01) > корица (9,27) > зверобой (8,65) > тыква+виноградные косточки (7,79) > ромашка (6,26).

— Зверобой; - - Гвоздика; — Ромашка; — Корица; —Петрушка; Тыквэ+виноградная косточка

Рис. 2. Спектры поглощения растворов С02-экстрактов лекарственных растений и специй

Данные общего химического и фракционного состава белков жилок и сухожилий КРС, известные особенности морфологического строения и рекомендации (J1.B. Антонова и др., 2003, 2006 гг.) говорят в пользу этого сырья как объекта для получения пищевых пленкообразующих покрытий при условии очистки от балластных фракций и целенаправленной модификации нативной структуры коллагеновых белков.

В связи с дефицитом отечественных ферментных препаратов общепротеолитиче-ского действия как альтернативу ферментативной обработке для удаления балластных белковых фракций и разрыхления структуры соединительной ткани использовали смесь гидроксида натрия и пероксида водорода, успешно апробированную ранее по отношению к гольевому спилку шкур КРС (А.И. Сапожникова и др., 1997 г).

По степени набухания сырья и эффекту удаления балластных белковых фракций выявлено рациональное соотношение применяемых реагентов в диапазоне концентраций раствора NaOH 5-10 % и Н2Ог 1-5 %. В интервале соотношений 10+1 - 5+1 время обработки для достижения максимальной степени набухания сырья составляет 6 часов. При изменении соотношения в сторону увеличения в составе композиции перошш водорода от 3,3+3 до 2,5+1 продолжительность обработки увеличивается в 2 раза (12ч); от2+1 до 1,7+1 - в4 раза(24 ч); от 1,5+1 до 1+1 - в 8раз(48 ч).

При химической обработке сырья в растворе, содержащем гидроксид натрия и пероксид водорода, в результате взаимодействия этих двух компонентов происходит экзотермическая реакция, которая интенсифицирует процесс проникновения щелочи в структуру коллагеновых фибрилл. Механизм действия гидроксида натрия заключается в нарушении и ослаблении некоторых водородных мостиков, частичном разрыве белково-углеводных мембран, окружающих пучки коллагеновых фибрилл.

Очевидно, пероксид водорода в использованных концентрациях, разлагаясь, значительно повышает внутрипоровое давление в соединительной ткани, раздвигая ее структурные элементы, и вызывает образование множественных связей радикального типа между активными группами боковых цепей молекул коллагена, позволяя добиться наилучшего поглощения гидроксида натрия. Одновременно с этим перекись вызывает окислительную деструкцию балластных веществ коллагенсодержащего сырья, что способствует получению кислоторастворимого коллагена.

Далее изучали условия бимодификации полученного коллагена под действием ферментного препарата протеолитического действия - коллагеназа пищевая (ТУ 2639001-45554109-98), производитель ЗАО «Биопрогресс»). Ферментный препарат применяли в виде растворов при дозировке 0,015 - 0,15 % (0,1-1,0 ед. ПА/г белка) к массе субстрата при постоянном уровне остальных факторов: температура (37±1) °С, гидромодуль 1:2, pH среды 7 в соответствии с рекомендациями (Л.В. Антипова, A.A. Донец, 2002). Экспериментально установлено, что целесообразными режимами ферментативной обработки на второй стадии модификации являются дозировка ферментного препарата 0,02 % к массе субстрата при продолжительности 2,5-3 ч.

Двухстадийная обработка коллагенсодержащего сырья позволяет осуществить выделение и последующую биомодификацию коллагеновой фракции белков. Целенаправленность этого воздействия подтверждает рентгенофазовый анализ, который позволяет идентифицировать межплоскостные расстояния, характерные для аминокислотных остатков в структуре полипептидной цепи коллагена, основные и примесные кристаллические фазы, а также соотношение кристаллической и аморфной ф:з в исследуемых образцах (рис. 3).

tm МОДА - с» ЧИСТ» 1«ПХТОЙПОв - I ГО*». - НЯ1РИРИМЯ нона» нлч.игоп юн.уго* в«г знака, аогостъ kwsc.hht. 1 18.009 ТВ.ВОв B.1W Ь.во 1 542 Игашцд—ioi-ifc кбсатхнмл Лея кым «_ S42

20—*

ТАБЛИЦА ПИКОВ СПЕКТРА

№ 20, град. Площ 1 прив Полушир Мсжпл, А 1,%

1 14,98 14 12 1,89 5,986 14,3

2 17,68 25 21 1,89 5,811 25,8

3 19,58 28 24 1,81 4,575 28,6

4 26,88 5 9 8,48 3,326 10,7

5 31,94 29 84 8,33 2,885 100

6 45,71 6 15 8,37 1,985 17,9

7 56,88 2 6 8,37 1,621 7,1

8 66,53 г 7 8,32 1,484 8,3

Т*1 Г*®* - С» ЧЙСЛЬ Ж7Е?>»Л0В - 1 ЫЛГ З'СЭТ s.iec 6.i «бсолтшш__I

ТЕЯИИ - НШГОЫмв

I. сижса нлкс.ннт. 1 WO

ТАБЛИЦА ПИКОВ СПЕКТРА

№ 26, фад. Площ I ПРИЗ Полушир Межпл,А 1>

1 19,18 28 18 8,85 4,623 5,9

2 28,45 13 28 8,58 4,332 6,6

3 21,58 16 21 8,88 4,133 6,9

4 23,22 18 18 8,41 3,834 5,9

5 24,88 16 16 8,76 3,723 5,3

6 25,58 11 11 8,89 3,586 3,6

7 31,84 96 286 8,26 2,805 100

8 31,98 148 183 8,62 2,797 60,2

9 45,58 2 6 8,26 1,993 2,8

18 56,68 1 6 8,12 1,626 2,8

11 66,49 83 384 8,21 1,488 25,5

12 66,58 168 198 8,68 1,484 62,5

W1 ЯН0ДА - О. ЧИСЛО ИЮТГВЙПС» - 1 POWt - ншжгшт иоюг нм.етоя кои.»гоя ьлг жат. скорость нмгс.икг. I мкем лв.евв в.im t.м i 32?

№go»KOn>MocTl» абсолюта

29-»

ТАБЛИЦА ПИКОВ СПЕКТРА

№ 20, град. Площ Inpiffi Полушир Межлл,А !,%

1 10,41 3 9 0,35 8,506 18,4

1 14,06 2 7 0,24 6,281 14,3

3 16,00 6 8 0,79 5,505 16,3

4 17,40 7 20 0,33 5,096 40,8

5 19,75 18 38 0,56 4,484 77,6

6 21,07 9 13 0,78 4,230 26,5

7 23,33 10 14 0,69 3,801 28,6

8 25,21 14 30 0,47 3,534 61,2

9 2i, 62 7 13 0,39 3,351 26,5

10 27,17 9 14 0,39 3,278 28,6

11 28,00 25 49 0,40 3,175 100,0

12 29,92 24 43 8,53 2,988 87,8

13 32,00 12 10 1,15 2,788 20,4

14 33,11 8 10 0,77 2,698 20,4

15 34,71 13 21 0,48 2,585 42,9

16 35,40 20 26 0,58 2,529 53,1

17 37,44 9 19 0,45 2,398 38,8

18 38,27 2 8 0,26 2,350 16,3

19 40,11 18 15 1,18 2,243 30,6

28 41,39 8 13 0,76 2,186 26,5

21 42,90 16 17 1,06 2,113 34,7

22 45,10 15 16 0,92 2,006 32,7

23 48,20 5 8 0,65 1,884 16,3

24 51,30 3 8 0,42 1,781 16,3

25 54,05 6 6 0,92 1,695 12,2

26 55,82 1 6 0,17 1,647 12,2

27 58,10 3 5 0,50 1,590 10,2

28 59,10 3 7 0,44 1,566 14,3

29 63,30 0 4 0,11 1,469 8,2

30 66,30 1 4 0,14 1,410 8,2

Рис. 3. Дифрактограммы коллагеновой дисперсии, полученной после гидролиза: а - пероксидно-щелочного; б - ферментативного; в - пероксидно-щелочного и ферментативного

На всех дифрактограммах отмечено наличие аморфного гало, указывающего на присутствие некоторой доли аморфной фа-в зы в образцах. Ярко выраженная аморфная

фаза наблюдается у дисперсии, полученной после обработки препаратом коллагеназы в дозировке 6 ед.ПА/г белка (рис. 36), что свидетельствует о высокой степени деструкции трехцепочечных спиралей молекул коллагена.

Наличие дифракционных линий, идентичных с эталонными линиями коллагена в кристаллической фазе (A.A. Зайдес, А.Н. Михайлов) для образца, полученного после перокендно-щелочного гидролиза (рис. За), позволяет сделать вывод о сохране-

нии в основных чертах структуры, свойственной нативному коллагену.

В структуре образцов после двухстадийной химической и ферментативной обработки имеются упорядоченные (кристаллические) и неупорядоченные (аморфные) участки с характерными интерференционными максимумами для коллагена, равные расстоянию 2.86 А, соответствующие длине одного аминокислотного остатка, и периодами с с! = 11.4 А и 4.6 А соответствующие расстоянию между боковыми цепями аминокислотных остатков, а также присутствуют фазы желатина и неидентифици-рованные фазы, наличие которых связано, вероятно, с наличием малой доли низкомолекулярных продуктов гддролиза белка (рис. Зв).

Таким образом, двухстадийная обработка жилок и сухожилий КРС приводит к разрушению внутри- и межфибриллярных связей, уменьшению исходной молекулярной массы коллагена. В свою очередь, это ведет к увеличению содержания фракций кристаллического коллагена, который ряд исследователей относят к ки-слоторастворимому.

Из анализа максимальной и приведенной интенсивности анализируемых образцов следует, что степень упорядоченности коллагеновых белков после двухстадий-ного пероксидно-щелочного и ферментативного гидролиза в 3,4 раза выше, чем после пероксидно-щелочного гидролиза и в 5,6 раз выше, чем после ферментативного гидролиза. Рентгенофазовый анализ позволяет выявить упорядоченные структуры полипептидных цепей коллагена, однако наличие значительного аморфного гало и неидентифицированные мелкие пики вызывают необходимость исследования мо-лекулярно-массового распределения белковых фракций с помощью БВБ-электрофореза. В результате разделения методом ЗОБ-электрофореза в ПААГ в препарате было выявлено 4 основных фракции (рис. 4, табл. 1).

