автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.07, диссертация на тему:Изучение утилизации углеводов дрожжами в концентрированных растворах, содержащих лактозу и лактулозу

На правах рукописи

НОВАКОВ ПАВЕЛ БОРИСОВИЧ

ИЗУЧЕНИЕ УТИЛИЗАЦИИ УГЛЕВОДОВ ДРОЖЖАМИ В КОНЦЕНТРИРОВАННЫХ РАСТВОРАХ, СОДЕРЖАЩИХ ЛАКТОЗУ И

ЛАКТУЛОЗУ

Специальность 05 18 07 — биотехнология пищевых продуктов

(перерабатывающие отрасли АПК)

АВТОРЕФЕРАТ

диссергации на соискание ученой степени кандидата технических наук

Ставрополь - 2007

003159640

Работа выполнена на кафедре прикладной биотехнологии ГОУ ВПО Северо-Кавказского государственного технического университета

Научный руководитель — доктор I ехнических наук, профессор

Евдокимов Иван Алексеевич

Официальные оппоненты - доктор технических наук, профессор

Жидков Владимир Евдокимович

доктор технических наук, заслуженный работник пищевой индустрии Гаврилов Гавриил Борисович

Ведущая организация — Кубанский государственный технологический

университет

Защита состоится «26» октября 2007 г в 10 — часов на заседании диссертационного совета Д 212 245 05 при ГОУ ВПО Северо-Кавказском государственном техническом университете по адресу 355029, г Ставрополь, пр Кулакова, 2, ауд К 308

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО СевКавГТУ

Автореферат разослан «Ц_» СШЛ^Л 2007)

Ученый секретарь диссертационного совета, к т н, доцент

Шипулин В И

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Проблема создания, по,шержания и восстановления нормальной кишечной микрофлоры является одной из наиболее актуальных для здоровья человека

Большие возможности для коррекции кишечной микрофлоры представляет питание человека, в частности пищевые продукты, содержащие вещества, которые стимулируют (или промотируют) рост бифидофлоры в кишечнике В настоящее время наиболее широко применяемым промотором или бифидус-фактором является лактулоза

В промышленности для обогащения пищевых продуктов применяют концентраты лактулозы, производимые чаще всего в виде сиропов Такие сиропы, помимо лактулозы, содержат немалую долю лактозы повышенное содержание которой является причиной образования кристаллического осадка при хранении готового продукта, что в свою очередь снижает сроки хранения и потребительскую привлекательность сиропов лактулозы

Теоретические и практические основы технологии лактулозы заложены в трудах О Н Яковлевой, В Я Матвиевского Э Ф Кравченко, С А Рябцевой, И А Евдокимова, А Г Храмцова, А В Серова, Е Montgomeiy, О Braun, М Toirnta, А Nangpal и других ученых

Современные способы эффективного удаления лактозы, применяемые в технологии лактулозы, предусматривают добавление токсичных реагентов, для удаления которых применяют сложные и дорогостоящие методы, в частности селективный ионообмен Кроме того, использование таких реагентов создает потенциальную опасность загрязнения готового продукта токсичными веществами В связи с этим актуальными являются исследования в области применения биологических и биохимических методов для снижения содержания лактозы в сиропах лактулозы

Цель и задачи исследования. Целью работы является изучение роста и метаболической активности дрожжей в растворах молочного сахара и лакто-

лаетулозы и определение направлений использования лактозоусваивающих дрожжей в технологии лактулозы и других областях

В соответствии с поставленной целью были определены задачи исследований

• Проведение мониторинга способов получения и очистки сиропов лакту-лозы и биотехнологии утилизации лактозы различными микроорганизмами

• Изучение влияния различных факторов на рост и интенсивность утилизации лактозы дрожжами в концентрированных модельных растворах молочного сахара

• Подбор штаммов дрожжей, наиболее быстро окисляющих лактозу, для проведения дальнейших исследований

» Исследование влияния различных способов стерилизации модельных растворов лакто-лактулозы на рос г и метаболическую активность дрожжей

• Исследование роста выбранных штаммов дрожжей в сложных по углеводному составу концентрированных модельных растворах лакто-лактулозы

» Изучение динамики углеводного состава модельных растворов лакто-лактулозы в процессе культивирования различных видов дрожжей

• Определение наиболее подходящего штамма и оптимальных параметров культивирования для максимальной утилизации лактозы и минимальной утилизации лактулозы в модельных растворах лакто-лактулозы

• Определение направлений практической реализации результатов исследований, разработка частной технологии получения сиропа лактулозы с пониженным содержанием лактозы

• Оценка экономической эффективности, экологической безопасности и социальной значимости на примере частной технологии производства сиропа лактулозы с пониженным содержанием лактозы

Научная новизна состоит в следующем исследовано влияние различных факторов на интенсивность утилизации лактозы адаптированными к повышенному осмотическому давлению лактозоусваивающими дрожжами в концентрированных растворах молочного сахара Впервые установлены особенности утилизации углеводов лактозоусваивающими дрожжами в растворах лакто-лактулозы Определена продолжительность культивирования штаммов Saccharomyces lactis SK и Candida kefyi Y - 203, обеспечивающая максимальную утипизацию лактозы и минимальную лактулозы Теоретически обоснована и экспериментально установлена возможность использования культивирования лактозоусваивающих дрожжей для снижения содержания лактозы в растворах лакто-пактулозы

Практическая значимость Определены основные пути применения лактозоусваивающих дрожжей в технологии лактулозы и производстве биологически-активных добавок, разработана частная технология получения сиропа лакгулозы с пониженным содержанием лактозы (ТУ и ТИ 9229-00846162908-2004, изменение №1, от 26 декабря 2006г) Проведена опытно-промышленная апробация микробной утилизации лактозы в растворах лакто-лактулозы на ГНУ ВНИМИ (г Москва) и ООО «Легион» (г Ставрополь)

Апробация работы Основные результаты работы обсуждались на международной научно-практической конференции «Пробиотические микроорганизмы - современное состояние вопроса и перспективы использования» (Москва, 2002), 2-ой Всероссийской научно-технической конф «Современные достижения биотехнологии» (Ставрополь, 2002), IV специализированном конгрессе «Молочная промышленность Сибири» (Барнаул, 2004), международной конференции «Пробно гики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания Современное состояние и перспективы» (Москва, 2004), межрегиональном научно-практическом семинаре «Теория и практика новых технологий в производстве продуктов питания» (Омск, 2005), международном научно-практическом семинаре «Современные направления

переработки сыворотки» (Ставрополь, 2006), симпозиуме международной молочной федерации «Лактоза и ее производные» (Москва, 2007)

Публикации. По результатам проведенных исследований опубликовано 11 печатных работ и подана заявка №2007123864 (025992) от 25 06 2007 на изобретение «Способ получения сиропа лактулозы»

Структура и объем диссертации Диссертация состоит из введения, пяти глав, выводов, списка литературы, содержащего 134 наименования, и приложений

Работа изложена на 137 страницах машинописною "текста, содержит 35 таблиц, 28 рисунков и 9 приложении

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ Во введении обоснована актуальность работы

В первой главе рассмотрены способы получения и очистки концентратов лактулозы, а также биотехнология утилизации лактозы В результате анализа литературных данных по биотехноло! ии утилизации лактозы было установлено, что для микробиологической утилизации лактозы в концентрированных растворах наиболее предпочтительным является использование дрожжей Такой выбор обусловлен высокой скоростью утилизации лактозы, способностью проявлять высокую метаболическую активность при повышенном содержании сухих веществ в среде и в широком диапазоне условий культивирования Также преимуществом дрожжей является способность полностью окислять углеводы в аэробных условиях (до воды и углекислого газа), не выделяя при этом больших количеств метаболитов органического происхождения

Во второй главе представлены данные об организации работы, объектах и методах исследования, обработке экспериментальных данных Схема проведения экспериментальных исследований представлена на рисунке 1

Для экспериментальных исследований были выбраны 4 штамма дрожжей Candida kefyr Y — 203, Trichosporon puliulans Y - 1536, Leucosporidium scotti Y -1537, Saccharomyces lactis SK Культуры дрожжей предварительно

Анализ состояния вопроса

Постановка задач исследований

Ф Ф Ф , , Ф Ф Ф

Культивирование дрожжей и утилизация лактозы в концентрированых модельных растворах моточного сахара

0 - содержание сухих веществ, С^) - концентрация клеток,

© - концентраций жизнеспособных клеток, С^З " жизнсспос°бность культуры, ^^ - рН модельного раствора, (б^) - продолжительность культивирования - содержание углеводов

Рисунок 1 - Схема проведения исследований

адаптировали к повышенному осмотическому давлению по аналогии с методом Gavel J, Kosikowski F (1978) Основными объектами исследований, помимо различных штаммов дрожжей являлись модельные растворы, состав которых приведен в таблице 1

Таблица 1 — Сое 1ав модельных растворов

Наименование вещества Количество, г/л

Модельный раствор молочного сахара-сырца Модельный раствор фармакопейного молочного сахара Модельный раствор лакто-лактулозы

Молочный сахар 234,3 229,0 40,0 (Фармакопейный)

Сироп лактулозы МЬ8-50 - - 263 9

Дрожжевой экстракт 6,0

К,НР04 3,0

КН2Р04 3,0

МЙ804 7Н20 0,27

Дрожжевой экстракт и минеральные соли добавляли для повышения метаболической активности дрожжей, при выборе добавок и их количеств руководствовались литературными данными В модельных растворах устанавливали значение рН 5,0 ±0,2

