автореферат диссертации по технологии, машинам и оборудованию лесозаготовок, лесного хозяйства, деревопереработки и химической переработки биомассы дерева, 05.21.03, диссертация на тему:Трансформация коры древесных пород грибом рода Trichoderma и получение биопрепарата

На правах рукописи

Лунёва Татьяна Анатольевна

ТРАНСФОРМАЦИЯ КОРЫ ДРЕВЕСНЫХ ПОРОД ГРИБОМ РОДА ТШСНОБЕЯМА И ПОЛУЧЕНИЕ БИОПРЕПАРАТА

05.21.03 - Технология и оборудование химической переработки биомассы дерева, химия древесины

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

Красноярск - 2008 г.

003449936

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Сибирский государственный технологический университет» на кафедре химической технологии древесины и биотехнологии

Научный руководитель:

доктор технических наук, профессор Рязанова Татьяна Васильевна

Официальные оппоненты:

доктор химических наук Лоскутов Сергей Реджинальдович

кандидат технических наук, доцент Ушанова Валентина Михайловна

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Алтайский государственный

технический университет»

Защита диссертации состоится « 14 » ноября 2008 г. в 15°° ч. на заседании диссертационного совета Д 212.253.01 при ГОУ ВПО «Сибирский государственный технологический университет».

Отзыв (в двух экземплярах) с заверенными подписями просим направлять ученому секретарю диссертационного совета по адресу: 660049, г. Красноярск, пр. Мира, 82. Тел./факс (391)266-03-90.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Сибирского государственного технологического университета.

Автореферат разослан « » 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, к.х.н.

Исаева Е.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Россия является одной из ведущих стран мира по объему заготавливаемой древесины. При существующих способах переработки древесного сырья в целом по России полезно используется около половины, а в сибирском регионе - лишь третья часть биомассы дерева. Большая часть отходов скапливается на территориях предприятий, представляя определенную пожарную опасность, а вымываемые атмосферными осадками кислые агенты мигрируют в почву, а далее - в грунтовые воды, создавая угрозу обширного загрязнения прилегающей к предприятиям территории. Необходимость утилизации отходов лесоперерабатывающей промышленности является одной из важнейших экологических проблем.

Утилизация отходов окорки древесины базируется в основном на применении химических и термических способов переработки. Альтернативным вариантом как с экономической, так и экологической точки зрения является их биотехнологическая переработка. Немаловажной задачей на сегодняшний день является разработка биологических методов по ограничению развития организмов, наносящих значительный ущерб в сельском и лесном хозяйствах. По распространенности заболеваний возделываемых культур в Средней Сибири и причиняемому ущербу первое место принадлежит грибным заболеваниям, инфекционное начало которых сохраняется в почве и на растительных остатках. Доминирующее положение в успешном регулировании численности популяций фитопатогенов и получении противогрибных препаратов занимают виды Тпскойегта, обладающие высокой антагонистической и гиперпаразитической активностью. На основе различных штаммов этих грибов в нашей стране и за рубежом созданы биопрепараты - триходермины, применяемые для борьбы с широким спектром фитопатогенов растений.

Проблема ресурсов доступного и дешевого сырья для промышленной биотехнологии остается весьма актуальной, поэтому перспективным является использование различных отходов лигноцеллюлозной природы в качестве субстрата при получении биопрепарата на основе гриба рода ТгкИоЛегта.

Особенность гриба разлагать наряду с целлюлозой лигниновые вещества ставит его в ряд агентов, способных трансформировать растительное сырье древесного происхождения, и позволяет в перспективе использовать эту способность для создания технологии переработки древесных отходов и получения биопрепаратов защитного действия. Управление данным процессом, его использование в промышленных масштабах возможно только при установлении механизмов воздействия микромицетов на растительный комплекс, а также влияния свойств субстрата и технологических параметров на качество биопрепарата.

Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы - установить влияние микробиологического воздействия на состав и свойства коры древесины хвойных и лиственных пород на примере гриба рода Тпс}гос1егта; разработать условия культивирования и предложить технологическую схему получения биопрепарата типа Триходермин с использованием в качестве субстрата коры лиственницы и березы.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

- установить влияние способа подготовки коры, а также продолжительности культивирования гриба рода ТпсИо<1егта на интенсивность спорообразования и изменение химического состава субстрата;

- изучить воздействие гриба рода ТпсИо(1егта на целлюлозу и лигнин, входящих в состав лиственничной и березовой коры;

- осуществить подбор комбинированных субстратов с целью интенсификации процесса биоконверсии;

- разработать технологическую схему получения биопрепарата на лиственничной и березовой коре и дать экономическую оценку эффективности их производства.

Научная новизна. С использованием методов химического, элементного и рентгенографического анализов, УФ- и ИК-спектроскопии получены сведения о биотрансформации целлюлозы и лигнина в составе коры лиственницы и березы под действием гриба рода Тпскойегта. Впервые получены и сопоставлены количественные характеристики лигнинов коры лиственницы и березы, рассчитаны эмпирические формулы мономерного фенилпропаноидного звена диоксанлигнинов до и после биодеструкции. Установлены факты интенсификации процесса биоконверсии. Получены новые формы биопрепаратов на основе коры лиственницы и березы. Сложившиеся в результате исследований представления о процессах деструкции грибом рода Тпс1юс1егта лигнина и целлюлозы, входящих в состав коры древесных пород вносят существенный вклад в научные основы технологии конверсии лигноуглеводных материалов.