А В

БСА (б? ¡¡Оа)—■

Трипсин (24 кЮэ)' Лизоцим (14,6 кОа)

Таблица 1 - Относительная электрофоретическая подвижность,

молекулярная масса и массовая доля белковых ( ррахций

Белок Яь отн.ед. Молекулярная масса, Е>а Массовая доля фракций,* %

] 0,031 2,005 101100 18,4

2 0,077 1,950 89100 19,1

3 0,107 1,918 82700 22,3

БСА 0,246 1,826 67000

4 0,312 1,706 50800 40,1

Трипсин 0,650 1,380 24000

Лизоцим 0,830 1,158 14400

' 0,1 % - неидентифицированные фракции

Рис. 4. Электрофореграммы фракций биомодифицированного коллагенсо-держащего сырья: А - белковые метчики; В - опытный образец

Результаты свидетельствуют, что выбранный вариант обработки обеспечивает деструкцию нативного коллагена, сопровождающуюся уменьшением его молекулярной массы от 3 до 5,9 раза. Однако результаты рентгенофазового анализа и известный из литературных источников механизм действия коллагеназы позволяют говорить о низкомолекулярных фракциях коллагена, которые сохраняют упорядоченные области.

Структурную стабильность полученных продуктов модификации коллаген-содержащего сырья подтверждают результаты ИК-спектроскопии. Идентифицированы характерные для аминокислот валентные колебания в области ЫН- и ОН-групп (3300-3600 см"1). В этой области поглощения находятся характеристические

и

частоты групп N11 и ОН, как свободных (3532 см"), так и водородносвязанных (3416 см"1), а также структурно связанной воды, которая является одним из компонентов, обеспечивающих структурную стабильность белковых молекул.

Результаты позволяют предположить, с одной стороны, их сорбционную способность по отношению к компонентам С02-экстрактов растительного сырья, а с другой - способность к самоструктурированию за счет свободных боковых функциональных групп. Для количественной оценки сорбционной способности коллагена по отношению к С02-экстрактам растительного сырья был проведен сенсорометрический анализ на установке «Электронный нос» с применением газовых пьезосенсоров (рис.5).

Вносимый объем экстракта корицы, мкл

В 1 сут 13 3 сут а 5 сут

50 100 150 200

Вносимый объем экстракта петрушки, мкл ЁЭ 0,5 сут Ш 1 сут И 3 сут И 5 сут

б

50 100 150 200

Вносимый объем экстракта зверобоя, мкл 0 0,5 сут Н 1 сут В 3 сут И 5 сут

50 100 150 200

Вносимый объем экстракта ромашки, мкл 0,5 сут 0 1 сут Q3 сут а 5 сут

0 0,5 сут

100 150 200

Вносимый объем экстракта гвоздики, мкл

а 1 сут Q 3 сут а 5 сут

Рис. 5.

Д е

Влияние вносимого объема С02-зкстрактов растительного сырья на динамику изменения аромата в газовой фазе в присутствии модифицированного коллагена: а — корицы; 6 - петрушки; в - тыквы и выиноградных косточек; г - зверобоя; д- ромашки; е- гвоздики

12

Выбор сорбентов обусловлен преобладающими в составе экстрактов ароматами в соответствии с их химической природой: петрушка - терпены и терпеноиды, эфирные масла; корица - эвгенол, коричный альдегид (жирноароматический ненасыщенный альдегид); тыква и виноградные косточки - эфирные масла, фенольные соединения; зверобой - терпены, эфирные масла; ромашка - терпеноиды, эфирные масла; гвоздика - эфирные масла (эвгенол), фенольные соединения. В качестве чувствительной пленки, наносимой на электроды пьезорезонаторов, был выбран сорбент полярной природы - Тритон Х-100, чувствительный к фенольным соединениям и эфирным маслам.

Установлено, что накопление ароматических веществ в газовой фазе достигает максимального значения в первые сутки хранения, затем соединения, содержащиеся в газовой фазе, переходят в пробу, т.е. сорбируются на коллагеновом белке. Наличие гидрофобных и гидрофильных зон коллагена позволяет предположить, что процесс сорбции происходит как за счет водородных связей, так и за счет гидрофобных взаимодействий между радикалами аминокислот в структуре продуктов деструкции коллагена и ароматическими углеводородами, содержащимися в ССЬ-экстрактах, обладающими дифильными свойствами.

Анализируя полученные данные, можно заключить, что 1 г продукта, полученного после химической и ферментативной модификации жилок и сухожилий КРС, способен связывать от 150 до 200 мкл экстрактов корицы, петрушки, ромашки и от 100 до 150 мкл экстрактов зверобоя, гвоздики, тыквы и виноградной косточки соответственно.

Экспериментальное исследование аминокислотного состава продуктов гидролиза соединительнотканных белков показало, что суммарное содержание глицина, пролина и оксипролина, играющих ключевую роль в формировании стабильной структуры коллагена, составляет 39,6 % к сумме аминокислот, в том числе глицина - 12,03 %. Высокую степень очистки коллагеновых субстанций подтверждают отсутствие триптофана, низкие доли метионина (1,44 %) и тирозина (0,91 %). Обращают внимание высокие доли аланина (7,1 %) и аргинина (10,2 %).

Используя результаты анализа аминокислотного состава продуктов биомодификации жилок и сухожилий КРС, а также известные результаты (A.A. Зай-дес) рентгенофазового анализа характерной для а(1) спирали коллагена последовательности аминокислотных остатков - глицин-пролин-лизин-глицин-пролин-аланин-глицин-глутамин-аргинин, нами с помощью имеющихся алгоритмов (квантово-химическая и мо-лекулярно-динамическая программа HyperChem версии 8,0) осуществлена геометрическая оптимизация данного участка а(1) спирали коллагена (рис. 6).'

Величина суммарной энергии ис-

Рис. 6 - Конфигурация пептидного участка коллагена

Рис. 7 - Гипотетическая модель взаимодействия флавоноида с глицином и аргинином в структуре продуктов гидролиза коллагена

5,56 Дебая, среднеквадратичный

следуемой модели является достаточно малой величиной (28,791 ккал/моль), среднеквадратичный градиент приближен к нулевому значению (0,099 ккал/(Ахмоль)), что свидетельствует об эффективно выполненной процедуре минимизации потенциальной энергии и сбалансированности энергетических свойств системы.

На следующем этапе, используя известные данные о структуре ароматических веществ фенольного ряда С02-экстрактов, на примере флавоноида (как одного компонентов СОг-экстрактов, обладающих антиоксидантной активностью) построена гипотетическая модель взаимодействия с ним двух из преобладающих в составе продуктов биомодификации жилок и сухожилий КРС аминокислот - глицина и аргинина (рис. 7). Проведенная геометрическая оптимизация взаимодействия молекул флавоноида с аминокислотами коллагена показывает, что суммарная энергия системы равна 48,358 ккал/моль), величина дипольного момента -градиент - 0,099 ккал/(Ахмоль).

Как видно из предложенной модели, в процессе комплексообразования участвуют водородные связи между гидрофильными аминокислотами и участками молекулы флавоноида. Однако наличие в структуре коллагена неполярных аминокислот и в экстрактах растений веществ, состоящих из углеводородной цепи без полярных участков молекул, позволяет предполагать, что в процессе комплексообразования участвует и гидрофобное взаимодействие.

Глава IV. Получение и комплексная оценка свойств пленкообразующих композиций.

Таблица. 2 - Рецептура коллагенсодержащих Совокупность результатов исследо-

ваний позволила предложить варианты рецептур (табл. 2) и принципиальную технологическую схему получения коллагено-вых пленкообразующих композиций (рис. 8). Разработанная технологическая схема пленкообразующих композиций с С02-экстрактами лекарственных растений и специй позволяет расширить аспекты применения коллагенсодержащего сырья, выделяемого при жиловке говядины (жилки, сухожилия, фасции), снизить расход препарата коллагеназы по сравнению с известными ферментными технологиями (A.A. Донец, 2002).

Наименование сырья Рецептуры

№1 №2

Норма, кг/100 кг

Жилка говяжья 19,98

(модифицированная)

Кислота аскорбиновая 80,00

(с массовой долей 5 %)

СОг-экстракты, г/100 кг;

тыква и виноградные косточки 3,0 3,0

петрушка - 3,5

корица 3,0

ромашка 3,0

гвоздики 2,5

зверобоя 2,0 2,0

Итого: 100,00 100,00

Приемка, сортировка коллагенсодержагцего сырья

[Срж

Промывка^т

- 2-^-3 ч)

Пероксидно-щелочной гидролиз (т =6 ч; 1 = 16-25 °С)

Промывка проточной водой (т=30 мин)

Измельчение на волчке ((1=2-3 мм)

Нейтрализация (НС1 0,5 моль/дм ; т — 30 мин)

V _

|_Центрифугирование (т = 10 мин)_

лГ

Ферментативный гидролиз (коллагеназа 0,8 ед. ПА /г белка; т = 2,5-3,0 ч; 1 = 37-40 °С, гидромодуль 1:2)

т = 30 мин)

Центрифугирование (т = 10 мин)

Аскорбиновая кислота —> Диспергирование и иммобилизация БАВ на

СОэ-экстракты

коллагеновом носителе (83,3 с'1, т = 15 мин; 33.3 с'1, т = ЗОмин)

Стабилизадия 2 ч

Розлив и упаковывание в емкости из полимер_ных материалов_

Хранение при 1= 4±2 °С, ф=80-85 % - 30 сут;

Рис. 8 - Модифицированная технологическая схема получения пленкообразующих композиций

Для оценки применимости разработанных пленкообразующих композиций в частных технологиях мясных продуктов необходимо дать комплексную оценку их свойств, в том числе барьерных, а также изучить характер структуро-образования коллагеновых белков применительно к получению пищевых покрытий Полученные данные общего химического и фракционного состава модифицированных белков коллагена в сравнении с базовым объектом - коллаге-новой массой на основе гольевого спилка шкур КРС свидетельствуют о том, что в продуктах двухстадийной модификации жилок, сухо-жилий КРС полностью удалены водорастворимая и солеерастворимая фракция белков.

