автореферат диссертации по приборостроению, метрологии и информационно-измерительным приборам и системам, 05.11.11, диссертация на тему:Высокоэффективная жидкостная хроматография ряда фенольных и полифенольных соединений

Введение

Глава 1. Литературный обзор

1.1. Общая характеристика соединений фенольной и полифенольной природы

1.1.1. Понятие «антиоксидант», принципы действия

1.1.2. Соотношение химическая структура - антиоксидантная активность (АА) соединений фенольной и полифенольной природы

1.2. Определение соединений фенольной и полифенольной природы методом ВЭЖХ

1.2.1.Неподвижные фазы для разделения соединений фенольной и полифенольной природы

1.2.2.Подвижные фазы для разделения соединений фенольной и полифенольной природы

1.3. Способы детектирования соединений фенольной и полифенольной природы

1.4. Идентификация фенольных соединений с использованием индексов удерживания в высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)

1.5. Определение соединений фенольной и полифенольной природы в различных объектах

1.5.1. Подготовка пробы к анализу

1.5.2. Примеры определения соединений фенольной и полифенольной природы в различных объектах

Экспериментальная часть

Глава 2. Исходные вещества, приборы, методики экспериментов

2.1. Растворы, реагенты, объекты исследования

2.2. Приборы и хроматографические системы

2.3. Методики экспериментов

Глава 3. Выбор оптимальных условий хроматографического разделения, детектирования и идентификации и создание базы данных ряда соединений фенольной и полифенольной природы

3.1. Выбор условий хроматографического разделения и детектирования

3.2. Расчет хроматографических индексов удерживания (ИУ)

3.3. Создание базы данных ряда соединений фенольной и полифенольной природы

Глава 4. Исследование методом ВЭЖХ фенольного и полифенольного состава экстрактов хмеля

Глава 5. Хроматографическое исследование продуктов окисления физиологически активного соединения фенольной природы — 5 -метилрезорцина

Выводы

Актуальность темы. За последние годы во всем мире резко возросло количество публикаций, посвященных исследованию природных и синтезированных антиоксидантов методом ВЭЖХ. В частности, внимание ученых привлечено к изучению антиоксидантной активности соединений фенольной и полифенольной природы. Ухудшение экологической обстановки и увеличение числа стрессовых ситуаций в современном мире приводят к дисбалансу и снижению защитных сил организма человека. Это, в свою очередь, повышает риск сердечно-сосудистых заболеваний, провоцирует развитие различных воспалительных процессов, атеросклероза и других патологических состояний. Поэтому важной научной и практической задачей для сохранения здоровья человека является изучение j активных форм и механизмов действия in vitro и in vivo природных и синтезированных антиоксидантов.

Фенольные и полифенольные соединения обладают широким спектром биологической активности: антиоксидантной, антирадикальной, противовирусной, противовоспалительной, антибактерицидной, антиканцерогенной, капилляроукрепляющей, гепапротекторной и др. Это обуславливает их применение в медицине, фармакологии, биохимии, пищевой промышленности. Несмотря на широкое использование полифенольных соединений в качестве антиоксидантов, все еще остаются не до конца выясненными их активные формы и механизмы действия in vitro и in vivo, что связано со сложностью их определения. Затруднение, возникающее при хроматографическом анализе этих соединений, вызвано недостатком необходимых стандартов для их идентификации вследствие существования большого количества природных производных этих соединений и многообразия их окисленных форм. Поэтому при анализе природных объектов, содержащих полифенольные соединения, актуальной проблемой является разработка способов идентификации этих соединений.

В хроматографии идентификацию компонентов в сложных объектах обычно проводят сравнением времен удерживания и спектральных характеристик исследуемых компонентов с соответствующими хроматографическими параметрами стандартов. Известно, что, как и в газовой хроматографии, в высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) при изократическом режиме элюирования возможно идентифицировать соединения путем сравнения их индексов удерживания (ИУ) относительно шкалы индексов удерживания соединений - гомологов, выбранных в качестве стандартов. Однако поскольку экстракты природных объектов в основном содержат соединения в широком диапазоне полярностей, то для их успешного хроматографического разделения используют градиентный режим элюирования. Известно, что одним из наиболее эффективных для идентификации соединений хроматографических методов является ГХ - МС. Однако этот метод не может быть использован для исследования смесей фенольных и полифенольных соединений из-за лабильности этих соединений.

Актуальным является увеличение достоверности идентификации полифенольных соединений в сложных смесях при анализе их в градиентном режиме обращенно-фазового варианта метода ВЭЖХ (ОФ-ВЭЖХ) путем сравнения их спектральных данных и индексов удерживания с соответствующими хроматографическими характеристиками стандартов. Решение этой задачи возможно при условии осуществления расчетов ИУ в градиентном режиме, выборе оптимальных условий хроматографического анализа и составления в оптимальных условиях базы данных ряда фенольных и полифенольных соединений для дальнейшего ее использования при идентификации соединений в природных объектах.

Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы являлась разработка метода исследования фенольных и полифенольных соединений и способа их идентификации, включая индексы удерживания и спектральные характеристики, при определении в сложных смесях в градиентном режиме ОФ-ВЭЖХ.

Для достижения намеченной цели необходимо было решить следующие задачи:

- выбрать оптимальные условия разделения и детектирования фенольных и полифенольных соединений в сложных смесях;

- выбрать ряд соединений-гомологов, пригодных в качестве стандартной шкалы индексов удерживания (ИУ) в жидкостной хроматографии, и исследовать возможность применения данной шкалы соединений и разработанного соответствующего программного обеспечения для расчета ИУ фенольных соединений, исследуемых в градиентном режиме элюирования методом ОФ -ВЭЖХ; в подобранных оптимальных условиях разделения и детектирования получить хроматографические характеристики ряда фенольных и полифенольных соединений и создать соответствующую базу данных этих соединений;

- с использованием полученной базы данных анализировать сложные смеси полифенольных соединений, включая экстракты различных сортов хмеля и продукты окисления физиологически активного соединения фенольной природы - 5-метилрезорцина.

