автореферат диссертации по технологии продовольственных продуктов, 05.18.07, диссертация на тему:Разработка технологии экстракта хмеля с высокой антиоксидантной активностью и применение его для стабилизации пива

На правах рукописи

ГОРЯЧЕВА НАТАЛЬЯ ГЕННАДЬЕВНА

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ЭКСТРАКТА ХМЕЛЯ С ВЫСОКОЙ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ И ПРИМЕНЕНИЕ ЕГО ДЛЯ СТАБИЛИЗАЦИИ ПИВА

Специальность 05.18.07 - Биотехнология пищевых продуктов (пивобезалкогольная, спиртовая и винодельческая промышленности)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

Москва 2004

Работа выполнена на кафедре «Процессы ферментации и промышленного биокатализа» Московского государственного университета пищевых производств и в лаборатории института электрохимии им. А.Н. Фрумкина РАН

Научные руководители:

кандидат биологических наук, доцент Елена Феликсовна Шаненко доктор химических наук Александра Анатольевна Ревина

Официальные оппоненты:

доктор технических наук Кочеткова Алла Алексеевна кандидат технических наук Коровина Юлия Анатольевна

Ведущая организация: ГНУ Научно - исследовательский проектно-технологический институт хмелеводства, г. Цивильск, Чувашская республика

Защита состоится «_/?_» июнл,2004 года в /0 6 50Л/ на заседании Диссертационного Совета Д 212.148.04 Московского государственного университета пищевых производств по адресу: 125080, Москва, Волоколамское ш., 11.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МГУПП.

Отзыв на автореферат в двух экземплярах, заверенных печатью учреждения,

просим направлять Ученому секретарю Совета.

Автореферат разослан

Ученый секретарь

Диссертационного Совета

кандидат технических наук, доцент

Крюкова Е.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы.

В современных пищевых технологиях широко используются антиоксиданты, которые позволяют значительно продлить сроки хранения продуктов и повысить их биологическую ценность. Хмель является богатейшим источником биологически активных веществ, в том числе антиоксидантного действия.

Использование антиоксидантов в пивоварение позволяет увеличить сроки хранения пива за счет снижения скорости окислительных процессов. Для замедления окисления в пиво вводят разрешенные антиоксиданты, однако эти «чужеродные» для пива вещества могут отрицательно влиять на органолептические показатели. Поэтому именно для пивоварения хмель может быть перспективным источником антиоксидантов. Однако технология хмелевых продуктов с высокой антиоксидантной активностью до настоящего времени не разработана.

Разработка технологии хмелевых экстрактов, позволяющей сохранить антиоксиданты в активной форме, является актуальной, поскольку она расширит возможности использования хмелевого сырья, в том числе хмелевых отходов. Такие хмелевые продукты могут быть использованы как антиоксидантные и биологические добавки в пивоварении для увеличения сроков хранения пива и повышения его биологической ценности.

Цель и задачи исследования.

Основной целью диссертационной работы являлась разработка способа получения экстракта хмеля, обладающего антиоксидантной активностью и изучение его влияния на стабильность пива при хранении. Для достижения поставленной цели необходимо решение следующих задач:

1) разработка технологии экстракта хмеля с высокой антиоксидантной активностью;

2) изучение антиоксидантной активности экстрактов хмеля и чистых препаратов флавонолов по отношению к различным активным формам кислорода в модельных системах;

3) получение хмелевого экстракта с высокой антиоксидантной активностью и изучение его состава и свойств;

4) исследование влияния чистых препаратов флавонолов хмеля и полученного хмелевого экстракта на стабильность пива при хранении.

Научная новизна работы.

Впервые изучена антиоксидантная активность соединений хмеля по отношению к различным активным формам кислорода.

Впервые установлен диапазон интенсивности у-излучения, в котором соединения экстракта хмеля проявляют свою антиоксидантную активность и идентифицированы продукты радиолиза хмелевого экстракта обращенно-фазовым методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Показано образование под действием у-излучения новых устойчивых форм фенольных соединений хмелевого экстракта.

Установлены параметры экстракции хмеля, позволяющие повысить содержание в экстракте флавоноидов, обладающих антиоксидантной активностью.

Определены условия подавления образования альдегидов «старения» пива чистым препаратом кверцетина и экстрактом хмеля. Показана большая эффективность экстракта хмеля, в сравнении с препаратом кверцетина.

Практическая значимость работы.

Разработана технология экстракта хмеля с повышенным содержанием флавонолов, обладающего антиоксидантной активностью.

Впервые разработан способ стабилизации сенсорно-активных компонентов пива с использованием экстракта хмеля.

Установлены дозировки и разработаны способы внесения экстракта хмеля, позволяющие продлить срок хранения пива в два раза без изменения качества по основным

показателям. Экономическая эффективность от использования хмелевого экстракта заключается в повышении конкурентоспособности пива на 20 % за счет увеличения сроков хранения без увеличения себестоимости.

Апробация работы.

Основные результаты диссертационной работы представлены в докладах и сообщениях на научно-технической конференции «Молодые ученые пищевым и перерабатывающим отраслям АПК. Технологические аспекты производства (г. Москва, МГУПП, 2000 г.); на Международной конференции молодых ученых «От фундаментальной науки - к новым технологиям. Химия и биотехнология биологически активных веществ, пищевых продуктов и добавок. Экологически безопасные технологии» (г. Тверь, ТГТУ, 2001 г.); на VI Международной конференции «Биоантиоксидант» (г. Москва, Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН, 2002 г.); на II Московском международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспектива развития» (Москва, 10-14 ноября 2003).

Публикации. Основные положения и результаты диссертационной работы изложены в 11 печатных работах.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, списка использованной литературы. Работа изложена

1. Обзор литературы

В обзоре литературы представлена характеристика хмеля как источника биологически активных веществ и антиоксидантов. Систематизированы данные по классификации и свойствам фенольных соединений. Рассмотрены современные способы получения экстрактов хмеля и перспектива использования соединений хмеля. Приведены современные представления об окислительных процессах в пиве и факторах влияющих на их интенсивность. Рассмотрены современные способы использования растений и растительных экстрактов с антиоксидантными свойствами, с целью стабилизации пива и продления сроков его хранения.

2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. Материалы и методы исследования

В качестве сырья для получения экстрактов использовали сорта хмеля отечественной селекции • Ранний, Подвязный, немецкой - Spalter Select и польской - Lublin. Использованы коммерческие препараты кверцетина (Qr), рутина (Ru), морина, лютеолина, танина («Cheamapol»).

Физико-химические показатели качества хмеля определяли с использованием методик, принятых в пивоварении. Влажность хмеля - по ГОСТ 21946-76-ГОСТ 21948-76; сумму фенольных соединений хмеля - колориметрическим методом Фолина-Дениса; содержание изогумулона - по методу Analytical-EBC, сухие вещества экстракта хмеля -методом высушивания до постоянной массы, флавонолы - модифицированным фотоколориметрическим методом Мурри, антоцианогены - методом Франкен-Люикса, восстанавливающую способность - модифицированным методом Indicator Time Test (ITT), концентрацию этанола - пикнометрическим методом, активную кислотность - рН-метром, цветность - методом колориметрического сравнения стандартных и исследуемых растворов, кислотность - титрованием раствором щелочи, альдегиды - йодометрическим методом.

Физико-химические показатели сусла, молодого и готового пива, а также микробиологические показатели определяли с использованием методов, принятых в пивоваренной промышленности.

Хроматографический анализ экстрактов хмеля осуществляли на хроматографах «Миллихром А-02» (ЭкоНова, Россия) и «Agilent 1100 Series» (Agilent Technologies, США)

Института физической химии РАН. В работе использовали обращенно-фазовый вариант высокоэффективной жидкостной хроматографии (ОФ-ВЭЖХ) со спектрофотометрическим и диодно-матричным детекторами и стальными хроматографическими колонками. Для идентификации компонентов в сложных природных объектах методом ВЭЖХ использовали относительное время удерживания, УФ-ВИД спектры или относительные оптические плотности при фиксированных длинах волн детектирования.1

Спектры оптического поглощения УФ-ВИД исследуемых образцов регистрировали при комнатной температуре с помощью двухлучевого спектрофотометра «Specord M - 40» (CarlZeiss, Jena, Германия).

Антиоксидантную активность экстрактов хмеля и препаратов Qr и Ru определяли методом радиационно-химического моделирования окислительно-восстановительных реакций. В качестве источника облучения использовали установку у- 60Со ГУРХ-100 ООО института электрохимии им. А. Н. Фрумкина РАН.

При проведении эксперимента использовали математические методы планирования и обработки результатов исследований с применением стандартного пакета программ.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

С целью разработки технологии экстракта хмеля, предусматривающей повышение антиоксидантной активности, проведено исследование влияния сорта, вида хмелепродуктов, экстрагента, гидромодуля, температуры на экстракцию фенольных соединений (ФС) хмеля и на антиоксидантную активность (АОА) полученных экстрактов.

2.2.1. Характеристика хмелевого сырья

В целях изучения сырьевой базы для производства экстракта хмеля был исследован состав фенольных соединений (ФС) различных сортов и партий хмеля.