Щелочерастворимого белка содержится соответственно

Пленкообразующая композиция 1

Пленкообразующая композиция 2

5,9 и 10,9 %; жира - 0,3 и 0,4 %; золы - 1,1 % и 0,3 %; влаги-У2,7 и 86,9 % По органолептическим показателям разработанные композиции имеют гелеобразную консистенцию, запах пряный, свойственный сочетанию экстрактов рецептуре, цвет матово-белый с желтоватым оттенком, также обладают активными свойствами по отношению к свободным радикалам кислорода (рис. 9).

При изучении реологических характеристик коллагенсодержащих пленкообразующих композиций выявлено, что они являются сильно

структурированными системами, что обуславливают их относительно высокие показатели вязкости (рис. 10).

мг/см

Рис. 9 - Антиоксидантная активность пленкообразующих композиций

Вероятно, способность к самоструктурированию эффективно реализуется за счет свободных боковых функциональных групп белковых молекул в присутствии аскорбиновой кислоты. При этом наличие в составе ССЬ-экстрактов фе-нольных соединений обусловливает возможность дополнительного структурообразования по механизмам, аналогичным при их использовании в качестве дуби-телей в технологии искусственных колбасных оболочек. Не исключена также возможность формирования поперечных связей за счет преобразования некоторых боковых цепей лизина в альдегиды, известная для физиологических условий организмов животных.

Одним из важных факторов, определяющих технологические свойства пленкообразующих композиций, является толщина покрытия, формуемого па поверхности мясного продукта. По результатам морфометрического микроскопирования образцов с измерением толщины покрытия в программе MetaVision, v. 1.2. этот показатель составляет в среднем 26,8 мкм.

При разработке пищевых покрытий одним из важнейших критериев создания барьеров для обеспечения безопасности и качества мясных продуктов при хранении служит их бактериостатическая активность. Ее оценка по диаметрам зоны подавления роста тест-микробов диск-диффузионным методом показала, что обе композиции имеют высокую активность по отношению к отобранным культурам микроорганизмов (рис. 11).

Для экспрессного тестирования уровня биологической активности и безвредности коллагенсодержащих пленкообразующих композиций использовали одноклеточный организм Paramecium caudatum (табл. 3).

Полученные экспериментальные данные позволяют сделать вывод, что отклонения показателей биологической безопасности и индекса биологической активности коллаге-новой дисперсии (без внесения СОг-экстрактов) от контрольного образца (вода дистиллированная) фиксируются лишь для разведения 1:1 ООО И явля- Рис ' I - Зоны задержки роста микроорганизмов коллагенсодер-ЮТСЯ, по-видимому, следстви- жашими пленкообразующими композициям

тРя*з -177.5763+0,529Э'х-5,6111 "у

Рис. 10 - Динамика изменения вязкости пленкообразующих композиций в процессе структурирования

Sacharomyces cerevisiae Streptococcus haemolyticus Staphiiococcuc aureus В. subtilis В. mesentericus Proteus vulgaris E. Coli

0 5 10 15 20

Зона задержки роста микроорганизмов, мм

I Пленкообразующая композиция 1 3 Пленкообразующая композиция 2

по-видимому, следствием применения ферментного препарата, коллагенолитическая активность которого предполагает, в том числе, гидролитическое воздействие на структурные белки клеточных оболочек тест-организма. В случае с пленкообразующими композициями результаты позволяют констатировать выраженное бактерицидное действие на инфузории уже начиная с разведения 1:10000.

Таблица 3 - Оценка биологической активности и безвредности объектов исследования

Разведение Биологическая безопасность Плотность инокулята Индекс биологической активности

Колла-геновая дисперсия Пленкообразующая композиция Контрольный образец Колла-геновая дисперсия Пленкообразующая композиция Контрольный образец Колла-геновая дисперсия Пленкообразующая композиция Контрольный образец

№1 |№2 №1 №2 №1 №2

1:1000 БЦ-50 БЦ-50 ИН 0,91 0,63 0,62 1,0±0,1 0,85 0,7 0,69 1,0*0,1

1:10000 ИН БЦ-50 ИН 0,97 0,75 0,73 1,0*0,1 1,0 0,8 0,78 1,0±0,1

1:100000 ИН ИН ИН 1,01 0,86 0,84 1,0*0,1 1,2 0,9 0,89 1,0±0,1

Примечание: ИН - индифферентность - клетки совершают равномерные броуновские движения; БА — биоактивность - движения клеток изменены; БЦ - биоцидностъ, токическое действие: БЦ-50 -погибло 50±10 % клеток, БЦ-100 - погибло 100±10 % клеток

Полученные нами результаты на уровне экспресс-биотеста коррелириуют с задержкой роста микроорганизмов, что позволяет прогнозировать применение пленочных покрытий с СОо-экстратами в качестве технологического барьера в частных технологиях птицепродукгах, рубленых полуфабрикатах.

Глава V. Разработка рекомендаций по использованию пленкообразующих композиций в частных технологиях мясных продуктов.

В последнее время рынок мясных полуфабрикатов является активно развивающимся, а потому наиболее перспективным. Наиболее доступными по цене и популярными среди потребителей со средним уровнем доходов замороженные мясные и комбинированные полуфабрикаты, в том числе формованные рубленые. Для этой группы продуктов одним из эффективных способов пролонгирования сроков хранения путем стабилизации физико-химических показателей является использование пищевых покрытий, обладающих барьерными свойствами.

Для расширения ассортимента полуфабрикатов этой группы за счет изделий с начинками (зразы «Особые») предложена модифицированная рецептура на основе единого фарша, в качестве базовой использована рецептура котлет «По-домашнему» (ТУ 9214-008-29240564-2003). Массовая доля начинки составляет 10 %, массовая доля пленкообразующей композиции № 1 - 7,5 % к массе фарша в качестве компонента, выполняющего барьерную роль по отношению к микрофлоре и свободным радикалам кислорода. Технология отличается от традиционной дополнительными операциями по приготовлению и нанесению коллагеновой пленкообразующей композиции на изделие методом погружения.

Апробированы различные способы термической обработки мясных рубленых полуфабрикатов в пленочном покрытии: варка на пару, жаренье, запекание под действием ИК-излучения. Оценка показателей качества и технологических характеристик (массовый выход изделий, потери массы) показала, что мясные рубленые полуфабрикаты, приготовленные по модифицированной рецептуре, отличаются улучшенными органолептическими показателями: опытные изделия прекрасно сохраня-

17

ют форму, имеют привлекательный внешний вид и пряный аромат ССЬ-экстрактов, отличаются улучшенными показателями по коэффициентам утилитарности аминокислотного состава и сопоставимой избыточности.

Массовый выход повышается в среднем на 13,2 % для изделий, запеченных под действием инфракрасного излучения, на 5,5 % для жареных и на 6,4 % для приготовленных на пару.

При хранении опытной партии полуфабрикатов в течение 30 суток при минус 18 °С пероксидное число изделий в пищевом покрытии, изготовленном из коллаген-содержащей пленкообразующей композиции, ниже на 0,03 % образцов в пленке без С02-экстрактов и на 0,04 % без пленочного покрытия (рис. 12).

В целях реализации барьерных технологий при производстве птицепродуктов нами разработана рецептура готовых кулинарных изделий на примере бескостных окорочков (табл. 4 и 5) и модифицированная технологическая схема. Отличительными особенностями являются использование жидкой о 5 ю » 20 25 ^ зо фракции гидролизата

коллагенсодержащего сырья в качестве основы для приготовления шприцовочного рассола, нанесение пищевого покрытия и декоративной обсыпки на стадии формования продукта.

В процессе изучения влияния дозировки вводимого рассола в количестве 5; 10; 15; 20 % к массе сырья с целью определения его функционально-технологических свойств установлено, что максимальные значения ВСС (97 %) и ВУС проявляются при дозировке 15 % рассола для шприцевания на основе жидкой фракции гидролизата.

По физико-химическим показателям продукт, приготовленный по модифицированной технологии, отличается традиционного аналога повышенным содержанием влаги на 5,6 % и белка - 0,7 %, уменьшением жира на 6,2 %, золы на 0,1 %. Энергетическая ценность продукта уменьшается на 217,3 кДж, что повышает его диетические свойства, переваримость возрастает (накопление тирозина больше на 0,48 ммоль/дм3 по сравнению с контролем к окончанию шестого часа переваривания системой пепсин - трипсин). Этот эффект обусловлен введением в модифицированную рецептуру жидкой фракции коллагенового гидролизата в составе рассола.

контрольный образец опытный образец 1 -*- опытный обрвэеа 2

Рис. 12. Изменение пероксидного числа опытного и контрольных образцов рубленых полуфабрикатов при хранении: контрольный образец - изделия в традиционной панировке; опытный образец 1 - изделия в коллагеновом покрытии; опытный образец 2 - изделия в коллагеновом покрытии с включением экстрактов растительного сырья

Таблица 4 - Рецептурно-компонентный состав продукта

(окорочох «Аппетитный»)

Наименование сырья Варианты зецетггур, кг/100кг

базовая модифицированная

Окорочок бескостный 100,0 100,0"

Композиция пленкообразующая №2 - 9,5

Обсыпка декоративная 0,5 0,5

Рассол для шприцевания 10,0 15,0

"без шкурки

Наименование компонентов Рецептура, кг/100 дм3

модифицированная базовая

Соль поваренная пищевая 7,0 7,0

Сахар-песок или глюкоза 1,0 1,0

Натрий фосфорнокислый 0,3 0,3

Натрий пирофосфорнокислый 0,3 0,3

Белок соевый растворимый - 1,0

Крахмал картофельный - 1,0

Камедь ксантановая - 0,1

Вода питьевая (лед) - 88,3

Гидролизат коллагена 91,4 -

Таблица 6 - Микробиологические показатели продукта при хранении (I = 0+4 °С)

Таблица 5 - Рецептурно-компонентный состав Эффективность использова-

ния разработанных пищевых покрытий в качестве средства анти-оксидантной защиты жиросодер-жащих продуктов подтверждают результаты оценки развития окислительной порчи продуктов из мяса птицы при хранении (рис. 13). Продукты обладают стабильными микробиологическими показателями (табл. 6).