Практическая значимость работы. Предложены комбинированные растительные субстраты для твердофазной ферментации с целью получения биопрепаратов типа Триходермин. Разработана технологическая схема получения биопрепарата на основе штамма «МГ-97/6» с использованием в качестве субстрата коры лиственницы, березы и торфоцеолитовой смеси. Наработана опытная партия биопрепарата типа Триходермин с использованием комбинированного субстрата, апробированная в полевых испытаниях при высадке картофеля в Красноярском крае. Показано положительное влияние биопрепарата на увеличение урожайности картофеля.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы докладывались и обсуждались на конференциях: всероссийских - «Современные проблемы математики и естествознания» (Нижний Новгород, 2004); «Химико-лесной комплекс - проблемы и решения» (Красноярск, 2004 - 2006); «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2005, 2007); «Новые экологобезопасные технологии для устойчивого развития регионов Сибири» (Улан-Удэ, 2005); «Химия и химическая технология в XXI веке» (Томск, 2006).

Работа выполнена в соответствии с планом НИР ГОУ ВПО «Сибирский государственный технологический университет» по теме: «Разработка теоретических основ биоконверсии растительного сырья и получение средств защиты растений» № ГР 0199000861 (2004 - 2009 гг.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 13 печатных работ, в том числе статья в журнале, рекомендованном ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, результатов и их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 140 страницах, содержит 14 рисунков и 18 таблиц. Список литературы включает 224 источника, из них 34 работы зарубежных авторов.

ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В качестве объектов исследования выбраны: кора лиственницы сибирской (Larix sibirica Ledeb.) и лубяная часть коры березы повислой {Betula pendula Roth.). Эти два вида древесных субстратов относятся к различным ботаническим группам. Взяты для исследования на том основании, что лиственница относится к одной из самой распространенной в Сибири, но малоутилизируе-мой породе. Кора березы интересна в связи с возобновлением развития в Красноярском крае лесопромышленных комплексов по производству фанеры и древесного угля и как следствие увеличением объема отходов окорки.

В качестве биологического объекта выбран штамм "МГ—97/6" Tricho-derma asperellum Samuels ВКПМ F-765, выделенный в 2000 г. исследователями Садыковой B.C. и др. под руководством профессора Лихачева А.Н. путем изолирования моноспоровых культур из штамма "МГ-97", выделенного из почвы Маганского лесопитомника в 1997 г.. Данный штамм обладает целлюлолитиче-ской активностью, максимум которой на коре и одубине коры лиственницы, составляет 75,4 и 55,4 усл.ед/г а.с.с. соответственно. Способен активно синтезировать на коре лиственницы, в меньшей степени на лиственничной одубине, лакказу и пероксидазу.

Подготовку сырья осуществляли путем измельчения коры лиственницы и луба березы на установке дезинтеграторного типа. Лиственничную кору дополнительно измельчали на установке гидродинамического размола типа «струя преграда», а также подвергали экстракции 1,5 %-м раствором гидроокиси натрия в 15 %-м спиртовом растворе.

Подготовленные субстраты стерилизовали и засевали мицелиальной суспензией гриба в количестве 1 • 106 спор на 1 г абсолютно сухой массы субстрата (а.с.с.). В качестве дополнительного источника минерального питания в субстраты вносили NaNÜ3 в количестве 3 % от а.с.с.. Гриб культивировали в чашках Петри при начальном pH 6,5, влажности 75-80 %, температуре 25-27 °С.

Численность микроорганизмов определяли по стандартной методике с использованием камеры Горяева. Потерю массы биобработанных субстратов оценивали весовым методом, учитывая влажность субстратов до и после биодеструкции.

Химический состав субстратов устанавливали по методикам, принятым в химии растительного сырья. Полисахариды определяли по методу Кизеля и Семигановского. Содержание лигнина определяли по методу Класона в модификации Комарова; гуминовых веществ - после обработки 2 % NaOH.

Препараты целлюлоз из исходной и биообработанной коры древесных пород выделяли по методу Кюршнера и Хоффера, основанном на обработке растительного материала этанольным раствором азотной кислоты. Степень полимеризации целлюлозы определяли вискозиметрическим методом в железо-виннонатриевом комплексе (ЖВНК); медное число целлюлозы объемным методом по количеству закиси меди; степень кристалличности целлюлозы - методом рентгеновской дифрактометрии и ИК-спектроскопии с Фурье преобразованием.

Препараты диоксанлигнинов из исходной и биообработанной коры древесных пород выделяли по методу Пеппера в токе азота. Элементный состав диоксанлигнинов изучали с помощью газового хроматографического анализа и по методу Либиха. Количество метоксильных групп определяли по методу Цейзеля с применением ГЖХ на приборе «ЛХМ - 80» с пламенно-ионизационным детектором на колонке с БЕ-ЗО. Общее содержание функциональных групп (-ОНфеи, -ОНал, -СООН) определяли методами количественного химического анализа. Ароматическую структуру диоксанлигнинов устанавливали с помощью абсорбционной спектроскопии при 230-360 нм на спектрофотометре СФ-26. ИК-спектры диоксанлигнинов регистрировали на спектрометре «Инфролюм ФТ-02» в области длин волн 400-4000 см"1 в виде таблеток КВг.

Статистическую обработку проводили по стандартным методикам. Для полученных результатов рассчитывали среднее арифметическое, ошибку средней арифметической. Достоверность различий рассчитывали при доверительной вероятности Р=0,95.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ Влияние предварительной обработки на химический состав лиственничной и березовой коры

Известно, что микроскопические грибы рода Тг1скос1егта способны активно участвовать в деструкции лигноцеллюлозных отходов предприятий лесопромышленного комплекса. Возможность освоения субстрата, степень его трансформации, морфологические параметры роста, интенсивность спорообразования гриба тесно связаны с природой субстрата и степенью его подготовки. Одним из обязательных способов подготовки является механическая обработка (сухой размол), заключающаяся в измельчении сырья, что позволяет значительно увеличить поверхность контакта без изменения его химического состава. Степень помола березовой и лиственничной коры составила 6 °ШР. Для увеличения поверхности контакта субстрата с грибом Т.аярегеНит лиственничную кору со степенью помола 6 °ШР подвергали дополнительной гидродинамической обработке, достигая степени помола 35-42 °ШР. Известно, что способность микроорганизмов утилизировать лигноцеллюлозные субстраты ограничена присутствием веществ фенольного характера. В качестве субстрата, где максимально удалены растворимые соединения фенольной природы, использовали одубину коры лиственницы.

