автореферат диссертации по приборостроению, метрологии и информационно-измерительным приборам и системам, 05.11.11, диссертация на тему:Взаимодействие стильбеноидов с поверхностью кремнезема в условиях жидкостной нормально-фазовой хроматографии

-г?

На правах рукописи

□□3463488

Колотилов Павел Николаевич

ЗАИМОДЕЙСТВИЕ СТИЛЬБЕНОИДОВ С ПОВЕРХНОСТЬЮ КРЕМНЕЗЕМА В УСЛОВИЯХ ЖИДКОСТНОЙ НОРМАЛЬНО-ФАЗОВОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

05.11.11 - Хроматография и хроматографические приборы

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

гиьР

&

Москва-2009

003463488

Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте физической химии и электрохимии им. А.Н. Фрумкина РАН (ИФХЭ РАН)

Научные руководители:

кандидат химических наук Полунин Константин Евгеньевич

доктор химических наук Ларин Александр Васильевич

Официальные оппоненты:

доктор химических наук Волощук Альберт Михайлович

ИФХЭ РАН

доктор химических наук Сердан Анхель Анхелевич ГУП Химический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова

Ведущая организация:

ГОУ ВПО Химический факультет Воронежский государственный университет

Защита состоится « 17 » марта 2009 года в 15 час 00 мин. на заседании Совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 002.259.04 при Учреждении Российской академии наук Институте физической химии и электрохимии им. А.Н. Фрумкина РАН по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский пр-т, д. 31, корп. 4.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИФХЭ РАН.

Автореферат размещен на сайте Института: http://phyche.ac.ru

Отзывы на автореферат (заверенные печатью) просим высылать по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский пр-т, д. 31, корп. 4, ИФЭХ РАН, ученому секретарю Диссертационного совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 002.259.04

Автореферат разослан «^>> февраля 2009 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 002.259.04,

кандидат химических наук

Л.Н. Коломиец

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Аю-уальность темы. Важное место в ряду растительных полифенолов, к которым привлечено повышенное внимание исследователей, занимают стильбеноиды. В последние годы на основе растительных экстрактов, содержащих резвератрол, пицеатаннол и пиностильбен, разработаны новые фармацевтические и косметические препараты, наполнителем и загустителем в которых является кремнезем. Кроме того, синтетические стильбеноиды различной функциональности и стильбенсодержащие полимеры используются в производстве лазерных красителей, сенсоров, фоточувствительных маркеров и композиционных материалов. Однако межфазные адсорбционные взаимодействия в таких системах изучены недостаточно.

Хроматографические методы широко применяются для анализа природных объектов, контроля качества фармацевтической и косметической продукции, а также препаративного разделения растительных экстрактов и синтетических смесей, очистки и выделения целевых соединений. Использование адсорбционной хроматографии для исследования физико-химических параметров сорбционных процессов и выявления связи характеристик хроматографического удерживания со структурой молекул - один из наиболее перспективных подходов для изучения межмолекулярных и межфазных взаимодействий в композиционных системах. Моделирование процесса удерживания стильбеноидов на силикагеле в условиях жидкостной нормально-фазовой хроматографии с выявлением корреляционных зависимостей позволяет устанавливать связь между физико-химическими параметрами веществ, прогнозировать свойства хроматографической системы, оптимизировать ее состав и условия разделения стильбеноидов.

Тема диссертационной работы входит в план научных исследований ИФХЭ РАН (№ 01.2.00704516). Работа поддержана грантами РФФИ (№ 06-03-33185, 08-0800845), Программами фундаментальных исследований Президиума РАН и Отделения химии и наук о материалах РАН.

Цель работы - выявление связи характеристик хроматографического удерживания синтетических и растительных стильбеноидов со структурой их молекул и равновесными адсорбционными характеристиками системы кремнезем -стильбеноиды - органический растворитель.

В соответствии с поставленной целью задачами работы являлись:

1. Выявление общих закономерностей удерживания на кремнеземе стильбеноидов с различной геометрической конфигурацией, длиной олефинового фрагмента, количеством и положением функциональных групп в широком интервале изменения доли полярного модификатора в бинарном органическом растворителе.

2. Формирование массива экспериментальных данных по хроматографическому удерживанию стильбеноидов на силикагеле для контроля качества фармацевтической продукции и оптимизации условий разделения синтетических смесей и растительных экстрактов стильбеноидов методами препаративной хроматографии.

3. Поиск корреляционных зависимостей, связывающих параметры удерживания стильбеноидов и модельных ароматических соединений, полученные различными методами адсорбционной жидкостной хроматографии.

4. Изучение изотерм и механизма адсорбции стильбеноидов на кремнеземе в широком интервале концентраций адсорбируемых веществ, применительно к условиям жидкостной нормально-фазовой хроматографии.

Научная новизна основных результатов работы заключается в следующем:

• Впервые получены экспериментальные данные о хроматографических и адсорбционных свойствах растительных стильбеноидов - пицеатаннола, рапонтигенина, пиностильбена и птеростильбена в широком интервале изменения доли полярного модификатора в бинарном органическом растворителе.

• Установлены корреляционные зависимости, связывающие параметры хроматографического удерживания стильбеноидов на кремнеземе с их функциональностью, структурными и физико-химическими свойствами в условиях жидкостной нормально-фазовой хроматографии.

• Впервые обнаружена корреляция между параметрами хроматографического удерживания метоксипроизводных стильбена, бензола и дифенила.

• Впервые получены изотермы равновесной адсорбции стильбеноидов на кремнеземе и изучено взаимодействие стильбеноидов с поверхностью 8Ю2 в расширенной области концентраций для условий препаративной хроматографии с нормальными фазами.

• Впервые изучено влияние химии поверхности сорбента на величину адсорбции стильбеноидов, обнаружено, что на АЬОз образуются более плотные монослои, чем на кремнеземе.

Практическая значимость работы. Установленные закономерности и экспериментальные результаты диссертационной работы были использованы при формировании массива данных в виде зависимостей параметров удерживания функциональных производных стильбена, дифенила и бензола от состава бинарного элюента в нормально-фазовой жидкостной хроматографии. Полученные результаты были использованы в работе ФГУ «Центр контроля лекарственных средств и медицинских измерений» Управления делами Президента РФ для анализа фармацевтических препаратов и растительных экстрактов, что привело к существенному сокращению времени анализа. Получен акт о внедрении созданного массива данных.

Результаты исследования параметров хроматографического удерживания полифенольных соединений на кремнеземе и установленные корреляционные зависимости позволяют прогнозировать поведение стильбеноидов при изменении условий сорбции, а также оптимизировать условия препаративного разделения синтетических смесей и выделения целевых продуктов. Данные диссертационной работы были использованы в материалах патентной заявки РФ № 2006123365.

Кроме того, результаты исследования адсорбционных свойств стильбеноидов могут быть использованы при разработке рецептуры новых композиционных материалов, наполненных кремнеземом.

На защиту выносятся:

1. Экспериментальные данные о хроматографических и адсорбционных свойствах синтетических и растительных стильбеноидов в условиях НФ ВЭЖХ.

2. Установленные закономерности хроматографического удерживания на кремнеземе стильбеноидов с различной геометрической конфигурацией, длиной олефинового фрагмента, количеством и положением функциональных групп в широком интервале изменения доли полярного модификатора в бинарном органическом растворителе.

3. Сравнительное удерживание стильбеноидов в условиях жидкостной нормально-фазовой хроматографии, а также корреляционные зависимости, связывающие параметры хроматографического удерживания стильбеноидов и модельных ароматических соединений, полученные различными методами жидкостной хроматографии.

4. Результаты исследования изотерм и механизма адсорбции стильбеноидов на кремнеземе из органических растворителей.

Апробация работы и публикации. Материалы диссертации докладывались на конференциях молодых ученых ИФХЭ РАН 2005-2008 гг. (премия им. А.В.Киселева в 2008 г.), Всероссийском симпозиуме «Хроматография и хроматографические приборы» (Москва, 2004 г.), Международной конференции «ИОНИТЫ» 2004 и 2007 гг., Международной конференции «Физико-химические основы новейших технологий XXI века» (Москва, 2005 г.), X Международной конференции «Теоретические проблемы химии поверхности, адсорбции и хроматографии» (Москва, 2006 г.), IV Всероссийской конференции «Химия и технология растительных веществ» (Сыктывкар, 2006 г.), III Всероссийской конференции «Химия поверхности и нанотехнология» (Санкт-Петербург, 2006 г.), Всероссийских конференциях «Физико-химические процессы в конденсированном состоянии и на межфазных границах» (Воронеж, 2006-2007 гг.), Всероссийском симпозиуме «Хроматография в химическом анализе и физико-химических исследованиях» (Москва, 2007 г.), XVIII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Москва, 2007 г.), XI - XII Всероссийских симпозиумах «Актуальные проблемы теории адсорбции, пористости и адсорбционной селективности» (Москва, 20072008 гг.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 20 работ. Основные результаты исследований опубликованы в 6 статьях в научных журналах, рекомендованных ВАК, в 13 трудах конференций и симпозиумов. Получена 1 патентная заявка на изобретение.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, шести глав, включающих, обзор литературы и пять глав экспериментальной части с

подразделами, выводов, списка цитируемой литературы из //^наименований и 2-х приложений. Работа содержит /^страниц машинописного текста, включая рисунков и _^габлиц.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Во введении дано обоснование темы диссертации, отражены актуальность исследований, их научная и практическая значимость.

В первой главе приводится обзор работ, посвященных изучению физико-химических и фармакологических свойств растительных и синтетических стильбеноидов, хроматографическому разделению природных смесей полифенолов, исследованию адсорбционных взаимодействий стильбеноидов на границе раздела фаз.

Во второй главе описаны объекты и методы физико-химических исследований. В качестве объектов исследования использовались цис- и транс-изомеры 1,2-дифенилэтилена (стильбена) 99,5% чистоты (Lancaster), а также различные гидрокси- и метоксипроизводные транс-стильбена и бензола от фирмы Acrus Organics. Кроме того, исследовались синтетические аналоги растительных стильбеноидов с гидрокси- и метоксигруппами (пиносильвин, пиностильбен, рапонтигенин, резвератрол, пицеатаннол), растительные экстракты, содержащие стильбеноиды (экстракты древесины Маакии амурской, стеблей Vitis amurensis и корневищ Rhei tindulati), а также лекарственные препараты с эстрогенной активностью, входящие в реестр Государственной Фармакопеи РФ (диэтилстильбэстрол, димэстрол, синэстрол, октэстрол). Химические структуры всех исследованных соединений приведены в табл. 1.

Хроматографическая подвижность веществ определялась методом аналитической ТСХ на готовых пластинах фирмы Merck с сорбентом Silica gel 60 F254 (размер частиц 5 мкм, диаметр пор 6 нм) толщиной 0.25 мм, содержащих люминофор (X = 254 нм). Детектирование компонентов разделяемой смеси осуществлялась с помощью УФ-лампы.

В качестве метода хроматографического исследования была выбрана нормально-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография (НФ ВЭЖХ). Эксперимент выполнялся на хроматографе «Милихром-А01» со спектрофотометрическим детектором (X = 284 нм) при температуре колонки (21±1) °С. Использовалась колонка из нержавеющей стали (80x2 мм), заполненная силикагелем Силасорб-600 фирмы Lahema (размер зерен 5 мкм, диаметр пор 6-8 нм, объем пор 0.7 см3/г, Sya = 600 м2/г). Расчетная масса адсорбента в колонке равна 140 мг, «мертвый» объем (объем удерживания бензола) - 180 мкл. Расход подвижной фазы составлял 50 мкл/мин. Элюентом служил н-гексан с добавкой этилацетата. Исследования методом ОФ ВЭЖХ проводили при комнатной температуре с помощью высокоэффективного жидкостного хроматографа фирмы Hewlett Packard 1050 с колонкой, заполненной силикагелем Hypersil ODS (С18) (125x4 мм), диаметр зерна 3 мкм), оснащенного многоканальным диодно-матричным спекрофотометрическим детектором. Детектирование проводилось при длинах волн 275, 295, 305 и 345 нм,

что позволяло охватить весь ряд исследованных соединений с шириной полосы 2 нм. Расход подвижной фазы смеси ацетонитрила и воды (1:1) составил 1 мл/мин.

Исследование адсорбции стильбеноидов из органических растворителей на кремнеземе (аэросил А-300 фирмы Degussa, SyJ = 310 м2/г) проводилось статическим методом путем измерения разности исходной С0 и равновесной С концентраций вещества в растворе до и после установления адсорбционного равновесия.

