автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.04, диссертация на тему:НАУЧНОЕ ОБОСНОВАНИЕ КОМПЛЕКСНОЙ ТЕХНОЛОГИИ ХИТИНА, ХИТОЗАНА ИЗ ПАНЦИРЯ ПРОМЫСЛОВЫХ РАКООБРАЗНЫХ И ПРОДУКЦИИ НА ИХ ОСНОВЕ



На пр*ых рукописи

р.МГ(»11> fpntft ¥tH>ДНМНРПЙНЧ

НАУЧНОЕ ОБОСНОВАНИЕ КОМПЛЕКСНОЙ ТЕХНОЛОГИИ ХИТИНА, ХИТОЗ AHA ИЗ ПАНЦИРЯ ПРОМЫСЛОВЫХ РАКООБРАЗНЫХ И ПРОДУКЦИИ НА ИХ ОСНОВЕ

Специальность 05.18.04 - технологи« мясных, молочных, рыбных продуктов и холодильных производств

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора технических наук

Москва, 2006.

Рабата выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте рыбного хозяйства и океанографии (ФГУП ВНИРО) я Центре «Биоинженерия» РАН

Научный консультант: Доктор химических наук, профессор В.П. Варламов

Официальные оппоненты: Доктор технических наук, профессор

Ольга Яковлевна Меэенова;

Доктор технических наук, доцент Боева Нэля Петровна;

-ч

Доктор технических наук Галина Васильевна Маслова

Ведущая организация*. Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности РАСХН (ВНИТИ БП)

Защита состоится 15 декабря 2006 года в 14 ч 00 мни. на заседании диссертационного совета Д 307.007.01 при Калининградском государственном техническом университете по адресу: 236000 г. Калининград, Советский проспект, Д.1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Калининградского государственного технического университета

Автореферат разослан «25» октября 2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, Доктор технических наук, профессор

Л.Т. Серпуннна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Одним из перспективных направлений мирового научно-технического прогресса в области изыскания новых материалов биологического происхождения за последние три десятилетня является изучение свойств хитина, хитозана и их производных, а также способов их получения и применения.

Потенциальные источники хитина многообразны и широко распространены в природе. Хитин по химической природе очень похож на целлюлозу, но если целлюлозу легко добывать из древесины и другого растительного сырья, то хитин, входящий в состав панцирей ракообразных, рассеян в мировом Океане и его сбор в промышленных масштабах связан с утилизацией отходов переработки промысловых ракообразных. Общая репродукция хитина в мировом Океане оценивается в 2,3 млрд.т в год, что может обеспечить мировой потенциал его производства в объеме ISO - 200 тыс. т в год. В России массовым источником хитинсодержащего сырья являются промысловые крабы на Дальнем Востоке, а также северная розовая креветка и акклиматизированный в Баренцевом море камчатский краб. Панцири речных раков, мелкие рачки гаммарусы и талетриды, обитающие во внутренних водоемах нашей страны и подмор медоносных пчел также могут стать полноценным источником хитозана. Высококачественным сырьем считается антарктический криль (Etiphazisia sttperba Dana), промысловые скопления которого только в Южной Атлантике составляют около 35 млн. тонн, а возможные объемы ежегодного вылова могут составлять от 1,5 до 4,0 млн. тонн [В.П.Быков,1995].

Значительный вклад в исследования в области изучения хитина и хитозана

из канциря ракообразных внесли ученые: Быков В.П., Сафронова Т.М., Рогожин

СВ., Гамзазаде А.И., Варламов В.П., Албулов А.И., Быкова В.М., Вахорева Г.А.,

Феофилова Е. П., Маслова Г.В., Нудьга Л.А., Плиско Е.А. и другие

исследователи, работы которых направлены на изучение свойств хитина и

хитозана, способов их получения из некоторых видов сиркя ц при-иг im-ir-—1

РГАУ-МСХА

имени К.А. Тимирязева ЦНБ имени В-И. Железном

№

различных областях промышленности и хозяйства. Однако, в большинстве случаев, получение хитина и хитозана рассматривалось как средство утилизации отходов производства, имеющее ограниченное применение в пределах того или иного промыслового бассейна. Вместе с тем, комплексная технология получения хитина и хитозаяа, основанная на применении биотехнологических и химических процессов и позволяющая полностью перерабатывать панцирь промысловых ракообразных должна обеспечивать получение из любого доступного хитинсодержащего сырья (ХСС) хитина и хитозана с определенными воспроизводимыми показателями, а также и белковых продуктов кормового я технического назначения.

Учитывая снижение в России общего объема добычи рыбы и нерыбных объектов, рациональное использование водных биологических ресурсов, а также разработка и реализация комплексной технологии его переработки с изготовлением пищевой, кормовой, технической продукции и бяологичесхн активных веществ является актуальным направлением в развитии рыбохозяйственного комплекса России. (Концепция развития рыбного хозяйства РФ на период до 2020 г.)

Комплексное использование панциря добываемых ракообразных позволит решить проблему загрязнения районов промысла отходами переработки, в том числе панцирем, который в настоящее время практически не используется.

Работа выполнялась в соответствии с отраслевой комплексной целевой программой «Криль», а также при поддержке гранта РФФИ ИННО № 02-04-08054, 2002 г.

Цель и задачи исследований. Цель работы заключалась в разработке научно обоснованной комплексной технологии хитина и хитозана из панциря промысловых ракообразных и другого хитинсодержащего сырья с применением ферментативных процессов, обеспечивающей его безотходную переработку и позволяющей получать хитин и хитозан с заданными свойствами, а также лшцевые добавкн и средства защиты растений, и белковые продукты кормового и технического назначения.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Разработать единый концептуальный подход к разработке и реализации технологии комплексной переработки панциря промысловых ракообразных и другого хитин содержащего сырья.

2. Разработать методику исследований и разработки комплексной технологии хитина и хятозана из панциря промысловых ракообразных и другого зштинсодержащего сырья, включающую:

- изучение техно-химических показателей различных видов хитинсодержащего сырья и обоснование способов их переработки для получения хитниа и хятозана различного назначения;

исследование технологических процессов депротеинировакия и деминерализации ХСС с применением ферментных препаратов микроби ального и животного происхождения;

• исследование процессов деацетняирования хитина из различных видов ХСС и обоснование рациональных режимов деацетилирования для разных хитинов;

- изучение процесса растворения хитина в щелочи при замораживании-размораживании и разработка технологии выделения хятозана из щелочных растворов хитина (ЩРХ);

• разработку способов механической, химической и ферментативной деградации хитозана для получения водорастворимой основы средств защиты растений.

3. Разработать технологию получения низкомолекулярного хитозана и средств защиты растений на его основе,

4. Исследовать биологическую активность хитозанов по повышению болезнеустойчивости и стимуляции роста сельскохозяйственных растений.

5. Разработать нормативную документацию на хитозан и продукцию на его основе.

Научная новизна работы. Разработана концепция комплексной технологии хитина и хитозана нз панциря промысловых ракообразных, обеспечивающей полную безотходную его переработку, позволяющую получать хитин, хитозан с заданными свойствами, средства защиты растений и биологически активные

добавки к пище, а также белковые продукты кормового и технического назначения.

Научно обоснованы принципы заготовки и первичной обработки хиткнсодержащего сырья из дальневосточных крабов, северной розовой креветки, антарктического криля к других видов ХСС.

- Сформулированы и экспериментально подтверждены принципы регулирования процессов депротеинирования и деминерализации ХСС — использование технологических подходов на основе применения ферментных препаратов протеин аз ми кр обвального н животного происхождения.

- Обосновано новое направление переработки нанциря мелких ракообразных я кутикулы насекомых с получением хитин-белкового комплекса, белковых гидролнзатов и белковых паст с использованием иа стадии депротеинирования слабых растворов щелочи и ферментных препаратов, обеспечивающих сохранение природных свойства биополимеров.

- Обоснованы параметры процесса получения хитозана из щелочных растворов хитнна в широком диапазоне температур, позволяющие регулировать его основные характеристики.

- Установлены и обоснованы рациональные параметры процессов механической, химической и ферментативной деградации хитозана при получении средств защиты растений и технологии их применения на различных культурах.

- Впервые разработана и апробирована в промышленных условиях комплексная технология хитнна и хитозана из подмора пчел на основе ферментативных способов депротеинирования хитина и деградации хитозана.

- Новизна технических решений подтверждена 5 авторскими свидетельствами СССР и патентами РФ.

Научные положения, выносимые на защиту:

• Концептуальный подход к технологии переработки ХСС как комплексному использованию сырьевых ресурсов промысловых ракообразных (крабов, креветок, антарктического криля) и других источников ХСС для получения хитина, хитозана и белковых продуктов.

• Закономерности взаимосвязи степени ДП хитина и способов активации ферментолиза.

- Закономерности изменения основных характеристик хитоэана от условий деацетилирования в широком диапазоне температур.

• Совокупность технологических решений переработки ХСС от заготовки ХСС до получения хитина, хитозаяа и белковых продуктов на основе ферментативных процессов;

• Технология изготовления и применения препаратов на основе хитозаяа для регуляции роста и защиты от болезней сельскохозяйственных растение. Практическая значимость работы. На основании анализа и обобщения результатов научных и экспериментальных исследований разработаны и внедрены в производство:

• комплексная технология хитина н хитоэана из антарктического криля н северной розовой креветки;

- комплексная технология хитина и хитозана из карапакса дальневосточных промысловых крабов;

• технология хитозаяа с регулируемыми показателями для применения в пищевой, промышленности, фармацевтике и сельском хозяйстве;

- технология получения средств защиты растений на основе деградированного хитозана.

Разработанные технологии позволяют обеспечить комплексное безотходной использование панциря промысловых ракообразных и другого хитиясодержашего сырья, а также выпуск высококачественной продукции, что подтверждено актами производственной проверки, разработанной нормативной документацией, авторскими свидетельствами СССР и патентами РФ.

Реализация результатов исследования. На основании результатов исследований разработаны в утверждены: ТУ 15-04-545-87 и ТИ 534-88 «Панцирь криля мороженый. Полуфабрикат для промышленной переработки»; ТУ 15-04546-87 в ТИ 535-88 «Концентрат панциря криля мороженый»; ТУ 15-04-663-91 и ТИ 637-91 «Хитин-белковый комплекс»; ТУ 64-14-170-89 «Хитин»; ТУ15-16-13-93 «Хитозан

т

кальцинированный (зольный)»; ТУ 15-16-14-93 «Хитозан»; ТУ 15-і6-17-93 «Хитозан»; ТУ 9289-004-40627737-97 «Хитозан пищевой. Технологическая и профилактическая добавка для пищевых продуктов.»; ТУ 2387-001-40627773-96 «Нарцисс-93 (Водорастворимая композиция па основе хитозана)»; ТУ 2387-0034067737-96 «Связующий компонент для комбикормов КХ-18 (композиция на основе хитозана)»; ТУ 8944-002-40627737-96 «Сорбент ХБК-ЩК капсулированый, на основе хитин-белкового комплекса»; ТУ и ТИ 9289-001-44162258-98 «Хитозан пищевой»; ТУ и ТИ 9289-002-11418234-99 «Хитозан низкомолекулярный пищевой»; ТУ 9239-017-00038155-00 «Биологически активная пищевая добавка «ХитАН»; ТУ и ТИ 9289-005-00038155-01 «Полпхит»; ТУ 2449-001-18681615-02 «АГТОХИТ, ВР (40 г/л, лактат хитозония)»

Разработанные технологии хитина, хитозана и продукции на их основе реализованы:

• НПО «Питательные среды», г. Махачкала, освоен промышленный выпуск хитина, зольного хитозана, хитозана пищевого и пептидно-аминокислотного гидролизата для питательных сред микробиологического назначения;

- ЗАО «Рыболовецкий колхоз Восток-1», г. Владивосток и ЗАО «Восток-Бор», г. Дальнегорск Приморского края, где освоен промышленный выпуск хитина и хитозана из каршахса дальневосточных крабов для производства средств защиты растений;

- ЗАО «Восток-МДТ», г. Зеленоград, освоен промышленный выпуск порошкообразного сельскохозяйственного препарата на основе хитозана и органических кислот дня стимулятора роста и индуктора болезнеустойчивости растений «Нарцисс»;

- ЗАО «Биопрогресс», г. Щелково Московской обл., где освоен выпуск хитозана низкомолекулярного пищевого, стимулятора роста и индуктора болезнеустойчивости растений «АгроХит», а также производство ВАД «ХитАн» и «Полихит» на основе хитозана пищевого.