Научная новизна; выбраны оптимальные условия хроматографического разделения и детектирования сложных смесей, содержащих полифенольные соединения широкого диапазона полярностей;

- исследована возможность использования алкиларилкетонов в качестве соединений-гомологов для стандартной шкалы индексов удерживания и применения разработанного программного обеспечения для расчета ИУ соединений, исследуемых в градиентном режиме анализа методом ОФ - ВЭЖХ;

- измерены хроматографические параметры 42 фенольных и полифенольных соединений и на их основе составлена база данных, включающая структурные формулы, времена, индексы удерживания и спектральные характеристики соответствующих соединений;

- предложен способ идентификации сложных смесей соединений фенольной и полифенольной природы с использованием их индексов удерживания и спектральных характеристик;

- исследованы экстракты различных сортов хмеля; показано, что наибольшее число фенольных соединений и максимальную устойчивость при хранении имеет экстракт, полученный из прессованных шишек; проведено хроматографическое исследование продуктов смоделированной реакции радиационного окисления физиологически активного соединения - 5-метилрезорцина;

- установлено, что в водных растворах алкилрезорцинов действием ионизирующего излучения инициируются сложные окислительно-восстановительные процессы, продолжающиеся в пострадиационный период и приводящие к образованию разнообразного набора конечных продуктов как в результате деструкции, так и агрегации промежуточных продуктов окисления.

Практическая значимость:

- предложен метод определения качественного состава сложных смесей, содержащих соединения фенольной и полифенольной природы, основанный на использовании их индексов, времен удерживания и спектральных характеристик;

- создана база данных, включающая хроматографические и спектральные характеристики 42 фенольных и полифенольных соединений;

- проведен хроматографический анализ экстрактов хмеля широко используемых в настоящее время в российском производстве пива сортов: немецкий Spalter Select, польский Lublin и чувашские Подвязный и Ранний. Показано, что чувашский сорт Ранний по своему полифенольному составу практически не уступает считающемуся одному из лучших в мире немецкому сорту хмеля Spalter Select. Исследовано влияние первичной обработки шишек хмеля на полифенольный состав экстрактов и их устойчивость при хранении. Показано, что наибольшее число фенольных соединений и максимальную устойчивость при хранении имеет экстракт, полученный из прессованных и подвергнутых серной обработке шишек. Полученные данные могут быть использованы в дальнейшем в технологии промышленного производства; установлено образование физиологически активных полифенольных продуктов окисления в водном растворе 5-метилрезорцина.

На защиту выносятся следующие положения:

- выбор оптимальных условий разделения и детектирования и создание базы данных, включающей хроматографические характеристики 42 соединений фенольной и полифенольной природы;

- использование алкиларилкетонов в качестве стандартной шкалы гомологов для расчета индексов удерживания фенольных соединений, исследуемых в градиентном режиме анализа методом ОФ - ВЭЖХ;

- способ идентификации сложных смесей фенольных и полифенольных соединений с использованием их индексов удерживания и спектральных характеристик;

- изучение методом ОФ - ВЭЖХ экстрактов различных сортов хмеля и продуктов окисления физиологически активного соединения - 5-метилрезорцина.

Апробация работы и публикации. Основные результаты диссертации изложены в 17 публикациях и доложены на научно-технической конференции «Молодые ученые - пищевым и перерабатывающим отраслям АПК (технологические аспекты производства)» (Москва, 13 - 14 декабря 2000 г.); на VI, VII конференциях молодых ученых «Некоторые проблемы физической химии» (Москва, 18-20 февраля 2001 - 2002 гг.); на международной конференции молодых ученых «От фундаментальной науки - к новым технологиям» (Москва - Тверь, 25 - 28 сентября 2001 г.); на VIII Всероссийском симпозиуме по молекулярной жидкостной хроматографии и капиллярному электрофорезу (Москва, 15 - 19 октября 2001 г.); на I Всероссийской конференции «Прикладные аспекты химии высоких энергий» (Москва, 30 октября - 2 ноября 2001 г.); на Всероссийском симпозиуме «Современные проблемы хроматографии» (Москва, 18-22 марта 2002 г.); на 3rd Intern. Conference on Protein Stabilization «Biocatalyst stability - different levels of observation» (Тулуза, Франция, 21-24 апреля 2002 г.); на 7th Intern. Symposium «Metal ions in Biology and Medicine» (Санкт-Петербург, 5 -9 мая 2002 г.); на "100 years of chromatography" 3rd Intern. Symposium on Separations in BioSciencies SBS 2003 (Москва, 13-18 мая 2003 г.), на XVII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии «Достижения и перспективы химической науки» (Казань, 21 - 26 сентября 2003 г.), на Всероссийской научно-технической конференции - выставке «Высокоэффективные пищевые технологии и технические средства для их реализации» (Москва, 21-22 октября 2003 г.).

Основные результаты диссертации изложены в следующих публикациях:

1. Кочетова М.В., Ревина A.A., Ларионов О.Г. Относительные индексы удерживания в ВЭЖХ некоторых полифенольных веществ. // Сорбционные и хроматографические процессы. 2003. T.3.N.I. С.12-18.

2. Горячева Н.Г., Кочетова М.В., Шаненко Е.Ф., Ревина A.A., Ларионов О.Г. Исследование фенольных соединений экстракта хмеля с помощью спектрофотометрического метода и ВЭЖХ. // Пиво и жизнь. 2003. Т.37. N.2. С.27-34.