Таблица 1

Структурные формулы исследованных соединений

Соединение Структура Соединение Структура

транс-Стшьбея 2' 3' \J И- 5 6 транс-4-Гидрокси-стильбен

¡/ис-Стильбен сГЪ транс-4,4'- Днгидроксистильбен (стальбэстрол)

транс- 1,4-Ди- фенил-1,3- бутадиен транс-3,5- Дигидроксистильбен (пиносильвин) но fX-J^XJ но

транс- 1,6-Ди-фенил-1,3,5-гексатриен fV'/ транс-3,5А' -Три-Глдрокси стильбен (резвератрол) но но \-Г

транс-А-Ыегокси-стильбен транс-3,5,5'-Тригидрокси-4'-метоксистильбен (рапоитшсшш) но /=. Г °н но

транс-АА-Д"-метоксистильбен транс-Ъ ,5,3' ,4' -Тетрагвдрокси-стильбен (пицеатаннол) но он но ^^^

транс-ЪА- Ди-(4-метокси- фенил)-3-гексен (димэстрол) транс-3,4-Ди-(4-гидроксифенил)-3-гексен (диэтил-стильбэстрол)

мезо-2,4-Ди-(4-шдроксифенил)-3-этилгексан (октэстрол) л;езо-3,4-Дп-(4-гидроксифенил)-гексан (синэстрол)

Механизм адсорбционного взаимодействия стильбеноидов на кремнеземе исследовался методом ИК-Фурье-спектроскопии (спектрометр Регкш-Е1тег 2000 с приставкой диффузного отражения фирмы Натек & К0). Для увеличения соотношения сигнал — шум производилось накопление и усреднение спектра по 300 сканированиям. Разрешение составляло 4 см'1.

В главе 3 приведены результаты исследования зависимости хроматографических свойств стильбена и других представителей дифенилполиенов РЬ-(НС=СН)П-РЬ от геометрической конфигурации и длины олефинового фрагмента молекул в условиях нормально-фазового варианта ТСХ и ВЭЖХ на кремнеземе.

В табл. 2 приведены значения константы Я/ изомеров стильбена и дифенилполиенов. 1/мс-Изомер стильбена удерживается слабее трансизомера, причем константа Rf последнего уменьшается примерно на 20% с увеличением длины

олефинового фрагмента в 3 раза. При увеличении полярности элюента до значений <р= 10% разделение смеси дифенилполиенов становится практически невозможным.

Методом НФ ВЭЖХ были рассчитаны удельные удерживаемые объемы (Упп) стильбенов по уравнению:

У„={Уг-Уа)!т, (1)

где Уг - объем удерживания (мкл); У(1 — «мертвый объем» (мкл); т — масса сорбента в колонке (г). Полученные результаты представлены на рис. 1 в координатах уравнения Снайдера:

\%Ут=а-п\%Хп,, (2) где а и п - эмпирические коэффициенты, зависящие от природы сорбируемого вещества, полярности жидкой фазы и химии поверхности адсорбента; Хт — мольная доля этилацетата в н-гексане.

Экспериментальные зависимости, полученные по уравнению (2), были аппроксимированы линейной функцией методом наименьших квадратов. Квадраты коэффициентов корреляции г2были не ниже 0.98.

Как видно из рис. 1, экспериментальные результаты удовлетворительно описываются уравнением Снайдера со значениями константы п, практически одинаковыми для всех транс-изомеров дифенилполиенов. При увеличении доли этилацетата в смеси с гексаном (Хт —* 1) происходит значительное снижение константы Генри (удельного удерживаемого объема), вплоть до значений, близких к нулю. Удерживание г/г/остильбена в меньшей степени зависит от полярности растворителя.

Таблица 2

Значения константы R/ дифенилполиенов на

пластинках Silica gel 6OF2S4 с элюентом этилацетат

- н-гексан (<р - объемная концентрация _этилацетата)._

Соединение Rr

<р = 5% Ф = 10%

1/мс-Стильбен (1,2-дифенилэтилен) 0.64 J 0.81

транс-Сттъбеи{ 1,2-дифенил этилен) 0.59 0.77

транс-1,4-Дифенил-1,3-бутадиен 0.51 0.76

транс-\,6-Дифенил-1,3,5-гексатриен 0.48 0.75

На основании экспериментальных данных по удерживанию соединений на силикагеле были рассчитаны относительные изменения свободной энергии:

Д(ДО) = -ЯЛп(К„,,,/Г„,„,), (3) где Упт- удерживаемый объем сорбата, - удерживаемый объем стандартного вещества, л - газовая постоянная, г - температура.

Рис. 1. Зависимость удельного удерживаемого объема У„„ (мкл/мг) цис- стильбена (1) и транс-стильбена (2), транс-1,4-дифенил-1,3-бутадиена (3) и транс-1,6-дифенил-1,3,5-гексатриена (4) от мольной доли Хт этилацетата в н-гексане.

Результаты расчетов Д(ДО) представлены в табл. 3. Увеличение длины олефинового фрагмента в молекуле /яранс-стильбена на одну или две двойные связи приводит к увеличению д(дс)на величину -290 и -610 Дж/моль, соответственно, для м/занс-1,4-дифенил-1,3-бутадиена и от/>анс-1,6-дифенил-1,3,5-гексатриена. Т.е. вклад в значение Д(Дй) одной двойной связи можно оценить примерно в -300 Дж/моль.

Таблица 3

Экспериментальные значения констант уравнения Снайдера и относительные

изменения свободной энергии МАО) соединений в системе Силасорб 600 -_этил ацетат — н-гексан ( Х,„ — мольная доля этилацетата)._

Соединение хт а п 2 Г Д(ДС), Дж/моль, Х,„= 0.25

транс-Стльбен * 0.01+0.25 -0.72 0.39 0.98 0

Чмс-Стильбен 0.01+0.25 -0.75 0.34 0.99 150

транс-1,4-Дифенил-1,3-бутадиен 0.055+0.35 -0.71 0.41 0.99 -290

транс-1,6-Дифенил-1,3,5-гексатриен 0.055+0.35 -0.69 0.45 0.99 -610

"стандартное вещество - транс-стильбен

Поскольку в нормально-фазовом варианте ТСХ и ВЭЖХ основным фактором, определяющим удерживание, является взаимодействие элюатов с поверхностью неподвижной фазы (сорбента), для проведения в дальнейшем препаративного разделения смесей стильбеноидов и дифенилполиенов были выполнены дополнительные исследования адсорбционных взаимодействий в модельных

-2.5 -2.0 -1.5 -1.0 -0.5

системах Si02 (аэросил) - растворы стильбенов в органических растворителях в широкой области изменения концентраций ароматических соединений.

Изотермы равновесной адсорбции изомеров стильбена на кремнеземе из н-гексана характеризуются довольно широкой областью Генри, переходящей в плато при равновесной концентрации транс- и ¡/¡/с-стильбена 175 и 225 мкмоль/л, соответственно. Расчеты по уравнению Ленгмюра позволили оценить емкость монослоев (ат). Показано, что в плотном монослое адсорбция транс-стипьбена на 30% больше, чем адсорбция г/ис-стильбена, и составляет 0.053 мкмоль/м2. Величина адсорбции от/?гг//с-1,4-дифенил-1,3-бутадиена и от/?аис-1,6-дифенил-1,3,5-гексатриена в области плато несколько выше и составляет 0.056 и 0.058 мкмоль/м2, соответственно.

Адсорбция стильбена и дифенилполиенов на кремнеземе из этилацетата приводит к образованию значительно менее плотного монослоя, чем при его адсорбции из w-гексана, но зависимость адсорбции от длины олефинового фрагмента остается той же.

Глава 4 посвящена выявлению связи характеристик хроматографического удерживания метоксипроизводных стильбена с количеством и положением функциональных групп в структуре молекулы, ее геометрической конфигурацией и строением углеводородного радикала.

Введение метоксигрупп в молекулы стильбена изменяет их донорно-акцепторные свойства и усиливает взаимодействие с гидроксилированной поверхностью силикагеля, однако качественно не меняет соотношения между хроматографическим удерживанием цис- и т/?янс-изомеров (табл. 4).

Показано, что при увеличении числа метоксигрупп в стильбене от 1 до 4 значение константы Rf уменьшается на 25%.

Хроматографическое удерживание метокси-стильбенов зависит от положения метоксигрупп: симметричные диметоксистильбены с заместителями в разных кольцах (С-4,4") удерживаются слабее, чем стильбены с двумя метоксигруппами в одном кольце (С-3,5). Наличие в димэстроле

Таблица 4

Значения константы А/метоксипроизводных стильбена, бензола и дифенила на Silica gel 6OF25-1 с элюентом этилацетат — н-гексан (<р — объемная концентрация

Соединение Rf

<р =50% Ч> =70%

ifMc-4-Метоксистильбен 0.62 0.85

тра;/с-4-Метокс11Стильбсн 0.59 0.81

цис-А А' -Диметоксистильбен 0.56 0.79

транс-АЛ' -Диметоксистильбен 0.54 0.77

Димэстрол 0.56 0.79

отранс-3,5-Диметоксистильбен 0.52 0.75

транс-3,5,4' -Триметоксистильбен 0.47 0.71

транс-3,5,3' ,4' -Тетраметоксистильбен 0.42 0.65

Метоксибензол 0.64 0.78

1.3-Диметоксибензол 0.62 0.76

1,4-Диметоксибензол 0.57 0.76

2,2' -Диметоксидифенил 0.58 0.79

4,4' -Диметоксидифенил 0.55 0.76

этильных групп при двойной связи этиленового фрагмента (табл. 1) приводит к увеличению константы Я; по сравнению с /и/>анс-4,4'-диметоксистильбеном.

Кроме того, в табл. 4 приведены значения константы Я/ различных модельных ароматических соединений с той же функциональностью, но разной структурой углеводородного радикала - бензола и дифенила. Сравнение хроматографического поведения метоксипроизводных стильбена, бензола и дифенила показывает, что хроматографические параметры удерживания т/?а//с-4,4'-диметоксистильбена и 4,4'-диметоксидифенила достаточно хорошо совпадают; удерживание 1,4-диметоксибензола немного слабее. В случае присутствия двух метоксигрупп в одном кольце, как у 3,5-диметоксистильбена и 1,3-диметоксибензола, разница в удерживании стильбена и бензола значительно выше. При увеличении доли этилацетата в элюенте до 70% разница в значениях Щ стильбенов, бензолов и дифенилов практически нивелируется.

На рис. 2 приведены экспериментальные зависимости удельных удерживаемых объемов Уг„, метоксистильбенов, полученные методом НФ ВЭЖХ, от мольной доли Х„, этилацетата в н-гексане. Обработка экспериментальных результатов по уравнению Снайдера (2) позволила обнаружить, что значения константы п для тряис-4-метоксистильбена и метоксибензола практически совпадают, т.е. эти соединения имеют близкие хроматографические свойства в НФ ВЭЖХ (табл. 5).

Рис. 2. Зависимость удельного удерживаемого объема />„, (мкл/мг) метоксибензола (1), /иранс-4-метоксистильбена (2), 1,4-диметоксибензола (3), 4,4'-диметоксидифенила (4) и транс-4,4'-диметоксистильбена (5) от мольной доли Х„, этилацетата в н-гексане.

Удерживание ароматических соединений на силикагеле увеличивается в последовательности: 1,4-диметоксибензол < 4,4'-диметоксидифенил < транс-4,4'-диметоксистильбен {Хт = 0.1+0.5).

В табл. 5 представлены результаты расчетов относительной свободной энергии для метоксистильбенов и бензолов. Вклады величины д(АО) в адсорбционное взаимодействие с силикагелем одной метоксигруппы в структурах стильбена и бензола имеют близкие значения и оцениваются примерно в -400 Дж/моль.

Таблица 5.

Экспериментальные значения констант уравнения Снайдера и относительные изменения свободной энергии А(&С) соединений в системе Сшасорб 600 -этилацетат -,н-гексан (Х,„ - мольная доля этилацетата).

Соединение Хт а и г' A(AG), Дж/моль, Хт=0.25

трянс-4-Метоксистильбен* 0.15-0.5 -0.54 0.66 0.98 0

транс-4,4' -Диметоксистильбен 0.1-0.55 -0.57 0.94 0.99 -390

Метоксибензол** 0.15-5-0.5 -0.54 0.62 0.99 0

1,4-Диметоксибензол 0.15-0.55 -0.56 0.7S 0.99 -370

4.4' -Диметоксидифенил 0.1+0.55 -0.57 0.91 0,99 -400

* стандартное вещество для транс-АА' -диметоксистильбена ** стандартное вещество для 1,4-диметоксибензола и 4,4-диметоксиднфенила

Полученные результаты позволяют воспользоваться при моделировании хроматографического поведения метоксистштьбенов их более доступными аналогами - метоксипроизводными бензола и дифенила.

