автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.04, диссертация на тему:Обоснование и разработка технологии пищевого хитозана и препаратов на его основе

На правах рукописи

ЕЖОВА ЕЛЕНА АНАТОЛЬЕВНА

ОБОСНОВАНИЕ И РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПИЩЕВОГО ХИТОЗАНА И ПРЕПАРАТОВ НА ЕГО ОСНОВЕ

Специальность 05.18.04 - технология мясных, молочных, рыбных продуктов и холодильных производств

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени

Москва - 2005

Работа выполнена в Федеральном государственном унитарном предприятии «Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии»

Научный руководитель:

кандидат технических наук, старший научный сотрудник

Быкова

Владимира

Максовна

Официальные оппоненты: доктор химических наук,

профессор

Варламов Валерий Петрович

доктор технических наук, старший научный сотрудник

Юдина Светлана Борисовна

Ведущая организация:

Федеральное государственное унитарное предприятие «Гипрорыбфлот»

Защита состоится «23» сентября 2005г в 1400 часов на заседании диссертационного Совета Д 307.004.03 при ФГУП «Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии» (ВНИРО) по адресу: 107140 г. Москва, ул. В. Красносельская, 17

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИРО. Автореферат разослан « /{?» сЛ)ЬЦ?Х01 2005г.

т

Ученый секретарь диссертационного Совета, кандидат технических наук ^ """ E.H. Харенко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время во всем мире отмечается возросший интерес специалистов к полисахаридам природного происхождения, а именно хитину и хитозану. Это связано с биологическими свойствами данных полисахаридов, а также с наличием богатой сырьевой базы.

Основным сырьем для получения хитина является панцирь промысловых ракообразных. Рыбная отрасль России располагает значительной базой панцирьсодержащего сырья. Вылов краба в 2004 составил около 30 тыс. т. Панцирь, являющийся побочным продуктом переработки ракообразных, составляет до 40% их массы, что позволяет организовать промышленное производство хитина и его производных.

Комплексное использование гидробионтов, предполагающее получение пищевых продуктов, ферментов, биологически активных веществ и природного высокомолекулярного полисахарида хитозана имеет большое народнохозяйственное значение в плане повышения эффективности использования сырьевых ресурсов.

В разработку научных и практических основ химии и технологии хитина/хитозана внесли большой вклад отечественные и зарубежные ученые: Плиско Е.А., Нудьга J1.A., Быкова В.М., Гамзазаде А.И., Сафронова Т.М., Вихорева Г.А., Маслова Г.В., Варламов В.П., Кривошеина Л.И., Немцев C.B., Феофилова Е.П., Muzzarelli R.A.A., Hirano и многие другие.

На сегодняшний день известно около 100 направлений практического использования хитина /хитозана, наиболее важными из которых признаны пищевая промышленность, медицина, косметика, сельское хозяйство, ветеринария, биотехнология и экология.

Значительная допя рынка потребления хитозана формируется в направлении его использования в здравоохранении и профилактической медицине.

Высокоэффективным путем решения проблемы поддержания здорового образа жизни населения является широкое применение биологически активных добавок (БАД) - концентратов натуральных или идентичных натуральным биологически активных веществ, предназначенных для непосредственного приема или введения в состав пищевых продуктов (Тутельян, 1996).

Использование хитозана для производства биологически активных препаратов обусловлено целым рядом его уникальных свойств. Прежде всего это сорбционные, липотропные, иммуномодулирующие,

регенерирующие, бактериостатические свойства.

В свою очередь, высокая биологическая активность хитозана по отношению к сорбции тяжелых металлов, холестерина, радионуклидов и различных токсинов зависит не только от природы данного биополимера, но и от способа его получения.

Существующие различные технологии получения хитозана связаны, в основном, с применением высоких температур и концентраций щелочей, что оказывает существенное влияние на степень деструкции полисахарида.

В этой связи представляются актуальными исследования, направленные на разработку технологии пищевого хитозана, обеспечивающей сохранение в процессе получения природных свойств биополимера, а также создание на его основе биологически активных препаратов.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является обоснование и разработка технологии пищевого хитозана и препаратов на его основе определенной направленности.

Для реализации цели были поставлены и решены следующие задачи- научно обосновать параметры технологического процесса получения пищевого хитозана с заданными свойствами;

- разработать рациональные параметры депротеинирования и деминерализации различных видов панцирьсодержащего сырья;

- исследовать и обосновать кратность этапов депротеинирования и деминерализации панциря краба и креветки;

- изучить качественные характеристики хитина, получаемого из панциря краба и креветки;

- исследовать и обосновать параметры активации хитина из панциря краба и креветки;

- изучить влияние температуры деацетилирования хитина на степень деструкции получаемого хитозана;

- установить зависимость молекулярной массы и вязкостных характеристик хитозана от продолжительности реакции деацетилирования;

- изучить влияние способа деацетилирования хитина на степень кристалличности получаемого хитозана;

- провести токсикологические исследования хитозана, полученного модифицированным способом;

- разработать технологию новых биологически активных препаратов на основе пищевого хитозана;

- модифицировать колориметрический метод определения содержания хитозана в пищевых продуктах и препаратах на его основе.

Научная новизна работы. Впервые разработана принципиально новая ресурсосберегающая технология пищевого хитозана, обеспечивающая сохранение в максимальной степени структуры биополимера, его высокую биологическую активность и сокращение расхода реагентов и энергоносителей.

Научно обоснованы параметры процессов депротеинирования (ДП), деминерализации (ДМ) в зависимости от вида сырья. Выявлена необходимость 2-х стадийного проведения процессов ДП и ДМ панциря краба, обеспечивающего максимальное удаление белковой и минеральной его составляющей.

Установлены закономерности влияния температуры и концентрации гидроокиси натрия на скорость и глубину реакции деацетилирования (ДА) хитина.

Выявлена взаимосвязь степени кристалличности хитина и способа его деацетилирования.

Показана зависимость молекулярной массы и сорбционной емкости хитозана от способа деацетилирования хитина.

На основе токсикологических исследований показана возможность использования пищевого хитозана предложенного способа получения для производства биологически активных добавок «Хитан» и «Полихит», научная новизна которых подтверждена патентами РФ.

Практическая значимость работы. Разработана и утверждена нормативная документация: ТУ 9289 - 067 - 00472124 - 03 и ТИ, Изменения к ТИ «Хитозан пищевой»; ТУ 9289 - 002 - 00472124 - 03 и ТИ «Биологически активная добавка к пище «Хитан», ТУ 9289 - 005 - 00038155 - 01 и ТИ «Биологически активная добавка к пище «Полихит», методические указания «Методы определения содержания хитозана в пищевых продуктах и препаратах на его основе».

Разработанные технологии апробированы при выработке, опытных партий пищевого хитозана и биологически активных препаратов «Хитан» и «Полихит» на экспериментальном участке ВНИРО и ЗАО «Биопрогресс».

Основные положения, выносимые на защиту:

- рационализация процесса депротеинирования и деминерализации различных видов панцирьсодержащего сырья;

- технологические приемы и режимы поэтапного процесса деацетилирования;

- научное обоснование технологии пищевого хитозана;

- результаты исследования биологически активных препаратов на основе пищевого хитозана.

Апробации работы. Основные положения диссертационной работы представлены на VI Международной конференции «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана» (Москва-Щелково, 2001); VII Международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана» (Санкт-Петербург - Репино,2003); 5lh International Conference of the European Chitin Society (Norway, Trondhaim, 2002); 6lh International Conference of the European Chitin Society ( Poznan, 2004).

Публикации. Основные результаты исследований представлены в 14 публикациях и защищены двумя патентами РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, четырех глав, выводов, списка литературы и шести приложений. Работа изложена на 127 страницах основного текста, содержит 19 табл., 28 рис. Список литературы включает 138 наименований работ отечественных и зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Введение. Обоснована актуальность темы диссертации, сформулированы цель, задачи исследований, научная новизна и практическая значимость работы.

Глава 1 «Обзор литературы»

Представлен анализ современного состояния научной, технической и патентной литературы по строению, свойствам хитина и хитозана, их получению и использованию в различных отраслях хозяйства и медицине. Приведены достоинства и недостатки существующих способов получения хитина и хитозана. Анализ современного состояния проблемы послужил основанием для формулирования цели и задач настоящей работы.