3. Ревина A.A., Ларионов О.Г., Кочетова М.В., Луцик Т.К., Эль-Регистан Г.И. Спектрофотометрическое и хроматографическое исследование продуктов радиолиза аэрированных водных растворов алкилрезорцинов. // Известия РАН, сер. Химическая. 2003. в печати (ноябрьский номер).

4. Полунин К.Е., Кочетова М.В., Ларин A.B., Полунина И.А. Удерживание /иранс-резвератрола в прямофазной хроматографии в зависимости от содержания полярных растворителей. // Сорбционные и хроматографические процессы. 2002 Т.2 N.4 С.406-410.

5. Горячева Н.Г., Ревина A.A., Шаненко Е.Ф., Кочетова М.В., Ларионов О.Г. Идентификация и изучение свойств флавонол-гликозидов, выделенных из хмеля «Magnum», «Подвязный». //

Тезисы научно-технической конференции «Молодые ученые -пищевым и перерабатывающим отраслям АПК (технологические аспекты производства)». Москва. 13 - 14 декабря 2000. С.69-71.

6. Кочетова М.В. Хроматографическое и спектроскопическое исследование флавоноидов хмеля. // Сборник статей «Некоторые проблемы физической химии». / Под ред. Чалых А.Е. М.: ИФХ РАН. 2001. С.40-44.

7. Кочетова М.В., Ларионов О.Г. Исследование природы и антиоксидантной активности флавоноидов хмеля. // Тезисы Международной конференции молодых ученых «От фундаментальной науки - к новым технологиям». Москва - Тверь. 25 - 28 сентября 2001. С.55.

8. Кочетова М.В., Ларионов О.Г., Горячева Н.Г., Ревина A.A. Исследование природы и антиоксидантной активности флавоноидов хмеля. // Тезисы VIII Всероссийского симпозиума по молекулярной жидкостной хроматографии и капиллярному электрофорезу. Москва. 15-19 октября 2001. С.4В.

9. Кочетова М.В., Ларионов О.Г., Ревина A.A., Луцик Т.К. Хроматографический анализ продуктов радиолиза алкилоксибензолов. // Тезисы I Всероссийской конференции «Прикладные аспекты химии высоких энергий». Москва. 30 октября - 2 ноября 2001. С.28-29.

10. Кочетова М.В., Ревина A.A., Ларионов О.Г. Использование относительных индексов удерживания в ВЭЖХ для идентификации веществ в многокомпонентных природных системах. // Тезисы Всероссийского симпозиума «Современные проблемы хроматографии». Москва. 18-22 марта 2002. С.131.

11. Кочетова М.В., Полунин К.Е., Татаурова О.Г., Ларин A.B. Удерживание транс-резвератрола в прямофазной хроматографии в зависимости от содержания полярных растворителей. // Тезисы Всероссийского симпозиума «Современные проблемы хроматографии». Москва. 18-22 марта 2002. С. 103.

12. Revina A.A., Kochetova M.V., Larionov O.G., Lutsik Т.К., Karpekina T.A., Mulyukin A.L., Boudrant J., El-Registan G.I. Study of alkylhydroxybenzene oxidation products. // Abstr. 3rd Intern. Conference on Protein Stabilization «Biocatalyst stability - different levels of observation». Тулуза. Франция. 21-24 апреля 2002. Р.39.

13. Revina A.A., Stepanenko I. Yu., Kochetova M.V., Larionov O.G., Lutsik Т.К., Karpekina T.A., Boudrant J., El-Registan G.I. Radioprotection of trypsin by alkylhydroxybenzenes. // Abstr. 3rd Intern. Conference on Protein Stabilization «Biocatalyst stability -different levels of observation». Тулуза. Франция. 21-24 апреля 2002. Р.68.

14. Kochetova M.V., Revina A.A., Tataurova O.G., Lutsik Т.К., Haylova E.B., Larionov O.G. Interaction of metal ions and nanoparticles of silver with different biological active flavonoids. // Metal ions in Biology and Medicine. / Ed. by Khassanova L., Collery P., Maymard I., Khassanova Z., Etienne J.-C. Avril 2002. V.7. P.82.

15. Revina A.A., Kochetova M.V., Larionov O.G., Tataurova O.G. The radiation-chemical contribution to the study of oxidation of natural biological active substances by HPLC. // Abstr. "100 years of chromatography" 3rd Intern. Symposium on Separations in BioSciencies - SBS 2003. Москва. 13 - 18 мая 2003. P.97.

16. Ревина A.A., Ларионов О.Г., Кочетова М.В., Зимина Г.М., Эль-Регистан Г.И. Ралиационно - инициированное окисление дигидрокситолуола в водных растворах. // Тезисы XVII Менделеевского съезда по общей и прикладной химии

Достижения и перспективы химической науки». Казань. 21-26 сентября 2003. С.207.

17. Горячева Н.Г., Шаненко Е.Ф., Ревина A.A., Кочетова М.В., Ларионов О.Г. Влияние активной кислотности экстрагента на состав хмелевых экстрактов. // Сб. науч. тр. Всероссийской научно-технической конференции-выставки «Высокоэффективные пищевые технологии и технические средства для их реализации». М.: МГУПП. 21 - 22 октября 2003. С. 110-114.