Химический состав коры и одубины приведен в таблице 1.

Таблица 1 - Химический состав коры и одубины

Наименование компонента Содержание, % а.с.с.

лубяная часть коры березы со степенью помола 6°ШР кора лиственницы со степенью помола 6°ШР кора лиственницы со степенью помола 35-42 °ШР яиственничная одубина со степенью помола 6°ШР

Минеральные вещества 1,69 2,42 2,01 2,00

Водорастворимые вещества 12,63 11,38 9,83 4,16

Легкогидролизуемые полисахариды 26,29 12,33 11,94 15,31

Трудногидролизуемые полисахариды 20,79 32,99 30,24 41,02

Всего полисахаридов 47,08 45,32 42,18 56,33

Лигниновые вещества 39,13 43,31 46,18 31,09

Анализируя химический состав коры хвойной и лиственной породы можно говорить о том, что по содержанию ЛТП, являющихся более доступными из полисахаридов, наиболее благоприятным субстратом для культивирования гриба рода ТпскоЛегта является лубяная часть коры березы, в которой содержание ЛГП в 2 раза выше, чем в остальных исследуемых субстратах. Оценка влияния предварительной подготовки лиственничной коры показала, что как гидродинамическая, так и химическая обработка способствует извлечению веществ фе-нольного характера, на что указывает снижение содержания водорастворимых и лигниновых веществ. Между тем, как показал химический анализ углеводов, спирто-щелочная обработка способствует извлечению и более доступных углеводов, таких как моносахариды, целлобиоза, олигосахариды, общее содержание которых снижается в 1,66 раз.

Указанные изменения в химическом составе коры, происходящие в результате предварительной подготовки, несомненно будут отражаться на способности гриба Т.азрегеИит трансформировать древесное сырье. Свидетельством чего являются химический состав биодеструктированных субстратов и интенсивность спорообразования гриба.

Влияние продолжительности культивирования на интенсивность спорообразования гриба рода ТпсИоёегта и химический состав древесных субстратов

Изучение влияния продолжительности культивирования гриба позволяет установить оптимальные сроки трансформации древесных субстратов и максимум роста гриба-продуцента, что в дальнейшем способствует интенсификации процесса биоконверсии.

Об эффективности воздействия ферментного комплекса гриба на лигно-углеводные субстраты можно судить по изменению их компонентного состава и убыли массы субстратов в результате культивирования штамма «МГ-97/6» T.asperellum.

Биоконверсию луба березы, коры лиственницы со степенью помола 6 °ШР и 35-42 IUP вели в течение 17-ти суток, с отбором проб на 4-е, 7-е, 10-е и 17-е сутки культивирования гриба, лиственничной одубины - в течение 28-ми суток с отбором проб на 8-е, 14-е, 22-е и 28-е сутки.

В таблице 2 приведены химический состав и убыль массы биодеструкти-рованного луба березы и коры лиственницы со степенью помола 6 °ШР. Химический состав субстратов приведен с учетом коэффициента убыли массы.

Таблица 2 - Химический состав и убыль массы биодеструктированных луба березы и коры лиственницы со степенью помола 6 °ШР_

Показатель Содержание, % а.с.с.

4 сут. 7 сут. 10 сут. 17 сут.

Минеральные вещества 2.98 3,10 2,81 3,15 2,80 3,21 2,67 3,45

Водорастворимые вещества 7.15 11,27 4,53 11,02 4,60 10,23 4,42 7,62

Легкогидролизуемые полисахариды 15.65 11,26 15,42 11,22 15,25 11,09 15,09 11,13

Трудногидролизуемые полисахариды 17,60 19,19 17,51 19,11 17,15 19,03 17,01 18,89

Всего полисахаридов 33,25 30,45 32,93 30,33 30,78 30,12 32,10 30,02

Лигниновые вещества 38,38 40,15 37,62 39,95 37,58 39,51 37,56 39,50

Гуминовые вещества 10,15 15,83 10,20 16,54 11,00 16,60 11,05 16,79

Убыль массы 8,39 8,48 14,18 9,52 15,43 10,34 19,15 10,53

Примечание - числитель — луб березы, знаменатель - кора лиственницы со степенью помола 6 °ШР

Как видно из результатов, приведенных в таблице 2, луб березы более подвержен воздействию ферментного комплекса гриба, чем кора лиственницы. Наибольшая убыль массы отмечена на 17-е сутки культивирования гриба на лубе березовой коры, что составляет 19,15 %. Установлено, что изменение содержания основных компонентов коры не имеет строго определенной зависимости от продолжительности культивирования гриба, а определяется, прежде всего, видовой принадлежностью древесного сырья.

Так, активное снижение содержания водорастворимых веществ луба березовой коры отмечено на седьмые сутки культивирования гриба, с использо-

ванием коры лиственницы - на 17-е сутки. Не исключено, что данный факт связан с меньшим содержанием в лубе березовой коры веществ фенольной природы, на что указывают литературные данные. Максимум снижения содержания полисахаридной части отмечен на четвертые сутки культивирования гриба, причем в лиственничной коре наиболее подвержены ферментативному воздействию ТГП, в лубе березы - ЛТП.