Табл 1

Сорт Общие смолы Мягкие смолы Твердые ■ смолы а- кислота ß-кис-лота Эфирные масла ФС

Подвязный 27,5 23,2 4,3 7,6 15,6 1,4 1,7

Ранний 14,1 10,4 3,7 2,7 7,7 0,3 2,0

*

* - характеристика всех показателей на абсолютно сухое вещество хмеля, %

Анализ отечественных сортов (табл. 1) показал, что они могут быть отнесены к ароматическому (до 6 % альфа-кислоты) и к горько-ароматическому (6 - 10 %) сортотипам соответственно. Содержание ФС в хмеле сортов Spalter Select и Lublin находилось в пределах 2,2 - 2,3 %. Несмотря на различие в почвенно-климатических условиях произрастания хмеля отечественных и зарубежных сортов содержание ФС находится на близком уровне.

Антиоксидантная активность (АОА) ФС зависит от структуры молекулы и степени ее окисленности. Наибольшую АОА проявляет одна из групп ФС - флавоноиды, среди

Автор благодарит проф. Ларионова О.Г. за помощь в проведение хроматографических исследований; сотрудников сектора ионизирующих излучений института электрохимии им. А. Н. Фрумкина РАН и Д.М. Зорина за консультацию и оказанную помощь в радиационно-химических исследованиях.

Рис 1. Содержание фенольных соединений в различных товарных формах хмеля сорта

Lublin

которых самыми активными антиоксидантами (АО) являются катехины, флавонолы, антоцианидины. Изучение состава ФС хмеля проводилось методом ОФ-ВЭЖХ и анализом спектров оптического поглощения водных и этанольных экстрактов. Хроматографический анализ с учетом времени удерживания (tr, минуты) позволил идентифицировать в составе основных фенольных компонентов всех экстрактов Qr (tr =12,32), Ru (tr = 9,55) и другие типичные флавоноиды хмеля. Особый интерес представляет идентификация ранее не обнаруженного в хмеле дигидрокверцетина (tr = 10,79) - восстановленной формы Qr, обладающего также высокой АОА. Кроме того, только в экстрактах хмеля Подвязный и Lublin идентифицирован нарингин (tr = 12,82). Максимальное количество ФС отмечено у хмеля сорта Spalter Select. Сравнительный анализ хроматограмм показал значительные различия в составе ФС сортов хмеля.

Для изучения влияния технологической переработки было определено содержание ФС различных товарных форм хмеля - в хмеле-сырце, прессованных и гранулированных шишках (сорт Lublin). Полученные данные (рис. 1) показали, что технологическая переработка приводит к снижению общего содержания ФС в хмелепродуктах. Особенно сильное влияние на содержание водорастворимых ФС оказало гранулирование.

Таким образом, проведенные исследования позволили обнаружить значительные различия в групповом составе ФС в исследованных сортах и товарных формах хмеля. Следовательно, при оценке качества сырья для получения экстрактов с высокой АОА следует учитывать не общее содержание ФС, а присутствие групп с высокой АОА. Дальнейшая работа проводилась с хмелем сорта Ранний.

2.2.2. Разработка технологии экстракции фенольных соединений хмеля

На процесс экстрагирования ФС хмеля оказывает влияние ряд факторов, которые необходимо учитывать при выборе условий экстракции - температура и время экстракции, полярность и рН экстрагента, гидромодуль.

Исследование влияния температуры на выход фенольных соединений проводили в диапазоне от 20° до 90 °С, используя в качестве экстрагента 50 % ный раствор этанола. Процесс экстракции контролировали по выходу сухих веществ (СВ) и ФС. Наибольший выход СВ и ФС происходил при температуре кипения смеси 70 °С (рис 2 а).

Для изучения влияния продолжительности экстракции на выход ФС экстракцию проводили при гидромодуле 1 : 50, температуре 70 °С в течение 90 мин. Динамика выхода ФС и СВ представлена на рисунке 2 (б). Из приведенных данных видно, что после 60 мин скорость извлечения падает и проведение дальнейшей экстракции нецелесообразно. Таким образом, наибольший выход ФС и СВ хмеля может быть получен при 70 °С при длительности экстракции 60 мин.

Для изучения влияния полярности среды на выход ФС использовали в качестве экстрагента 0,1 моль/дм3 водный раствор NaOH, воду и этанол с возрастающей концентрацией. Экстракцию проводили с использованием выбранных параметров - 70°С;

1

0.8

0.6 £ 0.4

0.2

0 10 20 30 40 50 60 70 80 toc ■ » СВ экстракта, % ■ Фенолы, %

а)

О 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 время, минуты

-С8 экстракте, % ■

-Фенолы, %

б)

Рис 2. Влияние: а) температуры; б) продолжительности экстракции на выход ФС и С В

хмеля

0,78

HL m °-5э

■ ■ I ■

0,3% NaOH вода .

этанол 50% этанол 70% 96 % этанол

Рис 3. Влияние полярности экстрагента на выход ФС хмеля

240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 Длина волны, нм

—вода —■—0.1 моль/дмЗ №ОН —»—50% этанол

-•—70% этанол —»—96% этанол

Рис 4. Влияние полярности экстрагента на спектр оптического поглощения экстрактов

хмеля

длительности экстракции - 60 мин. В экстрактах определяли содержание СВ и ФС. На рис. 3 видно, что относительная доля ФС к СВ экстракта максимальна при использовании в качестве экстрагента №ОН. На втором месте по количеству извлекаемых ФС находится водно-спиртовой раствор с концентрацией 70 % этанола. Наименьшей долей ФС характеризовался экстракт, полученный при использовании воды.

Для характеристики экстрактов были получены спектры оптического поглощения, приведенные на рис 4. Профиль спектров показывает значительные различия в составе полученных экстрактов. Для щелочного и водного - характерно в основном присутствие изогумулона, монофенолов и танинов, имеющих поглощение при длине волны 265 - 280 нм и незначительные количества флавоноидов, поглощающих при длинах волн 250 - 270 нм и 350 - 390 нм.

Для этанольных экстрактов наиболее характерные максимумы поглощения около 240 нм и 320 - 370 м и минимум поглощения при 260 - 280 нм, обусловлены присутствием флавонолов - желтых пигментов АО.

Табл2

рН экстрагента СВ*, % Выход СВ, % рн экст ракта ITT отн.едУмин % от сухого вещества экстракта

Изогу-мулон Флавонолы Общие фенолы Анто-циано-гены ИП**

1,0 0,55 27,5 4,0 0,015 0,08 0,18 0,64- 0,51 1,25

2,0 0,60 30,0 4,5 0,025 0,12 0,17 0,66 0,41 1,60

3,0 0,66 33,0 5,5 0,040 0.21 0,17 0,74 0,36 2,04

4,0 0,75 37,5 6,0 0,050 0,22 0,16 0,81 0,31 2,57

5,0 0,76 38,0 6,3 0,045 0,30 0,14 0,91 0,35 2,23

6,0 0,78 39,0 6,5 0,035 0,30 0,13 0,98 0,32 3,10

7,0 1,06 53,0 6,5 0,025 0,32. 0,08 i 1,06 0,28 3,18

СВ* - сухие вещества; ИП** - индекс полимеризации

Для изучения влияния рН экстрагента на выход флавонолов варьировали рН 70 % этанола концентрированной соляной кислотой (с = 37,7 %). Данные табл. 2 показывают, что наибольший выход СВ наблюдается при использовании экстрагента рН 7,0, в то время как . содержание флавонолов и ITT максимальны при рН 1,0 - 3,0 и 4,0 соответственно. Эти данные свидетельствуют о присутствии балластных веществ в экстрактах хмеля полученных при нейтральных значениях рН.

Исследование влияния рН экстрагента на выход ФС методом ОФ-ВЭЖХ (рис. 5) показало, что при использовании кислых экстрагентов повышается выход монофенолов и флавоноидов и снижается выход высокомолекулярных соединений. Важно отметить, что кислая среда способствует увеличению выхода среднемолекулярных соединений, имеющих поглощение при X 513 нм, характерное для антоцианидинов, приводящих к повышению: биологической активности полученных экстрактов. Присутствие антоцианидинов в экстрактах (рис.6) подтверждается характером спектров оптического поглощения в видимом диапазоне.

Для определения параметров получения экстракта с минимальным расходом экстрагента проведено исследование влияния гидромодуля (ГМ) в диапазоне от 1 : 50 до 1 : 5 (по массе) на выход ФС из хмеля.

Исследование влияния ГМ на процесс экстракции показало (рис.7), что максимальной 1ТТ, высоким содержанием СВ и флавонолов обладает экстракт,

ю 8 000.00 Ь 7 000,00 ^ 6000,00 5 000.00 | 4 000,00 ¡1 3 000,00 § 2 000.00 8 1000.00 с 0.00

м

~ я

рн«,0

Детекция при длине волны 260 нм

и

П

и

Время удерживания, мин/ты

8! о» г ш* 3! 8" а* о> о> 8 1П Ж Я" [ 66'6"( •15.99 | г 8 СП • 15,99 О! <л я"

о СО о (О о (О о СО

рнг.о рН4.0 рН 5.0 рН 7,0

1000.00 900.00 800.00 700,00 600.00 500.00 400,00 300.00 200,00 100,00 0,00

РН1.0

Детекция при длине волны 334 нм

8! о» • 15.99 | 8 8 О)" -15,99 8 Я 8 а -15.99 | 8 8' 8 О) •15.99 | 8 О* СО

о <0 о со о <о о <о

рН 2,0 рН 4,0 рН 5.0 рН 7,0

Время удерживания, минуты

35.00

О»

Ь зо.оо

% 25.00

I 20,00

л 15.00

Л 10,00

8 5,00 0.00

рН1,0

Детекция при длине волны 513 нм

I- I- I I

о» О) П а» О) О) О) от а> • 15,99 о> о» о> о> в о о> о> а> о» о> <У> О) О) СП

1 о со > о со ^ о со о С7

о <о о <0 о (О о (О

рН 2,0 рН 4.0 рН 5.0 рН 7,0

Время удерживания, минуты

Рис 5. Влияние рН экстрагента на экстракцию соединений хмеля

440 490 - 540 590 640 690 740 790 Длина волны, им

Рис 6. Спектры оптического поглощения экстрактов хмеля сорта Ранний в видимом

диапазоне.