Личный вклад автора заключается в разработке концепции, формулировании и постановке целей и задач, обосновании способов их решения, непосредственном

і

планировании и проведении экспериментальных работ, анализе и обобщении результатов исследований и биологических испытаний, организация и непосредственном проведении опытно-промышленных испытаний и промышленной реализации разработок комплексной технолога» использования ХСС, а также частичное участие в разработке состава и испытании препаратов для зашиты растений и Б АД, участия в разработке патентов, написании статей н монографии.

Апробация работы. Результаты работы доложены на Третьей Всесоюзной конференции «Совершенствование производства хитина и хитозана из панцирьсодерясадгих отходов криля и пути их использования» (Москва, 1992), Всесоюзной конференции «Разработка н производство препаратов медицинской биотехнологии» (Махачкала, 1992), Международной конференции «Технология переработки гидробионтов» (Москва, 1994), Четвертой Всероссийской конференции «Производство и применение хитина и хитозана» (Москва, 1995), Пятой международной конференции "Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана" (Москва - Щелково, 1999), Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 30-летию ВНИТИБП «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов» (Щелково, 2000, 2003), Научной конференции «Фитотерапия, лазеротерапия, биологически активные вещества естественного происхождения (БАВЕП) в XXI в» (Черноголовка, 2000, 2001, 2002), 37"1 Internationa) Apicuitural Congress "APIMONDIA 2001й (Durban, South Africa, 2001), 3* International Symposium on Chitin Enzymology (Senigallta, Italy, 2001), Щ семинаре-совещании «Современные технологии и перспективы использования экологически безопасных средств защиты растений и регуляторов роста» (Анапа, 2001). 8Л Workshop of Polish Chitin Society (Lodz, Poland, 2001), Шестой международной конференции «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана» (Москва - Щелково, 2001), 5a1 Asia Pacific Chitin — Chitosan symposium (Bangkok, Thailand, 2002), Первой Всероссийской конференции no иммунитету растений к болезням и вредителям (Санкт-Петербург, 2002), 9a Workshop of Polish Chitin Society (Krakow, Poland, 2002), Международных конференциях «Морские

прибрежные экосистемы: водоросли, беспозвоночные и продукты нх переработки» (Москва - Голицыне, 2002; Архангельск 2005), Первом Международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2002), Всероссийской научно-технической конференции-выставки с международным участием «Качество и безопасность продовольственного сырья и продуктов питаниям (Москва, 2002), 5-th Asia Pacific Chi tin and Chitosan Symposium. Advances in Chitin Science (Thailand, Bangkok, 2002), ХП Conference of the Section for Biological Control of Plant Diseases Polish Phitopathological Society "Chitosan and Other Natural Compounds in the Control of Plant Diseases'* (Skiemiewice, Poland, 2003), Седьмой Международной конференции Современные перспективы в исследовании хитина н хшшана, (Репино, Санкт-Петербург, 2003г.), Seventh Asian Apicultural Association Conference and Tenth BEENET Symposium and Technofora. Bees for New Asia (University of the Philippines Los Bands, 2004), 6th International Conference of the European Chitin Society (EUCHIS'04), 2004, Poznan, Polska.

Публикации. Результаты исследований по теме диссертации опубликованы в 75 работах, в том числе б авторских свидетельствах и патентах РФ. Разработанные препараты награждены 4 медалями «Лауреат ВВЦ» и одной серебряной медалью Международной выставки «Апимондня — 2001», г. Дурбан, ЮАР. Структура и обьем диссертации. Диссертация включает введение, обзор литературы, методическую и экспериментальную части, вывода, список использованной литературы и приложения. Работа изложена на 269 страницах основного текста, содержит 86 таблиц, 45 рисунков, ссылки на 247 литературных источников. В приложениях приведены ТИ и ТУ, акты выпуска продукции, патенты и авторские свидетельства, протоколы испытаний продукция, экспертные заключения.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Во введении обоснована актуальность темы диссертационной работы, сформулированы цель, научная новизна, практическая значимость и научные

положения, выносимые на защиту, сформулированы задача исследований, пути нх достижения.

В первой главе «Анализ научных и практических предпосылок создания комплексной технологии хитина в хитозана из панциря промысловых ракообразных» (обзор литературы) на основании анализа в обобщения данных, Приведенных в публикациях отечественных и зарубежных, авторов, освещены основные тенденции в получении хитина и хитозана из панцирей ракообразных. Представлены перспективные объекты промысла: антарктический криль, пресноводные раки и мелкие рачки гвммарусы н талетриды. Рассмотрены основные способы промышленного производства хитина и хитозана, установлена возможность комплексного использования всех компонентов хитинсодержащего сырья ракообразных, показаны пути использования хитозана для получения продукции пищевого, косметического, лечебно-профилактического, сельскохозяйственного и технического назначения. Показаны способы повышения биологической активности хдтозаяов в способы их применения для защиты растений от болезней.

Во второй главе «Объекты и методы исследований» представлена программно* целевая модель исследований (рис.1), изложена методика организация н проведения работ, даны основные принципы разработки комплексной технологии хитина и хитозана из панциря промысловых ракообразных, определены объекты и методы аналитических исследований, л также условия проведения экспериментальных И опытно-промышленных работ.

Объектами исследование при выполнении экспериментальной части работы служили следующие виды ХСС: варено-мороженые бланшнрованво-мороженые и сыромороженые отходы антарктического криля Euphemia superba Dana, панцирь промысловых дальневосточных крабов: камчатского (Paralithodes camtichaticua), синего (Paralithod&t platypus (Brandt), равиошипого (Lühndes aequispina (Benedict), а также крабов-стригунов опилно (Chionoecetei opißo(O.Fabricius) и бэрди (Chioncecetes bairdl), сушеные и варено-мороженые отходы северной разовой креветки Pandarmj bolt oris, сушеные рачки • бо ко плавы семейств Gammaridea

tt

(Gommants pvlex) н Talitroidea (Orehestia bottae и OreheUta montagui), знмвпй подмор пчел Apis meUifera среднерусской расы, биомасса жуков-щелкунов Agrióles taurlcus а также хитин-белковый комплекс, хитин-меланиновый комплекс, хитин, хнтозан, ннзкомолекулярный хнтозан, а также белковые продукты из данных видов ХСС и продукция ка их основе, полученная в соответствии с разработанными технологиями.

Анализ современного состояния теория я практики произведет»

__ЗШІHUU Л ХВТТШШ _ _

|Формуляров>вяе цела а задач нсспедовшн^

_:_¿_

Разработка пришшпов коколексиоЯ технологии хитнна в хжгозаяа _Из панциря промысловых рмтобрюмп и насекомых_

^_I_

^азработе* схемы исследований!

lOuemt» бимюпяммЖ активности СЭР на ос во«« anoamj

es_і_

Еїрасгнчесісая реаяидадя» разработанных технологий]

Рнс. 1. Программно-целевая модель исследовании.

И

Для исследования процесса ферментативного депротеинирования использовали ферментные препараты щелочных протеиназ: протосубтипин Г20х активностью 100тыс.ед7г, ТУ 59.01.003.74-84, панкреатин медицинский активностью 25 едУг, ОСТ 49-167-81, В качестве кислой проте иназы брали протаваморин активностью 100 едУг по ТУ 609-50-2361-79, а нейтральной протеази - протосубгилин ГЗх 70 ед./г. Для гидролиза хитозана применяли ферментный препарат Целловиридин Г20х по ТУ 9291-010-00479563-99 активностью ЦлА 2000 едУг.

Исследовательскую и экспериментальную часть работы проводили в лаборатории технологии криля ВНИРО, лаборатории инженерии ферментов Центра «Бноинженерия» РАН, лаборатории биополимеров ИНЭОС АН СССР, на экспериментальной базе ВНИРО РТМ "Керчь" г, Севастополь, на базе экспериментальных технологий ВНИРО.

Опытно-промышленные испытания и внедрение разработанных технологий, изготовление опытных партий продукции и отбор проб дня анализа проводили на опытных установках и производственных линиях, расположенных на Опытном заводе НПО "Питательные среды" г. Махачкала, на экспериментальном участке ВРПО Севтехрыбпром г. Мурманск, ЗАО «Биопрогресс», г. Щелково, ЗАО «Восток-Бор»^-. Дальнегорск, ЗАО «Сонат», г. Москва н ЗАО «Восток-МДГ», г. Зеленоград.

Объекты оценивали по органолептяческим, химическим, биохимическим и технохимнческим показателям, гранулометрическому составу современными общепринятыми в отрасли методами. Количество белковых азотистых веществ определяли на авто анализаторе «Kjeltec» модель 1003 фирмы «Tecator», Швеция по методу Къельдаля. Аминокислотный состав определяли на автоматических анализаторах «Hitachi» модели KLA-3B и AAA-853. Определение С ДА хитозанов проводили титрованием иа кондуктометре ОК 102/1 (Венгрия) и модифицированным методом Ван-Слайка. Молекулярную массу хнтозана определяли методом капиллярной вискозиметрии растворов на вискозиметре Ubellode. Динамическую вязкость щелочных растворов хитина и растворов хитозана измеряли на вискозиметрах "Reotest" , "Reotest-2" с коаксиальной

системой цилиндров S/S в однородном сдвиговом ноле, а также на ротационном вискозиметре Брукфильда с цилиндрическим ротором (6/RFM). Концентрацию NHj -групп в ферментных гидролизатах определяли по интенсивности окраски растворов с транитрсбензолсульфокислотоЙ на фотоколориметре "Spekol" при длине волны 340 нм, определение содержания липидов проводили их экстракцией по методу Folch-и последующим колориметрическим определением с бкхроматным реактивом по Bloor.

Биологическая активность препаратов на основе деградированного хитозана была изучена в соответствии с «Методическими рекомендациями по испытаниям пестицидов» в течение трехлетних полевых испытаний препаратов «Нарцисс» и «АгроХит» на основе деградированного хитозана и низкомолекулярного хитозана соответственно на культурах сельскохозяйственных растений, а также на биобезопасность для почвенных и водных организмов, млекопитающих и насекомых, определены LD-50, ПДК в воздухе рабочей зоны и другие показатели безопасности препаратов.

Достоверность экспериментальных данных оценивали методами математической статистики при надежности не менее 0,90 и доверительном интервале ±5%, для обработки полученных результатов и построения графических зависимостей использовали стандартные программы для Windows 2000 и Excel 2000.

В третьей главе «Исследование свойств различных видов хитин содержащего сырья» изучен химический состав различных видов сырья, использованного для получения хитина и хитозана. По способу заготовки поступающее на переработку ХСС делятся на сухое и влажное.

В панцире ракообразных хитин, образующий волокнистую структуру, находится в ассоциации с белком, имея вид хитин-белкового комплекса (ХБК), образующего основной материал панциря. У ракообразных сразу после линьки панцирь мягкий, эластичный, состоящий только из ХБК, но с течением времени происходит его упрочнение за счет минерализации структуры ХБК, в основном, карбонатом кальция.

В табл. 1 представлены основные виды изученного нами сушеного сырья, заготавливаемого промышленностью для технических и кормовых целей. Температура сушки ХСС существенно влияет на режимы депротеинирования хитина, так как при сушке ХСС выше 70°С хитин и белок панциря уплотняются и

Таблица 1

Химический состав различных видов сушеного хитинсодержащего сырья, %

№ я\д Вид ХСС Вода Белок Лишок Минераль ные. вещества Хииш

1. Панцирь кроля после щелочного отделения белка 8-9 36-49 1-3 10-17 30-33

2. Крупка из каралахса дальневосточных крабов 7-8 21-27 0,2 - 0.4 34-39 26-32

3. Пащшрь северной розовой креветки 7-8 42-49 0,7-1 26-29 17-20

4. Мука из паншгря речных раков 8-9 25 -32 5-7 48-55 10-12

5. Рачок гаммарус сушеный целиком 10-13 50-55 6-9 13-16 12-15

7. Рачки талетрнды сушеные целиком (0*13 50-55 2-3 15-13 14-17

8. Подмор пчел 8-Ю 35-45 меланины 30-« 2-3 25-30

роговеют, что снижает их доступность для реагентов и вызывает необходимость применения на стадии депротеинирования щелочей с концентрацией 2 - 4%. Сушка ХСС при 55 - 60 °С не приводит к значительному уплотнению хитина и позволяет депротеинировать панцирь щелочами 1-2 % концентрации или ферментными препаратами.

ХСС, получаемое из антарктического криля разных способов обработки к северной розовой креветки, заготавливается чаще а мороженом виде (Табл.2), что снимает проблему уплотнения хитина при сушке и позволяет проводить депротеинированне щелочами с концентрацией 1 — 2 % и ферментными препаратами.