С использованием инструментальных методов анализа показано, что образцы изделий в кол-лагеновом пищевом покрытии обладают более ярко выраженным и стойким ароматом за счет высокой сорбционной способности колла-геновых белков в составе пищевого покрытия по отношению к СОг экстрактам.

Проведенная 9-балльная оценка органолептических показателей показала, что образцы опытной партии, изготовленные по модифицированной технологии, превосходят традиционные по внешнему виду, консистенции, вкусу и запаху. Таким образом, использование в производстве птицепро-дуктов пленочных покрытий, формуемых из коллагенсодержа-щих пленкообразующих композиций, содержащих С02-экстракты растительного сырья, позволяет реализовать барьерные технологии. Их экономическая эффективность подтверждена при промышленной апробации (ОАО «Комбинат мясной «Калачеевский»), Расчетный уровень рентабельности соответственно составляет: при производстве коллагенсодержащих пленкообразующих композиций 26,6 %, мясных рубленых полуфабрикатов 22,7 %; изделий из мяса птицы с их использованием 21,9 %.

Продолжительность хранения, сут.

Показатели 0 2 4 6 8 10

I II I II I II I II I II I II

КМАФАнМ, *о о о "о о о о "о 'о 'о о

КОЕ/г # о * о * ОО а\ » о * о Г1 * о о * о * о ш * о сч * о о * о Г- * о

о г> о о _'

БГКП (колиформы) 1аз20_| 10,002_1 069 0 1ао5о [о,970 I 3,410_I 1,200 Э,640 о 0,701 1,500 о оо <> Ф

Примечание: I - без покрытия; II -0,14

! ПОКрЫТИИ

4 6 Продолжительность, сут -о- Изделие в покрытии —Изделие без покрытия

Рис. 13 - Изменение пероксидного числа птицепродук-тов пои хоанении

выводы

1. Для получения пленкообразующих композиций с антиоксидантными и бак-териоетатическими свойствами целесообразно использовать выделяемые в качестве вторичного сырья при жиловке говядины жилки и сухожилия после направленной модификации структуры тканей и химического состава, а также С02-экстракты растительного сырья (гвоздика, ромашка, корица, петрушка, тыква и виноградная косточка, зверобой).

2. Модификацию биополимерных систем соединительных тканей животных с целью использования их компонентов в качестве носителей биологически активных веществ растений целесообразно проводить в две стадии. На первом этапе - перок-сидно-щелочной композицией для разрыхления структуры ткани и окислительной деструкции балластных веществ (диапазон концентраций раствора NaOH 5-10 % и Н202 1-5 % в интервале соотношений 10-=-1 - 5-4 , продолжительность - 6 ч); на втором - препаратом коллагеназы для получения способных к самоструктурированию дисперсионных систем на основе продуктов гидролиза коллагеновой фракции (дозировка препарата «Коллагеназа пищевая» 0,8 ед. /г белка, продолжительность 3 ч, температура 37 °С, гидромодуль 1:2).

3. Разработана технологическая схема производства коллагенсодержащих пленкообразующих композиций для формования съедобных пленочных покрытий на поверхности мясопродуктов. В качестве диспергирующего агента рекомендовано применять раствор аскорбиновой кислоты с массовой долей 5 %, что обеспечивает диспергирование и иммобилизацию компонентов С02- экстрактов на коллагеновом носителе.

4. Обоснованы дозировки С02- экстрактов растительного сырья для иммобилизации на коллагеновом носителе (от 150 до 200 мкл экстрактов корицы, петрушки, ромашки и от 100 до 150 мкл экстрактов зверобоя, гвоздики, тыквы и виноградной косточки на 1 г носителя соответственно). По органолептическим показателям разработанные композиции имеют гелеобразную консистенцию, запах пряный, свойственный сочетанию экстрактов в рецептуре, цвет матово-белый с желтоватым оттенком, а также обладают активными свойствами по отношению к свободным радикалам кислорода и бактериостатической активностью по отношению к группам микроорганизмов (Е. coli, Pr. vulgaris, В. mesentericus, В. subtilis, St.aureus, Str. haemolyticus, Sach. cerevisiae).

5. С использованием коллагенсодержащих пленкообразующих композиций обоснованы и рекомендованы модифицированные рецептуры и технологии мясных замороженных полуфабрикатов (Зразы «Особые») и кулинарных изделий из мяса птицы («Окорочок бескостный запеченный»). Продукты имеют улучшенные потребительские свойства, хранимоспособность, повышенный на 5,5-13,8 % для полуфабрикатов и 10 % для птицепродуктов массовый выход, улучшенные показатели биологической ценности.

6. Экономическая эффективность технологических решений подтверждена производственной проверкой в условиях мясоперерабатывающих предприятий г. Воронежа (ОАО «Хладокомбинат») и Воронежской области (ОАО «Комбинат мясной «Калачеевский»), Расчетный экономический эффект при запланированном годовом объеме производства составляет: для коллагенсодержащих пленкообразующих композиций 485,6 и 487,5 тыс. руб., мясных рубленых пот/фабрикатов - 1035,4 тыс. руб., изделий из мяса птицы с их использованием - 810,9 тыс. руб.

20

Основные результаты диссертации опубликованы

в следующих работах: Публикации в изданиях, рекомендованных ВАК РФ

1. Антипова, Л.В. К вопросу разработки пищевых добавок для защиты биосистем с использованием компьютерного моделирования нанообъектов [Текст]/ J1.B. Антипова, Ю.В. Болтыхов, И.В. Вторушина, В.В. Прянишников, И.А. Глотова// Хранение и переработка сельскохозяйственного сырья. -2008. - № 11. - С. 44-46.

2. Глотова, И.А. Использование пленкообразующих композиций в барьерных технологиях мясных полуфабрикатов [Текст]/ И.А. Глотова, Ю.В. Болтыхов// Мясная индустрия. - 2009. - № 6. - С. 50-54.

Статьи и материалы конференций

3. Ильина, Н.М. Перспективные методы обработки коллагенсодержащего сырья [Текст] / Н.М. Ильина, Ю.В. Болтыхов // Материалы VI научно-практической конференции. Воронеж, межрегион, ин-т переподгот. кадров пищ. и перераб. промети, Воронеж, 2006. - С. 64-69.

4. Поплавская, С.А. Перспективы вторичного коллагенсодержащего сырья мясной отрасли в получении пищевых полимерных покрытий и биосовместимых материалов [Текст] / С.А. Поплавская, Ю.В. Болтыхов// Материалы студенческой научной конференции. Воронеж, гос. технол. акад. - Воронеж, 2007. - С. 101.

5. Глотова, И.А. Биоццдные свойства коллагеновых композиционных основ [Текст] / И.А. Глотова, Ю.В. Болтыхов // Фундаментальные исследования.- 2007. -№ 12(ч. 2).-С. 324-325.

6. Глотова, И.А. Получение новых барьерных биоматериалов с использованием вторичного коллагенсодержащего сырья мясной промышленности [Текст] / И.А. Глотова, Ю.В. Болтыхов // Живые системы и биологическая безопасность населения: Материалы VI Международной научной конференции студентов и молодых ученых. - М.: МГУПБ, 2007. - С. 200-202.

7. Глотова, И.А. Перспективы С02-экстрактов растений в качестве барьерных средств в разработке полифункциональных композиционных основ [Текст] / И.А. Глотова, Ю.В. Болтыхов // Потребительский рынок: качество и безопасность

оваров и услуг: Материалы IV Международной научно-практической конференции. Орел: ОрелГТУ, 2007. - С. 138-141.

8. Глотова, И.А. Реологические характеристики полифункциональных дис-ерсных систем на основе коллагеновых белков животных тканей [Текст] / I.A. Глотова, Ю.В. Болтыхов // Успехи современного естествознания.- 2008. - № 2. С. 43-44.

9. Антипова, Л.В. Анализ биобезопасности пищевых систем с использованием ест-культуры Paramecium caudatum [Текст] / Л.В.Антипова, И.А. Глотова, И.С. Ко-енко, Ж.И. Богатырева, Ю.В. Болтыхов, С.С. Забурунов // Международная научно-рактическая конференция: Биотехнология. Вода и пищевые продукты. - М.: ЗАО <Экспо-биохим-технологии», РХТУ им. Д.И. Менделеева, 2008. - С. 46.

10. Глотова, И.А. Разработка композиционных основ направленного физио-огического действия с использованием коллагеновых белков [Текст] / И.А. Глото-а, Ю.В. Болтыхов // Материалы XLVI отчетной научной конференции за 2007 год: | 3 ч./Воронеж. гос.технол. акад.,-Воронеж,2008.-4.1.-С. 141-146.

11.Глотова, И.А. Перспективы биомодифицированных коллагеновых белков со-

единительных тканей в качестве органической матрицы биологически активных веществ [Текст] / И.А. Глотова, И.В.Вторушина, Ю.В. Болтыхов // Материалы XLVI отчетной научной конференции за 2007 год: В 3 ч. / Воронеж, гос. технол. акад. -Воронеж, 2008,-4.1.-С. 152-154.

12. Антипова, JI.B. Структурные особенности белков тканей животных и гид-робионтов в получении коллагеновых субстанций [Текст] / Антипова JI.B., Глотова И.А., Болтыхов Ю.В., Дворянинова О.П. // Современные проблемы науки: Сборник материалов 1-й международной научно-практической конференции. - Тамбов: Изд-во ТАМБОВПРИНТ, 2008. - С. 109-110.

13. Болтыхов, Ю.В. Получение и применение в технологии мясных полуфабрикатов композиционных основ с использованием коллагенсодержащего сырья и биологически активных веществ растений [Текст] / Ю.В. Болтыхов, И.А. Глотова // Вестник ВГТА. - 2008. - № 3 (37). - С. 18-23.

14. Болтыхов, Ю.В. Антиоксидантные свойства коллагенсодержащих композиционных основ в обеспечении производства функциональных мясных продуктов [Текст] / Ю.В. Болтыхов, И.А. Глотова, A.B. Гребенщиков // Инновационные технологии переработки сельскохозяйственного сырья в обеспечении качества жизни: наука, образование и производство: Материалы Международной научно-технической конференции; Воронеж, гос. технол. акад. - Воронеж, 2008. - С. 166-167.

