автореферат диссертации по машиностроению и машиноведению, 05.02.01, диссертация на тему:ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ЭРИТРОЦИТОВ АНТИГЕНОВ ЭРИТРОЦИТОВ И ГЛАВНОГО КОМПЛЕКСА ТКАНЕВОЙ СОВМЕСТИМОСТИ В РАЗВЕДЕНИИ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

РОССИЙСКАЯ АКАДЕВЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЙАУК (РАСХЮ

ВСКРОССКЙСККЯ НАУЧНО- ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ И5КГГКТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА (ВИИ)

Па правах рукописи

БУКАРОВ Пурмзгомэд Гадиикулиевнч

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ГОЛИУОРФКЗМА АНТИГЕНОВ ЭРИТРОЦИТОВ И ГЛАВНОГО КОМНЛЕКСА ТКАНЕВОЙ СОШЕСТИИОСТК В РАЗВЕДЕНИИ И С0ВЕРШЮТВ03АЕЙИ КРУПНОГО РОГАТОГО СЯОТА

05. Ü2. 01 - Разведение .селекция и воспроизводство сельскоковя йстве наш животных

Автореферат диссертации

на соискание ученой степени доктора био-когичэскиа наук

ДуСровшу - 1995

Работа выполнена я лаборатории генетического маркирования крупного рогатого скота., свиней и овец Всероссийского научно-исследовательского института животноводства

Научный консультант; , академик РАСХН, доктор сельскохозяйственных наук, , профессор Л. К. ЭРПСТ.

Официальные оппоненты:

член-корреспондент РАСХН, доктор сельскохозяйственных

наук, профессор А. П. СОДДАТОВ;

доктор сельскохозяйственных наук с. К. ОХАПКИН;

доктор биологических наук Г. Г. СКРМИИЧВДЮ.

Ведущее учреждение - Всероссийский научно-исследовательский институт тенетикк и разведения сельскохозяйственных животных.

Защита диссертации состоится " /^" 1995 г.

в 10 часов на заседании Специализированного Совета Й- 020.16.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес института ! 142018, Московская оОласть, Подольский район, пос. Дубровицы.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЖа.

Автореферат разослан " У " ¿¿■б&С^сЯ 1995 г.

Ученый секретарь

Специализированного Совета

кандидаг сельскохозяйственных наук И. Н. ИШАКОВ

- 2 - .

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. Систематическое изучение биологических маркеров отдельных животных, родственных групп, стад и пород позволило разработать и апробировать концепцию генетической индивидуальности организма и использования насдедетаенных особенностей животных при прогнозировании продуктивности, совершенствовании методов разведения и селекции крупного рогатого окота.

Эритроцитарные и лимфоцитарные маркеры, благодаря легкости их идентификации, простоте типа наследования и широкому наследственному разнообразию, являются доступными и перспективными для массового использования в племенном и товарном скотоводстве (П.Ф. Сороковой, ЕГ. Букаров, й К Чернушенко и др., 1982, А. Р. Слепченко и др. 1982; A.M. Кэшу ров, 1980; O.K. Смирнов и др. , 1981; Б. П. Павличенко. 1983; Э. К. Бороздин, С. К, Охапкин, 1983; Д. В. Карликов и др., 198?; М. Д. Дедов, H.A. Попов, 1991; В. К. Чернушенко 19S2; С. К. Охапкин 1990; Н. О. Сухова 1992; L. Andersson-Eklund, В. Daneil, J. Rendel,1990; К. Majala, 1966, 1989).

Генетическое маркирование - прогрессивная методология, позволяющая дополнить селекционные показатели информацией молеку-лярно-биохимического уровня.

Наши исследования являются составной частью программ совершенствования отечественного черно-пестрого, палево-пестрого и бурого скота, реализуемых совместно с учеными и специалистами Селекционного центра крупного рогатого скота ВИЖа с 1977 г.

Ряд вопросов, представляющих взаимный интерес, решался совместно со специалистами НИИЖ Монголии (1S78-85 гг. ).Чехословакии (1986-90 гг.) и ПОЛЬШИ (1985, 1988-90 гг.).

Работа выполнена в соответствии с научно-техническими программами' 0.СХ77. N ГОС. per. 76067186, 81103329 ; 0.51.25. Ц. N гос. per. 01870025367, КПНТП - N гос. per. 018780025368; договором РАСХН N 31/1.

1.2. Цель и задачи исследования. Целью данной работы явилось совершенствование технологии генетического маркирования, использование индивидуальной изменчивости в разведении и совершенствовании скота, повышение точности оценки племенных и продуктивных качеств.

Для достижения указанной цели были поставлены задачи:

ЦЕНТРАЛЬНАЯ 'V НдаЧНЯЯ bHû.hAJTËKA -Моск. а.'Ли^хШ .

- з -

1. Усовершенствовать существующую и разработать новую промышленную технологию получения реагентов для определения эритро-цитарньк маркеров.

2. Создать и воспроизвести информативный банк диагностику-мов из ВА наименований для типирования крупного рогатого скота по эритроцитарнш маркерам.

3. Разработать методы маркирования скота по антигенам главного комплекса тканевой совместимости (ВоЬА), включая антиген дифференвдровки пола. (Н-У-антиген).

4. Разработать методы оценки имцунореактивности и дифферен-цировки животных на типы по этому показателю.

5. Усовершенствовать технику постановки иммуногенетеческих тестов,генотипирования и экспертизы происхождения животных.

6. Разработать системную концепцию и принципы генетического мониторинга при разведении и совершенствовании скота (зоомаркер-шй анализ).

7. Разработать новые и усовершенствовать существующие методы использования генетических маркеров для оптимизации разведения и совершенствования скота в соответствии с целями селекции.

1.3. Научная новизна и практическая впачимость. Впервые в стране ' создан информативный банк из 84 реагентов, в т. ч. 15 новых, для определения эритроцит арных антигенов (ЕА-антигенов), открывающих 11 генетических систем. Разработка промышленной технологии изготовления реагентов для ЕА-типирования позволила осуществить их коммерческий выпуск на Армавирской биофабрике и способствовала внедрению метода в масштабах всей страны, в ближнем и дальнем зарубежье.

Впервые проведено типирование скота по 17 антигенам главного комплекса тканевой совместимости (ВоЦО. Во1Л-типирование использовано для контроля происхождения, маркирования, определения генетического сходства и расстояний между стадами. Впервые разработана технология Н-У маркирования пересаживаемых эмбрионов с целью регуляции пола потомства, предложены методы получения Н-У реагентов, микрометоды ЕА- и ВЫЛ-типирования. методы дифферен-цировки животных по уровню иммунного ответа, открыты ЕА-О** и ЕА-С" субдокусы.

Впервые проведено маркирование генофонда черно-пестрых, палево-пестрых и бурья пород скота с использованием информативного банка реагентов.

Впервые проведен системный анализ влияния точности иденти-

фикадии животных на селекционно-генетические параметры CIA, R, ha).

Усо вершенет вованы методы использования генетических маркеров при традиционном разведении окота , а также при пересадке эмбрионов.

Впервые сформулированы системная концепция , принципы генетического мониторинга и зоомаркерной селекции.

Опыт нашей работы в период 1977 по 1994 гг. показал, что использование генетических маркеров улучшило селекционно-племенную работу, ускорило достижение целей селекции. Метод маркирования внедрен в больших объемах при незначительных инвестициях.

Впервые ЕА-маркирован vie и мониторинг нами внедрен (1977-1986 гг.) в племенных хозяйствах московской области: в ГПЗ "Эаря коммунизма", "Константиново". ."Холмогорка", "Б. Алексеевеков", "Никоновское", "Петровское", "Первомайское", "Пгичное", на племзаводах колхозов "Ленинский луч", им. Ленина, им. Владимира Ильича, "Путь к коммунизму", на племфермах "Непецино"; "Фомине-кое", "ДуОровицы", колхоза им. Макарова, Шсковской селекционной Станции-и др. (акт внедрения от 23.12.1983 г.)

Полученные результаты внедрены в 30 хозяйствах Шсковской, а такие в 35 хозяйствах Смоленской, Тульской, ярославской. Костромской, Воронежской и др. областей Российской Федерации.

Исследования, проведенные нами, а также рядом других учреждений, позволили подготовить приказ N 211 ШХ 00CP от 11 июля 1979г. "О внедрении иммуногенетического контроля достоверности происхождения племенных сельскохозяйственных животных". Это способствовало улучшению племенного учета и селекционной работы. В стране была создана и функционирует сеть из 19 иммуногенетичес-ких лабораторий.

Если на начало внедрения метода по централизованным поставкам _ реагентов, изготовленных Армавирской биофабрикой (1SSO г.), в стране было аттестовано 68,7 тысяч голов племенного крупного рогатого скота, то в 1986 г. число аттестованных животных составило 146,4 тыс. голов. При этом поголовье недостоверных по происхождению животных снизилось с 24,ОХ до 20,6Х. Разработка методов выявления антигенов на пересаживаемых эмбрионах расширяет возможности селекции и совершенствует методы разведения. Становится возможным отбор по полу пересаживаемых эмбрионов (HY+ и HY-). Новизна этих, а также других исследований по маркированию животных, подтверждена авторскими свидетельствами (N 1405744,

N 170473?) и патентом РФ (N2001627), Внедрение микрометодов си-пирования животных позволило в 20 раз снизить расход реагентов, повысить эффективность исследований.

При непосредственном участии и методическом контроле автора на предприятиях Виопрома МСХ СССР Ç Армавирская ОиофаОрика) налажен промышленный выпуск реагентов для ЕД-типирования крупного рогатого скота С акты внедрения от 26.05.1981, 5. 06.1981, 20.09.1991).