Культивирование штамма «МГ-97/6» Т.азреге11ит приводит к снижению в субстратах не только полисахаридов, но и лигниновых веществ, что сопровождается образованием веществ гуминовой природы, наибольшее количество которых отмечено на лиственничной коре.

В таблице 3 приведены химический состав и убыль массы биодеструкти-рованной коры лиственницы со степенью помола 35-42 °ШР и лиственничной одубины.

Таблица 3 - Химический состав и убыль массы биодеструктированных коры лиственницы со степенью помола 35-42 °ШР и лиственничной одубины

Показатель Содержание, % а.с.с.

4 cvt. 8 сут. 7 сут. 14 сут. 10 сут. 22 сут. 17 сут. 28 сут.

Минеральные вещества 3,60 4,47 3,43 5,53 3.38 5,84 3.31 5,84

Водорастворимые вещества 8.11 6,58 7.26 8,61 5.15 8,73 6,99 8,74

Легкогидролизуемые полисахариды 10,25 13,72 9,07 12,60 9.26 12,97 8.56 13,01

Трудногидролизуемые полисахариды 22,56 33,96 21,13 29,92 20,75 28,75 19,49 28,70

Всего полисахаридов 32,81 47,68 30,20 45,52 30,01 41,72 28,05 41,70

Лигниновые вещества 45,23 23,29 45,11 22,44 44,78 22,10 44,99 22,14

Гуминовые вещества 14,11 6,79 14,17 8,82 15,25 9,03 15,44 9,10

Убыль массы 9,09 11,56 9.97 12,37 11,75 12,80 12,09 12,94

Примечание - числитель - кора лиственницы со степенью помола 35-42 °ШР, знаменатель - лиственничная одубина

Количественное изменение ЛГП и ТТЛ лиственничной коры, подвергнутой гидродинамической обработке, идет вплоть до седьмых суток культивирования гриба, в отличие от коры «сухого» помола, где активная деструкция полисахаридов ограничена четырьмя сутками. Наряду с уменьшением полисахаридной части субстрата в этот период отмечено активное снижение веществ, растворимых в горячей воде. Активные изменения, происходящие в полисаха-

ридной и лигниновой частях субстрата сопровождаются интенсивным накоплением гуминовых веществ.

Химическая обработка коры лиственницы 6 °ШР помола приводит к более активному воздействию ферментативного комплекса гриба на субстрат, о чем свидетельствует более высокий показатель убыли массы в сравнении с корой «сухого» и гидродинамического размола. Химическая активация лиственничной коры способствует интенсивному снижению лигниновых веществ на протяжении 8-ми суток культивирования гриба. Анализ фракционного состава углеводов лиственничной одубины до и после биоконверсии показал, что под действием штамма «МГ-97/6» Т.аярегеЦит наибольшей деструкции подверглись вещества, которые с физиолого-биохимической точки зрения являются наиболее доступными ферментативному комплексу гриба - целлобиоза, олиго-сахариды, моносахариды, содержание которых снизилось на 2 %. Вместе с тем наблюдается значительное увеличение количества водорастворимых веществ, что возможно связано с разрушением легкодоступных полисахаридов до моносахаридов, которые переходят в группу веществ, экстрагируемых водой. Несмотря на активную деструкцию полисахаридной и лигниновой частей лиственничной одубины, накопление гуминовых веществ происходит менее значительно по сравнению с другими субстратами на протяжении всего срока биоконверсии.

Так как основным показателем качества готового биопрепарата является титр спор, то немаловажной задачей явилась оценка влияния продолжительности культивирования на интенсивность спорообразования штамма «МГ-97/6» Т.азрегеИит на лиственничной и березовой коре. Показатели конидиегенеза представлены в таблице 4.

Таблица 4 - Динамика конидиегенеза штамма «МГ-97/6» ТПсИо(1егта сярегеИит на исследуемых субстратах_____

Выход спор, • 10s т'1

Продол- лубяная часть кора лиственни- кора лиственни- лиственничная

житель- коры березы цы со степенью цы со степенью одубина

ность со степенью помола помола со степенью по-

культиви- помола 6°ШР 35-42 °ШР мола

рования, 6°ШР 6°ШР

сут

4 0,28±0,02 0,11±0,04 0,18±0,05 -

7 3,77±0,03 1,63±0,05 3,25±0,02 -

8 ■ - - 0,22±0,02

10 3,88±0,01 2,77±0.02 3,60±0,02 -

14 - - - 0,29±0,05

17 3,58±0,04 1,86±0,02 2,11±0,03 -

22 - - - 0,29±0,06

28 - - - 0,29±0,04

и

Следует отметить, более раннее начало (четвертые сутки) конидиегенеза штамма «МГ-97/6» Т.а.чрегеПит на березовой и лиственничной коре, в сравнении с лиственничной одубиной, где спороношение отмечено только на восьмые сутки.

Максимум роста конидий на коре различного градуса помола отмечен на 10-е сутки, на одубине - на 14-е. Увеличение продолжительности культивирования гриба приводит либо к снижению, либо к стабилизации (лиственничная одубина) роста спор, по-видимому, за счет накоплений ингибиторов роста. К числу ингибиторов относятся продукты метаболизма гриба - органических кислоты (пировиноградная, уксусная, щавелевая, глюконовая и лимонная кислоты), и низкомолекулярные продукты ферментативного гидролиза целлюлозы субстратов.

Сравнительный анализ содержания структурных компонентов и динамики конидиегенеза показал, что максимум спорообразования на коре, не зависимо от градуса помола, отмечен на 10-е сутки, на одубине - на 14-е, что не совпадает с максимумом убыли массы полисахаридной и лигниновой части исследуемых субстратов, который отмечен на 4-7-е сутки культивирования гриба.