15. Глотова, И.А. Биомодифицированные коллагеновые белки как носители микронутриентов в производстве полифункциональных пищевых добавок [Текст] / И.А. Глотова, И.В.Вторушина, Ю.В. Болтыхов // Инновационные технологии переработки сельскохозяйственного сырья в обеспечении качества жизни: наука, образование и производство: Материалы Международной научно-технической конференции; Воронеж, гос. технол. акад. - Воронеж, 2008. - С. 168-171.

16. Болтыхов, Ю.В. Пищевые коллагеновые покрытия с бактериостатиче-ским эффектом в обеспечении пролонгированных сроков годности рубленых полуфабрикатов [Текст] / Ю.В. Болтыхов, И.А. Глотова // Живые системы и биологическая безопасность населения: 7-ая международная научная конференция, - М.: МГУПБ, 2008. - С. 169-171.

17. Антипова, Л.В. Структурная организация коллагенов в получении продуктов для пищевой промышленности, косметологии, ветеринарии [Текст] / Антипова JI.B., Глотова И.А., Гребенщиков A.B., Дворянинова О.П., Болтыхов Ю.В., Сторуб-левцев С.А. П Материалы Пятого съезда Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова: Пущино, 2-4 декабря 2008 г./ Под. ред. Р.Г. Василова. - М.:МАКС Пресс, 2008.-С. 21-23.

18. Антипова, JI.B. Белки как носители биологически активных веществ [Текст] / JI.B. Антипова, И.А. Глотова, М.М. Данылив, Ю.В. Болтыхов, И.В. Поленов, И.В. Вторушина// Материалы Пятого съезда Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова: Пущино, 2-4 декабря 2008 г./ Под ред. Р.Г. Василова. - М.: МАКС Пресс, 2008.-С. 18-21.

19. Болтыхов, Ю.В. Потенциал биомодифицированных коллагеновых ингредиентов в развитии барьерных технологий [Текст] / Ю.В. Болтыхов // Совершенствование техники, технологии и методов управления на предприятиях пищевой и перерабатывающей промышленности: Материалы VIII науч.-практ. конф., г. Воронеж, 24-25 апреля 2008 г. - Воронеж, 2008. - С. 79-83.

20. Болтыхов, Ю.В. Исследование условий получения композиционных основ с использованием модифицированных белков и биологически активных веществ растений [Текст] / Ю.В. Болтыхов // Материалы XLVII отчетной научной конференции за 2008 год: В 3 ч. / Воронеж, гос. технол. акад. - Воронеж, 2009. - 4.1. - С. 93-98.

21. Антипова, Л.В. Иммобилизация биологически активных веществ на коллаге-новых носителях в получении функциональных ингредиентов [Текст] / Л.В. Антипова, И.А. Глотова, М.М. Данылив, Ю.В. Болтыхов, И.В. Поленов, И.В. Вторушина// Пятый Московский международный конгресс «Биотехнология: состояние и перспективы развития»: Материалы Пятого Московского международного конгресса, часть 2. -М.:ЗАО <Экспо-биохим-технологии», РХТУ им. Д.И. Менделеева. - 2009. - С. 31 -32.

22. Болтыхов, Ю.В. Структура и свойства модифицированных коллагенов сель-кохозяйственных животных и гидробионтов [Текст] / Ю.В. Болтыхов, С.А. Сторуб-1евцев, О.П. Дворянинова, М.М. Данылив, Л.В. Антипова, И.А. Глотова И Пятый Мо-ковский международный конгресс «Биотехнология: состояние и перспективы разви-ия»: Материалы Пятого Московского международного конгресса, часть 2. - М.:ЗАО <Экспо-биохим-технологии», РХТУ им. Д.И. Менделеева. - 2009. - С. 53-54.

23. Ткачева, Л.А. Использование коллагенсодержащих композиционных основ технологии птицепродуктов [Текст] / Л.А. Ткачева, Ю.В. Болтыхов, И.А. Глотова, .В. Полянских // Молодежная наука — пищевой промышленности: Материалы I сероссийской студенческой научной конференции. - Ставрополь, СевКавГТУ, 009.-С.112.

24. Антипова, Л.В. Коллагеновые ингредиенты в технологиии мясных и экстру-ированных продуктов с биопротекторными свойствами [Текст] / Л.В. Антипова, .А. Глотова, С.А. Сторублёвцев, Ю.В. Болтыхов, К.В. Борисенков // Инновацион-ые технологии в пищевой промышленности: Материалы Всероссийской конферен-ии. - Самара, СамГТУ, 2009. - С. 97-98.

25. Антипова, Л.В. Спектрофотометрические методы идентификации феноль-ых соединений с антиоксидантными свойствами в составе композиционных основ

екст] / Л.В. Антипова, И.А. Глотова, Ю.В. Болтыхов // Аналитика России: Мате-иалы III Всероссийской конференции с международным участием. - Краснодар, 009.-С. 215.

Подписано в печать 27.11. 2009. Формат 60 х 84 1/16 Усл. печ. л. 1,00. Тираж 100 экз. Заказ № 468.

ГОУВПО «Воронежская государственная технологическая академия» (ГОУВПО «ВГТА») Отдел полиграфии ГОУВПО «ВГТА» Адрес академии и отдела полиграфии: 394000, Воронеж, пр. Революции, 19

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Коллагеновые белки тканей животных как объект моделирования наноструктур с заданными свойствами

1.2. Проблема антиоксидантной защиты пищевых систем и пути ее решения

1.3. Опыт и эффективность применения функциональных пищевых добавок в барьерных технологиях мясных продуктов

ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ, ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ

ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Объекты исследований

2.2. Схема экспериментальных исследований

2.3. Общие методы исследований

2.4. Специальные методы исследования

2.5. Статистическая обработка результатов эксперимента

ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ УСЛОВИЙ ПОЛУЧЕНИЯ ПЛЕНКООБРАЗУЮЩИХ КОМПОЗИЦИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МОДИФИЦИРОВАННЫХ КОЛЛАГЕНОВЫХ БЕЛКОВ И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ РАСТЕНИЙ ?

3.1. Обоснование выбора компонентов для получения коллагеновых пленкообразующих композиций

3.2. Влияние физико-химических и биотехнологических методов модификации на структуру коллагеновых белков

3.3. Идентификация структурных особенностей модифицированных коллагеновых белков ^

3.4. Изучение сорбционной способности модифицированных кол- 98 лагеновых белков

ГЛАВА 4. ПОЛУЧЕНИЕ И КОМПЛЕКСНАЯ ОЦЕНКА СВОЙСТВ

ПЛЕНКООБРАЗУЮЩИХ КОМПОЗИЦИЙ

4.1. Рецептуры и технологическая схема производства пленкообразующих композиций

4.2. Сравнительная оценка показателей качества пленкообразующих композиции

4.3. Реологические свойства коллагеновых дисперсий

4.4. Оценка бактериостатического активности и безвредности пленкообразующих композиций

ГЛАВА 5. РАЗРАБОТКА РЕКОМЕНДАЦИЙ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПЛЕНКООБРАЗУЮЩИХ КОМПОЗИЦИЙ В ЧАСТНЫХ ТЕХНОЛОГИЯХ МЯСНЫХ ПРОДУКТОВ

5.1. Производство мясных рубленых полуфабрикатов с использованием пленкообразующих композиций

5.2. Применение пленкообразующих композиций в технологии продуктов из мяса птицы ВЫВОДЫ

Современный этап развития техники и технологий ставит как одну из наиболее актуальных проблему надежности биологических систем, что непосредственно связано со здоровьем человека в современных условиях урбанизации, экологической и социальной напряженности, хронического стресса и других неблагоприятных факторов. Важнейшая задача биотехнологии - обеспечение здоровья человека через питание. Другой немаловажной задачей является экологическая безопасность продуктов и производств, решение которой состоит в разработке рациональных и эффективных способов утилизации вторичных ресурсов в отраслях перерабатывающего сектора АПК. Для мясной промышленности первое место по объемам занимает коллагенсодержа-щее сырье [4, 9].

В работах JI.B. Антиповой, А.И. Жаринова, Н.Н. Липатова (мл.), Г.И. Касьянова, Ю.И. Ковалева, А.И. Мглинца, И.А. Рогова, Э.С. Токаева, С.А. Каспарьянца, А.И. Сапожниковой, G.N. Ramachandran, P. Borstein, др. отечественных и зарубежных ученых обоснованы подходы к рациональному использованию коллагенсодержащего сырья в пищевых технологиях с учетом медико-биологических требований к нутриентно адекватному питанию и пищевой комбинаторики. Результатами исследований JI.B. Антиповой, Э.Г. Розанцева, А.Г. Снежко, О.П. Дворяниновой, О.Г. Ибрагимовой и др. доказана эффективность биотехнологических подходов по выделению из тканей животных и рыб коллагеновых субстанций, способных к самоструктурированию. Однако потенциальные возможности коллагеновых белков как компонентов самоорганизующихся биополимерных систем с полифункциональными свойствами изучены и реализованы в виде технологических решений и рекомендаций мясоперерабатывающей промышленности крайне недостаточно. При этом интерес и перспективу представляет реализация возможностей коллагеновых белков как носителей биологически активных веществ, что обусловлено уникальным строением этого природного биополимера и наличием большого количества реакционноспособных групп [9, 11, 38, 158].

Практика промышленно развитых стран показывает приоритет барьерных технологий в получении безопасных продуктов питания. Имея в виду маркетинговые оценки потребительского рынка, привлекают внимание мясные полуфабрикаты и кулинарные изделия из мяса птицы как объекты для эффективного использования биотехнологического потенциала растительного сырья, многие виды которого отличают выраженные бактериостатические свойства в сочетании высоким уровнем антиоксидантной активности.

Следует отметить тот факт, что, согласно теоретическим исследованиям и опыту практической деятельности мясоперерабатывающих предприятий, предпочтительной формой для использования растительного сырья в современных технологиях переработки животных тканей являются С02-экстраты. Среди их преимуществ — концентрированная форма биологически активных веществ при высоком уровне целевой активности; исключение дополнительной микробной контаминации продукта при их использовании; высокая хранимоспособность [75, 77].

