автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.07, диссертация на тему:Разработка технологии иммобилизованного биосорбента из пивоваренных дрожжей для интенсификации процесса брожения

На правах рукописи

7 .

Крупичёва Александра Николаевна

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ИММОБИЛИЗОВАННОГО БИОСОРБЕНТА ИЗ ПИВОВАРЕННЫХ ДРОЖЖЕЙ ДЛЯ ИНТЕНСИФИКАЦИИ ПРОЦЕССА

БРОЖЕНИЯ

Специальность 05.18.07 — Биотехнология пищевых продуктов (пнвобезапкогольная, спиртовая и винодельческая промышленности)

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

Москва- 2006

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московский государственный университет пищевых производств» на кафедре «Процессы ферментации и промышленного бнокаталнза»

Защита состоится «28» декабря 2006 года в 15.00 часов в ауд. Ш-101 на заседании Диссертационного Совета Д.212.148.04 при ГОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств» по адресу: 125080, Москва, Волоколамское ш., 11.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО МГУПП.

Отзыв на автореферат в двух экземплярах, заверенных печатью учреждения, просим направлять по адресу: 125080, Москва, Волоколамское шоссе, д.11, МГУПП, учёному секретарю Совета.

Автореферат разослан «27» ноября 2006г. Ученый секретарь

Научный руководитель:

доктор технических наук, доцент Карпенко Дмитрий Валерьевич доктор технических наук, профессор Щербаков Сергей Сергеевич кандидат технических наук Гусов Марат Эльбрусович Московский Государственный Университет технологий н управления

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

Диссертационного Совета, д.т.н., доц.

Крюкова Е.В.

Общая характеристика работы

Актуальность работы, В настоящее время успех производства пищевых продуктов, в том числе, я напитков брожения зависит от учета ряда факторов: качества готовой продукции, эколошчности и технологичности производственных процессов. Решению этой задачи может способствовать применение, в дополнение к классической технологии, новых, высокоэффективных вспомогательных материалов. Одними из них являются сорбирующие препараты биологического происхождения, целесообразность использования которых для решения широкого спектра задач убедительно доказана. 1'

В большинстве случаев такие препараты являются порошкообразными или мелкодисперсными, что может ограничить область их применения. Устранить этот недостаток можно за счет получения гранулированных, механически или химически, форм биосорбентов. При сохранении сорбцнонной способности на удовлетворительном уровне такие препараты могут использоваться многократно или в проточном режиме, что особенно актуально в связи с переходом целых производств или отдельных стадий на непрерывные рабочие циклы.

Цели и задачи исследования. Целью наших исследований являлась разработка способа получения иммобилизованного сорбирующего препарата на основе порошкообразного биосорбента дрожжевой природы «ОД-2» и установление возможных областей его применения в бродильных и других пищевых производствах.

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- изучить современные методы, применяемые для иммобилизации различных биологических объектов, определить их пригодность для достижения цели исследований;

разработать способ иммобилизации дрожжевого биосорбента, обеспечивающий получение препарата с высокими механическими' и сорбционными характеристиками;

выявить параметры, влияющие на эффективность применения г иммобилизованного биосорбента в бродильных производствах и установить их оптимальные значения;

изучить характеристики полученного разработанным способом иммобилизованного препарата;

- разработать способы применения иммобилизованного биосорбента «ОД-2» для интенсификации технологических процессов на ключевых стадиях пивоваренного производства;

• определить качественные характеристики готового нива, полученного с применением иммобилизованного препарата и сопоставить их с аналогичными у пива, произведенного обычным способом.

Научная новизна работы,

Впервые проведена иммобилизация сорбирующего препарата дрожжевой природы путем поперечной сшивки его частиц.

Изучено влияние предложенного способа иммобилизации на основные характеристики полученного сорбирующего препарата дрожжевой природы.

Установлена зависимость сорбцнонной способности иммобилизованного препарата «ОД-2» от ряда условий: концентрации удаляемого компонента в обрабатываемом растворе, дозировки иммобилизованного биосорбента, продолжительности и температуры обработки, скорости подачи обрабатываемого раствора.

Впервые установлено влияние обработки иммобилизованным биосорбентом «ОД-2» технологической воды, используемой на стадии затирания, на улучшение состава пивного сусла.

Впервые выявлено интенсифицирующее влияние обработки пивного сусла иммобилизованным биосорбентом «ОД-2» на накопление этанола.

Практическая значимость.

Разработан эффективный способ иммобилизации микробных клеток или их оболочек на основе поперечной сшивки, не требующий использования носителя.

Установлена эффективность применения иммобилизованного биосорбента для решения различных технологических задач в различных режимах: периодическом полу периодическом, непрерывном.

Доказана возможность улучшения результатов стадии затирания за счет обработки технологической воды иммобилизованным биосорбентом «ОД-2» в непрерывном проточном режиме.

Применение иммобилизованного препарата «ОД-2» позволяет интенсифицировать сбраживание пивного сусла при сохранении или улучшении аналитических и органолегггических характеристик готового пива.

Рассчитана экономическая эффективность от применение иммобилизованного биосорбента для обработки пивного сусла, которая составит 3137,8 тыс. руб. на I млн. дал. пива (условно-годовая экономия 10323,37 тыс. руб.).

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы представлены на Научно-технической конференции «Молодые ученые - пищевым и перерабатывающим отраслям АПК (технологические аспекты производства)», 13 — 14 декабря 2000 г, Москва, МГУПП; Юбилейной международной научно-практической конференции «Пищевые продукты XXI века», Москва, МГУПП, 21 — 23 ноября 2001 п Всероссийской научно-технической конференции-выставке «Качество и безопасность продуктов питания», МГУПП, Москва, 18 - 19 декабря 2002 г.

Рублик алии. По материалам диссертационной работы опубликовано 9 печатных работ.

Структура и объем диосертятпга, Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, списка использованной литературы, включающего 138 источников, а 4 приложения. Работа изложена на 149 страницах машинописного текста, включая 45 таблиц и 13 рисунков.

Краткое содержание работы.

1. Введение. ;

Во введении определена актуальность выбранной темы и отражены основные задачи научного исследования.

2. Обзор литературы.

В обзоре литературы проанализированы данные, накопленные при изучении иммобилизованных биообъектов, й результаты, к которым . приводит иммобилизация таких объектов. Приведены методы иммобилизации различных биологических объектов. Рассмотрены основные характеристики, преимущества и недостатки методик и способов иммобилизации. Обосновано направление исследований данной работы.

3. Экспериментальная часть.

3.1. Материалы и методах.

В работе использовали суспензию остаточных пивоваренных дрожжей и производственное дивное сусло.

При выполнении аналитических исследований применяли общепринятые ф нзико-хим ические и микробиологические методы анализа, описанные в

специальной научно-техническое и отраслевой литературе. Физико-химические показатели пивного сусла и пива определяли: содержание этилового спирта — с помощью ускоренного метода определения спирта; концентрацию ионов железа в обрабатываемом растворе — методом определения ионов железа (III) с салициловой кислотой; содержание ионов кальция (II) по методу с трилоном Б; содержание аминного азота - по числу карбоксильных групп аминокислот и пептидов в водно-спиртовом растворе; влажность - методом доведения до постоянной массы; содержание редуцирующих веществ по методу с использованием калия железосинерод истого; сухих веществ — рефрактометрическим или пикнометрическим способом; временную жесткость — титрованием исследуемого раствора раствором соляной кислоты в присутствии индикатора метилоранжа.

3.2. Результаты исследований и их обсуждение.

3.2.1. Разработка способа получения иммобилизованного препарата на основе клеточных стенок пивных дрожжей "ОД - 2".

При выборе способа иммобилизации из обнаруженных в научной литературе предпочтение отдавалось методам, которые могли бы быть реализованы с наименьшими затратами. Апробирование методов физической иммобилизации показало, что они не обеспечивают достаточно прочного соединения частиц порошкообразного биосорбета. Был также проверен ряд методов химической иммобилизации: с использованием карбамида и карбамида совместно с формальдегидом. При их реализации не удавалось получить частиц с высокой механической прочностью или сорбционной способностью, хотя отработка параметров получения таких иммобилизованных препаратов позволила несколько улучшить их технологические характеристики.

Наилучшими механическими свойствами и сорбционной способностью обладал иммобилизованный препарат, полученный при использовании 40%-го раствора формальдегида, 5%-го раствора карбамида и порошкообразного препарата "ОД-2" в соотношении 2 (объём): 4 (объём): 1 (вес) соответственно.

Кроме того, на данном этапе исследований был сконструирован набор лабораторных грануляторов, позволяющих получать иммобилизованный препарата в виде гранул фиксированных формы и размера.

Была изучена зависимость сорбционной способности иммобилизованного препарата «ОД-2» от ряда факторов: «степени нагрузки», механического

воздействия, продолжительности гидратации, формы и размера частиц, режимов обработки, дозировки, концентрации обрабатываемого раствора,

В результате сорбцнонная способность им мобилизо в энного препарата составила около 30% от той, которой обладал порошкообразный биосорбент.

Безусловно, такое падение необходимо признать значительным, но, с нашей точки зрения, в результате предложенного метода иммобилизации сохраняется удовлетворительная сорбцнонная способность гранулированного препарата. Это позволило перейти к изучению результатов применения такого препарата.

3.2.2. Применение препаратов "ОД - 2й для обработки пивного сусла в непрерывном режиме.

Результаты, полученные на предыдущих этапах нашей работы позволили перейти к апробированию иммобилизованного биосорбента как средства, интенсифицирующего спиртовое брожение в пивоварении.