Деструкция целлюлозы древесных субстратов под действием гриба рода Тпскойегта Известно, что целлюлолитические ферменты гриба не могут проникать во внутренние структуры фибрилл целлюлозы, они действуют только на ее поверхности. Число гликозидных связей, доступных действию ферментов, зависит в значительной мере от степени набухания целлюлозы. Между тем, увеличение реакционной способности целлюлозы неотрывно связано с предварительной обработкой древесного сырья. Кроме того, существенное влияние на подверженность воздействию ферментного комплекса оказывает присутствие в субстрате ингибиторов, в частности веществ фенольного характера.

Для решения поставленной задачи из исходных лиственничной и березовой коры, а также субстратов, подвергнутых конверсии в течение 10-ти суток, а лиственничной одубины - в течение 14-ти суток, выделены препараты целлюлозы по методу Кюршнера и Хоффера.

Для изучения влияния гриба рода Т.сярегеИит на собственно целлюлозу в отсутствии фенольного комплекса, нами проведена биодеструкция препаратов целлюлоз, выделенных из коры лиственницы 6 °ШР помола и луба березы. Процесс проводили в условиях, аналогичных культивированию штаммом «МГ-97/6» ТмярегеИит на субстратах коры. Выход конидий на 10-е сутки культивирования гриба на препаратах целлюлоз из коры лиственницы и луба березы составил 12,40-Ю9 и 11,99-109 спор/г а.с.м. соответственно, что в 3 раза выше, чем на исходных субстратах. Убыль массы биодеструктированных препаратов целлюлоз обоих субстратов составила около 10 %. В таблице 5 представлены физико-химические характеристики препаратов целлюлоз.

Полученные результаты дают основание утверждать, что как гидродинамическая, так и химическая обработка коры лиственницы приводит к снижению степени полимеризации целлюлозы в 3 раза.

Таблица 5 - Физико-химические характеристики препаратов целлюлоз, выделенных из субстратов до и после биоконверсии __

Наименование объекта Выход целлюлозы, % а.с.с. Выход D-глюкозы, % а.с.с. Медное число, г Си20/ 100 г. а.с. целлюлозы Степень полимеризации 1 Молекулярная масса

Луб березы 19,64 15,53* 97,33 97,54* 6.25 7,04 479 394 77598 63828

Кора лиственницы (6 °ШР) 29,60 17,69* 97,85 98,23* 5,47 6,21 644 429 104328 69498

Кора лиственницы (35-42 °ШР) 28,34 19,32* 98,01 98,97* 7.74 8,11 211 122 34182 19764

Одубина коры лиственницы Примечание - числител знаменатель - показател i 37,93 28,90* ь - пока ь после 95,05 93,49* затель до бис биоконверси 7,58 8,21 жонверсии; и, *-с учето 214 84 м убыли м: 34668 13608 1ссы

Увеличение реакционной способности лиственничной коры путем удаления растворимых фенольных соединений (химическая обработка) приводит к активному воздействию комплекса целлюлолитических ферментов гриба Т.аврегеИит, на что указывает снижение степени полимеризации целлюлозы (в 2,6 раза) в сравнении с исходным. Степень полимеризации биодеструктирован-ных препаратов целлюлоз луба березы и лиственничной коры 6 °ШР помола, выделенной из остальных биологически разрушенных субстратов, по сравнению с исходными снижается в 1,2-1,7 раза. Воздействие гриба Т.азрегеНит на чистые препараты целлюлоз в сравнении с целлюлозой, находящейся в вышеназванных субстратах (таблица 5) практически не приводит к изменению степени полимеризации.

Исследование топологической структуры целлюлозы луба березы и коры лиственницы 6 °ШР помола до и после биоконверсии методом рентгеновской дифрактометрии и ИК-спектроскопии с Фурье преобразованием позволяет количественно выразить степень кристалличности целлюлозы (Кр).

Целлюлоза, выделенная из коры лиственницы, в меньшей степени амор-физирована по сравнению с целлюлозой луба березы, показатель Кр составляет 0,41 и 0,38 соответственно. Различия в соотношении аморфных и кристаллических участков целлюлоз лиственницы и березы отражаются на глубине ферментативного гидролиза. Культивирование штамма «МГ-97/6» Т.азрегеПит на лубе березовой коры приводит к снижению степени кристалличности целлюлозы в 1,2 раза. На коре лиственницы со степенью помола 6 °ШР воздействие целлюлолитических ферментов гриба приводит к незначительному увеличению показателя Кр, - разница составляет 0,02 %. Это позволяет предположить, что в силу

более высокой реакционной способности на начальных сроках культивирования гриба аморфные участки целлюлозы как хвойной, так и лиственной коры гидролизуются быстрее, чем кристаллические, что и приводит к увеличению показателя Кр. По мере исчерпания аморфных участков целлюлозы атаке цел-люлазами подвергаются кристаллические участки, что сопровождается увеличением показателя Кр. Этот факт особенно характерен для луба березы.

Таким образом, результаты физико-химического анализа препаратов целлюлоз показывают, что предварительная обработка лиственничной коры способствует снижению степени полимеризации целлюлозы и увеличению ее реакционной способности, что отражается на глубине ферментативного гидролиза под действием целлюлолитических ферментов штамма «МГ—97/6» Т.азрегеНит.

Деструкция целлюлозы идет путем расщепления 1,4-р-гликозидной связи между остатками П-глюкозы на участках, удаленных от концов полимерной цепи. Это приводит к значительному снижению степени полимеризации целлюлозы (в 1,2-2,6 раза) и увеличению ее редуцирующей способности. При этом процесс ферментативного гидролиза целлюлозы луба березовой коры, в отличие от лиственничной, сопровождается некоторой аморфизацией кристаллических участков, на что указывает снижение индекса кристалличности целлюлозы.