В третьей главе изучено влияние различных факторов на интенсивность окисления лактозы в модельных растворах молочного сахара

Влияние способа приготовления посевного материала на интенсивность окисления лактозы. Исследовали два способа приготовления посевного материала По первому способу посевной материал получали в две стадии на первой стадии адаптированную к повышенному осмотическому давлению культуру дрожжей Э 1ас1|Э БК выращивали на поверхности агаризованного модельного раствора молочного сахара-сырца в матрасных колбах, на второй стадии выросшую культуру переносили в коническую колбу и культивировали глубинным способом в растворе молочного сахара-сырца На

обоих стадиях выращивание проводили при температуре 3(>°С в течение 36 ±4ч В горой способ исключал выращивание посевного материала в конической колбе Согласно рабочей гипотезе термостатирование культ) ры в конической колбе позволит повысить активность посевного материала и, как следовие, будет способствовать более быстрому окислению лакгочы за счет адаптирования культуры к условиям глубинного роста

Культивирование проводили в биореакторе, содержащем 500 ±10 см3 модельного раствора молочного сахара-сырца, при постоянной аэрации с интенсивностью 50 ±10 л/ч и температуре 30°С, без коррекции рН Графическая интерпретация изменений некоторых параметров культивирования и свойств модельного раствора приведены на рисунках 2 и 3

Щ 0 10 20 30 40 50 60 ГО 80 90

Ь£ Время культивирования ч

Рисунок 2 — Кривые роста дрожжей

в 1ас11к ЭК в модельных растворах

молочного сахара-сырца при

различных способах получения инокулята

О 10 20 30 40 50 60 70 80 90 Время культивирования ч

Рисунок 3 - Кинетика изменения содержания сухих веществ модельного раствора при различных способах получения инокулята

В результате анализа полученных результатов было установлено, что при первом способе приготовления посевного материала активность последнего значительно ниже Об этом свидетельствует более продолжительная лаг-фаза (рисунок 2) и соответственно незначительная метаболическая активность дрожжей в первые 9—11 часов культивирования (рисунок 3) Применение второго способа приготовления посевного материала способствует более быстрому окислению лактозы, о котором можно косвенно судить по

уменьшению содержания сухих веществ модельнсм о раствора (более 90% сухих веществ модельного раствора — лактоза) На рисунке 2 видно, что содержание сухих веществ приблизительно 3,8% достигается на 23 — 25 часов раньше при втором способе приготовления посевного материала по сравнению с первым

Таким образом, применение первого способа является менее продуктивным с точки зрения утилизации лактозы Следовательно, рабочая гипотеза не подтверждается В дальнейших исследованиях использовали второй способ приготовления посевного материала

Влияние различных видов дрожжевого экстракта на интенсивность окисления лактозы. Для оценки влияния различных видов дрожжевого экстракта на интенсивность окисления лактозы были использованы модельные растворы на основе фармакопейного молочною сахара (таблица 1) В модельный раствор 1 добавляли экстракт хлебопекарных дрожжей лабораторного приготовления (метод Рубинского), в модельный раствор 2 -экстракт кормовых дрожжей (ЭКД) производства ООО «Питательные среды» г Махачкала Посевной материал дрожжевой культуры S lactis SK приготавливали согласно второму способу Условия культивирования были такими же, как в описанном выше эксперименте В ходе анализа данных, характеризующих процесс культивирования, было установлено, что продолжительность логарифмической фазы роста при культивировании дрожжей в модельном растворе 1 на 3 — 4 часа больше, что обеспечивает увеличение концентрации жизнеспособных клеток приблизительно на 150 — 300 млн/см3 по сравнению с модельным раствором 2 (рисунок 4) Увеличение продолжительности фазы логарифмического роста связано, по всей видимости, с более полноценным составом модельного раствора, обеспечивающим достаточное количество питательных веществ для интенсивного размножения дрожжевых клеток Дрожжевой экстракт лабораторного приготовления, входящий в состав модельного раствора 1, также оказывает положительное влияние на интенсивность окисления лактозы, что подтверждает кинетика изменения содержания сухих веществ (рисунок 5)

и

Концентрация сухих веществ в модельном растворе 1 после первых 9 часов культивирования, уменьшается с большей скоростью по сравнению с раствором 2 Кроме того, замедление скорости снижения сухих веществ в модельном растворе 1 происходит более постепенно, нежели в растворе 2 Благодаря этому в модельном растворе 1 достигается более полное окисление субстрата

24 * 22

I20

3" 18

& Ч

—модельный раствор 1

Ц* модельный раствор 2

О 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 х Время культивирования ч

Рисунок 4 — Кривые роста дрожжей Б кс^Б ЭК в модельных растворах фармакопейного молочного сахара при добавлении различных видов дрожжевого экстракта

О 5 10 15 20 24 30 35 40 45 ЬО 55 время культивирования ч

Рисунок 5 — Кинетика изменения содержания сухих веществ модельного раствора при добавлении различных видов дрожжевого экстракта

Таким образом, применение дрожжевого экстракта хлебопекарных дрожжей обеспечивает более высокое накопление клеточной биомассы, а также более полную утилизацию лактозы по сравнению с экстрактом промышленного производства По нашему мнению, это связано с несколькими факторами

— применение хлебопекарных дрожжей позволяет получить экстракт, оказывающий большее стимулирующее действие на рост и метаболическую активность лактозоусваивающих дрожжей, нежели применение кормовых дрожжей,

- в экстракте кормовых дрожжей, присутствует большее количество продуктов реакции меланоидинообразования (которые могут ингибировать рост и метаболическую активность дрожжей) о чем свидетельствует более тем-

чая окраска растворов ЭКД по сравнению с экстрактом лабораторного приго-товпения

Изучение окисления лактозы в модельных растворах молочного сахара различного качества Для оценки влияния качества молочного сахара на интенсивность окисления лактозы нами были проведены исследования роста и потребления лактозы дрожжами в модельных растворах модочною сахара-сырца и фармакопейного молочного сахара

Как свидетельствуют результаты эксперимента, переход разви г ия популяции дрожжевых клеток в фазу отмирания происходит раньше в модельном растворе моточного сахара-сырца (рисунок 6) Вероятно, это связано с более высокой метаболической активностью дрожжей в модельном растворе молочного сахара-сырца Более высокая метаболическая активность, в свою очередь, является причиной наступления более раннего действия основных лимитирующих рост факторов (истощение субстрата и накопление продуктов метаболизма) О более интенсивном потреблении субстрата в модельном растворе молочного сахара-сырца свидетельствует кинетика изменения содержания сухих веществ модельных растворов Как следует из рисунка 7, уменьшение

Рисунок 6 - Кривые роста дрожжей 51асП5 вК в модельных растворах молочного сахара различного уровня качества

О 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Время купьтаеирования ч

Рисунок 7 - Кинетика изменения содержания сухих веществ в модельных растворах молочного сахара различного уровня качества

содержания сухих веществ в модельных растворах молочного сахара-сырца происходит более стремительно Предполагается, что повышенная метаболическая активность дрожжей в модельном растворе молочного сахара-сырца обусловлена наличием в молочном сахаре-сырце веществ (витаминов, минеральных веществ, веществ, имеющих в своем составе азот в легкоусваиваемой микроорганизмами форме) стимулирующих процесс аэробной утилизации лакго-.ш Ввиду более глубокой очистки фармакопейная лактоза содержит меньше таких веществ

Исследование окисления лактозы различными штаммами дрожжей.

Известно, что интенсивность окисления лактозы в значительной степени зависит от штамма используемых дрожжей Для оценки этого влияния нами были исследованы различные штаммы 8 ксШ 8К, Т риПЫап.ч У - 1536, Ь зсоМп У -1537, С ке£уг У - 203 Среди перечисленных штаммов наибольший интерес представляют штаммы - Э 1асЬя 8К и С кеГуг У — 203 Эксперименты, проводимые со штаммами Т ри11и1апя У - 1536 и Ь эсоНи У - 1537 не дали обнадёживающих результатов При проведении исследований были отмечены некоторые особенности штаммов Т ри!1и1аш У - 1536 и 1. зеойп У - 1537, в силу которых применение этих штаммов для эффективного глубинного культивирования является проблематичным При проведении глубинного культивирования не было отмечено значимого уменьшения содержания сухих веществ, что свидетельствует о низкой метаболической активности этих штаммов при глубинном культивировании Кроме того, данные штаммы обладают повышенной флотируемо-стью, в большей степени она выражена у штамма Т риПЫапэ У — 1536, данное обстоятельство говорит о большей приспособленности этих штаммов к поверхностному, или смешанному способам культивирования Учитывая повышенные затраты ручного труда, а также сложности в аппаратурном оформлении и автоматизации поверхностного и смешенного культивирования, основное внимание было уделено штаммам в 1ас1>ь ЭК и С ке1уг У — 203 способным к активному росту и высокой метаболической активности в условиях глубинного культивирования

t

»