На основе наших исследований были подготовлены технические условия (ТУ-46-21) выпуска наборов ЕА-реагентов. Изданы методические рекомендации по выведению линий черно-пестрого скота нового типа с использованием генетических маркеров.

1.4. Основные положения, выносимиые на защиту: технология создания информативного банка реагентов для ЕА- и BoLA-типирова-ния клеток крови и H-ï-тшшрования живых пересаживаемых эмбрионов, разработка метода определения иммунореактивности организма, методов генетического моиитерирования и оценки селекционной ситуации в популяциях, маркирование генофонда черно-пестрого, палево-пестрого и бурого скота, формирование структуры родственных групп и стад, совершенствование методов отбора и подбора, оценки быков-производителей с использованием маркерной информации. Изучение эффективности методов маркирования скота и их совершенствование.

1.5. Апробация подученных результатов. Материалы исследований доложены: на' ежегодных отчетах ВИЖ - 1977-1985 гг., 1991-1В94 гг.; Ученом Совете ВНИИРГЖ (1989); Совете Мзждунар. лвб. по биотехнологии в жив-ве (1987, 1988, 1990 гг., г. Нитра, ЧСФР); XVI Междунар. конф. по группам крови и б но к им. полиморфизму ( г. Ленинград, 1978); XÀX1II конф. ЕАД (г. Ленинград, 1982); Научно-методич. комиссиях ВАСХНИЛ по общим вопросам генетики и управления селекционным процессом (г.Москва, 1981, 1985); 4-ом съезде ВОГиС (г.Кишинев, 1981); V Всес. симп. "Молекулярные механизмы генетич. процессов" (г. Москва, 1983); Объединенном Совете ШШ МНР И ЪЮХ СССР (г.Улзн-Ватор. i 985); Симп. ло биологии воспроизводства (г.Нитра, ЧСФР, 1987); Семинарах "Актуальные вопросы асювет. науки" (г.Нитра, ЧСФР, 1987, 1989); Междунар. семинаре Агрофильм 88 (г.Нитра, ЧСФР, 1988); 17 заседании СЭВ по проблеме "Разработка основных проблем в области жив-ва, в т.ч.

по биотехнологии" {г. Нитра, ЧСФР. 1QB8); Научно-метол, конф. Еио-центра НИМ г. Нитра С1989); Семинаре по повышению квалиф. спец-тов жив-ва (Скадьски двор, Брно, ЧСФР, 1989); IV франко-че-хосл. конгрессе "От ооцита к эмбриону" (г.Прага, ЧСФР, 1990); Стп. но биологии репродукции ун-та им. Масарика (г.Брно, ЧСФР, 1991); Ыеждунар. симп. "Биотехнология а жив-ве" (г.Нитра, ЧСФР, 1931); на 15 генетических днях (г. Че шс кие-Будее вицы, ЧСФР,

1991), Бее рос. семинаре "Повышение эффективности использования горных земель" (п. Ахты, Дагестан, рф, 1991); Межотдельской конф. отделов БЮКа - селекции круп. рог. скота, биотехнологии и тех-нол, производства свинины (199?); 50 :сэнф. аспирантов и молодых ученых ВИКа (п. Дубровицы, 1992); Междунар. симп. по биотехнологии в жив-ве с участием специалистов ФРГ и США (п. Дубровицы,

1992); Научных чтениях, посвященных памяти акад. Б. К Шловано-ва, (п. Быково, 1993, 1994); 1 Ш жду нар. конф. по частной генетике с.-х. животных, Аскания-Вова (1993).

1.6. Публикация результатов исследований. Основные результаты исследований, выполненные по теме диссертации, опубликованы в 59 научных работах. Наиболее полно отражают содержание диссертации 24 работы, цитированные в автореферате.

1.7. ООъеи и структура работы. Диссертация изложена на 300 страницах машинописного текста, состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, предложений производству. Работа иллюстрирована 111 таблицами и 10 рисунками. Слисок литературы содержит 311 источников, в том числе 189 на иностранных языках.

2. Материалы и методы исследований. (Схема исследований, рис. 1). Исходные сыворотки для ЕА-типирования получали методом аллоиммунизации совместно с В. К. Чернушнко с 1977 по 1930 гг. в совхозе "Михейковский" Смоленской области. Донорские стада также были созданы в селекцентрах костромской (с-э "Чернопенский", к-э "Зйамя труда"), с ярославской пород (О.Х. "Михайловекое"). в О. X. "Дубровицы"- ЕИИ, Центральном аймаке Монголии и кооперативе "Новые Сады" (Словакия). Монос rie цнфиче с кие реагенты получали в 54 сериях. Проведено 4273 анализирующих и 24S7 заключительных абсорбций. Банк ЕА-реагентов был воспроизведен 3-кратно. Воспроизведенные а новые реагенты проверяли в международных сравнительных испытаниях 1978, 1979-80, 1983-64, 1991-93 гг. Для повышения титра и увеличения выхода антител при иммунизации реципиентов использовали иммуностимулятор "Нитра-1".

Ь Совершенствование существующих и разработка новых технология получения реагентов•

- 1 -

Создание и воспроизводство информативного банка ЕА-реагентов, 84 наим. 11 генетических

систем - 2 -

Разработка метода дифференцировки животных по уровню иммунного ответа

Разработка техники BoLA тилирования и получение реагентов 17 наименований

- 4 -

Разработка микрометодов ЕА и Во!_А тилирования

-5 -:-

Разработка технология Н-К тилирования и оценка приживаемости пересаживаемых эмбрионов

-6 -

Навью методы получ. реагентов: иммуно-стимуляция, элюиро-вание, десорбция, в нут риселезеночная иммунизация

Открытие новых ЕАО" и ЕАС" систем эрит-роцитарных маркеров, совершенствование методов генотип ирования

-1-

-у-

II. Маркирование адлелофонда и контроль происхождения животных черно-пестрых, палево-пестрых и бурых пород скота

Племпредлриятия я станции искусственного осеменения животных в РФ

N-13, п-3426 - 2 -

Племенные хозяйства Московской области

N»30, п-19854,

- 3 -

Племенные хозяйства Тульской, Смоле н-ской, Костромской, Ярославской и др, областей РФ N-35, п-22563

- 4 -

Популядаи Украины, Белоруссии, Казахстана,Монголии и др N-10, п-2891

- 5 -

Трансплантанты, химеры и двойни спонтанного и биотехнического происхождения N-19, п-125

- 6 -

Системныл анализ влияния учета на селекционные параметры

2

1А, Я. П

Разработка комплекса компьютерных программ для внедрения маркерной селе кции N-7

III. Разработка и анализ методов использования маркеров В разведении и совершенствовании крупного рогатого енота

Маркер позитивный И маркер негативный отбор производителей для использования на маточных стадах N-£3, п-989

Отбор и оценка маркированных сыновей родоначальников линий N-189, п-5403

- 3--

Анализ продуктивности маркированного потомства быков-производителей

N-16, п»752

Частотные характеристики маркеров в связи с продуктивностью N-4, п-380

-5 -

Сочетаемость маркированных генотипов производителей и маток

N-2, п-&4-

-6 -—

Генетическое сходство и расстояние при разведении скота

N-17, п-6247

Принципы генетического мониторинга и зоо-маркерной селекции

N-3

Рис. 1. СХЕМА ИССЛЕДОВАНИИ

С 1979 г. разработанные наш методы непользовали на Армавирской Сиофабрике для промышленного получения реагентов. Это дало возможность массового внедрения генетического маркирования в практику разведения скота (акты о внедрении от £6.05.1981, 5.06.1981 И 20.10.1991).

Технику длительного хранения маркируемых эритроцитов разработали на заюраживателе "СноуОодл" (Австрия) с использованием криопротектора ДМСО (диметилсульфоксид).

Определение антигенов главного комплекса гистосовместимости (Во1А - типирование) проводили по разработанной нами методике (рац.предд. N 4/155, 1980 г. Е!1Д). Гипериммунные сыворотки получали двумя методами - иммунизацией быков изолированными лимфоцитами (п-11) и цельной кровью (№25).

Опыты по изучению иммунореактивности проводили на 22 теля-. тах молочного комплекса "Щаяово** и ферма "Овечкино". Уровень иммунного ответа у 72 телят 4-месячного возраста на ксеноантигены и его связь с последующим ростом, развитием и удоем взрослых коров изучали с 1982 по 1984 г.

дня идентификации антигена дифференцировки пола живых пересаживаемых эмбрионов и клеток организма использовали метод Н-У антител (патент ГФ N 2001627, 1993).

Совершенствование методов генетического контроля воспроизводства скота проводили на основе анализа особенностей наследования ЕА-ант иге нов, включая неполные семьи, животных-трансплантатов , химер биотехнологического и спонтанного происхождения.

Системный анализ влияния точности идентификации животных на параметры оценки производителя, повторяемость его оценки, а также на коэффициенты наследуемости признаков провели с использова- . кием популяционно-генетических методов анализа и моделирования селекционных параметров (Ю.Н. Григорьев 1931, Н.И. Стрекоэов, 1989).

Экономическую эффективность генетического маркирования определяли в соответствии с рекомендациями П. Ф. Сорокового и др. (1991). Моделирование эффективности отбора по генетическим маркерам проводили с использованием алгоритмов С. ашЬЬ (1967).

разработка концепции генетического мониторинга осуществлена путем систематического накопления и анализа экспериментального материала.

Оценку быков по качеству дочерей, унаследовавших альтерна-

тивные маркеры (косегрегационный анализ), провели по методике П.Ф. Сорокового (1974). Генетические дистанции между популяциями определяли по М. Нею (1980).