Отличительной чертой хитина, входящего в состав кутшсульг насекомых, является то, что он ковалентно связан с меланинами и белками типа склеротива, образуя соединения с трудом поддающиеся разделению без значительной

деградации. За счет широкого развития пчеловодства, а нашей стране существует возможность получать сырье для производства хитина в виде подмора пчел, ежегодная сырьевая база которого в России составляет от 6 до 10 тысяч тонн.

Таблица!

Химический состав мороженого ХСС, % на сухое вещество.

Ж п/п Вед хягансодержыпего сыри Белок Личиды Минеральные асщестза Хитин

1. Кр«ль целив мороженый 62-65 15-1« 12-15 5-7

2. ХСС крилі мртіет мпроженыс 45-55 3-5 18-20 10-15

3. ХСС криш от кэатт белка 25-30 1-3 20-22 25-30

4. ХСС ог производства фарой криля 56-53 2-4 30-34 14-16

5. Хитин-€ел*оеый комплоте еоия* 5-9 0,5-0,7 1-5 83-95

6. Ошдн северной розовой грсветт варсно-иороженые 33-45 -3,5 26-29 17-20

7. Пвяцврь иошиматизароваявого штатского краба мороженый 26-35 2-4 19-22 1Я-2Э

Таблица 3

Качественные показатели хнтина и хкгозана из ХСС камчатского краба, высушенных при разных

температуї рах

Темчераіу -р» сушкм ХСС,*С Содгржжяи« в хитяие, % СДА хвто-

■ад» белом мла

55-60 8,0 1*0,2 0,1-0,2 9й±2

70-75 8,5 3=ь03 0,5-0,7 85^2

90-100 10 5 ±0,3 0,8-1.1 75±2

Результаты модельных опытов по депротеинированию разных видов сушеных ХСС, с толщиной панциря краба 0,5 мм, креветки -0,2 мм, а хрнля - 0,05 мм показали, что хитин-белковый комплекс более тонкого панциря более доступен для

Депрогвинираванме, ч аг-Крид» крштм —Кр»с|

Рис. 2. Делротеннорование сушеных ХСС 2 % раствором №ОН при 70°С

гидролиз уюшего агента и скорость депротеинировання тонкого панциря краля выше, чем толстого панциря краба (рис. 2), При сушке тонкого панциря несколько снижается отрицательное влияние ороговения ХЕК, что показано в таблице 3. Наиболее эффективно депротеиннрование кридевого панциря, высушенного при - £0 "С, а степень деацетшшрования хитозана, полученного из такого хитина выше остальных. Таким образом, сушить ХСС следует при температурах 55-60 "С. Для депротеинировання панциря краба целесообразно применять щелочные растворы 4%-ной концентрации, для более тонкого панциря креветки - 2%, а для самого тонкого панциря криля - 1 — 2%, что связано с разной доступностью ХБК для депротеинирующего агента.

Для сохранения белковой фракции ХСС и получения из нее кормовой или технической продукции предпочтительно применять на стадии депротениирования ферментные препараты, так как по сравнению со щелочным депротеинированием полученные белковые гндролизаты не содержат поваренной соли, образующейся при осаждении белка. Аминокислотный состав белковой части различного ХСС, гидролизованного щелочью и ферментными препаратами показан в табл. 4, данные которой свидетельствуют о кормовой ценности выделенного белка и пригодности полученного пептидно-аминокислотного гидролизата для получения основы микробиологических питательных сред. Заметно снижение содержания аминокислот в белковой пасте, полученной 4% щелочью (колонка б) по сравнению с 1% (колонка 5). Белковые пасты, полученные с применением ферментных препаратов (колонки 3, 4, и б) по аминокислотному составу близки к белкам исходного ХСС и мышечному белку криля и отличаются большей сбалансированностью и близки по своему составу к кормовой муке, что подтверждает их кормовую ценность (Боева Н.П., 2002). Высокое содержание белков в ХСС, от 20 до 80% и их полноценный аминокислотный состав предопределяют необходимость выделения белковой части ХСС и использование ее для производства кормовых и технических продуктов.

Таблица 4

Содержание аминокислот в гидролизате и белковых продуктах из ХСС криля, г/100 г сухого вещества

Аминокислоты 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Аспарапшовая кислота 7,23 6,33 7,34 7,23 9,32 5.63 0,16 8,09 9.42

Треонин 3,01 2,30 3,47 2,90 3,03 1,02 0,46 2,86 1.66

Серив 2,83 2,19 2,75 2,54 2,45 0,75 0,32 2,41 1,37

Гяутаминовая кислота 9,80 9,25 9,23 9,66 11,03 7,04 0,54 10,54 8,65

Глицин 3,02 2,61 3,15 3,01 3,73 2,70 0,22 3,43 2,72

Алания 3,96 3,60 3,96 3,88 4^7 2,87 0,60 4,11 3,43

Цистиа 0,24 0,37 0,40 0,29 0,35 0,35 0,28 0,42 0,71

Валян 4,04 2,77 4,55 4,64 4,65 ЭД6 0,92 4,29 3,79

Метионнн 1,27 1,67 2,08 1,77 0,16 1,66 0,60 1,99 1,65

Иэолейщт 3,64 2,88 4,96 3,48 3.99 3,13 0,87 3,78 2,87

Лейцин 7,12 4,61 6,33 4,95 5,64 4,75 1,82 5,47 5,70

Тирозин 0,17 2.14 3,41 1,15 2.32 235 2,15 1,42 1,66

Февилаланин 3,80 2,57 4,16 3,85 4,96 4,17 1,59 2,89 3,81

Лизин 5,21 5,26 5,73 4,95 3,06 2,29 2,04 5,55 3,84

Гисгидт? 2,69 VI 1,69 ив 1,57 0,84 0,32 1,72 1.91

Арпшин 3,16 3,99 4,80 3,94 4,46 1,84 1,98 4,67 2,95

Пронин 3,15 2,34 2,83 3.02 3,07 1,79 0,1» 3.12 2.87

Сумма 66,06 57,14 72,12 62.64 70,1 4735 15,21 66,67 61,15

1 • ПСО криля (исходное сырье);

2 - мышечный бело« криля;

3 - белковая паста из ПСО криля, депроггеюшрованне протосубтилнноы Г20Х; 4,- белковая паста аз ПСО криля, депротеинированне панкреатином;

5 • белковая паста из ПСО криля, депротеиниро вание 1% ЫаОН;

6 • белковая паста из ПСО криля, депротекнирование 4 % НаОН давние рассчитаны с учетом содержанка минеральных веществ 25% на сухое вещество;

7 • гидролиз« ю ПСО криля (основа сухих питательных сред), депротсиеирование в промышленных условиях панкреатином;

в — белковая паста из ПСО северной розовой креветки, депротеиинрованис прставаморином ГЗХ, данные рассчитаны с учетом содержания минеральных веществ 22% на сухое вещество; 9—белковая паста из паншгря караяакса камчатского краба, депротеваировшже 4% ИаОН, данные рассчитаны с учетом содержания минеральных веществ 25% на сухое вещество.

В четвертой главе «Обоснование способов получения хитин я из панциря промысловых ракообразных» проведена сравнительная оценка различных способов депротеиниро ваяия и деминерализации ХСС с последовательным получением концентрата панциря криля (КПК), зольного хитина (ЗХ), хитин-белкового комплекса (ХБК) и хитин-меланинового комплекса (ХМК).

Мышечные белки вареных и бланшированных ХСС криля и креветки, а также целого криля целесообразно отделять путем механического прессовании

на фарш-сепараторах, получая яри этом концентрат панциря криля, продукт с содержанием панциря 25 - 40% в пересчете «а сухое вещества Получаемая в при пресс-сепарации белковая масса имеет фарщеобразнуго консистенцию от розового до серого цвета, содержание влаги колеблется от 86 до 8794, белка в фарше от 71 до 7$ %. Отработку режимов механического отделения мышечного белка ХСС криля проводили на пресс-сепараторе "Фарш 4/500" с диаметром отверстий сепарации 1,2 мм и на неопрессе "ВПзип" (Япония) с диаметром отверстий сепарации I мм, результаты испытаний которых показаны в таблице 5. Полученный после отделения белка концентрированный панцирь криля заготавливают в мороженом виде и хранят при минус 12 — 18"С. Основным принципом выделения хитина из панциря стала моделирование процесса биокопверсии хитин-белкового комплекса, протекающего в процессе линьки ракообразных, то есть применение ферментных препаратов протекназ с низкой хитинояитической активностью на стадии депротеинировзния хитина. Для проведения ферментативного депротенннрования ХСС суспендировали в воде с концентрацией сухих веществ 6,5 - 8

Таблица 5

Химический состав бланшированных ХСС криля до и после разделения на пресс-сепараторе Фарш 4/500 и неоирессе "В1Ьип»,%.

Пявоярь Белок

ХСС «Ые В-М,

Вода во на сухое »0 яя суш % м сулее

вдаяюом естестве и л я ж нам вещество

матераале мате-

рим*

Прмс-ешарэтор Фарш 4/500

Исходные отходы 80,5 5.9 30^ 8,3 45,1 12,7

После прессования:

-пашнрка» фракция; 70.5 ПА 33,6 1и 38,3 зад

-белковая фракция 0,9 »,6 6,5 65,7 5.3

Нсопресе "ВШоа»

Исходные отходы 78,6 5,0 23,3 13,75 64,2 12,4

После йртссов&яия:

-панцирная фракция; 73,4 9,0 37.7 (4,0 52,6 26,7

-45«якоам фрахшы 87,0 1.2 7,2 11,4 87,6 5,2

1'ас. 3. Зависимость ковцеатредии КНг-грушг а ферментном гвдролиэате от еьемінн фермеатолнза оротосубталином пре разянчвых концентрациях субстрата

Рис. 4. Зависимость конгквтрадин свободных аминогрупп в гйлролваате от времени дещхиеивироваїш« при разных концентрациях фермента.

В соответствия с оптимумом рН суспензии устанавливали на уровне 7 -7,5 для нейтральных протеиназ или 8 - 8,8, для щелочных протеин аз. Рациональную концентрацию ферментных препаратов установили опытным путем. Д ія щелочных протеиназ протосубтилина Г20х она составила 0,05%, для панкреатина - 0,5%, (рис. 4), а для нейтральной протеин азы — протосубтилина ГЗх — 0,2% (рас. 3). По окончании фермевтолиза через 2 ч от момента внесения в суспензию ферментного препарата, степень гидролиза белков ХСС достигает 60% при остаточном содержании белка в панцире 5 - 6%. При депротеинировании панциря криля с концентрацией субстрата 6,5% и рН 4 определена рациональная концентрация ферментных препаратов кислых протеиназ проторязян П25х и вротаваморкн П20х, составляющая 0,15%, что показано на рис. 5.

4 4,1 OJ ft.» 0.«

Концентрация ферментного препаратами

-Протосувицин. рН в,5 -- Прртсувткли»» рН Т -

«>рНЭ - flporopttfuH. рН 4_

* « I»

I 30

Iм

I.» I и | ю

I 5

о

0 0,3 I IJ

Концентрация ферментного прелАрлтз.%

> грялл —»—ЦдпиВ |

Рве. 5. Заансимось степени гидролиза ХСС от концентрации ферментных препаратов. (Время гидролиза 1 ч., С суЪфт, = 6,5%)

Рве. б. Зависимо«, степени гидролиза ХСС

от концентр алии панкреатина.

(Время гидролиза 1 я., С rytaum =* 6^5%)

Для панциря криля и креветки, содержащих менее 30% минеральных веществ, отработаны режимы последовательного проведения деминерализации и депротеиниро вания кислой протеин азой при рН 3 — 4,5 без промежуточного разделения суспензии, хотя в этом случае осаждаемые белковые пасты содержат 25- 36% минеральных веществ.

Депротеннирование ХСС криля панкреатином при концентрации ферментного препарата 0,5% за 2 ч проходит на 40 -45 % , а хитин содержит остаточное количество белка 5 - б% (рис, б). Из ферментных гндролизатов, полученных щелочным н нейтральным протосубтилинами при рН 5,5 осаждается в виде пасты до 80% гидролизованного белка, тогда как из гидролизата, полученного панкреатином, только 30%, что говорит, очевидно, о разной субстратной специфичности этих ферментных препаратов. В связи с этим депротеннирование ХСС панкреатином было применено при изготовлении пептидно-аминокислотных гидролизатов дня производства микробиологических питательных сред.