В главе 5 изучены параметры хроматографического удерживания стильбеноидов, содержащих гидрокси- и метоксигруппы, в нормально-фазовой ТСХ и ВЭЖХ на силикагеле в зависимости от строения их молекул и состава бинарного элюента. Как показывает сравнение факторов удерживания стильбеноидов (табл. 6), /ярянс-4-гидроксистильбен удерживается сильнее, чем его цис-изомер.

Таблица 6

Значения константы Rf гидрокси- и метоксипроизводных стильбена на

Silica gel 6OF254 с элюентом этилацетат — и-гексан _(<р - объемная концентрация этилацетата)._

Соединение Rf

<3 = 50% <р = 70%

1/ис-4-Гидроксистильбен 0.52 0.63

тратг-4-Гидрокеистильбен 0.46 0.57

транс-4,4' -Дигидроксистильбен 0.39 0.48

Диэтилстильбэстрол 0.42 0.52

л»мо-3,4-Ди-(4-гидроксифенил)-гексан (синэстрол) 0.46 0.55

транс- 3,5-Д игидроксистильбен (пиносильвин) 0.37 0.45

транс-3,4' -Д игидрокси-5 -метоксистильбен (пиностильбен) 0.35 0.42

игранс-3,5-Дигидрокси-4'-метоксистильбен 0.30 0.37

Резвератрол 0.20 0.31

Рапонтигенин 0.18 0.28

Пицеатаннол 0.12 0.23

Метоксистильбены удерживаются значительно слабее гидроксистильбенов, поэтому замена одной ОН-группы в гидроксистильбенах на метоксигруппу, т.е. переход от пицеатаннола к рапонтигенину или от резвератрола к пиностильбену приводит к уменьшению их удерживания на сшшкагелеВеличина Я/ пиностильбена немного меньше, чем у пиносильвина, т.е. вклад метоксигруппы в адсорбцию гидроксиметоксистильбенов на кремнеземе незначителен.

На рис. 3 приведены данные о хроматографическом удерживании на силикагеле стильбеноидов, полученные методом НФ ВЭЖХ. Величины констант Генри значительным образом изменяются в зависимости от мольной доли Х„, полярного растворителя в жидкой фазе, количества и положения гидроксильных групп в молекулах элюатов (рис. 3). Согласно результатам, приведенным в табл. 7, удерживание гидроксистильбенов на силикагеле растет в последовательности цис-4-гидроксистильбен < т/шнс-4-гидроксистильбен < диэтилстильбэстрол < транс-4,4'-дигидроксистильбен < резвератрол < пицеатаннол.

Рис. 3. Зависимости удельных удерживаемых объемов Угт (мкл/мг) от мольной доли Х„ этилацетата в н-гексане для: (я) /иранс-4-гидроксистильбена (1), 4,4'-да/№/£>дигидроксистпльбена (2), диэтилстильбэстрола (3), резвератрола (4) рапонтигенина (5) и пицеатаннола (6) и {б) фенола (1), пирокатехина (2), резорцина (3), гидрохинона (4), флороглюцина (5).

Наличие в диэтилстильбэстроле этильных групп при двойной связи приводит к увеличению константы по сравнению с транс-4,4'-дигидроксистильбеном, тогда как переход от диэтилстильбэстрола к синэстролу, т.е. насыщение двойной связи молекулы стильбена, приводит к снижению удерживания на силикагеле.

Результаты расчетов Д(ДО) стильбеноидов при двух значениях мольной доли Хт этилацетата в жидкой фазе представлены в табл. 7. Значения Д(ДО) в ряду транс-4,4'-дигидроксистильбен - резвератрол - пицеатаннол составляют, соответственно, -3220, -5200 и -7100 Дж/моль при Хт = 0.25. Это позволяет примерно рассчитать

численное значение &(AG) для одной гидроксильной группы, которое оказалось равным -2000 Дж/моль при Хт = 0.25. Отметим, что абсолютные значения относительных свободных энергий Д(Д G) для гидроксистильбенов при варьировании Х„, изменяются существенно, но соотношение и оцененные значения Д(ДО) для одной гидроксильной группы при каждом Х,„ остаются постоянными. Это позволяет прогнозировать энергетику водородной связи с кремнеземом при адсорбции веществ, содержащих гидроксильные группы, при произвольном содержании полярной составляющей в жидкой фазе.

Таблица 7

Экспериментальные значения констант уравнения Снайдера и относительные

изменения свободной энергии соединений в системе Сшасорб 600_этилацетат — н-гексан (Хт — мольная доля этилацетата). _

Соединение хт а п A(ÄG), Дж/моль, Х,,=0.25 Д(ДО), Дж/моль, Хг=0.4

4- транс- Гидроксистильбен* 0.15+0.6 -0.61 1.43 0.98 0 0

транс-4,4'-Дигидроксистильбен 0.2+0.6 -0.51 2.38 0.99 -3220 -2700

Диэтилстильбэстрол 0.2+0.6 -0.41 1.87 0.98 -1520 -1250

Резвератрол 0.4+0.75 -0.33 3.20 0.99 -5200 -4300

Рапонтигенин 0.4+0.8 -0.30 3,33 0.99 -6200 -5200

Пицеатаннол 0.4+0.8 -0.11 3.55 0.99 -7100 -6020

Фенол** 0.15+0.5 -0.54 1.33 0.99 0 0

Гидрохинон 0.25+0.5 -0.46 2.50 0.98 -4070 -3410

Резорцин 0.25+0.5 -0.45 2.42 0.99 -3790 -3100

Пирокатехин 0.5+0.8 -0.45 1.94 0.99 -2260 -1820

Флороглюцин 0.4+0.8 -0.33 3.56 0.99 -5920 -4950

* стандартное вещество для гидроксистильбенов ** стандартное вещество для гидроксибензолов

Поскольку коэффициенты и уравнения Снайдера для флороглюцина и пицеатаннола достаточно близки между собой, то флороглюцин можно использовать ' как аналог пицеатаннола при моделировании его хроматографического удерживания на поверхности силикагеля из неводного растворителя.

Для проведения в дальнейшем препаративного разделения смесей стильбеноидов были выполнены дополнительные исследования их адсорбционных взаимодействий с аэросилом в широкой области концентраций. Проведено сравнение адсорбционных констант стильбеноидов, измеренных методом НФ ВЭЖХ в области малых концентраций, с результатами, полученными статическим методом при измерении изотерм адсорбции в области больших концентраций. Обнаружено, что в некоторых случаях величины предельной адсорбции исследованных соединений, рассчитанные по уравнению Ленгмюра для мономолекулярной адсорбции на

поверхности с энергетически однородными центрами, совпадают (например, для ;я/?анс-4-гидроксистильбена), а в некоторых случаях (например, для фенола) значительно отличаются от величин равновесной адсорбции, оцененных по области выхода изотерм адсорбции на плато.

Лучшие результаты дает использование уравнения Фрейндлиха для локализованной адсорбции на поверхности с энергетически неоднородными центрами.

На рис. 4 приведены результаты измерений изотерм адсорбции, обработанные в координатах уравнения Фрейндлиха:

Ш = п+т-1§(СР), (4)

где а - величина адсорбции, Ср — равновесная концентрация соединения в растворе, п и т - эмпирические коэффициенты, зависящие от природы сорбируемого вещества.

Значения констант п и т уравнения (4), рассчитанные из экспериментальных изотерм адсорбции на кремнеземе из смеси м-гексана и этилацетата, приведены в табл. 8.

А, мкмаль/м

мкмаль/м

10 20 30 40 50

С ,ммэш/л

0.5 0.0 -0.5 -1.0 -1.5 -2.0 -2.5 -3.0

-1.2 -0.6 0.0 0.6 1.2 1.8 2.4

Ы(Ср), ммопь/л

Рис. 4. Изотермы адсорбции: а - фенола (1), отря«о4-гидроксистильбена (2), резвератрола (3), флороглюцина (4) и пицеатаннола (5) из смеси н-гексана и этилацетата (1:1) на поверхности 5Ю2 и резвератрола (3") на поверхности А120з; б -изотермы тех же соединений в координатах уравнения Фрейндлиха.

Как было показано методом ИК-Фурье-спектроскопии (рис. 5), адсорбция стильбеноидов осуществляется на силанольных группах поверхности кремнезема с образованием водородных связей и полностью обратима.

Таблица 8

Значения констант и и от в уравнении Фрейндлиха, рассчитанные из

экспериментальных изотерм адсорбции на кремнеземе из смеси н-гексана и этилацетата

Соединение п т

/иранс-4-Гидроксистильбен -1.69 0.81

Резвератрол -0.82 0.45

Пицеатаннол -0.63 0.37

Фенол -1.84 0.82

Флороглюцин -0.75 0.41

1512

Уменьшение числа ОН-групп в молекуле стильбеноида от четырех (пицеатаннол) до одной (4-гидроксистильбен) существенно не влияет на механизм взаимодействия стильбеноидов с аэросилом. Однако при этом уменьшается величина адсорбции стильбеноида на кремнеземе и часть силанольных групп поверхности остается свободной.

Оксид алюминия, также как и силикагель, широко используется в колоночной хроматографии низкого давления при анализе фармацевтических препаратов.

Оксид алюминия проявляет повышенную селективность по сравнению с силикагелем в разделении полиенов и

каротиноидов. Изучено влияние химии поверхности адсорбента на величину адсорбции

гидроксистильбенов. Для сравнения использовался пирогенный аэрогель А1203 фирмы Degussa (AluC, Sya= 100 м2/г).

Обнаружено, что величина адсорбции транс-4-гидроксистильбена и резвератрола на поверхности Si02 при выходе на плато составляет 0.21 и 0.74 мкмоль/м2 (рис. 4, кривая 2 и 3), а на А1203 - 0.44 и 1.5 мкмоль/м2 (кривая 3'), соответственно, т.е. на А120з величина адсорбции гидрокси-стильбена и резвератрола на единицу поверхности примерно в 2 раза больше, чем на Si02. Константы пит уравнения Фрейндлиха для транс-4-гидроксистильбена и резвератрола на Si02 составили соответственно значение -1.69 и 0.81, а на А1203 соответственно, -0.61 и 0.72.

Сравнение значений констант и и /и для стильбенов и фенолов, приведенных в табл. 8, позволяет обнаружить корреляцию между адсорбционным поведением фенола и /«/>д//с-4-гидроксистильбена, а также флороглюцина, резвератрола и пицеатаннола. Полученный результат важен для препаративного разделения стильбеноидов, поскольку многие соединения этого ряда малодоступны и дороги.

- | 3740

4000

3200

2400 1800

1400см

Рис. 5. ИК-спектры диффузного отражения кремнезема, модифицированного пицеатаннолом (я), и чистого кремнезема (б).

Возможность прогнозирования хроматографического поведения стильбеноидов в конкретной системе, путем изучения хроматографического поведения легко доступных и дешевых гидрокси- и метокси производных бензола и дифенила, имеет большое значение для практических целей препаративного разделения растительных стильбеноидов.

Глава 6 посвящена применению установленных закономерностей хроматографического поведения стильбеноидов с различной функциональностью для решения практических задач по оптимизации условий анализа и препаративного разделения смесей стильбеноидов, а также контроля за качеством лекарственных препаратов.

Значительно ускорить проведение препаративного разделения растительных экстрактов и смесей синтезированных стильбеноидов позволяет использование корреляции между параметрами удерживания стильбеноидов, полученных методами ТСХ и НФ ВЭЖХ.

На рис. 6 приведена линейная зависимость между величиной обратной константе й/и удельным удерживаемым объемом Упп стильбеноидов в изократическом режиме элюирования, которая может быть описана уравнением:

1/Я/= 0.06+1.44 Ут. (5)

Ошибка переноса данных между двумя методами меньше 10%.

V

Г)П

Рис. 6. Зависимость между величиной обратной константе Я/ и приведенным объемом удерживания \'гт (мкл/мг) для г/г/с-стильбена (1), /ирдис-стильбена (2), метоксибензола (3), 4,4'-диметоксидифенила (4), 1,4-диметоксибензола (5), транс-4-метоксистильбена (6), т/аднс-4,4'-диметоксистильбена (7), фенола (8), транс-4-гидроксистильбена (9), пирокатехина (10), резорцина (11), 1,4-дигидроксибензола (12) , резвератрола (13), флороглюцина (14), пицеатаннола (15) при значении <р этилацетата в н-гексане: 50%.