Анализировали эффективность маркер-позитивного и маркер-негативного отбора производителей, отбора маркированных сыновей родоначальника родственной группы, продуктивность экспериментально полученного маркированного потомства, связь частотных характеристик маркеров с продуктивностью, сочетаемость маркированных генотипов производителей и маток, значение генетических расстояний в разведении и совершенствовании скота.

Эффективность сочетаемости маркированных родительских пар по мясной продуктивности потомства определили при скрещивании производителя кианской породы ГиаСо 87 с коровами холмогорской породы.

Для обработки, анализа и внедрения результатов исследований разработали комплекс из 20 статистических и популяционно-генетических программ, реализуемых на микроЭБМ типа "Электроника" БЗ-21, БЗ-34, МК-61.

3. Результаты исследований и их обсуждение.

3.1. Оовердоиствование существующих и разработка новых катодов получения нымуноспецгфмеских реагентов для выявления ¡зритроютарных антигенов. В период с 1977 по 1986 гг. в 54 сериях абсорбций трехкратно (1977-79 гг. . 1980-82 гг. , 1983-86 гг.) воспроизвели банк реагентов. На однократное воспроизводство банка реагентов потребовалось 18 серий абсорбций (табл. 1). Еши использованы эритроциты 6 пород скота.

Таблица 1. Исследования по созданию и воспроизводству информативного банка реагентов ВИЖа

Кодовые обозначения серий опытов по изготовлению реагентов Проведено серий абсорбшй Год исследования Воспроизводство банка

3(2), 112, Кг, Л2, КЕ, Ш 0(2), П2, Р2, С2, Т2, У2, <К, Х2, 42, ИВ, И2, Э2, ВЕ, Я2 6 7 7 1977 1978 1979 I

АЗ, БЗ, В3, ГЗ. ЯЗ, ЕЗ ЖЗ, 3(3), ИЗ, КЗ, лз МЗ, нз, 03. пз, рз, сз 6 5 6 1980 1981 1982 11

тз. уз. та, хз. из, 43. шз Щ3. 33, ЮЗ. ЯЗ. А4. Б4, В4 14, Д4, £4 Б 2 7 3 1983 1984 1985 1986 Ш

В табл. 2 приведены параметры получения реагентов по технологии ВИЭа.

Таблица 2. Технологические параметры производства реагентов

К Содержание работы Колич. показатели

n/n по одной серии абсорбций (одной серии)

1 Отбор крови от доноров одной или 40 гол.

нескольких пород скота

2 Отбор крови от одного донора 10 л

3 Пробные абсорбции сывороток 79 ст.

4 Промышленные абсорбции сывороток 46 шт.

5 Абсорбции гипериммунной сыворотки 49 л

6 Элюция антител с абсорбента 2 ит.

7 Получение стандартных реагентов 4 шт.

8 Десорбции антисывороток и реагентов 40 пгг.

В процессе исследования усовершенствована известная технология и предложена новая. Преимущество новой технологии выявляется по 9 параметрам: выходу исходной иммуноспецифическоff сыворотки (вьяие на 25-ЗОЯ), себестоимости реагентов (нт® в 2 раза), расходу реагента (ниже в 20 раз), и т.д.

Полученные новые стандартные и экспериментальные сыворотки идентифицированы в международных сравнительных испытаниях 1978 (СССР). 1979-80 гг. (Австрия), 1983-84 гг. (Шотландия), 1991-92 гг. (Финляндия). В испытаниях 1991-92 ГГ. участвовали 35 лабораторий. в т. ч. 4 лаборатории США, 3 - ФРГ, по 2 - Голландии, ЮАР. Японии, по одной - от России (В1Ш) и еще от El страны. В тестах были использованы 90 реагентов, относящиеся к 11 ЕА-системам, Информативный банк ВИЖа представлен 84 реагентами: ЕАА - 5 наименований" AI, А2, D, Н, Z' ; ЕАВ - 48 наименований - 81, BS, Gl. 62, G3, II, 12, К, Ol, 02, 03, 04, PI, P2, Q, Tl. T2, У1 Y2, А* 1, A'2, А'З, ¡3*, D", E'l. E'2, E'3, E'4, F*l, F'2, 6',' 1*1, I*2, J'l, J'2, K\ O'l, O'S, P'l. P*2, Q', Y', B", D", G"l, 6"2, I", К"; EAC- 13 наименований - Cl. C2, E, Rl, R2. V. XI, X2, С'. L', X*. C"1, C"2 ; EAF 3 наименования F, V, N'; EAJ 2 наименования - Jl, J2 ; EAL к БАМ по 1 наименован» L и M ; EAS - 8 наименований - Sl, S2, Ul, U2, H', U', H", U"; EAZ - 1 наименование -Z ; EAR* - 2 наименования R*. S' и EAT' - l наименование T. в перечень новых стандартных реагентов ВИЖа, открывающих 15 антигенов в ЕАВ-, ЕАС- и EAS- системах входят: ЕАВ-система -G1-(SU8/1), S3»(SU8), О'2-(SU34), I"2-(SU20), 04-(Ох), Е'4-(Е'х), K"-(SU10), !'*-( CzCS/H), D"-(PO/Bal 87/2), G"l-( Po/Bal-87/4), G"2-(Po/Bal-87/5); EAC-система

- 11 -

EAS-система -

Ul-CPo/Bal-87/б),

SIT,

C"l-(SU27/1). C"Z-(SU27/2); U2-CPo/Bal-87/7).

Б составе Оанка также 11 экспериментальных реагентов: SUS, SU11, SU12, SW3, SU14, SU16. SU17, SU!9, SU21, SU22.

Аттестация донорских стад в Российской Федерации (рис. 2) позволила пользоваться разнообразном аллелофонда пород при иммунизации и абсорбции, осуществлять обмен иммунослецифичеекими сыворотками и эритроцитами для исследований.

БИЖ - лаборатория генетики

М/

/

\

с Число

Организации Год ЕА-Типир. животных Порода

1. Армавирская биофабрика Главбиопрома МСХ СССР 1979-1983 500 красная степ-

ная и помеси

2. Костромской СХИ 1977-1983 240 костромская

а Новосибирское ГШ 1979 200 симментальская

4. Одакое ГПО 1979 186 черно-пестрая

6. Свердловское ГШ СиОШПТШ (Новосибирск) 1979 200 тагильская

б. 1978 200 черно-пестрая

7. Смоленский филиал ВИЖа 1977-1S80 447 сыч., ювидоая

8. Урал НИИСХОЗ 1980-1982 329 черно-пестрая

0. Ярославский НИЙЖ 1977-1983 180 ярославская

Рис.

2. Создание в России донорских ЕА-типирующкх реагентов

стад для получения

ВИЖ - лаборатория генетики

\ /

/

\

Число

Организация Год ЕА-типир. животных Порода

1. УкрНИИЖ "Аскания Шва" 1979-1983 498 кр. степная, АЗТ, помеси

2. УкрНИИСХ, г. Житомир 1979-1983 557 черно-пестрая,

укр. белоголовая , помеси

3. У]фНИИЖ, г. Харьков 1982 30 черно-пестрая

4 БелНИИЖ. г. Жодино 1982 100 »

5. КазНИИ эксп. биологии. 1981 167 алатауская

г. Алма- Ата

й. НиргНйНЖиВ, г. фунае ЭНИИЖиВ, г. Тарту 1979-1980 202 алатауская

7. 1979 50 кр. эстонская

Hic. 3. Создание донорских стад в союзных республиках

Из рис. 2 видно, что реагенты ЩЖа в период с 1977-1983 гг. использовали в 9 регионах РФ с целью создния донорских стад разных пород, для внедрения иммуногенетического анализа в практику.

На ркс. 3 поглэако создание донорских стад на Украине, в Белоруссии, в Казахстане и др. республиках.

Сотрудничество лаборатории генетики ЕИЯ со странами дальнего зарубежья по разработке и внедрению новых методов генетического маркирования показано на рис. 4.

НИК - лаборатория генетики

\

/

/

Институт групп кровя и резистентности животных, г. Мюнхен

Институт животноводства и ветеринарии Монголии,

г. Улан-Батор Институт зоотехнии, Г.Краков Отдел иммуногенетики Госплемпредприятий Чехии

п. Градииггко под Медником Агропромышленное объединение, г. София Центральная станция искусственного осеменения

животных, г. София Институт улучшения животных, г. Гавана Кооператив "Новые езды" Зап. Словакия Институт биохимии и генетики Словацкой ЛН,

г. Иванка на Дунае Станция искусственного осеменения животных,

п. Дужанки, зап. Словакия Международная лаб. биотехнологии животных, г. Нитра

йгждународное общество генетики животных (ШГН)

1978-80 гг.

1977-65 гг.

1983-90 гг.

1987-91 гг.

1981 г.

1986 г.

1982 г.

1987 г.

1986-89 гг.

1989-90 гг.

1S86-S1 гг.

1377-92 гг.

Ркс. 4. Шждународк^е сотрудничество ВИЖ при создании банка реагентов для ЕА-, ВоЬА- и Н-У-типирования скота

3.2. Разработка методов изоляции лимфоцитов, проведение км-М7пиааццй, постановка серологических тестов и получение ЕкАЛ-ди-агностикумон- Как наиболее технологичную, мы применили разработанную нами модификацию макрометода постановки лимфоцитотокси-ческих реакция, повысившую производительность труда более чем в 8 раз.

После двух циклов иммунизашй с перерывом в 2 мес. у реципиентов, выработавших антитела в титре 1:16 и выше, брали кровь для получения ВоЬА-сывороток. Сыворотки, полученные при многократных инъекциях реципиентам £0 мл цельной крови (внутримы-

течно и частично в толщу коли). также были испытаны на неродственных животных разных пород.