Цель работы - обоснование барьерных технологий мясных полуфабрикатов и продуктов кулинарной готовности за счет целенаправленного использования коллагеновых белков животных тканей и биологически активных веществ растений.

В рамках поставленной цели решались задачи:

- выбор объектов животного и растительного происхождения для получения пленкообразующих композиций с барьерными свойствами;

- обоснование условий модификации биополимерных систем соединительных тканей животных для использования их компонентов в качестве носителей биологически активных веществ растений;

- обоснование рецептурного состава пленкообразующих композиций для реализации барьерных технологий;

- разработка технологической схемы получения пленкообразующих композиций;

- комплексная оценка их свойств;

- обоснование рекомендаций по использованию в частных технологиях мясных продуктов;

- разработка проектов технической документации на мясные полуфабрикаты и продукты кулинарной готовности в коллагеновых покрытиях;

- оценка экономической эффективности предлагаемых технических решений.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР кафедры технологии мяса и мясных продуктов Воронежской государственной технологической академии «Теория и практика производства биологически полноценных, комбинированных, аналоговых и функциональных продуктов питания на основе рационального использования сельскохозяйственных ресурсов с привлечением методов биотехнологии» (2006-2010 гг., № г. р. 012.006.037.63).

ВЫВОДЫ

1. Для получения пленкообразующих композиций с антиоксидантными и бактериостатическими свойствами целесообразно использовать выделяемые в качестве вторичного сырья при жиловке говядины жилки и сухожилия после направленной модификации структуры тканей и химического состава, а также С02-экстракты растительного сырья (гвоздика, ромашка, корица, петрушка, тыква и виноградная косточка, зверобой).

2. Модификацию биополимерных систем соединительных тканей животных с целью использования их компонентов в качестве носителей биологически активных веществ растений целесообразно проводить в две стадии. На первом этапе — пероксидно-щелочной композицией для разрыхления структуры ткани и окислительной деструкции балластных веществ (диапазон концентраций раствора NaOH 5-10 % и Н202 1-5 % в интервале соотношений 10-Н - 5-М, продолжительность - 6 ч); на втором - препаратом коллагеназы для получения способных к самоструктурированию дисперсионных систем на основе продуктов гидролиза коллагеновой фракции (дозировка препарата «Кол-лагеназа пищевая» 0,8 ед. /г белка, продолжительность 3 ч, температура 37 °С, гидромодуль 1:2).

3. Разработана технологическая схема производства коллагенсодержа-щих пленкообразующих композиций для формования съедобных пленочных покрытий на поверхности мясопродуктов. В качестве диспергирующего агента рекомендовано применять раствор аскорбиновой кислоты с массовой долей 5 %, что обеспечивает диспергирование и иммобилизацию компонентов С02- экстрактов на коллагеновом носителе.

4. Обоснованы дозировки С02- экстрактов растительного сырья для иммобилизации на коллагеновом носителе (от 150 до 200 мкл экстрактов корицы, петрушки, ромашки и от 100 до 150 мкл экстрактов зверобоя, гвоздики, тыквы и виноградной косточки на 1 г носителя соответственно). По органо-лептическим показателям разработанные композиции имеют гелеобразную консистенцию, запах пряный, свойственный сочетанию экстрактов в рецептуре, цвет матово-белый с желтоватым оттенком, а также обладают активными свойствами по отношению к свободным радикалам кислорода pi бактерио-статической активностью по отношению к группам микроорганизмов (Е. coli, Pr. vulgaris, В. mesentericus, В. subtilis, St. aureus, Str. haemolyticus, Sach. cerevisiae).

5. С использованием коллагенсодержащих пленкообразующих композиций обоснованы и рекомендованы модифицированные рецептуры и технологии мясных замороженных полуфабрикатов (Зразы «Особые») и кулинарных изделий из мяса птицы («Окорочок бескостный запеченный»). Продукты имеют улучшенные потребительские свойства, хранимоспособность, повышенный на 5,5-13,8 % для полуфабрикатов и 10 % для птицепродуктов массовый выход, улучшенные показатели биологической ценности.

6. Экономическая эффективность технологических решений подтверждена производственной проверкой в условиях мясоперерабатывающих предприятий г. Воронежа (ОАО «Хладокомбинат») и Воронежской области (ОАО «Комбинат мясной «Калачеевский»). Расчетный экономический эффект при запланированном годовом объеме производства составляет: для коллагенсодержащих пленкообразующих композиций 485,6 и 487,5 тыс. руб., мясных рубленых полуфабрикатов — 1035,4 тыс. руб., изделий из мяса птицы с их использованием - 810,9 тыс. руб.

1. Аксенова, Т. И. Выбор упаковки для мясных продуктов и прогнозирование сроков их хранения Текст. / Т. И. Аксенова, В. В. Ананьев, О. В. Видении // Мясные технологии. 2007. - №10. - С. 20-23.

2. Антипова, Л. В. Как отходы превратить в доходы Текст. / Л. В. Антипова, И. А. Глотова, С. В. Полянских, М. М, Данылив, А. С. Пешков, С. А. Сторублевцев, А. Е. Топоркова // Мясной ряд. 2008. - № 1. - С. 30 - 55.

3. Антипова, Л. В. Положительное воздействие коллагеназы на структуру мясного сырья Текст. / Л. В. Антипова, А. И. Албулов, А. А. Донец // Мясная индустрия. 2003. - № 2. - С. 45-48.

4. Антипова, Л. В. Основы рационального использования вторичного коллагенсодержащего сырья мясной промышленности Текст. / Л. В. Антипова, И. А. Глотова // Воронеж, гос. технол. акад. СПб: ГИ-ОРДДООб. - 384с.

5. Антипова, Л. В. Технология и оборудование птицеперерабатывающего производства Текст. / Л. В. Антипова, С. В. Полянских, А. А. Калачев // Воронеж, гос. технол. акад. СПб: ГИОРД,2009. - 512с.

6. Антипова, Л. В. Химия пищи. Книга 1: Белки: структура, функции, роль в питании Текст.: учебник для вузов / И. А. Рогов, Л. В. Антипова, Н. И. Дунченко, Н. А. Жеребцов // в 2 кн. Кн. 1. М. : Колос, 2000. -384 с.

7. Антипова, Л. В. Методы исследования мяса и мясных продуктов Текст. / Л. В. Антипова, И. А. Глотова, И. А. Рогов. М.: Колос, 2001. - 376 с. ; 22см. -Рез.: англ. — Библиогр.: С. 65-80.

8. Антипова, Л. В. Практикум по физическим методам контроля сырья и продуктов в мясной промышленности Текст. / Л. В. Антипова, Н. Н. Безрядин; Воронеж, гос. технол. акад. Воронеж, 2004. 92 с.

9. Антипова, Л. В. Прикладная биотехнология Текст. / Л. В. Антипова, И. А. Глотова, А. И. Жаринов. СПб.: ГИОРД, 2003. - 283 с.

10. Апраксина С. К. Повышение пищевой адекватности коллагенсодержа-щего сырья ферментативной обработкой Текст. / С. К. Апраксина, Р. В. Кащенко // Все о мясе. -2006. №4. - С. 12-13.

11. Базарнова, Н. Г. Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья: материалы III Всероссийской конференции. 23-27 апреля 2007 г.: в 3 кн. Текст. / Н. Г. Базарнова, В. И. Маркин. Барнаул: Изд-во Алт. ун-та, 2007. - Кн. 2. - 404 с.

12. Белевцова, Д. В. Изучение возможности получения золей коллагена пероксидно-щелочным способом Текст. / Д. В. Белевцова, А. И. Са-пожникова // Известия ВУЗов. Серия «Химия и химическая технология». 2006. -Т. 49. - Вып. 12. - С. 70-73.

13. Бобренева, И. В. Исследование функционально-технологических и структурно-механических свойств новых видов функциональных добавок Текст. / И. В. Бобренева, Э. С. Токаев, И. С. Краснова // Все о мясе. 2008. -№ 6. - С. 28-32.

14. Бобренёва И. В. Обогащение мясных продуктов для спасателей МЧС новыми видами функциональных добавок Текст. / И. В. Бобренёва, Э. С. Токаев, И. С. Краснова // Мясная индустрия. 2008. - № 1. - С. 56-58.

15. Бобренёва, И. В. Обогащение мясных продуктов для спасателей МЧС новыми видами функциональных добавок Текст. И. В. Бобренёва, Токаев Э. С. , И. С. Краснова // Мясная индустрия. 2008: - №1. - С. 5658.

16. Браун, Д. Спектроскопия органических веществ Д. Браун, А. Флойд, М. Сейнзбери Электронный ресурс. Режим доступа: http://litagents.ru/ naukatehnika/10063-spektroskopija-organicheskikh-veshhest^.htmI . - Загл. с экрана.

17. Будавева, В. В. Исследование биологически активных флавоноидов в экстрактах из растительного сырья Текст. / В. В. Будавева, Г. В. Сако-вич // Химия растительного сырья. 2004. - № 1. - С. 47-52.

18. Васильев, А. В. Инфракрасная спектроскопия органических и природныхсоединений: Учебное пособие Текст. / А. В. Васильев, Е. В. Гриненко, А. О. Щукин, Т. Г. Федулина. СПб.: СПбГЛТА, 2007. - 54 с.

19. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов. СанПиН 2.3.2.1078-01. Москва: ФГУП «ИнтерСЭН», 2008.- 168 с.

20. Глотова, И. А. Новые подходы к стабилизации структуры биомодифи-цированных коллагеновых субстанций Текст. / И. А. Глотова, О. Т. Ибрагимова, JI. В. Антипова // Хранение и переработка сельхозсырья. -2003.-№5.-С. 49-53.

21. Глотова, И. А. Развитие научных и практических основ рационального использования коллагенсодержащих ресурсов в получении функциональных добавок, продуктов и пищевых покрытий: диссертация на соискание д. т. н. — Воронеж, 2003. С. 127-129.

22. Глотова, И. А. Реологические характеристики полифункциональных дисперсных систем на основе коллагеновых белков животных тканей Текст. / И. А. Глотова, Ю. В. Болтыхов // Успехи современного естествознания. 2008. - № 2 - С. 43-44.