Рис 7. Влияние гидромодуля на: а) содержание сухих веществ; б) выход сухих веществ; в) содержание флавонолов; г) восстанавливающую способность экстрактов.

и

ТаблЗ

Влияние способа экстракции на показатели качества экстракта

СВ, Выход Флаво- ITT,

Способ экстракции % СВ,% нолы, отн.

% ед./мин

Одноступенчатая экстракция, ГМ 1:5 7,22 36,10 1,60 0,50

Одноступенчатая экстракция, ГМ 1:10 5,98 59,80 0,80 0,10

2-х ступенчатая экстракция,

1 ступень экстракции ГМ 1:10 5,98 59,80 0,80 0,10

2 ступень экстракции ГМ 1:10 1,71 17,10 0,49 0,07

2-х ступенчатая экстракция,

1 ступень экстракции (ГМ 1:10) 5,98 59,80 • 0,80 0,10

2 ступень экстракции (ГМ 1 : 5) 4,21 21,05 0,61 0,07

Предварительное замачивание ГМ 1 : 5

экстракция (ГМ 1: 7,5) 10.26 76.95 1.16 0.17

Без замачивания ГМ 1 : 7,5 7,77 58,28 1,04 0,13

Табл 4

Физико - химические показатели экстракта хмеля

Показатель Значение

Внешний вид густая консистенция ■

Цвет темно - зеленый с коричневым оттенком

Аромат хмелевой, спиртовой

Массовая доля СВ, % 60,00

PH 4,3 - 5,3

Изогумулон, % 1,7-2,5

Фенольные соединения, % 8,0-9,0

Флавонолы, % 5,5-6,5

ITT, отн. ед./минуту 0,10-1,15

полученный при ГМ 1 : 5. Однако, использование этого значения гидромодуля приводит к снижению выход СВ и флавонолов, поэтому более целесообразно использовать ГМ 1:10.

Для увеличения выхода СВ и флавонолов при экстракции растительного сырья используется такой известный прием как предварительное замачивание. Этот способ ускоряет взаимодействие частиц растительного сырья и экстрагента, позволяет провести односторонний процесс диффузии и увеличить выход СВ хмеля.

Состав хмелевых экстрактов, полученных путем одно- и двухступенчатой экстракции, и экстракции с предварительным замачиванием в течение 1 часа представлены в табл 3. Анализ состава экстрактов показал, что предварительное замачивание позволяет повысить выход и содержание СВ и флавонолов, и увеличить ITT экстракта в сравнении со всеми исследованными способами.

Экстракт может быть получен периодическим или непрерывным способом. Технологическая схема получения экстракта хмеля непрерывным способом приведена на рисунке 8. Разработанная технология была использована для получения в лабораторных условиях хмелевого экстракта. В табл 4 представлена оценка физико - химических показателей полученного экстракта.

2.23. Исследование антиоксидантной активности экстрактов хмеля

Антиоксидантная активность (АОА) флавоноидов проявляется в присутствии активных форм кислорода (АФК) и зависит не только от структуры молекулы, но и

Рис 8.Технологическая схема производства эксракта хмеля непрерывным способом

в - вода; п - пар; э- эстрагент; 1) подъемник; 2) транспортер; 3) дробилка;

4) бункер-накопитель; 5) бункер-дозатор; 6) экстрактор; 7) сборник - смеситель;

8) насос; 9) теплообменник; 10) насос; 11) теплообменник; 12) сборник-мерник; 13) насос;

14) испаритель; 15) сборник-мерник; 16) купажные емкости; 17) сборник готовой продукции

18) шнек; 19) пресс; 20) насос; 21) сборник; 22) бункер; 23) выпарная колонна; 24) теплообменник;

25) сборник этанола;26) емкости этанола и 1,5 % раствора НС1; 27) теплообменник;

28) выпарная колона; 29) дефлегматор; 31) холодильник;32) насос; 33) теплообменник;

34) сборник этанола; 35) насос

Табл 5

Радиационная устойчивость кверцетина и рутина

Доза X, нм Выход радиолиза, G, молекул/100 эВ

облучения, Гр3 Ru/Mi1 Ru/ROH-1 Qr/Mi Qr/ROH

85 256 0,03 2,31 1.17 0,20

380 0,19 2,50 0,23 0,26

255 256 0,19 0,72 0,67 0,28

380 0,38 0,56 0,46 0,32

510 256 0,18 0,35 0,48 0,34

380 0,50 0,45 0,63 0,48

Mi1 - обратно-мицеллярный раствор; ROH'1 - этанольный раствор.

3) 1 Гр = 6,24 х 10'5 эВ/см3

состава среды. АОА основных компонентов хмелевого экстракта была изучена на модельных системах, в которых учитывали влияние вышеуказанных факторов.

Для определения - АОА был использован прямой метод радиационно-химического моделирования окислительно-восстановительных процессов, основанный на генерации свободных радикалов (Я*) и активных форм кислорода (АФК) (Ог , ЯО*2. >ОН* е'гндрат* Н) в среде. За счет взаимодействия флавоноидов с этими частицами образуются различные по стабильности продукты, которые регистрируются в пострадиационный период и детектируются спектрофотометрическим методом и ОФ-ВЭЖХ.

Моделирование молекулярных и обратно-мицеллярных сред, характерных как для хмелевых экстрактов, так и других пищевых продуктов, осуществляли с помощью водно-спиртовых и водно-органических (НгО/ПАВ/углеводород) растворов.

За взаимодействием АФК с кверцетином ((}г) и рутином (Яи) (с = 10"4 М) следили по изменению оптической плотности основных полос поглощения 250 - 270 НМ И Хг 350 — 390 нм. В качестве количественной характеристики радиолиза использовали радиационно-химический выход обесцвечивания флавоноидов или появления нового продукта и изменение величины относительной интенсивности основных полос поглощения (У, %) Qг и Ru под действием у-облучения' (рис. 9 а, б). Процессы снижения относительной интенсивности поглощения обозначены знаком «-», а процессы увеличения - «+». Полученные данные, отражающие влияние дозы облучения на устойчивость Qг и Ru к АФК представлены в табл. 5.

Сравнение спектров оптического поглощения Qг и Ru в молекулярных и в мицеллярных растворах позволило обнаружить влияние организации среды на характер спектров оптического поглощения.

Близкие значения выходов распада пигментов Qг/ROH и Ru/Mi при облучении в дозах 255 и 510 Гр свидетельствуют о высокой обратимости реакций взаимодействия Qг и Ru с активными продуктами радиолиза этанола и обратно-мицеллярного раствора.

Более высокие значения выходов обесцвечивания пигментов при малых дозах облучения указывает на их высокую АОА. При больших дозах облучения радиационно-химический выход пигментов снижается за счет регенерации, что говорит об их многократном участии в обрыве кинетических цепей окисления.

Уменьшение оптической плотности основных полос поглощения (281 нм, 330 нм, 350 нм и 430 нм) и появление новых говорит о взаимодействии компонентов экстрактов с активными частицами. Для количественной характеристики АОА экстрактов использовали У компонентов экстрактов в пострадиационный период (рис. 9 в, г).

Различный состав ФС сортов хмеля влияет на способность их экстрактов проявлять АОА (рис. 9.в). На рисунке показаны различия в У экстрактов разных сортов хмеля.

в) г)

Рис 9. Изменение относительной интенсивности оптического поглощения после у-облучения: а) этанольных растворов <3г и Яи; б) обратно-мицеллярных растворов (?г и Яи; в) 50 % этанольных экстрактов хмеля; г) 70 % этанольных экстрактов хмеля

Наибольшее значение обесцвечивания пигментов отмечается у сорта Подвязный. Для сортов Ранний и Spatter Select характерно образование новых продуктов хиноидной формы. Эти данные коррелируют со значениями G этанольных растворов Qr и Ru (рис 9 а).

Для изучения влияния состава экстрагента на АОА экстрактов сортов хмеля Ранний, Подвязный и Spalter Select использовали радиационно-химическое воздействие, у-облучение экстрактов проводили в выбранных раннее условиях. Полученная доза составляла 20 кГр.

Компоненты экстрактов хмеля, полученные при слабокислых и кислых значениях рН этанола и имеющие поглощение при X 330 — 350 НМ, при окислительной деструкции интенсивно разрушаются, что указывает на высокую АОА. В этих же экстрактах образуются продукты с поглощением в области X. 430 НМ, что указывает на то, что экстракты не теряют своей АОА.

Сравнение АОА Qr и Ru с АОА экстрактов, полученных при разных концентрациях этанола, выявило образование различных организаций сред. При использовании 50 % этанола (рис 9 а, в) преобладают молекулярные структуры, а при использовании 70 % -мицеллярные (рис. 9 б, г). Вероятно, этим можно объяснить значительные различия в ITT экстрактов, полученных при использовании 50 %-ного и 70 % -ного этанола.

Экстракты хмеля, полученные при рН экстрагента 1,0 и 4,0, обладали более высокой активностью, чем чистые вещества по причине максимального взаимодействия в экстракте содержащем комплекс АО и за счет содержания продуктов с более высокой активностью, чем Qr и Ru.