Глава 2 «Объекты и методы исследований»

Методический подход к аналитическим и экспериментальным исследованиям представлен на рис.1.

Основными объектами исследований при выполнении экспериментальной части работы служили крабовая крупка сушеная,

панцирь креветки сушеный и хитин, полученный из панциря дальневосточных крабов.

Рис. 1. Схема проведения исследований

Химический состав используемого в работе хитинсодержащего сырья представлен в табл. 1

Таблица 1

Химический состав хитинсодержащего сырья

Вид сырья Содержание влаги, % Содержание, % на сухое вещество

Азотистые в-ва Липиды Минеральные в-ва Хитин

Панцирь креветки атлантической сушеный 9-10 30-37 10-12 23-30 10-20

Крабовая крупка 8-10 19-24 2-4 26-35 24-30

Хитин 4-8 6,1* - 0,1-0,4 -

*- содержание общего азота, Ыобш.

Хранили все указанные образцы при температуре 20-22°С, относительной влажности воздуха 75% в течение не более 12 месяцев.

В работе использовали как общепринятые и стандартные методы исследования, так и специфичные для данной тематики, некоторые из которых нами модифицированы.

Отбор проб для исследований проводили в соответствии с требованиями ГОСТ 8756.0-70. Содержание воды, минеральных веществ, общего азота определяли по ГОСТ 7636-85.

Количественное определение хитозана проводили колориметрическим методом (Muzzarelli R.A.A., 1998).

Степень деацетилирования (СДА) определяли кондуктометрическим титрованием и колориметрическим методом (Глазунов, 1999).

Динамическую вязкость растворов хитозана измеряли на приборе Viscotester VT-40 фирмы "Rion" Япония.

Определение молекулярной массы (ММ) проводили вискозиметрическим методом на вискозиметре Убеллоде с использованием уравнения Марка-Куна (Скляр, 1981).

Структуру хитина и хитозана изучали рентгенографическим методом на дифрактометре «Дрон-3» и спектроскопическим - на спектрометре Bio -RAD FTS -40 Гинье, 1961; Miya, 1979).

Определение токсичности хитозана проводили по методу Кербера путем непосредственного введения водной суспензии хитозана в желудок нелинейных белых мышей.

Адсорбцию тяжелых металлов (никеля) хитозаном определяли комплексонометрическим тированием (Перетрухин, 1993).

Эксперименты проводили в трехкратной повторности.

Математическую обработку экспериментального материала проводили на уровне требований надежности с вероятностью Р>0,95 (Ляликов, 1974). Для построения графических зависимостей использовали стандартные программы Windows 2000, Exel 2000.

Глава 3 «Результаты исследований и их обсуждение»

Разработка технологии пищевого хитозана.

В разделе 3.1 представлены результаты исследований по выбору и обоснованию рациональных параметров процессов депротеинирования (ДП) и деминерализации (ДМ) панциря ракообразных.

Концентрацию гидроокиси натрия, продолжительность ДП, соотношение панциря и раствора гидроокиси натрия изменяли в зависимости от вида сырья.

Данные, представленные на рис. 2, свидетельствуют о том, что для панциря креветки необходимо применять 2-4% растворы, для панциря краба -4-6%.

30 Т

3 4

Концентрация МаОН,%

Рис.2. Зависимость остаточного содержание азотистых веществ в хитине от концентрации раствора ИаОН при обработке крабовой крупки (1), панциря креветки (2)

Результаты исследований по влиянию температуры и продолжительности реакции ДП показали, что температурный оптимум обработки крабовой крупки составляет 90°С при продолжительности процесса 130-150 мин. Зависимость степени ДП панциря креветки от температуры и времени носит аналогичный характер, но характеризуется более низкими численными значениями.

При этом выявлено, что однократная щелочная обработка крабовой крупки не обеспечивает полного удаления белковой фракции, в связи с чем необходимо повторное ДП (табл. 2).

ДМ панциря проводили растворами соляной кислоты различной концентрации при комнатной температуре (20-22°С).

Таблица 2

Наименование сырья Стадия Концентрация гидроокис и натрия, % Продолжительность реакции, мин Температура проведения реакции, °С Соотношение сырья и р-ра ЫаОН Остаточное содержание азотистых в-в*.%

Крабовая крупка сушеная I 4-6 130-150 90 1: (7-8) 5,0

II 4-6 90-100 70 1 : (6-7) 1,0

Панцирь креветки сушеный I 2-4 90-120 60 1: (5-6) 1,0

* - без учета азота хитина

Установлено влияние концентрации НС1 и продолжительности

процесса на остаточное содержание минеральных веществ (рис. 3, 4).

Рис. 3. Зависимость остаточного содержания минеральных веществ от концентрации НС1 при деминерализации депротеи-нированной крабовой крупки (1), депротеинирован-ного панциря креветки (2).

3 4 5 Концентрация НС1,%

Время, мин

Рис.4. Зависимость степени деминерализации панциря креветки (1) и крабовой крупки (2) от продолжительности процесса

Наиболее эффективно использовать 2-4% растворы соляной кислоты для панциря креветки и 4-6% - для крабовой крупки, при этом для крабовой крупки необходима повторная стадия ДМ для достижения остаточного содержания минеральных веществ менее 1% (табл. 3).

Таблица 3

Режимы процесса деминерализации для различных видов сырья

Вид Стадия Концен- Соотноше- Продолжи- Остаточное

сырья трация ние тельность содержание

НС1, % панциря и НС1 деминерализации, мин. минеральных веществ, %

Депротеиниро-ванная крабовая I 4-6 1: (6-7) 120-140 3,5

крупка II 4-6 1: 6 60-80 0,4

Депротеиниро-ванный панцирь I 2-4 1 = (5-6) 90-110 0,2

креветки

Характеристика образцов хитина по основным показателям представлена в табл.4.

Таблица 4

Характеристика хитина, полученного из разных видов сырья

Вид Содержание, %

сырья влаги общего азота, золы,

на сух.в-во на сух.в-во

Хитин из креветки 7,5-7,8 6,1-6,4 0,1-0,3

Хитин из краба 9,8-10,0 6,7-6,9 0,2-0,4

В разделе 3.2 приведен анализ результатов по выбору и обоснованию рациональных параметров деацетилирования (ДА) различными способами. Известно, что хитину, как полимеру, присуща структурная неоднородность, т.е. наличие кристаллических и аморфных областей. ДА в первую очередь протекает в аморфных областях полимера, при этом скорость реакции высокая. Дальнейшее развитие реакции замедляется из-за малой доступности гидролизуемых ацетамидных групп в кристаллических областях полимера.

Для увеличения скорости протекания реакции и достижения высокой степени ДА применяются высокие температуры обработки.

Рис. 5. Зависимость степени ДА от температуры и продолжительности обработки хитина 1 -Т=130°С; 2-Т= 110°С; 3 - Т=105°С

0 60 Время, мин 120 180

Зависимость степени ДА от температуры и продолжительности обработки хитина, представленная на рис. 5, свидетельствует о том, что достижение высокой степени ДА (выше 90%) возможно при повышении температуры обработки хитина до 130°С.

Однако для использования хитозана при производстве пищевой продукции и БАД достаточно проводить ДА хитина до содержания свободных аминогрупп в пределах 80-85%, что позволяет снизить температуру до 105-110°С.

Вместе с тем, температура, также как и продолжительность процесса ДА, зависит от вида используемого сырья (рис. 6).

Рис. 6. Зависимость степени ДА от продолжительности процесса обработки хитина креветки (1), краба (2)

30

60 90 Время, мин

120

150

Длительное воздействие гидроокиси натрия при высоких температурах приводит к разрыву молекулярной цепи полимера по гликозидным связям

(деструкции хитозаиа) и, как следствие, снижению молекулярной массы, сорбционной емкости, вязкости его растворов.

Учитывая изложенное, проведены исследования по разработке способа ДА хитина, обеспечивающего получение хитозана с высокой молекулярной массой и низкой степенью деструкции. В этой связи, изучена возможность проведения процесса деацетилирования в условиях умеренных температур 20-22°С.

Результаты экспериментов, приведенные на рис. 7, показали возможность достижения степени ДА на уровне 82-85% по истечении 18-21 сут. для краба, 15-17 сут - для креветки. Эти данные подтверждаются характеристиками получаемого хитозана (рис. 8).