Через препарат пропускали воду, затем выдерживали гранулы бносорбента под слоем воды в течение 15 — 1$ часов. После этого препарат использовали для обработки начального сусла в непрерывном режиме.

Использовали темное производственное пивное сусло (14,5% с.в.), которое обрабатывали различными способами. Вариант 1: сусло пропустили через колону, заполненную 1,25 г иммобилизованного препарата "ОД-2", со скоростью 4 смэ/мин. Вариант 2: к суслу добавили навеску (0,3 г) порошкообразного биосорбента «ОД-2». Вариант 3: сусло, не контактировавшее с какой-либо разновидностью препарата «ОД-2». К суслу всех вариантов добавили по 2 см3 густой суспензии производственных дрожжей. Брожение вели в течение 7 суток при температуре 8-10°С. Во всех вариантах определили содержание этанола. Полученные образцы молодого пива дображивали в течение 21 суток при температуре 1 - 2°С. Результаты представлены в табл. 1.

Обработка сусла иммобилизованным биосорбентом в проточном режиме позволила накопшъ в молодом пиве на 0,89% об., а в готовом нефильтрованном пиве на 1,52% об. этилового спирта больше, чем в контроле, то есть примерно на 13 и 14%, соответственно. Это меньше, чем в случае внесения в сусло порошкообразного препарата «ОД-2», обеспечившего прирост этанола как в молодом так и в готовом нефильтрованном пиве, равный 16 %, по сравнению с контрольным вариантом. Тем не менее, степень интенсификации процесса брожения оказалась сопоставимой, а применение ИП «ОД-2» может обеспечить

Таблица 1.

Влияние препаратов "ОД-2" на результаты главного брожения __и дображивайия пивного сусла

Вариант Состав Содержание спирта, %

в молодом пиве в готовом пиве

1 1,25 г (обработанного водой) ИП иОД-2" + 200 см3 сусла 4,01 5,58

2 03 г порошкообразного препарата "ОД -2" + 200 см3 сусла 5,03 6,59

3(Ю 200 см3 сусла 3.12 4,06

экономический эффект прежде всего за счет сокращения продолжительности как главного брожения так и дображивая ия.

С нашей точки зрения, полученные результаты доказывают перспективность использования иммобилизованного биосорбента «ОД-2» в производстве пива.

3.2.3. Результаты иммобилизации хлебопекарных дрожжей с использованием различных сшивающих реагентов.

На предыдущем этапе нашей работы была установлена возможность получения иммобилизованного биосорбента дрожжевой природа за счет химической «сшивки» частиц препарата. Используемый при этом формальдегид является веществом с высокой токсичностью, в том числе, для микроорганизмов. Удаление «вымываемого» формальдегида из состава ИП «ОД-2» в ходе предварительной обработки повышает затраты на получение пива с использованием иммобилизованного биосорбента и, следовательно, снижает привлекательность данного технологического приема. Тем не менее, имеющиеся данные позволили, по нашему мнению, сделать вывод о принципиальной технологической целесообразности использования ИП «ОД-2» при производстве пива.

Поэтому было решено расширить спектр рассматриваемых «сшивающих» агентов, обеспечивающих прочное химическое связывание частиц биосорбента. Выбор «сшивающих» реагентов осуществлялся на основе литературной информации о существующих методах иммобилизации, а также информации о химических реакциях, протекающих между реакционно-способными группировками, потенциально присутствующими на поверхности частиц биосорбента «ОД-2» и в составе того или иного химического соединения. Для

решения поставленной задачи была реализована серия экспериментов, в которых критерием оценки результатов иммобилизации как положительных/ отрицательных являлось образование (или отсутствие такового) частиц макроразмера, обладающих определенной механической прочностью и способностью сохранять свою структуру при продолжительной инкубации в водной среде и интенсивном перемешивании. Для вариантов, соответствовавших этим требованиям, проводилась оценка сорбционной способности полученных иммобилизованных препаратов. На основе литературной информации был составлен список соединений различного строения и состава, имеющих как минимум бифункциональный характер, то есть включающие в состав не менее двух группировок, способных взаимодействовать с группировками, имеющимися у порошкообразного сорбирующего препарата «ОД-2»: щавелевая кислота, гидрохинон, резорцин, гидроксиламнн, глицерин, винная кислота, салициловая кислота, гидразин, борная кислота, молочная кислота, лимонная кислота.

Из всех рассмотренных «сшивающих» реагентов результаты иммобилизации, соответствующие установленным требованиям, обеспечило лишь использование щавелевой кислоты.

3.2.4. Изучение влияния соотношения компонентов. ИП «ОД-2» на механическую прочность его частиц.

На первом этапе в качестве иммобилизуемого объекта использовали сухие порошкообразные дрожжи. Соотношение компонентов иммобилизованного препарата варьировали, изменяя отношение навески дрожжей и объема раствора «сшивающего» реагента - щавелевой кислоты — концентрацией 86 г/дм3. Наилучшие результаты удалось получить при соотношении навеска дрожжей : объем раствора щавелевой кислоты, равном 1:5, Сделанные выводы было решено проверить при иммобилизации биосорбента «ОД-2», структура частиц которого сходна со структурой дрожжевых клеток, но имеет и определенные отличия. Соотношения навеска иммобилизуемого объекта: раствор «сшивающего» реагента составили 1:80; 1:40; 1:20; 1:10; 1:5. Полученные суспензии после тщательного перемешивания высушили в тонком слое при 50° в течение 3 суток, после чего слои полученных иммобилизованных препаратов измельчили вручную до частиц со средним диаметром 6-8 мм. Половину навески каждого ИП подвергли испытаниям ; на механическую прочность.

Из всех вариантов наилучшими механическими характеристиками обладали частицы иммобилизованного биосорбента, полученного при соотношении 1:5.

3.2,5. Определение зависимости сорбцнокной способности ИП «ОД-2» от температуры.

Одним из важных факторов, влияющих на эффективность применения биосорбентов, является температура обработки. Сорбирующие препараты дрожжевой природы, по крайней мере, порошкообразные, могут применяться для решения различных задач и, следовательно, при широком диапазоне температур. Это сделало необходимым рассмотрение вопроса о зависимости сорбционной способности ИП «ОД-2» от температуры, при которой проводится деметализация жидкой фазы.

Поэтому провели эксперимент, в рамках которого навески ИП, равные 0,25 г, поместили в 200 см3 раствора Ре2(80«)э*9Н20. Контроль - 200 см3 раствора Рег(50«)3*9Н20. 1,2,3,4 варианты выдержали при температурах 8 °С, 18 °С, 40°С, 60°С соответственно в течение I часа, после этого центрифугировали 20 минут при 4000 об'1, надосадочную жидкость декантировали и определили в ней содержание Ре3* по методу с салициловой кислотой. Результаты приведены на рис. 1._

40 35

^ * 30

Сорбциоиная способность __ ИП, мг РеЗ+/г ^ препарата ^

5-

О -

8 18 40 60

Температура обработки, ОС ЕИ Сорбционная способность ИП, мгРеЗ+/г препарата, опыт Рис. 1. Влияние температуры на сорбционную способность ИП.

Можно сделать вывод о том, что иммобилизованный биосорбент целесообразно использовать для обработки сред с температурой 40 °С и ниже.

Наилучшие результаты могут быть получены при низких температурах, около 10°С и менее. Если существует технологическая возможность, применять ИП «ОД-2» следует для обработки «холодных» сред.

32.6. Определение влияния хранения на сорбционную способность иммобилизованного биосорбенга «ОД-2»,

При изучении свойств, порошкообразного биосорбента «ОД-2» было установлено, что на протяжении 6 — 8 месяцев хранения препарата при температуре 13 25°С сорбционная способность не снижалась по сравнению с исходной, определенной непосредственно после получения препарата. Очевидно, частицы ИП имеют более сложную структуру, на которой, негативное воздействие хранения может сказаться более существенно или за более короткое время. Для выяснения поставленного вопроса было проведено сопоставление сорбционной способности двух партий ИП «ОД-2», полученных с разницей в три месяца.

Установлено, что хранение ИП при умеренных условиях в течение 3 месяцев не привело к изменению его сорбционной способности, по крайней мере, по отношению к нонам железа (III). Это особенно важно в производственных условиях, так как нет необходимости использовать только свежеприготовленный биосорбент, его можно хранить и транспортировать в обычных условиях, без дополнительных финансовых затрат.

3.2.7. Изучение микробиологического состояния иммобилизованного биосорбента «ОД-2».

Одним из потенциальных применений дрожжевых биосорбентов, как порошкообразного, так и иммобилизованного, является обработка питательных сред для развития микробных популяций, в частности, пивного сусла до его засева производственными дрожжами. При этом крайне важно гарантировать отсутствие внесения в сусло значимого количества жизнеспособных микроорганизмов, в том числе и тех дрожжей, из которых биосорбент был получен. Для изучения микробиологического состояния дрожжевых биосорбентов был поставлен эксперимент: навески препаратов «ОД-2», порошкообразного и иммобилизованного в асептических условиях перенесли в колбы со стерильной дистиллированной водой, получив смыв микроорганизмов. Исходное разведение использовали для получения последующих разведений. Проводили глубинный посев в чашки Петри, содержащие охлажденный до 45 - 50°С сусло-агар (СА) и мясо-пептонный агар

(МПЛ). После застывания питательных сред чашки Петри перевернули вверх дном и поместили в термостат с температурой 28 - 30°С. Через 48 ч провели подсчет колоний микроорганизмов, выросших на этих средах (см. табл. 2).