2.2.4. Влияние хмелевых экстрактов на качество пива

Окислительно-восстановительная система пива формируется в ходе сбраживания сусла, и присутствие антиоксидантов (АО) может оказать влияние на стабильность готового продукта. Дрожжи являются восстановительной системой сусла. В анаэробных условиях брожения дрожжи подвергаются действию АФК. Вследствие окисления АО или гиперпродукции реакционных форм кислорода баланс между образованием и инактивацией АФК может нарушаться. Несмотря на короткое время жизни, АФК обладают цитотоксичностью и способны вызывать множественные нарушения в дрожжах: инактивировать ферменты, индуцировать перекисное окисление липидов. Окислительный стресс приводит к потере жизнеспособности, замедлению роста, развитию процессов, снижающих продуктивность и технологические свойства дрожжей. Присутствие в сбраживаемой среде Qr или экстракта хмеля может способствовать сохранению физиологической активности дрожжей в условиях окислительного стресса.

Для изучения влияния хмелевого экстракта и Qr на физиологическую активность дрожжей использовали препарат Qr и экстракты, полученные при рН экстрагента 1,0 и рН 4,0, и облученный экстракт рН 1,0 (доза облучения 20 кГр). Выбор экстрактов обусловлен тем, что они обладают более высокой АОА и имеют полосы оптического поглощения в области длин волн более 400 нм.

В качестве АО вносили 0,005 % об. Qr или хмелевой экстракт, содержащий эквивалентное количество флавонолов. Брожение проводили в течение 7 сут при 7 ± 2°С. Оценка состояния культуры дрожжей в течение брожения показала (рис. 10) благоприятное влияние добавленных АО как на накопление гликогена дрожжевыми клетками, так и на устойчивость к автолизу. Количество мертвых клеток в культуре при добавлении Qr снизилось на 50 %, при добавлении хмелевого экстракта - на 65 %, и облученного экстракта - на 25%.

Продолжительность брожения, сут • Сусло - контроль ■ Сусло с экстрактом

■ * ■ Сусло с экстрактом облуч < Сусло с От

а)

160 ,

140 J 135 128

5 120 | 100 108 ■ ШЛ

I I I I

пиво-контроль пиво + экстрат пиво + облуч. ПИВО «От

э it страт

В)

Рис 10. Влияние антиоксидантов на показатели жизнедеятельности дрожжей: а) содержание гликогена; 6) количество мертвых клеток; в) количество биомассы в конце главного брожения

Табл б

Влияние кверцетина и хмелевых экстрактов на физико-химические _показатели молодого пива_

Показатели Сусло Пиво-контроль Пиво с Qr рН экстрагента

Пиво срН 1,0 Пиво срН 1,0 облуч. Пиво срН 4,0

Экстрактивность начального сусла, % 14,0 14,0 14,0 14,0 14,0 14,0

Действительный экстракт, мае. % - 6,27 6,27 6,29 6,52 6,20

Действительная степень сбраживания, % - 55,25 55,25 55,07 53,4 55,71

Массовая доля спирта, мае. % - 4,00 4,0 4,10 3,9 4,1

Кислотность, к.ед 1,50 2,50 2,90 2,80 2,9 2,6

Цветность, ц.ед. 0,70 0,87 0,83 0,85 0,87 0,85

Более активное физиологическое состояние дрожжей в опытных вариантах с добавлением хмелевых экстрактов и Qr подтверждают данные по накоплению биомассы дрожжей. Добавление экстракта повысило содержание биомассы на 8 %, облученного экстракта - на 35 %, a Qr - на 28 % в сравнении с контролем. Анализ физико-химических показателей пива показал (табл. 6), что внесение Qr и хмелевых экстрактов не повлияло на действительную степень сбраживания и содержание этанола, но вызвало повышение титруемой кислотности, которая оставалась в пределах нормы.

Органолептическая оценка опытных образцов пива с Qr и экстрактом хмеля показала, что они обладали более мягким гармоничным вкусом с хмелевой горечью без посторонних привкусов, в отличие от контроля и образца с облученным экстрактом, в которых наблюдалась грубоватая горечь.

Таким образом, показано положительное влияние Qr и хмелевых экстрактов на физиологическое состояние дрожжей и органолептические показатели пива.

Метаболическая активность дрожжей и протекающие физико-химических процессы в ходе брожения сусла приводят к потере значительной части АО фенольной природы. Снизить расход АО возможно путем введения его в готовое пиво перед розливом.

Поскольку в экстракте хмеля, полученном при рН экстрагента 1,0 содержится максимальное количество низкомолекулярных флавонолов с наименьшим, индексом полимеризации, он был использован для стабилизации пива.

Исследование влияния экстракта хмеля на стойкость пива проводили в условиях теста на ускоренное стаиение. Экстракт вводили в готовое пиво перед розливом в пересчете на Qr из расчета 0,5 - 3,0 мг/дм3 и препарат Qr • 0,5 - 3,0 мг/дм3.. В ходе хранения пива определяли показатели, отражающие интенсивность окислительных процессов: содержание альдегидов, ITT. Контроль пива проводили в исходный момент и после 7 и 14 сут хранения (рис 11).

Внесение Qr и экстракта хмеля способствовало стабилизации окислительно-восстановительного потенциала пива в течение всего периода хранения. Можно отметить, что при минимальной дозировке в течение первых суток хранения пива внесенный Qr

0,5 мг/дмЗ 70

7 Время, сутки □ Контроль ■ От ■ Экстракт хмеля

1,0 мг/дмЗ 70

7 Время, сутки И □ Контроль ■ От ■ Экстракт хмеля

7 Время, сутки 14 О Контроль ■ От ■ Экстракт хмеля

а)

б)

в)

0.5 мг/дмЗ

1 7 14

Время, сутки

7 14

Время, сутки

0.035 0,03 | 0,025 § 0,02 I 0,015 Ё 0,01 0,005 0

0,03

3,0 мг/дмЗ

0,02

0,010

0,01

ж* \

| о.ооЯ I о.ооа

0,01

0,01

1 о 7

Время, сутки

14

г) Д) е)

Рис 11. Влияние кверцетина и экстракта хмеля на показатели стабильности качества пива: (а - в) - содержание альдегидов;

(г-е) - восстанавливающая способность

вызвал увеличение ITT, а затем стабилизацию, в то время как в контроле наблюдалось постоянное снижение ITT. Экстракт в пересчете на Qr в дозе 3,0 мг/дм5 вызвал максимальное повышение восстановительной способности пива с 1 сут хранения и сохранял ее на высоком уровне до 14 сут хранения.

На рис 11 (а - в) видно, что за первые 7 сут хранения контрольного образца пива наблюдается снижение содержания альдегидов, в последующие 7 сут хранения появляются альдегиды «старения» и их содержание возрастает. Внесение Qr в дозе 3,0 мг/дм' приводит к снижению в содержание альдегидов, что связано с более сильным окислением альдегидов за 7 суток хранения, и полным подавлением образования альдегидов «старения» за последующий период хранения. Экстракт хмеля в этой же дозировке в пересчете на Qr также полностью подавляет образование сенсорно активных альдегидов, в отличие от других дозировок.

Таким образом, внесение 3,0 мг/дм1 экстракта хмеля полученного при рН 1,0 экстрагента, более эффективно приостанавливает процессы вкусовой деструкции пива при хранении.

Выводы

1) Разработана технология экстракта хмеля с высокой антиоксидантной активностью.

2) По результатам анализа отечественных и зарубежных сортов хмеля показаны значительные различия в групповом составе ФС разных сортов и товарных форм хмеля. Установлено, что при оценке качества сырья для получения экстрактов с высокой АОА следует учитывать не общее содержание фенольных соединений, а присутствие групп ФС с высокой АОА.

3) Установлены параметры экстракции хмеля, позволяющие повысить содержание в экстракте флавоноидов, обладающих АОА.

3) Получен хмелевой экстракт с высокой АОА и изучен его состав.

4) На основании сравнительного анализа антиоксидантной активности экстрактов хмеля и чистых препаратов Qr и Ru по отношению к различным активным формам кислорода в модельных системах, установлено, что экстракты хмеля представляющие собой комплекс биологически активных веществ обладают большей АОА, чем индивидуальные вещества.

6) Исследовано влияния чистых препаратов флавонолов хмеля и полученного хмелевого экстракта на стабильность пива при хранении. Определены условия подавления образования альдегидов в пиве чистым препаратом Qr и экстрактом хмеля. Показана большая эффективность экстракта хмеля по сравнению с препаратом Qr. Добавление в готовое пиво перед розливом экстракта хмеля в количестве 3,0 мг/дм3 в пересчете на Qr подавляет образования альдегидов «старения», что позволяет сохранить горечь и другие сенсорно активные компоненты пива.

7) Экономическая эффективность от использования экстракта хмеля в пивоварении заключается в повышении конкурентоспособности пива на 20 % за счет увеличения сроков его хранения без увеличения себестоимости.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Идентификация и изучение свойств флавонол-гликозидов, выделенных из хмеля «Magnum», «Подвязный» / Горячева Н.Г., Ревина А.А., Шаненко Е.Ф., Кочетова М.В., Ларионов О.Г. - Тезисы докладов. Молодые ученые пищевым и перерабатывающим отраслям АПК / Московский гос. университет пищевых производств. - Москва, 2000. - С. 69 -71.