Линейные зависимости наблюдаются для всех стильбеноидов в широком диапазоне изменения концентрации полярного модификатора в бинарном элюенте. В частности, на рис. 7 приведены данные для пицеатаннола и рапонтигенина.

Рис.7. Зависимость между константой к/ и удельным удерживаемым объемом Уп„ (мкл/мг) для пицеатаннола и рапонтигенина при значениях <р этилацетата в н-гексане: 80% (1,1', соответственно), 70% (2, 2'), 60% (3,3'), 50% (4,4').

9

пп

6

3

0

О

2

4

6

V

г т

Кроме того, были проведены исследования взаимосвязи между параметрами хроматографического удерживания, полученными методами НФ и ОФ ВЭЖХ, для использования сформированного нами массива данных при анализе биологических жидкостей. К тому же использование в качестве твердой фазы гидрофобного силикагеля С18 позволяет в первом приближении моделировать липидный матрикс биомембран и прогнозировать поведение стильбенсодержащих лекарственных препаратов в живых системах.

Были измерены зависимости между значениями факторов удерживания стильбеноидов, полученными методами НФ ВЭЖХ (Силасорб-600, элюент - смесь этилацетата и н-гексана (1:1) и ОФ ВЭЖХ (Hypersil ODS C!S, колонка 125x4 мм, диаметр зерна 3 мкм; элюент - смесь ацетонитрила и воды (1:1). Обнаружено, что существует линейная зависимость между этими хроматографическими параметрами. В табл. 9 проведено сравнение параметров разделения стильбеноидов в НФ ВЭЖХ и ОФ ВЭЖХ в изократическом режиме элюирования. Величины значений а и R между пиками для большинства стильбеноидов одинаковы в обоих методах кроме изомеров стильбена. Численные значения величин а и R при разделении смеси изомеров стильбена в 2 и 10 раз больше при использовании метода НФ ВЭЖХ, чем ОФ ВЭЖХ. По-видимому, это связано со специфическим взаимодействием изомеров стильбена с поверхностью гидроксилированного силикагеля.

Результаты исследования хроматографических параметров удерживания стильбеноидов и установленные корреляционные зависимости позволяют прогнозировать их поведение при изменении условий сорбции, а также оптимизировать условия хроматографического разделения смесей стильбеноидов.

Полученные результаты могут оказаться очень полезными при выборе метода анализа стильбеноидов и перенесении параметров хроматографического разделения между методами НФ ВЭЖХ или ОФ ВЭЖХ.

Таблица 9

Хроматографические параметры удерживания и разделения смеси стильбеноидов _в условиях НФиОФВЭЖХ_

Соединене

Силасорб-600

К

а

Я

НурегеЛ ОР5 С|8

а

Я

ццс-Стильбен

0.08

3.75

16.11

1.03

0.36

транс-С тильбен

0.19

16.61

транс-4-Метокснстильбен

2.11

1.15

3.33

15.71

1.11

2.85

транс-4,4'-[иметоксистильбен

2.42

14.12

транс-4-Гидроксистильбен

3.36

1.36

3.67

4.92

1.32

2.21

Диэтилстильбэстрол

4.56

3.72

Резвератрол

6.78

.34

7.61

2.12

1.15

6.72

Пицеатаннол

9.09

1.84

к - фактор удерживания, а - фактор разделения и Н - разрешение между пиками соединений.

Хроматографический метод анализа широко используется для контроля качества фармацевтической и косметической продукции. Использование сформированного массива данных по хроматографическому удерживанию стильбеноидов позволяет быстро и надежно идентифицировать присутствие этих ценных биологически активных веществ, обладающих пртивораковой, антивирусной, гепато- и кардиопротекторной активностью в фармакологической и косметической продукции.

На основе экстрактов древесины Маатш амурской, стеблей Г7//.У атшепъ'и и корневищ КНе1 ппс!и1а1'1, содержащих смесь стильбеноидов (пицеатаннола, рапантигенина, резвератрола и др.), изготавливается ряд лекарственных и косметических препаратов, а также биологически активных добавок. На рис. 8-9 приведены хроматограммы экстракта из древесины Маакии амурской и препарата «Максар», производимого на его основе, зарегистрированного как биологически активная добавка. Пики на хроматограмме препарата «Максар» идентифицировали с использованием двух параметров: времени удерживания и спектрального отношения при длинах волн 280 нм и 365 нм. В обоих образцах обнаружены резвератрол, рапонтигенин и пицеатаннол.

Экспериментально было установлено, что оптимальная объемная концентрация этилацетата в м-гексане для разделения стильбеноидов с гидрокси- и метоксигруппами составляет 50%. Эта система оказалась пригодной для анализа растительных экстрактов методом НФ ВЭЖХ.

Таким образом, использование метода НФ ВЭЖХ и сформированного массива данных по хроматографическому удерживанию стильбеноидов позволяет надежно определять наличие стильбеноидов в растительных экстрактах, контролировать качество лекарственных препаратов и значительно сократить время анализа.

/, m V

V, м к л

Рис. 8. Хроматограмма препарата «Максар»: резвератрол (1), рапонтигенин (2) и пицеатаннол (3) в системе Силасорб 600 - этилацетат - н-гексан при объемной концентрация этилацетата в м-гексане <р = 50%.

Рис. 9. Хроматограмма соединений из древесины Маакии амурской: резвератрол (1), рапонтигенин (2) и пицеатаннол (3), кверцетин (4) и морин (5) в системе Силасорб 600 - этилацетат - н-гексан при объемной концентрация этилацетата в н-гексане ф = 50%.

В состав многих лекарственных препаратов, используемых в гормонозаместительной терапии, входят соединения со структурой стильбена. На рис. 10 приведена хроматограмма препарата «Фолликулин», зарегистрированного в реестре лекарственных препаратов РФ, в состав которого входят эстрогенные гормоны нестероидного строения - димэстрол, синэстрол и октаэстрол.

I, 111 V

LsL

О 100 200 300 400 500 600 700 800 900

V, м к л

Рис. 10. Хроматограммы: (а) смеси стандартов - димэстрола (1), синэстрола (2 октаэстрола (3); (б) препарата «Фолликулин» (Силасорб 600 - этилацетат - н-гек при объемной концентрация этилацетата в w-гексане <р = 50%).

V, мкл

Как показывает сравнение хроматограмм, в препарате «Фолликулин» содержатся вышеупомянутые эстрогенные соединения, что подтверждает заявленный состав данного препарата.

Для экспресс-анализа биологических жидкостей, содержащих лекарственные препараты на основе эстрогенных гормонов нестероидного строения, могут быть использованы корреляционные зависимости между параметрами удерживания, полученными методами ТСХ и НФ ВЭЖХ для фенольных соединений.

В табл. 10 приведены значения Я/ и Уп„ эстрогенных гормонов нестероидного строения. Как видно из таблицы, значения удельных удерживаемых объемов Г,ш для эстрогенных гормонов нестероидного строения, полученные экспериментально и рассчитанные по уравнению (5), хорошо согласуются между собой.

Таблица 10

Значения констант Л/и удельных удерживаемых объемов ¥гт для эстрогенных

гормонов несте роидного строения

Соединение Структура Л/ ^ гт. (рассчитанное) у * пи, (экспериментальное)

)/ишс-3,4-Ди-(4- 1етоксифенил)-3-гексен (димэстрол) 0.56 1.19+0.06 1.14±0.06

/>анс-3,4-Ди-(4- одроксифенил)-3- ексен диэтилстильбэстрол) 0.42 1.61±0.08 1.59±0.08

и«о-3,4-Ди-(4-идроксифенил)-гексан синэстрол) 0.46 1.47±0.07 1.4210.07

е?о-2,4-Ди-(4-идроксифенил)-3-тилгексан октэстрол) "'Ху^Г 0.41 1.66+0.08 1.65±0.08

Таким образом, обнаруженные зависимости, связывающие параметры удерживания стильбеноидов, полученные различными методами жидкостной хроматографии, значительно облегчают оптимизацию условий анализа и препаративного разделения смесей стильбеноидов, позволяют прогнозировать поведение стильбеноидов при изменении условий сорбции, а также контролировать качество лекарственной и косметической продукции.

ВЫВОДЫ

1. Получены новые экспериментальные данные о хроматографических свойствах синтетических и растительных стильбеноидов в условиях нормально фазовой жидкостной хроматографии на кремнеземе. Сформирован массив данных в виде зависимостей удерживания стильбеноидов от доли полярного

модификатора в элюенте для качественного и количественного анализа растительных экстрактов и фармацевтических препаратов, содержащих стильбеноиды.

2. Установлены зависимости хроматографического удерживания стильбеноидов от физико-химических свойств их молекул (функциональности, количества и положения функциональных групп, геометрической конфигурации и длины олефинового фрагмента). Определены количественные соотношения вкладов этих составляющих в хроматографическое удерживание. Изучены возможности моделирования стильбеноидов с использованием производных бензола и дифенила с аналогичной функциональностью и пространственным расположением групп.

3. Рассчитаны эмпирические коэффициенты уравнений, связывающих константы удерживания стильбеноидов на кремнеземе, полученные методами ТСХ и НФ ВЭЖХ; установлена корреляция между хроматографическими параметрами удерживания стильбеноидов в условиях НФ и ОФ ВЭЖХ, что значительно облегчает оптимизацию условий анализа и препаративного разделения смесей стильбеноидов, выделение чистых целевых соединений.

4. Впервые изучено адсорбционное взаимодействие стильбеноидов с поверхностью кремнезема в расширенной области концентраций для условий препаративной хроматографии с нормальными фазами. Получены изотермы адсорбции из индивидуальных и бинарных органических растворителей, для их описания предложена модель локализованной адсорбции на энергетически неоднородных центрах Фрейндлиха. Методом ИК-Фурье-спектроскопии изучен механизм взаимодействия растительных стильбеноидов с поверхностью кремнезема.

Основное содержание диссертации изложено в следующих публикациях:

1. Колотилов П.Н., Полунин К.Е., Шепелев Б.Н. и др. Закономерности удерживания дифенилполиенов на поверхности силикагеля // Сорбционные и хроматографические процессы. 2004. Т. 4. Спец. вып. «ИОНИТЫ-2004». С. 8691.

2. Колотилов П.Н., Шепелев Б.Н., Полунин К.Е. и др. Хромато-оптический анализ дифенилов и полиенов // Сорбционные и хроматографические процессы. 2005. Т.5. Вып. 1.С. 82-91.

3. Полунин К.Е., Колотилов П.Н., Полунина И.А. и др. Взаимодействие стильбеноидов с поверхностью силикагеля в органических средах // Сорбционные и хроматографические процессы. 2007. Т. 7. Вып. 3. С. 389-396.

4. Колотилов П.Н., Полунин К.Е., Ларин A.B. и др. Сравнительная адсорбция гидроксипроизводных /?;ря//с-стильбена и бензола на нанодисперсном аэрогеле А1203 // Сорбционные и хроматографические процессы. 2008. Т.8. Вып. 2. С. 210-217.

5. Полунин К.Е., Колотилов П.Н., Полунина И.А. и др. Адсорбционные свойства синтетического пицеатаннола // Физикохимия поверхности и защита материалов. 2008. Т.44. № 6. С. 600-607.

6. Колотилов П.Н., Полунин К.Е., Ларин A.B. и др. Равновесная адсорбция стильбеноидов на оксидах металлов // Физикохимия поверхности и защита материалов. 2009. Т.45. № 1. С. 22-27.

7. Комаров В.С, Морозов Ю.М., Колотилов П.Н. и др. Способ получения рентгеноаморфной модификации карведилола // Патентная заявка РФ 2006123365 от 22.08.2007. Бюл. № 3.2008.

8. Колотилов П.Н., Полунин К.Е., Ларин A.B. Удерживание пицеатаннола в условиях нормально-фазовой хроматографии / Сб. материалов конф. «Теоретические проблемы химии поверхности, адсорбции и хроматографии». М„ 2006. С. 371-375.

9. Колотилов П.Н., Полунин К.Е., Адсорбционное взаимодействие биологически

активных стильбеноидов с поверхностью силикагеля / Сб. материалов конф. «Теоретические проблемы химии поверхности, адсорбции и хроматографии». М, 2006. С. 366-370.

10. Колотилов П.Н., Полунин К.Е. Исследование гидрофобных свойств молекул дифенилполиенов в модельных системах / Материалы III Всероссийск. конф. «Физико-химические процессы в конденсированном состоянии и на межфазных границах». Воронеж: Науч. книга. 2006. Т. 2. С. 797-800.