и

Для полного депротеиаирования хитина применяли механическую и химическую активацию ферментолиза, а также комбинированные схемы депротеинирования, включающие как ферментативный, так и щелочной гидролиз белковой части ХСС. Данные, представленные в табл. б и на рис. 6, свидетельствуют о том, что максимальная скорость ферментолиза приходится на первые 2 часа обработки ХСС. На этот же период приходится и максимальный выход белковой пасты, составляющей 30 - 35% на сухое вещество ХСС. Предварительное измельчение ХСС интенсифицирует процесс так, что максимальный выход белковой пасты из неизмельченных отходов от бланшированного мяса криля наблюдается через на 5 - б ч, в то время как для измельченных ХСС • через 4 - 5 ч. При ферментативном депротеннировании сушеных ХСС в течение 4 ч количество осаждаемого белка при рН 5,5 увеличивается до 55 - 60%, видимо из-за того, что дегидратированный белок набухает медленнее и гндролизуется ферментом в меньшей степени, чем влажный или не денатурирований.

Таблица б

Степень депротеиннрованая ХСС и изменение их химического состава при разной продолжительности ферментолиза, %

Врекл гидролиза, ч Паниигм, послс фернентолнза Белковал паста СДП

Выход к сырью Содсрж диие •оды Выход на сухое МО Хиксосгде Выход к си рью Содерж анне воды Выход на сухое е-ео ХСС

Белок Минер

I 2 3 Л 5 6 7 8 9 10

Варево-морясекые ХСС крнля с предварительным измельчением

1 70.0 87,0 70,0 - - }ба 92,0 58,0 -

2 42,0 87,0 50.0 59,2 4,7 54,0 - 69,2

3 79,4 87,0 47,0 60,б 2.6 28.7 91,1 11,6 66,5

4 69,4 87,0 47,0 61,0 2.7 35.5 89.4 17.1 66,9

5 79,5 87,0 53.8 58,6 1.9 _4210__ 91,0 16,9 71.4

6 60,1 87,0 1,6 52,6 91,6 20.0

8,5 60,0 87.0 35,5 33,0 68,0 88,5 35,7 таГо

Варено-мороженые ХСС крилд бе» измельчения

1 70.9 80,0 46,6 58.0 5,9 66,0. 91,4 26,1 62,5

2 52,8 80,0 47.5 59,7 3.2 60,0 90,5 26,1 42,4

3 36,1 80,0 35,8 59,7 6,3 64,0 91.6 24,6 48,9

4 53.4 80,0 48,5 - 4,4 59,8 90,9 24,7 58,4

5 35.7 . 80.0 31,1 48,1 8,9 72,1 89,7 33,7 69,8

6 50.1 80.0 40.0 - 6,1 70,0 85,6 37,7 -

На рис. 7 представлены графические зависимости выхода белковой пасты из ферментных гидролизатов разных ХСС, полученных с применением протосубтилина за 2 ч при pH 8,8. Из представленных зависимостей видно, что доступность белковой части ХСС для воздействия протеиназ располагается в возрастающем порядке: сушеные—* вареные—» бланшированные—* сыро-мороженые. Содержание остаточного белка в хитинах после депротеинирования ферментными препаратами составляет 4-8 % в (табл. 7),

Таблица 7

Содержание белка в хитинах после его депротеинирования ферментами и 1% _NaOH

№ о/п Вид сырья Ферментное ДП Щелочное ДП 1% NaOH, сод. белка.%

Вид фермента Остаточное сод. бедиа.%

1 Сухой панцирь криля от получения июшгга Пратосубтяиш S.7 м

2 Бланшироваяно-мороженые ХСС криля Протосубтилни **

3 Сыро-мороженый ХСС криля от получения фарша Протосубтидшя 4,1 0,8

4 Бланшированио-мороженые ХСС криля Панкреатин 6,8 U

5 Бланшированво-короженые ХСС криля Проторвзаи 8Д 1,6

Рис. 7. Зависимость количества осаждаемого белка от времена ферментодкэа разных видов ХСС

Рве. 8. Депротеннированне панциря криля Iii NaOH при различных температурах

а посте дополнительной щелочной обработки 1%-ным раствором NaOH снижаются до 1-2 %.

Механическая активация ферментолиэа сушеных ХСС увеличивает отделение бедка для крабового панциря - на 5 - 7 %, для креветочногс панциря — на 10 - 12%, для панциря криля и гаммаруса — до 15%, Щелочное депротеинирование проводили 1% раствором NaOH, обеспечивающим наиболее эффективный гидролиз белков панциря при низком уровне деструкции хитина, в присутствии 0,1% сульфита натрия, повышающего эффективность депротеинирования {Рис. S). Степень депротеинирования хитина с повышением температуры возрастает, достигая 85 - 90% при 70°С, однако, дальнейшее повышение температуры не приводит к увеличению степени депротеинирования хитина, но может снижать его молекулярную массу.

В пятой главе «Регулирование физико-химических показателей хигоззна» приведены результаты исследований, направленных на разработку способов регулирования таких характеристик хитозана, как содержание минеральных веществ, степени деацетилированде н молекулярной массы с целью обоснования технологии получения хитозана заданного из разных видов ХСС. Необходимо учитывать источник и качественные показатели сырья, способ заготовки и срок его хранения, и на основании этих данных выбирать способ обработки ХСС, а также параметры всех его стадий. Контроль основных характеристик полупродуктов позволяет влиять на качественные показатели конечного продукта.

Разработка способа регулировании содержания золы в хитине и хитозане Проведение ферментативного и щелочного депротеинирования ХСС позволяет получить хитин, содержащий 30 - 50% минеральных веществ, 1 - 3% остаточного белка и представляет собой полуфабрикат для выработки хитина и зольного хитозала. Известно, что деацетшшрование хитина, находящегося в комплексе с карбонатом кальция позволяет получать более высокомолекулярный хнтозаа, так как ноны кальция оказывают ннгибирующее действие на деструкцию молекулы хитина (Гамзазаде и др., 1955). Нами установлены

температурно-временные параметры реакции деацетштрования зольного хитина и определено, что растворимый хитозан с С ДА выше 80% образуется при деацетилировании зольного хитина 50%-ным раствором ИаОН при температуре 105 - 130 СС в течение 1,5 -2 ч. При этом полученный хитозан содержит 16 -25% золы, полностью растворяется в 1 - 2% растворах уксусной кислоты, образуя 1 - 2% растворы с динамической вязкостью 40-60 сПз (табл. 8).

Таблица 8

Физико-химические характеристики зольных хитозанов

Способ получения хитина Содержанке минеральных миксте ■ хите Содержите минеральных итсста • хитоэяче Степень деацетнлир ояаии* Вязкость 1% рапир»« № УК, сГЪ

% на сухое веш«т*о

КислолкыделочкоЯ. ХСС от тают» «рил», ДШ-0.it). НаОН с доваалеиием ПАВ (тин) 27 16 82 60

Кислотно-щелочной, ХСС кркля вланинцюмнмпмороженые, ДП-1 -14 МвОН; ДП-2 - <•/, М«ОН 29 17 81 54

Фермеетлишшй, ХСС ирил» варннморожвн^ ДП-1 чцхткубгияии Г20Х, ДП-2 - 1% КаОН 33 22 84 50

мороженые, ДП-1 -панкреатин, ДП-2 • 5%ЫаОН 34 21 8« 52

ФерыемтатмяныН, ХСС берекиеаочор"Ской креветки мремо-мерож. ДП-1 -ттротосувтнлин Г20ХЛП-2 - 42 25 83 40

Кислотно-щелочм., ХСС (жремиево-аорской кректкн мремо-морож. ДП-1 39 23 83 47

Разработка условий деминерализации хитина. Деминерализация является важной стадией при производстве хитина, так как содержание золы определяет вязкостные и другие физико-химические характеристики как хитина, так и получаемого из него хитозана. Разработанный способ деминерализации хитина предусматривает суспендирование панциря в воде и внесение в реакционную массу 6а. соляной кислоты. С целью предотвращения вспенивания реакционной массы кислоту добавляли в рассчитанном количестве порциями в 3 - 5 приемов. Проведение деминерализации сопровождается контролем рН среды, необходимым для установления момента окончания реакции. Этим моментом считали установление рН на уровне 4 - 4,5, не изменяющееся в течение 0,5 часа, что говорит о прекращении реакции. Проведение деминерализации

И

разработанным способом позволяет в течение 20 - 40 минут при 18 - 22°С полностью перевести минеральную часть панциря в растворимое состояние и получить юггин с содержанием золы менее 1% (рис. 9).

Важную роль играет последовательность проведения стадий деминерализации и депротеинированяя. Установлено, что для толстого и сильно минерализованного панциря камчатского краба предпочтительно сочетать химические приемы с биотехнологическими и проводить деминерализацию перед депротеиннрованием, а панцирь криля необходимо деминерализовать после депротенннрования.

Ряс. 9. Зависимость степени деминерализации от времени при расходе бя. HCl 0,3 wji/ЫЙЙ

l.t-6Q4C; 2. t = 40 ®С; 3.1«20"С.

Рис, 10. Зависимость С ДА от времени дсаастилированиз хитинов в разной агрегатном состоянии при НО "С. I. Разыороженый хитин; 2. Влажный хитин; 3. Сушеный хитин.

Деапетмлнрованне хитина позволяет получить растворимый полимер Д-глюкозамина, хитозан, важнейшей характеристикой которого является степень деацетилирования (СДА), определяемая как отношение количества звеньев 1>-глюкозамина к М-ацетал-Б-глюкозамина. СДА характеризует растворимость хитозана в растворе кислоты, а растворяться хитозан начинает при СДА 70%.

26

Деацетилирование хитина проводили в 50% растворе NaOH при 90 - 120°С, регулируя параметры реакции в зависимости от вида я способа получения хитина (рис. 10). Реакция деацетнлирования сопровождается одновременным разрывом гликозидных связей полимера. Таким образом, хитозан представляет собой полидисперсный по молекулярной массе полимер Д-глюкозамица, содержащий 5 — 15 Va ацетамидных групп, а также до 1 % групп, соединенных с аминокислотами и пептидами.

С увеличением температуры снижается молекулярная масса хнтозаяа, для сохранения которой предпочтительно снижать температуру обработки хитина. Наибольшая скорость реакции деацетнлирования наблюдается в течение первого часа щелочной обработки. За это гремя хитин деацетилируется примерно на 70 % при условии обработки его 50 % щелочью при 100 "С. Далее скорость реакции значительно замедляется и к 5 часам степень деацетилнровання достигает S0 %. Таким образом, длительная обработка ие приводит к резкому повышению степени деацетнлирования, в то время как реакция деструктирования происходит на всем протяжении процесса. Установлено, что хитины сразу после очистки от белка и минеральных веществ и не подвергнутые сушке, а хранившиеся замороженными, могут быть деацетилированы при 90 - 95 °С, тогда как сушеный хитин деацетилировали при 115-120 °С, что показано на рис. 11 и 12. Грубые крабовые хитины деацетилировали 50% щелочью при 100 — 105 "С в течение 3 ч, креветочный 2 - 2,5 ч, а мягкий крилевый хитин — 1,5 - 2 ч.

Разработанный • нами способ регулирования СДА хитозана путем экспозиции щелочных растворов хитина (ЩРХ) позволяет получать растворимый полимер при 20 - 70 °С с применением 15 - 25% щелочей. В растворах NaOH указанных концентраций суспендировали хитин, получая 1- 5% суспензии, которые затем тщательно перемешивали и замораживали при температурах от -10 до -35 "С, причем процесс набухания хитина протекает наиболее эффективно в интервале температур от -27 до -35 °С. ЩРХ размораживали при 18 -22 °С.

Время, мня

Рас. II, Зависимость С ДА от времени деапетаявроваии влажных хитинов. 1.1-115-120 "С; 2.1-100- 105 "С; 3.190-95 "С.

Рис. 12. Деацетилироваяие влажных хитинов разного происхождения при 100 -105°С

1 — Хлтил криля; 2 — Хитин кре*етки; 3 — Хитин краба

Размороженные ЩРХ имеют вид текучей, вязкой массы с окраской от соломенно-желтой до темнокоричневоЙ в зависимости от качества использованного хитина.

Лучшая растворимость хитина наблюдается в 13 и 15% растворах щелочи. Графики зависимости вязкости ЩРХ в 15% КаОН от градиента сдвига представлены на рис. 13., которые показывают, что с течением времени ЩРХ теряет текучесть до образования геля. Щелочные растворы хитина, приготовленные с использованием 19 и 24% щелочей обладают меньшей текучестью и менее устойчивы во времени, быстрее желируют. На рис. 14 представлены зависимости изменения механических свойств щелочного геля хитина с течением времени для хитина, взятого для приготовления ЩРХ, в различном состоянии.