2. Содержание полифенолов в сортах хмеля, используемых в пивоварении / Горячева Н.Г., Шаненко Е.Ф., Ревина А.А., Рупошев А.Р. - Труды Чувашской государственной с.-х. Академии / Чувашская государственная с.-х. академия. - Чебоксары. - 2001. - Т. 15. - С. 3 -4.

3. Разработка способа получения хмелевого экстракта, обогащенного фенольными соединениями / Горячева Н.Г., Шаненко Е.Ф., Пичугина Т.В., Ревина А.А. - Материалы международной конференции молодых ученых. От фундаментальной > науки - к новым технологиям. Химия и биотехнология биологически активных веществ, пищевых продуктов и добавок. Экологически безопасные технологии. / Тверской государственный технический университет. - Тверь, 2001. - С. 55.

4. Исследование природы и антиоксидантной активности флавоноидов хмеля / Кочетова М.В., Ларионов О.Г., Горячева Н.Г., Ревина А.А. - Материалы международной конференции молодых ученых. От фундаментальной науки - к новым технологиям. Химия и биотехнология биологически активных веществ, пищевых продуктов и добавок. Экологически безопасные технологии. / Тверской государственный технический университет. - Тверь, 2001. - С. 55 - 56.

5. Исследование природы и антиоксидантной активности флавоноидов хмеля / Кочетова М.В., Ларионов О.Г., Горячева Н.Г., Ревина А.А. - VIII Всероссийский симпозиум по молекулярной жидкостной хроматографии и капиллярному электрофорезу. -Москва, 2001.-С. 14.

6. Фенольные соединения и их использование в пищевой промышленности / Горячева Н.Г., Ревина А.А., Шаненко Е.Ф., Пичугина Т.В. - Сб. трудов «Нетрадиционные природные ресурсы, инновационные технологии и продукты» // РАЕН - МААНОН - Москва, 2001. - С. 206 - 230.

7. Сравнение антиоксидантной активности экстрактов хмеля и индивидуальных флавоноидов / Горячева Н.Г., Ревина А.А., Шаненко Е.Ф. - Тезисы докладов VI международной конференции «Биоантиоксидант» - Москва, 16-19 апреля 2002 г. - Москва, 2002.-С. 126-128.

8. Фенольные соединения в хмелепродуктах различных сортов хмеля / Горячева Н.Г., Шаненко Е.Ф., Пичугина Т.В., Ревина А.А. // Пиво и напитки. - 2002. - № 2. - С. 28 - 29.

9. Исследование фенольных соединений экстракта хмеля с помощью спектрофотометрического метода и ВЭЖХ / Горячева Н.Г., Кочетова М.В., Шаненко Е.Ф., Ревина А.А., Ларионов О.Г. // Пиво и жизнь. - 2003. - № 2 (37). - С. 17 - 34.

10. Влияние активной кислотности экстрагента на состав хмелевых экстрактов / Горячева Н.Г., Шаненко Е.Ф., Ревина А.А., Кочетова М.В., Ларионов О.Г. // Сб. науч. тр. Всероссийской научно-технической конференции-выставке «Высокоэффективные пищевые технологии и технические средства для их реализации». / МГУПП - Москва, 2003. - С. 110114.

11. Исследование антирадикальной активности флавоноидов хмеля / Горячева Н.Г., Ревина А.А., Шаненко Е.Ф., Кочетова М.В., Ларионов О.Г., Эль-Регистан Г.И. // Биотехнология: состояние и перспектива развития: Материалы II Московского международного конгресса (Москва, 10-14 ноября 2003). М.: ЗАО ПИК «Максима», РХТУ им. Д.И. Менделеева, 2003. Часть 2. - С. 132 - 133.

IM О 1 5 4

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Общая характеристика фенольных растительных соединений.

1.2. Свойства флавоноидов.

1.3. Хмель как источник биологически активных веществ.

1.4. Стабилизация качества пива с использованием антиоксидантов

1.4.1. Химический состав пива.

1.4.2. Окислительные процессы в пиве и факторы, влияющие на их интенсивность.

1.4.3. Система коллоидной защиты пива.

1.4.4. Перспектива использования хмелевых экстрактов.

2. Экспериментальная часть.

2.1. Материалы и методы исследования.

2.2. Результаты и их обсуждения.

2.2.1. Характеристика хмелевого сырья.

2.2.2. Разработка способа экстракции фенольных соединений хмеля

2.2.2.1. Влияние физических и химических параметров экстракции хмеля на выход и качественный состав фенольных соединений.

2.2.2.2. Влияние величины гидромодуля на экстракцию фенольных соединений хмеля.

2.2.2.3. Разработка технологической схемы получения экстракта хмеля.

2.2.3. Исследование антиоксидантной активности экстрактов хмеля

2.2.3.1. Исследование антиоксидантной активности препаратов флавонолов.

2.2.3.2. Исследование антиоксидантной активности экстрактов различных сортов хмеля.

2.2.4. Исследование влияния экстрактов хмеля на качество пива.

2.2.4.1. Выбор показателей, характеризующих стабильность пива.

2.2.4.2. Исследование влияние хмелевых экстрактов на физиологическую активность дрожжей.

2.2.4.3. Исследование влияния экстракта хмеля на стабильность пива при хранении.

Выводы.

Актуальность работы

В современных пищевых технологиях широко используются антиоксиданты, которые позволяют значительно продлить сроки хранения продуктов и повысить их биологическую ценность. Хмель является богатейшим источником биологически активных веществ, в том числе антиоксидантного действия. ,

Использование антиоксидантов в пивоварении позволяет увеличить сроки хранения пива за счет снижения скорости окислительных процессов. Для замедления окисления в пиво вводят разрешенные антиоксиданты, однако эти «чужеродные» для пива вещества могут отрицательно влиять на органолептические показатели. Поэтому именно для пивоварения хмель может быть перспективным источником антиоксидантов. Однако технология хмелевых продуктов с высокой антиоксидантной активностью до настоящего времени не разработана.

Разработка технологии получения хмелевых экстрактов, позволяющей сохранить антиоксиданты в активной форме, является актуальной, поскольку она расширит возможности использования хмелевого сырья, в том числе хмелевых отходов. Такие хмелевые продукты могут быть использованы как антиоксидантные и биологические добавки в пивоварении для увеличения сроков хранения пива и повышения его биологической ценности.

Цель и задачи исследования

Основной целью диссертационной работы являлась разработка способа получения экстракта хмеля, обладающего антиоксидантной активностью и изучение его влияния на стабильность пива при хранении. Для достижения поставленной цели необходимо решение следующих задач:

1) разработка технологии экстракта хмеля с высокой антиоксидантной активностью;

2) изучение антиоксидантной активности экстрактов хмеля и чистых препаратов флавонолов по отношению к различным активным формам кислорода в модельных системах;

3) получение хмелевого экстракта с высокой антиоксидантной активностью и изучение его состава и свойств;

4) исследование влияния чистых препаратов флавонолов хмеля и полученного хмелевого экстракта на стабильность пива при хранении.

Научная новизна

Впервые изучена ант иоксидантная активность компонентов хмеля по отношению к различным активным формам кислорода.

Впервые установлен диапазон интенсивности у-излучения, в котором соединения экстракта хмеля проявляют свою антиоксидантную активность и идентифицированы продукты радиолиза хмелевого экстракта обращенно-фазовым методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Показано образование под действием у-излучения новых устойчивых форм фенольных соединений хмелевого экстракта.

Установлены параметры экстракции хмеля, позволяющие повысить содержание в экстракте флавоноидов, обладающих антиоксидантной активностью.

Определены условия подавления образования альдегидов «старения» пива чистым препаратом кверцетина и экстрактом хмеля. Показана большая эффективность экстракта хмеля, в сравнении с препаратом кверцетина.

Практическая значимость работы

Разработана технология экстракта хмеля с повышенным содержанием флавонолов, обладающего антиоксидантной активностью.

Впервые разработан способ стабилизации сенсорно-активных компонентов пива с использованием экстракта хмеля.

Установлены дозировки и разработаны способы внесения экстракта хмеля. Экономическая эффективность от использования хмелевого экстракта заключается в повышении конкурентоспособности пива на 20 % за счет увеличения сроков хранения без увеличения себестоимости.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Выводы

1) Разработана технология экстракта хмеля с высокой антиоксидантной активностью.

2) По результатам анализа отечественных и зарубежных сортов хмеля показаны значительные различия в групповом составе ФС разных сортов и товарных форм хмеля. Установлено, что при оценке качества сырья для получения экстрактов с высокой АОА следует учитывать не общее содержание фенольных соединений, а присутствие групп ФС с высокой АОА.

3) Установлены параметры экстракции хмеля, позволяющие повысить содержание в экстракте флавоноидов, обладающих АОА.

3) Получен хмелевой экстракт с высокой АОА и изучен его состав.

4) На основании сравнительного анализа антиоксидантной активности экстрактов хмеля и чистых препаратов Qr и Ru по отношению к различным активным формам кислорода в модельных системах, установлено, что экстракты хмеля представляющие собой комплекс биологически активных веществ обладают большей АОА, чем индивидуальные вещества.

6) Исследовано влияния чистых препаратов флавонолов хмеля и полученного хмелевого экстракта на стабильность пива при хранении. Определены условия подавления образования альдегидов в пиве чистым препаратом Qr и экстрактом хмеля. Показана большая эффективность экстракта хмеля по сравнению с препаратом Qr. Добавление в готовое пиво перед розливом экстракта хмеля в количестве 3,0 мг/дм3 в пересчете на Qr подавляет образования альдегидов «старения», что позволяет сохранить горечь и другие сенсорно активные компоненты пива и продлить срок хранения пива.