23. Глотова, И. А. Биоцидные свойства коллагеновых композиционных основ Текст. / И. А. Глотова, Ю. В. Болтыхов // Фундаментальные исследования. 2007. - № 12 (ч. 2). - С. 324-325.

24. ГОСТ Р 51994-02 Мясо птицы. Методы определения органолептическихпоказателей, температуры и массы. М.: Изд-во стандартов, 2002. - 18 с

25. ГОСТ Р 52349-2005. Продукты пищевые. Продукты пищевые функциональные. Термины и определения. — М.: Стандартинформ, 2005. 20 с.

26. Запорожский, А. А. Управление качеством мясной, молочной и рыбной продукции Текст. / А. А. Запорожский, Н. А. Соскова, В. Н. Данилин, Г. И. Касьянов. Краснодар: КУБГТУ, 2008. -276 с.

27. Зенков, Н. К. Фенольные биоантиоксиданты Текст. / Н. К. Зенков, Н. В. Кандалинцева, В. 3. Ланкин, Е. Б. Меньщикова, А. Е. Просенко. -Новосибирск: СО РАМН, 2004. С. 26-31.

28. Зилфикаров, И. Н. Новые подходы в разработке и стандартизации фитопрепаратов из эфирномасличного сырья: автореф. дис. на соиск. уч. ст. к. т. н. — Пятигорск, 2008. — 48 с.

29. Иванова, Р. А. Изучение антирадикальных свойств сухих экстрактов полифенолсодержащего сырья Текст. / А. И. Прида, Р. А. Иванова [Электронный ресурс]. Режим доступа: http://www.oeno.md/ru/article3. - Загл. с экрана.

30. Истранов, Л. П. Коллаген новое вспомогательное вещество в технологии лекарств / Л. П. Истранов, Р. К. Абоянц, Е. В. Истранова, И. А. Сыченников Электронный ресурс. - Режим доступа: http://www. collagen.su/archives/2628. - Загл. с экрана.

31. Касьянов, Г. И. Применение С02 — экстрактов пряностей в мясной промышленности Текст. / Г. И. Касьянов, Н. Н. Латин, В. И. Баланян // Мясная индустрия. 2002. -№ 7. -С. 29-33.

32. Кащенко, Р. В. Разработка способа ферментативной обработки колла-генсодержащего сырья и его применение в технологии вареных колбас Текст. : автореф. дис. на соиск. уч. ст. канд. техн. наук. / Кащенко Р. В. — М, 2007-25с.

33. Кис, И. В. Разработка и оценка качества коллагенсодержащих антисептических композиций ветеринарного назначения. Электронный ресурс. Режим доступа: http://www.collagen.su/archives/663 . - Загл. с экрана.30.09.2009)

34. Кобаяси, Н. Введение в нанотехнологию Текст. / Н. Кобаяси. М.:Би-ном. - Лаборатория знаний, 2005 . - С. 79-80.

35. Коноплева, М. М. Фармакогнозия: природные биологически активные вещества: учеб. пособие для вузов Текст. / М. М. Коноплева. Витебск: Витеб. гос. мед. ун-т. - 2007. - 273 с.

36. Коренкова, А. А. Влияние фитодобавок флавоноидной природы на показатели качества молочных продуктов Текст. : автореф. дис. на со-иск. уч. ст. канд. техн. наук. / Коренкова А. А. — М., 2006 23 с.

37. Короткова, Е. И. Новый вольтамперометрический способ определения активности антиоксидантов Текст. / Е. И. Короткова, Ю. А. Корбаи-нов, О. А. Аврамчик // Тезисы докладов VI Международной конференции "Биоантиоксидант". М., 2002 - С. 298-299.

38. Кравченко, С. Н. Формирование потребительского поведения на рынке продуктов функционального назначения Текст. / С. Н. Кравченко, Г. С. Драпкина, М. А. Постолова // Пищевая промышленность. 2008. - № 4. - С. 6-7.

39. Красильникова, JI. А. Биохимия растений Текст. / JI. А. Красильникова, О. А. Авксентьева, В. В. Жмурко. Феникс Торсинг, 2004. — 224 с.

40. Критические технологии федерального уровня: биосовместимые материалы. Электронный ресурс. Режим доступа: http://www.extech.ru/ se/mins/niokr/krittech/annot/3-07. htm. - Загл. с экрана.

41. Крылова, В. Б. Биомодификация коллагенсодержащего сырья молочнокислыми бактериями Текст. / В. Б. Крылова, О. Н. Витренко // Мясная индустрия. 2004. - № 8. - С. 27-29.

42. Кузьмичева, М. Б. Российский рынок мясных полуфабрикатов Текст. / М. Б. Кузьмичева. Мясная индустрия. - 2005. - № 12. - С. 12-14.

43. Куличихин, В. Г. Нанокомпозитные гидроколлоидные адгезивы для биомедицинского применения Текст. / В. Г. Куличихин, С. В. Антонов, В. В. Макарова, А. В. Семаков, P. Singh // Наноматериалы функционального назначения. 2006. - Том 1. - № 1. - С. 170-182.

44. Латин, Н. Н. Применение С02-экстрактов в мясной промышленности Текст. / Н. Н. Латин О. Н. Стасьева // Мясные технологии. 2004. - № 8 (20). - С. 4-6.

45. Лепешков, А. Г. Сверхкритическая экстракция в пищевой промышленности Текст. / А. Г. Лепешков, А. Р. Водяник // Пищевая промышленность. М.: Репроцентр. - 2002. - № 12. - С. 52-53

46. Лепешков, А. Г. Выделение биологически активных веществ с помощью сверхкритического диоксида углерода Электронный ресурс. Режимдоступа: http://www.extract.ru/index.php?id=l 10. Загл. с экрана.

47. Ляйстнер, Л. Барьерные технологии: комбинированные методы обработки, обеспечивающие стабильность, безопасность и качество продуктов питания / Л. Ляйстнер, Г. Гоулд. М.: ВНИИМП, 2006. - 236 с.

48. Меныцикова, Е. Б. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиокси-данты Текст. / Е. Б. Меныцикова, В. 3. Ланкин, Н. К. Зенков. М. : Фирма «Слово», 2006. - 556 с.

49. Месропова, Н. В. Взаимодействие коллагена с биологически активными веществами // Н. В. Месропова, А. И. Сапожникова. Электронный ресурс. Режим доступа: http://www.collagen.su/archives/2599 . - Загл. с экрана.

50. Месропова, Н. В. Применение коллагена для создания систем полимер-лекарственное вещество // Н. В. Месропова, А. И. Сапожникава, И. М. Гордиенко. Электронный ресурс. Режим доступа: http://www.collagen.su/archives/2583 . - Загл. с экрана.

51. Молочников, В. В. Использование фитопрепаратов в рецептурных композициях мясных продуктов Текст. / В. В. Молочников, И. А. Трубина, В. В. Садовой, С. Н. Шлыков // Пищевая промышленность. 2008. - № 6. - С. 64.

52. МУК 4. 2. 1890-04. Определение чувствительности микроорганизмов кантибактериальным препаратам. Утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 04. 03. 2004. 10 с.

53. Неклюдов А. Д. Коллагеновые фракции, получаемые водно-солевой экстракцией из сырья животного происхождения Текст. / А. Д. Неклюдов, А. В. Бердутина, А. Н. Иванкин // Прикладная биотехнология и микробиология. 2003. - Т. 39, № 4. - С. 483-488.

54. Пасичный В. Н. Пищевые добавки для усиления и стабилизации цвета Текст. / В. Н. Пасичный, И. В. Кремешная, П. М. Сабадаш // Ингредиенты. 2007.-№ 8. - С. 10-12

55. Патент 2094999 РФ МПК6 С07К1/36 Способ получения коллагена Текст. / Шеландер К. Э. (SE); заявитель и патентообладатель Шелан-дер К. Э. № 93058205/13; заявлено 11. 10. 1997; опубл. 09. 08. 2000

56. Патент 2272808 РФ, МПК С07К 1/36, A23L 1/0562. Способ получения коллагена Текст. / Баер Н. А. , Неклюдов А. Д. , Зиборов В. А. , Леонов А. Ю. № 2004106115/13; заявл. 03. 03. 2004; опубл. 10. 08. 2005

57. Патент 2277410 РФ. Косметическое средство Текст. / Костелев Н. А. -Опубл. 23. 05.2005

58. Патент 2282851 Российская Федерация. МПК7 G01N33/02. Способ определения суммарной антиоксидантной активности Текст. /

59. Т. Г. Цюпко, 3. А. Темердашев, О. Б. Воронова, Н. В. Храпко -№2004138188/13; заявл. 27. 12. 2004; опубл. 27. 08. 2006, Бюл. № 24. С. 523.

60. Патент 2289931 РФ. Состав для покрытия мяса и мясных продуктов Текст. / Е. А. Евстафьева, П. М. Голованова, Е. И. Украинская, О. А. Сорокина, В. А. Зинов № 2005114956/13; заявл. 18. 02. 2005 опубл. 27. 12. 2006

61. Патент 2295980 РФ. Имплантат для восстановления костной и/или хрящевой ткани и способ его получения Текст. / Назаренко Г. Ф. , Земчихина В. Н. Опубл. 27. 03. 2007

62. Патент 2308960 РФ. Ранозаживляющая губка Текст. / Лубсандоржие-ва П. Б., Николаев С. М., Шантанова Л. Н. , Истранов Л. П., Лукманова К. А, Бодоев А. В., Бальхаев М. И., Жигаев Г. Ф., Даргаева Т. Д. -Опубл.: 27. 10. 2007. Бюл. № 30

63. Патент 2310475 РФ. Медицинское покрытие Текст. / Левченко В. А, Раков Д. Л. Опубл.: 20. 11. 2007. - Бюл. № 32

64. Патент 2314352 РФ. Способ обработки коллагенсодержащего сырья Текст. / А. О. Титов, О. П. Титов, И. И. Титова. Опубл. 10.01.2008: -Бюл. № 1

65. Патент 2322249 РФ. Способ получения коллагена из биологического материала Текст. / Анфимов П. Е., Краснова Н. С. Опубл. 20.04.2008

66. Поляк, М. С. Некоторые факторы, влияющие на результативность диск-диффузионного метода определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам Текст. / М. С. Поляк, И. А. Цветкова // Клин. лаб. Диагностика. 2007. - № 5. - С. 36 - 39.