По достижении хитином в ЩРХ определенной С ДА ослабевает его взаимодействие со средой и усиливаются межцепные контакты. Устойчивость щелочного раствора до желировання зависит от скорости протекания этих

процессов и в комнатных условиях может колебаться от нескольких часов до нескольких суток.

>0

£ 30 I 15

»4

3 10

/

/

/

V -

100 300 ' " юо

Время экспоэнщп ШРХ, ч

-СухчЛ кнгнм

Рйс. 14. Изменение модуля упругости геля хитина а зависимости от времени экспозиции ЩРХ при 22?С; С млн ■ 24%;

С М1ГТКН1 ™

Рве. 13, Зависимость вязкости ЩРХ разного времени выдерживания от градиента сдвига при 20 - 22 "С, С «м - 2%, С мж - 13%.

Процесс деацетилирования хитина протекает на протяжении всего времени выдерживания щелочного раствора хитина после его размораживания и имеет ступенчатый характер (рис. 15). Из представленных графических зависимостей видно, что для достижения СДА 75%, гарантирующей полную растворимость хитозана, необходимо выдерживание щелочного раствора хитина при 18 - 22 "С в течение 75 ч. Затем реакция деацетилирования замедляется таким образом, что СДА не растет в течении 20 - 25 ч (кривая 1), оставаясь все это время на уровне 40 • 45%. Кривая 3 на рисунке 15 иллюстрирует протекание деацетилирования хитина в щелочном растворе при нагревании его до 70 - 75 "С. При термообработке щелочной раствор хитина желирует в первые 20 • 30 минут и реакция деацетилирования проходит таким образом, что СДА хитина 40 - 45% достигается за 3 - 5 ч.

Врем», мня

Рис. 15. Зависимость степени деацетнлировання зиггозан» от времени выдерживания раствора хитина при различных температурах. 1.21-22*С; 2.37"С; 3.70-75"С,

Рве. 16. Изменение С ДА криохитозаиов от времени экспозиция 1ДРХ пря 22°С

Следовательно, если подвергнуть термообработке гель, образовавшийся При выдерживании щелочного раствора хитина при комнатной температуре, то можно получить высокодеацетнлирозаяный хитозан за 20 — 24 ч. Щелочной раствор хитина выдерживали при комнатной температуре до момента желирования, а затем нагревали без перемешивания до 70 - 75 "С в толще массы и поддерживали згу температуру 3 - 5 ч. Гель после термообработки измельчали, отделяли выделившуюся в результате синерезиса щелочь и затем отмывали до нейтральной реакции, получая в результате хитозаны с СДА 80 - 95%.

Хитозаны, полученные с помощью криообработки отличаются по своим свойствам от хитозаиов, полученных при 130 "С. Они практически пе электризуются при измельчении, их растворы проявляют реологические свойства, близкие к свойствам ньютоновских жидкостей. На рисунке 17 показаны кривые течения растворов хтозанов, полученных из щелочных растворов хитинов, полученных разработанным способом.

Так, раствор хитозана, полученного нз влажного, набухшего хитина, по характеру кривой течения близок к ньютоновской жидкости (кривая 1), а наибольшую способность к структурообразованию имеют хитозаны, полученные из сухого хитина без предварительного набухания перед замораживанием (кривая

Молекулярная масса (ММ) хитина и хитозана может быть снижена на разных этапах переработки ХСС. Так, вид ХСС, взятого для обработки изначально определяет молекулярную массу конечного полимера и хитозаны из панциря крабов обычно имеют ММ 300 - 500 кДа и выше, из панциря креветок 150 —400 кДа, а из панциря криля S0 — 200 кДа. На снижение этого показателя существенное влияние оказывают условия деацетилирования, при которых ММ может снизиться на 20 — 30%, измельчение хитозана, снижающее ММ на 10 - 15%, а также целенаправленное снижение ММ перекисью водорода и ферментными препаратами с хитинолитической активностью. Обработка хитозана 1 - 3% перекисью водорода сразу после получения в течение 40 — 60 мин снижает ММ в 2 раза, но более глубокая деградация хитозана достигается с помощью ферментных препаратов хитин аз.

Разработка биотехнологии ферментативной деградации хитозана. В эксперименте использовали ферментный препарат актином ицета Streptomyces

3).

Рнс. 17. Кривые течения 1% растворов хитозаяов:

1. - хитозан, полученный гетерогенным способом, эталон;

2. - хитозан из сухого хитина без набухания;

3. - хитозан из сухого хитина с предварительным набуханием;

4.- хитозан из влажного хитина.

kwssanovtí, проявляющий хатинолитическую активность 0,15 — 0,55 ед/мл и наработанный в опытных условиях лаборатории инженерии ферментов в Центре "Биоинженерия" РАН, применение которого позвонило до минимума сократить использование химических реагентов, избежать модификации хитозана, плавно регулировать процесс гидролиза.

Процесс растворения н гидролиз хнтозава ферментным препаратом Streptomyces kurssanovii проводили в реакторе из нержавеющей стали, оснащенном рубашкой для подогрева, мешалкой турбинного типа со скоростью вращения 180 об/мин п дозирующим устройством, регулирующим подачу уксусной кислоты и раствора NaOH. Исходный хнтозан растворяли при рН 4,9 - 5,4 в 0,2 М ацетатном буфере, приготовленном непосредственно в реакторе, нагревали до 45°С и добавляли ферментный комплекс. По окончании времени гидролиза в реактор добавляли раствор щелочи до установления рН И. При этом низкомолекулярный хнтозан (НМХ) выпадает в осадок и отделяется фильтрованием. Затем осадок 2-3 раза промывали дистиллированной водой до рН 9, НМХ растворяли, для чего доводили рН суспензии до б - 7 соляной кислотой и подвергали раствор распылительной сушке, получая порошкообразный продукт от белого до кремового цвета. После ферментолиза исходного хитозана с молекулярной массой 200 — 350 кДа и СДА 78 - 84% получили НМХ с ММ 5-20 кДа.

Нами исследована зависимость ММ получаемого НМХ от количества вносимого ферментного препарата. Поскольку хитиназная активность разных партий ферментного препарата Streptomyces kurssanovii может отличаться, то показателем количества вносимого фермента установили отношение единицы активности на 1 г сухого хитозана. Ферментолиз крабового хитозана проводили в одинаковых условиях в течение 180 мин. Результаты исследования показаны в табл. 9. При внесении в реакционную массу ферментного препарата более 1 ед\1г хитозана выход НМХ снижался на 20 - 25% за счет потерь низкомолекулярной фракции.

Таблица 9

Динамическая вязкость 1% водного раствора НМХ при различных режимах гидролиза

Норма внесения фермента, ед\ 1г 0,64 0.82 0,96 1,01 1,04

Динамическая вязкость, сПэ 3,21 2,16 1^6 1,30 0,43

Внесение ферментного препарата в количестве менее 0,8 ед\1г приводило к получению НМХ не полностью растворимого в воде. Оптимальной нормой внесения ферментного препарата 2(герютусез кигззапомі считали 1,0 ± 0,4 ед\1г.

Растворение сухого хитозана осуществляли в течение 12 - 16 ч при 18-22 °С, затем раствор нагревали до 45 - 46 °С, добавляли ферментный препарат и проводили гидролиз. Жесткие условия получения исходного хитозана и его последующая конвекционная сушка придают полимеру с высокой степенью деацетилнрования сформировавшуюся вторичную структуру, что препятствует его растворению и гидролизу. С целью смягчения условий процесса, хитозан подвергали гидролизу сразу после деацетилировання, минуя стадию сушки. Данные табл. 10 показывают, что по сравнению с сухим полимером, влажный хитозан, не подвергавшийся сушке, поддается гидролизу за более короткое время и позволяет получать НМХ с меньшей ММ.

Таблица 10

ММ сухого и влажного хитозанов при гидролизе хитиказой Во-ерСотусез кгігзіаптііі, кДа.

Вид хитозана Время гидролиза, мин

0 30 60 120 180 240

Сухой 300 156,6 106,6 72,4 40,9 32,0

Влажный 300 87,0 41,8 27,6 8 -

При щдролизе сухого хитозана вязкость его раствора резко снижается в течение первых 15-25 мин. реакции, а затем падение вязкости происходит медленнее и практически заканчивается к 160—180 мня. гидролиза.

Влажный хитозан растворяется быстрее сухого, за б - 8 ч, а его гидролиз проходит также за 160 -180 минут. Вязкость 1% раствора хитозаяа в 1% уксусной кислоте в процессе гидролиза за 180 минут снижается от 250 - 300 сПз до 1,3—1,6 сПз и соответственно со 150— 180 кДа до 8—10 кДа.

Другим ферментным препаратом, примененным нами для гидролиза хитозан а, стал целловиридин Г20х активностью ЦлА 2000 ед7г, промышленный ферментный препарат гидролаз на основе штамма Trichoderma reesei, выпускаемый Заводом биологических препаратов в г. Бердск.

Гидролиз хитозаяа целловиридином проводили в растворе с концентрацией полимера 2% при концентрации ферментного препарата 0,3% в течение 4 ч. при рН 5,3 и 52 "С.

На основании результатов исследований в производственных условиях ЗАО «Биопрогресс» нами получен водорастворимый НМХ, который затем был использован в качестве основы для разработки и испытания средств защиты растений (СЗР) серии «АгроХит», обладающих более высокой фитокммукоиндуцирующей активностью по сравнению с СЗР на основе высокомолекулярных хитозанов.

В шестой главе «Разработка комплексной технологии хитина и хитозана яз панциря промысловых ракообразных» представлены разработанные нами технологические схемы получения из ХСС хитина, хитозана, криохдтозаяа и НМХ, являющиеся продуктами комплексной переработки панциря ракообразных н использования всех его компонентов. Применение в комплексной технологии хитина и хитозана биотехнолошческих подходов связано с использованием на разных стадиях переработки ХСС различных ферментных препаратов, что с одной стороны позволяет варьировать параметры процесса и регулировать физико-химические показатели хитина и хитозана, а с другой стороны делает технологическую схему гибкой и дает возможность изменять ее в зависимости от качественных характеристик исходного ХСС и конечного продукта. Обобщенная схема комплексной технологии хитина н хитозана из панциря промысловых ракообразных показана на рис. 19.

и

Гидролмат-<— Келкпвая паста

Хятвими«ржа шее сыпь«

4-

Суспеидировариев воде *

-Феомвитолиз

ХКК -

ШслочиоЙ гидролиз

і

Фильтрование

і

Зольный дп-ин

—^ Измелмян«

4-

Сов6*ит

»Суспеидтювание в щелочи

4-

Замораживавяс

Размораживание 1

Термоуб боткі

4-

Отмывка

4-

Сушка 4.

Кришятозач

Іииетялирмание

1г

4-

Нейтрали лава -

4-

Сушка

і

,Хатотая чольиый

Деминерализация л-

\г

Пимымм

4-

Сушка

4-

Хатви

4-

Дмиетилтюццц^

4

4.

Суши» штщэна

4-

Хитозап

4

^готятаттовмЯ гид ролі

4 нвх

I

^асг воїх я и е

I-

СЭР

Рис. 19. Схема комплексной технологии хитина, хитоэана и продукции на их основе из панциря промысловых ракообразных

Регулирование основных показателей хнтозана, степени деацетилирования и молекулярной массы можно осуществлять на всех этапах, изменяя те в ли нные режимы обработки. Физико-химические показатели хитозана, полученного в соответствии с разработанной технологией разными способами представлены в таблице 11.

Таблица 11

Хитозаны криля разных способов получения

Способ получения хитина Способ получения хитозана СДА,% Молекулярная масса, кДа

Кислотно-щелочной, в мягких условиях крио акта ваши 85 280

традиционный 85 120

Кислотно-щелочной» в жестких условия* криоактивация 86 260

традидвоииый 80 90

Фермевтатмный, вротосубтютт іфиовкттгеашю 74 220

традиаиовкыЯ 85 130

Ферментативный, панкреатин крйоактиаацйя 96 160

традиционный 95 100

В седьмой главе «Практическая реализация результатов исследований» рассмотрены результаты внедрения результатов технологических исследований на производстве и обоснованы технологии изготовления на основе хитозанов средств защиты растений, а также технологии их применения и полученные результаты.

Промышленное производство хитина, хитозана и продукции на их основе. Результаты научных исследований и технологических разработок внедрены в промышленное производство на шгти предприятиях различных форм собственности.

На производственных мощностях НПО «Питательные среды», г. Махачкала налажена комплексная переработка целого сыроморожеиого криля и варено-морожекого панциря криля и выкушены промышленные партии пептидно-аминокислотного гидролизата микробиологического назначения, ХБК, хитина, хитозана и зольного хитозана пищевого и технического назначения.