Анализируя данные таблицы, можно сделать вывод о низкой, примерно равной «микробной нагрузке» дрожжевых биосорбентов, как порошкообразного, так и иммобилизованного. Второе особенно важно, так как количество

Таблица 2.

Результаты микробиологического анализа порошкообразного и иммобилизованного

(гранулированного) препаратов «ОД-2»

Анализируемый бносорбент «ОД2» Питательная среда Кратность разведения Количество и характер колоний

Порошкообразн ый * CA 10'* отсутствуют

10* отсутствуют

МПА 10* 3,кокки

10* отсутствуют

Иммобилизованный (гранулиро ванный) CA 10** отсутствуют

10* отсутствуют

МПА 10* 1, кокки

10* 2, кокки

манипуляций и, следовательно, вероятность потенциального заражения при получении иммобилизованного препарата существенно больше. Это позволяет утверждать, что внесение биосорбента в сусло или более или менее продолжительный контакт между ними не вызовут проблем с ухудшением микробиологического состояния самой питательной среды для культивирования пивных дрожжей. С нашей точки зрения, это особенно важно, если предполагается обрабатывать биосорбентом сусло, используемое для культивирования дрожжей чистой культуры.

3.2.8. Определение количества ионов железа (III), связанных иммобилизованным препаратом «ОД-2» при работе в непрерывном проточном режиме.

В нашей работе была показана возможность применения иммобилизованного биосорбента в поупериодическом режиме, т.е., для последовательной обработки порций технологической среды. Однако более целесообразным является

использование гранулированного препарата в непрерывном, проточном режиме. Одним из наиболее вероятных способов такого применения иммобилизованного биосорбента является заполнение частицами (гранулами) препарата проточного биореакгора колоночного типа. Такой подход позволяет работать в проточном режиме или в режиме рецикла, подавая уже обработанную один или более раз порцию среды обратно в колонку, добиваясь более высокой степени изменения химического состава этой среды.

На эффективность применения иммобилизованного биосорбента в проточном режиме влияет целый ряд факторов. К наиболее значимым из них следует отнести степень загрузки колонки, то есть количество иммобилизованного препарата «ОД-2», используемого для обработки, скорость подачи обрабатываемой среды, содержание удаляемого компонента в обрабатываемом растворе, химический состав последнего, температура обработки, конструкция и форма биореактора и некоторые, другие. Влияние ряда упомянутых факторов было изучено в нашей работе.

Решено было рассмотреть зависимость количества связанных ионов железа (III) от количества иммобилизованного биосорбента в проточной колонке. Использовали навески препарата равные 1г; 0,5п 0,25г.

Результаты приведены на рис. 2.

Общий характер изменения содержания ионов Fe3+ аналогичен во всех трех рассмотренных экспериментах: снижение количества удержанных иммобилизованным биосорбентом ионов Fe3* по мере увеличения объема пропущенного через колонку раствора.

Была проведена серия экспериментов, в которых зависимость, характерная для порошкообразного дрожжевого биосорбента подтвердилась и для ИП «ОД-2» при его использовании в периодическом режиме и при работе в непрерывном режиме: при обработке более концентрированных растворов Fe2(S04)j*9H20 сорбирующий препарат связывает большее количество ионов железа (III).

Номер фракций

Ш Сорбционная споебноть ИП (навеска ИП=1 г) ■ Сорбциониая спосбнотъ ИП (навеска ИП=0,5 г) □ Сорбционная спосбнотъ ИП (навеска ИП=0,25 г)

Рис. 2. Результаты обработки раствора Ре2(5оч)з*9Н20 ЙП «ОД-2» в проточном режиме (навески ИП= I г, 0,5 г, 0,25 г) 3.2.9. Влияние скорости потока обрабатываемого раствора на количество ионов железа (П1), связанных иммобилизованным препаратом «ОД-2».

Результаты обработай растворов, содержащих ионы металлов, порошкообразным бносорбентом «ОД-2» существенно зависят от продолжительности такой обработки, то есть, от времени контакта частиц препарата с удаляемыми компонентами. В рамках нашей работы была проведена серия экспериментов по определению влияния скорости пропускания обрабатываемой среды через биореактор (колонку) на результаты обработки растворов ионов железа (III).

В каждом из них использовали 1г ИП «ОД-2» с размером гранул 2-3 мм, которые помещали в колонку, через которую с определенной скоростью (2 см3/мии, 4 cmVmhh, 8 cmVmhh) пропускали раствор FeI(S04)s*9HjÖ концентрацией I г/дм3. Обработанный раствор собрали фракциями определенного объема, в которых определили содержание ионов Ре3. В качестве контроля использовали необработанный, исходный раствор той же соли с такой же концентрацией.

Общий характер динамики изменения содержания ионов железа в растворе после обработки аналогичен во всех рассмотренных случаях. Сравнивая результаты экспериментов (см. табл. 3.), можно сделать ряд выводов.

Таблица 3.

Количество ионов железа (III), связанных иммобилизованным препаратом «ОД-2» при различных скоростях подачи в колонку исходного раствора _Fe^SO^'SHiO при работе в непрерывном режиме_

Скорость подачи исходного раствора Fei(S0^)3»9H20, мл/мин Количество ионов железа, связанных в 100 мл обрабатываемого раствора, мг

2,0 23,66

4,0 26,49

8,0 18,67

В начале обработки раствора Fei(S04)3*9Hj0 иммобилизованным препаратом «ОД-2» в проточном режиме (в первых 40 см3) при всех рассмотренных скоростях потока было связано практически одинаковое (6,84 — 7,12 мг) количество Fe'*. В дальнейшем возникли различия, носившие нелинейный характер. Так, оказалось, что при скорости потока обрабатываемой среды, равной 4 cmVmhh, было связано наибольшее количество ионов железа (III), при 8 см3/мин - наименьшее. Последнее, очевидно, объясняется наименьшим «временем удержания», то есть продолжительность контакта между биосорбентом и обрабатываемым раствором. В то же время, увеличение количества удаленных ионов при возрастании скорости с 2 до 4 см3/мин может быть обусловлено возрастанием турбулентности потока и

вызванным этим более интенсивным контактом между участниками процесса биосорбции при достаточной продолжительности такого контакта. -

В целом, можно заключить, что выбор оптимальной скорости подачи обрабатываемой среды должен быть сделан с учетом конкретных, индивидуальных условий применения иммобилизованного биосорбента, принимая во внимание наличие определенного диапазона, выход как за верхнюю, так и за нижнюю границу которого более или менее снизит технологическую результативность обработки. При этом существенными будут и экономические соображения.

3.2.10. Определение результатов применения иммобилизованного препарата «ОД-2» в периодическом режим» с целью снижения содержания ионов кальция в растворе.

Решено было рассмотреть целесообразность использования иммобилизованного биосорбента для связывания ионов кальция, содержавшихся в водном растворе.

Использовали раствор хлорида кальция в дистиллированной воде концентрацией 3 г/дм3. В качестве контрольных вариантов использовали раствор , хлорида кальция той же концентрации без добавления иммобилизованного биосорбента и дистиллированную воду.

Использование иммобилизованного препарата позволило в условиях эксперимента связать и удалить 16 % нонов кальция от их количества, содержавшегося в исходном растворе. Безусловно, такую эффективность нельзя признать высокой, однако, можно было предположить, что оптимизация условий обработки растворов, содержащих ионы кальция, позволит ее повысить.

3.2.11. Определение влияния обработки иммобилизованным препаратом «ОД-2» на устранимую жесткость воды в непрерывном режиме.

После установления возможности связывать определенное количество ионов кальция иммобилизованным биосорбентом «ОД-2» решено было рассмотреть возможность умягчения воды аналогичным способом.

Водопроводную воду обрабатывали 1 г иммобилизованного препарата «ОД-2». Контролем являлась необработанная водопроводная вода.

В первой фракции обработанного раствора удалось полностью устранить жесткость, во второй она составила менее 30, а в третьей, чуть менее 60 % от исходного значения, тогда как в четвертой фракции в условиях эксперимента

вообще не удалось снизить значение устранимой жесткости. Таким образом, можно сделать сразу два вывода: иммобилизованный препарат «ОД-2» может быть использован дня снижения значения устранимой жесткости, например, технологической или технической воды; кроме того, удалось определить сорбционную емкость ИП по отношению к компонентам, обуславливающим устранимую жесткость водопроводной воды.

3.2.12. Влияние обработки технологической воды ИП «ОД-2» на результаты стадии затирания пивоваренного производства.

Следует учитывать, что на многих пивоваренных предприятиях в качестве технологической используют воду, жесткость которой ниже или на уровне допустимой. Нам представлялось интересным определить результаты затирания с использованием такой воды и воды, обработанной ИП «ОД-2» в непрерывном режиме, то есть, оценить эффективность умягчения с помощью иммобилизованного биосорбента по результатам стадии приготовления затора. Водопроводную

воду пропустили через колонку с иммобилизованным биосорбеитом со скоростью 40 см'/мин.

Опытный вариант представлял собой 400 см3 обработанной ИП «ОД-2» в проточном режиме водопроводной воды, 100 г дробленого светлого ячменного солода. В контрольном - в качестве налива использовали водопроводную воду, не обработанную иммобилизованным биосорбентом. Оба образца затирали по одноотварочному способу в одинаковых условиях.

Затор подвергли центрифугированию. В первом сусле определили: содержание сухих веществ; содержание редуцирующих веществ (РВ) и содержание аминного азота. Результаты приведены в табл. 4.