Деструкция лигнина древесных субстратов грибом рода ТпсИойетта

Пути микробиологической деструкции лигнина, как показал анализ литературы, до настоящего времени остаются невыясненными, хотя и открыты многие реакции, в частности под действием базидиальных грибов, приводящие его к биотрансформации. Отсутствие литературных данных по изучению поведения лигнина под действием микроскопических грибов способствовало возникновению интереса и явилось одной из задач исследования.

Известно, что селективная лигниндеструктирующая способность грибов рода Trich.od.erma основана на наличии фенолоксидаз, характер воздействия которых зависит от специфичности субстратов, в данном случае от принадлежности к разным ботаническим группам.

Препараты лигнина выделяли по методу Пеппера путем обработки исходных субстратов смесью диоксан-вода (9:1) в присутствии НС1 (0,7 %), а также подвергнутых воздействию гриба Т.азрегеПит штамм «МГ-97/6» в течение 10-ти суток.

Сравнительный анализ содержания лигнина позволил установить, что воздействие гриба рода Trichoderma штамма «МГ-97/6» приводит к снижению содержания в коре лиственницы 6 °1ПР помола и лубе березы лигниновых веществ (таблица 2), при заметном возрастании количества лигнина, растворимого в диоксане. Так, выход диоксанлигнина биообработанной лиственничной коры 6 °ШР помола по сравнению с результатом до конверсии увеличивается в 1,7 раза, луба березы - в 1,4 раза. Увеличение выхода препаратов диоксанлигнинов хорошо коррелируется с результатами, полученными методом абсорбционной спектроскопии в УФ области спектра. Увеличение интенсивности поглощения в УФ-спектрах в области 275-280 нм водно-диоксановых растворов указывает на дополнительное появление низкомолекулярных ароматических соединений.

Для установления влияния гриба рода Т-аярегеИит штамма «МГ-97/6» на собственно лигнинную компоненту, нами была проведена биодеструкция препаратов диоксанлигнина, выделенных из коры лиственницы 6 °1ПР помола и луба березы. Выход конидий на препаратах диоксанлигнина коры лиственницы и луба березы в течение 10-ти суток культивирования гриба составляет 1,2МО9 и 1,59-10 спор/г а.с.м. соответственно, убыль массы около 3 %.

Элементный состав диоксанлигнинов, представленный в таблице 6, свидетельствует о том, что выделенные препараты характеризуются невысоким содержанием атомов кислорода, что указывает на невысокое содержание кислородсодержащих функциональных групп.

Таблица 6 — Элементный состав диоксанлигнинов

Наименование объекта для выделения диоксанлигнина С,% а.с.м. 0,% а.с.м. Н,% а.с.м. Сэ-формула

Луб березы 73,78 72,16 17,94 19,82 8,28 8,02 с0 НшО„ .»ГОСНОп 40(0%), ,„(ОНЛ 74ГСООШП П. С9Н8,48О0,09(ОСНз)0,2з(ОНф)0,42(ОНа),,04(СООН)0,06

Луб березы после биоконверсии 73,78 71,62 17,94 18,44 8,28 9,97 Со H^O^fOCIbV afl(OHtV ,л(ОШп nCCOOI п, с, н, ,,з40о,1б(ОСНзЬ8(ОНф)о,з7(ОНа)о,88(СООН)о,о5

Кора лиственницы (6 °ШР) 67,83 24,67 7,50 СоН7 07От(ОС1Ь)п „СОНфЬ ,7(ОН„)п 7<ifCOOH)oji7

66,07 26,26 7,20 С9Н8,7о01,о4(ОСНз)о,19(ОНф)о,27(ОН>)о,,2(СООН)о,,о

Кора лиственницы (6 °ШР) после биоконверсии 67,83 24,67 7,50 С,Н7 520ш(0СН^п пСОН^п „(ОНЛ, „CCOOHVya

65,47 27,04 7,45 С9Н,,,601,18(ОСНз)о,2о(ОНф)о.з4(ОНа)о.89(СООН)о,12

Примечание - числитель - показатель до биоконверсии; знаменатель - показатель после биоконверсии

Кроме того, следует отметить высокое содержание углерода (67,83 -73,78 % а.с.с.). Соотношение С:Н>9 подтверждает ароматическую природу полученных препаратов.

Ферментативное воздействие гриба Т.а$реге11ит штамм «МГ-97/6» на кору лиственницы и луб березы приводит к увеличению массовой доли кислорода и водорода, при заметном снижении углерода (таблица 6).

На основании полученных данных элементного (таблица 6) и функционального состава (таблица 7) диоксанлигнинов хвойных и лиственных пород нами вычислена средняя брутто-формула и развернутая эмпирическая формула их мономерного фенилпропаноидного звена. Молекулярные массы диоксанлигнинов лиственничной и лубяной части березовой коры при действии мик-ромицета, определенные расчетным путем, снижаются, что возможно говорит об отсутствии протекания поликонденсационных процессов.

Диоксанлигнин, выделенный из коры лиственницы 6 °ШР помола отличается

Таблица 7-Характеристика функционального состава диоксанлигнинов

Наименование объекта для выделения диоксанлигнина Содержание, % а.с.м.

-ОСНз -ОНобщ -ОНфен -ОН,,, -СООН

Луб березы 8.02 4,65 11,77 16,21 2.27 4,64 8.33 11,57 1.46 1,68

Луб березы после биоконверсии 8.02 5,58 11,77 13,16 2.27 4,05 8.33 9,71 1.46 1,48

Кора лиственницы (6 °ШР) 6,26 3,55 10,51 13,13 3.44 3,60 8.24 9,53 2,04 2,82

Кора лиственницы (6 °ШР) после биоконверсии 6.26 3,76 10,51 12,47 3.44 3,43 8.24 9,07 2,04 2,32

Примечание — числитель — показатель до биоконверсии; знаменатель - показатель после биоконверсии

от диоксанлигнина луба березы (таблица 7) не только меньшим содержанием ме-токсильных групп, что указывает на принадлежность к разным породам, но и большим содержанием карбоксильных, гидроксильных, то есть диоксанлигнин коры лиственницы является более окислешшм.