Рис. 7. Зависимость степени ДА от продолжительности выдержки суспензии 1 - краб; 2- креветка

.100

ВС в 80 -

X

X и а о 60 -

с о.

р и X ч 40 -

3 20 -

О 3

6 9 12 15 18 21 24 27 30 Продолжительность, сут

Снижение вязкости растворов хитозана после указанных сроков (рис.8), по-видимому, обусловлено деструкционными процессами, которые становятся четко выраженными по мере окончания реакции деацетилирования.

6 9 12 15 18 21 24 27 30 Продолжительность, сут

Рис. 8. Зависимость вязкости хитозана от продолжительности ДА хитина краба (1), креветки (2)

Вместе с тем, длительность осуществления процесса ограничивает возможности его практической реализации.

Осуществлена попытка модификации указанного способа в части сокращения продолжительности процесса, уменьшения расхода гидроокиси натрия при условии сохранения высоких качественных характеристик получаемого полимера.

Исследования по модифицированию процесса ДА хитина проводили, разделяя его на два этапа: предварительную активацию при температуре 20-22°С и ДА при повышенных температурах.

Результаты исследований, представленные на рис.9, показывают, что наиболее интенсивное увеличение степени ДА происходит в первые 6-7 сут, после чего процесс накопления свободных аминогрупп значительно замедляется. Степень ДА растет пропорционально повышению концентрации щелочи.

Рис. 9. Зависимость степени ДА от продолжительности процесса и концентрации щелочи

1 - 30%№ОН;

2 - 40% ЫаОН;

3 - 50%№ОН

0 3 Л 9 12 15 18 21 24

Продолжительность, сут

На основании полученных данных для проведения процесса активации и ДА хшина предпочти!елыю использовать 40%-ные растворы щелочи.

Одновременно проведенными исследованиями показана возможность сокращения расхода щелочи в процессе ДА хитина до соотношения хитин-раствор щелочи 1:7 при условии сохранения высокого уровня степени ДА (рис.10).

# 90 -г- -72-

< 75'

Ч 60 -

£ 45 -

ё 30

Р 15 " 0

82.

84

Рис. 10. Зависимость

степени ДА от соотношения хитин: раствор щелочи

1:05 1.07 1:10

Соотношение хитин: раствор щелочи

На втором этапе исследования процесса щелочного ДА хитина, представлялось необходимым изыскать возможность ускорения процесса ДА путем повышения температуры реакции и соответственно сокращения её продолжительности.

Рис. 11. Зависимость продолжительности процесса ДА от температуры

40 60 80 . 100 120

Температура, С ,

—Экспонента

Полученные экспериментальные данные (рис.11) позволяют определить зависимость продолжительности процесса ДА от температуры обработки, которая носит экстремальный характер.

Анализ обобщенных данных, приведенных в табл.5, указывает на целесообразность проведения щелочного ДА при температуре 60°С.

Таблица 5

Влияние температуры обработки на длительность процесса деацетилирования и величину молекулярной массы хитозана

Показатели Температура деацетили рования, °С

120 100 80 60 40

Длительность процесса, ч 1,0 1,0 1,5 2,0 36,0

Молекулярная масса хитозана, кДа 90 100 184 369 438

Подводя итоги исследованиям по выбору рациональных режимов процесса ДА хитина из панциря краба и креветки рекомендованы условия, приведенные в табл. 6.

Таблица 6

Режимы процесса деацетилирования различных видов сырья

Наименование Стадия Концентра- Температура Продолжи- Соотноше-

сырья ция раствора проведения тельность ние хитин:

ЫаОН, % реакции, °С реакции,ч р-р ЫаОН

Хитин краба I 40 20-22 168 1:7

И 40 60 2 1:7

Хитин креветки I 35 20-22 120 1:7

II 35 60 1,5 1:7

Технологическая схема получения пищевого хитозана модифицированным способом ДА на примере панциря краба представлена на рис. 12.

/ Крупка из панциря краба сушеная

ДепротбинироЗание в 2 стадии —4-6% р-р ЫаОН

Использованный р- р ЫаОН Подкрепле!ше р- ра ЫаОН

Центрифугирование Промывка Деминерализация в 2 стадии Центрифугирование

Промывка Активация хитина . - Разделение Суспензии

* Тепловая обрабо гка ▼

Промывка

-4-6% р-р НС1

40% р-р ЫаОН

Рис. 12.

Центриф^нрованне Сушка Изме^чение

Упаковка Маркировка Хранение

Технологическая схема получения пищевого хитозана

Сравнительная оценка качественных показателей хитозана, полученного различными способами представлена в табл.7.

Таблица 7

Качественные характеристики хитозана, полученного разными способами

Характеристики Деацетилирование

при высоких температурах (105-110°С) в условиях умеренных температур (20-22°С) Модифицированным способом

Степень ДА, % 85 79 82

Характеристическая вязкость [Л]. Дл/г 5,6 13,2 10,6

Молекулярная масса, кДа 195 460 369

рН 1%-ого водного раствора 7,4 7,5 7,3

Содержание минеральных в-в, % 0,1 0,1 0,1

Содержание азотистых в-в, % 0,1 0,1 0,1

Приведенные данные свидетельствуют о том, что характеристическая вязкость, ММ, степень ДА образцов хитозана, полученных в условиях умеренных температур и модифицированым способом выгодно отличаются от хитозана, полученного при высоких температурах.

Для хитозана, как и других полисахаридов, характерно наличие зависимости между однородностью его химической структуры, упорядочненностыо надмолекулярной структуры, степенью

кристалличности и реакционной способностью.

Посредством рентгеноструктурного анализа в Институте

элементоорганииескнх соединений им. А.П. Несмеянова РАН проведено определение степени кристалличности хитозана, влияющую на его реакционную способность (рис. 13).

Для дифрактограмм всех образцов хитозана характерно наличие широкого рефлекса при 20=20° и широкого плато в области 20=10-15°, что характерно для мапоупорядочненных структур с невысокой степенью кристалличности. Более четко выраженный максимум на дифрактограмме исходного хитина связан с большей степенью кристалличности.

Таким образом, реакция ДА хитина сопровождается снижением степени кристалличности получаемого хитозана.

50ОС

Х12

□

5

30

Рис. 13. Дифрактофаммы образцов хитозана и исходного хитина 1бх - исходный хитин; хитозан, полученный: XI 1 -при высоких температурах; XI2 - модифицированным способом; Х13 - в условиях умеренных температур

Исследования по определению адсорбции хитозаном катионов никеля из водных растворов, проведенные совместно с Институтом физической химиии и электрохимии им. А.Н. Фрумкина РАН и полученные при этом результаты свидетельствуют о предпочтительности пищевого хигозана модифицированного способа ДА (рис 14). Предельная величина адсорбции такого хитозана составляет 6,Зммоль/г, что значительно превышает эту же величину для хитозана, полученного ДА при высоких температурах (1ммоль/г)

о

Рис. 14. Изотермы адсорбции хтозана " хигозан модифицированного способа ДА ф хитозан, полученный ДА при высоких температурах

о

5 10 15 20 25 30

Равновесная концентрация, мг/мл

Исследования, проведенные совместно с ВНИТИБП по определению острой токсичности, показали, что пищевой хитозан, полученный модифицированным способом ДА, можно отнести к IV группе опасности веществ, т.е. практически нетоксичен. Это позволяет рекомендовать использовать его в составе пищевых продуктов и биологически активных добавок к пище.

Разработка технологии биологически активных препаратов па основе пищевого хнтозана

В разделе 3.3 представлены результаты исследований по разработке БАД «Хитан» на основе пищевого хитозана.

Наличие первичных аминогрупп в формуле хитозана обеспечивает связывание ионов тяжелых металлов и радионуклидов, а способность хитозана образовывать полиэлектролитные комплексы с анионными полимерами используется для связывания и выведения из организма различных токсинов.

При этом важны такие свойства хитозана, как сочетание безвредности

и биологической активности. Особое значение придается лппотропному

/

действию хнтозана, как важному фактору, способствующему противостоянию сердечно-сосудистым заболеваниям.

На основе пищевого хитозана, характеризующегося содержанием минеральных веществ в пределах 0,1-0,3%; нерастворимых веществ не более 0,1%; динамической вязкостью не выше 500сПз, степенью ДА - не менее 80%, получен первый препарат «Хитан», одобренный по результатам клинических испытаний Институтом питания АМН РФ и Минздравом РФ (рис. 15).