67. Попова, И. Ю. Сверхкритические углекислотные экстракты как источник сырья для биологически активных пищевых добавок Электронный ресурс. / режим доступа: http://www.extract.ru/index. php?id=106. -Загл. с экрана.

68. Попова, И. Ю. Сравнительный анализ экстрактов ромашки, полученных различными способами Текст. / И. Ю. Попова, А. Р. Водяник // Рынок БАД. 2005. -№3(23). - С. 12-14.

69. Прида, А. И. Природные антиоксиданты полифенольной природы. Антирадикальные свойства и перспективы использования Электронный ресурс. Режим доступа: http://www.oeno.md/ru/articlel. - Загл. с экрана.

70. Птицын, А. В. Технология выделения флавоноидов винограда Vitis vinifera сорта "Изабелла" для косметики и изучение их свойств Текст. : автореф. дис. на соиск. уч. ст. канд. техн. наук / Птицын А. В. — М., 2007-26с.

71. Птичкина, Н. М. Измерение вязкости реальных и модульных пищевых систем Текст. / Н. М. Птичкина. — Саратов, 2003. 50 с.

72. Рахманов, С. В. Использование невзаимодействующих проб в пространстве белковой структуры для построения статистических потенциалов межатомного взаимодействия Текст. / С. В. Рахманов,

73. B. Ю. Макеев // Биофизика. 2008. - Т. 53, № 3. - С. 389 - 396.

74. Романова, Т. А. Теория и практика компьютерного моделирования нано-объектов: Справочное пособие Текст. / Т. А. Романова, П. О. Краснов,

75. C. В. Качин, П. В. Аврамов // Красноярск: ИПЦ КГТУ, 2002. - 223 с.

76. Садовой, В. В. Исследование молекулярных свойств желатина методами молекулярной и квантовой механики Текст. / В. В. Садовой, И. А. Тру-бина // Хранение и переработка сельхозсырья. — 2008. № 6. - С. 20 - 21.

77. Сапожникова, А. И. Возможности в использовании сырья животного происхождения для косметического и медицинского применения. Электронный ресурс. Режим доступа: http://www.collagen.su/archives/2479. -Загл. с экрана.

78. Сапожникова, А. И. Кислые дисперсии коллагена. Электронный ресурс. Режим доступа: http://www.collagen.su/archives/2515 . - Загл. с экрана.

79. Сапожникова, А. И. Коллаген: пленки и их применение. Электронный ресурс. Режим доступа: http://www.collagen.su/archives/1276 . - Загл. с экрана.

80. Сапожникова, А. И. Методы растворения коллагена и их влияние на структуру полученных продуктов Электронный ресурс. Режим доступа: http://www.collagen.su/ archives/2674 . - Загл. с экрана.

81. Сапожникова, А. И. Применение коллагена в биотехнологии Текст. / А. И. Сапожникова, С. А. Каспарьянц [Электронный ресурс]. Режим доступа: http://www.collagen.su/archives/51. Загл. с экрана.

82. Сапожникова, А. И. Современные представления о коллагене, как основном белке соединительной ткани Текст. / А. И. Сапожникова, Е. В. Щукина [Электронный ресурс]. Режим доступа: http://www.collagen.su/ar-chives/829 . - Загл. с экрана.

83. Сапожникова, А. И. Фибриллярные белки: тенденции и перспективы использования Электронный ресурс. Режим доступа: http://www.collagen.su/archives/1107 . - Загл. с экрана.

84. Сизова, И. Ю. Сравнительный анализ химического состава С02 экстрактов Текст. / И. Ю. Сизова, И. Ю. Попова, А. Р. Водяник // Сырье и упаковка. 2004, - № 5 (44) - С. 14.

85. Сизова, Н. В. Сравнение антиоксидантной активности пихтового масла и С02-экстракта пихты, подсолнечного масла и ССЬ-экстракта семян подсолнечника Текст. / Н. В. Сизова // Химия растительного сырья. 2004.-№3.-С. 99-102.

86. Скурихин, И. М. Таблицы химического состава и калорийности российских продуктов питания: Справочник Текст. / И. М. Скурихин, В. А. Тутельян. М.: ДеЛи принт, 2007. - 276 с.

87. Стромберг, А. Г. Физическая химия Текст. / А. Г. Стромберг, Д. П. Семченко. М.: Высш. школа, 2001. - 496 с.

88. Титов, Е. И. К вопросу о перспективности использования коллагенсо-держащего сырья в продуктах питания Текст. / Е. И. Титов, С. К. Апраксина, JI. Ф. Митасева, Р. В. Кащенко // Мясные технологии. 2006. -№11.-С. 8-12.

89. Титов, Е. И. Коллагенсодержащее сырье мясной промышленности и его использование: Учебное пособие Текст. / Е. И. Титов, С. К. Апраксина, JI. Ф. Митасева, Р. В. Кащенко, С. М. Мухина, В. Н. Новикова. -М.:МГУПБ, 2006. 85 с.

90. Храпко, Н. В. Определение интегральной антиоксидантной способности растительного сырья и пищевых продуктов Текст. : автореф. дис. на соиск. уч. ст. канд. техн. наук. / Храпко, Н. В. — Краснодар, 2006 23 с.

91. Шмидт, В. Оптическая спектроскопия для химиков и биологов Текст. / В. Шмидт // Мир физики и техники. М: Техносфера, 2007. - С. 308-319

92. Buehler, М. J. Nature designs tough collagen: Explaining the nanostructure of collagen fibrils Text. / Markus J. Buehler // P. Natl. Acad. Sci. USA. -2006.-P. 12-14.

93. Collagen and Natural Gut Strings. Электронный ресурс. Режим доступа: http://web. mit. edu/3. 082/www/teamlfi)2/collagen. htm . - Загл. с экрана.

94. Fonrobert, В. Untersuchungen im infraroten Spektralbereich zur Aufklarung der Strukturdynamik von Biopolymeren: die Dissertation Munchen, 2003. -S. 53

95. Fratzl, P. Collagen: Structure and Mechanics Text. / Peter Fratzl // Springer.-2008.-P. 506.

96. Gasser, С. T. Hyperelastic modelling of arterial layers with distributed collagen fibre orientations Text. / T. Christian Gasser, Ray W Ogden, Gerhard A Holzapfel // J. R. Soc. Interface 2006. № 3. - P. 15-35

97. Koide, T. Designed triple-helical peptides as tools for collagen biochemistry and matrix engineering Text. / T. Koide // Phil Trans R Soc B. 2007. - S. 1281-1291

98. Kozukue, N. Tomatine, chlorophyll, carotine and lycopene content in tomatoes during growth and maturation Text. / N. Kozukue, M. Friedman // J. of Science of Food and Agriculture. Feb. -2003. - v. 83. -N3. - P. 195-200.

99. Li Y. C. Preparation and analysis of collagen polypeptide from hides by enzymes Text. / Y. C. Li, , D. Y. Zhu, L. Q., Jin, J. // Soc. Leather Technol. Chem. -2005. № 89. - P. 103-106.

100. Luque de Castro, M. D. Method for the simultaneous determination of total polyphenol and anthocyan indexes in red wines using a flow injection approach Talanta Text. / J. Gonzalez-Rodriguez, P. Perez-Juan, M. D. Luque de Castro. 2002. - v56. -p53-59.

101. Plastina, A. Collagen. Электронный ресурс. Режим доступа: https://chempolymeфroject.wikispaces.com/Collagen-D-apml. - Загл. с экрана.

102. Sano, М. Determination of peroxyl radical scavenging activity of flavonoids and plant extracts using an automatic potentiometric titrator. // J. Agric. Food Chem.- 2003 Vol. 51. -N. 10. - P. 2912-2916.

103. Synthese und Untersuchung der antioxidativen Eigenschaften von vinylog Flavonoiden. Antioxidative Eigenschaften von naturlichen Carotinoiden Text. / Ines Angeles Hernandez Blanco. Dusseldorf, 2003 - S. 252

104. Westermeier, R. Electrophoresis in Practice: A Guide to Methods and Applications of DNA and Protein Separations, 4th, Revised and Updated Edition Text. / R. Westermeier. Wiley, 2004. - 426 p.

105. Yen, G. C. Pro-oxidative properties of flavonoids in human lymphocytes Text. / G. C. Yen, P. D. Duh, , H. L. Tsai, S. L. Huang // Biosci Biotechnol Biochem 2003. № 67. - 1215-1222.

106. Yilmaz, Y, Toledo R. T. Major flavonoids in grape seeds and skins: antioxidant capacity of catechin, epicatechin, and gallic acid. Text. / Y. Yilmaz, R. T. Toledo // J. Agric. Food Chem. 2004. - Vol. 52. - N. 2. - P. 255-260

107. Zankl, H. Untersuchungen zur antioxidativen Wirkung von flavonoid-/polyphenolreichen Mischfruchtsaften bei Probanden Text. : die Dissertation Kaiserslautern, 2006. - S. 310.

108. Zhang, Z. Physicochemical properties of collagen, gelatin and collagen hy-drolysate derived from bovine limed split wastes Text. / Z. Zhang, G. Li, Bi Shi // Journal of the Society of Leather Technologists and Chemists. -2008. Vol. 90. - P. 23.

109. Zhao, Yu-Hong. Characterization of Collagen from Eggshell Membrane Text. / Yu-Hong Zhao, Yu-Jie Chi // Biotechnology. 2009. - Volume: 8. -Issue: 2. - P. 254-258.

110. Zheng, W. Oxygen radical absorbing capacity of phenolics in blueberries, cranberries, chokeberries and lingonberries Text. / W. Zheng, S. Y. Wang // J Agric Food Chem, 2003. № 51. - 502-509.

111. Zong, Y. A Collagen Hug Model for Staphylococcus aureus CNA binding to collagen Text. / Yinong Zong, Yi Xu, Xiao wen Liang // The EMBO Journal. 2005. - № 24. - P. 4224-4236.