1. Выбраны оптимальные условия хроматографического разделения в градиентном режиме ОФ-ВЭЖХ, детектирования и идентификации ряда фенольных и полифенольных соединений в сложных смесях.2. С использованием гомологов - алкиларилкетонов создана стандартная шкала для расчетов индексов удерживания фенольных соединений, изучаемых в выбранном градиентном режиме анализа методом ОФ - ВЭЖХ; составлена база данных, включающая хроматографические параметры - индексы удерживания и спектральные характеристики - 42 соединений фенольной и полифенольной природы.3. Предложен метод идентификации сложных смесей соединений фенольной и полифенольной природы на основе созданной базы данных с использованием их индексов удерживания и спектральных характеристик.4. Проведено хроматографическое исследование экстрактов разных сортов хмеля и определен ряд содержащихся в них фенольных соединений.5. При сравнении экстрактов разных сортов хмеля обнаружено, что наибольшее число фенольных соединений содержат водно -

спиртовые экстракты хмеля немецкого Spalter Select и чувашского сорта Ранний.6. Показано, что для всех сортов хмеля максимальную устойчивость при хранении проявляют экстракты, полученные из прессованных шишек хмеля;

7. Методом ОФ-ВЭЖХ изучены продукты радиационного окисления физиологически активного соединения - 5- метилрезорцина. Показано, что в пострадиационный период в водных растворах алкилрезорцинов происходит образование разнообразных конечных продуктов как в результате деструкции, так и агрегации физиологически активных промежуточных продуктов окисления.

1. Morrisey P.А., O'Brien К.М. Dietary antioxidants in Health and Disease. // Int. Dairy Journal. 1998. V.8. P.463-472.

2. Alanko J., Ruitta A., Holm P., Mucha I., Metsa-Ketela T. Modulation of arachidonic acid metabolism by phenols: relation to their structure and antioxidant/prooxidant properties. // Free Rad. Biology & Medicine. 1999. V.26. N.1/2. P.193-201.

3. Deng W., Fang X., Wu J. Flavonoids function as antioxidants: by scavenging reactive oxygen species or by chelating iron? // Radiat. Phys. Chem. 1997. V.50. N.3. P.271-276.

4. Saija A., Scalese M., Lanza M., Marzullo D., Ronina F., Castelh F. Flavonoids as antioxidant agents: importance of their interaction with biomembranes. // Free Rad. Biology & Medicine. 1995. V.19. N.4. P.481-486.

5. Guo Q., Zhao В., Li M., Shen S., Xin W. Studies on protective mechanisms of four components of green tea polyphenols against lipid peroxidation in synaptosomes. // Biochimica et Biophysica Acta (BBA). 1996. V.1304. P.210-222.

6. Jodoin J., Demeule M., Beliveau R. Inhibition of the multidrug resistance P-glycoprotein activity by green tea polyphenols. // Biochimica et Biophysica Acta (BBA). 2002. V.1542. N.1-3. P. 149-159.

7. Tomasbarberan F.A., Blazquez F.F.M.A., Garciaviguera C , Tomaslorente F. High-performance liquid-chromatography of honey flavonoids. // J. Chromatogr. 1993. V.634. N.l . P.41-46.

8. Семенов A.A. Очерк химии природных соединений. Новосибирск: Наука. Сибирская издательская фирма РАН. 2000. 664 с.

9. Муравьева Д.А. Фармакогнозия (с основами биохимии лекарственных растений). // Москва: Медицина. 1978. 530-628.

10. Antolovich М., Prenzler P.D., McDonald E., Robards K. Methods for testing antioxidant activity. // Analyst. 2002. V.127. P. 183-198.

11. Артюхов В.Г., Наквасина M.A. Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами. Воронеж: Издат-во Воронежского университета. 2000. 294 с.

12. Rice-Evans С,А,, Miller N.J., Paganda G. Structure-antioxidant activity relationships of flavonoids and phenolic acids. // Free Radical Biology & Medicine. 1996. V.20. N.7. P.933-956.

13. Nakai S., Inoue Y., Hosomi M. Algal growth inhibition effects and inducement modes by plant-producing phenols. // Wat. Res. 2001. V.35. N7. P.1855-1859.

14. Brown J.E., Knodr H., Hider R.C., Rice-Evans C.A. Structural dependence of flavonoid interactions with Cu ions: implications fot their antioxidant properties. // Biochem. J. 1998. V.330 P.l 173-1178.

15. Matito C , Mastorakou F., Centelles J.J., Torres J.L., Cascante M. Antiproliferative effect of antioxidant polyphenols from grape in murine Hepa- lclc7. // Eur. J. Nutr. 2003. V.42. P.43-49.

16. Marinova E.M., Yanishlieva N.V., Totseva LR. Anti-oxidant activity and mechanism of action of trans-resveratrol in different lipid systems. // Int. J. Food Science and Technology. 2002. V.37. P. 145-152.

17. Belguendouz L., Fremont L., Linard A. Resveratrol inhibits metal ion-dependent and independent peroxidation of porcine low-density lipoproteins. // Biochem. Pharmac. 1997. V.53 P. 1347-1355.

18. Areias F.M., Rego A.C., Oliveira C.R., Scabra R.M. Antioxidant effect of flavonoids after ascorbate/Fe^^-induced oxidative stress in cultured retinal cells. // Biochem. Pharmac. 2001. V.62. P.l 11-118.

19. Peng Z.F., Strack D., Baument A., Subramaniam R., Goh N.K., Chia T.F., Tan S.N., Chia L.S. Antioxidant flavonoids from leaves of Polygonum hydropiper L, {Laksa leaves). II Phytochemistry. 2003. V.62. N.2. P.219-228.

20. Halliwell B. Antioxidant characterisation methodology and mechanism. // Biochem. Pharm. 1995. V.49. N.IO. P.1341-1348.

21. Day A.J., Bao Y., Morgan M.R.A., WiUiamson G. Conjugation position of quercetin glucuronides and effect on biological activity // Free Radical Biology & Medicine. 2000. V.29. N.12. P.1234-1243.

22. Sergediene E., Jonsson K., Szymusiak H., Tyrakowska В., Rietjens I., Cenas N. Prooxidant toxicity of polyphenolic antioxidants to HL-60 cells: description of quantitative structure-activity relationships. // FEBS Letters. 1999. V.462. P.392-396.