X

Для сравнения интенсивности утилизации лактозы штаммами S lactis SK и С keiyr Y - 203 использовали модельный раствор фармакопейного молочного сахара Условия культивирования были такими же, как в описанных выше зкс-перимен гах Результаты эксперимент ов свидетельствуют о том, что оба штамма дрожжей интенсивно накапливают биомассу и активно утилизируют субстрат Следует отметить, что при культивировании дрожжей S lactis SK наблюдаются более высокие показатели содержания жизнеспособных клеток в основное время культивирования Однако, как стедует из рисунка 8, при использовании штамма S lactis SK, выявлено более раннее наступление фазы отмирания клеток, что предположительно связано с большей метаболической активностью дрожжей этого штамма и, как следствие, с более ранним действием основных лимитирующих рост факторов (истощение субстрата и накопление продуктов метаболизма) В пользу этого предположения выступают данные по кинетике изменения содержания сухих веществ модельного раствора (рисунок 9) Скорость окисления лактозы культурой С kefyr Y - 203 снижается по прошесг-

0 5 10 15 Z0 2 5 3 0 3 5 40 4 5 5 0 55 Время культивирования ч

0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Время культивирования ч

Рисунок 8 - Кривые роста дрожжей ЭксШ; БК и Ске^г У - 203 в модельных растворах фармакопейного молочного сахара

Рисунок 9 - Изменение содержания сухих веществ модельного раствора при культивировании 8 1ас№ ЭК и Ске^гУ-гОЗ

вии первых 13 ±1 часов Отмеченное снижение совпадает по времени с началом стационарной фазы развития культуры С kefyr У - 203 Данное обстоятель-

ство говорит о том, что штамм С kefyr Y — 203 более интенсивно утилизирует субстрат в период активного накопления биомассы, по истечении которого интенсивность утилизации снижается

При культивировании штамма S lactis SK наблюдается очень плавное снижение содержания сухих веществ на протяжении всего времени культивирования, что свидетельствует о достаточно стабильной скорости окисления лактозы как в период экспоненциального, так и ст ационарного роста

Таким образом, несмотря на выявленные различия в кинетике утилизации субстрата, очевидна целесообразность использования обоих штаммов для изучения утилизации углеводов в концентрированных растворах лакто-лактулозы

В четвертой главе изучены рост и утилизация углеводов различными штаммами дрожжей в модельных растворах лакто-лактулозы

Влияние способа стерилизации модельного раствора на рост и метаболическую активность дрожжей S lactis SK Модельный раствор готовили с использованием в качестве основы высокоочищенного сиропа лактулозы MLS — 50 («Milei», Германия) Для повышения содержания лактозы в модельный раствор добавляли фармакопейный молочный сахар, в результате, доля лактозы в смеси углеводов (лактулоза, лактоза, галактоза) составляла 21,9 ±0,3%, что соответствует аналогичному показателю в сиропе «Лактулоза пищевая», Россия

В ходе проведения предварительных исследований было отмечено потемнение модельного раствора после термической сгерилизации Потемнение раствора обусловлено наличием темноокрашенных продуктов реакции мела-ноидинообразования, протекающей между углеводами и аминосоединениями, содержащимися в дрожжевом экстракте Известно, что продукты реакции ме-ланоидинообразования могут ингибировать рост и метаболическую активность микроорганизмов Для оценки возможного ингибирования мы изучили рост и потребление лактозы дрожжами S lactis SK в модельных растворах, подвергшихся различным методам стерилизации, а именно термической и механической Термическую стерилизацию осуществляли автоклавированием в течении

15 минут при температуре 120°С Механическую стерилизацию проводили путем микрофильтрации Культивирование проводили при температуре 30е С в анаэробных условиях Измерение необходимых параметров проводили в начале и по завершении культивирования (таблица 2)

При обоих методах стерилизации наблюдается незначительное увеличение биомассы, что может быть следствием не полного использования энергии

Таблица 2 — Изменение биологических и других параметров модельного

раствора при различных способах стерилизации

Продолжительность кучьтиви-рования, ч Концентрация клеток дрожжей, млн/мл Концентрация жизнеспособных клеток дрожжей, млн/см3 Доля жизнеспособных клеток дрожжей, % Содержание сухих веществ, % рН, ед

термическая стерилизация

0 94 ±7 87 ±9 93 ±2 22,3 ±0,5 4,48 ±0,12

192 137 ±15 78 ±27 57 ±6 20,8 ±0,3 4,15 ±0,04

механическая стерилизация

0 95 ±15 89 ±12 94 ±2 22,5 ±0,1 4,97 ±0,08

192 218 ±22 194 ±19 89 ±5 15,2 ±0,3 4,10 ±0,05

субстрата при анаэробном процессе Наличие ингибирования метаболизма дрожжей подтверждаются незначительным изменением содержания сухих веществ, отмеченным в модельном растворе, прошедшем термическую стерилизацию Различие в изменении содержания сухих веществ, наблюдаемое после культивирования в модельных растворах, стерилизованных двумя способами, значительна (более чем в 4 раза) В связи с этим для дальнейших исследований использовали механическую стерилизацию

Изучение культивирование лактозоусваивающих дрожжей в модельном растворе лакто-лактулозы Для исследований использовали штаммы в (ас^Б ЭК и С ке!уг У — 203 Условия культивирования были такими же, как в исследованиях на модельных растворах молочного сахара В

результате анализа полученных результатов установили, что при культивировании дрожжей С к^уг У — 203 наб подаются более высокие показатели концентрации жизнеспособных клеток Это скорее всего связано со способностью данного штамма эффективнее использовать для роста различные углеводы в качестве источников углерода и энергии При сравнении кривых роста дрожжей в модельном растворе лакто-лдктулозы и в модельном растворе фармакопейного молочного сахара (рисунок 10) заметно, что и в том, и в другом модельных растворах развитие популяции дрожжевых клеток характеризуется поочередной сменой одних и тех же фаз развития, однако продолжительность этих фаз в разных модельных растворах существенно отличается В модельном растворе лакто-лактулозы длительность фаз роста приблизительно в два раза больше, вследствие этого время культивирования также увеличивается почти в два раза по сравнению с модельным раствором фармакопейного молочного сахара

770

О 10 20 30 40 50 80 70 80 90 100 110 120 Время культивирования ч

Рисунок 10 — Кривые роста культур Б 1асиз ЭК и С ке!уг У - 203 в различных модельных растворах

Более продолжительное время культивирования в модельном растворе лакто-лактулозы, по всей вероятности, связано с меньшей метаболической активностью дрожжей В свою очередь, пониженная метаболическая активность дрожжей в модельных растворах лакто-лактулозы является следствием взаимо-

действия механизмов индукции и репрессии синтеза ферментов при утилизации нескольких углеводов

Исследование углеводного состава растворов лакто-лактулозы при культивировании различных штаммов дрожжей Для изучения углеводного состава растворов лакто-лактулозы в образцах, отобранных через определенные промежутки времени в процессе культивирования, определяли содержание отдельных углеводов методом газо-жидкостной хроматографии В результате анализа полученных результатов установлено, что штаммы Б 1а.с11з ЭК и С кеГуг У - 203 в процессе метаболизма утилизируют одновременно как лактозу, так и лактулозу (рисунки 11, 12) Уменьшение содержания галактозы наблюдается тогда, когда из модельного раствора практически полностью

г?100

а 90

ta

5 80

5 70

6 60 s

50

| 40

| 30

I 20 I 10 h° о

лактулоза

• лактоза

..... алактоза = ,

Г

^ 100

а 90

я

§ 80

1 70

с;

fe 60

§• 50

S 40

I 30

£ 20 ф

5 10

5 о

v лактулоза уА

• лактоза

•—-......лактулоза ~ j

•■—■■• алактоза ~ /

20 30 40 50 Время культивирования

70 60 00 100

Рисунок 11 - Кинетика изменения степени утилизации углеводов при культивировании штамма С кефг У — 203

О 10 20 30 40 50 60 70 00 90 100 110 Время культивирования т ч

Рисунок 12 — Кинетика изменения степени утилизации углеводов при культивировании штамма S lactis SK

исчезают дисахариды В практическом отношении важное значение имеет различие в степени утилизации лактозы и лактулозы, которое зависит как от времени культивирования, так и от используемого штамма дрожжей Анализ приведенных зависимостей позволил предположить, что оптимальное время культивирования, то есть, момент времени, при котором наблюдается максимальная утилизация лактозы и минимальная утилизация лактулозы. определяется характером изменения во времени степени утилизации лактулозы — алак1улоза и пара-

метра Д| Параметр А, предложен нами и является разностью между степенью утилизации лактозы и степенью утилизации лактулозы Более наглядно высказанное предположение иллюстрируют кривые, приведенные на рисунке 13 Как видно из рисунка 13, в промежутке времени между 45 и 65 часами после начала культивирования параметр Д, изменяется незначительно (в пределах 3%), тогда как степень утилизации лактулозы в этот же промежуток времени увеличивается с 21 до 32% Из этого следует, что для нахождения т0„1имум, необходимо определить максимум функции Д2 = 1"(т), где Д2 = Д1 - «лает-улом (рисунок 14) Используя уравнения алактулоза = 1(т) и аМХ10я - Г(т), при помощи ЭВМ был определен максимум функции Д2 = 1'(т) для каждого штамма дрожжей, который

О 10 20 30 40 50 60 70 80 ВО 100 Время культивирования х ч

Рисунок 13 - Кинетика изменения степени утилизации лактулозы и разности Д1 при культивировании С ке!уг У - 203

О 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 т ч

Рисунок 14 - Кинетика изменения параметра Д2 при культивировании дрожжей С kefyr Y -203 и S lactis SK