Таблица 4.

Характеристики первого сусла, полученного на воде, подвергнутой умягчению иммобилизованным препаратом «ОД-2» в непрерывном режиме

Вариант Показатель

Сухие вещества, % Аминный азот, мг/100 см3 РВ, мг/см3

Вода необработанная (контроль) 18,2 147,0 114

Вода, обработанная ИП «ОД-2» 18,6 175,0 116

В условиях эксперимента применение иммобилизованного биосорбента обеспечило улучшение всех трех измеренных показателей первого сусла: по сравнению с контролем прирост сухих веществ составил 2,2%, РВ - 1,75%, а аминного азота — 19%. Установлено также, что при использовании в качестве технологической воды с повышенной жесткостью использование иммобилизованного биосорбента обеспечивает еще большее улучшение определяемых показателей сусла. Следовательно, обработка технологической воды ИП «ОД-2» в проточном режиме может применяться как регулярный технологический прием после подтверждения экономической эффективности.

3.2.14. Влияние обработки пивного сусла иммобилизованным препаратом «ОД-2» в непрерывном режиме на результаты стадий главного брожения и дображивания.

На завершающем этапе нашей работы была проведена оценка результатов применения иммобилизованного препарата «ОД-2» для обработки пивного сусла перед началом стадии главного брожения. Сусло пропускали через колонку с биосорбентом. Контролем являлось необработанное сусло, в варианте сравнения к суслу добавили навеску порошкообразного препарата «ОД-2».

Брожение вели 7 суток при 7°С. Молодое пиво перевели на дображивание (3°С, 21 сутки). Результаты представлены в табл. 5.

Таблица 5

Влияние обработки пивного сусла иммобилизованным препаратом «ОД-2»

на ход и результаты стадий главного брожения и дображивания

Этап контроля Содержание этилового спирта, % об.

Контроль Опыт

Главное брожение:

4 сутки 2,5 2,84

5 сутки 3,4 3,45

6 сутки 3,58 3,7

7 сутки 4,08 4,31

Дображивание: 4,21 4,65

Таблица б

Основные характеристики готового пива, полученного с применением __биосорбентов_

Показатель Образец пива

К О, (+«ОД-2»> 02 (+ обработкаИП«ОД-2»)

Экстр активность начального сусла, % 12,1 12,1 12,1

Содержание этанола, % об. 4,54 5,41 5,30

Действительный экстракт, % 5,53 4,13 4,44

Степень сбраживания, % 54,25 65,89 63,30

Титруемая кислотность, к.ед.1* 2,48 2,70 2,71

РН 4,4 4,4 4,3

Цветность, ц. ед.21 0,9 0,9 0,9

Содержание амииного азота, мг/дм3 103 87 99

Содержание РВ, г/100 см' 1,09 0,68 0,7

Содержание диацетила, мг/дм3 0,09 0,10 0,10

" к.ед. — количество см3 раствора гндроксида натрия концентрацией 1 моль/дм1 на 100 см1 пива

2) ц.ед. - объем раствора йода концентрацией 0,1 моль/да3, прибавленный к 100 см3 воды до совпадения цветности раствора с цветностью пива, см3

С нашей точки зрения, на основе полученных результатов можно сделать вывод о заметном интенсифицирующем эффекте обработки пивного сусла перед засевом дрожжами иммобилизованным биосорбентом «ОД-2» в непрерывном режиме, по крайней мере, на накопление этилового спирта как на стадии главного брожения, так и на стадии дображивания пивоваренного производства.

Установлено, что по эффективности иммобилизованный препарат незначительно уступает порошкообразному, но его использование позволило как интенсифицировать стадию главного брожения, так и улучшить характеристики готового пива (табл. 6).

Видно, что более интенсивные развитие/метаболизм дрожжевой популяции

приводят к накоплению более высоких концентраций органолегггически значимых (как положительно, так и отрицательно) соединений. В то же время практически по всем позициям анализируемые образцы укладывались в допустимые пределы. Дегустационная оценка показала, что готовое нефильтрованное пиво, полученное с использованием иммобилизованного биосорбента «ОД-2», не уступало контрольному.

4. Выводы.

1. Проведено сопоставление результатов реализации нескольких методов иммобилизации сорбирующего препарата дрожжевой природы «ОД-2»: определены механическая прочность частиц иммобилизованных препаратов, их сорбщтонная способность.

2. Разработан способ получения иммобилизованного биосорбента за счет поперечной сшивки частиц исходного порошкообразного препарата бифункциональным реагентом — щавелевой кислотой. Изучены факторы, влияющие на эффективность разработанного метода иммобилизации: объем и концентрация раствора щавелевой кислоты, соотношение такого раствора и порошкообразного биосорбента «ОД-2», дисперсность и форма частиц иммобилизованного препарата.

3. Изучены результаты различных режимов применения иммобилизованного сорбирующего препарата «ОД-2» - периодического, полу периодического и непрерывного - с целью удаления нежелательных компонентов жидких технологических сред на примере ионов металлов. Определены значимо влияющие факторы: концентрация компонента в обрабатываемом растворе, дозировка иммобилизованного биосорбента, продолжительность и температура обработки, скорость подачи обрабатываемого раствора, степень гидратации гранул препарата.

4. Определено, что иммобилизованный сорбирующий препарат «ОД-2» может храниться при умеренных условиях в течение не менее трех месяцев без снижения его сорбционной способности и ухудшения микробиологического состояния.

5. Установлена возможность снижения временной жесткости воды за счет применения иммобилизованного препарата «ОД-2» в периодическом и непрерывном режимах.

6. Доказана эффективность обработки технологической воды иммобилизованным биосорбентом: ее использование обеспечило улучшение ряда характеристик первого сусла: содержания сухих веществ — на 2,2 %, концентрации редуцирующих веществ —на 1,8 %, содержания аминного азота - на 19%.

7. Установлена целесообразность применения иммобилизованного препарата «ОД-2» для обработки в непрерывном режиме пивного сусла перед началом сбраживания. Это обеспечило повышение концентрации этилового спирта в молодом пиве - на 5,6 %, а в готовом нефильтрованном - на 10,5 %, что дает возможность сокращения продолжительности стадий главного брожения и/или дображивания. По органолепгаческим характеристикам пиво, полученное с использованием иммобилизованного биосорбента, не уступало контрольному. 8. Экономический эффект от внедрения технологии с использованием иммобилизованного сорбирующего препарата «ОД-2» для обработки пивного сусла перед началом стадии главного брожения составит 3137,8 тыс. руб. на 1 млн. дал, пива (условно-годовая экономия 10323,37 тыс. руб.).

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Карпенко Д.В., Крупичева А,Н. Способы частичного разрушения компонентов биосорбента «ОД-2». - Пиво и напитки, 2001, №> 6, с. 18 — 19.

2. Карпенко Д.В., Крупичева АЛ. Зависимость сорбционной способности препарата «ОД-2» от методов его обработки. - Пиво и напитки, 2002, № I, стр. 24 -25,

' 3. Карпенко Д.В., Крупичева А.Н., Хмельницкая О.И. Получение иммобилизованных биосорбентов. - Тезисы докладов Всероссийской научно-технической конференции-выставки «Качество и безопасность продуктов питания», МГУПП, Москва, 18 - 19 декабря 2002 г.

4. Крупичева АЛ., Карпенко ДИ., Матвеева О.Г. Способ получения иммобилизованного биосорбента «ОД-2». - Пиво и напитки, 2003, № 3, стр. 16 -17.

5. Хмельницкая О.И., Карпенко Д.В., Крупичева А.Н. Новые способы получения иммобилизованного бносорбента «ОД-2». - Пиво и напитки, 2003, № 4, стр. 22 - 25.

6. Карпенко ДД., Крупичева А.Н., Матвеев СВ. Применение иммобилизованного биосорбента «ОД-2». - Пиво и напитки, 2003, №5, стр. 16-18.

7. А.Н. Крупичева, Д.В. Карпенко, И,С. Формальнова. Использование иммобилизованного биосорбента «ОД-2» в периодическом и непрерывном режиме, — Хранение и переработка сельхозсырья, 2003, №12, стр. 63 - 67.

8. Крупичева А.Н., Карпенко Д.В., Вихлянцева Н.Б. Регенерация дрожжевого бносорбента. - Пиво и напитки, 2006, № 4, стр. 22 - 23.

9. Карпенко Д.В., Крупичева А.Н. Многократное применение дрожжевого биосорбента. - Пиво и напитки, 2006, X» 4, стр. 30 — 32.

Формат 60 х 84/16 Бумага писчая Тираж 100 экз. Заказ 105 Подписано в тираж 24.11,2006г.

Отпечатано в типографии ЦНГБ пищевой промышленности 125171, г.Москва, Ленинградское ш., д.8/2 Телефон/факс: (495) 150-19-43 Е-таЦ: Е1ЬКо@Гоо<1тй>.го

1. Введение

2. Обзор литературы

2.1. Иммобилизованные биосорбенты

2.2. Методы иммобилизации. 24 2.2.1. Методы иммобилизации различных биологических объектов. 25 2.2.1.1. Методы механической иммобилизации объектов. 25 2.2.1.2 Иммобилизация с использованием полупроницаемых оболочек 26 (мембран).

2.2.1.3. Методы физической иммобилизации.

2.2.1.4. Иммобилизация с использованием систем двухфазного типа.

2.2.1.5. Химические методы иммобилизации.

3. Экспериментальная часть

3.1. Материалы и методы.