Разработка комплексной технологии заготовки и переработки панциря дальневосточных крабов внедрена на производстве хитина и хитозана, организованном ЗАО «Рыболовецкий колхоз «Восток - 1» и ЗАО «Восток-Бор» в г. Дальнегорске. результатом внедрения стало налаженное производство мощностью до 80 т в год хитина и хитозана сельскохозяйственного назначения в качестве основы для получения СЗР «Нарцисс» и «АгроХит». Разработанная технология измельчения хитозана стала основой для организации цеха ЗАО

36

«Восгок-МДТ» пс> производству порошкового СЗР «Нарцисс» в г, Зеленограде мощностью до 50 т готового продукта в год.

На основе применения хитинолятических ферментных препаратов в Центре «Бйоинженерия» РАН разработана промышленная технология получения низкомолекулярного водорастворимого хитшана в качестве основы для СЗР нового поколения «АгроХят», препарат прошел регистрационные испытания, а технология внедрена в ЗАО «Биопрогресс».

Разработка технологи» получения средств защиты растений н> основе штозана. Современные технологии сельскохозяйственного производства требуют применения на всех стадиях от обработка посевного материала до хранения урожая эффективных и безопасных средств защиты растений (СЗР) от болезней и вредителей. Опыт применения хитоэава в качестве действующего вещества в СЗР показал его высокую эффективность для стимулирования роста я индукции болезнеустойчивости многих сельскохозяйственных культур. Хитозановые препараты позволяют повышать урожайность зерновых, технических, овощных н других полевых культур, обладают выраженным ризогекным эффектом нря укоренении черенков а рассады в открытом грунте я теплицах, увеличивают выход кондшшонной плодоовощной продукции при зимнем хранении.

Учитывая, что хитоэан является природным биополимером, разрешен для пищевого применения н является полностью безопасным для окружающей среды, работников, применяющих его на предприятиях и в хозяйствах, а также для потребителей сельскохозяйственной продукции, можйо считать его одним из перспективных соединений для производства СЗР. Для получения хитозаяа используют панцирь промысловых ракообразных, в основном, дальневосточных крабов, современные объемы добычи которых позволяют обеспечить хитозажшыми СЗР потребности сельского хозяйства нашей страны.

Технологии получения в применения хнтозановых СЗР предусматривают

выпуск порошкообразных и жидких препаратов. Порошкообразный препарат

«Нарцисс», разрешенный ГосхимкошгосиеЙ и применяемый для предпосевной

обработки семян и картофеля, представляет собой иодорастаорммую

37

композицию из тонкоизмельченвого хитозана, органических кислот: янтарной, L-глутамивовоЙ, красителя родамина и прилипателя карбоксимстилцешиолозы. Хятозан из панциря краба со степенью деацетилированкя выше 75% и молекулярной массой 100 - 150 кДа последовательно измельчали методами истирания и среза ш терке и дезинтеграторе до размера частиц от 0,i до 0,5 мм и рассеивали по фракциям ва вибросите. Последующее измельчение хитоэана вместе с другими компонентами препарата в шаровой вибромелькице методом одновременного удара и истирания позволяет получить продукт с равномерным распределением компонентов. Такой препарат представляет собой тонкодисперсный порошок белого с розовым, кремовым или серым оттенками цвета без запаха с размером частиц от 200 до 2000 мк, насыпной плотностью 0,6 г/см1, растворимый а воде до 1 г/100 см1 с вязкостью 1% водного раствора не менее S сПз.

Основным процессом при получении порошковых СЗР является измельчение хитозана. Известно, что хятозан измельчается с трудом и электризуется при измельчении. На опытном оборудовании НПО «Вибротехника», состоящем из дисмембратора, абразивной мельницы, шаровой гиброыельнипы и сит с калиброванным размером ячеи от 0.1 до 0,5 мм. Исследовали режимы измельчения хитозанов с различной молекулярной массой и определяли гранулометрический состав полученных порошков, при этом определяли последовательность и кратность измельчения хитозанов на мельницах разных типов до получения порошка с содержанием более 90% частиц размером 0,1 — 0,2 мм. Основные характеристики исследованных хитозаноа представлены в табл. 12.

Таблица 12

Физико'Химические показатели измельченных хитозанов

л п/п Фкрмя-вранзводетель Молекулярна ■ масса, «Да Степень д*«цегпд8рмдеш1Я,% Иподиий размер частик, мм

1. ЗАО «Сонат» 350-380 8S-9Q 0,5-1,5

2. Beijing Co-sing Chemicals Со.^СятаЙ 250-300 30-85 1,5-3

3- ЗАО «Восток-Бор» 120-150 go-as 0.6-6,0

Учитывал высокую электризуеностъ ворошков хнтозана и связанную с этим летучесть тонкоизмельченной фракции, подбирали режим измельчения преимущественно на дисмембраторе, изменяя кратность измельчения. Высокомолекулярные хитозаны с влажностью 10%, обладающие пластичностью дополнительно измельчали на абразивной мельнице с промежуточным рассевом на вибросите. Для исследованных образцов хнтозана подобраны рациональные режимы измельчения, позволяющие получить порошки хнтозана с содержанием фракции 0,1 - 0,2 мм более 90%, что показано в таблице 13.

Таблица 13

Режимы измельчения и гранулометрический состав измельченных хнтозанов

№ Фирм*- Мсльннпа 1 Мельница 2 Овьем фракция

п/п производитель wp »Til ость кратность 0,1-0,2 мм, %

1. ЗАО «Сонат* 2 I 90

2. Beijing Co-sing 1 1 95

Chemicals Со.Жигай

3. ЗАО «Восток-Бор» 1 - 95

Различия в физических характеристиках между хитозаиом и другими компонентами, входящими в рецептуру СЗР, требуют проведения дополнительной процедуры перемешивания компонентов с одновременным дополнительным их измельчением.. Исследования проводили на шаровой внбромельнице с металлическими шарами. При таком измельчении под воздействием ударно-сдвиговых нагрузок частицы хнтозана, имеющие более высокую пластичность, измельчаются совместно с более хрупкими частицами компонентов, что приводит к получению однородного порошка. В зависимости от времени измельчения композиции Б АД от 1 до 2 час на шаровой внбромельнице можно получать порошки с необходимой насыпной массой и гранулометрическим составом.

Жидкие СЗР препараты серии «АгроХит» представляют собой раствор ннзкомолекулярного хнтозана в слабых растворах органических и минеральных кислот. НМХ на порядок более активный в качестве индуктора

болезнеустойчиво ста растений по сравнению с высокомолекулярными хитозанами, что позволяет получать на его основе СЗР с низкими нормами расхода и не требующие срока ожидания. Разработан и испытан в полевых условиях препарат на основе полидисперсного комплекса низкомолекулярных хнтозанов с молекулярной массой 5-20 кДа «АгроХит».

Для получения препаратов серии «АгроХит» готовили маточный 4%-ный раствор НМХ в 1% растворе молочной, уксусной или соляной кислоты. Применение «АгроХита» предусматривает разбавление его водой до концентрации по действующему веществу 0,01 — 0,08% в зависимости от культуры и стадии обработки. Препарат «АгроХит» включен в список препаратов, разрешенных к применению по картофелю и яблоням, так как обладает высокой способностью к индукции болезнеустойчивости как однолетних, так и многолетних растений. В настоящее время в технологии производства и применения СЗР на основе хнтозанов доведены до стадии практической реализации. Налажен выпуск препаратов, имеющих спрос в сельском хозяйстве в отличающихся высокой эффективностью при полной экологической безопасности для окружающей среды и человека.

ВЫВОДЫ

1. Разработан концептуальный подход к комплексной переработке хитннсодержащего сырья, основанный на применении ферментативных технологий при получении хитина и регулировании основных физико-химических характеристик хитозана, обеспечивающая возможность промышленного использования этих биополимеров для производства продуктов пишевого, сельскохозяйственного и технического назначения.

2. Научно обоснована комплексная технология хитина и хитозана из панциря промысловых ракообразных для получения из них хитина и хитозана с заданными характеристиками, хитин-белкового комплекса, низкомолекулярного хитозана, белковых продуктов кормового и технического

назначения из ХСС различного происхождения и качества, а также производить из хятозана эффективные средства зашиты растений.

3. Научно обоснованы принципы заготовки и переработки хитин содержащего сырья из дальневосточных крабов, северной розовой креветки, антарктического криля г перспективных источников ХСС, предусматривающие их хранение в мороженом веде или сушку при температуре не выше 50-55 °С.

4. Научно обосновано и экспериментально подтверждено преимущество получения хитина и хитозана с применением биотехнологичесхих методов по сравнению с широко применяемой кислотаскщ елочной схемой обработки. Определены параметры процессов депротеинирования и деминерализации ХСС с применением ферментных препаратов микробиологического и животного Происхождения при различных pH реакции, установлены рациональные значения температурно-временных параметров процесса с учетом степени депротеинирования и деминерализации хитина в условиях воздействия ингибврующих факторов.

4, Обоснованы рациональные параметры деацетилнрования хитина из различных видов ХСС и для сушеных, сырых и размороженных хитинов.

5, Разработаны, научно обоснованы и экспериментально подтверждены рациональные параметры получения щелочных растворов хитина при замораживании (- 25 - 32°С) и размораживании (20 - 22 °С), изучены свойства ЩРХ и параметры процесса деацетилнрования хитина в гомогенных условиях, позволяющие регулировать основные характеристики получаемого криохитозана. Изучены физико-химические свойства криохитозана и установлен характер влияния на них темпсратурно-временных факторов.

6, Установлены параметры технологии механической, химической и ферментативной деградации хитозана для получения водорастворимой основы средств зашиты растений, установлены рациональные параметры снижения молекулярной массы хитозана я получения порошковых и жидких препаратов сельскохозяйственного назначения на основе высокомолекулярных, полидисперсных и деградированных хитозана;

7. Разработаны технологические схемы переработки мелких ракообразных с использованием на стадии депротеннирования слабых растворов щелочи н ферментных препаратов, что позволяет сохранять исходные свойства хитина и белков.

Разработаны технологические схемы получения из кутикулы насекомых (пчелы, жуки-щелкуны) хитин-мел анинового комплекса, хитина, хнтозана, низкомолекулярного водорастворимого хнтозана н хитозан-меланинового комплекса.

8. Разработана комплексная технология переработки панциря дальневосточных промысловых крабов и камчатского акклиматизированного краба с получением низкомолекулярного хнтозана в качестве основы для СЗР, проявляющего свойства индуктора болезнеустойчивости и стимулятора роста сельскохозяйственных растений, включая многолетние.

9. Установлена биологическая активность препаратов на основе деградированного хнтозана в отношении сельскохозяйственных растений и разработана технология их производства и применения на различных культурах. Получены данные по улучшению биометрических показателей сельскохозяйственных растений, снижению их заболеваемости и увеличению урожайности в результате применения СЗР на основе хнтозана. Проведены широкие полевые испытания СЗР на основе хнтозана разной молекулярной массы на однолетних И многолетних культурах, разработаны препараты, прошедшие регистрационные испытания и разрешенные для применения в РФ.

10. Разработанная комплексная технология хитина п хнтозана из панциря промысловых ракообразных прошла производственную проверку в судовых условиях и на промышленных предприятиях.

Разработана нормативная документация на процесс к продукты переработки ХСС. Разработанные технологии позволяют обеспечить комплексное безотходное использование традиционных и перспективных промысловых ракообразных, а также выпуск высококачественной продукции, что подтверждено как нормативной документацией, так и авторскими свидетельствами СССР и патентами РФ.

42

Основное содержание диссертации опубликовано в следующих рябого х:

Монография!

Немцев C.S. Комплексная технология хитина и хитоэана из панциря

ракообразных М.; Издательство ВНИРО, 2006,133 стр.

Статьи:

1. Быкова В.М., Гройсмая МЛ., Кривошеииа JLH., Тен BJL, Немцев С.В., Гамэаззде А.И., Рогожин СЛЗ. Изыскание рациональных способов переработки панциря криля в условиях промысла.//Технология криля. Сборник научных трудов ВНИРО. - М-: ВНИРО, 1988 г.-С.5-12.

2. Быкова В.М, Немцев СЛ., Быков В,П., Полякова Л.К., Зыкова НЛ, Пастухова ЕА., Рогожин CJB,, Гамзазаде А.И. Исследование возможности получения хитина и хитозана из панцнрьсодержащих. отходов криля с применением ферментных препаратов.// Труды ВНИРО. - М.: ВНИРО, 1988 г, -с. 12-22. ...