соответствует значениям А2 = -9%, т = 50 часов для штамма Э ¡асИэ ЭК в промежутке времени от 5 до 96 часов и Д2 = 19%, т = 48 часов в промежутке времени от 0 до 93 часов для С кеГуг У - 203 Руководствуясь найденными значениями оптимального времени культивирования, мы рассчитали содержание углеводов в модельных растворах при культивировании различных штаммов дрожжей (таблица 3) Для расчетов использовали уравнения ауглеЕОД = Г(т) Полученные результаты свидетельствуют о большей эффективности применения дрожжей С кеГуг У - 203 для уменьшения содержания лактозы в сиропах лактулозы Так, после микробиологической обработки раствора лакто-лактулозы

дрожжами С ке£уг У — 203 в течение 47 — 49 часов достигается относительно высокая степень утилизации лактозы 62 ±2% Недостатком микробиологической обработки является достаточно значимые потери лактулозы в процессе микробной утилизации - 22 ±3% от начального содержания (таблица 3)

Таблица 3 — Содержание углеводов в модельном растворе при оптималь-

ном времени культивирования

Наименование углевода Содержание углеводов % от начального

Э ЬйвЭК С ке1уг У - 203

Время культивирования 50 ±1 ч Время культивирования 48 ±1 ч

Галактоза 149 ±22 150 ±10

Лактоза 54 ±9 38 ±2

Лактулоза 70 ±6 78 ±3

В пятой главе описаны основные направления практической реализации результатов исследований, представленные в виде схемы на рисунке 15

Рисунок 15 — Направления практической реализации результатов исследований

В качестве одного из примеров практической реализации результатов исследований разработана частная технология получения сиропа лактулозы с пониженным содержанием лактозы, в которой использовано культивирование лактозоусваивающих дрожжей для уменьшения содержания лактозы

Технология предусматривает изомеризацию лактозы в лактулозу, микробиологическую обработку раствора лакто-лактулозы с последующей очисткой и сгущением

В таблице 4 приведена сравнительная характеристика сиропа, полученного по разработанной технологии и сиропа «Лактулоза пищевая»

Таблица 4 - Сравнительная характеристика сиропов лактулозы

Наименование показателя Характеристика продукта

Сироп лактулозы с пониженным содержанием лактозы Концентрат лактулозы «Пищевая лактулоза»

Плотность, кг/м3 1258 (±3) 1265 (±4)

Массовая доля, % сухих веществ, в т ч 57,1 (±0,7) 58,0 (±2,8)

Лактулозы 38,5 (±0,6) 36 4 (±0,7)

Лактозы 6,0 (±0,4) 12,2 (±0,5)

Галактозы 10,8 (±0,4) 7,1 (±0,3)

Золы 0,58 (±0,09) 0,63 (±0,15)

Другие вещества 3,1 (±0,1) 1,5 (±0,1)*

*Другие вещества - неанализируемые углеводы и вещества, образовавшиеся в процессе жизнедеятельности дрожжей

Как следует из данных, приведенных в таблице 4, содержание лактозы в сиропе, полученном по разработанной технологии, более чем в два раза меньше, чем в концентрате «Лактулоза пищевая», а содержание лактулозы в обоих сиропах практически одинаковое Результаты наблюдений за опытными образцами сиропа лактулозы с пониженным содержанием лактозы свидетельствуют об отсутствии выпадения кристаллов лактозы при хранении в течении одного года

ВЫВОДЫ

1 Теоретически обоснована и экспериментально доказана возможность использования лактозоусваивающих дрожжей для снижения содержания лактозы в растворах лакто-лактулозы

2 Установлено, что интенсивность утилизации лактозы выше в модельных растворах молочного сахара-сырца по сравнению с модельными растворами фармакопейного молочного сахара

3 Выяснено, что применение одностадийного способа приготовления посевного материала дрожжей позволяет получить инокулят, обеспечивающий высокую интенсивность утилизации лактозы

4 Показано, что использование дрожжевого экстракта хлебопекарных дрожжей способствует повышению интенсивности утилизации лактозы

5 Установлено, что штаммы дрожжей С кеГуг У - 203, и Э ксйэ ЯК способны более интенсивно утичизировать лактозу в концентрированных модельных растворах молочного сахара по сравнению с другими исследованными штаммами

6 Выяснено, что замена термическом стерилизации модельного раствора лакто-лактулозы механической (микрофильтрация) позволяет повысить метаболическую активность дрожжей благодаря исключению ингибирующего действия со стороны продуктов реакции меланоидинообразования, наблюдаемой при термической сгерилизации

7 Доказано, что развитие популяции дрожжевых клеток штаммов С кеГуг У -203 и Б 1асиз ЭК в многокомпонентных по углеводному составу модельных растворах лакто-лактулозы происходит медленнее, чем в модельных растворах молочного сахара

8 Установлено, что при культивировании штамма С ке!уг У - 203 в растворе лакто-лактулозы с начальным содержанием лактулозы и лактозы 14,0 ±0,3% и 4,4 ±0,1% соответственно наблюдается максимальная утилизация лактозы — 62 ±2% и минимальная лактулозы - 22 ±3% после 47 — 49 часов культивирования

9 Определены пути практической реализации результатов исследований, разработана частная технология получения сиропа лактулозы с пониженным со-

держанием лактозы (ТУ 9229-008-46162908-2004 изменение №1 от 26 12 06 ), оценена экономическая эффективность, социальная значимость и экологическая безопасность разработанной технологии

Основное содержание диссертации изложено в следующих работах

1 Василисин, С В Регенерация питательных сред [Текст] / С В Василисин, Н Н Капленко, Г С Гуреева, Г1Б Новаков, М А Шмакова // Материалы международ научно-практ конф «Пробиотические микроор1 анизмы - современное состояние вопроса и перспективы использования» Москва 2002 - с 77

2 Храмцов, А Г Конструирование продуктов функционального питания на основе электроактивирования молочного белково-углеводного сырья [Текст] / А Г Храмцов, С А Рябцева, А П Поверин, П Б Новаков М А Шмакова // Ма-тиалы международ научно-практ Конф «Пробиотические микроорганизмы -современное состояние вопроса и перспективы использования» - Москва, 2002 - с 75

3 Евдокимов, И А Регенерация отработанных кулътуральных жидкостей [Текст] / И А Евдокимов, С В Василисин, Н Н Капленко, П Б Новаков, М А Шмакова // Сборник научных трудов СевКав ГТУ серия «Продовольствие» — Ставрополь СевКав ГТУ, 2002 -с 68-71

4 Евдокимов, И А Применение электроактивации для создания продуктов функционального питания [Текст] / И А Евдокимов, С А Рябцева С В Василисин, А П Поверин, П Б Новаков П Материалы 2-ой Всероссийской научно-техн конф «Современные достижения биотехнологии», том 2 Ставрополь, 2002 -с 90

5 Евдокимов, И А Бифидогенные свойства электроактивированной изомери-зованной подсырной сыворотки [Текст] / И А Евдокимов, С А Рябцева, Д В Харитонов, С В Василисин, П Б Новаков, А П Поверин // Известия ВУЗов Пищевая технология -2003 -№5,6 -с 53 - 55

6 Евдокимов И А Создание продуктов функционального питания с изомери-зованной молочной сывороткой [Текст] / И А Евдокимов, С А Рябцева П Б Новаков, В Г Папин, А Д Лодыгин // Тезисы докладов международной конференции «Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания Современное состояние и перспективы» - Москва, 2004 - с 99

7 Евдокимов, И А Перспективы утилизации молочной сыворотки дрожжами S lactis Sk [Текст] / И А Евдокимов, Д В Харитонов, С А Рябцева, П Б Новаков // Сборник материалов IV специализированного конгресса «Молочная промышленность Сибири» — Барнаул, 2004 — с 44-45

8 Евдокимов, И А Изучение процесса утилизации лактозы в аэробных условиях [Текст] / И А Евдокимов, П Б Новаков, Д В Харитонов, С А Рябцева // Сборник научных трудов участников межрегионального научно-практического семинара «Теория и практика новых технологий а производстве продуктов питания» -Омск, 2005 - с 133-135

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Роль лактулозы в здоровом питании.

1.2. Физико-химические свойства лактулозы.

1.3. Способы получения и очистки лактулозы.

1.4. Биотехнология утилизации лактозы.

1.4.1. Сбраживание лактозы бактериями.

1.4.1.1. Молочнокислое брожение.

1.4.1.2. Пропионовокислое брожение.

1.4.1.3. Маслянокислое брожение.

1.4.2. Утилизация лактозы плесневыми грибами.

1.4.3. Сбраживание и окисление лактозы дрожжами и дрожжеподобными микроорганизмами.

1.5. Цели и задачи исследований.

Глава 2. Организация работы и методы исследований.

2.1. Объекты исследований.

2.2. Характеристика исследуемых дрожжей.

2.2.1. Trichosporon pullulans.

2.2.2. Leucosporidium scotti.

2.2.3. Candida kefyr.

2.2.4. Kluyveromyces marxianus var.lactis.

2.3. Методы исследований.

2.4. Математическая и статистическая обработка результатов экспериментов.

Глава 3. Изучение окисления лактозы дрожжами в модельных растворах молочного сахара.

3.1. Влияние способа приготовления посевного материала на интенсивность окисления лактозы.

3.2. Влияние различных видов дрожжевого экстракта на интенсивность окисления лактозы.