23. Metodiewa D., Jaiswal A.K., Cenas N., Dickancaite E., Segura- Aguilar J. Quercetin may act as a cytotoxic prooxidant after its metabolic activation to semiquinone and quinoidal product. // Free Radical Biology & Medicine. 1999. V.26. N.'/2. P.107-116.

24. Хроматография. Практическое приложение метода. / Под ред. Хефтмана Э., М.: Мир. 1986. Т.2. 422 с.

25. Шатц В.Д., Сахартова О.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография. Рига: Зинатне. 1988. 390 с.

26. Crosier А., Jensen Е., Lean M.E.J., McDonald M.S. Quantitative analysis of flavonoids by reversed-phase high perfomance liquid chromatography. // J. Chromatogr. A. 1997. V.761. P.315-321.

27. Schieber A., Keller P., Carle R. Determination of phenolic acids and flavonoids of apple and pear by HPLC. // J. Chromatogr. A. 2001. V.910.P.265-273.

28. Hutabarat L.S., Greenfield H., Mulholland M.. Quantitative determination of isoflavones and coumesfrol in soybean by column LC. // J. Chromatogr. A. 2000. V.886. P.55-63.

29. Shui G., Leong L.P. Separation and determination of organic acids and phenolic compounds in finait juices and drinks by HPLC. // J. Chromatogr. A. 2002. V.977. N.l. P.89-96.

30. Chen L.-J., Games D.E., Jones J. Isolation and identification of four constituents from the seeds of Oroxylum indicum by high-speed counter-current chromatography. // J. Chromatogr. A. 2003. V.988. N.l. P.95-105.

31. Chen H., Zuo Y., Deng Y. Separation and determination of flavonoids and other phenolic compounds in cranberry juice by HPLC. // J. Chromatogr. A. 2001. V.913. P.387-395.

32. Palomino O.M., Gomez-Serranillos P., Carretero E., Villar A.. High-performance liquid chromatography of flavonoids from Sideritis species. /11. Chromatogr. A. 1996. V.731. P. 103-108.

33. Rohr G.E., Meier В., Sticher O. Quantitative RP-HPLC of procyanidins in Crataegus leaves and flowers. // J. Chromatogr. A. 1999. V.835.P.59-65.

34. Е8сафа A., Gonzalez M.C. Approach to the content of total extractable phenolic compounds from different food samples by comparison of chromatographic and spectrophotometric methods. // Anal. Chim. Acta. 2001. V.427. P.119-127.

35. Bednarek P., Franski R., Einhom L., Wojtaszek P., Stobieski M. Profiling changes in metabolism of isoflavonoids and their conjugates in 1.upinus albus treated with biotic elicitor. // Phytochemistry, 2001. V.56. N.l.P.77-85.

36. Lee B.-L., Ong C.-N. Comparative analysis of tea catechins and theaflavins by HPLC and capillary electrophoresis.// J. Chromatogr. A. 2000. V.881.P.439-447.

37. Tokusoglu O., Unal M.K. Optimized method for simultaneous determination of catechin, gallic acid and methylxanthine compounds in chocolate using RP-HPLC // Europ. Food Research and Technology. 2002. V.215.N.4.P.340-346.

38. Ortuno A., Reynaldo L, Fuster M.D., Botia J., Puig D.G., Porras L, 1.idon A.G., Sabater P., Del-Rio J.A. Citrus cultivars with high flavonoid contents in the fruits. // Scientia Horticulturae. 1997. V.68. P.231-236.

39. Tsanova-Savova S., Ribarova F. Free and conjugated myricetin, quercetin and kaempferol in Bulgarian red wines. // J. Food Composition and Analysis. 2002. V.15. N.6 . P.639-645.

40. Palomino O., Gomez-Serranillos M.P., Slowing K., Carretero E., Vilar A. Study of polyphenols in grape berries by RP-HPLC. // J. Chromatogr. A. 2000. V.870. P.449-451.

41. Julkunen-Tiitto R., Sorsa S. Testing the effects of drying methods on willow flavonoids, tannins and salicylates. // J. of Chem. Encology. 2001.V.27.N.4. P.779-789.

42. Rodriguez-Delgado M.A., Malovana S., Perez J.P., Borges Т., Motelongo F.J.G. Separation of phenolic compounds by HPLC with absorbance and fluorimetric detection. // J. Chromatogr. A. 2001. V.912. P.249-257.

43. Lores M., Garcia СМ., Cela R. High-performance Hquid chromatography of phenolic aldehydes with highly selective fluorimetric detection by means of postcolumn photochemical derivatization. // J. Chrom. A. 1994. V.683. P.31-44.

44. Andlauer W., Martena M.J., Furst P. Determination of selected phytochemicals by RP-HPLC combined with UV and MS detection. // J. Chromatogr. A. 1999. V.849. P.341-348.

45. Ogawa A., Arai H., Tanizawa H., Miyahara Т., Toyo'oka T. Online screening method for antioxidants by LC with chemiluminescence detection. //Anal. Chim. Acta. 1999. V.383. N.3. P.221-230.

46. Justesen U. Negative atmospheric pressure chemical ionisation low-energy collision activation MS for the characterisation of flavonoids in extracts of fresh herbs. // J. Chromatogr. A. 2000. V.902. P.369-379.

47. Tarantilis P.A., Tsoupras G., Pollisiou M. Determination of saffron {Crocus sativus L.) components in crude plant extract using HPLC-UV-visible photodiode-array detection-mass spectrometry. // J. Chromatogr. A. 1995. V.699. P.107-118.