11. Колотилов П.Н., Полунина И.А., Полунин К.Е., Соколова Н.П., Горбунов A.M. Взаимодействие стильбеноидов с аэросилом / Тез. докл. III Всероссийск. конф. «Химия поверхности и нанотехнология». С.-Пб. 24.09-01.10.2006. С. 129-130.

12. Колотилов П.Н., Ларин A.B., Полунин К.Е. Адсорбционное поведение гидроксистильбенов и фенолов в прямофазной ВЭЖХ / Тез. докл. Международ, конф. «Физико-химические основы новейших технологий XXI века». М., 30.0604.07.2005. Т. 1.С. 186.

13. Колотилов П.Н., Полунина И.А., Полунин К.Е., Ларин A.B. Удерживание пицеатаннола в прямофазной хроматографии в зависимости от содержания полярных растворителей / Тез. докл. X Международ, конф. «Теоретические проблемы химии поверхности, адсорбции и хроматографии». М.24-28.04.2006. С.317.

14. Колотилов П.Н., Полунин К.Е. Адсорбционное взаимодействие биологически активных стильбеноидов с поверхностью силикагеля / Тез. докл. X Международ, конф. «Теоретические проблемы химии поверхности, адсорбции и хроматографии». М. 24-28.04.2006. С. 190.

15. Колотилов П.Н., Полунина И.А., Полунин К.Е. Адсорбционные свойства фитоалексина пицеатаннола / Тез. докл. IV Всероссийск. конф. «Химия и технология растительных веществ». Сыктывкар. 25-30.06.2006. С. 387.

16. Колотилов П.Н., Полунина И.А., Полунин К.Е., Ларин A.B. Сорбционные свойства биологически активных стильбеноидов в условиях хроматографии с нормальными фазами / Тез. докл. Всероссийск. конф. симпозиума

«Хроматография в химическом анализе и физико-химических исследованиях». М. 24-29.04.2007. С. 104.

17. Колотилов П.Н., Полунина И.А., Полунин К.Е., Дзарданов Д.В. Равновесная адсорбция стильбеноидов на оксидах металлов / Тез. докл. Всероссийск. симпозиума «Актуальные проблемы теории адсорбции, сорбции и адсорбционной селективности». М. 16-20.04.2007. С. 135.

18. Колотилов П.Н., Полунин К.Е. Гидрофобные свойства стильбеновых антиоксидантов / Тез. докл. XVIII Менделеевского съезда по общей и прикладной химии «Достижения и перспективы химической науки». М. 712.09.2007. С. 269.

19. Колотилов П.Н., Ларин A.B., Полунин К.Е. Сорбционные свойства стильбеновых фитоалексинов - пицеатаннола, резвератрола и рапонтигенина в условиях хроматографии с нормальными фазами / Тез. докл. XI Международ, конф. «Физико-химические основы ионообменных процессов. ИОНИТЫ 2007». Воронеж. 17-21.09.2007. С. 122,

20. Колотилов П.Н., Полунина И.А., Полунин К.Е, Соколова Н.П. Адсорбционное разделение дифенилполиенов / Тез. докл. XII Всероссийск. симпозиума «Актуальные проблемы теории адсорбции, пористости и адсорбционной селективности». М. 21-25.04.2008. С. 152.

Подписано в печать 10.02.2009 г. Тираж 100 экз. Заказ № 305 Отпечатано в типографии «АллА Принт» Тел. (495) 621-86-07, факс (495) 621-70-09 www.allaprint.ru

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Физико-химические и фармакологические свойства стильбеноидов.

1.2. Хроматографическое определение стильбеноидов в различных объектах.

1.2.1. Определение стильбеноидов в растительных материалах и лекарственных препаратах методом тонкослойной хроматографии.

1.2.2. Высокоэффективная жидкостная хроматография.

1.2.3. Аналитические методы определения растительных стильбеноидов с помощью ОФ ВЭЖХ.

1.3. Препаративное выделение стильбеноидов. Адсорбция стильбеноидов на оксидах.

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объекты исследования.

2.1.1. Исследуемые соединения.

2.1.2. Сорбенты.

2.2 Методы физико-химических исследований.

2.2.1. Тонкослойная жидкостная хроматография.

2.2.2. Препаративная колоночная хроматография.

2.2.3. Нормально-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография.

2.2.4. Обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография.

2.2.5. Определение адсорбции веществ из органического растворителя на поверхности твердой дисперсной фазы.

2.2.6. Спектроскопические методы.

2.3. Математическая обработка полученных результатов.

ГЛАВА 3. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ СТИЛЬБЕНА И

ДИФЕНИЛПОЛИЕНОВ С ПОВЕРХНОСТЬЮ КРЕМНЕЗЕМА.

3.1. Физико-химические свойства стильбена и дифенилполиенов.

3.2. Удерживание стильбенов и дифенилполиенов в нормально-фазовой хроматографии в зависимости от содержания полярного модификатора.

3.3. Равновесная адсорбция стильбенов и дифенилполиенов на кремнеземе из смеси органических растворителей.

ГЛАВА 4. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ МЕТОКСИПРОИЗВОДНЫХ СТИЛЬБЕНА С ПОВЕРХНОСТЬЮ КРЕМНЕЗЕМА.

4.1. Физико-химические свойства метоксипроизводных стильбена.

4.2. Удерживание метоксипроизводных стильбена в нормально-фазовой хроматографии в зависимости от содержания полярного модификатора.

4.3. Равновесная адсорбция метоксипроизводных стильбена на кремнеземе из смеси органических растворителей.

ГЛАВА 5. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ГИДРОКСИПРОИЗВОДНЫХ СТИЛЬБЕНА И МОДЕЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ С ПОВЕРХНОСТЬЮ КРЕМНЕЗЕМА.

5.1. Удерживание гидроксипроизводных бензола в нормально-фазовой хроматографии в зависимости от содержания полярного модификатора.

5.2. Равновесная адсорбция гидроксипроизводных бензола на кремнеземе из смеси органических растворителей.

5.3. Физико-химические свойства гидроксипроизводных стильбена.

5.4. Удерживание гидроксипроизводных стильбена в нормально-фазовой хроматографии в зависимости от содержания полярного модификатора.

5.5. Удерживание гидроксипроизводных стильбена в обращенно-фазовой хроматографии в зависимости от доли органического модификатора в элюенте.

5.6. Равновесная адсорбция гидроксипроизводных стильбена на кремнеземе из смеси органических растворителей.

ГЛАВА 6. ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПРИРОДНЫХ ЭКСТРАКТОВ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ, СОДЕРЖАЩИХ

СТИЛЬБЕНОИДЫ.

6.1. Высокоэффективная жидкостная хроматография экстракта из древесины Маакаи Амурской и лекарственного препарата на его основе.

6.2. Хроматографический анализ неэстрогенных гормональных лекарственных препаратов на основе стильбена.

ВЫВОДЫ.

Актуальность темы. Важное место в ряду растительных полифенолов, к которым привлечено повышенное внимание исследователей, занимают стильбеноиды. В последние годы на основе растительных экстрактов, содержащих резвератрол, пицеатаннол и пиностильбен, разработаны новые фармацевтические и косметические препараты, наполнителем и загустителем в которых является кремнезем. Кроме того, синтетические стильбеноиды различной функциональности и стильбенсодержащие полимеры используются в производстве лазерных красителей, сенсоров, фоточувствительных маркеров и композиционных материалов. Однако межфазные адсорбционные взаимодействия в таких системах изучены недостаточно.

Хроматографические методы широко применяются для анализа природных объектов, контроля качества фармацевтической и косметической продукции, а также препаративного разделения растительных экстрактов и синтетических смесей, очистки и выделения целевых соединений. Использование адсорбционной хроматографии для исследования физико-химических параметров сорбционных процессов и выявления связи характеристик хроматографического удерживания со структурой молекул — один из наиболее перспективных подходов для изучения межмолекулярных и межфазных взаимодействий в композиционных системах. Моделирование процесса удерживания стильбеноидов на силикагеле в условиях жидкостной нормально-фазовой хроматографии с выявлением корреляционных зависимостей позволяет устанавливать связь между физико-химическими параметрами веществ, прогнозировать свойства хроматографической системы, оптимизировать ее состав и условия разделения стильбеноидов.

Тема диссертационной работы входит в план научных исследований ИФХЭ РАН (№ 01.2.00704516). Работа поддержана грантами РФФИ (№ 06

03-33185, 08-08-00845), Программами фундаментальных исследований Президиума РАН и Отделения химии и наук о материалах РАН.

Цель работы - выявление связи характеристик хроматографического удерживания синтетических и растительных стильбеноидов со структурой их молекул и равновесными адсорбционными характеристиками системы кремнезем - стильбеноиды - органический растворитель.

В соответствии с поставленной целью задачами работы являлись:

1. Выявление общих закономерностей удерживания на кремнеземе стильбеноидов с различной геометрической конфигурацией, длиной олефинового фрагмента, количеством и положением функциональных групп в широком интервале изменения доли полярного модификатора в бинарном органическом растворителе.

2. Формирование массива экспериментальных данных по хроматографическому удерживанию стильбеноидов на силикагеле для контроля качества фармацевтической продукции и оптимизации условий разделения синтетических смесей и растительных экстрактов стильбеноидов методами препаративной хроматографии.

3. Поиск корреляционных зависимостей, связывающих параметры удерживания стильбеноидов и модельных ароматических соединений, полученные различными методами адсорбционной жидкостной хроматографии.

4. Изучение изотерм и механизма адсорбции стильбеноидов на кремнеземе в широком интервале концентраций адсорбируемых веществ, применительно к условиям жидкостной нормально-фазовой хроматографии.

Научная новизна основных результатов работы заключается в следующем:

• Впервые получены экспериментальные данные о хроматографических и адсорбционных свойствах растительных стильбеноидов - пицеатаннола, рапонтигенина, пиностильбена и птеростильбена в широком интервале изменения доли полярного модификатора в бинарном органическом растворителе.

• Установлены корреляционные зависимости, связывающие параметры хроматографического удерживания стильбеноидов на кремнеземе с их функциональностью, структурными и физико-химическими свойствами в условиях жидкостной нормально-фазовой хроматографии.

• Впервые обнаружена корреляция между параметрами хроматографического удерживания метоксипроизводных стильбена, бензола и дифенила.

• Впервые получены изотермы равновесной адсорбции стильбеноидов на кремнеземе и изучено взаимодействие стильбеноидов с поверхностью БЮг в расширенной области концентраций для условий препаративной хроматографии с нормальными фазами.

• Впервые изучено влияние химии поверхности сорбента на величину адсорбции стильбеноидов, обнаружено, что на А120з образуются более плотные монослои, чем на кремнеземе.

Практическая значимость работы. Установленные закономерности и экспериментальные результаты диссертационной работы были использованы при формировании массива данных в виде зависимостей параметров удерживания функциональных производных стильбена, дифенила и бензола от состава бинарного элюента в нормально-фазовой жидкостной хроматографии. Полученные результаты были использованы в работе ФГУ «Центр контроля лекарственных средств и медицинских измерений» Управления делами Президента РФ для анализа фармацевтических препаратов и растительных экстрактов, что привело к существенному сокращению времени анализа. Получен акт о внедрении созданного массива данных.

Результаты исследования параметров хроматографического удерживания полифенольных соединений на кремнеземе и установленные корреляционные зависимости позволяют прогнозировать поведение стильбеноидов при изменении условий сорбции, а также оптимизировать условия препаративного разделения синтетических смесей и выделения целевых продуктов. Данные диссертационной работы были использованы в материалах патентной заявки РФ № 2006123365.

Кроме того, результаты исследования адсорбционных свойств стильбеноидов могут быть использованы при разработке рецептуры новых композиционных материалов, наполненных кремнеземом.

На защиту выносятся:

1. Экспериментальные данные о хроматографических и адсорбционных свойствах синтетических и растительных стильбеноидов в условиях НФ ВЭЖХ.

2. Установленные закономерности хроматографического удерживания на кремнеземе стильбеноидов с различной геометрической конфигурацией, длиной олефинового фрагмента, количеством и положением функциональных групп в широком интервале изменения доли полярного модификатора в бинарном органическом растворителе.

3. Сравнительное удерживание стильбеноидов в условиях жидкостной нормально-фазовой хроматографии, а также корреляционные зависимости, связывающие параметры хроматографического удерживания стильбеноидов и модельных ароматических соединений, полученные различными методами жидкостной хроматографии.

4. Результаты исследования изотерм и механизма адсорбции стильбеноидов на кремнеземе из органических растворителей.