«Хитан» в капсулированном виде рекомендован для использования с профилактической целью при различных нарушениях обменных реакций в организме в количестве 1,5 г в сутки при месячном курсе его приема.

В разделе 3.4 приведены технологические параметры производства БАД «Полихит».

Капсулы

Банки полимерные

Хитозан пшиепой

Измельчение

Инспектирование

—>. Наполнени?капсул -

Укупор1шамме

Сортировка капсул t

_Расфасовка

Упаковка Маркировка Хранение

Рис. 15. Технологическая схема получения Б АД «Хитан»

Известно, что практически на всей территории России имеет место в той или иной степени выраженности дефицит по йоду. В среднем потребление йода в России составляет 40-80 мкг в день, при рекомендуемой адекватной норме потребления 120-150 мкг , то есть в 2-3 раза ниже адекватного уровня потребления.

При ограниченном поступлении йода в организм через продукты питания возникают различные патологии щитовидной железы, нарушаются функции других органов и систем.

Учитывая существующую проблему йододефицита, разработана технология БАД «Полихит», основу которой составляет пищевой хитозан с добавлением ламинарии японской, технологическая схема которой представлена на рис. 16.

Исходя из рекомендуемой Институтом питания РАМН суточной нормы потребления йода и с учетом возможности поступления данного микроэлемента в организм человека с другими продуктами питания, нами предложено ввесш в состав «Полнхита» 13% ламинарии японской (сухой).

По заключению Института питания «Полихит» рекомендован при заболеваниях желудочно-кишечного тракта, сердечно-сосудистой системы, щитовидной железы и недостатке йода в организме.

Предусмотрен выпуск препарата в капсулированном виде, в виде драже, таблеток и порошка.

Ламинария Хитозаи пищевой Лимонная кислота Сахар ♦ + --'--

Подготовка и измельчение смеси _р. ПОРОШОК

Раствор поливинил пнрролидона

Стеарат кальция —■—

Таблетированне 1

Сортировка таблеток

ТАБЛЕТКИ

->■ Гранулирование смеси *

Сушка гранул *

'Нанесение стеарата кальция на гранулы Формование основы драже

Увлажнение основы драже

Обсыпка драже *

Подсушка драже *

Сахарный сироп+декстрин

Углекислый магний + мука

Сглаживание и окрашивание драже -Сахарный сироп + дву-

Подсушивание драже У

Глянцевание драже У

Подсушка драже У

ДРАЖЕ 1

Расфасовка У

Упаковка *

Маркировка

Транспортирование, хранение Рис. 16. Технологическая схема получения Б АД «Полихит»

окись титана+краситель

Тальк + воск

Наполнение капсул У

Укупоривание V

КАПСУЛЫ

В главе 4 представлены данные по практической реализации результатов проведенного исследования в части разработки технологии пищевого хитозана, создания на его основе БАД и модификации метода определения содержания хитозана в различных препаратах на его основе и пищевых продуктах.

выводы

1. Научно обоснована и разработана технология пищевого хитозана, базирующаяся на рациональных параметрах депротеинирования и деминерализации панциря ракообразных, модификации процесса деацетилирования хитина, гарантирующих высокое качество и максимальное сохранение структуры полимера.

2. Установлена необходимость 2-х стадийных этапов депротеинирования и деминерализации панциря краба по сравнению с креветкой, обеспечивающих наличие остаточного содержания минеральных веществ в хитине в пределах 0,2-0,4%, азотистых веществ не более 0,1% (без учега азота хитина) в пересчете на сухое вещество.

3. Разработаны рациональные параметры деацетилирования хитина из панциря краба 40%-ным раствором гидроокиси натрия, включающие его предварительную активацию при температуре 20-22°С в течение 7 Суток и последующий щелочной гидролиз при температуре 60°С в течение 2ч, позволяющие получать пищевой хитозан с высокими качественными характеристиками (ММ - 369кДа, СДА - 82%, характеристическая вязкость - 10,6 дл/г).

4. Показана возможность сокращения продолжительности процесса активации хитина из панциря креветки до 5 суток и концентрации раствора гидроокиси натрия - до 35%, что связано со структурными особенностями панциря.

5. Результаты рептгеноструктурного анализа свидетельивуют об идентичности надмолекулярной структуры хитозана, полученного разными способами деацетилирования. Показано, чш реакция деацетилирования хитина сопровождается снижением степени кристалличности получаемого хитозана.

6. Изучена адсорбция тяжелых металлов пищевым хитозаном на примере катионов никеля. Показана большая сорбционная емкость хитозана модифицированного способа деацетилирования, предельная величина

сорбции которого составляет 6,Зммоль/г против 1,1 ммоль/г хитозана, полученного деацетилированием при высоких температурах.

7. Разработана технология биологически активной добавки к пище «Хитан» на основе пищевого хитозана, характеризующегося содержанием минеральных веществ в пределах 0,1-0,3%, нерастворимых веществ не более 0,1%, СДА - не менее 80%, динамической вязкостью 500сГГз.

8. Разработан технологический процесс получения БАД «Полихит», основными компонентами которой являются хитозан пищевой и ламинария японская с содержанием йода не менее 0,16% от массы сухой водоросли. Выявлено, что внесение 13% ламинарии сухой в состав препарата обеспечивает адекватный уровень потребления йода.

9. Модифицирован колориметрический метод определения содержания хитозана в различных препаратах и пищевых продуктах, основанный на взаимодействии аминогрупп хитозана с нингидрином. Установлено, что на характер калибровочной кривой оказывают влияние степень деацетилирования и молекулярная масса хитозана.

10. Технологические решения производства пищевого хитозана и препаратов на его основе использованы при разработке нормативной документации ТУ 9289 - 067 - 00472124 - 03 «Хитозан пищевой», ТУ 9289 - 002 - 00472124 - 03 «Хитан» и ТУ 9289 - 005 - 00038155 - 01 «Полихит». Новизна технических решений подтверждена патентами РФ № 2217011 «Способ получения биологически активной добавки к пище «Полихит» и № 2246880 «Способ получения хитозана из хитина ракообразных».

Список работ, опубликованных по материалам диссертации

1. Ежова Е.А. Модификация «холодного» способа деацетилирования хитина. // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана. Материалы Седьмой Международной конференции. М.: Изд-во ВНИРО, 2003. С.17-19

2. Быкова В.М., Кривошеина Л.И., Глазунов О.И., Ежова Е.А. Использование хитозана для получения биологически активных пищевых добавок. // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана. Материалы Шестой Международной конференции М • Изд-во ВНИРО, 2001. С. 147-149

3. Быкова В.М., Кривошеина Л.И., Глазунов О.И., Ежова Е.А Хитозан-источпик получения биологически активных пищевых добавок // Ж. БАД и рынок №3(5), 2000. С.16-17

4. Быкова В.М., Кривошеина Л.И., Глазунов О.И., Ежова Е.А Хитин, хитозан - биополимеры XXI века. // Ж. «Пища, вкус и аромат». №1. 2001. С.4-6

5. Быкова ВМ, Кривошеина ЛИ., Ежова Е.А К вопросу определения хитозана в различных композициях. // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана. Материалы Шестой Международной конференции. М.: Изд-во ВНИРО, 2001. С.269-271

6 Быкова В.М., Кривошеина Л.И., Ежова Е.А. Использование хитозана для получения биологически активных пищевых добавок.// Международный форум по проблемам науки, техники и образования Тезисы докладов. Москва, 2001. С. 7

7 Быкова В.М., Кривошеина Л.И., Ежова Е.А., Глазунов О И, Панов К.Н. Современные достижения и песпективы в исследовании хитина и хитозана. // Прикладная биохимия и технология гидробионтов. Труды ВНИРО- М.: Изд-во ВНИРО, 2004. Т. 143 С.33-42

8 Быкова В.М., Кривошеина Л.И., Ежова Е.А , Глазунов О.И, Панов К.Н. Биологически активные добавки на основе хинипна получение, применение // Прикладная биохимия и технология гидробионтов Труды ВНИРО- М.: Изд-во ВНИРО, 2004. Т.143. С.118-124

9. V.M. Bykova, L.I. Krivosheina, Е.А. Ezhova Application of cliitosan for preparations bioactive supplements. // 5,h International Conference of the European Chitin Society, Trondhaim, Norway, 2002. P.7