3.3. Изучение окисления лактозы в модельных растворах молочного сахара различного качества.

3.4. Исследование окисления лактозы различными штаммами дрожжей.

Глава 4. Исследование окисления углеводов дрожжами в модельных растворах лакто-лактулозы.

4.1. Влияние способа стерилизации модельного раствора на рост и метаболическую активность дрожжей.

4.2. Изучение культивирования лактозоусваивающих дрожжей в модельных растворах лакто-лактулозы.

4.3. Исследование углеводного состава модельных растворов при культивировании различных штаммов дрожжей.

4.4. Оптимизация выбора штамма дрожжей и времени культивирования.

Глава 5. Практическая реализация результатов исследований.

5.1. Направления практической реализации результатов исследований.

5.2. Разработка технологии лактулозы с пониженным содержанием лактозы.

5.2.1. Технологический процесс получения сиропа лактулозы с пониженным содержанием лактозы.

5.2.2. Оценка экономической эффективности производства сиропа лактулозы с пониженным содержанием лактозы.

5.2.3. Социальная значимость и экологическая безопасность разработанной технологии.

Выводы.

Нормальная микрофлора кишечника играет исключительно важную роль в формировании и функционировании различных органов и систем организма человека за счет разнообразных метаболитов, ферментов, витаминов, биологически активных веществ, антигенов и других соединений, которые образуются в процессе микробиологической трансформации [8].

Бифидобактерии являются наиболее значимыми представителями нормобиоценоза кишечника и выполняют ряд важнейших функций. Прежде всего, они осуществляют физиологическую защиту от проникновения микробов и токсинов во внутреннюю среду организма за счет ассоциации со слизистой оболочкой кишечника и высокой антагонистической активности по отношению к патогенным и условно патогенным микроорганизмам. Кроме того, бифидофлора обладает иммуномодулирующим действием: регулирует функции гуморального и клеточного иммунитета, препятствует деградации секреторного иммуноглобулина А, стимулирует образование интерферона и вырабатывает лизоцим [8].

При воздействии на организм различных неблагоприятных экзогенных и эндогенных факторов микробиоценозы кишечника выходят из состояния биологического равновесия. При этом, в первую очередь резко снижается уровень бифидофлоры, что приводит к увеличению количества потенциально патогенных микробов, усилению генетического обмена и формированию измененных клонов, несущих плазмиды лекарственной устойчивости [8]. В результате дисбиотических явлений нарушается обмен веществ, снижается уровень иммунной защиты организма, возникают желудочно-кишечные, аллергические и другие заболевания [45].

Таким образом, проблему создания, поддержания и восстановления нормальной кишечной микрофлоры необходимо рассматривать как одну из наиболее актуальных для здоровья человека.

Большие возможности для коррекции кишечной микрофлоры представляет питание человека или пищевые продукты, содержащие вещества, которые стимулируют (или промотируют) рост бифидофлоры в кишечнике.

В настоящее время наиболее широко применяемым промотором или бифидус-фактором является лактулоза [39, 77]. Бифидогенные свойства этого углевода были открыты австрийским врачом-педиатром Petuely F. Он впервые выделил лактулозу из состава женского молока и обнаружил ее благоприятное действие на нарушенный микробиоценоз кишечника и состояние здоровья новорожденных детей, находящихся на искусственном вскармливании [119].

В конце XX века отмечен резкий рост интереса к пищевым продуктам, оказывающим регулирующее и лечебное действие на организм человека в целом или на его отдельные органы и системы. Такие продукты называют функциональными, здоровыми или нутрицевтическими. Одним из наиболее перспективных направлений в этой области является обогащение пищевых продуктов веществами, способными восстанавливать нарушенную микроэкологию кишечника, в частности, лактулозой. В настоящее время производится широкий спектр пищевых продуктов с добавлением лактулозы, а именно, молочные и мясные продукты, хлебобулочные изделия, напитки и другие продукты [1,2,15, 21,22,27,31, 32, 58, 66, 73].

В промышленности для обогащения пищевых продуктов лактулозой применяют концентраты лактулозы, производимые чаще всего в виде сиропов. Такие сиропы, помимо лактулозы, содержат побочные или минорные углеводы, снижающие долю лактулозы в концентрате. В сиропах, производимых в России, наибольшее содержание среди минорных углеводов приходится на лактозу. Помимо снижения концентрации лактулозы, повышенное содержание лактозы является причиной образования кристаллического осадка лактозы при хранении готового продукта, что в свою очередь снижает потребительскую привлекательность сиропов лактулозы.

Современные способы эффективного удаления лактозы предусматривают применение токсичных реагентов, для удаления которых применяют сложные и дорогостоящие методы, в частности, селективный ионообмен. Кроме того, использование таких реагентов создаёт потенциальную опасность загрязнения готового продукта токсичными веществами. В связи с этим представляют интерес методы, основанные на биохимическом и микробиологическом удалении лактозы.

Целью диссертационной работы является изучение роста и метаболической активности лактозоусваивающих дрожжей в растворах молочного сахара и лакто-лактулозы и определение направлений использования лактозоусваивающих дрожжей в технологии лактулозы и других областях.

На защиту выносятся следующие основные положения и результаты работы. теоретическое обоснование применения лактозоусваивающих дрожжей для удаления лактозы в технологии лактулозы; закономерности роста дрожжей и утилизации лактозы в концентрированных модельных растворах молочного сахара; закономерности роста дрожжей и утилизации различных углеводов в модельных растворах лакто-лактулозы.

САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ

26.01.08.922.П.000466.10.06 от 06.10.2006 г.

Настоящим санитарно-эпидемиологическим -заключением удостоверяется, что продукция: Концентрат лактулозы изготовленная в соответствии ТУ 9229-008-46162908-2004

СООТВЕТСТВУЕТ (НИ

МШНШ^ранитарпым правилам (ненужноезачеркнуть,указать полное наименование юсударственных санитарно-эпидемиологических правил и нормативов):

СанПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов"

Организация-изготовитель ООО "Легион" г.Ставрополь, ул. Коломийцева, 12 "б" (Российская Федерация)

Получатель санитарно-эпидемиологического заключения ООО "Легион" г. Ставрополь, ул. Коломийцева, 12 "б" (Российская Федерация)

Основанием для признания продукции, соответствующей (не соответствующей) СаНИТарНЫМ правилам, являются (перечислигь рассмотренные протоколы исследований, наименование учреждения, проводившего исследования, другие рассмотренные документы):

Протокол лабораторных испытаний Ne 453 от 05.10.06г. ИЛЦ филиала ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Ставропольском крае в г. Ставрополе" аттестат "Системы" № ГСЭН.ЯЦЩОА. 059/1 зарегистрированный в Госреестре РОСС.RU.0001.511582 от 17.11.04г Экспертное заключение на виды продукции от 06.10,06 г. Санитарно-эпидемиологическое заключение на производство № 26.01.08.000.М.002177.09.06 от 27.09.06г. и

W>

0169195

Ч/" wmm+msgkш-л ■ ттз ь

VII московский МЕЖДУНАРОДНЫЙ САЛОН ИННОВАЦИЙ И ИНВЕСТИЦИЙ диплом шм^тауметш,

Северо-Кавказский Государственный

Технический Университет за разработку

Технология производства лактулозы

Министр образования и науки Российской Федерации

А. А. Фурсенко

МОСКВА, ВВЦ, 3007

1. Акулова, А.В. Создание продуктов питания с бифидогенной добавкой [Текст] А.В. Акулова, Т.Б. Цыганков Тезисы докладов научнопрактической конференции «Профессивные, экологически безопасные технологии хранения и комплексной переработки сельхозпродукции для создания продуктов питания повышенной пищевой и биологической ценности продуктов XXI века». М.: Россельхозакадемия, 1998. с.

2. Дисбактериозы у детей. Учебное пособие для врачей и студентов./ Под ред. Воробьева А.А., Пака Г.- М.: КМК Лтд., 1998. 64с.

3. Барыбина, Л.И. Изучение качественных показателей модельных фаршевых систем, содержащих КСБУ [Текст] Л.И. Барыбина, С И Постников Сборник научных трудов СевКав ГТУ серия «Продовольствие». Ставрополь: СевКав ГТУ, 1999. с.56

4. Максимов В.И., Родоман В.Е. Кислотность кишечника как защитный фактор организма хозяина //Журн. Микробиол., 1998, №4. 96-101.

5. Василисин, С В Регенерация питательных сред [Текст] С В Василисин, Н.Н. Капленко, Г.С. Гуреева, П.Б. Поваков, М.А. Шмакова Тезисы докладов международной научно-практической конференции «Пробиотические микроорганизмы современное состояние вопроса и перспективы использования». Москва: 2002. с. 77.

6. Вижинтайте, Г.Д. Углеводы молока и молочных продуктов и методы их определения [Текст] Г.Д. Вижинтайте, П.Ф. Дьяченко. ЦНИИТЭИ, 1968.-40С.

7. Горбатова, К.К. Биохимия молока и молочных продуктов К.К. Горбатова. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1984. 344 с.

8. Груновская, В.А. Использование бифидобактерий в рационах молодняка сельскохозяйственных Эрвольдер, С А. животных Гудков [Текст] В.А. Груновская, Т.М. М.: М.: Обзорная информация. АгроНИИТЭИММП, 1991. 24 с.