3. Быкова BAL, Полякова Л.К., Зыкова Н.П., Пастухова ЕА., Немцев С.В. Влияние продолжительности хранения мороженых панцнрьсодержащих отходов криля на качество хитоэана. U Труды ВНИРО. - М: ВНИРО, 1988 г,-с.22-25. ..... .......

4. Быков В.П., Быкова . D.M., Немцев С.В. Технология комплексной переработки панцнрьсодержащих отходов криля// Сборник трудов ВНИРО -М.: ВНИРО, 1989 г. - с. 156-157. -, „

5. Быков В XL, Сафронова Т.М., Быкова В.М., Кривошеина Л.И., Немцев С.В. Состояние исследований и перспективы организации производства хитозана из ракообразных. // Технология рыбных продуктов. Сборник научных трудов -М: Издательство ВНИРО, 1997 г. - с.208-220.

6. Немцев С.В. Разработка комплексной технологии хитина и хитозана из панцирьсодержащего сырья криля с применением ферментных препаратов и криоактивации. // Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук. М.; Издательство ВНИРО, 1997 г., 23с,

7. V.P. Varlaroov, A.V. Ilyina, G.E. Bannikova, S.A. Lopatin, S.V. Nemtaev, D.V. Yusupova, AI. Melent'ev, P.P. Sukhanova, G-A. Vicborerva Enzymatic

43

depolymerization of chitosan and sulfated chitosan. // Chitin Enzymology 2001 RJLA. Muzzareffi, ed. Atec, Italy, 2001, pp. 423 - 429.

8. Немцев СВ., Зуева О.Ю., Хисмзтуллин РХ., Хясматуллин М.Р., Лариков В.ВЧ Варламов В JL Хнтозан из подмора — новый продукт пчеловодства. // Пчеловодство, № 5,2001г.- с. 50-51.

9. Немцев СЛ., Ильина А.В., Шинкарев С.М., Албулов А.И., Варламов BJL Получение низкомолекулярного хнтозана^/Биотехнология, № б, 2001г., с.37-42.

10. СВ. Немцев, А.И. Гамзазаде, С.В. Рогожин, В.М. Быкова, В.П. Быков Щелочные растворы хитина. Деацетилнрование в гомогенных условиях. // Прикладная биохимия и микробиология, 2002, том 38, >66, с 609-615.

11. В.М. Быкова, СВ. Немцев Сырьевые источники и способы получения хитина и хитозана. В книге: Хитин и хитозан. Получение, свойства и применение - М.: Наука, 2002, С 7-23.

12. Sergey V. Nemtsev, Valery P. Varlamov, Konstantin G. Skryabin Stimulation of plant growth and induction of plant diseases by acid-free water-soluble chitosan. // Progress on chemistry and application of chitin and its derivatives. Ed. By H. Struszczyk, Monograph v.VDI, Lodz, Poland, 2002, pp. 125 - 132.

13. Bil Кашин, OJL Поликарпова, АЛ. Борисова, С.В. Немцев, В.П. Варламов Лактат хитозана при размножении садовых растений зелеными черенками. // Плодоводство н ягодоводство в России; Сборник научных работ — М.: ВСТИСП, 2002, Т.1Х., с.212-218.

14. Sergey V. Nemtsev, АИаЛ'ша, Valery P. Varlamov, Otga L. Ozeretskovskaya, Natalya I. Vasyukova, Sergey N. Chirkov, Konstantin G. Skrysbin Stimulation of Plant Growth and Induction of Potato resistance to deseases by low molecular weight chitosan. Я Bulletin of the Polish Academy of Sciences. Biological Sciences, Vol. 51. Xa 3,2003, pp.243 — 249.

15. Sergey V, Nemtsev, Valery P. Varlamov Chitin and chitosan production in Russia, // Progress on chemistry and application of chitin and its derivatives. Ed. By H.Struszczyk, Monograph v.IX, Lodz, Poland, 2003 , pp. 7 - 11.

16. СВ. Немцев, О.Ю. Зуева, MP. Хисматуллкн, А.И. Албулов, BJL Варламов Получение хитина а хитозана мз медоносных пчел И Прикладная биохимия и микробиология, 2004 г., том 40, Xs 1, с. 42-46.

17. R.G. KhismatouUm, S.V. Nemtsev, O.U. Zueva and V.P, Varlamov Bees as a Potential Sources of Chitosan and Melanin // Веез for New Asia. Proceedings of the Seventh Asian Apicultuial Association Conference and Tenth BEENET Symposium and Technofora. University of the Philippines Los Banos.Ed, by Edwin N. Camaya & Cleofes R. Cervancia, 2004, ppJ59-360

18. C.D. Немцев Деацетилнрование хитина в гомогенных условиях // Прикладная биохимия и технология гидробионтоа. Труды ВНИРО, М.: Издательство ВНИРО, т.143,2004, с.59-68.

19. Быкова В.М„ Ежова Е.А., Немцев C.B. Некоторые аспекты использования хитина И хнтозапа в качестве флокулянтов. // Аграрная Россия, 2004, №5, с. 3031.

20. Быкова В.М., Ежова П.А., Немцев СВ., Григореико 11Б, Консервирующая композиционная смесь на основе высокомолекулярного полидисперсного хитозана и ее влияние на качество рыбных продуктов. // Аграрная Россия, 2004, №5, с Л-32.

21. Немцев C.B. Производство средств защиты растений на основе хитозана. // Аграрная Россия, 2004, №5, с. 32-34.

22. Бобрешова О .В., Бобылкнна ОЗ., Кулинцов ПЛ., Бобривская - ПА., Варламов В.П., Немцев C.B. Электропроводность водных растворов ннзкомолехуляраого хитозана. // Электрохимия, 2004, вып.40, №7, с.793 -797

23. Немцев C.B. Ферментативная переработка панцирсодержащнх отходов криля. // Рыбная промышленность, 2005, №2, стр37 — 41.

24. Nemteev S.V4 Bykova V.M^Gamzazade A.I., Rogojin S.V. Alkaline solutions of chittn. Deacetylation at homogenous conditions. Advances in chitin science, vot.Vni, ed. By HJïtTuszczyk, Martin G.Peter, A.Domard, HPospieszny. Printed by: ESUS. Poznan, Poland, 2005. pp.164-168.,

25. Франченко Б.С., Тамова М.Ю., Сорохоумов И.М., Вихорева Г.АЧ Ежова Е^А., Немцев C.B. Получение хитозана нз панциря речиых раков // Известия

41

высших учебных заведений. Пищевая технология, 5-6 (288-289), 2005, C.Ï25-126.

2ti. S.N. Kulikov, F.K. Alímova, N.Q. Zakharova, S.V. Nemtsev and Vi». VaHamov Biological Preparations with Different Mechanisms of Action for Protecting Potato against Fungal Diseases // Applied Biochemistry and Microbiology, 2006,vol.42, No.l, pp.77-83.

Материалы:

27. Немцев C.B. Способы получения хитина н хдтоэанаУ/Совершенствование производства хитина и хнтозана из панцирьсодержащих отходов криля и пути их использования. Материалы Третьей Всесоюзной конференции. - М.: ВНИРО, 1992 г. - с.7-15.

2S. Султанов 3.3., Степанова Э.Д., Меджидов ММ., Какулина ЕА., Кулакова Л.С., Гамзазаде АЛ, Быков BJL, Быкова В.М., Немцев С. В. Комплексная переработка панцирьсодержащих отходов хрипя.// Совершенствование производства хитина н хнтозана из панцирьсодержащих отходов криля н путн их использования. Материалы Третьей Всесоюзной конференции. - М.: ВНИГО, 1992г.-с.18-19,

29. Немцев C.B., Али Сален Омер Технологические особенности хитиновых пластин головоногих моллюсков. //Технологах переработки гндробиоитов. Материалы Международной конференции. - М.: В НПРО, 1994 г. -с. 125 -127. ЭФ. Немцев C.B., Божко B.C. Промышленное производство хнтозана из панциря каранакса охотоморских крабов. // Новые перспективы в исследовании хитина н хнтозана. Материалы пятой Международной конференции. - М.: Издательство ВНИРО, 1999 Г. - с. 51 - 52.

31. Васильева C.B., Глез В.М., Немцев C.B., Сушков И.В. Защитно-стимулирующее действие хнтозанового препарата "Нарцисс" иа картофеле. // Новые перспективы в исследованнл хитина и хнтозана. Материалы пятой Международной конференции,—М.: Издательство ВНИРО, 1999 г.—с. 83.

32. Метлищшй О.З., Романченко Т.Н., Зейналов A.C.. Корнацкая Г.А., Приходы«) ДЛ., Удринцова И.А., Немцев C.B. К оценке хнтозана для защиты

46

садов и ягодников от вредителей и болезней. // Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана. Материалы пятой Международной конференции. -М.: ИздательствоВНИРО, 1999 г.-с. 90 - 92.

33. Локтионов Е.Б., Филатов В Л, Иванов ОА., Сушков И.В., Немцев СЛ. Применение сорбентов на основе хитин-белкового комплекса в устройствах для перевозки я хранения живой рыбы. // Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана. Материалы пятой Международной конференции. — М.: Издательство ВНИРО, 1999 г. -С. 158 - 160.

34. Филатов В. И., Богданова АЛ, Слепнев В А., Сушков И. В., Немцев C.B. Адсорбционная емкость препаратов хитозан-белкового комплекса в отношении метаболитов рыб. // Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана. Материалы пятой Международной конференции. — М.: Издательство ВНИРО, 1999 г, — с. 201- 205.

35. Вихорева ГЛ., Варламов ВЛ, Немцев СВ., Сафронова Т.М., Игнатюк JLH., Ким Г.Н., Максимова СЛ. Органолептическне свойства производных хитина различного строения. // Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана. Материалы пятой Международной конференции. - М,: Издательство ВНИРО, 1999 г. — с. 219 — 222.

36. Немцев C.B., Ильина A.B., Албулов АЛ., Шинхарев С.М., Комаров Б.А., Варламов В.П. Медицинское применение хитина и хитозана. // Фитотерапия, лазеротерапия, биологически активные вещества естественного происхождения (БАВЕП) и XXI в. Материалы научной конференции. — Черноголовка: Редакционно-издательскиЙ отдел ИПХФ РАН, 2000 г. - с. 90-94.

37. Варламов В.П., Ильина A3., Лопатин С.А., Банникова Г iL, Немцев C.B. Ферменты в биотехнологических процессах. // Ферменты микроорганизмов. ХП Юбилейная конференция. Сборник докладов. - Казань: Казанский государственный университет, 2001 г. - с. 54*56.

38. С.М. Шинкарев, АЛ Албулов, Ю.Д. Фролов, C.B. Немцев, В.П. Варламов, £3. Зацерковная, ПЛ>. Ершов Получение низкомолекулярного хитозанаУ/ Сборник докладов международной конференции молодых ученых «Научные

основы производства ветеринарных биологических препаратов»: ВНИИТТШП, г. Щелково, 2001.-с. 169-174.

39. АЛ Албулов, АЛ. Самуйленко, В Л. Варламов, СЛ. Немцев, ВМ. Быкова,

A.М. Трунов Некоторые аспекты промышленного выпуска н применения хитозана я его производных. // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана. Материалы шестой Международной конференции. - М.; Издательство ВНИРО, 2001, с. 9-11,

40. СЛ. Немцев, OJO. Зуева, РТ. Хисматуллин, MJ*. Хисматуллин, В.В. Лариков, В.П. Варламов Пчела как потенциальный источник хитозана. // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана. Материалы шестой Международной конференции. — М.: Издательство ВНИРО, 2001, с. 39-42.

41. В.И. Кашин, Ф.Я. Поликарпова, A.A. Борисова, К.Г. Скрябин, СЛ. Немцев,

B.П. Варламов Оценка эффективности лактата хитозана при размножении садовых растений зелеными черенками. // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана. Материалы шестой Международной конференции. — М.; Издательство ВНИРО, 2001, с. 82 - 84.

42. C.B. Немцев, ИД. Авдиеако, В Л. Варламов, К.Г. Скрябин Росторегулирующее действие низкомолекулярного хитозана. // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана. Материалы шестой Международной конференции. - М.: Издательство ВНИРО, 2001, с. 94 - 97.

43. ОЛ. Озерецковская, Н.И. Васгакова, Б.А. Переход, Г.И. Чаленко, В.М. Глёз, A.B. Ильина, C.B. Немцев, В.П. Варламов, К.Г. Скрябин Новый препарат "АгроХит" на основе низкомолекулярного хитозана против фитофтороза картофеля. // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана. Материалы шестой Международной конференции. - М.; Издательство ВНИРО, 2001, с. 97 -103.