10. Быкова В.M., Немцев C.B., Ежова Е.А. Основные направления и перспективы комплексного использования панциря ракообразных. // О приоритетных задачах рыбохозяйственной науки в развитии рыбной отрасли России до 2020 года. Научно-практическая конференция: Тезисы докладов. М., 2004. С.208-210

11. V.M. Bykova, L.I. Kxivosheina, Е.А. Ezhova. Biologically active chitosan additives. // 6lh International Conference of the European Chitin Society, Poznan, 2004. P. 75

12. E.A. Ezhova, V.M. Bykova, L.I. Krivosheina. Chitosan deacetylation under low temperature conditions. // 6lh International Conference of the European Chitin Society, Poznan, 2004. P. 19

13. Ежова Е.А. Модификация технологии получения пищевого хитозана.// Научные основы ветеринарных биологических препаратов. Материалы Международной научно-практической конференции. Щелково: ВНИТИБП, 2005. С. 455-461

14. Быкова В М., Ежова Е.А., Немцев C.B., Албулов А.И. Разработка технологии биологически активных препаратов на основе пищевого хитозана. Материалы Международной научно-практической конференции. Щелково: ВНИТИБП, 2005. С. 450-455

15. Быкова В.М., Кривошеина Л.И., Ежова Е.А. и др. Способ получения биологически активной добавки к пище «Полихит». Пат № 2217011. Опубл. 22.11.2003 Бюл.№ 33

16. Кривошеина Л И., Быкова В.М., Ежова Е.А. и др. Способ получения хитозана из хитина ракообразных. Пат № 2246880. Опубл. 27.02.2005 Бюл. №6

Подп. а печать Oß, О^ОЬъгип.я. Тираж ¿¿29зкз. Заказ ВНИРО. 107140, Москва, В. Красносельская, 17

114558

РНБ Русский фонд

2006-4 9048

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Строение и свойства хитина и хитозана

1.2. Способы получения хитина и хитозана

1.2.1 Способы получения хитина

1.2.2 Способы получения хитозана

1.2.3 Влияние различных факторов на процесс 23 деацетилирования хитина

1.3 Применение хитина и хитозана в различных отраслях хозяйства 27 и медицине

ГЛАВА 2 ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ

2.1 Объекты исследования

2.2 Методы исследований

ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ

ОБСУЖДЕНИЕ

Разработка технологии пищевого хитозана

3.1 Выбор и обоснование рациональных параметров процессов 54 депротеинирования и деминерализации панциря ракообразных

3.1.1 Исследование влияния различных факторов на 54 процесс депротеинирования

3.1.2 Исследование влияния процесса деминерализации 59 хитина на его качественные характеристики

3.2 Выбор и обоснование рациональных параметров процесса 63 деацетилирования хитина

3.2.1 Деацетилирование хитина при высоких температурах

3.2.2 Деацетилирование хитина в условиях умеренных 69 температур

3.2.3 Деацетилирование хитина модифицированным 74 способом

3.2.4 Сравнительная оценка хитозана, полученного различными 88 способами деацетилирования

Разработка технологии биологически активных 95 препаратов на основе пищевого хитозана

3.3 Разработка технологического процесса БАД «Хитан»

3.4 Технологические параметры получения БАД «Полихит»

ГЛАВА 4 ПРАКТИЧЕСКАЯ РЕАЛИЗАЦИЯ

РЕЗУЛЬТАТОВ ПРОВЕДЕННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

4.1 Комплексная технология переработки панцирьсодержащих 104 отходов ракообразных

4.2 Модификация метода определения содержания хитозана в 108 пищевых продуктах и различных препаратах на его основе.

4.3 Реализация результатов исследования

ВЫВОДЫ

В настоящее время во всем мире отмечается возросший интерес специалистов к полисахаридам природного происхождения, а именно хитину ракообразных, его производному - хитозану и возможностям их использования в различных областях жизнедеятельности человека. Это связано с биологическими свойствами данных полисахаридов, а также с наличием богатой сырьевой базы.

Основным сырьем для получения хитина является панцирь промысловых ракообразных. Другими источниками могут служить гладиус кальмара и сепион каракатицы (Немцев, 1994; Салем Омер, 1995; Дацун,1995), куколка шелкопряда и кутикула тараканов (МиггагеШ, 1977), биомасса микроорганизмов (Феофилова, 1995; Феофилова, 1999), диатомовые водоросли (Регз1'<л'а1, 1967) и пчелиный подмор (Немцев, 2001).

Рыбная отрасль России располагает значительной базой панцирьсодержащего сырья. Панцирь, являющийся побочным продуктом "переработки ракообразных, составляет до 40% их массы, что позволяет организовать промышленное производство хитина и его производных.

Комплексное использование гидробионтов, предполагающее получение пищевых продуктов, ферментов, биологически активных препаратов и природного высокомолекулярного полисахарида хитозана имеет большое народнохозяйственное значение в плане повышения эффективности использования сырьевых ресурсов.

В разработку научных и практических основ химии и технологии хитина, хитозана, их производных внесли большой вклад отечественные и зарубежные ученые: Плиско Е.А., Нудьга Л.А., Быкова В.М., Гамзазаде А.И., Сафронова Т.М., Вихорева Г.А., Маслова Г.В., Варламов В.П., Кривошеина Л.И., Немцев С.В., Феофилова Е.П., МиггагеШ 11.А.А., Нкапо и многие другие.

О большом интересе к проблемам изучения этих биополимеров, 4 технологии их получения и использования свидетельствуют множество международных конференций по хитину и хитозану, проведенных за последние 20 лет: США (1977), Япония (1982), Италия (1985), Норвегия (1988), США (1991), Польша (1994), Франция (1997), Япония (2000), Норвегия (2001), Таиланд (2002), Польша (2004).

За прошедшие годы в нашей стране хитину и хитозану были посвящены семь Всероссийских и Международных конференций: Владивосток (1983), Мурманск (1987), Москва (1991), Москва (1995), Москва - Щелково (1999), Москва - Щелково (2001), Санкт-Петербург- Репино (2003), что убедительно свидетельствует о том, что Россия находится в числе ведущих стран мира по разработке и внедрению оригинальных технологий использования хитозана и его производных в различных отраслях народного хозяйства (Варламов, 2001).

В настоящее время ведущую роль в мире в части исследований по данной проблеме, производству хитина/хитозана и продуктов на их основе занимает Япония. В Японии работают около 20 компаний, выпускающих хитин, хитозан и другие производные, и свыше 40 организаций, занимающихся вопросами их использования. Именно в Японии с 1972 г. впервые в мире начато промышленное производство хитина/хитозана, которое к настоящему времени достигло около 2000 т/год (Красавцев, 2003).

По мнению американских экспертов, называющих хитозан «полимером XXI века», мировой рынок продукции на основе хитозана в будущем будет носить глобальный характер, хотя в настоящее время хитиновой проблемой занимаются в разной степени не более 15 стран, главным образом, связанных с морским рыболовством, а мировой рынок продукции из хитозана в ближайшей перспективе составит около 2 млрд. амер. долларов в год (Быков, 1995).

На сегодняшний день известно около 100 направлений практического использования хитина /хитозана, наиболее важными из которых признаны пищевая промышленность, медицина, косметика, сельское хозяйство, ветеринария, биотехнология и экология.

Значительная доля рынка потребления хитозана формируется в направлении его использования в здравоохранении и профилактической медицине.

Высокоэффективным путем решения проблемы поддержания здорового образа жизни населения является широкое применение биологически активных добавок (БАД) - концентратов натуральных или идентичных натуральным биологически активных веществ, предназначенных для непосредственного приема или введения в состав пищевых продуктов (Тутельян, 1996).

Биологически активные добавки уже давно широко применяются в мире в качестве сбалансированного питания и в последнее время все большее распространение получают в нашей стране. Использование БАД позволяет исправить многочисленные нарушения, вызванные изменением структуры питания значительной части населения нашей страны, а также применять их с целью профилактики, вспомогательной терапии и поддержки в физиологических границах функциональной активности органов и систем (Албулов, 2000).

Использование природного полисахарида - хитозана для производства биологически активных препаратов, обладающих лечебно-профилактической направленностью, обусловлено целым рядом его уникальных свойств. Прежде всего это сорбционные, липотропные, иммуномодулирующие, регенерирующие, бактериостатические свойства.