ВоЬА-антисыворотки использовали при контроле происхождения телок черно-пестрой породы на ферме "Овечкино". В тестах использовали экспериментальные сыворотки ВоЬА 51110-20. Получено совпадение экспертных заключений по двум тинам антигенов (табл. 3).

■Таблица 3. Генетический контроль происхождения потомства быков черно-пестрой породы по лимфоцитарным и эритроцитарным антигенам

Семейные связи goLA-тип Заключение о происхождении по отцу

BoLA ЕАВ

0. Памир 2977 п. 1685 15,17.18 15,17,18,19 СИ- G2Y2E'1Q'/G2Y2E'1Q' G2Y2E* ÍQ" 0+

П. 1748 п. 1754 п. 1708 П. 1762 П. 1760 п. 1717 15.17 13,15,16 15.18 15 15,20 15,16,19 000-О 0-о- 04Е* G" 0-P1E'3/G2Y2E4Q' 0? 12 0-QV04E'3G" 012 ' 0-04Y2A'1 0-

0. Акрес 1712771 п. 1667 13,15,16/19,20 15.18.20 0+ G2Y2E' 1Q' /02 A' ¡tJ'ZK' 0' 02 A* 2J * 2К' 0* СИ-

п. 1688 п. 1697 п. 1732 п. 1767 15.16,18 17,18 15,16,17,18,19 15,18 00-0+ о- 12 012 0-G2Y2E' 1Q' 0+ 12 0-

0. Экми 93 П. 1671 15,16/18,19 15,16,19.20 0+ Р1Е' 3/04Y2A'1 Р1Е*3 Сн

п. 1736 П. 1703 12,13,16,17,18. 19,20 15 00- G2Y2E' 1Q' 0-04Y2A* 1 0?

Изучен полиморфизм животных словацкой пестрой (СП), чешской пестрой и помесей СП е другими улучшающими породами. В тестах использовали 17 BoLA-реагентов: VI, W2, W3, V4, W5, W6, №.2 (W8), V7, Ш, WS, WIO, Vil, VI2, W13, V16, W20. W31. Для СП характерны антигены WS (7. 8Х), WS(B. IX). W10(13. 4X) , VI 1(5. II) и №0(10.61). У помесей СП с голландской черно-пестрой породы частоты антигенов VI и W2 равны 1.S8X. У чистопородных животных СП аллели VI. W3 и V4 не обнаружены. У помесных животных возросли чистоты по специфичности« №( 16. 37.) , W8(19. 4%), W12(6. 52).

кЕ0(2О.9Х), та!(1&4Д). У голштинского скота наиболее часто встречаются антигены Уб - 13.6Х, N8 - 25.2Х, Ш2 - 17.7% и отсутствовали антигены УЗ, \/9,

Для чешской пестрой породы характерны антигены: У1(5. ОХ), N6(7. 5Х) и VI0(8.2Х). Анализ показал, что наименьшая генетическая дистанция по ВоЬА-антигенам установлена между популяциями животных СП с помеснымы СП х черно-пестрая - 0-0.116. Наибольшее расстояние выявили между СП и голшггинской породами (0-0. £57).

3.3. Разработка метода иаргснрования пересаживаемых эмбрионов по антигену дифференцировки пола. Для аллоиммунизаций были использованы инбредные кролики новозеландской породы, инбредные крысы Льюис, Браун-Но рве й. а такле инбредные мыши С57В1/6. Шра-ботку антител осуществляли путем внутриселезеночной иммунизации самок.

При аттестации 174 эмбрионов мышей соотношение Н-У+ и Н-У-эмбрионов составило 79 : 95 ( X2 - 0,7: Р > 0,05).

В 6 сериях опытов на 292 мышиных эмбрионах определили условия их экспозиции в разных средах, используемых при манипуляциях по маркированию эмбрионов. Приживаемость Н-У типированных эмбрионов (26.71Х ).была не ниже, чем в контроле (23,32). Точность оценки пола 101 эмбриона составила 78,2Х.

Техника Н-У тилирования была унифицирована применительно к эмбрионам крупного рогатого скота. Были определены признаки свечения эмбрионов, дающих начало мужским и женским особям.

У крупного рогатого сюта аттестовали 70 эмбрионов, которые распределились 31 Н-У+ и 39 Н-У-. Шсде 24-часовой инкубации в ФБС 37 иа 40 (92.5Х) Н-У-типированных эмбрионов продолжили развитие в культуре.

После аттестации 13 бластоцист были пересажены телкам черно-пестрой породы. Ректальное исследование на 60 день показало, что 4 реципиента из 10 были стельными (40%).

а 4, Разработка методов оценки реактивности ншунной системы для дифференцировки животных по уровню иммунного ответа. Сравнение первичного и вторичного иммунного ответа показало, что вторичный иммунный ответ является более стабильной характеристикой животного и его использование несколько предпочтительнее. Методика дифференцировки телят по уровню иммунного ответа на ксеноантиген позволяет выделить 3 типа: низкий, средний к высокий (0.6+-0,18, 8. Г)+-0.7; и ю. 4+-0.70) Изучена связь живой

массы тела 3, б и 12 месячных телят с уровнем иммунного ответа при первичной и вторичной иммунизации и с последующей молочной продуктивностью коров.

Различия по живой массе тела телок в связи с уровнем вторичного иммунного ответа усилились с возрастом. В 12-месячном возрасте телки, выделенные в группу log2-6.5, весили на 15.3 кг меньше (р < 0.05), чем телки со средним значением титра 1о?2 -8.5, Не выявлена связь последующего удоя коров с уровнем иммунного ответа в раннем онтогенезе.

3.5. Генетическое маркирование и контроль пропсходдекия плеиеиного крупного рогатого скота. Систематически осуществляли контроль происхождения и маркирование скота. В хозяйствах (п-30) псковской области было аттестовано 19854 гол. , а в хозяйствх in-35) других областей - 22563 ремонтных быков, коров-селекционных групп и телок. На 13 племпредприятиях аттестовали 3426 быков-производетелей для комплектования их проверенными по происхож-

дению животными и контроля потомства.

Таблица 4. Иммуногенетическое маркирование и контроль происхождения племенного крупного рогатого скота

Год Число хозяйств и племпредпр. Быки-производители Норовы плем. ядра Ремонтные быки и телки Итого по годам

1977 18 201 650 278 1120

1978 16 174 901 298 1373

1979 25 210 1472 2125 3807

1980 12 1206 2651 3285 7142

1981 39 668 6113 8452 15233

1982 38 204 2006 3269 5498

1983 25 330 1101 1053 2484

1984 16 202 2745 1915 4862

1985 17 231 1938 1861 4030

Всего 3426 19576 22556 45558

Из табл. 4 видно,- маркировано более 45,5 тыс, животных. Это позволило изучить аллелофонд и осуществить мониторинг в подконтрольных стадах. Полученные данные позволяют считать, что допустимыми пределами ошибок в учете по отцу для молочного скота -2,431 (ГГО"Еланский " ) - 4.6Х (пл.з-д к-за им. Ленина Тульской обл.). Хозяйства, в которых ошибки в племенном учете превышают 15,ОХ, следует выводить из категории племенных. Систематический контроль снизил ошибки ь родословных с 1977 по 1983 г. с 277. до 12. 4(акт от 23.12.1983.). Улучшение учета было отмечено по плем-

заводу к-за "Ленинский луч" (акты от 24.11.1982 и 20.12.1983), племферме "Непецино" (акт от 4.10.1985), племферме "Дубровицы" (акт от 28.1.1986).

Таким образом, контроль происхождения при отборе быков на племпредприятия и их оценке по качеству потомства позволяет выявлять и устранять ошибки, гарантирует достоверность полученных результатов, ускоряет реализацию селекционных программ. Сотрудничество нашей лаборатории со специалистами других регионов позволило широко внедрить этот метод в РФ и сошных республиках.

3. 6, Совершенствование методов генотипирования и контроля воспроизводства крупного рог атого скота. Открытие новых антигенов и расширение банка диагностикумов позволили установить новые закономерности, отражающие взаимоотношения межу антигенами сложных ЕА-систем, Антигены 6 и И" входят, в частности, в состав ЕАВ-аллелей черно-пестрой - Б2У2Е' 1С О". <3201 В1(32К04У2А* 20' 0" и чешской красно-пестрой - 02¥2А-2В'!Г У0*\ ВЮгКЕ'ЗГ'б* О' Б"0", В162К0' 0" пород. Анализ показал, что антиген О" не встечается в составе аллелей, состоящих из антигена И или 51 в комбинации с другими антигенами - й!!1, 6101 и др. Учет указанных закономерностей расширяет возможности генотипирования.

Эритроцитарные антигены - 61 и 0" образуют закрытый суб-локус внутри отрытой ЕАВ-системы (рис. 5).

ЕАВ-Б1-сублокус

1 в1 1111

В1 В2 (32 1 ез К 11 12 Р1

ЕАВ-0"-су5локус Рис. 5. Модель аллелькых суОлокусов ЕАВ-в! и ЕДВ-О"

Структура ЕАВ-комплекса разделена на 2 аллелькых сублокуса ЕАВ-Б1 и ЕАВ-О". Сходная закономерность установлена для антигенов ЕАС системы < ЕАС-С"-суСлокус),

На практике часто имеют дело с неполными семьями. В таких случаях проведение экспертизы по одному из родителей затруднено. Поэтому, внедрили форму бланка для проведения экспертизы происхождения. учитывающую информацию об отце матери (ОМ). В связи с тем. что ОМ - популярные в регионе маркированные быки-производи-

гели ЦСИО и племпредприятий Московской области, контроль происхождения матерей племенных быков, наряду с происхождением самого пробанда. не требует дополнительной аттестации.