3.1.1. Получение порошкообразного биосорбента «ОД-2».

3.1.2. Ускоренный метод определения спирта.

3.1.3. Метод определения ионов железа (III) с салициловой кислотой.

3.1.4. Метод определения ионов Са

3.1.5. Определение аминокислот и пептидов по числу карбоксильных групп 43 в водно-спиртовом растворе.

3\ 1.6. Метод определения влажности.

3.1.7. Методы получения иммобилизованного препарата «ОД-2»

3.1.8. Определение редуцирующих веществ с калием железосинеродистым

3.1.9. Метод определения сухих веществ в растворах.

3.1.10. Метод определения временной жесткости.

3.2. Результаты и обсуждение. 47 3.2.1. Разработка способов иммобилизации дрожжевого биосорбента «ОД- 47 2» и оценка их результатов.

3.2.1.1. Разработка способа получения иммобилизованного препарата на 47 основе клеточных стенок пивных дрожжей "ОД - 2".

3.2.1.2. Изучение сорбционной способности иммобилизованного 50 препарата "ОД - 2".

3.2.1.3. Изучение влияния "степени нагрузки" иммобилизованного 52 препарата "ОД-2" на его сорбционную способность по отношению к Fe3+.

3.2.1.4. Изучение влияния механического воздействия на структуру и 55 сорбционную способность пластинчатого иммобилизованного препарата "ОД-2".

3.2.1.5. Изучение влияния продолжительности гидратации на сорбционную 57 способность гранулированного иммобилизованного препарата "ОД-2".

3.2.1.6. Определение влияния формы и размера частиц ИП «ОД-2» на его 58 сорбционную способность по отношению к ионам железа (III).

3.2.1.7. Определение сорбционной способности иммобилизованного 60 препарата "ОД-2" по отношению к ионам железа (III) при работе в полупериодическом режиме.

3.2.1.8. Изучение влияния дозировки иммобилизованного препарата "ОД-2" 62 на характер связывания железа (III) при работе в полупериодическом режиме.

3.2.1.9. Изучение влияния концентрации обрабатываемого раствора ионов 65 железа (III) на сорбционную способность иммобилизованного препарата "ОД-2" в непрерывном режиме.

3.2.1.10. Изучение прочности связывания ионов железа (III) 68 иммобилизованным препаратом "ОД - 2" при работе в непрерывном режиме.

3.2.1.11. Сопоставление эффективности применения иммобилизованного 70 препарата "ОД - 2" и активированного угля.

3.2.1.12. Применение препаратов "ОД - 2" для обработки пивного сусла в непрерывном режиме.

3.2.2. Разработка способа иммобилизации дрожжевого биосорбента «ОД-2» 76 за счёт поперечной сшивки его частиц щавелевой кислотой. 3.2.2.1. Результаты иммобилизации хлебопекарных дрожжей с использованием различных сшивающих реагентов.

3.2.2.2 Изучение влияния соотношения компонентов ИП «ОД-2» на механическую прочность его частиц.

3.2.2.3. Сравнение сорбционной способности иммобилизованного препарата 82 и препарата «ОД-2».

3.2.2.4. Изучение влияния формы частиц иммобилизованного препарата 84 «ОД-2» на его сорбционную способность по отношению к ионам железа

III).

3.2.2.5. Сравнение сорбционной способности гранулированных 86 иммобилизованных препаратов с различным размером частиц.

3.2.2.6. Определение зависимости сорбционной способности ИП «ОД-2» от 87 объема обрабатываемой среды.

3.2.2.7. Изучение влияния концентрации обрабатываемого раствора на 89 сорбционную способность иммобилизованного препарата «ОД-2» по отношению к ионам железа (III).

3.2.2.8. Определение влияния продолжительности гидратации ИП на его 90 сорбционную способность по отношению к ионам железа (III).

3.2.2.9. Изучение возможности восстановления сорбционной способности 92 ИП «ОД-2» после гидратации различной продолжительности.

3.2.2.10. Определение зависимости сорбционной способности ИП «ОД-2» 94 от температуры.

3.2.2.11. Изучение влияния хранения на сорбционную способность 95 иммобилизованного биосорбента «ОД-2»

3.2.2.12. Изучение микробиологического состояния иммобилизованного биосорбента «ОД-2».

3.2.2.13. Изучение сорбционной способности ИП при работе в 99 полупериодическом режиме.

3.2.2.14. Определение количества ионов железа (III), связанных различными 100 количествами иммобилизованного препарата «ОД-2» при работе в непрерывном проточном режиме.

3.2.2.15. Изучение влияния скорости потока обрабатываемого раствора на 104 количество ионов Fe3+, связанных иммобилизованным препаратом «ОД-2».

3.2.2.16. Определение влияния концентрации обрабатываемого раствора на 109 сорбционную способность иммобилизованного препарата «ОД-2» при работе в непрерывном режиме.

3.3.3. Разработка способов применения иммобилизованного сорбирующего 110 препарата «ОД-2».

3.3.3.1. Определение результатов применения иммобилизованного 110 препарата «ОД-2» в периодическом режиме с целью снижения содержания ионов кальция в растворе.

3.3.3.2. Изучение влияния обработки иммобилизованным препаратом «ОД- 112 2» в непрерывном режиме на содержание ионов кальция в растворе.

3.3.3.3. Определение влияния обработки иммобилизованным препаратом 113 «ОД-2» на устранимую жесткость воды в непрерывном режиме.

3.3.3.4. Изучение влияния обработки технологической воды ИП «ОД-2» на 114 результаты стадии затирания пивоваренного производства.

3.3.3.5. Определение влияния обработки пивного сусла иммобилизованным 117 препаратом «ОД-2» в непрерывном режиме на результаты стадий главного брожения и дображивания.

4. Выводы.

5. Технологическая часть

6. Экономическая часть

Актуальность работы. В настоящее время успех производства пищевых продуктов, в том числе, и напитков брожения зависит от учета ряда факторов: качества готовой продукции, экологичности и технологичности производственных процессов. Решению этой задачи может способствовать применение, в дополнение к классической технологии, новых, высокоэффективных вспомогательных материалов. Одними из них являются сорбирующие препараты биологического происхождения, целесообразность использования которых для решения широкого спектра задач убедительно доказана.

В большинстве случаев такие препараты являются порошкообразными или мелкодисперсными, что может ограничить область их применения. Устранить этот недостаток можно за счет получения гранулированных, механически или химически, форм биосорбентов. При сохранении сорбционной способности на удовлетворительном уровне такие препараты могут использоваться многократно или в проточном режиме, что особенно актуально в связи с переходом целых производств или отдельных стадий на непрерывные рабочие циклы.

Цели и задачи исследования. Целью наших исследований являлась разработка способа получения иммобилизованного сорбирующего препарата на основе порошкообразного биосорбента дрожжевой природы «ОД-2» и установление возможных областей его применения в бродильных и других пищевых производствах.

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- изучить современные методы, применяемые для иммобилизации различных биологических объектов, определить их пригодность для достижения цели исследований;

- разработать способ иммобилизации дрожжевого биосорбента, обеспечивающий получение препарата с высокими механическими и сорбционными характеристиками;

- выявить параметры, влияющие на эффективность применения иммобилизованного биосорбента в бродильных производствах и установить их оптимальные значения;

- изучить характеристики полученного разработанным способом иммобилизованного препарата;

- разработать способы применения иммобилизованного биосорбента «ОД-2» для интенсификации технологических процессов на ключевых стадиях пивоваренного производства;

- определить качественные характеристики готового пива, полученного с применением иммобилизованного препарата и сопоставить их с аналогичными у пива, произведенного обычным способом.

Научная новизна работы.

Впервые проведена иммобилизация сорбирующего препарата дрожжевой природы путем поперечной сшивки его частиц.

Изучено влияние предложенного способа иммобилизации на основные характеристики полученного сорбирующего препарата дрожжевой природы.

Установлена зависимость сорбционной способности иммобилизованного препарата «ОД-2» от ряда условий: концентрации удаляемого компонента в обрабатываемом растворе, дозировки иммобилизованного биосорбента, продолжительности и температуры обработки, скорости подачи обрабатываемого раствора.

Впервые установлено влияние обработки иммобилизованным биосорбентом «ОД-2» технологической воды, используемой на стадии затирания, на улучшение состава пивного сусла.

Впервые выявлено интенсифицирующее влияние обработки пивного сусла иммобилизованным биосорбентом «ОД-2» на накопление этанола.

Практическая значимость.

Разработан эффективный способ иммобилизации микробных клеток или их оболочек на основе поперечной сшивки, не требующий использования носителя.

Установлена эффективность применения иммобилизованного биосорбента для решения различных технологических задач в различных режимах: периодическом, полупериодическом, непрерывном.

Доказана возможность улучшения результатов стадии затирания за счет обработки технологической воды иммобилизованным биосорбентом «ОД-2» в непрерывном проточном режиме.

Применение иммобилизованного препарата «ОД-2» позволяет интенсифицировать сбраживание пивного сусла при сохранении или улучшении аналитических и органолептических характеристик готового пива.

Рассчитана экономическая эффективность от применения иммобилизованного биосорбента для обработки пивного сусла, которая составит 3137,8 тыс. руб. на 1 млн. дал. пива (условно-годовая экономия 10323,37 тыс. руб.).