Апробация работы и публикации. Материалы диссертации докладывались на конференциях молодых ученых ИФХЭ РАН 2005-2008 гг. (премия им. А.В.Киселева в 2008 г.), Всероссийском симпозиуме «Хроматография и хроматографические приборы» (Москва, 2004 г.), Международной конференции «ИОНИТЫ» 2004 и 2007 гг., Международной конференции «Физико-химические основы новейших технологий XXI века» (Москва, 2005 г.), X Международной конференции «Теоретические проблемы химии поверхности, адсорбции и хроматографии» (Москва, 2006 г.), IV Всероссийской конференции «Химия и технология растительных веществ» (Сыктывкар, 2006 г.), III Всероссийской конференции «Химия поверхности и нанотехнология» (Санкт-Петербург, 2006 г.), Всероссийских конференциях «Физико-химические процессы в конденсированном состоянии и на межфазных границах» (Воронеж, 2006-2007 гг.), Всероссийском симпозиуме «Хроматография в химическом анализе и физико-химических исследованиях» (Москва, 2007 г.), XVIII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Москва, 2007 г.), XI - XII Всероссийских симпозиумах «Актуальные проблемы теории адсорбции, пористости и адсорбционной селективности» (Москва, 2007- 2008 гг.).

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, шести глав, включающих, обзор литературы и пять глав экспериментальной части с подразделами, выводов, списка цитируемой литературы из 180 наименований и 2-х приложений. Работа содержит 149 страниц машинописного текста, включая 45 рисунков и 30 таблиц.

ВЫВОДЫ

1. Получены новые экспериментальные данные о хроматографических свойствах синтетических и растительных стильбеноидов в условиях нормально фазовой жидкостной хроматографии на кремнеземе. Сформирован массив данных в виде зависимостей удерживания стильбеноидов от доли полярного модификатора в элюенте для качественного и количественного анализа растительных экстрактов и фармацевтических препаратов, содержащих стильбеноиды.

2. Установлены зависимости хроматографического удерживания стильбеноидов от физико-химических свойств их молекул (функциональности, количества и положения функциональных групп, геометрической конфигурации и длины олефинового фрагмента). Определены количественные соотношения вкладов этих составляющих в хроматографическое удерживание. Изучены возможности моделирования стильбеноидов с использованием производных бензола и дифенила с аналогичной функциональностью и пространственным расположением групп.

3. Рассчитаны эмпирические коэффициенты уравнений, связывающих константы удерживания стильбеноидов на кремнеземе, полученные методами ТСХ и НФ ВЭЖХ; установлена корреляция между хроматографическими параметрами удерживания стильбеноидов в условиях НФ и ОФ ВЭЖХ, что значительно облегчает оптимизацию условий анализа и препаративного разделения смесей стильбеноидов, выделение чистых целевых соединений.

4. Впервые изучено адсорбционное взаимодействие стильбеноидов с поверхностью кремнезема в расширенной области концентраций для условий препаративной хроматографии с нормальными фазами. Получены изотермы адсорбции из индивидуальных и бинарных органических растворителей, для их описания предложена модель

Фрейндлиха локализованной адсорбции на энергетически неоднородных центрах. Методом ИК-Фурье-спектроскопии изучен механизм взаимодействия растительных стильбеноидов с поверхностью кремнезема.

1. Семенов А.А. Очерк химии природных соединений. Новосибирск: Наука, 2000. 664 с.

2. Кнорре Д.Г., Мызина С.Д. Биологическая химия. М.: Высшая школа, 1992.416 с.

3. ТрамбергИ.И. Органическая химия. М.: Дрофа, 2004. 672 с.

4. Нурмухаметов Р.Н. Поглощение и люминесценция ароматических соединений. М.: Химия, 1971. 523 с.

5. Seo Y. S., Lee С., Lee К. Н., et al. Yoon К. В. 1:1 and 2:1 charge-transfer complexes between aromatic hydrocarbons and dry silica, titanium dioxide // Ang. Chem. 2005. V. 44. N. 6. P. 910-913.

6. Takagai Y., Kubota Т., Kobayashi H., et al. Adsorption and desorption properties of trans-Resveratrol on cellulose cotton // Anal. Sci. 2005. V. 21. N. 2. P. 183-186.

7. Mohammed-Ziegler I., Holmgren A., Forsling W., et al. Mechanism of the adsorption process of pinosylvin and some polyhydroxybenzenes onto the structure of lignin // Vibr. Spectr. 2004. V. 36. N. 1. P. 65-72.8.

8. Kim S., Ko H., Park J.E. Design, synthesis and discovery of novel trans -stilbene analogues as potent and selective human cytochrome P450 1B1 inhibitors. //J. Med. Chem. 2002. V. 45. P. 160-164.

9. Vitrac X., Bornet A., Vanderlinde R., Vails J., et al. Determination of stilbenes (5-viniferin, trans-astringinin, trans-piceid, cis- and trans-resveratrol, s-viniferin) in Braziliau wines. // J. Agric. Food Chem. 2005. V. 53. N. 14. P. 5664-5669.

10. Merillon J. M. Separation of stilbene isomers from red wine by overopressured-layer chromatography// J. Planar Chromatogr. 2004. V. 17. N. l.P. 4-8.

11. Bravo M. N., Silva S., Coelho A. V., et al. Analysis of phenolic compounds in Muscatel wines produced in Portugal // Anal. Chem. Acta. 2006. V. 563. N. 2. C. 84-92.

12. Ku K. L., Chang P. S., Cheng Y.A. C. Production of stilbenoids from the callus of arachis hypogaea. A novel source of the anticancer compound piceatannol 11 J. Agric. Food Chem. 2005. V. 53. N. 10. P. 3877-3881.

13. Cantos E. Differential stilbene induction susceptibility of seven red wine grape varieties upon post-harvest UV-C irradiation // Europ. Food Research and Technol. 2003. V. 217. N. 3. P. 253-258.

14. Chan M.M., Matiacci J.A., Hwang H.S. Synergy between ethanol and grape polyphenols // Biochem. Pharm. 2000. V. 60. P. 1539-1548.

15. Садек П. Растворители для ВЭЖХ / Пер. с англ. / Под ред. А.А.Горбатенко. М.: Бином, 2006. 704 с.

16. Рудаков О.Б. Растворитель как средство управления процессом в жидкостной хроматографии. М.:Мир, 2003. 306 с.

17. Erkoc S., Keskin N., Erkoc F. Resveratrol and its analogues resveratrol-dihydroxyl isomers: semi-empirical SCF-MO calculations // J. Mol. Struct. Chem. 2003. V. 631. N. 1-3. C. 67-73.

18. Jang M, Cai L, Udeani G. O. Cancer chemopreventive activity of resveratrol, a natural product derived from grapes // Science. 1997. V. 275. P. 218-220.

19. Horvath Z., Murias M., Saiko P., et al. Cytotoxic and biochemical effects of 3,3',4,4',5,5'-hexahydroxystilbene, a novel resveratrol analog in HL-60 human promyelocyte leukemia cells // Experiment. Hematol. 2006. V. 34. N. 10. P. 1377-1384.

20. Amorati R., Lucarini M., Mugnaini V., et. al. Antioxidant activity of hydroxystilbene derivatives in homogeneous solution // J. Organic Chem. 2004. V. 69. N. 21. P. 7101-7107.

21. Nakanishi I., Shimada T. Involvement of electron transfer in the radical-scavenging reaction of resveratrol//Chem. Lett. 2007. V. 36. N. 10. P. 1276-1277.

22. Ali M. A., Kondo K. Synthesis and hematocidal activity of hydroxystilbenes // Chem. Pharm. Bull. 1992. V. 40. N. 5. P. 1130-1136.

23. Lion C.J., Malcolm F.G. Synthesis antitumor evaluation and apoptosis inducing activity hydroxylated (E)-stilbenes // J. Med. Chem. 2005. V. 48. P. 1292-1295.

24. Torres P., Avila J. G. De Vivar A. R. Antioxidant and insect growth regulatory activities of stilbenes and extracts from Yucca periculosa // Phytochem. 2003. V. 64. N. 2. P. 463-473.

25. Sanoh S., Kitamura S., Sugihara K., et. al. Estrogenic activity of stilbene derivatives // J. Health Science. 2003. V. 49. N. 5. P. 359-367.

26. Li X-M. Studies on formic acid catalyzed dimerization of isorhapontigenin and resveratrol to tetralins // Tetrahedron. 2003. V. 59. P. 4405-4413.

27. Syamala M.S. Consequences of hydrophobic association in photoreactions: photodimerization of stilbenes // J. Org. Chem. 1986. V. 51. N. 19. P. 37123715.

28. Momotake A., Uda M., Arai T. Photochemical cyclization reaction in cis-tetrametoxystilbene // J. Photochem. Photobiol. 2003. V. 158. P. 7-12.

29. Kim H. J., Saleem M., Seo S. H., et. al. Two new antioxidant stilbene dimers, parthenostilbenins A and B from Parthenocissus tricuspidata // Planta Medic. 2005. V. 71. N. 10. P. 973-976.

30. Schuster D. I., Nuber В., Vail S. A., et. al. Synthesis, photochemistry and photophysics of stilbene-derivatized fullerenes // Photochem. Photobiol. Sci. 2003. V. 2.N.3. P. 315-321.

31. Запесечная Г.Г., Куркин В.А., Бойко В. П. Фенилпропаноиды — перспективные биологически активные вещества лекарственных растений//Хим.-фарм. журн. 1995. Т. 4. № 1. С.47-50.

32. Поляков Н.Э., Лешина Т.В. Некоторые аспекты реакционной способности каротиноидов. Окислительно-восстановительные процессы и комплексообразование // Успехи химии. 2006. Т.75. С. 1175-1192.

33. Лекарственные растения Государственной Фармакопеи. / Под. Ред. И.А. Самылиной М.: Медицина, 999. 126 с.

34. Машковский М.Д. Лекарственные средства. В двух томах. 14-е. Изм. М.: Новая волна, 2000. Т. 1. 539 с.

35. Регистр лекарственных средств России. Экциклопедия лекарств. М.: «РЛС-2000», 2000. 1520 с.

36. Бакуридзе Я.Д., Курцикидзе М.Ш. Иммуномодуляторы растительного происхождения // Хим.- фарм. журн. 1993. Т. 8. № 1. С. 43-47.

37. Potter G.A., Patterson L.H., Wanogho Е. The cancer preventative agent resveratrol is convented to the anticancer agent piceatannol by citochrome P450 enzyme CYP 1B1 //British. J. Cancer. 2002. V. 86. P. 747-778.

38. Власова Т.В., Венгеровский А.И., Саратиков А.С. Полифенолы Маакин амурской эффективное гепатозащитное и желчегонное средство // Хим.-фарм. журн. 1994. Т. 3. № 2. С. 56-58.

39. Roupe К. A., J. A., Teng X. W., Davies N. М. Pharmacokinetics of selected stilbenes: Rhapontigenin, piceatannol and pinosylvin in rats// J. Pharmac. Pharmacol. 2006. V. 58. N. 11. P. 1443-1450.

40. Rimando A. M., Kalt W., Magee J. В., et. al. Resveratrol, pterostilbene, and piceatannol in Vaccinium berries // J. Agric. Food Chem. 2004. V. 52. N. 15. P. 4713-4715.

41. Roupe K., Teng X. W., Fu X., et. al. Determination of piceatannol in rat serum and liver microsomes: Pharmacokinetics and phase I and II biotransformation //Biomedic. Chromatogr. 2004. V. 18. N. 8. P. 486-491.

42. Li Y., Zhang D. M., Yu S. S. A new stilbene from Cercis chinensis Bunge // J. Integrative Plant Biology. 2005. V. 47. N. 8. P. 1021-1024.

43. Kopp P. Resveratrol, a phytoestrogen found in red wine. A possible explanation for the conundrum of the 'French paradox'? // J. Endocrinol. 1998. V. l.N. 38. P. 619-620.

44. Siemann E., Creasy L. Concentration of the phytoalexin resveratrol in wine // J. Enol. Viticult. 1992. V. 43. P. 49-52.

45. Полунин К.Е, Ларин A.B. Синтез, выделение и физико-химические свойства некоторых фитоалексинов // Сб. "Некоторые проблемыфизической химии" / Под ред. Чалых. А.Е. М. ИФХ РАН. 2001. С. 3539.

46. Полунин К.Е., Шмальц Х.-Г., Полунина И.А. Ареновые комплексы хрома в синтезе транс-резвератрола // Известия РАН. Сер. хим. 2002. №7. С. 1219-1223.

47. Kamoda S., Terada Т., Saburi Y. A common structure of substrate shared by lignostilbenedioxygenase isozymes from Sphingomonas paucimobilis TMY1009// Biosci. Biotechnol. Biochem. 2003. V. 67. N. 7. P. 1394-1396.