7) Экономическая эффективность от использования экстракта хмеля в пивоварении заключается в повышении конкурентоспособности пива на 20 % за счет увеличения сроков его хранения без увеличения себестоимости.

1. Алавердиева С.И. Антиоксидантные свойства природных компонентов и их смесей в процессах окисления липидов в технологиях косметических изделий: Дис. канд. т. наук. - М., 2000. -154 с.

2. Аксенова З.Н. Определение физико-химических показателей качества хмеля и продуктов его переработки. Харьков, 1989. - 89 с.

3. Ангер Х.М. Обеспечение небиологической стабильности пива важный фактор, гарантирующий минимальную стойкость при хранении // Brauwelt. Мир пива. - 1996. - № 2. - С. 40.

4. Базарнова Ю.Г., Колодязная B.C. Определение антиокислительных фитодобавок в жирсодержащих продуктах // Пищевая пром-ть. 2000. - № 2. - С. 20 - 21.

5. Биохимия растительного сырья. / Под ред. Щербакова В.Т. -М.: Колос, 1999. 376 с.

6. Вакербауер К., Хардт Р. Реакция с радикалами и стабильность вкуса пива // Мир пива. 1997. - № 4. - С. 38 - 42.

7. Великая Е.И., Суходол В.Ф. Лабораторный практикум по курсу общей технологии бродильных производств. М.: Легкая и пищевая пром-сть, 1983. - 312 с.

8. Гаммерман А.Ф., Кадаев Г.Н., Яценко-Хмелевский А.А. Лекарственные растения. М.: Высшая школа, 1990. - 542 с.

9. Главачек Ф., Лхотский А. Пивоварение. М.: Пищевая пром-ть, 1977.-С. 280.

10. ГОСТ 21946 76 - Гост 21948-76. Хмель-сырец и хмель прессованный. Технические условия и методы испытаний. - Москва, 1976. -22 с.

11. ГОСТ 12786-80 Пиво. Методы отбора проб.

12. ГОСТ 12787-81 Определение спирта этилового.

13. ГОСТ 12787-81 Определение экстрактивности.

14. ГОСТ 12788-87 Определение кислотностиж

15. ГОСТ 12789-87 Определение цветаж

16. ГОСТ 30060-93 Определение органолептических показателей

17. Деменко В.И., Степанова Ю.В. Фитоэкстрогены и фитогормоны понятия нетождественные //Сырье и упаковка. - 2002. -№9(28).-С. 9-11.

18. Дудкин М.С., Щелкунов Л.Ф. Новые продукты питания. М.: МАИК «Наука», 1998. - 303 с.

19. Ермолаева Г.А. Справочник работника лаборатории пивоваренного предпричтия. М.: Изд-во «Профессия», 2004. - 536 с.

20. Запрометов М. Н. Фенольные соединения растений и их биогенез // Итоги науки и техники. Серия Биологическая химия 1988. -Т. 27.- 188 с.

21. Защита Saccharomyces cerevisiae алкилоксибензолами от окислительного и радиационного поражения / Степаненко И.Ю., Страховская М.Г, Беленикина Н.С. и др. // Микробиология. 2004. - Т. 73.-№2. - С. 204-210.

22. Зенков Н.К., Меньшикова Е.Б. Активированные кислородгые метаболиты в биологических системах // Успехи совр. биол. — 1993. — Т. 113.- Вып 3. С.286 — 296.

23. Использование хмеля в фитотерапии / Горошко О.А., Пахомов В.П., Самылина И.А., Никулина И.Н. // Практическая фитотерапия. 2000. - № 1. - С. 39 - 44.

24. Исследование состава шишек хмеля / Горошко О.А., Пахомов В.П., Самылина И.А., Никулина И.Н. // Фармация. 2000. - № 4. - С.

25. Каликинская Е. Антиоксидантны защита от старения и болезней // Наука и жизнь. - 2000. - № 8. - С. 90 - 93.

26. Кинг Б.М., Дьюнвельд С.А.А. Изменение горькости пива при его хранении. Материалы симпозиума «Квест интернешенел Нидерланды». Амстердам. 2002. — С. 16.

27. Колодязная B.C. Пищевая химия. СПбГАХПТ, 1999.- 140 с.

28. Кондакова Н.В. Разработка биотест-систем для изучения повреждающего действия ионизирующей радиации и поиска биологически активных веществ с противолучевыми свойствами: Автореф. дис. доктора биолог, наук. — М., 2000. — 35 с.

29. Косминский Г. И. Технология солода, пива и безалкогольных напитков. Лабораторный практикум по технохимическому контролю производства. М.: Дизайн ПРО, 1998. - 352с.

30. Красновский А.А. Синглентный кислород: механизмы образования и пути дезактивации в биологических системах // Биофизика. 1994. - Т. 39. - Вып. 2. - С. 236 - 250.

31. Кочетова М.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография ряда фенольных и полифенольных соединений: Автореф. дис. к.х.н. М., 2003. - 24 с.

32. Кочетова М.В., Ревина А.А., Ларионов О.Г. Относительные индексы удерживания в ВЭЖХ некоторых полифенольных веществ // Сорбционные и хроматографические процессы. — 2003. Т.23. - № 1. -С. 12.-18.

33. Кочетова М.В. Хроматографическое исследование флавоноидов хмеля // Сборник статей «Некоторые проблемы физической химии», под ред. Чалых А.Е. М.: ИФХ РАН - 2001. - С. 40-44.

34. Кулинский В.И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул: польза, вред и защита // Соровский образ, журнал 1999. - Т.5. - № 1. - С. 2 - 7.

35. Кунце В., Мит Г. Технология солода и пива: пер. с нем. СПб., «Профессия», 2001.-912 с.

36. Курченко В.П. Механизм ингибирующего действия меланиновых пигментов // Тезисы докладов VI международной конференции «Биоантиоксидант» Москва, 16—19 апреля 2002 г. — Москва, 2002. - 683 с.

37. Лесиовская Е.Е. Антиоксиданты препараты 21 века // OapMexpeess. Актуальные вопросы формации. - 1999. -№ 1.-С. 2 - 11.

38. Липидный жирнокислотный состав и состояние перекисного окисления липидов сублимированного кобыльего молока при длительном хранение с антиоксидантами / Валиева Т.А., Валиев А.Г., Куланова С.Н. и др.// Вопросы питания. — 1991. № 5. — С. 61 — 65.

39. Лукаткин А.С. Холодовое повреждение теплолюбивых растений и окислительный стресс. — Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2002.-208 с.

40. Лященко Н.И., Солодюк Г.Д. Методы количественного определения полифенолов в хмеле // Хмелеводство. К.: Урожай, 1980.- Вып. 2.-С. 57-64.

41. Максимов О.Б., Кулеш П.И., Горовой П.Г. Полифенолы дальневосточных растений. — Владивосток: Дальнаука, 2002. — 332 с.

42. Максимова Т. Еще раз об антиоксидантной терапии // Наука и жизнь. 2001. - № 2. - С. 52 - 55.

43. Матоушек Я. Целебное пиво // Пиво и жизнь. 2002. - № 2 (31).-С. 1-3.

44. Мельникова Н.Б., Иоффе И.Д. Биосовместимость дигидрокверцетина с липофильными и гидрофильными фрагментами биомембраны. Влияние ионов металлов и аскорбиновой кислоты // Химия растительного сырья. 2002. - № 2. - С. 93 — 103.

45. Мерзляк М.Н. Активированный кислород и жизнедеятельность растений // Соровский образ, ж. 1999. - Т.5. - № 9.-С. 20-26.

46. Мойр М. Ароматические соединения хмеля / Brauwelt. Мир пива 1997. - №3. - С. 63 - 71.

47. Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация. / Под ред. проф. B.JI. Багировой, проф. В.А. Северцева. СПб.: Спец. лит.,2001.- 223 с.

48. Новый метод определения антиоксидантной активности красных вин / Оганесянц JI.A, Телегин Ю.А., Сенькина З.Е. и др. // Виноделие и виноградарство. 2003. - № 5. - С. 27. - 29.

49. Окислительно-восстановительные процессы в экстрактах / Филонова Г.Л., Никифорова У.В., Урусова JI.M., Ерыгин Г.Д. // Пиво и напитки. 2001. - №5. - С. 52-53.

50. О'Рурк Т. Коллоидная стабилизация пива / Пиво и напитки.2002.- №6.-С. 23 -25.

51. Оценка антирадикальной активности композиций диквертина и аскорбиновой кислоты / Ильясова И.Р., Белобородое B.JL, Тюкавкина Н.А. // VI симпозиум по фенольным соединениям 28 — 30 апреля 2004.- Москва. 2004. - С 120.

52. Пищевые добавки./ Нечаев А.П., Кочеткова А.А., Зайцев А.Н.- М.: Изд-кий комплекс МГУ1111,1998. 66 с.

53. Пихльмайер Г. Развитие мирового рынка хмеля с точки зрения немецких хмелеводов / Пиво и жизнь — 2001. №4(29). — C.I — X.

54. Применение пряно-ароматических и лекарственных растений в пищевой промышленности / Касьянов Г.И., Кизим И.Е., Холодцов М.А. // Пищевая промышленность. 2000. - № 6. - С. 18 -20.