Так, материнство неаттестованной Ляны 617 (ГПЗ "Константи-ново") подтверждается передачей ею дочери N 893 аллеля 6301Т1У2А'2Е*ЗГ'2К', который она унаследовала от отца Амоса 325315.

Сходная ситуация имела место при экспертизе происхождения на племферме "Дубровицы" коровы к 82.

Нерегулярное наследование эритроцитарных антигенов установили в потомстве Экми 93 и коровы N1330 ( о. X. Дубровицы ). Потомок 5786 унаследовал неправильный аллель 11Р103А'2Е' З.Г К'О', Мать N1330 маркирована ШОЗА'ЙУК' О', а отец - Р1Е'3/04У2А*1.

Полученные данные указывают на необходимость учета случаев нерегулярного наследования при экспертизе происхождения животных и ЕА-картировании.

а 7. Влияние точности идентификации животных на оценку Си-ков-проиаводителей по качеству потомства и популяционио-генетические параметры стад. Анализ данных табл. 5 позволяет сделать

Таблица 5. Точность оценки производителя

Уровень ошибок Число потомков Коэф: )ициент наследуемости

0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30

оооо *8888 5 10 30 60 0,503 0,517 0,568 0.6Г' 0,516 0,543 0,622 0,706 0,528 0,566 0,671 0,758 0.541 0,587 0,706 0,795 0,554 0,606 0,734 0,822 0,563 0,624 0,759 0,843

0,20 0,20 0,20 0,20 5 10 30 60 0,652 0,665 0,709 0,756 0,664 0,688 0,756 0,817 0.675 0,707 0.790 0,853 0,686 0.725 0.817 0,878 0,695 0.741 0,837 0.896 0,705 0,755 0,854 0,909

оооо 1—» Н* 1—' оооо 5 10 30 60 0,818 0,626 0,854 0,882 0,826 0,841 0,882 0,914 0,833 0.853 0,901 0,933 0,840 0,663 0,915 0,945 0.846 0,873 0,925 0,954 0,852 0,881 0,934 0,960

вывод о том, что ошибки в идентификации животных снижают точность оценки быков - производителей по качеству потомства. Так, точность оценки быка-производителя по удою дочерей (Пг- 0,25) при численности последних ^-30 и уровне ошибок ЗОХ составит 55,4-73,4Х.

3.8. Моделирование эффективности отбора по генетическим маркерам. Эффективностью маркерной селекции считали генетическое превосходство отобранных по маркеру животных: 6 - ггг~ * 1 *

где гякЛ - корреляция между фактической и предсказанной генетической ценностью, I - интенсивность селекции. <3к - стандартное генетическое отклонение.

Несмотря на относительно небольшой селекционный прогресс (36-51 кг/год) использования маркера при отборе быков и коров, его выгоды очевидны, т. к. маркерная информация является критерием в предварительном отборе молодых быков.

Моделировали ожидаемый генетический прогресс по удою потомства при доле влияния маркера на изменчивость удоя, равной 5-1 ОХ. При этом генетический прогресс составил 0.72-1.IX.

Генетическое улучшение при этапной (ступенчатой) селекции складывается из суммы эффектов отдельных этапов.

Расчет показал, что при разнице между группами маркированных дочерей быка В 140-300 кг использование маркерной информации повышает темп генетического совершенств шия животных по удою в 1.2 - 1.4 раза (22 - 42 X). Показано, что маркирование влияет на повышение молочной продуктивности по 3-м каналам (табл. 6). Суммарный эффект влияния генетических маркеров на удой достаточен для его учета в селекции - 9.3 X (при уровне удоя 6000 кг).

Таблица 6. Повышение молочной продуктивности коров при генетическом мониторинге

N п/л Мероприятие в X к контролю (удой 6000 кг)

1 Ранний отбор в потомстве быков-дочерей, унаследовавших желательные маркеры отца, сцепленные с удоем + 5,0

2 Учет генетической структуры стада и закрепление быков-производителей оптимально сочетающихся с наследственностью маточного поголовья (групповой и индивидуальный подбор) + 3.1

3 Контроль происхождения, предотвращение потерь продукции молока, достигаемое за счет исключения ошибок в учете ♦ 1,2

Суммарный эффект 9.3Х

Данные, получены в НПО "Пойма" совместно с ii.c-x.ti. II А. Поповым, в 1992 г. показали, что генетический тренд за поколение по всем дочерям быка Барбариса 207 составил 162 кг. Отбор по гену <а2У2Е*Ю' приводит к прогрессу стада за поколение (5 лет) на 22? кг. Разность между фенотипическим трендом всех дочерей и маркированных указанным аллелем составила 65,4 кг/год (227,4-162), т.е. на 40Х (в 1,4 раза) выше по сравнению с отбором без использования маркеров,

3. В. Сиеш® быков ко качеству иаркнрованного п ото ист во. Изучена молочная продуктивность дочерей 16 быков-производителей при расщеплении ЕАВ-маркированного генотипа; по черно-пестрой породе - (быки пле'мзавода колхоза "Ленинский луч") Мастер 001 {п-213) и Нор 1717325 (п-74), (быки ГПЗ "К Алексеевское") Дракон 259 (п-20) и Лупп 730 (л-17); по красно-пестрой голштипской породе - (быки ГПЗ им. Ленина) Ридяес 1743506 (п-22), Техаль 1726749 (г*-44) и Имлровер 333471 (п-45); ПО сычевской - (бык племаавода "Сычевка") Люкс 5750 (п-49); по симментальской - (быки ГШ "Еланский") Лимон 5179 (п-10) и Лакмус 5481 (п-12); по швкцкой - (быки ГПЗ "Караваево") Гамблер 160083 (п-23) и Султан 157734 (п-19); по костромской - Луч 8021 (п-61) и Балет 1430(п»57). Различия по удою коров, маркированных альтернативными гаплотипами отца, находились в пределах 1269 (бык Гамблер)-180 кг (бык Имлровер).

Статистически значимые различия обнаружены по выходу молочного жира у дочерей Мастера в пользу гаплотипа 62У2Е'10'. По удою и выходу молочного жира у дочерей Гамблера 160083 и по удою у дочерей Люкса 5750. Гены быка Гамблера. сопряженные с маркером ЕАВ-В1СШ2А'2Е'35''Р"0' У , представляют интерес для улучшения отечественных бурых пород скота.

Оценка родоначальника линии черно-пестрого скота московского типа Мастера 001 по маркированным дочерям ЕАС- и ЕАР- систем также выявила различия (табл. 7), Таблица 7. Оценка быка Мастера 001

Маркированные дочери п Удой за 1 лакташш +- к контролю 1 К контролю +- К сверстницам

Х2 75 6406-1—128 +149 2. 4 +1253

Е* 72 6089+- 93 -168 2. 3 + 945

V £2 6547+-214 +290 4.6 +1404

г 83 6193+-105 - 64 1.0 + 1050

Наибольшей продуктивностью отличались дочери Мастера 001, маркированные аллелем ЕАР-У, которые превышают удой всех дочерей отца (контроль) на 290 кг, а сверстниц на 1404 кг. Дочери, унаследовавшие маркер ЕЧ, на 317 кг уступали подусестрам , унаследовавшим Х2 группу сцепления. Таким образом, удои коров-дочерей Мастера 001, унаследовавших альтернативные аллели, отличались на 4.7 - 5. 6 % от среднего удоя его дочерей.

Анализ расщепления генотипа Мастера 001 и его комбинационной способности показал, что удой его дочерей от разных типов спаривания по маркерам варьировал от 5670 до 7018 кг, а у отдельных - до 9500 кг. Общая схема анализа связи селекционного показателя с генетическими маркерами производителя представлена на рис. 6.

В« - Мастер 001 - С2У2Е* 10' /04ТСА' 1-ЕУ/Ж

Сыновья вгчгЕ' 1<у , 04У2А' 1, ЕУ. Х2, Н-У*

-г-V

Дочери игУ2Е'Юг, С4У2А*1, ЕУ, Х2. Н-У-_

I ЕАС-система Х2 > ЕУ неравновесное сцепление

Оценка маркированных сыновей по дочерям

-г~

V

Оценка связи маркера с удоем дочерей

(КУ2Е' 10* -сыновья

32У2Е' 10' 04У2А* 1 различия по маркерам ЕАВ-системы незначимые (Р > О, 05)

Х2

Для продуктивного стада и разведения

Оценка сыновей по маркированным дочерям

-1—

V

._!_

Оценка продуктивности > по маркеру 04У2А'1

V

_I_

Оценка продуктивности по маркеру 62УЕЕ' Ю*

Рис. 6. Схема выявления связи между удоем и ЕА-маркерами в потомстве быка-производителя Мастера 001

Из табл. 8 рицно, что расщепление генотипов сыновей 4 родоначальников линий по маркерам ЕАВ-системы сопряжено с достоверными различиями по удою. Внучки Экыи 93 , происходящие от отца, унаследовавшего маркер Р1Е'3, уступают по удою своим двоюродным сестрам по отцу на 186 кг. Следовательно,' маркирование повышает точность оценки быков и прогнозирования удоя в родственной группе. При обычном закреплении быка Мастера за коровами без учета генетических маркеров из 18 типов сочетаний только 7 были удовлетворительными , а в И - нуждались в пересмотре и закреплении коров аа другими быками.

Таблица 8. Оценка сыновей родоначальников новых линий московского типа черно-пестрого скота

Кличка, N родоначальника, генотип Маркеры сыновей Колич-во Удой, кг X и

сыно -вей внучек внучки,1 лактация разница но маркир. Г р.