44. Н.И. Большаков, A.A. Пряходько, Е.Ю. Куклин, СМ. Насибов, В.П. Варламов, СЛ. Немцев Прикладные медицинские аспекты применения гелевых форм хитозана (сообщение 1). // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана. Материалы шестой Международной конференции. - М.: Издательство ВНИРО, 2001, с. 132 -135.

48

45. Н.И. Большаков, Е.В. Чуян, CJvî. Насибов, В Л, Варламов, СВ. Немцев Прикладные медицинские аспекты применения гслевых форм хитооаиа (сообщение 2). Ü Новые достижения в исследовании хитина и хитозана. Материалы шестой Международной конференции. — М.: Издательство ВНИРО,

2001, с. 136- 139.

46. С.А. Лопатин, C.B. Немцев, В.П. Варламов Новый колориметрический метод определения хитозана. // Новые достижении в исследовании хитина и хитозана. Материалы шестой Международной конференции. - М.: Издательство ВНИРО, 2001, с. 298 - 299.

47. Авдиенко ИД, Суркова ТЛ, Минина И.С, Немцев C.B., Варламов В Л. Совместное применение препарата «АгроХит» и бактерии - антагониста Bacillus subtilis против ф иго патогенов укропа при гидропонном выращивании. // Научные материалы Первой Всероссийской конференции по иммунитету растений к болезням и вредителям. С-Пб.: ВИЗР, 2002, с.246.

43. C.B. Немцев, ОЛ. Озерецковская, В Л. Варламов, КХ. Скрябин Ростостимуляци я и индукция болезнеустойчивости растений низхомолекулярным водорастворимым хитозаном. // Научные материалы Первой Всероссийской конференции по иммунитету растений к болезням и вредителям. С-Пб.: ВИЗР, 2002, с.148.

49. Романеико H .Д., Попов И.О., Немцев C.B., Варламов В.П., Авдиенко ИД., Корсак ИЗ., Сумин НА., Тукачев НЛ. Эффективность применения бактерий' антагонистов и препаратов-элиситоров по моркови и картофелю в промышленных условиях. // Научные материалы Первой Всероссийской конференции по иммунитету растений к болезням и вредителям. С-Пб.: ВИЗР,

2002, с. 150,

50. C.B. Немцев, В.П. Варламов, И.Д. Авдиенко, К.Г. Скрябин Низкомолекулярный водорастворимый хитозан, как эффективный стимулятор роста и индуктор болезнеустойчивости растений. // Материалы 1-го Международного конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития» - М.: ЗАО «ПИК «Максима», РХТУ им. ДЛ. Менделеева, 2002 г., С. 146.

51. О.Ю. Зуева, C.B. Немцев, В.П. Варламов, М.Р. Хисматуллин, Р.Г. Хисматуллин, АЛ Албулов Получение хитозана из пчел. // Материалы 1-го Международного конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития» - М.: ЗАО «ПИК «Максима», РХТУ им. Д.И. Менделеева, 2002 г., С.390.

52. Зуева OJO., Ильина АЛ., Немцев СВ., Варламов В Л. Водорастворимые формы хитина. // Качество и безопасность продовольственного сырья и продуктов питания. Сборник докладов Всероссийской научно-технической конференции-выставки с международным участием. М.: МГУПД 2002 г., С 2122.

53. V.P. Varlamov, S.V. Nemtsev, O.Yu. Zueva, МЛ. KhismatuUm, R.G. Khismatullin and A.I. Aibulov, Production of Chitin and Chitosan from Bees. //Advances tn Chitin Science. Proceedings of the 5-th Asia Pacific Chitin and Chitosan Symposium. Ed. By K. Suchiva, S. Cfiandrkrachang, P. Methacanon and M.G. Peter, Thailand, Bangkok: MTEC, 2002, pp.22-24.

54. Немцев СВ., Зуева О.Ю., Исмаилов BJL, Варламов В Л. Кутикула жуков станет новым источником хитина и хятозана. // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана. Материалы Седьмой Международной конференции, М.: Издательство ВНИРО, 2003г., С.36-38.

55. Куликов СЛ., Алимова Ф.К., Захарова Н.Г., Немцев C.B., Варламов ВЛ. Препараты «АгроХит»® и «Триходермин» против болезней картофеля. // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана. Материалы Седьмой Международной конференции, М.: Издательство ВНИРО, 2003г., С.86-91.

56. Мыльников Н.М., Мороховец В.Н., Яковец В.П., Малахова Н.М., Немцев СВ., Варламов ВЛ Влияние препарата «АгроХита на заболеваемость и урожайность ячменя и пшеницы в Приморском крае. // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана Материалы Седьмой Международной конференции, М.: Издательство ВНИРО, 2003г., С.97-99.

57. Поликарпова ФЛ., Павлова AJO., Борисова АА., Немцев C.B., Варламов ВЛ. Влияние лактата хитозана на индукцию ризогенеза у стеблевых черенков

50

садовых культур. // Современные перспективы в исследовании хитина и хнтозана. Материалы Седьмой Международной конференции, М.: Издательство ВНИРО, 2003г„ С. 108-111.

58. Бобрешова ОЗ., Кулинцов П.И., Варламов В.П., Немцев С.В. Электрода алнзяая очистка низкомолекулярного хитозана от минеральных примесей. // Современные перспективы в исследовании хитина и хнтозана. Материалы Седьмой Международной конференции, М.: Издательство ВНИРО, 2003г., С .279-282.

59. Зуева О.Ю, Немцев С.В., Ильина A3., Хисматуллин РХ., Хисматуллин М.Р., Варламов В.П. Ферментативный гидролиз пчелиного хитозана. // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана. Материалы Седьмой Международной конференции, М.: Издательство ВНИРО, 2003г., CJ90-395.

60. Sergey V. Nemtsev, Alia Il'ina, Vaiery P. Varlamov, Olga L. Ozeretskovskaya,

• " - ' " v ^

Natafya I. Vasyukova and Konstantin C. Skryabm. Stimulation of plant growth and induction of potato resistance to diseases by low molecular weight chitosan. // Summaries of ХП Conference of the Section for Biological Control of Plant Diseases Polish Phitopathological Society "Chitosan and Other Natural Compounds in the Control of Plant Diseases". Ed. By Leszek B. Otlikowsfci and Czeslaw Skrzypczak, Skiemiewice, Poland: Research Institute of Pomology and Floriculture, 2003, p. 19.

61. Албулов А.И., Самуйленко АЛ., Еремец В.И., Фролова М.А., Шинкарев С.М., Фоменко А.С., Авдненко ИД, Герасименко Д.В., Немцев СВ., Варламов В.П. Перспективы применения низкомолекулярных хитозанов в производстве Б АД. // Фитотерапия, биологически активные вещества естественного происхождения. Материалы Пятой Международной конференции. Черноголовка: 1ШХФ РАН, 2003, С.312-317.

62. В.П. Варламов, С.В. Немцев, АЛ Албулов, К.Г. Скрябин Стимуляция роста и индукция болезнеустойчивости растений препаратом АгроХит на основе низкомолекулярного хитозана. // Материалы докладов международной научно-практической конференции «Биологическая защита растений — основа

стабилизации агроэкоеистем», Краснодар; ВНИИБЗР РАСХН, 2004, С. 180-181.

«

63. Е.А.Ежова, O.A. Седова, В .M, Быкова, C.B. Немцев Разработка технологии защитного средства для кожи рук на основе хитозана, // Материалы международной научно-практической конференции молодых ученых «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково: ВНИИТИ БП, 2004, с. 128-132.

64. Албулов А.И., Шиикарев С.М., Фролова МЛ., Кузнецов ПЛ., Гринь A.B., Варламов ВН., Ильина A.B., Немцев C.B. Получение низкомолекулярного хитозана методом ферментативного гидролиза. // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов. Материалы международной научно-практической конференции. Щелково: ВНИИТИ БП, 2005, С.430—435.

65. Быкова B.M.J Ежова Е.А., Немцев СЛ., Албулов А.И., Гринь AJ3. Разработка технологии получения биологически активных препаратов на основе пищевого хитозана. // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов. Материалы международной научно-практической конференции. Щелково: ВНИИТИ БП, 2005, с.450 - 455.

66. Немцев C.B. Возможность использования хитозана для очистки питьевой воды. // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов. Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 35-летию института ВНИИТИ биологической промышленности. Щелково: ВНИИТИ БП, 2005, с.498 - 502.

67. Албулов А,И., Варламов В.П., Немцев C.B. Разработка и производство биопрепаратов на основе морепродуктов. Материалы Второй Международной научно-практической конференции Морские прибрежные экосистемы: водоросли, беспозвоночные и продукты их переработки», М.: Издательство ВНИРО, 2005, с.245-247

68. Немцев C.B., Быкова В.М., Панов К.Н. Измельчение хитозана для производства биологически активных препаратов. Материалы Второй Международной научно-практической конференции Морские прибрежные экосистемы: водоросли, беспозвоночные и продукты их переработки», М.: Издательство ВНИРО, 2005, с.332-335.

si

Авторские свидетельства и патенты:

69. Рогожин СЛ., Лозинский В.И., Вэйнерман Е.С., Кулакова В.К., Гамзазаде А.И., Быкова В.М., Немцев C.B., Лобова Е.И. Способ получения хитозана. Авторское свидетельство СССР № 1363831, 1986, Б.И. 1986, №48, С. 282 .

70. Рогожин C.B., Вайнерман B.C., Гамзазаде АЛ., Быков В.П., Быкова В.М., Немцев СВ., Меджидов М.М., Султанов 3.3., Степанова Э.Д, Способ переработки панцирьсодержащнх отходов ракообразных. " Авторское свидетельство СССР № 1587678, 1988.

71. Быков В.П., Быкова В.М., Сафронова Т.М., Кривошеииа Л.И., Немцев С,В., Недосекова Т.М., Новиков A.B., Ермишева ОЗ., Кадыров З.К., Сныткин ИЛ. Способ переработки мелких ракообразных с получением хитозана. Патент РФ Jfc 2000066,1992.

72. Быкова BJVÎ-, Варламов В.П., Григоренко И.Б., Кривошеииа Л.И., Кобзева Н.С., Немцев C.B., Никитин А.М., Албулов А.И., Ильина AB. Способ консервирования икры рыб. Патент РФ на изобретение № 2170022, 2001, БЛ. № 19,2001.

73. Варламов В.П., Ильина A.B., Банникова PJE., Немцев C.B., Ильин Л.А., Чертков К.С., Андрианова И.Е., Платонов Ю.В., Скрябин К.Г. Способ получения низкомолекулярного хитозана для противолучевых препаратов. Патент РФ №2188829,2000, Б Л. J& 25,2002г.

74. Быкова В.М., Григоренко ИХ., Ежова Е.А., Зитев ИЗ., Исаев E.H., Кобзева Н.С., Кривошеииа Л.И., Немцев C.B. Композиция для консервирования рыбных продуктов. Пат. РФ 2277339,2004, опубл. Бюл.№16,2006.

Or автора

Автор выражает глубокую благодарность научному консультанту доктору химических наук, профессору В.П. Варламову за внимательное отношение и помощь, оказанную при подготовке работы.

Автор глубоко признателен руководству ВНИРО, директору к .т.н. Б.Н Котеневу и зам. директора д.т.н. JI.C. Абрамовой за предоставленную возможность написания и оформления диссертации, а также всем членам технологической секции Ученого совета ВНИРО за конструктивное и благожелательное ее обсуждение.

Искреннюю благодарность автор выражает тем, кто заинтересованно способствовал написанию диссертации, а также всем, кто был при частей к выполнению настоящих исследований н поддерживал их: доктору технических наук В Л. Быкову, кандидату технических наук В.М. Быковой, доктору химических наук А.И. Гамзазаде, кандидату технических наук Л. И. Кривошеивой, кандидату технических наук JI.K. Поляковой, кандидату' химических наук A.B. Ильиной, кандидату химических наук С.А. Лопатину, доктору биологических наук А.И. Албулову, кандидату биологических наук С.М. Шинкареву.

Искреннюю признательность автор выражает всем, кто участвовал в производственной проверке и практической реализации результатов исследований — д.б.н., профессору МЛІ. Меджидову и к.б.н. 3.3. Султанову (НПО «Питательные среда», г. Махачкала), В.Н. Чи кину и И.В. Сушхову (ЗАО «Восток-МДГ»), B.C. Божко (ЗАО «Восток-Бор»),

я

¿Г

л.

Подп. в печать 0&. 0& ОбьемД ¿£п.я. ТиражЗаказ £ 8НИРО. 107140, Москва, В. Красносельская, 17