48. Andrabi S.A., Spina M.G., Lorenz P., et. al. Oxyresveratrol (trans-2,3',4,5'-tetrahydroxystilbene) is neuroprotective and inhibits the apoptotic cell death in transient cerebral ischemia // Brain Research. 2004. V. 1017. N. 1. P. 98-107.

49. Roupe K. A., Helms G. L., Halls S. C. Preparative enzymatic synthesis and HPLC analysis of rhapontigenin: Applications to metabolism, pharmacokinetics and anti-cancer studies // J. Pharm. Pharmaceutical Sciences. 2005. V. 8. N. 3. P. 375-386.

50. Weng К. C., Duval D. J., Risbud S. H., Frank C. W. Fluid biomembranes supported on nanoporous aerogel/xerogel substrates // Langmuir. 2004. V. 20. N. 17. P. 7232-7239.

51. Djarmati Z., Filip S., Jankov R. M. A stilbene from the heartwood of Madura pomifera // J. Serbian Chem. Society. 2003. V. 68. N. 3. P. 235237.

52. Finlay E.M., Wilson D.W., Aldercreutz H. The identification and measurement of phytoestrogens in human saliva, plasma, breast aspirate or cyst fluid and prostatic fluid using gas chromatography-mass spectrometry // Endocrinology. 1991. V. 12. P. 49-55.

53. Hoffman R. Potent inhibition of breast cancer cell lines by the isoflavonoid kievetone: comparison with genistein // Biochem. Biophys. Res. Com. 1995. V.211.P. 600-606.

54. Stopper H., Schmitt E., Kobras K. Genotoxicity of phytoestrogens Mutation Research Fundamental and Molecular Mutagenesis // Mutagenesis. 2005. V. 574. N. 1. P. 139-155.

55. Maralhas A., Monteiro A., Martins C., et. al. Genotoxicity and endoreduplication inducing activity of the food flavouring eugenol // Mutagenesis. 2006. V. 21. N. 3. P. 199-204.

56. Farines V., Monje M. C., Telo J. P., et. al. Polyphenols as superoxide dismutase modulators and ligands for estrogen receptors // Anal. Chem. Acta. 2004. V. 513. N. 1. P. 103-111.

57. Benassayag C., Perrot-Applanat M., Ferre F. Phytoestrogenes as modulators of steroid action in target cells // J. Chromatogr. B. 2002. V. 777. P. 233-248.

58. Mueller O.S. Overview of in vitro tools to assess the estrogenic and antiestrogenic activity of phytoestrogenes // J. Chromatogr. B. 2002. V. 777. P. 155-165.

59. Ferrer P., Asensi M., Segarra R., et. al. Association between pterostilbene and quercetin inhibits metastatic activity of В16 melanoma // Neoplasia. 2007. V. 7. N. 1. P. 37-47.

60. Дегтярев E.B., Тяглов Б.В., Красиков В.Д. и др. Применение тонкослойной хроматографии в анализе биологически активных веществ // Сб. 100 лет хроматографии / Под ред. Б.А. Руденко М.: Наука. 2003. С. 223-229.

61. Кочетова М.В., Семенистая Е.Н., Ларионов О.Г., Ревина А.А. Определение биоактивных фенолов и полифенолов в различных объектах методом хроматографии // Успехи химии. 2007. Т. 76. №1. С. 125-136.

62. Cimpoiu С. Analysis of some natural antioxidants by thin-layer chromatography and high performance thin-layer chromatography // J. Liquid Chromatogr. Relat. Technolog. 2006. V. 29. N. 8. P. 1125-1142.

63. Kostecki K., Engelmeier D., Pacher Т., et. al. Dihydrophenanthrenes and other antifungal stilbenoids from Stemona cf. pierrei // Phytochem. 2004. V. 65. P. 99-106.

64. Zheng Y., Li X. W., Gui M. Y. Studies on flavonoids from stems and leaves of Panax notoginseng // J. Chin. Pharmac. 2006. V. 41. N. 3. P. 176178.

65. Kim H. J., Saleem M., Seo S. H., et. al. Two new antioxidant stilbene dimers, parthenostilbenins A and В from Parthenocissus tricuspidata // Planta Medic. 2005. V. 71. N. 10. P. 973-976.

66. Eastoe I., Sancher M. Properties of a stilbene- containing Gemini potosurfactant: light-triggered changes in surface tension and aggregation // Langmuir. 2002. V. 18. N. 2. P. 7837-7844.

67. Настойки, экстракты, элексиры и их стандартизация / Под ред. проф. Багировой В.А. С. Пб.: Спец. Лит, 2001. 223 с.

68. Коренман Я.И. Практикум по аналитической химии. Хроматография. Методы анализа. Воронеж.: ВГТА, 2000. 336 с.

69. Zeng D., Mi Q., Sun H. A convenient synthesis of 14C-labelled resveratrol // J. Label. Compoun. Radiopharmac. 2004. V. 47. N. 3. P. 167-174.

70. Waksmundzka-Hajnos M. Retention process in reversed phase TLC systems with polar bonded stationary phases // J. Separat. Scie. 2005. V. 28. N. 6. P. 566-574.

71. Gritti F., Guiochon G. Adsorption mechanism in RPLC. Effect of the nature of the organic modifier // Anal. Chem. 2005. V. 77. N. 13. P. 42574272.

72. Сумина Е.Г., Штыков С.Н., Тюрина Н.В. Тонкослойная хроматография Теоретические основы и практическое применение. Саратов.: Саратовский Университет, 2006. 112 с.

73. Красиков В.Д. Основы планарной хроматографии С.-Пб.: Хим. изд., 2005. 232 с.

74. Беленький Б.Г., Гурков Е.А., Кочан Ю.Д., Красиков В.Д. Тонкослойная хроматография в России // Сб. 100 лет хроматографии / Под ред. Б.А. Руденко М.: Наука. 2003. С. 61-69.

75. Грейс Ф. Основы тонкослойной хроматографии. М.: Мир, 1999. 753 с.

76. Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. М.: ФЦ ГЭН Минздрава России, 2004. 240 с.

77. Кожанова Л.А., Федорова Г.А. Определение водо- и жирорастворимых витаминов в поливитаминных препаратах методом ВЭЖХ// Журн. аналит. химии. 2002. Т.1.С.49-54.

78. Лисичкин Г.В., Кудрявцев Г.В., Сердан A.A. Модифицированные кремнеземы в сорбции, катализе и хроматографии. М.: Химия, 1986. 248 с.

79. Киселев A.B., Лисичкин Г.В., Никитин Ю.С., Сердан A.A. Адсорбционные свойства кемнеземов, химически модифицированныхалкилтрихлорсиланами с разной длиной цепи // Журн. физ. химии. 1983. Т. 57. № 7. С. 1829-1832.

80. Сердан А.А., Богословский С.Ю., Нестеренко П.Н. Зависимость удерживания некоторых лекарственных препаратов на дифильном сорбенте от рН и ионной силы элюента. // Журн. физ. химии. 1991. Т. 65. № ю. С. 2638-2643.

81. Арзамасцев А. П., Печенников В.М., Родионова Г.М. и др. Анализ лекарственных смесей. М.: Спутник, 2000. 275 с.

82. Lee D. Pharmaceutical Analysis. / CRC Press. 2003. 320. P.

83. Rastija V., Mornar A., Jasprica I. Analysis of phenolic components in Croatian red wines by thin-layer chromatography // J. Planar Chromatogr. 2004. Y. 17. N. l.P. 26-31.

84. Рудаков О.Б., Востров И.А., Федоров C.B., и др. Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии. Воронеж.: Водолей, 2004. 528 с.

85. Райхардт К. Растворители и эффекты среды в органической химии. Пер. с англ. / Под ред. Кирюшкина А.А. М.: Мир. 1991. С. 523-542.

86. Киселев А.В. Межмолекулярные взаимодействия в адсорбции и хроматографии. М.: Высшая школа, 1986. 307 с.

87. Шатц В.Д., Сахартова О.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография. Рига: Зинатне, 1988. 390 с.

88. Snyder L.R. Principles of adsorption chromatography. New York: Marcel Dekker. 1968. 150 p.

89. Snyder L.R., Kirkland J.J. Introduction to modern liquid chromatography. Second edi. New York: J. Wiley and sons, 1979. 125 p.

90. Сыркина А. И., Верещагин A.A. Содержание некоторых флавоноидных соединений и сиренгина в отдельных частях CIRSIUM SETOSUM. // Журн. аналит. химии. 2000. Т. 36. Вып. 2. С. 73-79.

91. Katsagonis A., Atta-Politou J., Koupparis M. A. HPLC method with UV detection for the determination of trans-resveratrol in plasma// J. Liquid Chromatogr. 2005. V. 28. N. 9. P. 1393-1405.

92. Полунин К.Е., Полунина И.А., Соколова Н.П., Горбунов A.M. Адсорбционные взаимодействия гидроксистильбенов с поверхностью пирогенного кремнезема // Сорбц. и хроматографические процессы. 2002.Т.2. Вып. 4. С. 125-129.

93. Полунин К.Е., Полунина И.А., Ролдугин В.И. Влияние строения стильбеноидов на их взаимодействие с силикагелем // Сорбц. и хроматографические процессы. 2003. Т.З. № 4. С. 567-576.

94. Ланин С.Н., Никитин Ю.С. Высокоэффективная жидкостная хроматография фенолов на силикагеле. // Сб. научных трудов «Хроматография в биологии и медицине» / Под ред. Р.Т. Тогузова. М.: 2-ой МОЛГМИ им. Н.И.Пирогова. 1986. С.86-90.

95. Рудаков О.Б., Алексюк М.П., Коновалов В.В. Микроколоночная высокоэффективная жидкостная хроматография оргао-замещенных производных фенола // Журн. аналит. химии. 2001. Т. 56. № 4. С. 351358.

96. Киселев А. В., Яшин Я. И. Молекулярные основы адсорбционной хроматографии. М.: Наука, 1986. 272 с.

97. Руденко Б.А., Руденко Г.И. Высокоэффективные хроматографические процессы. М.: Наука, 2002. 225 с.

98. Ланин С.Н. Адсорбционные модели удерживания в жидкостной хроматографии // 100 лет хроматографии / Под ред. Б.А. Руденко М.: Наука. 2003. С. 407-438.

99. Ланин С.Н., Лялюнина Э.М., Никитин Ю.С., Шония Н.К. Влияние ассоциации молекул модификатора в подвижной фазе на удерживание в ВЭЖХ. // Журн. физ. химии. 1993. Т. 67. №1. С. 146-150.

100. Sochewinski Е. Simple molecular model for adsorption chromatography // Chromatogr. 1973. V. 6. N. 6. P. 269-271.

101. Ланин C.H., Никитин Ю.С. Прогнозирование удерживания в ВЭЖХ. Вытеснительная модель // Журн. аналит. химии. 1991. Т.46. № 8. С.1493-1502.

102. Ланин С.Н., Ланин И.А., Никитин Ю.С. Влияние ассоциации молекул сорбата и модификатора в подвижной фазе на удерживание в высокоэффективной жидкостной хроматографии. // Журн. физ. химии. 1995. №69. С.2045-2051.

103. Yao Y., Zhu Y. F. Determination of the contents of emodin and 2,3,5,4"-tetrahydroxystilbene-2-O-D-glucoside of Fanchun koufuye by HPLC method // Pharmac. Care and Research. 2005. V. 5. N. 3. P. 240-242.

104. Carer M., Corradini C., Elviri L., et. al. Direct HPLC analysis of quercetin and trans-resveratrol in red wine, grape, and winemaking byproducts// J. Agric. Food Chem. 2003. V. 51. N. 18. P. 5226-5231.

105. Ye M., Han J., Chen H., et. al. Analysis of Phenolic Compounds in Rhubarbs Using Liquid Chromatography Coupled with Electrospray Ionization // J. American Society for Mass Spectrometry .2007. V. 18. N. 1. P. 82-91.

106. Рудаков О.Б., Селеменев В.Ф., Коновалов B.B. Обращенно-фазовая микроколоночная высокоэффективная хроматография фенолов // Журн. физ. химии. 2002. Т. 76. № 5. С. 931-935.

107. Nasal A., Siluk D., Kaliszan R. Chromatographic retention parameters in medicinal chemistry and molecular pharmacology Current// Medic. Chem. 2003. V. 10. N. 5. P. 381-426.

108. Шафигулин P.B., Буланова A.B. Хроматографический анализ флавоноидов, содержащихся в чае // Сорбционные и хроматографические процессы. 2006. Т. 6. Вып. 5. С. 1365-1369.