55. Применение экстрактов растений в качестве антиоксидантов при производстве маргариновой продукции / Дементий В.А., Гладкая В.Ф., Радионова JI.JI., Слюнина В.М. и др. // АгроНИИТЭИПП Пищевая промышленность. Серия 20. — 1993. Вып. 1. - С. 1 - 20.

56. Применение экстрактов растительного сырья в качестве биологически активных добавок к пище / Маюрникова JI.A., Гореликова Г.А., Позняковский В.М., Щипицын С.К. // Хранение и переработка сельхозсырья. 2000. - № 5. - С. 41 - 42.

57. Природные антиоксиданты как гепатопротекторы / Бунятян Н.Д., Герасимова О.А., Сахарова Т.С. и др. // Экспер. и клинич. фармакология - 1999. - Т. 62. - № 2. - С.64 - 67.

58. Прохорова Л.И., Ревина А.А. Роль лабильных комплексов с кислородом в антиоксидантной активности каротиноидов/ Радиационная биология. Радиоэкология. — 2001- Т.41. № 1.С. 24 — 32.

59. Развитие мирового рынка хмеля с точки зрения немецких хмелеводов. Пихльмайер Г. / Пиво и жизнь № 4(29), 2001. С. I — X.

60. Реакция с радикалами и стабильность вкуса пива / Вакербауер В., Хардт Р. // Brauwelt. Мир пива. 1997. - №4. - С. 38 - 42.

61. Ревина А.А. Ранние стадии активирования молекулярного кислорода флавоноидами и каротиноидами // 3 Российский Национальный конгресс «Человек и лекарства»: Тезисы докладов. М. - 1996.-С. 45.

62. Ревина А.А., Егорова Е.М. Взаимодействие природного пигмента кверцетина с наночастицами серебра в обратных мицеллах//Журнал физической химии.-1999.-Т.73-№10.-С.1897- 1904.

63. Рогинский В.А. Антиоксидантные свойства природных полифенолов// VI симпозиум по фенольным соединениям 28 — 30 апреля 2004. Москва. - 2004. - С 105.

64. Роль супероксида в формировании неспецифического адаптационного синдрома корневых клеток / Минибаева Ф.В., Рахматуллина Д.Ф., Гордон J1.X. и др.// Докл. РАН. 1997. - Т.355. - № 4.-С. 554-556.

65. RU. Патент № 2062785 С1. Способ получения хмелевого экстракта. С 12 С 3/08. Опубл. 27.06.96. Бюл. № 18.

66. RU. Патент 2076145 С1, 27.03.1997.

67. RU. Патент 2122014 С1,20.11.1998.

68. RU. Патент 2162883 С1. Способ производства пива с гепатопротекторными свойствами. С 12 с 7/00, 12/00, 5/02. Опубл. 10.02.2001. Бюл. №4.

69. RU. Патент 2172337 С1. Способ производства светлого пива. С 12 7/00, 12/00. Опубл. 20.08.2001. Бюл. № 23.

70. RU. Патент 2175979 С2. Способ производства пива. С 12 С 7/00, 12/00. Опубл. 20.11.2001. Бюл. № 32.

71. Саммур И.А. Разработка способа повышения стойкости пива от коллоидных помутнений: Дис. канд. т. наук. М., 1993. - 154 с.

72. Слюсаренко Т.П. Лабораторный практикум по микробиологии пищевых производств — М.: Легкая и пищевая промышленность, 1984. — 208 с.

73. Смагин А.М., Абрамович Н.В. Изучение влияния хмеля на процесс окисления жиров // Международная научно-практическая конференция «Энергоресурсосбережение технологии переработки сырья». 1996. - Часть 2. - С. 20.

74. Спектрофотометрическое и хроматографическое исследование продуктов радиолиза аэрированных водных растворов алкилрезорцинов / Ревина А.А., Ларионов О.Г., Кочетова М.В. и др. // Известия РАН. Сер. Химическая. 2003. - № 11. - С. 2257 - 2263.

75. Судаков К.В. Новые акценты классической концепции стресса // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 1997. -Т. 123. № 2. — С.124 - 130.

76. США. Патент № 4507329. Способ получения хмелевого экстракта. С 12 С 3/00, 426/600. Опубл. 1985.

77. Технологическая инструкция по производству СОг-экстракта хмеля. ТИ 10-04-06-68-86.

78. Технология солода, пива и безалкогольных напитков./ Калунянц К.А., Яровенко B.JL- М.: Колос, 1992. 446 с.

79. Тушение синглетного кислорода фенолами / Кабальнова Н.Н., Воробьев А.С., Русаков И.А., Фурлей И.И., Муринов Ю.И., Шерешовец ВВ.// Известия АН. Сер. Хим.-1993.-№12.- С.2132 2134.

80. Тюкавина Н.А., Колесник Ю.А. Природные флавоноиды как пищевые антиоксиданты и биологически активные добавки // Вопросы питания. 1996. - № 2. - С. 33 - 38.

81. Уровень знаний о ксантогумулоне веществе, содержащемся в хмеле. Камхубер К., Цайдлер К., Зайгнер Е., Энгельхард Б.// Brauwelt. Мир пива.- 1999. - №1. - С. 33-36.

82. Филонова Г.Л., Стрелков В.Н. Разработка технологий концентратов для напитков здоровья из растительного сырья (научные аспекты) // Пиво и напитки. 2001. - № 1. - С. 33 - 36.

83. Хмель и его использование /А. А. Годованый, Н. И. Ляшенко, И. Г. Рейтман, И. С. Ежов; Ред. И. С. Ежова. К.: Урожай, 1990. - 336 с.

84. Хмель. Исследования технологического и вкусового влияния на пиво / Кальтнер Д., Тум Б., Форстер К., Бак В. // Brauwelt. Мир пива. -2001. № 1. - С. 12-16.

85. Хорунжина С.И. Биохимические и физико-химические основы технологии солода и пива. М.: Колос, 1999. - 312 с.

86. Чернышева Н.Н., Лапин А.А., Рябый О.Н. Использование лекарственного растительного сырья в пивоварении // Нетрадиционные природные ресурсы и, инновационные технологии и продукты: Сборник науч. тр М.: изд-во РАЕН. - 2003. - Вып. 8. - С. 173 - 182.

87. Щавел Ян, Здвигалова Дана, Прокопова Мария. Почему стареет пиво. Новые данные согласно теории радикалов // Пива! 1998. -№3 (10).-С. 1-Х.

88. Щавел Ян, Здвигалова Дана, Прокопова Мария. Методы исследования активных форм кислорода в сусле и пиве // Пива! 1998. -№4(11).- C.I-X.

89. Щавел Ян. Как связано разложение органических красителей с окислением пива? // Пиво и жизнь. — 2001. № 4 (29). - С. I — VI.

90. Щавел Я. Исследование окислительных изменений сахаридоа и редуктонов при помощи цветовых индикаторов // Пиво и жизнь. -2002. № 3. - С. I - VI.

91. Щавел Я. Факторы стресса для дрожжевых клеток. // Пиво и напитки.-2001. -№ 1.-C.I-VI.

92. Экспрессная оценка антиоксидантной активности растительного сырья / Абдулин И.Ф., Чернышева Н.Н., Турова Е.Н., Будников Г.К. и др.// Сырье и упаковка. 2002. - № 9 (28). - С. 24 — 26.

93. Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения./ Под ред. Г.П. Яковлева, К.Ф. Блиновой. СПб.: Специальная литература, 1999. - 408 с.

94. Becana M, Moran J.F., Iturbe-Ormaetxe I. Iron-dependent oxygen-free radical generation in plants subjected to environmental stress.

95. Toxicity and antioxidant protection // Plant Soil. 1998. - V. 201. - № 1. — P 137-147.

96. Behavior and fole of iron ions in beer deterioration / Kaneda H., Kano Y., Koshino S., Ohya-Nishiguchi H. // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1992. - № 40. - PP. 2102-2107.

97. Brown J. P. A review of the genetic effects of naturally occurring flavonoids, anthraquinones and related compounds // Mutat. Res. -1980.-PP. 75:243.

98. Buchholz, K. D.; Pawliszyn, J. Determination of phenols by solid-phase microextraction and gas chromatographic analysis // Environ. Sci. Technol. 1994. - №27. - PP. 2844 - 2848.

99. Chapon L. Nephelometry as a method for studying the relations between polyphenols and proteins // J. Inst. Brew. 1993. - № 99. - PP. 32 -39.

100. Chapon L. The mechanics of beer stabilization // Brewer Guardian. 1994. - № 123 (12). - PP. 46 - 50.

101. Chemistry and biology of hop flavonoidss / Stevens J.R., Mirinda C. L., Buhler D.L., Deinzer M. L. // American Society of Brewing Chemists. 1998.-Vol. 56. №54. - PP.136-145.

102. Chen, J., Pawliszyn, J. B. Solid phase microextraction coupled to high-performance liquid chromatography // Anal. Chem. — 1995. № 67. — PP. 2530 - 2553.

103. Crombecq P. Bier Jaarboek 1995 1996. - Utrecht/Antwerpen: Kosmos, 1995.-17 p.

104. Determination of essential oils in hops by headspace solid-phase microextraction / Field J.A., Nickerson G., Derryl D.J., Heider C. // J. Agric. Food Chem. 1996. - № 44. - PP. 1768 - 1772.

105. Determination of proanthocyanidins and catechins in beer and barley by high-performance liquid chromatography with dual- electrodeelectrochemical detection. / Madigan D., McMurrough I., Smyth M.R.// Analyst. 1994. - № 119. - PP. 863 - 868.