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы представлены на Научно-технической конференции «Молодые ученые - пищевым и перерабатывающим отраслям АПК (технологические аспекты производства)», 13 -14 декабря 2000 г, Москва, МГУПП; Юбилейной международной научно-практической конференции «Пищевые продукты XXI века», Москва, МГУПП, 21 -23 ноября 2001 г; Всероссийской научно-технической конференции-выставке «Качество и безопасность продуктов питания», МГУПП, Москва, 18-19 декабря 2002 г.

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 9 печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, списка использованной литературы, включающего 138 источников, и 4 приложения. Работа изложена на 149 страницах машинописного текста, включая 45 таблиц и 13 рисунков.

Заключение

Таким образом, благодаря новой технологии предприятие увеличивает выпуск продукции на 439,8 тыс. дал, может получить условно-годовой экономии 10323,37 тыс. руб. С уменьшением себестоимости единицы продукции на 3,22% предприятие имеет возможность снизить цену и расширить рынок сбыта пива.

1. Абишева А.К., Мансурова P.M., Жубанова А.А., Мансуров З.А. Изучение сорбционной активности адсорбентов на основе зауглероженной скорлупы грецких орехов. // Вестник КазГУ, серия «Экология». 1999. - №1. - С. 18-20.

2. Арипов Э.Л. Природные минеральные сорбенты, их активирование и модифицирование. Ташкент: Изд-во ФАН СССР, 1970. - 250 с.

3. Березин И. В., Клячко H.JL, Левашов Ф.В., Мартинек К., Можаев В.В., Хмельницкий Ю.Л. Иммобилизованные ферменты. М.: Высшая школв, 1987, с.47 -96.

4. Бидей С.П., Броделиус П., Кабрал И.М.А., Кафлэн М.П., Нето Г. де О. И др. Иммобилизованные клетки и ферменты, Методы: Пер. с англ. / Под ред. Дж. Вудворда. М.: Мир, 1988.-215 с.

5. Биотехнология: Учеб.пособие для вузов. В 8 кн./Под ред. Н.С. Егорова, В.Д.Самуилова. Кн.8: Инженерная энзимология /И.В.Березин и др.-М.:Высш.шк.,1987.-143с.

6. Бирюков В.В., B.C. Барбот. Иммобилизованные клетки в биотехнологии, Пущино, 1987.163-173.

7. Быков В.А., Монаков М.Н., В.И. Панфилов и др.- Биотехнология. Производство белковых веществ; М., 1987. 142 с

8. Валуйко Г. Г. Виноградные вина. М.:Пищевая промышленность, 1978. - 254 с.

9. Великая Е. И., Суходол В. Ф. Лабораторный практикум по курсу общей технологии бродильных производств (общие методы контроля). М.: Легкая и пищевая промс-ть, 1983.-312 с.

10. Виестур У.Э., Шмите И.А., Жилевич А.В. Биотехнология. Биологические агенты, технология, аппаратура. Рига, 1987.263 с.

11. Волошенко М.И., Дислер Е.Н., Кощевнко К. А. Биотехнология. 1, 1985, №5, 43-47.

12. Войнар А.О. Микроэлементы в живой природе. М.: «Высшая школа», 1962. -94 с. с ил.

13. Ганиткевич Я. В. Биотехнология, Поверхностно - активные вещества микробного происхождения, 4, 1988, №5, 575-582.

14. Гачева И.Н., Гаврилова Н.Н., Иванова J1.A. Технология микробных белковых препаратов, аминокислот и жиров. М., 1980.448.

15. Гвоздак П.И. Иммобилизованные клетки в биотехнологии, Пущино, 1987,56-61.

16. Горленко В.М. Экология водных микроорганизмов. М.: Наука, 1977. - 137 с.

17. Давидович А., Ксиецкий А. Способ получения носителей для иммобилизации микроорганизмов. Пат. 153105 ПНР, МКИ (5) А61К 47/00; Uniwersytet Marii Curie-Sklodowskiej. -N 267945; Заявл. 28.09.87; Опубл. 30.08.91.

18. Дубровский. B.C., Виестур Э.У. Метановое сбраживание с/х отходов. Рига, 1988.303 с.

19. Дунец Р.В. Разработка технологии получения угольно-минеральных сорбентов из отходов АПК и их применение для обработки напитков. Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук. Краснодар, 2002. - 152 с.

20. Егоров. Н.С., Олескин А.В., Самуилов В.Д. Биотехнология. Проблемы и перспективы. М., 1 , 1987.459с.

21. Егорова Н.С., Самуилова В.Д. Биотехнология. Иммобилизованные ферменты-М.: Высш. шк., 1987. 159 с.

22. Ермолаева Г.Л., Колчева Р.А. Технология и оборудование производства пива и безалкогольных напитков: Учеб. для нач. проф. образования. М.: ИРПО; Изд. Центр "Академия", 2000, - 416 с.

23. Илялетдинов А.Н., Алиева Р.М. Иммобилизованные клетки в биотехнологии, Пущено, 1987,62-72.

24. Иммобилизованные клетки в биотехнологии. Сб.науч.тр. /Под ред.К. А.Кощеенко.-Пу щино. 1987.-174с.

25. Карпенко Д.В. Разработка способа получения иммобилизованной циклодекстрингликозилтрансферазы из Bacillus macerans.- Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук. Москва, 1990

26. Кислухина О., Кюдулас И. Биотехнологические основы переработки растительного сырья. Каунас, «Технология», 1997. - 183 с.

27. Кист А.А. Биологическая роль химических элементов и периодический закон. Ташкент: «Фан», 1973. - 65 с. с граф.

28. Коваленко Г.А., Комова О.В., Симаков А.В., Рудина Н.А., Хомов В.В. Углеродсодержащие макроструктурированные керамические носители для адсорбционной иммобилизации ферментов и микроорганизмов. I Адсорбция глюкоамилазы. Биотехнология, 2002,3, С. 55-56.

29. Кретович В. J1. Биохимия растений. М.:Высшая школа, 1986. - 503 с.

30. Кружкова Р.В. Методика указанания к выполнению организационно -экономической части дипломных научно исследовательских работ (для студентов специальности 24.05.01). - М.: 2002.

31. Лебедева Ж. Д., Волкова И. М., Рубан Е. JI. Влияние йонов металлов на липолитическую активность Mycobacteriub и Actinomyces streptomycini. II Микробиология. 1976, т. 45, вып. 1.-С. 104 -116.

32. Малашенко Ю.Р., Гри нберг Т. А., Пирог и др. Биотехнология, Образование экзополисахаридов иммобилизованным клеткам Microcus Sp.,растущими на этаноле, 3, 1987, №3,386-390.

33. Мальцев П.М., Великая Е.И., Колотуша П.В. Химико-технологический кнтроль производства солода и пива. М.: Пищевая промышленность, 1976. - 448 с.

34. Медведева Н.Г, Гриднева Ю.А., Лысенко А.А., Сухаревич В.И. Иммобилизация уксуснокислых бактерий на углеродных волокнах и использование их для трансформации тиодигликоля, Биотехнология, 2001, 5, С. 5157.

35. Нахапетян ЛД Меняилова И.И. Биотехнология, Получение глюкозо - фрукгозных сиропов из крахмалсодфжащего сырья, 4.1988,№ 5,564-574.

36. Никовская Г.Н., Глоба Л.И. Иммобилизация бактерий в зависимости от гидратации поверхностей клеток и сорбентов. // Доклады АН СССР. 1989. - № 10. -С. 79-82.

37. Никовская Г.Н., Гордиенко А.С., Глоба Л.И. Гидрофильно-гидрофобные свойства микроорганизмов при различных условиях культивирования. // Микробиология. 1989. - т. 58, № 3. - С. 448 - 451.

38. Патент РФ N 2177503, С 12 N 11/10, 12.01.1995.

39. Патент РФ № 2233327, С 12 N 11/04,20.08.2002

40. Полычалина Г.В., Чередниченко B.C., Рухлядева А.П. "Инструкции по техническому контролю спиртового производства ", М, Агропромиздаг, 1986.

41. Сиденко. В.П., Мордвинова Д.И., Яроцкая Н.Е. и др. Микробиолог. Журн., 48, 1987, №2,209-215.

42. Синицин А.П., Райкина Е.И., Лозинский В.И. Иммобилизованные клетки микроорганизмов. М.: Изд - во МГУ, 1994. - 288 с.

43. Тривен М. Иммобилизованные ферменты.-М.:Мир, 1983,213с.

44. Химическая энзимология/Под ред.И.В.Березина, К.Мартинека.-М:Изд-во Моск. ун-та, 1983.-278с.

45. Шеламова С.А., Ковалева Т.А., Селеменев В.Ф., Трофимова О.Д., Бондарева Н.В. Иммобилизация липазы Rhizopus japonicus 1403 на анионообменной смоле АВ-17-2П путем ковалентного связывания. Биотехнология, 2001, 5, С. 32-39.

46. Ютта Людерс. Brauwelt, Иммобилизованные дрожжи в пивоварении, № 6,1996,51 -54.

47. Allcock Harry R., Pucher Shawn R., Visscher Karyn B. Activity of urea amidohydrolase immobilized within poly(di(methoxyethoxyethoxy)phosphazene) hydrogels. Biomaterials. 1994. - 15, N 7. - C. 502-506. - Англ. - ISSN 0142-9612.

48. Arnold; Talsky, Gerhard. Effect of pressure on immobilized enzyme, (Inst. Tech. Chem. Univ. Muenchen, 8046 Garching, Fed. Rep. Ger.). GBF Monogr. Ser. 1988 (Pub. 1989), 11 (Enzyme Lebensmitteltechnol.), 221-5 (Ger).