Процентное содержание в диоксанлигнинах метоксильных групп показало, что под действием микромицета их количество снижается в среднем в 1,4 -1,8 раза для диоксанлигнинов коры и луба березы, при заметном увеличении общих гидроксильных групп в 1,3, в 1,4 раза соответственно.

ИК-спектры исследуемых препаратов диоксанлигнинов содержат типичный для лигнинов ряд характерных полос в области: 3200-3600, 2940, 2870, 2860, 1600-1605, 1505-1515, 1370, 1330, 1270-1275, 1125-1135, 1220, 1143, 1075, 1034 см1.

Спектральный анализ диоксанлигнинов подтвердил, что деструкция лигнина сопровождается снижением содержания метоксильных групп, об этом свидетельствует относительное изменение интенсивности поглощения в области длин волн 3200-3600, 1370, 1220 см"1. О возможном разрыве связи Ca-Cß и окислении первичного гидроксила до карбоксильной группы свидетельствует увеличение содержания карбоксильных групп (таблица 7) и интенсивности поглощения в области 2940, 2860 см"1. Деструкция субстратов под действием ферментного комплекса микромицета, наряду с разрывом связи Ca-Cß, по-видимому, может приводить и к разрыву ароматического кольца в структурах лигнина, что подтверждается снижением интенсивности полосы поглощения в области длин 1605-1600 см"1 и 1515- 1505 см'1, повышению содержания кислорода и уменьшению степени ароматичности фенилпропановой единицы лигнина.

Таким образом, необходимо отметить, что трансформация лигнинов коры хвойной и лиственной пород под действием гриба рода T.asperellum «МГ-97/6» сопровождается окислительными реакциями и протекает по схеме, аналогичной схеме деструкции лигнинов под действием базидиомицетов, предложенной Медведевой С.А..

На основании проведенных исследований выявлено, что биодеструкти-рующая способность гриба зависит, во-первых, от вида и степени диспергирования растительного сырья, во-вторых, от продолжительности процесса биоконверсии. Максимальный выход гриба-продуцента (титр порядка 109 спор/г а.с.с.), а также накопление гуминовых веществ (от 18 до 19 %) в субстратах коры лиственницы и луба березы отмечены на 10-е сутки культивирования гриба Т.азрегеНит «МГ-97/6».

Получение биопрепарата на комбинированных субстратах Основное требование, предъявляемое к биологическим средствам защиты растений от патогенной микрофлоры, является не только селективность используемого гриба, но и его максимальная активность, которая непосредственно связана с субстратом, используемым для получения биопрепарата. Используемые в качестве субстрата древесные отходы являются источником питания не только для ТпсИос1егта, но и активизируют развитие сапротрофной антагонистической микобиоты. Для интенсификации процесса конидиегинеза и придания биопрепаратам не только свойств структурообразователя почвы, но и стимулятора роста растений необходимо иметь в составе субстрата компоненты, которые могут придать ему эти свойства.

В нашем случае получение биопрепарата, имеющего высокую биологическую активность в отношении фитопатогенов, а также способствующего стимуляции роста растений, возможно путем введения в субстраты на основе хвойной и лиственничной коры следующих природных компонентов:

- торф, обеспечивает грибу рода Тггс1гос1егта доступный источник углерода; при внесении в почву обеспечивает ее дренаж и является индуктором защиты растений от грибных инфекций и стимулирует рост растений;

- природный цеолит, служит дополнительным источником минерального питания для гриба рода Тпскос1егта; обладает ионообменными и адсорбционными свойствами, при внесении в почву является структурообразователем.

Получение комбинированных субстратов для твердофазной ферментации проводили путем механического смешивания лиственничной коры и луба березы с цеолитом Сахаптинского месторождения и торфоцеолитовой смесью. Доля коры в комбинированных субстратах составляет 80 %. Процентное соотношение торфа и цеолита в комбинированных субстратах приведено в таблице 8.

Таблица 8 - Содержание торфоцеолитовой смеси в комбинированных субстратах, %_ __

Древесный субстрат Цеолит Торф

1 Кора лиственницы со степенью помола 6 °ШР 20

2 Кора лиственницы со степенью помола 6 °ШР 4 16

3 Кора лиственницы со степенью помола 35-42 °ШР 4 16

4 Кора лиственницы со степенью помола 35-42 °ШР 10 10

5 Луб березы со степенью помола 6°ШР 20 -

6 Луб березы со степенью помола 6°ШР 4 16

Культивирование гриба ТпсУюйегта азрегеПит штамм «МГ-97/6» на комбинированных субстратах вели согласно методике в течение 10-ти суток. Установлено, что штамм «МГ-97/6» способен расти на всех исследуемых суб-

стратах, однако, продуктивность конидиегенеза была неодинаковой и варьировала (рисунок 1).

1 2 3 4 5 6

Субстрат

Рисунок 1 - Конидиегенез штамма «МГ-97/6» Т.ахрегеНит на комбинированных субстратах

Появление первого мицелия на субстрате 6 выявлено на вторые сутки культивирования, на остальных субстратах - на третьи. Массовое спороноше-ние штамма «МГ-97/6» Т.азрегеИит на всех субстратах отмечено на 10-е сутки.