48. Careri M., Elviri L., Mangia A., Musci M. Spectrophotomefric and coulometric detection in the HPLC of flavonoids and optimisation of sample treatment for the determination of quercetin in orange juice, // J. Chromatogr. A. 2000. V.881. P.449-460.

49. He X.-G. On-line identification of phytochemical constituents in botanical extracts by combined HPLC-DAD-MS techniques. // J. Chromatogr. A. 2000. V.880. P.203-232.

50. Huck C.W., Huber C.G., Ongania K.-H., Bonn G.K. Isolation and characterization of methoxylated flavones in the flowers of Primula veris by LC-MS. // J. Chromatogr. A. 2000. V.870. P.453-462.

51. Ducrey В., Wolfender J.L., Marston A., Hostettmann K. Analysis of flavonol glycosides of thirteen Epilobium speacies (Onagraceae) by LC-UV and thermospray LC-MS. // Phytochemistry. 1995. V.38. N.l. P.129-137.

52. Baldy A., Rosen R.T., Fukuda E.K., Ho C-T. Identification of nonvolatile components in lemon peel by HPLC with confirmation by MS and DAD. // J. Chromatogr. A. 1995. V.718. P.89-97.

53. Perez-Magarino S., Revilla I., Gonzalez-SanJose M.L., Beltran S. Various applications of LC-MS to the analysis of phenolic compounds. // J. Chromatogr. A. 1999. V.847. P.75-81.

54. Zuo Y., Chen H., Deng Y. Simultaneous determination of catechins, caffeine and gallic acids in green. Oolong, black and pu-erh teas using HPLC with a photodiode array detection. // Talanta. 2002. V.57. N.2. P.307-316.

55. Weber В., Hoesch L., Rast D.M. Protocatechualdehyde and other phenols as cell wall components of grapevine leaves/ Phytochemistry. 1995.V.40.N.2. P.433-448.

56. Киселев A.B., Пошкус Д.П., Яшин Я.И. Молекулярные основы адсорбционной хроматографии. М.: Химия. 1986. 270с.

57. Не J., Xie В. Reversed-phase argentation HPLC in phytochemical analysis of ginkgolic acids in leaves from Ginkgo biloba L. // J. Chromatogr. A. 2002. V.943. N.2. P.303-309.

58. Pace M., Agnellini D., Gardana C, Mauri P.L., Pietta P.O. High- perfomance liquid chromatographic assay of glycosyltransferases using flavonoids as substrate. // J. Chromatogr. A. 1995. V.691. P.331-336.

59. Netzel M., Strass G., Bitsch L, Konitz R., Christmann M., Bitsch R. Effect of grape processing on selected antioxidant phenolics in red wine. // J. Food Engineering. 2003. V.56. N.2-3. P.223-228.

60. Cert A., Moreda W., Perez-Camino M.C. Chromatographic analysis of minor constituents in vegetable oils. // J. Chromatogr. A. 2000. V.881.P.131-148.

61. Chiavari G., Concialini V., Galletti G.C. Electrochemical detection in the high-performance liquid chromatographic analysis of plant phenolics. // Analyst. 1988. V.l 13. N.l . P.91-113.

62. Peyrat-Maillard M.N., Bonnely S., Berset С Determination of the antioxidant activity of phenolic compounds by coulometric detection. // Talanta. V.51. 2000. N.4. P.709-716.

63. Бражников В.В. Детекторы для хроматографии. М.: Машиностроение. 1992. 318 с,

64. Fiorini М. Preparative HPLC for the purification of natural anthocyanins. / /J . Chromatogr. A. 1995. V.692. P.213-219.

65. Senorans F.J., Ibanez E., Cavero S., Tabera J., Reglero G. Liquid chromatographic-mass spectrometric analysis of supercritical fluid extracts of rosemary plants. // J. Chromatogr. A. 2000. V.870. P.491-499.

66. Tsuda Т., Kato Y,, Osawa T. Mechanism for the peroxinitrite scavenging activity by anthocyanins. // FEBS Letters. 2000. V.484. P.207-210.

67. Ossipov v. , Nurmi K., Loponen J., Haukioja E., Pihlaja K. High- performance liquid chromatographic separation and identification of phenolic compounds from leaves of Betula pubescens and Betula pendula. II J. Chromatogr. A. 1996. V.721. P.59-68.

68. He X., Lian L., Bemart M.W. High-performance liquid chromatography-electrospray mass spectrometry in phytochemical analysis of sour orange {Citrus aurantium L.). II J. Chromatogr. A. 1997. V.791. P.127-134.

69. Stobiecki M. Application of MS for identification and structural studies of flavonoid glycosides. // Phytochemistry. 2000. V.54. N.3. P.237-256.

70. Ryan D., Robards K., Prenzler P., Antolovich M. Applications of mass spectrometry to plant phenols. // Trends in Analitical Chemistry. 1999. V.18.N.5. P.362-372.

71. Brolis M., Gabetta В., Fuzzati N., Pace R., Panzeri F., Peterlongo F. Identification by HPLC-DAD-MS and quantification by HPLC-UV absorbance detection of active constituents of Hypericum perforatum. II J. Chromatigr. A. 1998. V.825. P.9-16.

72. Stevens J.F., Ivancic M., Hsu V.L., Deinzer M.L. Prenylflavonoids fromHumulus lupulus. //Phytochemistry. 1997. V.44N.8. P.1575-1585.

73. Smith R.M. Alkylarylketones as a retention index scale in liquid chromatography. // J. Chromatogr. 1982. V.236. P.313-320.

74. Smith R.M. Retention and selectivity in liquid chromatography // J. Chromatogr. Library. 1995. V.57. P.93-140.

75. Smith R.M. Retention and selectivity in liquid chromatography // J. Chromatogr. Library. 1995. V.57. 462p.

76. Smith R.M. Comparison of reversed-phase liquid chromatography columns using "Rohrschneider" type constants. // J. Chromatogr. 1982. V.236. P.321-328.