49. Bales, Vladimir; Meraros. Effect of hydrodynamic condilions on sucrase hydrolysis in a fixed bed of immobilized yeasts (Chemickotechnihol Fak, SVST. 81237 Bratislava, Czech.). Kvasny Prum. 1989,35 (5), 138 141 (Czech).

50. Barbotin Jean-Noel. Comportement physiologique et stabilite des cellules immobillisees. Biofutur. 1994, N 132. - С/ 22, 24-27. - Фр. -ISSN 0294-35-06.

51. Bauge, Salam Rajendra P. Immobilization of a amylase and glucoamylase on a modified cellulose matrix (Dep. Chem. Eng. Idian. Inst. Technol., Madras, 600 036 India). Indian Chem. Eng. 1989, 31 (2), 49 - 54 (Eng).

52. Baumgardt, Wolfgang, Mensshel, Claudia. Carriers for immobilization of m/o, substrates, and biologically active polymers, (VEB Projektierung Wasserwirtschaft Holte) Ger. (EAST) DD 264, 887, (CI. B29C67/16), 15 Feb. 1989, Appl. 309,236,20 Na 1987; 3 pp.

53. Borman Stu. Enzymes immobilized in polymeric microcapsule arrays. Chem. and Eng. News. 1994. - 72, N 22. - C. 17. - Англ. - ISSN 0009-2347

54. Brink L.E., Tramper J. J.Chem. Techol. Biotechnol., 37, 1987, 21 -44.

55. Carmichael. R.P, Jones A., Piekard A. Appl. Env. Microbiol., 51, 1986,1 2, 276 -280.

56. Cheap encapsulation. Eur. Biotechnol. Newslett. 1994, N 177. - C. 3-4. Англ. -ISSN 0765-2046

57. Chen Jyh-Ping, Chang Ko-Chang. Immobilization of chitinase on a reversibly soluble-insoluble polymer for chitin hydrolysis. Chem. Technol. and Biotechnol. 1994. - 60, N 2. - C. 133-140. - Англ. - ISSN 0268-2575.

58. Crumbliss A. L., Stonehuerner J., Henkens R.W., O'Daly J.P., Zhao J. The use of inorganic materials to control or maintain immobilized enzyme activity. New J. Chem. -1994. 18, N 3. - С/ 327-339. - Англ. -ISSN 1144-0546.

59. Das, A., Kundu P. J.Sci.and Ind.Res., 46, 1987, 307-311

60. De la Noije, D. Pronlx. Appl. Microbiol. Biotechnol, 29, 1988, 292 - 297.

61. Gonzalez Gustavo, Alea Jacqueline/ Pepsin immobilized by covalent binding to a chitosan derivative. Chem. Technol. and Biotechnol. 1995. - 63< N 3. - С/ 247-248. -Англ.-ISSN 0268-2575.

62. Gorff, Hans; Koenig, Steffen. Immobilization of yeast of cellulose gels, (Ingenieurschule fuer Lebensmittelindustrie Dippoldiswalde) 26 Oct., 1988, Appl. 303, 259, 28 May 1987,3 pp.

63. Gorff, Hans. Immobilization of yeast of cellulose gels, (Ingenieurschule fuer Lebensmittelindustrie Dippoldiswalde) Ger (East) DD 261,374 (CI. С12 G1 / 06), 26 Oct., 1988, Appl. 303,262,28 May 1987; 2 pp.

64. Gorff, Hans. Manufacture of beer, using yeast immobilized on derevatized cellulose, (Ingenieurschule fuer Lebensmittelindustrie Dippoldiswalde) Ger (East) DD 261,374 (CI. C12 G1 / 06), 26 Oct., 1988, Appl. 303, 260, 28 May 1987; 3 pp.

65. Gorff, Hans. Manufacture of beer, using yeast immobilized on derevatized cellulose, (Ingenieurschule fuer Lebensmittelindustrie Dippoldiswalde) Ger (East) DD 261,373 (CI. C12 G1 / 00), 26 Oct., 1988, Appl. 303, 261, 28 May 1987; 3pp.

66. Groom. C.A., Dauduli A. J., White B.N. Appl. Microbiol. Biotechnol., 8, 1988, 8 -11.

67. Heindrich, Guenter, Lange, Luts. Manufacture of wine and champagne with microorganism immobilized in plant material, (VEB Kombinat Spirtuosen, Wein und Sekt). Ger, (EAST) DD 261, 206,02 Jul 1987; 4 pp.

68. Hertzberg S., Moen E., Vogelsang C., Ostgaard K. Mixed photo-cross-linked polyvinyl alcohol and calcium-alginate gels for cell entrapment.

69. Higham D.P., Sadler P.J., Scawen M.D. Cadmium resistance in Pseudomonas putida: growth and uptake of cadmium. // J. Gen. Microbiol. 1985. - Vol. 131. - P. 2539-2544.

70. Horbach, Ute; Hartmeiner, Winfried. Immobilization of invertase on the basis of matrix covered yeast cells, (Abt. Tech. Biochem., Univ. Hoheuheim, D 7000 Stuttgart, 70 Fed. Rep. Ger.). Gordian 1989, 89 (7 - 8), 134 - 6 (Ger).

71. Kamiya, Yoshihiro; Kawase, Mitsno, Takeshi. Immobilization of m / о on ceramic carriers, (NGK Insulators, Ltd.) ) Jpn. Kokai Tokkyo Koho Jp 63, 202, 384 88, 202, 384. (CI. С 12 1 11 /14), 22 Aug 1988, Appl. 87 / 34, 257, 17 Feb 1987; 3 pp.

72. Katagai, Nobujoshi; Senda, Susuki, Rie. Method of microbial immobilization. (Hitashi Chemical Co., Ltd.) Jpn. Kokai Tokkyo Koho Jp 63, 152, 980 88, 152, 980. (CI. С 12 1 11 / 08), 25Jun 1988, Appl. 86 / 298, 307,15 Dec 1986; 6

73. Kaul. R. , P.Adlercreutz, B.Mattiasson Biotechnol. Bioeng., Coimmobilization of Substrate and Biocatalyst: A Method for Bioconversion of Poorly Soluble Substrances in Water Milien, 28,1986, 1432 - 1437.

74. Kihkawa, Masayoshi; Sugara. Immobilization of alkaline phoshate on scleroprotein membranes prepared in the presence of sorbitol, (Nate. Chem. Lab. Ind., Tsukuba, Japan), Kagaku Gijutsu Kenkyusho Hohoku 1989, 84 (7), 459 63 (Japan).

75. Kimura, Takashi; Yoshida, Masahiro. Immobilization of exo maltotetraohydrolase and pullulanase, (Eng. Dev. Div., Chiyoda Corp. Yokohama, Japan 221). Agric. Biol. Chem. 1989, 53 (7), 1843-8 (Eng).

76. Koga, Naoki; Maehashi, Notuyuki. Ceramic filter membranes for enzyme immobilization, (Toto Ltd.) Jpn. Kokai Tokkyo Koho Jp 63, 242, 340 88, 242, 340. (CI. В 01J20 / 02), 07 Oct 1988, Appl. 87 / 79, 343, 30 Mar 1987; 4 pp.

77. Konishi, Hidenori; Tanaka, Funada. Manufacture of immobilized biocatalysis (ensymes), (Nippon Oies and Fats Co., Ltd.) Jpn. Kokai Tokkyo Koho Jp 63, 222, 690 88,222, 690. (CI. С 12 1 11 / 04), 16 Sep 1988, Appl. 87 / 56, 880, 13 Mar 1987; 10 pp.

78. Konishi, Hidenori; Tanaka, Funada. Manufacture of immobilized biocatalysis (ensymes), (Nippon Oies and Fats Co., Ltd.) Jpn. Kokai Tokkyo Koho Jp 63, 222, 688 88,222,688. (CI. С 12 1 11/04), 16 Sep 1988, Appl. 87/56, 878, 13 Mar 1987; 10 pp.

79. Konishi, Hidenori; Tanaka, Funada. Manufacture of immobilized biocatalysis (ensymes), (Nippon Oies and Fats Co., Ltd.) Jpn. Kokai Tokkyo Koho Jp 63, 222, 691 88,222, 691 . (CI. С 12 1 11 / 04), 16 Sep 1988, Appl. 87 / 56, 881, 13 Mar 1987; 9 pp.

80. Kovalenko G.A., Sokolovskii V.D. Epoxidation of propene by microbial cells immobilized on inorganic supports. Biotechnol. and Bioeng. 1992. - 39, N 5. - C. 522-528. - Англ. - ISSN 0006-3592.

81. Kumakura M., Yoshida M., Asano M. Preparation of immobilized yeast cells with porous substrates. Process Biochem. 1992. - 27, N4. - C. 225-229. - Англ. - ISSN 0032-9592.

82. Lovely D.R., Phillips E.J.P., Gorby Y.A., Landa E.R. Microbial reduction of uranium. // Nature. 1991. - Vol. 350. - P. 413 - 416.

83. Lovely D.R., Widman P.K. Woodward J.C., Phillips E.J.P. Reduction of uranium by cytochrome C3 of Desulfovibrio vulgarism. II J. Appl. Environ. Microbiol. 1993. - Vol. 59.-P. 3572-3576.

84. Macaskie L.E., Dean A.C.R. Cadmium accumulation by Citrobacter sp. // J. Gen. Microbiol. 1984. - Vol. 130. - P. 53 - 62.