В свою очередь, высокие биологические свойства хитозана по отношению к сорбции тяжелых металлов, холестерина, радионуклидов и различных токсинов зависят не только от природы данного биополимера, но и от способа его получения, который обеспечивал бы сохранение в максимальной степени его нативной структуры.

Существующие различные технологии получения хитозана связаны, в основном, с жесткими условиями обработки хитина: высокими температурами и концентрациями щелочей, что оказывает существенное влияние на степень деструкции полисахарида и, как следствие, значительно изменяет его нативные свойства.

В этой связи настоящие исследования, направленные на модификацию технологии пищевого хитозана с целью сохранения в процессе получения его нативной структуры и создание биологически активных препаратов на основе данного биополимера, представляются актуальными.

Цель работы: обоснование и разработка рациональной технологии пищевого хитозана и создание на его основе биологически активных препаратов определенной направленности.

Научная новизна диссертационной работы состоит в разработке принципиально новой ресурсосберегающей технологии деацетилирования хитина, обеспечивающей сохранение в максимальной степени нативной структуры биополимера и его высокую биологическую активность.

Установлены закономерности влияния температуры и концентрации гидроокиси натрия на скорость и глубину реакции деацетилирования хитина.

Показана зависимость молекулярной массы и сорбционной активности хитозана от способа деацетилирования хитина.

Разработаны биологически активные добавки «Хитан» и «Полихит», новизна которых подтверждена патентами РФ, получен патент на новый способ получения хитозана из хитина ракообразных.

Практическая значимость.

Разработана и утверждена нормативная документация: ТУ 9289 - 067 -00472124 - 03 и ТИ, Изменения к ТИ «Хитозан пищевой», ТУ 9289 - 002 -00472124 - 03 и ТИ «Биологически активная добавка Хитан», ТУ 9289 - 005 -00038155 - 01 и ТИ «Биологически активная добавка Полихит», Методические указания «Методы определения содержания хитозана в пищевых продуктах и препаратах на его основе».

На базе ЗАО «Биопрогресс» освоен промышленный выпуск указанных продуктов.

выводы

1. Научно обоснована и разработана технология пищевого хитозана, базирующаяся на рациональных параметрах депротеинирования и деминерализации панциря ракообразных, модификации процесса деацетилирования хитина, гарантирующих высокое качество и максимальное сохранение структуры полимера.

2. Установлена необходимость 2-х стадийных этапов депротеинирования и деминерализации панциря краба по сравнению с креветкой, обеспечивающих наличие остаточного содержания минеральных веществ в хитине в пределах 0,2-0,4%, азотистых веществ не более 0,1% (без учета азота хитина) в пересчете на сухое вещество.

3. Разработаны рациональные параметры деацетилирования хитина из панциря краба 40%-ным раствором гидроокиси натрия, включающие его предварительную активацию при температуре 20-22°С в течение 7 I суток и последующий щелочной гидролиз при температуре 60°С в течение 2ч, позволяющие получать пищевой хитозан с высокими качественными характеристиками (ММ - 369кДа, СДА - 81%, характеристическая вязкость — 10,6 дл/г).

4. Показана возможность сокращения продолжительности процесса активации хитина из панциря креветки до 5 суток и концентрации раствора гидроокиси натрия - До 35%, что связано со структурными особенностями панциря.

5. Результаты рентгеноструктурного анализа свидетельствуют об идентичности надмолекулярной структуры хитозана, полученного разными способами деацетилирования. Показано, что реакция деацетилирования хитина сопровождается снижением степени кристалличности получаемого хитозана.

6. Изучена адсорбция тяжелых металлов пищевым хитозаном на примере катионов никеля. Показана большая сорбционная емкость хитозана модифицированного способа деацетилирования, предельная величина сорбции которого составляет 6,Зммоль/г против 1,1 ммоль/г хитозана, полученного при высоких температурах.

7. Разработана технология биологически активной добавки к пище «Хитан» на основе пищевого хитозана, характеризующегося содержанием минеральных веществ в пределах 0,1-0,3%, нерастворимых веществ не более 0,1%, СДА - не менее 80%, динамической вязкостью 500сПз.

8. Разработан технологический процесс получения БАД «Полихит», основными компонентами которой являются хитозан пищевой и ламинария японская с содержанием йода не менее 0,16% от массы сухой водоросли. Выявлено, что внесение 13% ламинарии сухой в состав препарата обеспечивает адекватный уровень потребления йода.

9. Модифицирован колориметрический метод определения содержания хитозана в различных препаратах и пищевых продуктах, основанный на взаимодействии аминогрупп хитозана с нингидрином. Установлено, что на характер калибровочной кривой оказывают влияние степень деацетилирования и молекулярная масса хитозана.

10. Технологические решения производства пищевого хитозана и препаратов на его основе использованы при разработке нормативной документации ТУ 9289 - 067 - 00472124 - 03 «Хитозан пищевой», ТУ 9289 - 002 - 00472124 - 03 «Хитан» и ТУ 9289 - 005 - 00038155 - 01 «Полихит». Новизна технических решений подтверждена патентами РФ № 2217011 «Способ получения биологически активной добавки к пище «Полихит» и № 2246880 «Способ получения хитозана из хитина ракообразных».

1. Аким Э.Л., Наймарк Н.И., Васильев Б.В. // Высокомолекулярные соединения. 1971.Т. 13А. №12. С. 2244-2249

2. Акопова Т.А., Роговина С.З., Вихорева Г.А. и др. // . Высокомолекулярные соединения. 1991. Т. Б32. №10. С.735-737.

3. Акопова Т.А. Химические превращения хитина и хитозана в твердом состоянии при механическом воздействии. Автореферат дисс. канд. хим. наук.М,2001

4. Албулов А.И., Симонова Л.В., Фролова Е.А. Перспективы применения хитозана в косметике // Материалы V конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИРО, 1999. С. 117-118. ,

5. Аналитическая химия. Химические методы анализа под ред. д.х.н., проф. О.М. Перетрухина. М.: Химия. 1993. 400 с.

6. Александрова Е.А., Суворов A.B., Антипенко Е.А. и др. Эффективность препарата «Олигохит» при вертеброгенной дорсалгии // Материалы VII Международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИРО, 2003. С.131-135.

7. Бегунов И.И., Надыкта В.Д., Терехов В.И. и др. Эффективность композиций на основе хитозана против фомопсиса подсолнечника //

8. Большаков И.Н., Насибов С.М. Связывание бактериального липополисахарида хитозаном при энтеросорбции в эксперименте // Материалы V конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИРО, 1999. С. 120.

9. П.Быков В.П. Перспективы организации в рыбной отрасли промышленного производства хитина и хитозана // Тезисы четвертой Всероссийской конференции «Производство и применение хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 1995. С.3-5.

10. Быков В.П., Сныткин И.И., Быкова В.М. и др. Способ получения хитозана из ракообразных. Пат. РФ 2116733 A23L1/33, 1996.

11. З.Быков В.П., Фурман Д.И. Получение хитозана из гаммаруса // Материалы V конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИРО, 1999. С. 18-21.

12. Быкова В.М., Кривошеина Л.И., Ежова Е.А. Использование хитозана для получения биологически активных пищевых добавок.// Международный форум по проблемам науки, техники и образования. Тезисы докладов. М. 2001- С. 7

13. Быкова В.М., Кривошеина Л.И., Ежова Е.А К вопросу определения хитозана в различных композициях.// Материалы VI Международной конференции «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». М.: Изд-во ВНИРО, 2001-С.269-271

14. Быкова В.М., Кривошеина Л.И., Ежова Е.А. и др. Способ получения биологически активной добавки к пище «Полихит». Пат № 2217011. Опубл. 22.11.2003 Бюл.№ 33

15. Быкова В.М., Кривошеина Л.И., Ежова Е.А., Глазунов О.И., Панов К.Н. Современные достижения и песпективы в исследовании хитина и хитозана. // Прикладная биохимия и технология гидробионтов: Труды ВНИРО- М.: Изд-во ВНИРО, 2004. Т.НЗ.С.ЗЗ-42

16. Быкова В.М., Кривошеина Л.И., Ежова Е.А., Глазунов О.И., Панов К.Н. Биологически активные добавки на основе хитозана: получение, применение. // Прикладная биохимия и технология гидробионтов: Труды ВНИРО- М.: Изд-во ВНИРО, 2004. Т.143.С.118-124

17. Варламов В.П. Место российской науки в мировом хитозановом буме // Материалы VI Международной конференции «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». М.: Изд-во ВНИРО, 2001. С. 7 9

18. Вихорева Г.А. Синтез и. свойства водорастворимых производных хитинаУ/ Дис. докт. хим. наук. М.:ВНИИПВ, 1998. 316с.