77. Smith. R.M. Characterization of reversed-phase high liquid chromatographic columns with reversed indexes of standards based on an alkyl aril ketones scale. // Anal. Chem. 1984. V.56. P.256-262.

78. Зенкевич И.Г., Косман В.М. Методы количественного хроматографического анализа лекарственных веществ: Пособие для фармацевтических работников. СПб.: СПХФА. 1999. 80 с.

79. Halang А, Langlais R., Kugler Е. Cubic spline 1п1ефо1а11оп for the calculation of retention indices in temperature-programmed gas-liquid chromatography. //Anal. Chem. 1978. V.50. P.1829-1832.

80. Зенкевич И.Г. Обобщенные индексы удерживания для газохроматографического анализа с линейным программированием температуры. // Журн. Анал. Хим. 1984. Т.39. N.7. 1297-1307.

81. Зенкевич И.Г. Особенности использования линейно- логарифмических индексов удерживания в обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. // Журн. Прикл. Хим. 1995. Т.68. N.8. 1321-1327.

82. Watts R.B., Kekwick R.G.O. А simple relationship between retention parameters in isotermal and programmed-temperature gas chromatography. // J. Chromatogr. 1974. V.88. P. 165-167.

83. Косман B.M., Зенкевич И.Г. Информационное обеспечение для идентификации фенольных соединений растительного происхождения в обращенно-фазовой ВЭЖХ. Флавоны, флавонолы, флаваноны и их гликозиды. // Растит, ресурсы. 1997. Т. 33. N.2. 14-26.

84. Зенкевич И.Г, Формирование базы данных по индексам удерживания лекарственных веществ в обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии, // Журн. Прикл. Хим. 1994. T.67.N.1 I . e . 1877-1882.

85. Fiorini М. Preparative HPLC for the purification of natural anthocyanins. // J. Chromatogr. A. 1995. V.692. P.213-219.

86. Shibusawa Y., Yanagida A., Ito A.,. Ichihashi K, Shindo H., Ito Y. High-speed counter-current chromatography of apple procyanidins. // J. Chromatogr. A. 2000. V.886. P.65-73.

87. Senorans F.J., Ibanez E., Cavero S., Tabera J., Reglero G. Liquid chromatographic-mass specfrometric analysis of supercritical fluid extracts of rosemary plants. // J. Chromatogr. A. 2000. V.870. P.491-499.

88. Palma M., Pineiro Z., Baroso C.G. Stability of phenoHc compounds during extraction with superheated solvents. // J. Chromatogr. 2001.A. V.921.P.69-174.

89. Swatsitang P., Tucker, G. Robards K., Jardine D. Isolation and identification of phenolic compounds in Citrus sinensis. II Anal. Chim. Acta. 2000. V.417. N.2. P.231-240.

90. Slimestad R., Marston A., Hostettmann K. Preparative separation of phenolic compounds from Picea abies by high-speed counter-current chromatography. // J. Chromatogr. A. 1996. V.719. P.438-443.

91. Czyzowska A., Pogorzelski E. Changes to polyphenols in the process of production must and wines from blackcurrants and cherries. // European Food Research and Technology. 2002. V.214. N.2. P.148-154.

92. Евсафа A., Gonzales M.C. HPLC-DAD for the determination of phenolic compounds in peel and pulp from different apple varieties. // J. Chromatogr. A. 1998. Y.823. P.331-337.

93. Bronner W.E., Beecher G.R. Extraction and measurement of prominent flavonoids in orange and grapefruit juice concentrates. // J. Chromatogr. A. 1995. V.705. P.247-256.

94. Katalinic V. High-performance liquid chromatographic determination of flavan fingerprints in plant extracts. // J, Chromatogr. A. 1997. V.775. P.359-367.

95. Markham K.R., Mitchell K.A., Wilkins A.L., Daldy J.A., Lu Y. HPLC and GC-MS identification of the major organic constituents in New Zealand propolis. // Phytochemistry. 1996. V.42 N. 1. P.205-211.

96. Bongartz D., Hesse A. Selective extraction of quercetrin in vegetable drugs and urine by off-line coupling of boronic asid affinity chromatography and HPLC. // J. Chromatogr. B. 1995. V.673. P.223-230.

97. Svedstrom U., Vuorela H., Kostiainen R., Huovinen K., Laakso I., Hiltunen R. High-performance liquid chromatographic determination of oligomeric procyanidins from dimers up to the hexamer in hawthorn. // J. Chrom. A. 2002. V.968. N.1-2. P.53-60.

98. Svedstrom U., Vuorela H., Kostiainen R., Tuominen J., Kokkonen J., Rauha J.-P., Laakso I., Hiltunen R. Isolation and identification of oligomeric procyanidins from Crataegus leaves and flowers. //Phytochemistry. 2002. V.60. N.8. P.821-825.

99. Arts I., Hollman P.C.H. Optimisation of a quantitative method for the determination of catechins in fruits and legumes. // J. Agr. And FoodChem. 1998. V.46. N.12. P.5156-5162.

100. Но Р.С., Saville D.J., Wanwimolruk S. Improved chromatographic method for the analysis of naringin in grapefruit juice without extraction. // Pharm. and Pharmacol. Commun. 1998. V.4. N.IO. p.473-476.

101. Liang Y., Lu J., Zhang L. Comparative study of cream in infusions of black tea and green tea {Camellia sinensis). II Int. J. Food Science & Technology. 2002. V.37. N.6. P.627-634.

102. Gupta S., Saha В., Giri A.K. Comparative antimutagenic and anticlastogenic effects of green tea and black tea: a review. // Mutation Research / Reviews in Mutation Research. 2002. V.512. N.l. P.37-65.