Экми 93 04У2А'1/Р1Е'3 04У2А' 1 Р1Е'3 15 15 407 337 4081 3895 185 ** 3.71 3. 6»

Майор 163 <3£У2Е' Ю' / В1(ЗгК£' 1Р0' 62УЙЕ' 10* вюгкЕ' 1го' 14 8 389 160 4086 3856 130 а* а И 711

Барс 326089 041ЙА* 1 / егугЕ'Ю' 04У2А'1 С^гЕ'Ю* 7 17- 138 469 4202 4090 112 ** и /0 .), '.'И

Астронавт 17 04Е' ЗВ"/0' 04 Е' 36" 0' 33 30 1111 863 4434 - 4353 81 ** VI 3, 7^1

3.10. Мониторинг в разведении и совершенствований крупного рогатого скота. Обобщение многолетнего опыта ВИЖ, ВНИЙплем, ВНИ-ИРГЖ, а также зарубежных исследований по использованию генетически к маркеров в животноводстве, позволило разработать концепцию и три основных принципа мониторинга при разведении и совершенствовании крупного рогатого скота. Основными принципами мониторинга являюгя: нейтральность маркеров, их сопряженность с селекционными показателями и обратная связь . Селекционная практика выдвигала и выдвигает задачи, решение которых в рамках классической зоотехнии затруднено, а иногда и не возможно. Имеет мегтс разное толкование селекционных категорий (порода, тип, отродье. линия, кросс и др.). Маркирование предоставляет возможность их однозначной идентификации.

- 22 - ■

Ыэниторинг частот основных ЕАВ-аллелей в хозяйствах "Дубро-вицы", "Щапово" и "Непецино" показал статистически достоверное снижение частот одних ЕАВ аллелей на 1.3- 5.13 % <В102А'2Е'3,)*2К'0\ В103У2А' ЕЕ' 33' Р' О' В", 04Е' ЗО") и повышение на 1.оз - 6.17 % других (вт.еггеЕ'Ю', огл'ггк'о', о*о'£'зр*б'о^ 04У2А'20', 0'). Частоты 9 из 12 статистически достоверно изменились. Исходя из снижения общего числа аллелей в стаде с 64 до 48 можно заключить, что темп замещения равен одной аллели в год. Удой коров за указанный период вырос на 2750 кг. С 1980 по 1992 гг. частоты основных аллелей ЕАВ-системы в стаде племфермы "Непецино" также существенно изменились. Удой сравниваемых групп коров вырос от 4215 до 6330 кг. Следовательно, повышение продуктивности сопряжено с изменением частотных и качественных характеристик аллелофонда стада. Так, аллель ЕАВ-системы Г, имевший исходную частоту 13.2Х (1980 г.), у животных, аттестованных в 1992 г., отсутствовал, В то же время, частота желательного алле-ля, маркирующего высокомолочные генотипы - 62У2Б'1Р* - выросла от 3.51 до 27.7% (Р<0,001).

Для выяснения возможных последствий сокращения числа аллелей в стадах анализировали широту наследственной изменчивости и молочной продуктивности первотелок. 3 исследованиях учитывали показатели 318 дочерей 30 быков черно-пестрой породы голландской селекции в 4 племенных стадах (племзавод к-за "Ленинский луч"» ГПЗ "Большое Алексеевекое", ГШ "Холмогорка", племферма "Непецино") с уровнем удоя не ниже 4000 кг.

Анализ показал, что во всех исследованных стадах,у коров наиболее часто встречаются аллели ЕАВ-системы 12, Ь, <ЗЕ.Ч2Е' 10*, В103У2А'2Е'33*Р'0'6". Их сочетания маркировали генотипы большинства животных. Установлено, что у 70 % коров наследственная изменчивость ограничена 10 ЕАВ-аллелями и только у 30 7. животных были выявлены редкие аллели: 11020А' 1К'(Г, В1У26'6", Р1Г, 04А'Ю*. Последующий анализ показал, что животные - носители маркеров ЕАВ-системы эритроцитов с низкой частотой встречаемости постепенно были вытеснены из стад.

Средний удой первотелок последней группы на 11.3 X. был нилоэ (460 кг, Р<0.001), чем первой (табл. 9).

Таблица 9. блочная продуктивность коров-первотелок

Частоты генотипов, Z п Удой, кг Жир, %

70 ' 30 265 115 4514+-42 4054+-51 *** 3.84+-0. 03 3. 84+-0. 03

До использования голштинских быков в аллелофонде черно-пестрого скота преобладали ЕАВ-аллели: 12, B1G2K04Y2A*20*, 04Y2D' Е' 1F' 20*, I*, Y2D'G* I'Q*. Б стадах Московской области гены европейского происхождения замешается на голштинские, севере- американской селекции. Вследствие этого, суживается генофонд стад. Удой коров при этом повышался на 50 - 160 кг в год.

В потомстве F1 и F2 от скрещивания голштинских быков с коровами черно-пестрой породы существенно увеличились частоты ЕАВ-аллелей, наиболее типичных для голштинского скота, -G2Y2E* 1Q*, OIA' 102A'2J'2K'0', 04У2А' 1 и ЕАС-системы - Е, R2, Х2. При атом снизились частоты аллелей B1G2K04Y2A'20', B103Y2A' 2Е* 3G" Р*QKG", 12, 04Y2D* Е* 1F'20* , CIE, C2R2WC*.

Мониторинг движения наследственной информации в родительском, дочернем и внучатом поколениях родоначальника новой линии быка Мастера 001 указывает на эффективность использования маркеров при формировании родственных групп и линий,

3.11. Экспериментальный подбор родительских пар по генетическим (¿аркерам. в результате подбора в потомстве быка Мота 1060 был получен бык Дуб 805 (ЕАВ-1г/12). В возрасте 12 месяцев он был поставлен на пункт искусственного осеменения в колхозе "Гор-виха". За ним закрепили 58 коров к-за "Горгаиха" и ВО коров О. X. "Михайловекое". Данные о продуктивности дочерей быка Дуба 805 -EAB-I2/I2 приведены в табл. 10.

Таблица 10. Результаты.оценки быка Дуба 805

Гр. живот н. п Удой, кг 1тЬлочньй I жир

Дочери Штерн Сверстницы 21 21 88 3226+-137 2824+-1ЬЗ 2968+- 70 4.62+-0. Об 4. 49+-0. 07 4. 46+-0.03 151+-7. 3 л 125+-6. 2 132+-4. 0

Дочери Дуба превосходят сверстниц и матерей по удою соответственно на 258 ( 8,7/.) и 402 кг (14. 2£), жирномолочности - на 0.13 и 0.162, выходу молочного жира за 1 лактацию - на 15 и 26 КГ. Бык был оценен как улучшатель по удою и жирномолочности. Ему присвоили категорию АЗВ1.

Данные исследований 1977 - 85 гг. показали, что использование быков с маркированными желательными генами повволяет повысить продуктивность их потомства на 8 - 10 X.

Доказательством эффективности маркерной селекции также является оценка ремонтных быков в хозяйствах Московской области (табл. 11). Сравнение оценок £8 сыновей Мастера, маркированных ЕАВ-&У2Е'Ю', и 21 сына того же быка, маркированного ЕАВ-04У2А'1, выявило достоверные различия по удою их дочерей.

Таблица 11. Результаты отбора и подбора быков с учетом маркеров ЕАВ-системы эритроцитов

ЕАВ-маркер Число ремонт. быков УДОЙ, 1СГ Z жира

число дочерей 1 лактация разница по удою

02У2Е' 10* 28 727 4424 249 *** 3. 69

(желательный)

04У2А'1 21 781 4175 - 3.72

(допустимый)

Анализ показал, что дочери быков, маркированных ЕАВ-62У2Е' 10', превосходят по удою дочерей быков, маркированных ЕАБ-04У2А*1, на 249 КГ (Р<0.001).

3.12. 1£фкер-позитивный и иаркер-негативный отбор производителей.

Полученные данные (табл. 12) свидетельствуют о статистичес-

Таблица 12. Продуктивность дочерей быков бурой швицкой породы, маркированных и немаркированных аллелем 0301Т1У2Е'ЗР'2.

Гр. Маркер быков Число Удой (кг) Мир (X) Живая Масса (кг) Возраст отела (дни) Скорость доения (кг/мин)

быков доч.

I 03+ 8 183 4068 3.82 518 907 2.00

(имп. ) +-61 +-0. 01 +-2.0 +-8 +-0. 02

11 63- 5 361 3915 3. 79 511 975 1.85

(имт ) +-49 ** +-0.0* +-1.7** +-9*** +-0. 02***

III 03- 9 430 3769 3.81 521 992 1.86

(мест.) +-39 +-0.00 +-1.4 +-8 +-0.01

IV аз+ 1 15 4250 3. 84 520 880 2.14

(мест.) +-177** +-0. 01 +-6,7 +-23*** +-0.08***

ки достоверном превосходстве быков, носителей маркера 03+, по качеству потомства. Дочери быков указанной группы превосходят по удою сверстниц - дочерей быков; не носителей маркера 03, на 153 кг (3.9%, Р<0,01), а дочерей быков местной селекции - на 299 кг (8Х, Р<0.001).

3.13. Генетические дистанции и кх эначепке в раз ведения скота. Генетические дистанции между в популяциями черно-пестрого скота Московской области приведены на рис. 7, иэ которого следует, что минимальное генетическое расстояние и наибольшее сходство имеет место мевду быками ЦСИО и быками пле«предприятий Московской области <0-0.028, 1-0.972), а наибольшее расстояние и минимальное сходство-между аллелофондом стада "Непецино" и голш-тинскими быками ЦСИО (0-0. 796, 1-0.451).