19. Водолажская C.B. Технология получения белковых гидролизатов из гидробионтов электрохимическим способом для производства микробиологических питательных сред // Дис. .канд. техн. наук. СПб.: СПбГТИ(ТУ), 2001. 137с.

20. Волгарев М.Н., Батурин А.К., Гаппаров М.М.-Г.// Вопросы питания.-1996.-№2.-С.З-6.

21. Гамзазаде А.И., Ажигирова И.А., Рогожин C.B. Способ получения хитозана A.c. СССР № 592678, 1977

22. Гамзазаде А.И., Мрачковская Т.А., Давидович Ю.А. и др. Способ получения хитина A.c. СССР № 665683 ,1979

23. Гамзазаде А.И., Скляр A.M., Павлова С.А., Рогожин C.B. // Высокомол. соед. 1981. Т А23.№3. С.594-597.

24. Гарсия-Алонсо И., Овьедо-Вега Д., Хенрикес Р. // Биоорганическая химия. 1984. Т. 10. №9. С. 1253-1255.

25. Гинье А. Ренгенография кристаллов. // М.: Физматгиз, 1961г.

26. Глазунов В.П., Горбач В.И. Спектрофотометрическое определение содержания аминогрупп в хитозане.// Биоорганическая химия, Т 25, 1999. С.216-219.

27. Горовой Л.Ф., Кошевский И.И., Теслюк В.В и др. Влияние препарата Микосан и хитозана на устойчивость ячменя к болезням // Материалы

28. VI Международной конференции «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». М.: Изд-во ВНИРО, 2001. С. 78-82.

29. Дацун В.М. Вторичные ресурсы рыбной промышленности (использование высокоминерализированных отходов). М.: Колос, 1995. С.32-34.

30. Ежова Е.А. Модификация «холодного» способа деацетилирования хитина // Материалы VII Международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИРО, 2003. С.17-19.

31. Елинов Н.П. Химическая микробиология. М:. Высшая школа,1984. С.197

32. Кайминьш И.Ф., Клявинып З.В. Разработка медицинских сорбентов на основе отходов производства хитозановых бумаг // Тезисы IV Всероссийской конференции «Производство и применение хитина и хитозана». М.: ВНИРО, 1995. С. 51-54

33. Кайминьш И.Ф., Лейченко И.А., Полякова Л.К. и др. Перевязочный материал для закрытия повреждений кожи, A.C. 1406853, 1988.

34. Кайминьш И.Ф. Физико-химические свойства хитозана и возможности его практического использования // Материалы V конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИРО, 1999. С. 230-231.

35. Кайминьш И.Ф., Кисилева Т.Б., Клявиньш З.В. и др. Получение диетической пищевой добавки на основе хитозана // Материалы VI Международной конференции «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИРО, 2001. С. 175.

36. Кленкова Н.И. Структура и реакционная способность целлюлозы. Л.: Наука, 1976. С152-191.

37. Красавцев В.Е. Технико-экономические перспективы производства хитина и хитозана из антарктического криля // Материалы VII Международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИРО, 2003. С.7-8.

38. Кривошеина Л.И., Быкова В.М., Ежова Е.А. и др. Способ получения хитина из хитина ракообразных. Пат №. 2246880. Опубл. 27.02.2005 Бюл. №6

39. Куликов С.Н., Алимова Ф.К., Захарова Н.Г. и др. Препараты «АгроХит» и «Триходермин» против болезней картофеля //Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Материалы Седьмой Международной конференции. — М.: Изд-во ВНИРО, 2003.- С.86-90.

40. Куприна Е.Э., Красавцев В.Е., Козлова И.Ю. и др. // Материалы V конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИРО, 1999. С. 245-273.

41. Куприна Е.Э., Водолажская C.B. // Хитин и хитозан: Получение, свойства и применение/ Под ред. К.Г.Скрябина, Г.А. Вихоревой, В.П. Варламова,-М.:Наука, 2002, С.59-61.

42. Леваньков C.B., Купина H.H., Блинов Ю.Г. // Материалы V конф. «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИРО,1999. С. 44-46

43. Лопатин С.А., Немцев C.B., Варламов В.П. Новый колориметрический метод определения хитозана // Материалы VI Международной конференции «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». М.: Изд-во ВНИРО, 2001. С. 298-299.

44. Ляликов Ю.С. Физико-химические методы анализа. // М.: Химия, 1974. 534с.

45. Максимова С.Н. Совершенствование технологии пищевого хитозана// Автореф. дис. канд. тенх. наук.- Владивосток: Дальрыбвтуз, 1998.-25с.

46. Маслова Г.В., Куприна Е.Э., Ежов В.Г. и др Комплексная установка для получения белкового концентрата, липидов и хитина из хитинсодержащего сырья. Патент № 2059390. 1996.

47. Маслова Г.В., Куприна Е.Э., Сподобина Л.А. и др. Способ получения хитина из панцирьсодержащего сырья. A.C. 175188 СССР. А 23 I 1/33., 1990

48. Маслова Г.В. Теория и практика создания комплекса рациональных ресурсосберегающих технологий гидробионтов. Автореферат дисс. доктор техн. наук. М., 2002

49. Москаленко Т.М. Влияние хитозана на микробиологические показатели и токсичность бульонов з процессе их дезодорации // Науч. Труды Дальрыбвтуза. Вып 12. Владивосток, 1999. С. 147 151

50. Немцев C.B., Салем Омер А. Технологические особенности хитиновых пластин головоногих моллюсков. // Материалы Международной конференции «Технология переработки гидробионтов». М.: ВНИРО, 1994. С.125-127.

51. Немцев C.B. Разработка комплексной технологии хитина и хитозана из панцирьсодержащего сырья криля с применением ферментных препаратов и криоактивации //Дис. . канд. техн. наук. М: 1997, 222с.

52. Немцев C.B. Разработка комплексной технологии хитина и хитозана из панцирьсодержащего сырья криля с применением ферментных препаратов и криоактивации. Автореферат дисс. канд. техн. наук. М., 1997

53. Новиков М.Ю., Орлова Т.А., Веронина И.Е. // Из. вузов. Пищ. технол. 1990. №5. С.64-67.

54. Нудьга Л. А., Плиско Е.А., Данилов С.Н. // ЖОХ. 1971. Т. 41. С. 25552558. '

55. Нудьга JI.A., Баклагина Ю.Г., Петропавловский Г.А. и др.// Высокомол. соед. 1991. Т.ЗЗБ. №11. С.864-868.

56. Пенистон К.П., Джонсон Э.Л. Способ деминерализации панцирей ракообразных . Пат. США №4066735, 1978.

57. Петров В.А., Тарасенко Г.А. Токсико-гигиеническая оценка хитозана из панциря камчатского краба в условиях хронического эксперимента // Материалы Пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИРО, 1999. С. 176

58. Плиско Е.А., Нудьга Л.А. , Данилов С.Н. // Усп. химии. 1977. XLVI, вып. 8. С. 1470-1487.

59. Пилат Т.Л., Иванов A.A. Биологически активные добавки к пище (теория, произодство, применение).-М.:Авваллон, 2002.- С.184-190.

60. Рогожин C.B., Лозинский, В.И., Вайнерман Е.С. и др. Способ получения хитозана. A.c. СССР № 1363831, 1986

61. Розенталь А.Д. Биотехнологические основы переработки панциря антарктического криля // Дис. . канд. биол. наук. Л.:ЛТИ им. Ленсовета, 1988, 102с.

62. Роль Л.Н. и др. Утилизация отходов производства крилевого мяса путем протеолиза //Тез. Докл. 1 Всесоюз.конф. по хитину и хитозану, Дальрыбвтуз, Владивосток, 1983.-С.40.

63. Садовой В.В., Анисимова Ю.А. Изучение связывающецй способности ионов тяжелых металлов пищевой добавкой, содержащей хитозан //

64. Салем Омер А. Разработка технологии получения хитина и хитозана из сепиона каракатицы. Автореферат дисс. канд. техн. наук. М., 1995.