106. Eisner E.F., Osswald W. Mechanisms of oxygen activation during plant stress // Oxygen and Environmental Stress in Plants / Proc. Of the Royal Society of Edinburgh. Section B. 1994. -V. 102. - P. 131 - 154.

107. Fate of xanthohumol and related prenylflavonoids from hops to beer / Stevens J.F., Taylor A.W., Clawson J.E., Deinze M.L. // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1999. - № 47. - PP. 2421-2428.

108. Formation of aromatic intermediates in the biosynthesis of bitter acids in Humulus lupulu / Zuurbier K.W.M., Fung, S.Y., Scheffer. J.J.C., Verpoorte, R. // Phytochemistry 1995. - №38. - PP. 77-82.

109. Green C. P., Osborne P. Rapid method for obtaining essential oil from hops. // J. Inst. Brew. 1993. - №99. - PP. 335 - 339.

110. Groot H. de., Rauen U. Tissue injuryc by reactive oxygen species and the protective effects of flavonoids // Fundam. Clin. Pharmacol. . 1998. - Vol. 12. - № 3. - P. 249 - 255.

111. Hagers Handbuch der Pharmazeutischen Praxis, Vol. 5, 5th edn. Drogen. Springer, Berlin, 1990, PP. 447 - 458.

112. Harborne J.B. The Flavonoids: Advances in Research Since 1986. Chapman and Hall, London, 1994. - PP. 1- 676.

113. Haslam E. Natural polyphenols (vegetable tannins) as drugs: possible modes of action // J. Nat. Prod. 1996. - №59. - PP. 205-215.

114. Haze formation shelf line prediction for lager beer / McMurrough, Madigan, D., Kelly, R., O'Rourke // Food Technology. -1999. - № 1, vol. 53. - PP. 53 - 62.

115. Hop Breeding, genetics, chemistry. Annual Research Summary. / Haunold, A., Nickerson G. В., Gampert, U., Kling, D. // U.S. Department of Agriculture: Washington, DC. 1993.

116. Identification of isoflavones in the roots of Pueraria lobata / Rong H., Stevens J.F., Deinzer M. L., de Cooman L., de Keukeleire D. // Planta Medica. 1999. - Vol. 64. - PP. 620 - 627.

117. Investigations on hop polyphenols / Forster A., Beckk В., Schmidt R. // Proc. Congr. Eur. Brew. Conv. 1995. - № 25. - PP. 143 - 150.

118. Kenny, S. T. Identification of US-grown hop cultivars by hop acid and essential oil analyses // J. Am. Soc. Brew. Chem. 1990. № 48. -PP. 3 - 8.

119. Leaf surface flavonoids of Chrysothamnus / Stevens J.F., Wollenweber E., Ivancic M., Hsu V.L., Sundberg S., Deinzer M. L. // Phytochemistry. 1999. - Vol.51. - PP. 771 - 780.

120. McMurrough I., Byrne J.R. Food analysis by HPLC. New York: Marcel Dekker. Inc., L.M.L. Nollet, (ed.), Chapter 16,1992. - 150 p.

121. McMurrough I., Baert T. Identification of proanthocyanidins in beer and their direct measurement with a dual electrode electrochemical detector // J. Inst. Brew. 1994. - № Ю0. - PP. 409 - 416.

122. McMurrough I., Madigan D., Smyth M.R. Adsorption by polyvinylpolypyrrolidone ofcatechins and proanthocyanidins from beer // J. Agnc. Food Chem. 1995. - № 43. - PP. 2687-2691.

123. Middleton M., Kandaswami C. The impact of plant flavonoids on mammalian biology; implications for immunity, inflammation and cancer. In: The Flavonoids. Advances in Research since 1986. B. Harborne, Chapman and Hall, London, 1994. PP. 619 - 652.

124. Miksicek R. J. Commonly occurring plant flavonoids have estrogenic activity // Mol. Pharmacol. 1993. - № 44. - PP. 37 - 43.

125. Moir, M. Hops a millennium review // American Society of Brewing Chemists. - 2000. - № 4, vol. 58. - PP.131 - 146.

126. Narziss Ludwig. Die Bierbrauerei: in drei Banden. Bd. Die Technologie der Wurzebereitung. Stuttgart: Enke, 1992. - 335 s.

127. Neve R. A. Hops. Chapman and Hall, London, 1991, p. 36.

128. O'Rourke T. The requirements of beer stabilization // Brewers Guardian. 1994. - №123 (8). - PP. 30 - 33.

129. Peacock V. Fundamentals of hop chemistry. // Tech. Q. Master Brew. Assoc. Am. - 1998. - № 35 (1). - PP. 4 - 8.

130. Polyphenol metallic complexes: characterization by electrospray mass spectrometric and spectrophotometric methods / Marmolle F., leize E., Mila I. Et. al. // Analysis: 1997 - Vol. 25 - № 8. - P. 53 - 55.

131. Polyphenolic flavonols as scavengers of aqueous phase radicals and as chain — breaking antioxidants // Arch. Biochem. Biophys. — 1995. Vol 322.-№2.-P. 339-346.

132. Potter, D. W., Pawliszyn, J. Detection of substituted benzenes in water at the pg/mL level using solid-phase microextraction and gas chromatography-ion trap mass spectrometry // J. Chromatogr. 1992. -№65.-PP. 247-255.

133. Potter, D. W., Pawliszyn J. Rapid determination of polyaro-matic hydrocarbons and polychlorinated biphenyls in water using solid-phase microextraction and GC/MS. // Environ. Sci. Technol. -1994. № 28. - PP. 298 - 305.

134. Prenylflavonoids from Humulus Lupulus / Stevens J.F., Ivancic M., Hsu V.L., Deinzer M.L. // Phytochemistry. 1997. - Vol. 44, №8. - PP. 1575-1585.

135. Prenylflavonoid variation in Humnlus lupulus: distribution and taxonomic significance of xanthogalenol and 4/-0- methylxanthohumol /

136. Stevens J.F., Taylor A.W., Nickerson G.B., Ivancic M, Henning J., Haunold A., Deinzer M. L. // Phytochemistry. 2000. - Vol.53. - PP. 759 - 775.

137. Proceedings of the Scientific Commission I.H.G.C.: International Hop Grovers'Convention I.H.G.C. Canterbury, England, 5-7August 2001.— S. 21.

138. Rice Evans C.A., Miller N.J. Antioxidant activities of flavonoids as bioactive components of food // Biochem. Soc. Trans. - 1995. - Vol 24. -№ 3. - P. 829-835.

139. Ryter S.W., Tyrrell R.M. Singlet molecular oxygen: a possible effect of eukaryotic gene expression // Free radical biology and medicine. —1998. V. 24. - № 9 - P.l 520 - 1534.

140. Scandalios J.G. Response of playn antioxidant defense genes to environmental stress // Adv. Genet. 1990. - V. 28. - P. 1 - 41.

141. Scandalios J.G. Oxygen stress and superoxide dismutases // Plant Physiol. 1993. - V. 101.- № 1. - P. 7 - 12.

142. Siebert Kt. J., Lynn P.Y. Comparison of polyphenol interactions with polyvinylpolypyrrolidone and haze-active protein // J. Am. Soc. Brew. Chem. 1998. - № 56. - PP. 24-31.

143. Stevens J.F., Taylor A.W., Deinzer M. L. Quantitative analysis of xanthohumol and related prenylflavonoids in hops and beer by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. // Journal of Chromatography.1999.-№832.-PP. 97- 107.

144. Structural dependence of flavonoid interactions with Cu ions: implications for their antioxidant properties / Brown J.E., Khodr H., Hider R.C., Rice-Evans C.A. II Biochem. J. 1998. - V. 330. - P. 1173 - 1178.

145. Tabata N., Ito M., Tomoda H, Omura S. Xanthohumols, dia-cylglycerol acyltransferase inhibitors, from Humulus lupulus. II Phytochemistry. 1997. - №46. - PP. 683 - 687.

146. The history and analytical chemistry of beer bitter acids / Keukeleire D., Vindevogel J., Szucs R., Sandra P. //Trends in analytical chemistry. 1992. - № 11 (8). - PP. 275 - 280.

147. The oestrogcnic activity of hops (Humulus lupulus L.) revistcd. / DeKeukeleire D., Milligan S. R., DeCooman, L., Heyerick, A. // Pharm. Pharmacol. Lett. 1997. - №7. - PP 83 - 86.

148. Variability of essential oils of hops, Humulus lupulus L. / Kralj J., Vasilj S., Kralj S., Psenicnik, J. // J. Inst. Brew. 1991. - №97. - PP. 197 -206.

149. Verschuere, M., Sandra, P. Fractionation by SFE and micro-column analysis of the essential oil and bitter principles of hops // J. Chromatogr. Sci. 1992. - № 30. - PP 388 - 391.

150. Vinson J.A. Flavonoids as nutriceuticals // The third international symposium on natural colorants for food, nutriceuticals, beverages, confectionery, cosmetics. New Jersey, 19-22 April 1998. - PP. 388 - 396.

151. Wojtaszek P. Oxidative burst: an early plant response to pathogen infection // Biochem. J. 1997. - V. 322. - P. 681 - 692.

152. Yang, X., Peppard. T. Solid-phase microextraction for flavor analysis // J. Agric. Food Chem. 1994. - №42. - PP. 1925 -1930.

153. Zhang, Z., Pawliszyn, J. Headspace solid-phase microextraction // Anal. Chem. 1993. - № 65. - PP. 1843 - 1852.