109. Toshiyuki Т., Munekazul I., Hiroko М. Stilbene derivatives in the stem of parthenocissus Quinqve folia II Physchem. 1998. V. 48. N. 6. P. 1045-1049.

110. Скурхин В.Н., Шабаев C.B. Методы анализа витаминов A, D, Е и каротина в кормах, биологических объектах и продуктах животноводства. М.: Химия, 1996. 87 с.

111. Даванков В.А., Яшин Я.И. Сто лет хроматографии // Вестник РАН. 2003. Т. 73. № 7. с. 637-646.

112. Ларионов О.Г., Белякова Л.Д., Буряк А.Д., Татаурова О.Г. Применение и перспективы использования хроматографии в физико-химических исследованиях // Сб. 100 лет хроматографии / Под ред. Б.А. Руденко М.: Наука. 2003. С. 439-445.

113. Яшин Я.И, Яшин А.Я. Высокоэффективная хроматография. Состояние и перспективы // Росс, хим журн. 2003. Т.47. №1 .С. 64-79.

114. Бидлинмейер Б. Препаративная жидкостная хроматография. М.: Мир, 1990. 358 с.

115. Столяров Б.Н., Савинов И.М. Практическая газовая и жидкостная хроматография. С.-Пб., 1998. 610 с.

116. Кремнеземы в медицине и биологии // Под. ред. Чуйко. А.А. Киев.: Ставрополь, 1993. 259 с.

117. Technical bulletin pigments N11 Basic Characteristics and Application of AEROSIL // Frankfurt. Сотр. Publ. Degussa AG. 1993. 80. P.

118. Donatti D. A., Ruiz A. I., Vollet D. R. Structural evolution up to 1100 °C of xerogels prepared from TEOS sonohydrolysis and liquid phase exchanged by acetone// J. Non-Crystal. Solids. 2006. V. 352. N. 2. P. 167173.

119. Wang С. M., Chang K. S., Chung T. W. Adsorption equilibria of aromatic compounds on activated carbon, silica gel, and zeolite // J. Chem. Engineering Data. 2004. V. 49. N. 3. P. 527-531.

120. Roostaei N., Tezel F. H. Removal of phenol from aqueous solutions by adsorption // J. Environment. Management. 2004. V. 70. N. 2. P. 157-164.

121. Yilmaz N., Mizukami M., Kurihara K. Macroclusters of phenol adsorbed on silica in cyclohexane induced by surface silanol groups // Polymer Preprints. 2006. V. 55. N. 2. P. 443-447.

122. Ларин A.B., Фролова E.A. Изотермы и теплоты адсорбции изононилфенола из н-декана на силикагеле // Коллоидн. Журн. 1995. Т. 57. 3. С. 442-444.

123. Бидзиля В.А., Головкова Л.П., Н.Н. Власова и др. Изучение адсорбции а-токоферола и его аналогов на высокодисперсном кремнеземе // Укр. хим. Журн. 1994. Т. 60. №. 9. С. 616-619.

124. Медицинская химия и клиническое применение диоксида кремния / Под ред. А.А. Чуйко Киев.: Наукова Думка, 2003. 400 с.

125. Энтеросорбция / Под ред. Н.А. Белякова Л.: Центр сорбцион. технологии, 1991. 366 с.

126. Al-Abadleh Н. A., Grassian V. Н. FT-IR study of water adsorption on aluminum oxide surfaces // Langmuir. 2003. V. 19. N. 2. P. 341-347.

127. Другов Ю.С. Экология. Аналитическая химия. С.-Пб., 2000. 432 с.

128. Follut F., Vel Leitner N. К. Radiolysis of aqueous 4-nitrophenol solution with A1203 or Ti02 nanoparticles // Chemosphere. 2007. V. 66. N. 11. P. 114-119.

129. Вредные вещества в промышленности / Под ред. Э.Н. Левиной Л.: Химия, 1985. 464 с.

130. Eichelbaum М., Testa В., Somogyi A. Stereochemical aspects of drug and disposition / Springer. 2002. 450 p.

131. Wang Т., Jiang X. Preparation of Ti02 on surface of silica // J. Chem. Industry Engineering. 2003. V. 54. N. 12. P. 1779-1782.

132. Takeda S., Fukawa M. Role of surface OH groups in surface chemical properties of metal oxide films // Mater. Sci. Eng. B. 2005. V. 119. N. 3. P. 265-267.

133. Polat H., Molva M., Polat M. Capacity and mechanism of phenol adsorption on lignite // J. Mineral Processing. 2006. V. 79. N. 4. P. 264-273.

134. Nagasaki S., Nakagawa Y., Tanaka S. Sorption of nonylphenol on Na-Montmorillonite // Colloids Surf. A: Physicochem. Engi. Aspects. 2003. V. 1. P. 131-139.

135. Matsuda H., Tomohiro N. Anti-allergic effects of stilbene components from rhei undulati rhizoma II Biol. Pharm. Bull. 2001. 24. N 3. C. 264-267.

136. Левина Т.П. Справочник по органической химии. С.-Пб.: Паритет, 2002. 448. С.

137. Хубер Л. Применение диодно-матричного детектирования в ВЭЖХ. М.: Химия, 1993. 94 с.

138. Бражников В.В. Детекторы для хроматографии. М.: Машиностроение, 1992. 317 с.

139. Крейчи М. Вычисления и величины в сорбционной колоночной хроматографии. М.: Мир, 1993. 208 с.

140. Потапов В.Н. Стереохимия М.: Химия, 1988. 117 с.

141. Kou Н., Pan Y., Guo J. Morphologies of А12Оз shell prepared from Al/A100HnH20 core-shell particles // Ceramic. International. 2007. V. 33. N. 2. P. 305-308.

142. Mischler C., Horbach J., Kob W. Water adsorption on amorphous silica surfaces: A Car-Parrinello simulation study // J. Phys. Condens. Matter. 2005. V. 17. N. 26. P. 4005-4013.

143. Дункен X., Лыгин В. Квантовая химия адсорбции на поверхности твердых тел. М.: Мир, 1980. 288 с.

144. Gelo-Pujic М., Desmurs J.-R., Delaire S., et. al. Synthesis of new antioxidant conjugates and their in vitro hydrolysis with Stratum corneum enzymes // Int. J. Cosmet. Sci. 2008. V. 30. N. 3. P. 195-204.

145. Китаева Т.А., Бородина E.B., Сафонова Е.Ф., Селеменев В.Ф. Оптимизация условий определения витамина D2 методом хроматографии в тонких слоях // Сорбционные и хроматографические процессы. 2008. Т. 8. Вып. 3. С. 521-524.

146. Березкин В.Г. Новый подход к определению величин относительного удерживания в ТСЖХ // Журн. аналит. химии. 2007. Т. 62. № 4. С. 435439.

147. Глущенко М.Н., Плетнева Т.В. Фармацевтическая химия. М.: Изд. Академия, 2004. 384 с.

148. Сергеев Г.Б. Нанохимия М.: МГУ, 2003. 288 с.

149. Энгельгардт X. Жидкостная хроматография при высоком давлении М.: Мир, 1980. 246 с.

150. Hahn-Deinstrop Е. Applied Thin-Layer Chromatograhy: Best practice and Avoidence of mistakes. Ney York, 2000. 304 P.

151. Yilmaz N., Mizukami M., Kurihara K. Macroclusters of phenol adsorbed on silica in cyclohexane induced by surface silanol groups // Polymer Preprints. 2006. V. 55. N. 2. P. 443-447.

152. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биологии / Под ред. А. М. Хеншен: Мир, 1988. 688 с.

153. Препаративная жидкостная хроматография / Под ред. Б. Биндлингмейера М.: Мир, 1990. 360 с.

154. Запрометов М.Н. Биохимия катехинов. М.: Наука, 1964. 294 с.

155. Золотов Ю.А. Аналитическая химия и химический анализ //Успехи химии. 2006. Т. 75. № 4 .С. 299-301.

156. Saeed M., Rogan E., Cavalieri E. Novel spiro-quinone formation from 3-hydroxydiethylstilbestrol after oxidation with silver oxide // Tetrahedron Lett. 2005. V. 46. N 26. P. 4449-4451.'

157. Learmonth David A. A novel, convenient synthesis of the 3-O-D and 4-0-D-glucopyranosides of trans-resveratrol // Synth. Commun. 2004. V. 34. N. 9. P. 1565-1575.

158. Зенкевич И.Г., Кочетова M.B., Ларионов О.Г., Ревина А.А. Индексы удерживания как наиболее воспроизводимый параметр удерживания хроматографии фенольных соединений в ОФ ВЭЖХ // Журн. аналит. химии АХ. 2005. Т. 60. №7. С. 734-746.

159. Chu В. S., Baharin В. S., Man Y. B.C., Quek S. Y. Comparison of selected adsorbents for adsorption and desorption of vitamin E from palm fatty acid distillate // J. of Food Lipids. 2005. V. 12. N. 1. P. 23-33.

160. Brinker A.M., Seigler D.S. Isolation and identification of piceatannol as a phytoalexin from sugar cane // Phytochem. 1991. V. 30. P. 3229-3232.

161. Durbeeij В., Eriksson A.L. Fotodegradation of substituted stilbene compound: what colors aging paper yellow? // J. Phys. Chem. A. 2005. V. 109. P. 5677-5682.

162. Mohammad A., Sirwal Y. H. A New Anionic Micellar Mobile Phase System for the Normal-Phase thin-layer chromatography of amino compounds: Simultaneous separation of aminophenol isomers // J. Anal. Chem. 2003.V. 58. N. 8. P. 731-739.

163. Кулеш Н. И., Веселова М. В., Федореев С. А., Денисенко В. А. Полифенолы из стеблей Vitis amurensis // Химия природ, соед. 2006. Т. 2. С. 194-195.

164. Венгеровский А.И., Головина Е.Л., Чучалин B.C., Саратиков Л.С. Влияние энтеросорбентов на терапевтические эффекты гепатопротектора Максара при экспериментальном токсическом гепатите //Хим.-фармац. журн. 2000. Т. 34. Вып. 5. С. 9-11.

165. Goyne К. W., Chorover J., Kubicki J.D., Zimmerman A. R., Brantley S. L. Sorption of the antibiotic ofloxacin to mesoporous and nonporous alumina and silica//J. Colloid Inter. Sci. 2005. V. 283. N. 1. P. 160-170.

166. Саратиков A.C., Венгеровский А.И., Мозжелин M.E., Суходоло И.В. Защитное действие максара при экспериментальном остром панкреатите // Хим.-фармац. ж. 2001. Т. 35. Вып. 12. С. 6-7.

167. Bavaresco L., Fregoni М., Trevisan М., et. al. The occurrence of the stilbene piceatannol in grapes Vitis. II J. Anal. Chem. V. 41. N. 3. C. 123136.

168. Саратиков A.C., Лившиц H.C., Бурченкова Ф.И., и др. Доклиническое изучение безопасности Максара // Эксперим. и клин, фармакол. 2003. Т. 66. № 6. 53-55.

169. Garcia I., Sarabia L., Cruz O.M. Building robust calibration models for the analysis of estrogens by gas chromatography with mass spectrometry detection //Anal. chim. acta. 2004. V. 526. N. 2. P. 139-146.

170. Liazid A., Palma M., Brigui J. Investigation on phenolic compounds stability during microwave-assisted extractioin // J. Chromatogr. A. 2007. V. 1140. N. l.P. 29-34.

171. Nakanishi I., Shimada T., Ohkubo K., et. al. Involvement of electron transfer in the radical-scavenging reaction of resveratrol // Chem. Lett. 2007. V. 36. N. 10. P. 1276-1277.

172. Stojanovic S., Brede O. Elementary reactions of the antioxidant action of trans-stilbene derivatives: resveratrol, pinosylvin and 4-hydroxystilbene // Phys. Chem. 2002. V. 4. N. 5. P. 757-764

173. Pearce V., Nawaz Z. Xiao W., et. al. 4-Ethoxymethylphenol: A novel phytoestrogen that acts as an agonist for human estrogen receptors // J. Steroid Biochem. Molec. Biology. 2003. V. 84. N. 4. P. 431-439.

174. Ekeberg D., Flaete P.O., Eikenes M., et. al. Qualitative and quantitative determination of extractives in heartwood of Scots pine (Pinussylvestris L.) by gas chromatography // J. Chromatogr. A. 2006. V. 1109. N. 2. P. 267272.

175. Nomenclature for Chromatography // Pure and Appl. Chem. 1993. V. 65. N. 4. P. 819-872.