65. Самуйленко А.Я., Албулов А.И., Еремец В.И. и др. Хитозан в составе биологически активных добавок к пище // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Материалы Седьмой Международной- конференции. -М.: Изд-во ВНИРО, 2003. С. 271-272.

66. Сафронова Т.М., Игнатюк JI.H., Максимова С.Н. Способ получения хитозана. Патент №2147590. 2000.

67. Скляр A.M., Гамзазаде А.И., Роговина JI.3. и др. Исследование реологических свойств разбавленных и умеренно концентрированных растворов хитозана.// Новое в реологии. Материалы XI Всесоюзного симпозиума по реологии. Суздаль, 1981.- с.86.

68. Соколова Е.А., Байданова Е.А>. Влияние фиторегуляторов на количество зерен в колосе // Материалы VII Международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИРО, 2003. С.114-116.

69. Справочник по химическому составу и технологическим свойствам водорослей, беспозвоночных и морских млекопитающих/ Под ред. Быкова. М.:Изд-во ВНИРО, 1999.С.13-15

70. Тутельян В.А.//Вопросы питания.- 1996.-№6.-С.6.

71. Тутельян В.А., Суханов Б.П., Австриевских А.Н. и др. Биологически активные добавки в питании человека. Томск: Изд-во HTJI, 1999. 296с

72. Удалова В.Б., Селиверстов А.Ф., Ершов Б.Г. Применение хитозана и нилверма в комплексной системе мер борьбы с галловой нематодой в теплицах // Материалы V конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИРО, 1999. С. 108 110.

73. Шлегель Г. Общая микробиология. М.:Мир, 1987. С.51, 136.

74. Шугалей И.В., Львов С.Н„ Целинский И.В. и др. Некоторые аспекты действия крилевого хитозана при свободнорадикальных поражениях биообъектов // Производство и применение хитина и хитозана: Тезисы докладов 4-й Всероссийской конф. М.: ВНИРО, 1995. С.49

75. Феофилова Е.П., Терешина В.М., Менорская A.C. Хитин мицелиальных грибов: методы выделения, идентификации и физико-химические свойства. // Микробиология, 1995. Том 64. №1. С.26-30.

76. Феофилова Е.П., Терешина В.М. Перспективные источники получения хитина из природных объектов.// Материалы V конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИРО, 1999. С. 76-78.

77. Фомичев Ю.П., Шайдуллина Р.Г., Федоров Ю.Н. и др. Влияние хитозана на резистентность и рост телят// Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Материалы Седьмой Международной конференции. -М.: Изд-во ВНИРО, 2003. -С.210-214.

78. Хитин и хитозан: получение, свойства и применение/ Под ред. К.Г. Скрябина, Г.А. Вихоревой, В.П. Варламова.-М.: Наука, 2002. С.65-70.

79. Червинец В.М. Изменение микробиоцеиоза при воспалительных и эрозивно-язвенных поражениях пищевода, желудка и двенадцати

80. Чертова Т.С. Биологически активные вещества в защите растений // Защита и карантин растений. -2000. №6. - С.58-62.

81. Эмануэль Н.М. Химическая физика старения и стабилизации полимеров. М: Химия, 1982. С. 282

82. Arul J., Ghaouth А. Е. // Proc. Intern. Conf. Chitin/Chitosan, 1st, France.-1995.-P.18.

83. Blumental H.J., Roseman S.// J. Bacterid. 1957. V. 74. P. 222-225

84. Brine C. // Chitin and Chitosan, Japan, 1981.-P.105-110

85. V.M. Bykova*, L.I. Krivosheina*, E.A. Ezhova*. Application of chitosan for preparations bioactive supplements. // 5th International Conference of the European Chitin Society, Trondhaim, Norway, 2002. P.7

86. V.M. Bykova*, L.I. Krivosheina*, E.A. Ezhova*. Biologically active chitosan additives. // 6th International Conference of the European Chitin Society, Poznan, 2004.C. 75 ;

87. Carlson В., Knorr D., Watkins T. // Nutrition Reports Intern.-1983 Vol.27.-P.201.

88. Cira L.A., Huerta S., Guerrero I. et al. // Advances in chitin science, TUCHIS-99. Potsdam: 1999. P.21-27.

89. Cid C., Ramos V. // Advances in chitin science, EUCHIS-99, Potsdam, 1999. P.93-97.

90. E.A. Ezhova, V.M. Bykova*, L.I. Krivosheina. Chitosan deacetylation under low temperature conditions. // 6th International Conference of the European Chitin Society, Poznan, 2004.C. 19

91. FAO/WHO. Питание. Глобальные проблемы. Международная коференция по питанию.-Рим, 1994.-С.3-8.

92. Foster А. В., Hackman R.H. // Nature. 1957. V.180. P. 40-44.

93. Hall G.M., Reid C.L. // Chitin and chitosan, the versatile environmental freindly modern materials. Malaysia: UKM. 1995. 47p.

94. Joseph S. Podolski, Kuang Hsu. // Chitosan Induced Immunopotentiation. Zonagen, Inc., Patent US N.5,912,000 Jun. 15.1999.

95. Knorr D. Recovery and Utilization of Chitin and Chitosan in Food Processing Waste Managenem// Food Technol., January, 1991.-P. 114-122.

96. Le Doan Dien, Tran Quang Binh.// proc. Asia-Pacif. Symp. Chitin/Chitosan, 2nd, Thailand, 1996.- P.200-203.

97. Lusena C.V., Rose R.C. // J.Fish Res Board Can. 1953. V.10. P.521-525.

98. Madhavan P., Ramachandran Nair K.G. // Fishery Technol. 1974. V.U. P.50-53.

99. Mima S., Miya M., Iwamoto R. et. al.// It chitin and chitosan. Ed. S. Hirano, S. Tokura. The Japaness Society of Chitin and Chitosan. 1982. P.21-25.

100. Miya V., Iwamoto R., Yoshikawa S. et. al. I.r. spectroscopic determinaition of CONH content in highly deacylated chitosan // Int.J. Biol. Macromol., Vol 2, P.323

101. Mooijani M.N., Achuta V., Khasim D.I. // J. Food Sei. Technol. 1975. V.12. P. 187-190.

102. Muzzarelli R.A.A., Chitin. Oxford: Pergamon Press, 1977. 309p.

103. Muzzarelli R.A.A. Colorimetric determination of chitosan // Analytical Biochemistry, V.260, 1998. P.255-257.

104. Persiwal E., McDowell R. Chemistry and enzymology of marine algae polysaccharides.// Academic Press. London and New York, 1967. P.219.

105. Ramachandran N.K., Madhavan P. // Proc. 2nd Int. Conf. "Chitin end Chitosan". Sapporo: 1982, P. 187-190

106. Rao S.S.V. et al.// Indian J. Technol. 1987. - Vol.25. - №4. - P.580-583.

107. Rao S.S.V., Stevens W.F. Processing parameters in scaling-up of lactobacillus fermentation of shrimp biowaste // Advances in chitin science, 7th ICCC, Lyon: 1997. P. 88-93.

108. Rhoades J., Roller S. Antimicrobial actions of degraded and nativ chitosan against spoilage organisms in laboratory media and foods // Applied and Environmental Microbiology. Jan.2000. V.66(l). P.80-86.

109. Roberts G.A.F. Chitin chemistry. BasingstokeA Macmillan Press, 1992, 352c.

110. Roberts G.F.A.// Advances in chitin science. 7th ICCC, 3-5 September 1997, -Lyon, France, 1997. P22-31.

111. Saito G. // Cellulosechemie. 1940. V. 18. P.106-110. 134.Shimahara K., Ohkoushi K., Ikeda M. // In chitin and chitosan. Ed. S. Hirano, S. Tokura. The Japanese Society of Chitin and Chitosan. 1982. P. 10-15.

112. Stivens W.F., Win N.N., Ng Ch H., Pichyangkura S., Chandrkrachang S.// Proc. Intern. Chitin/Chitosan Conf. 7th, Franse, 1997.-P.40-47.

113. Takeda M., Tamida T. // Suisan Daigakku Kenkyu Hokoku, 1969. P.143- . 150

114. Wächter R., Stenberg E.// Proc. Intern. Conf. Chitin/Chitosan, lst, France.-1995-P.1813 8.Yang T.C., Zall R.R. // Ind. Eng. Chem. Prod.Res.Dev.1984. V.23. N.l P.168-172