Рассматриваемые популяции дивергировали на 2 кластера. Первый малый кластер составляют популяции: быки-ЦСИО (код 6), быки племпредприятий Московской области (код 8) и коровы стада плем-совхоза "Фоминекое (код б), представленные животными импортного голландского происхождения. Укаганкш популяции, являются в наибольшей мере "голландизированными".

Шпуля цата: ЦСИО-быки

черно-пестрой породы Быки племпредприятий

племсовхоз "Фоминекое" (коровы)

ГПЭ "В. Алексеевское" (коровы)

ГШ "Холмогорка" (коровы)

Ремонтные быки

племзавод колхоза "Ленинский луч"

племферма "Непецино" (коровы)

ЦСИО-быки голщтинской породы

0.0 0.1 ' О.'2 0.'3

Рис. 7. Дендрограмма кластеров сравниваемых популяций черно-пестрой породы крупного рогатого скота

0.028

Второй большой кластер представлен остальными 6 популяциями. Генетически более отдаленной от голландизированного скота является популяция голштинских быков ЦСИО (0-0.320). Наибольшее сходство с голяп «некими быками имели коровы племфермы колхоза "Ленинский луч" (0-0.263).

Зч 14. Генетические шркеры в позыоеяии эффективности скре-Еипапая мэлючн!« коров с быками шснш пород.

Принципы генетического мониторинга являются универсальными. Изучено расцепление генотипа кианского быка Гиабо 87 для повышения эффективности скрещивания (табл. 13).

Таблица 13. Масса тела киан - холмогорских быков

Унаследован п Масса Отклонение от

ЕАГ-маркер тела, кг средней, кг

Р 9 379 +-11. 4 -11

V 11 399 +-13. 0 + 9

11з данных табл. 13 видно, что потомки быка Гиабо 87, унаследовавшие маркер отца ЕАР-У при межпородном скрещивании, к концу откорма весили на 20 кг (6,12) больше по сравнению со средним весом потомков, унаследовавших ЕДТ-Г маркер. Учет сочетаемости ЕДР-У и ЕАМ-т маркеров отца с материнскими показал, что потомки - двойные гетерозиготы -Т/У-М/т (п-б), - имели достоверно большую живую массу на 42.3 - 58.3 кг (10. 8 - 17 X).

Анализировали генетические особенности монгольская скота (п-225, х-во "Туяа Эрдэнз"), домашних яков (п-100) и гибридных потомков (п-85), в том числе - 49 голов от прямого скрещивания быков монгольской породы с самками яка (саран-хайнак) и 36 потомков от обратного скрещивания як х коровы монгольского скота (нараи-хайнак) в связи с повышением эффективности животноводства путем отбора и подбора родительских пар по генетическим маркерам,

а 15. Использование вычислительной техники - программируемых микрокалькуляторов "Электроника" БЗ-21, БЗ-34, МК-46, МК-54. МП-56, №61. ЫК-85 (РФ), НР-9820А (США), а также ПК 1ВМ РС облегчает обработку материалов, анализ и внедрение . Разработаны и опубликованы тексты 7 генетических программ и примеры их использования в разведении и селекции скота.

4. Заклггсешэ. Результаты собственных исследований автора позволяют сделать вывод о том, что разработаны технология к концепция генетического мониторинга, позволяющие на генном уровне осуществлять анализ селекционных процессов, "принимать оптимальные решения при разведении и совершенствовании крупного рогатого скота.

Усовершенствованы существующее и разработаны новые методы получения реагентов для ЕА-, ВоLA- и H-Y-типирования.

Создание в ЕИКе информативного банка ЕА-типирующих реаген-' тов способствовало развитию норых направлений исследований по изучению генофонда в бвязи с ускорением темпов повышения продуктивности скота - -Т. В, Бахмутова (1080), А. В. Баранов (1986), по филогенезу и породообразовательному процессу - Ы. Д. Ледов, а А.Попов (1991), по гетерозису „при межвидовом скрещивании -П. Ф. Сороковой, а Г. Букаров, Е. Загдсурэн (1382), по раннему прогнозированию продуктивных признаков - Ф. Фотиадис (1984), по сохранению генофонда локальных пород - В. И. Черкащенко (1984) по повышению эффекта селекции по удою - В. К Чернушенко (1992), по оптимизации воспроизводства стада - С. КУханов (1982) и др.

Установлено, что связи между маркерами и количественными признаками возникают в процессе разведения и селекции (рис.8).

Исходный неотселекционированный генофонд популяции, отличающийся генетической изменчивость» и специфичностью

г* -V-

Снижение генетической изменчивости

СЕЛЕКЦИЯ

Изменение уровня

селекционных

параметров

Возникновение связей селекционных признаков с генетическими маркерами

Рис. 8. Изменение генофонда крупного рогатого скота в связи с селекцией по экономически ценным признакам

Сочетание принципов маркерного и геотехнического анализа (зоомаркерный анализ) вывело селекцию на качественно новый уровень. Зоомаркерный анализ позволяет учитывать особенности конкретных стад при достижении селекционных целей. Ыакромониторинг стад Подмосковья выявил гетерогенность их генофонда в связи с селекцией . Зоомаркерный анализ в каждом случае дополнительно повышает продуктивность потомства на 6 - 10Х по удою и ускоряет темп увеличения удоя в 1,3 - 1.5 раза. В наших исследованиях показана роль мониторинга на всех этапах селекционной работы (индивидуальный и групповой отбор, подбор, оценка генетической структуры стада, ситуации в стадах, прогнозирование генетического потенциала животных, эффективности селекции). Это позволило предложить схему совершенствования скота с использованием концепции генетического маркирования и зоо-маркерного анализа .

Генетический мониторинг и зоомаркерный анализ следует рассматривать как составные части современной технологии разведения крупного рогатого скота.

5. В ы в о д ы

1. Во Всероссийском НИН животноводства разработана прогрессивная промышленная технология изготовления наборов моноспецифических стандартных реагентов и создан банк из 84 реагентов для типирования крупного рогатого скота по 11 системам эритроцитар-ных антигенов. Предлагаемая технология, использует откормочных быков для продукции гемолитических сывороток, иммуностимулятор (а. с. N 1704767, СССР, 1692 г.), бое некую кровь для иммуноадсср-бции, фракционную изоляцию антител и последующее их элюирование (а. С. N 1405755, СССР, 1988 г.).

2. Создание информативного банка реагентов повысило эффективность генетического нюнитерирования при разведении скота, расширило возможности его генотипирования, повысило разрешающую способность генетических маркеров при экспертизе происхождения. Это также позволило установить внутри ЕДВ- и ЕАС-комплексов две закрытые системы - сублокусы ЕАВ-Р" и ЕАС-С". Для контроля происхождения быков, отбираемых на племпредприятия, для оценки по качеству потомства усовершенствован и внедрен метод экспертизы, дополнительно учитывающий маркеры отца матери (ОН) пробанда.

3. 11а основе изучения серологии и генетшш лимфоцитарных антигенов класса I главного комплекса гистосовместимости крупного рогатого скота (BoLA), разработана техника массовой генетической аттестации. Широкий наследственный полиморфизм антигенов, представляющих 17 специфичностей - VI, W2, W3, W4, V5, V6. 2/W18, V7, W8, W9, VIO, Vil, V12, V13, W16. V20 и V31, позволяет использовать их при контроле воспроизводства животных, при оценке генетического сходства популяций и молекулярно-таксономических взаимосвязей мевду породами в их никроэволюционном и филогенетическом развитии. Оценки генетических дистанций между популяциями, а таю® результаты генетического контроля воспроизводства крупного рогатого скота на основе BoLA-антигенов,являются не смещенными.

4. Разработан иммунофлуореспентный метод определения H-Y-антигена (антигена самцов) на живых пересаживаемых эмбрионах крупного рогатого скота {п-70) и лабораторных мышей. Установлена кросс-реактивность H-Y-типирухдах реагентов, полученных внутри-селезеночной иммунизацией инбредных мышей линии С57В1/6 (патент РФ N 2001627, 1993 г.). Аттестованные эмбрионы крупного рогатого скота распределились в соотношении 1:1 (31 H-Y+ и 39 H-Y-). После 24-х часовой инкубации в ФБС 37 из 40 (02. 5Х) H-Y-тшшрован-ных эмбрионов продолжили развитие. Приживаемость пересаженных эмбрионов скота после Н-Y-типирования составила 40Х. Лабораторные испытания на модельных эмбрионах мышей (п-101) покззаля 78.2Z точность метода определения пола по H-Y-антигену.

5. На основе вторичного иммунного ответа на ксеногенный раздражитель (антигены эритроцитов лошади) телята были дифференцированы на высоко-, средне- и низко-реагирующие типы. Титры (1ое2) гемолизинов у трех типов животных соответственно были равны - 10.4, 8. 5 и 6. 5.

6. С увеличением возраста телок черно-пестрой породы от' рождения до 12 месяцев различия в живой массе, связанные с уровнем гегероиммунного ответа', возрастали и достигали статистически значимых величин. Телки с низким уровнем иммунного ответа (1одг2 - 6.5) весили на 15.3 кг (Р<0.05) меньш, чем со средним уровнем

(log2 - 8,5). Различия по уровню удоя за первую лактацию (3702 и 37Р6 кг) у животных, дифференцированных в раннем возрасте по уровню иммунного ответа, были не значимыми.

Разработка метода учета интенсивности аллоиммуиного ответа у телят на эритроцитарные антигены позволила установить, что иммунная система телят до 1.5-месячного возраста,является незрелой, в возрасте 2-4 месяцев она слабореактивна, в 6-месячном возрасте-становится зрелой.