103. Shui G., Leong L.P. Separation and determination of organic acids and phenolic compounds in fruit juices and drinks by HPLC. // J. Chromatogr. A. 2002. V.977. N.l. P.89-96.

104. Полунин K.E., Шмальц Х.-Г. Ареновые комплексы хрома в синтезе транс-резвератрола. // Известия РАН. Сер.хим. 2002. N.7. 1219-1223.

105. Ляшенко И.Н. Фенольные соединения в различных органах хмеля. // Физиология и биохимия культурных растений. 1977. Т.9. N.3. 316-321.

106. Jarret R.D., Brynjolfsson А., Wong СР. National and International Standartisation of Radiation Dosimetry. IAEA. Vienna. 1978. 103 p.

107. Зенкевич И.Г., Косман В.М. Относительное поглощение при разных длинах волн - дополнительный УФ - спектральный параметр для идентификации органических соединений в обращенно-фазовой ВЭЖХ. //ЖАХ. 1996. Т.51. N.8. 870-874.

108. Зенкевич И.Г. Приватное сообщение.

109. Запрометов М.Н. Основы биохимии фенольных соединений. М.: Высшая школа. 1974. 272 с.

110. Годованный А.А., Ляшенко Н.И,, Рейман И.Г., Ежов И.С. Хмель и его использование. К.: Урожай. 1990. 336 с.

111. Калунянц К.А. Химия солода и пива. Москва ВО.: Агропромиздат. 1990. 176 с.

112. Stevens J.F., Taylor A.W., Deinser M.L. Quantitative analysis of xanthohumol and relatedprenylflavonoids in hops and beer by liquid chromatography - tandem mass spectrometry. // J. Chromatogr. A. 1999. V.832. P.97-107.

113. Stevens J.R., Miranda C.L., Buhler D.L., Deinzer M.L. Chemistry and biology of hop flavonoids. // J. Am. Soc. Brew. Chem. 1998. V.56.P.136-145.

114. Moir M. Hops - a millennium review. // J. Am. Soc. Brew. Chem. 2000. V.58. P.131-146.

115. Пикаев A.K. Современная радиационная химия. Радиолиз газов и жидкостей. М.: Наука. 1986. 440 с.

116. Ладыгин Б.Я., Ревина А. А., Ванников А. В. Об участии хинонов в окислении углеводородных радикалов. // Химия высоких энергий. 1985. Т. 19. 412-417.

117. Breitfellner F., Solar S., Sontag G. Effect of gamma irradiation on flavonoids in strawberries. // Eur. Food Res. Technol. 2002. V.215. N. 1. P.28-31.

118. Ладыгин Б.Я., Сараева В.В., Резина А.А., Зимина Г.М. Вклад радиационно-химических исследований в общую теорию жидкофазного окисления органических соединений. // Русский Химический Журнал. 1996. Т.40 N.6. 78-89.

119. Брусенцева А., Прибуш А.Г., Шубин В.Н., Долин П.И. Радиолиз водных растворов фенола. // Химия высоких энергий. 1971. Т.5. 83-84.

120. Подзорова Е.А., Рябченко В.И., Рябченко Н.И. Радиационное обеззараживание производственных сточных вод. // Химия и технология воды. 1992. Т. 14 N.1. 58-62.

121. Podzorova Е.А. New developments in radiation - chemical technology of sewage treatment. // Radiat. Phys. Chem. 1995. V.46. N.4-6. P.l 129-1132.

122. Kozubek А., Tyman J.H.P. Rezorcinol lipids, the natural non- isoprenoid phenolic amphiphiles and their biology activity. // Chem. Rev. 1999. V.99.P.1-25.

123. Колесников П.А., Зорэ СВ. Флавоны и пероксидазное окисление аскорбиновой кислоты. // Биохимия. 1962. Т.27. N.1. 48-54.

124. Фролов Ю.Л., Сапожков Ю.М., Барер С. Люминесценция флавоноидных соединений. // Известия АН СССР. сер. химич. 1974. Т.6. 2364-2367.

125. Strandjord A.J.G., Barbara P.P. Proton-transfer kinetics of 3- hydroxyflavone: solvent effects. // J. Phys. Chem. 1985. V.89. N . l l . P.2355-2361.

126. Ревина A. A. Полифункциональная радиопротекторная активность природных пигментов - флавоноидов. // Нетрадиционные природные ресурсы, инновационные технологии и продукты. / Сб. научн. трудов. Москва. 2003. Вып.9. 197-208.

127. Гродзинский Д.М., Гудков И.Н. Защита растений от лучевого поражения. М.: Атомиздат. 1973. 232 с.

128. Запрометов М.Н. Биохимия катехинов. М.: Наука. 1964. 295 с.

129. Лысиков В.Н.,. Луцик Т.К, Ревина А.А. Промежуточные продукты радиолиза антоциана как антимутагенный фактор. // Известия АН МССР, сер. биология, и химич. наук. Кишинев. 1986. Т.5. 29-33.

130. Slavinski J. Biophotonic and Coherent Systems. M.: Univ. Press. 2000.316 р.

131. Запрометов М.Н. Фенольные соединения: Распространение, метаболизм и функции в растениях. М.: Наука. 1993. 272 с.

132. Бах А.Н. Собрание трудов по химии и биохимии. / Под ред. Опарина А.И., Фрумкина А.Н., М.: Академия наук СССР, 1950. 314-320.

133. Кочетова М.В., Ларионов О.Г., Ревина А.А., Луцик Т.К. I Всероссийская конференция (с приглашением специалистов стран СНГ) «Прикладные аспекты химии высоких энергий» (Москва, 30 октября-2 ноября, 2001 г.). Тезисы. Москва. 2001. с. 28-29.