9. Далев, П. Способ приготовления лактулозы из лактозы [Текст] П. Далеев, П. Цонева Труды хим.-фарм. ин-та (НРБ), 1982. 1 2 с. 95 102.

10. Дисбактериозы у детей [Текст] Под ред. Воробьева А.А. и Пака Г. Учебное пособие для врачей и студентов. М.: КМК Лтд, 1998. 64с.

11. Евдокимов, И.А. Бифидогенные свойства электроактивированной изомеризованной подсырной сыворотки [Текст] И.А. Евдокимов, А. Рябцева, Д.В. Харитонов, С В Василисин, П.Б. Новаков, А.П. Поверин Известия ВУЗов. Пищевая технология. 2003. №5,6. с. 53 55.

12. Евдокимов, И.А. Изучение процесса утилизации лактозы в аэробных условиях [Текст] И.А. Евдокимов, П.Б. Иоваков, Д.В. Харитонов, А. Рябцева Сборник научных трудов участников межрегионального научнопрактического семинара «Теория и практика новых технологий а производстве продуктов питания». Омск, 2005. с. 133-135.

13. Евдокимов, И.А. Изучение утилизации лактозы в аэробных условиях на модельных растворах молочного сахара сырца [Текст] И.А. Евдокимов, П.Б. Поваков, А. Рябцева, Д.В. Харитонов Сборник научных трудов СевКав ГТУ серия «Продовольствие». Ставрополь: СевКав ГТУ, 2006. с. 39-41.

14. Евдокимов, И.А. Перспективы утилизации молочной сыворотки дрожжами S.lactis Sk. [Текст] И.А. Евдокимов, Д.В. Харитонов, А. Рябцева, П.Б. Новаков Сборник материалов IV специализированного конгресса «Молочная промышленность Сибири». Барнаул, 2004. с. 44-45.

15. Евдокимов, И.А. Применение электроактивации для создания продуктов функционального питания [Текст] И.А. Евдокимов, А. Рябцева, С В Василисин, А.П. Поверин, П.Б. Новаков Материалы 2-ой Всероссийской научно-технической конференции «Современные достижения биотехнологии», том 2.: Ставрополь, 2002. с. 90.

16. Евдокимов, И.А. Регенерация отработанных культуральных жидкостей [Текст] И.А. Евдокимов, С В Василисин, Н.Н. Капленко, П.Б. Новаков, М.А. Шмакова Сборник научных трудов СевКав ГТУ серия «Продовольствие». Ставрополь: СевКав ГТУ, 2002. с. 68-71.

17. Евдокимов, И.А. Создание продуктов функционального питания с изомеризованной молочной сывороткой [Текст] И.А. Евдокимов, А. Рябцева, П.Б. Иоваков, В.Г. Папин, А.Д. Лодыгин Тезисы докладов международной конференции «Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы». Москва, 2004. с. 99.

18. Европейская заявка Х» 0322499, МКИ С13К 13/

19. Способ получения лактулозного сиропа высокой чистоты и получаемый продукт [Текст] Сирак, заявл.28.03.88, опубл. 5.07.89, приор. Италии 30.12.87 (2326587).

20. Еремин, Г. Б. Технология этилового спирта из молочной сыворотки [Текст] Г.Б. Еремин, П.Н. Мешкова Повое в технике и технологии переработки молочной сыворотки. Углич: 1981. 55-59.

21. Залашко, М.В. Биотехнология переработки молочной сыворотки [Текст] М.В. Залашко. М.: Агропромиздат, 1990. 192 с. [

22. Залашко, М.В. Способность лактозосбраживающих дрожжей к образованию этанола [Текст] М.В. Залашко, А.П. Капич, А.П. Картель, М.М. Грушенко Прикладная биохимия и микробиология. 1998. №2. с. 164-167.

23. Залашко, М.В. Этиловый спирт на основе молочной сыворотки [Текст] М.В. Залашко, А.Н. Картель, Л.Т, Мишин, К.В. Объедков Производство спирта и ликероводочных изделий. 2001. JVb3. с. 1 2 1 3

24. Заявка Российской Федерации 2000115536, МКИ А23С9/

25. Молочный напиток для геродиетического питания [Текст] Липатов П.П., Андреенко Л.Г., Антипова Т.А. Приор. 15.06.2000, опубл. 27.04.2002.

26. Заявка Франции 2147925, МКИ С13К 9/

27. Способ получения сиропов лактулозы и новые продукты, получаемые при этом [Текст] Моринага Милк.Инд., заявл. 19.05.72, опубл. 16.03.73, (34454).

28. Заявка ФРГ 2224680, МКИ С13К 13/

29. Способ получения лактулозной патоки [Текст] Моринага Мил к. Инд., заявл. 19.05.72, опубл. 7.10.76, приор. Японии 22.05.71 (34454).

30. Заявка Японии 51-23573, МКИ С13 К 13/

31. Способ очистки сиропа лактулозы [Текст] Моринага Нюгёк К., заявл. 26.09.72, опубл. 17.07.76.

32. Ивен, М. Ферментация сыворотки Penicillium javanicum [Текст] М. Ивен, Р. Гриншельде Ттуды 21 Международного молочного конгресса. М.: 1982.-Т.1.-КН.2.-С. 396-397.

33. Использование микроорганизмов и их продуцентов в народном хозяйстве [Текст] под ред. А. Самцевича, М.В Залашко, Н.И Мильто, Б.Х Шкляра. Минск: Наука и техника, 1973. 191 с.

34. Клепкер, В.М. Разработка технологии творожных изделий с бифидогенной активностью [Текст] автореферат дис. канд. тех. наук. Ставрополь, 2005-18 с.

35. Козлов, Ю.А. Питательные среды в медицинской микробиологии [Текст] Ю.А. Козлов. М.: Медгиз, 1950. 252с.

36. Конн, Г.О. Синдромы печеночной комы и лактулоза [Текст] Г.О. Конн, М.М. Либертал. М Медицина, 1983. с. 339 377.

37. Коновалов, А. Биохимия дрожжей [Текст] А. Коновалов. М.: Пищевая промышленность, 1980.-271 с.

38. Куприянов, В.А. Исследование и разработка технологии вареных колбас, обогащенных свекловичными волокнами и лактулозой [Текст]: дисс. канд. тех. наук. М., 2003 139 с. приор. Японии 22.05.71

39. Лактоза и ее производные в производстве алкогольных напитков [Текст] Серов А.В., Евдокимов И.А., Ким В.В. и др. Сборник российских научно-технических работ, посвященных лактулозе «Российская лактулоза. Чудо из молока». М.: Изд-во МИИТ, 1999. 86 90.

40. Лахтин, В.М. Лектины в исследовании белков и углеводов [Текст] В.М. Лахтин Итоги науки и техники. Сер. Биотехнология. Т.2./ Под ред. А.А. Клесова. М.: ВИНИТИ, 1987. 290 с.

41. Ленипджер, А. Биохимия [Текст] А. Ленинджер. М.: Мир 1976. 957 с.

42. Липатов, Н.Н. Вопросы экологизации пищевых производств [Текст] Н.Н. Липатов, Л.Л. Лисенкова Вестник РАСХН. 1995. N3.- с.22 23.

43. Липатов, Н.Н. Экология молока и молочных продуктов [Текст] Н.Н. Липатов Обзорная информация. М.: АгроНИИТЭИММН, 1991.- 69 с.

44. Лодыгин, А.Д. Разработка безотходной технологии бифидогенного концентрата из молочной сыворотки [Текст]: дисс. канд. техн. Наук: 05.18.04: защищена 21.05.99-Ставрополь, 1999.- 126 с.

45. Максимов, В.И. Лактулоза и микроэкология толстой кишки [Текст] В.И. Максимов, В.Е. Родоман, В.М. Бондаренко Жури, микробиол. 1998.

46. Максимов, В.И. Кислотность кишечника как защитный фактор организма хозяина [Текст] В.И. Максимов, В.Е. Родоман 1998.-№4.-с.96-101.

47. Микробы и их метаболиты [Текст] под ред., Л.С. Залашко, B.C. Олешко, И.С. Важинской. Минск: Наука и техника, 1974. 254 с.

48. Микроорганизмы продуценты биологически-активных веществ [Текст] под ред. А. Самцевича, М.В Залашко, А.Г. Лобанюка. Минск: Наука и техника, 1973.-204 с.

49. Научно-технические основы биотехнологии молочных продуктов нового поколения: Учеб. Пособие [Текст] А.Г. Храмцов, Б.М. Синельников, И.А. Евдокимов, В.В. Костина, А. Рябцева. Ставрополь.: СевКав ГТУ, 2002.-118с. //Журн. Микробиол.

50. Новаков, П.Б. Культивирование дрожжей C.kefyr в растворах лактолактулозы [Текст] П.Б. Новаков, И.А. Евдокимов, Д.В. Харитонов, А. Рябцева Сборник материалов симпозиума международной молочной федерации «Лактоза и её производные». Москва, 2007. с. 133.

51. Новаков, П.Б. Влияние комплекса биологически-активных веществ молочной сыворотки на метаболизм дрожжей S.lactis SK [Текст] П.Б. Новаков, И.А. Евдокимов, А. Рябцева Сборник семинара материалов международного научно-практического «Современные направления переработки сыворотки». Ставрополь, 2006. с. 80.

52. Панин, А.Н. Иммунобиология и кишечная микрофлора [Текст] А.Н. Панин, Н.И. Малик, Е.В. Малик. 1998.-48 с.