7. Генетическое маркирование и контроль происхождения 45.5 тыс. голов крупного рогатого скота черно-пестрых, палево-пестрых и бурых пород Московской, Тульской, Смоленской, Ярославской, Костромской, Тамбовской и других областей РФ позволило виранки-ровать животных с неизвестным происхождением, предотвратить стихийный инбридинг, исключить получение смещенных оценок племенной ценности быков-производителей.

8. Маркирование аллелофонда скота позволило определить межпородные различия, идентифицировать генетические группы, внутри-породные типы, отродья, стада, родственные группы, линии и отдельных животных. Эти результаты представляют интерес в связи с охраной прав авторов селекционных достижений и владельцев скота.

9. Определение генетических дистанций между 9 популяциями черно-пестрого скота Московского региона выявило минимальное генетическое расстояние и наибольшее сходство между быками ЦСИО и быками племпредприятий Московской области CD-0.028). Наибольшее генетическое расстояние было установлено между стадом коров племфермы "Иепецино" и популяцией голигинеких быков ЦСИО (D-0. 796).

В бурой швицкой породе минимальное генетическое расстояние было установлено между быками-производителями и коровами селекционных групп Смоленской области (D-0.074), а максимальное -между импортированными из США быками и племенными коровами Смоленской и Тульской областей <D-0. 526, D-0.520),

10. Иммуногенетические исследования крупного рогатого скота различных корней позволили разработать и внедрить концепцию генетического мониторинга и эоо маркерного анализа в скотоводстве. В стадах черно-пестрого, палево-пестporo и бурого скота установлено замещение маркерных генов низкопродуктивных животных на высокопродуктивные гены, привносимые быками голлггинской и бурой епвицкой породы североамериканской селекции.

■Sill. Генетический мониторинг и воомаркерный анализ показали, что у черно-нестрого скота нового московского типа гены, определявшие удой, распределены неравномерно по отношению к ЕАВ-локусу (81 - 249 кг молока), а гены жирномолочности - равномерно (0.02 - о. ОЗХ). Генетическое маркирование черно-пестрого скота эффективно в связи с селекцией по удою. ,

6. Предложения производству. О целью шноокого внедрения в '■ скотоводство методов генетического мониторинга и зоомар!«рного анализа необходимо :

1. Шести в инструкцию по оценке быков производителей и планы селекционно племенной работы раздел "Генетический мониторинг быков по качеству потомства" для прогнозирования продуктивности потомства, правильного отбора и подбора животных, повышения эффекта селекции в 1,2 - 1.3 раза, удоя дочерей на 6 - 10Х в стадах с уровнем 4000 - 6000 кг молока.

2. В Московском регионе при получении высокопродуктивных животных черно-пестрого скота с удоем 6000 - 10000 кг молока рекомендуем использовать генотипы, маркированные ЕАВ-аллеля><и -G2Y2E'1Q', 04Y2A* 1, 02A'2J*1K*0*. Q*, B201Y2D', 04E'3G", Ol, 12, G201Y2, 04Y2D*E' 1F*0*, 04D'E'1F*<3'0'. Gill, Bill.

3. Предприятиям биопромышленности Минсельхозпрода России, фирмам биотехнологического профиля предлагаем для внедрения :

а) технологию создания банка стандартных реагентов для выявления 84 эритроцитарных антигенов 11 генетических систем (а.с. N 1405755, СССР, 1S88 Г.);

б) технологию создания банка реагентов для идентификации 17 лимфоцитарных антигенов класса I главного комплекса гистосовмес-тимости крупного рогатого скота (BoLA);

в) технологию производства реагентов для идентификации пола у пересаживаемых эмбрионов млекопитающих (патент РФ N 2001627, 1903 г.);

г) технологию получения иммуностимулятора "Нитра-1" для увеличения выхода деловой гипериммунной сыворотки (а. с. N 1704787, СССР. 1992 г. );

д) микрометод постановки серологических тестов, снижающий расход реагентов в 20 раз.

- 32 -

Результаты исследований по теме опубликованы в 24 работах:

1. Еукаров & Г. Антигены гистосовместимости сельскохозяйственных животных // с'езд ЮГИС им. Н. И. Вавилова, Тезисы докладов. Н. - 1982. -С . 202-203.

2. Еукаров а Г. Биологические маркеры в разведении крупного рогатого скота // Сельское хозяйство за рубежом. - 1984., -И 10 -а 43-46.

3. Еукаров Н.Г. сценка племенной ценности молочного скота с использованием программируем« микрокалькуляторов // Биометрическая генетика и системный анализ в животноводстве. Скальски двор. ЧСФР. - 1988. - а 27-35.

4. Еукаров а Г. Разработка принципов аоомаркерного анализа при совершенствовании крупного рогатого скота // Тезисы Международной конференции "Модекулярво-генетические маркеры животных". Киев,- 1994.-С. 54.

5. Еукаров а Г. Результаты деятельности совместной чехосло-вадко-советекой лаборатории по биотехнологии в животноводстве. Агрокомплекс-Нитра, 1988. -С, 36-42.

6. Еукаров а Г. Способ получения Н-У антисыворотки для определения пола при пересадке эмбрионов. Патент РФ N2001627 от За 10.1993 Г.

7. Еукаров а Г. Эффективность и перспективы использования микрометодов в иммуногенетических исследованиях крупного рогатого скота // Иммуногенетика и селекция сельскохозяйственных животных. М. - 1986. - С. 75-78.

8. Еукаров а Г., ЛЬсь а Ф. Анализ групп крови и продуктивности дочерей быков разных генотипов // Междунар, симпозиум. Молекулярная генетика и биотехнология в оценке и изменении геномов сельскохозяйственных животных. Санкт-Петербург - Пушкин. -1994.-С. 102-103.

9. Букаров а Г.. Сороковой а Ф. Антигены совместимости тканей крупного рогатого скота - новый класс иммуногенетических маркеров //Об. науч. трудов / ВНИИРГЯ. -С. 1985.-С. 110-116.

10. Букаров а Г., Сороковой П. Ф. Эффективность генетического маркирования крупного рогатого скота по типам крови // Животноводство. - 1987.- N7.-0. 19-21.

11. Букаров а Г., Краварик Л-, Ковач а , Еулла И., Графенау а . Овчинников А. В., Сороковой а ф. Способ получения иммуноглобулинов. Авт. свид. N1704787 (СССР). Опубликовано в Б. И. М2, 1992.

12. Методические рекомендации по выведению линий черно-пестрого скота нового типа / ЕИЖ. сост.: Карликов Д. В., Петля ков А. Т.. Стрекозов а И. и др. , Дубровицы, - 1987. 45с.

13. Смирнов О. К. . Сороковой П. Ф. , Букаров Н. Г. » Будникова А. В., Храпковский А.И. , Пасечник А.П. Мясная продуктивность помесного крупного рогатого скота под влиянием сочетаемости родительских пар по генетической и биохимической индивидуальности // С/К биология. - 1981.- N5.-С. 661-666. ■

14. Сороковой EÍ., Еукаров Н.Г. Анализ молочной продуктивности коров черно-пестрой породы по иммуногенетическим маркерам // Бюллетень научных работ / ВИЖ. - 198а Выпуск 69.-С. 31- 36.

15. Сороковой П. Ф., букаров Н.Г. Генетические особенности черно-пестрого и голаггинского скота // Иммуногенетика и селекция сельскохозяйственных животных. М. - 1985.-С. 7-14.

16. Сороковой П. Ф, , Букаров Н. Г. Иммуногенэтический контроль происхождения глемеиного крупного рогатого скота // Информ. лист. - N. 331 -85. ЦНТИ. М. - 1985. -С. . 1-3.

17. сороковой П.Ф., Букаров Н.Г. Итоги и перспективные направления иммуногенетических исследований в племенном скотоводстве // Бюллетень научных работ / ВИЖ. - 1986. Еып. 47. -с. 64-70.

18. Сороковой П.Ф. . Букаров Н. Г; Оценка сочетаемости наследственных факторов по генетическим маркерам, // Животноводство. - 1387.- N1,- С. 23-24.

19. сороковой П. Ф., Букаров Н. Г. Способ получения реагентов для определения наследственных антигенов групп крови животных. АВТ. СВИД, N1405755 (СССР). Опубл. В Б. И. »24. 1988.

20. Сороковой П. Ф. . Еукеров Н. Г., Чернушенко а К. , Машуров А. М. . Семенов В. А. Использование генетических маркеров для выбора оптимальных параметров наследственной изменчивости при селекции молочного скота // XXXIII ежегодная конф. Европейской Ассоциации по жив-ву. - 1982.-С. 1-10.

21. Bukarov N, Viuzitie ímunoeenetiky pre raspracovani novych metod siachteni ja hovedzteho dobytka // Biotechnol. v Polnohospod. CSVTS. B. Bystryca CSSR. 1987, s. 138-145.

22. Bukarov H.G. , Bulla J. 1 irenunofluorescarit identification of male-specific antigen on pre implantation mouse embryos // 4-th Franko-Czechoslovak meeting: "Trought the oocyte to the enfcryo". Praque. 1990. p. 69.

23. Bukarov N.a. Bulla J., Windtsh V. et al.. Immunogenetic method of sex 1 ng pre i mplantat 1 on eirbryos against the H-Y antigen // Monsanto seminar. CSFR. Ultra. 1990. p. 34-41.

24. Bukarov N. G. . Semanova № L. , Bukarova V.l. Imunogeneticka metoda urcovania pohlavia transplantovanych eirbryi prt pouztti polyklonalnych a monoklonalnych H-Y protilatok // Veterinarstvi. 1989, Mil. s.510-511.

Ноютссно г.и"сг;т Т^.О^.Т^Э^г. • Объем *г,~ у*г.изл.гг^ст

7£каэ * т3:>_"г> экз.

Участок по ялграфкп р.'ССГ"™