85. Miyawaki.O, L. Wingard, J. Brackin et al. Biotechnol. Bioeng., 28, 1986, 343 -348.

86. Moellgaard, Henric. Biologicals immobilization by crosslinking with polyazetidine, (Novo Industri A / S) Eur/ Pat. Appl. EP 297, 912 (CI. С 12 1 11 / 02), 04 Jan 1989, DK Appl. 87 / 3, 369, 01 Jul 1987; 10 pp.

87. Mullen M.D., Wolf D.C., Ferris F.G., Beveridge T.J. Fleming C.A., Bailey G.W. Bacterial sorption of heavy metals. // Appl. Environ. Microbiol. 1989. - Vol. 55, № 12. -P. 3143-3149.

88. Nakajima A., Sakaguchi T. Selective accimulation of heavy metals by microorganisms. // Appl. Microbiol. Biotechnol 1986. - Vol. 24. - P. 59 - 64.

89. Nakanishi, Koishi. Beer production with immobilized yeast celts, (Lap Bren, Sci., Kirin Bren. Co., Ltd., Takasati, Japan). Bioprocess Technol. 1990 5. (YEAST),85 - 102 / (Eng).

90. Niu H., Xu X.S. Wang J.H. Removal of lead from aqueous solution by penicillin biomass. // Biotechnol. and Bioeng. 1993. - Vol. 42. - P. 785 - 787.

91. Nmuray,Y.,M.Iwahara,M.Hongo. Biotechnol.Bioeng., 30, 1987, 788-793.

92. Norberg A., Persson H. Accumulation of heavy metals ions by Zoogloea ramigera. // Biotechnol. and Bioeng. 1984. - Vol. 26. - P. 239 - 246.

93. Oliveera, E.A.; Silva, M.P.C.; Figueiredo, Z.M.B. Immobilization of proteins on plates of Dacron, (Cent. Cienc. Biol., Univ. Fed. Pernambuco, 50000 Recife, Brazil). Appl. Biochem. Biotechnol. 1989, 22 (1), 109 14 (Eng).

94. Okita.W.B., D.J. Kirwan Biochemi. Eng., 5, 1987, 256 - 259.

95. Oriel.P. Biotechnol. Lett. Amylase Production by Ecnericuia Coli Immobilized in silicone FOAM, 10, 1988,1 2, 113 - 116.

96. Pan Jinlun, Tong Mignrong, Han Lijun, Yu Yaoting. Study cell Arthrobacter sumplex immobilized in polyvinyl alcohol gel. Lizi jiaowan yu xifu Ion Exch. and Absorp. - 1994. - 10, N 4. - C. 334-337. - Кит.; рез. Англ. - ISSN 1001-5493.

97. Phillips E.J.P., Landa E.R., Lovely D.R. Remediation of uranium contaminated soils with bicarbonate extraction and microbial uranium (VI) reduction. // J. Indust. Vicrobiol. -Vol. 14. -p. 203-207.

98. Ryder, D.S, Masschelein, C.A.:Proc. Eur. Brew. Conv, Lisbon, Elsevier, New York, 1990, s. 345

99. Saha U., Sen. A.K., Bakshi K. Simple speetrophoto metric method for determination of cooper (II) in pharmocentical raw materials and in lotion using salicylic acid as colour developer, Indian Drugs, May, 1987, 24 (8), 413-415.

100. Sanroman A., Pintado J., Lema J.M. A comparison of two techniques (Adsorbtion and Entrapment) for the immobilization of Aspergillus niger in polyurethane foam. Biotechnol. Techn. 1994. - 8, N 6. - C. 389-394. - Англ. - ISSN 0951-208X.

101. Sarkar Jawed M., Bollag Jean M., Leonowicz Andrzej. Sposob otrzymywania immobilizowanych enzymow. ПАТ. 152548 ПНР, МКИ {5} C12N 11/14; Uniwersytet Marii Curie-Sklodowskiej. -N 861230; Заявл. 15.09.88; Опубл. 28.06.91.

102. Sheffield Deborah J., Harry Yim R., Smith Arnold J., Rogers Lyndon J. Immobilisation of bromoperoxidase from Corallina officinalis. Biotechnol. Techn. -1994. 8, N 8. - C. 579-582. - Англ. - ISSN 0951-208X.

103. Simmons P., Tobin J.M., Singleton I. Consideration of the use of commercially available yeast biomass for the treatment of metal containing effluents. // J. Indust. Microbiol. 1995. - Vol. 14. - p. 240 - 246.

104. Stark, May Britt, Holenberg. Covalent immobilization of lipase in organic solvents, (Dep. Histol. Univ. Goeteborg, 400 33 Goeteborg, Swed.). Biotechnol. Bioeng. 1989, 34 (7), 942 50 (Eng).

105. Sudi, Dala, Szajani. Preparation, characterization, and application of a novel immobilized carboxypeptidase, (Reanal Fact. Lab. Chem., Budapest, Hung.). Appl. Biochem. Biotechnol. 1989,22 (1), 31 -43 (Eng).

106. Tamada.M., N. Kasai, M. Kumakura et al. Biotechnol., 1, 1984, 97 - 104.

107. Tijero J., Guardiola E. et al. Effect of Cu2+, Ni2+ and Zn2+ on an anaerobic digestion system. // J. Environ. Sci. and Health. 1991. - Vol. 26, N6. - P. 799 - 811.

108. Tonemura K., Kida K., Twasaki K., Sonoda Y. Operation conditions for anaerobic treatment of wastewater from a beer brewery. // Journal of Fermentation Bioengeneering.- 1992. Vol 73, №4. - P. 332 - 335.

109. Trace elements. Ed. By Lamb C.A., Bently O.G. and Beattie. Acad. Press, New York-London, 1958.

110. Tsezos M., Volesky B. Biosorpion of uranium and thorium. // Biotech. Bioeng. -1981,-Vol. 24.-P. 385 -401.

111. Vlach, D., J.E.Prenosil J.Molec.Catalysis, 26, 1984, 173-185.

112. Wang. D.I.C., C.L.Cooney, A.L.Deman et al. Fermentation and Enzyme Technology. N.Y., 1979. 341 350.

113. Wingar. L.B., R.P.Roach., O. Miyawaki et al. Enz . Microb. Technol/, 7, 1985, 503-509.

114. Uragamy, Todashi, Aketa. Hydrolysis of through urease immobilizing polyion complex membrane, (Fac. Eng. Kansai Univ. Suita, Japan 564). Maku 1989, 14 (3), 211 -16 (Eng).

115. US Pat. № 6280983 (1999) Enzyme immobilization in a gel containing 30 to 50 persent gelatin.

116. USA-microcapsule arrays for enzyme immobilization. Biosens. and Bioelectron. -1994. 9, N 8. - X. - Англ. - ISSN 0956-5663.

117. Van Dyk M.S., Thomas E. Hydrolysis of finalyl acetate and a-terpinyl acetate by yeasts. // Biotechnology Letters. 1998. - Vol. 20, №4. - P. 417-421.

118. Varalakshmi P., Lathika К. M., Raghavan K. G., Singh В. B. Altered physiochemical characteristics of polyethyelen glycol linked beet stem oxalate oxidase. Biotechnol. and Bioeng. 1995. - 46, N 3. - C. 254-257. - Англ. - ISSN 0006-35-2.

119. Venkaiah Betapudi, Kumar Anil. A process for the recovery and immobilization of starch phospharylase from starch-based industrial wastewater. Biotechnol. and Appl. Biochem. 1995. - 21, N 1. - C. 77-85. - Англ. - ISSN 0885-4513.

120. Verma G., Nigam P., Singh D., Chaudhary K. Bioconversion of starch to ethanol in a single step process by coculture of amylolytic yeasts and Saccharomyces cerevisiae. II Bioresource Technology. 2000. - Vol. 72, №3. - P. 261 - 266.

121. Walt David R., Agayn Vanetka I. The chemistry of enzyme and protein immobilization with glutaraidehyde. TrAC: Trends Anal. Chem. 1994. - 13, Suppl. N 2. - C. 425-430. - Англ. - ISSN 0165-9936.

122. Wu Kuo-Ying Amanda, Wisecarver Keith D. Cell immobilization using PVA crosslinked with boric acid. Biotechnol. and Bioeng. 1992. - 39, N 4. - C. 447-449. -Англ. - ISSN 0006-3592.

123. Wurdig G., Muller T. Vergliechnde Untensuchngen uber die Anwendung der blausehonung und von Fesslers compound zur Reduzierung des Schwermetallgehaltes von Wein. // Wein-Wiss. 1988. - Vol. 43, N1. - S. 61 - 65.

124. Yamaguchi N., Wada О., Ono Т., Yazaki K., Toyakawa K. Detection of heavy metal toxicity by Tetrahymena pyriformis culture method. // Ind. Health. 1973. - Vol. 11.-P. 27-31.

125. Yuhui Yang, Howard A. Chase. Immobilization of a*amilase on polyvinyl alcohol)-coated perfluoropolymer supports for use in enzyme reactors. Biotechnol. Appl. Biochem., 1998, 28, C. 145 154.

126. Zhon, Hui, Che, Wei. The study of immobilizing trypsin to triethanolamine -polystyrene resin by covalenting method, (Dep. Chem. Julin Univ., Changchnu, Peop. Rep. China). Shengwu Huaxe zazhi 1989, 5 (3), 209- 13 (ch).

127. Zhu, Petty, Ancelin, Yarwood. On the formation of Langmuir Blodgett films contating enzymes, (Sch. Eng. Appl. Sci. Univ. Durham, Durham, UK DH 1 3 LE). Thin Solid Films 1989, 176(1), 151 -6 (Eng).