53. Патент Австрии 288595, МКИ А61К 27\

54. Способ производства концентрата лактулозы [Текст] Лаевозан. заявл. 7.02.69, опубл. 10.03.71.

55. Патент Великобритании 2031430, МКИ С07Н 3/

56. Процесс производства лактулозы [Текст] Молтени. Италии 17.12.82 (24814).

57. Патент Великобритании 2143826, МКИ С13К 13/00, 5/

58. Способ очистки лактулозы [Текст] Сирак, заявл. 20.06.84, приор.Италии 20.06.83.

59. Патент Германии №297999, МКИ С13К 13/

60. Способ получения опубл.20.02.85, Заявл. 29.09.78, опубл. 23.08.

61. Приор. М.: Аграрная наука, ИК «Родник», лактулозы [Текст] Дюпер (Нидерланды) заявл 20.06.90, опубл.30.01.92.

62. Патент Р.Ф 2036231, МКИ С 12 N1/16, С 12 С 11/02, С12 Р7/06 Закваска для получения пищевого этанола на основе молочной сыворотки [Текст] Колодкин A.M., Колодкин Ю.М., Ворсина Г.В. Приор.24.09.92, опубл.27.05.95,бюл.№15.

63. Патент Р.Ф 2044774, МКИ С13К 5/

64. Способ получения сиропа лактулозы [Текст] Храмцов А.Г., Кунижев СМ., Виноградская Е., Чепурной И.П., Рябцева А., Павлюк Е.А. Приор.06.11.91, опубл.27.09.95, бюл.№27.

65. Патент Р.Ф 2057798, МКИ С 12 G 3/00 Способ получения спиртасырца из молочной сыворотки [Текст] Черемисина Л.Ф., Ахремчик Т.Д. Приор.09.01.92, опубл. 10.04.95, бюл..№10.

66. Патент РФ Х» 2101358, МКИ С13К 5/00, А23С 21/

67. Способ получения сиропа лактулозы [Текст] Храмцов А.Г., Евдокимов И.А., Рябцева А., Серов А.В. Приор.14.03.94, опубл. 10.01.98, бюл.Хо1.

68. Патент США 3546206, МКИ С13К 13/

69. Способ получения сиропа лактулозы [Текст]. Опубл. 01.12.70.

70. Патент США 4536221, МКИ С13К 5/

71. Способ получения лактулозы из лактозы в виде сиропа или кристаллического продукта [Текст] Сирак. Заявл. 1.08.83, опубл.20.08.85., приор. Италии 17.12.82 (24814).

72. Перт, Д. Основы культивирования микроорганизмов и клеток [Текст] Д. Перт. М.: Мир, 1975. 331 с.

73. Практикум по микробиологии: учеб. пособие для студ. высш. учеб. заведений [Текст] А.И. Петрусов, М.А. Егорова, Л.М. Захарчук и др.; Под ред. А.И. Петрусова. М.: Издательский центр «Академия», 2005. 608 с.

74. Применение лактулозы в молочных продуктах [Текст] Российская лактулоза XXI век. М.: Изд-во МИИТ, 2000. с.97 1 0 1

75. Применение нормазы в клинической практике [Текст] Под ред. В.П. Яковлева Материалы симпозиума. М.: 1990. 110 с.

76. Рябцева, А. Разработка физико-химических основ технологии лактулозы [Текст]: дисс.... док. тех. наук. Ставрополь, 2001. 362 с.

77. Рябцева, А. Технология лактулозы [Текст] А. Рябцева Учебное пособие. М.: ДеЛи принт, 2003. 232 с.

78. Серов, А.В. Химия и физика лактозы и её производных Серов. Ставрополь: СевКавГТУ, 2003. 116 с. [Текст] А.В.

79. Серов, А.В. Теоретическое обоснование и экспериментальные исследования химико-технологических нроблем получения, определения и использования лактозы и её производной лактулозы [Текст]: дисс. док, тех. Наук. Ставрополь. 2004. 308 с.

80. Стейниер, Р. Мир микробов [Текст] Р. Стейниер, Э. Эдельберг, Д. Ингрэм. Том 1. М.: Мир 1979. 320 с.

81. Стейниер, Р. Мир микробов [Текст] Р. Стейниер, Э. Эдельберг, Д. Ингрэм. Том 3. М.: Мир 1979. 486 с.

82. Суюнчева, Б.О. Разработка технологии бифидогенного концентрата из молочного белково-углеводного сырья для хлебопечения [Текст]: автореферат дисс.... канд. техн. наук. Ставрополь, 2004 24 с.

83. Трифонова, И.Ю. Исследование утилизации молочной сыворотки дрожжами Kluyveromyces marxianus var. lactis [Текст] И.Ю. Трифонова, Ю.Л. Гуревич Биотехнология. 1997. №11 12. с. 48 50.

84. Тутов, И.К. Основы биотехнологии ветеринарных препаратов И.К. Тутов, В.И. Ситьков [Текст] Учебное пособие для студентов высших учебных заведений по специальности 310800 Ветеринария. Ставрополь, 1997.-253 с.

85. Урбах, В.Ю. Статистические методы в биологических и медицинских исследованиях [Текст] В.Ю. Урбах. М.: Медицина, 1975. 296 с.

86. Успехи технической микробиологии [Текст] под ред., А. самцевича, М.В. Залашко, Е.С. Гуриновича. Минск: Наука и техника, 1968. 238 с.

87. Химия углеводов [Текст] Кочетков Н.К., Бочков А.Ф., Дмитриев Б.А. и др. М.: Химия, 1967. 672 с.

88. Храмцов, А. Г. Молочный сахар Агропромиздат, 1987. 224 с. [Текст] А.Г. Храмцов. М.:

89. Храмцов, А.Г. Конструирование продуктов функционального питания на основе электроактивирования молочного белково-углеводного сырья [Текст] А.Г. Храмцов, А. Рябцева, А.П. Поверин, П.Б. Новаков, М.А. Шмакова Тезисы докладов международной научно-практической конференции «Пробиотические микроорганизмы современное состояние вопроса и перспективы использования». Москва, 2002. с. 75.

90. Храмцов, А.Г. Молочный сахар [Текст] А.Г. Храмцов. М.: Агропромиздат, 1987. 224 с.

91. Чеботарев, Л. Н. Интенсификация производства этилового спирта из молочной сыворотки [Текст] Л. Н. Чеботарев Труды МТИПП. 1981. -Яо 2 с 6 2 6 5

92. Швец, В.Н. Исследование процесса сбраживания молочной сыворотки [Текст] В.Н. Швец, Л.А. Иванова Известия ВУЗов. Пищевая технология. 1995. №5-6. с. 58 60.

93. Шевелева, А. Пробиотики, пребиотики и пробиотические продукты [Текст] А. Шевелева Вопросы питания. N2. 1999. с.32 40.

94. Яковлева, О.П. Разработка методов получения углеводов для детского питания [Текст]: автореф. Дисс.... канд. тех .наук. Киев, 1963. 22 с. 79. Al-Shabibi, М.М.А. Fermentation of whey filtrate by Kluyveromyces frasilis: the effect on cell lipids [Text] M.M.A. Al-Shabibi, N.A.J. Younis Can. Inst. Food Sci. Technol. J. 1984. v. 17. №2. p. 117 120.

95. Barion, M. Valorisation du lactose: La voie chimigue [Text] M. Barion Process. 1989. N1045 -C.41-43.

96. Brady, D. Production of ethanol by the thermotolerant yeast Kluyveromices marxianus IMB3 during growth on lactose-containing media [Text] D. Brady, R. Marchant Biotechnology letters. 1994. v. 16. №7. p. 737 740.

97. Carlotti, A. Yeast production from crude sweet whey by a mixed culture of Candida kefyr LY496 and Candida valida LY497 [Text] A. Carlotti, F. Jacob, J. Perrier, S. Poncet Biotechnology letters. 1991. v. 13. «6. p. 437 440.

98. Conner, D.E. Ability of probiotic and soluble complex carbohydrates supplemented in the starting feed to decrease colonization of Salmonella in ceca of broiler chicks infected at hatch [Text] D.E. Conner, E.T. Moran Poult.Sci. 1 9 9 2 v 7 1 l p. 145.

99. Duvnjak, Z. Production of Alcohol and biomass from various carbohydrates by Kluyveromyces fragilis [Text] Z. Duvnjak, L. Houle, K. Molk Biotechnology letters. 1987. v. 9. №5. p. 343 346. 86. El-Samragy, Y.A. The influence of sodium chloride on the activity of yeast in the production of single cell protein in whey permeate [Text] Y.A. ElSamragy, R.R. Zall J. dairy Sci. 1988. v. 71. p. 1135 1140.

100. Esser, K. Alcohol production by biotechnology [Text] K. Esser, U. Schmidt Proc. Biochem. 1982. "4. p. 46 49.

101. Fatma, I. Production of single proteiri from yeast grown in whey [Text] I. Fatma, S. Awatif// Acta Alimentaria. 1991. v. 20, p. 205 213.

102. Ferrari, M. Ethanol production from concentrated whey permeate using fed batch culture of Kluyveromyces fragilis [Text] M. Ferrari, L. Loperena, H. Varela Biotechnology letters. 1994. v. 16. M2. p. 205 210.

103. Foda, M. Production of fungal enzymes and protein from high salt cheese wheys [Text] M. Foda J. Sci. Food Agric. 1984. v. 32. .№11. p. 1109 -1114.

104. Friend, B.A. Industrial alcohol production via whey and grain fermentation [Text] B.A. Friend, M.L. Conningham, K.M. Shahani Agricultural wasters. -1982.-Xo4.-p.55-63.

105. Fujita, K. Production of lactosucrose and its properties [Text] K. Fujita, S. Kitahata In: M.A.Clarke (Editor), Carbohydrates in industrial synthesis. Proc. Symp. Div. Carbohyd. Chem. Soc. Bartens. Berlin: 1992. p. 2238.

106. Gedec, B, Bacteriologische Faeceanalysen bei mit Milchaustauschem emarten Kalbem [Text] B. Gedec Zentralblatt flir Bacteriologie. 1969. Ab.l, B.209,Heft2.-s.244-261.

107. Ghaly, A.E. Kinetics of batch production of single-cell protein from cheese whey [Text] A.E. Ghaly, R.M. Ben-Hasan Applied Biochemistry and biotechnology. 1995. v. 50. p. 79 92.

108. Ghaly, E.A. Effect of nutrient supplements addition on ethanol production from cheese whey using Candida pseudotropicallis under batch condition [Text] E.A. Ghaly, A.A. El-Taweel Applied Biochemistry and biotechnology. 1995.-v.53.-p. 107-131.

109. Grba, S. Selection of yeast strain Kluyveromyces marxianus for alcohol and biomass production on whey [Text] S. Grba, V. Stehlink-Tomas Chem. Biochem.Eng.-2002.-v. 1 6 l p 13-16.

110. Hansen, R. Carbery milk products in Ireland fremstiller alcohol of valle [Text] R. Hansen, //Nordeuropaesk. Mejeri-Tiddskrift. 1980. -v. 46. p. 1-17.

111. Hartmeier, V. Ethanol formation from lactose using yeast and bacterial cells coimmobilized with P-galactosidase [Text] V. Hartmeier, E.D. Jankovic Biotech. 84: World Biotech. Rept., 1

113. Europe, Pinner, 1984. v. 1. p. 415 426.

114. Heyns, K. Selective oxidation of carbohydrates, employing platinum catalysts [Text] K. Heyns, H. Paulsen Advances in Carbohydrate Chemistry. 1962. -V. 17.- p. 169-221.

115. Hicks, K. Preparations and purification of lactulose from sweet cheese whey ultrafiltrate [Text] K. Hicks, D. Raupp, W. Smith J.Agric.Food Chem. 1984.-v.32.-p.288-292.

116. Imbs, B. Ocena ef fectyvnosci technologii amonowania i produckji etanolu z servatki [Text] B. Imbs, K. Krajewski Przemysl Spozywczy. 1981. 1 35. l l 1 2 s 330-332.

117. Janssens, J. H. Lipidenhanced ethanol production by Kluyveromyces fragilis [Text] J.H. Janssens, N. Bums, A. Woadward Appl. Environ. Microbiol. 1983. V. 45. 2. p. 598 602.

118. Kehageas, С Microbial protein production from Fuzarium moliniforme on whey in a pilot plant fermentor [Text] C. Kehadeas, B. Macris 3rd Cong. Biotechnol. Munchen: Weinheim e.a. 1984. v. 2. p. 565 570.

119. Kosaric, N. Fermentative utilization of food industry liquid wastes by Eur. products) such as cheese whey for specially products, single cell proteins and fuel alcohol production [Text] N. Kosaric, A. Wieczorec Food industries and Environment, Int. Symp. Budapest, 1982. p. 229 239.

120. Mahmoud, M.M. Alcohol and single cell production by Kluyveromyces in concentrated whey permeate with reduced ash [Text] M.M. Mahmoud, F.V. Kosikowski J. dairy Sci. 1982. v. 65. p. 2082 2087.

121. Matsumoto, K. Galactooligosaccharides. Int.: T.Nakakuki (Editor) Oligosaccharides. Production, Properties and Applications [Text] K. Matsumoto Japanese Technology Rewiews. Gordon and Breach, Japan. 1993.-v.3.-№2.-p. 107-117. 1U

122. Michel, A. Yeast production from crude sweet whey [Text] A. Michel, F. Jacob, J. Parrier, S. Poncet Biotechnology and bioengineering. 1987. v. 3 0 p 780-783.

123. Mizota, T. Lactulose as a sugar with physiological significance [Text] T. Mizota, Y. Tamura, M. Tomita Bull. Int. Dairy Fed. 1987, N 212. p.69 76.

124. Montgomery, E.M. Relations between rotating power and structure in the sugar group. Part .

125. Synthesis of a new disaccharide ketose from lactose [Text] E.M. Montgomery, C.S. Hudson J.Am.Chem.Society. 1930. v.52. p.2101.

126. Moulin, G. Alcohol production by yeast in whey ultrafiltrate G. Moulin, M. Guillaume, P. Galzy [Text] Biotechnology and bioengineering. 1980. v. 22.-P. 1277-1281.

127. Nikolajsen, K. Structured modeling of a microbial System: III. Growth on Mixed Substrates [Text] K. Nikolajsen, J. Nielsen, J. Villadsen Biotechnology and Bioengineering. 1991. v. 38. p. 24 -29. 115.0Leary, V.S. Alcohol production by selected yeast strains in lactose- hydrolized acid whey [Text] V.S. OLeary, R. Green, B.C. Sullivan, V.H. Holsinger Biotechnology and bioengineering. 1977. v. 19. p. 1019 1035.

128. Oligosaccharides and probiotic bacteria [Text] Modler H.W., Birlouez I., Holland S. et al. Bull.of the IDF №313,1996. 58 p.

129. Ozilgen, M. Kinetics of batch fermentations with Kluyveromyces fragilis [Text] M. Ozilgen, D.F. OUis, D. Ogrydziak Enzyme Microb. Technol., 1988. Vol. 10, p. 165-172.

130. Patrice, V. Alcohol from whey permeate: Strain selection, temperature, and medium optimization [Text] V. Patrice, U. Stockar bioengineering Symp. 1983. №13. p. 421 435.

131. Petuely, F. Bifidusflora bei Flaschenkindem durch bifidogene Substanzen (Bifidusfactor) [Text] F. Petuely Z.Kinderheimkd. №79. 1957. s.l74 179.

132. Petuely, F. Der Bifidusfactor [Text] F. Petuely Dtsch. Med. Wochenschr. 1957.-V.82.-S. 1957-1

134. Rowland, I.R. Metabolic interactions in the gut [Text] I.R. Rowland. Probiotics, The Scientific Basis. London: Chapman and Hall, 1992. p.29 53.

135. Shay, L.K. Nonpolluting conversion of whey permeate to food yeast protein [Text] L.K. Shay, G.H. Wegner J. dairy Sci. 1986. v. 69. p. 676 683.

136. Smart, J.B. Growth of lactic acid bacteria and bifidobacteria on lactose and lactose-related mono-, di- and trisaccharides and correlation with distribution of P-galactosidase and phospho-P-galactosidase [Text] J.B. Smart, C.J. Pillidg, J.H. Garman J.Dairy Res. 1993. v.6O P.557 568.

137. Tamura, Y. Lactulose and its application to the food and pharmaceutical industries [Text] Y. Tamura, T. Mizota, S. Schimamura Fed. 1994.- E-doc 289. p. 43 53.

138. Terada, A. Effect of lactulose on the composition and metabolic activity of the human faecal flora [Text] A. Terada, H. Hara, M. Kataoka, T. Mitsuoka Microb.Ecol.Health Dis. 1992. v.5. p. 43 50. 126. The yeasts. Taxonomic study [Text] Ed. Kreger van Rij N.J.W. Amsterdam: Elsevier Sci. Publ. BV, 1984. 1082 p.

139. Thelwall, L.A. Developments in the chemistry and chemical modification of lactose [Text] L. A. Thelwall in the Developments in Dairy Chemistry. Lactose and minor constituents. Ed. By Fox P.F. 1985. v.3. p. 35 -66. 128. Tu, C. Factors Affecting ethanol production from cheese whey [Text] C. Tu, Y. Jayanata, R. Bajpai Biotechnology and bioengineering Symp. 1985. №15. p. 295-305. 129. U.S. Patent No 4555271, Int.Cl. C13D 3/

140. Process for purifying lactulose syrup [Text] Sirac SpA, Italy. Pat.26.11.85, prior. IT 20.06.83 (21689). 130. U.S. Patent 5725749 BOID 61/44, BOID 61/

141. Process for the separation of lactulose [Text] Duphar Int.Res.B.V., Netheriands. Pat 10.03.98, Bull. Int. Dairy prior.l 1.07.94 EP 94201997.

142. Continuous process for the production of lactulose from lactose using boric acid as a complexation agent [Text] Pat.20.04.99, prior. 01.08.95. 132. U.S. Patent №3272

143. Lactulose as a laxative [Text]. Patented 13.09.66.

144. Vine, P. An investigation of ethanol inhibition and other limitations during the fermentation of concentrated whey permeate by Kluyveromyces fragilis [Text] P. Vine, U. Von Stockar Biotechnology letters. 1985. v. 7. №7. p. 521 -526.

145. Willetts, A. The production of single-cell protein from whey [Text] A. Willetts, U. Ugalde Biotechnology letters. 1987. v. 9. №11. p. 798 800.