Выход спор штамма рода ТпсИой\erma после 10-ти суток культивирования был значительно выше в 2-2,5 раза на комбинированных субстратах, в которые была внесена торфоцеолитовая смесь. Самый низкий выход спор отмечен на комбинированных субстратах с включением только цеолита.

Следует отметить, что введение в древесные субстраты торфоцеолитовой смеси способствует интенсификации роста спор гриба и гумификации сырья. Количественное содержание гуминовых веществ возрастает до 30 %.

Следует заключить, что интенсивность спорообразования у штамма «МГ-97/6» Т.аярегеИит тесно связана с природой субстрата. Внесение в древесное сырье смеси цеолита с торфом способствует лучшей аэрации субстрата, поддержанию оптимальной влажности, является дополнительным источником минеральных веществ и доступных углеводов, а это приводит к ускорению конидиегенеза и увеличению титра спор, максимальной гумификации древесного сырья, что является основным требованием, предъявляемым к биопрепаратам типа Триходермин и биогумусам.

Наработана опытная партия биопрепарата на основе короцеолитового субстрата и апробирована в полевых испытаниях при высадке картофеля сорта «Адретта» в с.Вечернице Емельяновского района Красноярского края. Показано положительное влияние биопрепарата на увеличение урожайности картофеля. Прирост урожая картофеля составил более 100 ц/га по сравнению с контролем (160,4 ц/га).

Результаты позволяют рекомендовать биопрепараты на основе березовой либо лиственничной коры 6 - (35-42) СШР с добавлением в древесную кору торфоцеолитовой смеси для производственных испытаний и предложить универсальную технологическую схему получения биопрепарата.

ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ Технологическая схема получения биопрепарата на основе комбинированных субстратах и технико-экономические показатели производства

Блок-схема получения биопрепарата представлена на рисунке 2. Схема является универсальной для использования в биотехнологическом процессе как коры 6 °ШР помола, так и коры со степенью помола 35-42 °ШР после экстракционного производства.

Рисунок 2 - Блок-схема получения биопрепарата

Измельченная кора загружается в стерилизатор, смешивается с торфоцео-литовой фракцией в количестве 20 % а.с.с., обогащается азотсодержащими солями (МаЖ>з - 3 % а.с.с.), стерилизуется и направляется в растительно-конвейерную установку типа 4Г-КСК, представляющую собой металлический шкаф, внутри которого расположены 4-5 ветвей сетчатого транспортера.

Через коллектор, встроенный в растительную камеру, по стерильному трубопроводу подается инокулят, который вносится из расчета 1-106 спор/г а.с.с. Споровый инокулят получают способом иммерсионного культивирования гриба, разработанным В.Г. Тюльпановым с соавторами. Процесс культивирования гриба в растительной камере протекает в следующих условиях: влажность субстрата - 75 - 80 %, температура 25-27 °С.

Через 10 сут. культивирования гриба ферментационная масса высушивается при температуре 32-34 °С до влажности 5-8 % и поступает в устройство для стерильного фасования. Далее, расфасованный биопрепарат по ленточному

конвейеру направляется в штабельформирующую машину и затем на склад готовой продукции.

В Красноярском крае и Хакасии посадочный материал для лесовосстано-вительных работ выращивают в 70 лесопитомниках, общей площадью 763 га. Проведенные маркетинговые исследования и ориентировочные технико-экономические показатели производства биопрепарата позволили установить, что потребность в биопрепарате составляет около 80 тонн в год, уровень рентабельности производства составит 57,13 %, срок окупаемости 1,4 года. Следует отметить, что себестоимость биопрепарата на основе коры с торфоцеолитовой смесью значительно ниже, по сравнению с традиционными субстратами, что позволяет выгодно производить и широко применять биопрепарат в практике защиты растений.

ВЫВОДЫ

1. Проведена комплексная оценка воздействия гриба рода ТНс1юс1егта азрегеНит штамм «МГ-97/6»на основные компоненты древесной коры и предложена технологическая схема получения биопрепарата на комбинированных субстратах.

2. Установлено влияние предварительной обработки лиственничной коры на групповой химический состав. Показано, что гидродинамическая и химическая обработка сопровождается снижением содержания экстрактивных веществ в 1,2 и 2,7 раза и снижением степени полимеризации целлюлозы в 3 раза.

3. Выявлено, что на процесс культивирования гриба существенное влияние оказывает вид субстрата и продолжительность процесса. При оптимальной продолжительности культивирования (10 суток) максимумы выхода конидий 3,77* 109 спор/г а.с.с. отмечен на лубе березовой коры, образования гу-миновых веществ 16,6 % - на лиственничной коре.

4. Установлено, что деструкция целлюлозы идет путем расщепления 1,4-Р-гликозидной связи между остатками Б-глюкозы, что приводит к значительному снижению степени полимеризации целлюлозы древесных субстратов в 1,2-2,6 раза и увеличению ее редуцирующей способности.

5. Показано, что деструкция лигнина протекает по схеме, аналогичной деструкции лигнинов под действием базидиомицетов. Наблюдается снижение содержания метоксильных групп в 1,4-1,8 раза и увеличение общих гидро-ксильных групп в 1,2-1,4 раза и карбоксильных групп. Деструкция лигнина сопровождается разрывом связи Са-Ср, окислением первичного гидроксила до карбоксильной группы; снижением степени ароматичности в структурах лигнина.

6. Впервые получены и сопоставлены количественные характеристики лигнинов коры лиственницы и березы, рассчитаны эмпирические формулы мономерного фенилпропаноидного звена диоксанлигнинов до и после биодеструкции.

7. Осуществлен подбор комбинированных растительных субстратов для получения биопрепаратов типа Триходермин. Доказано, что введение в субстрат торфоцеолитовой смеси повышает технические характеристики био-

препарата: выход гриба-продуцента увеличивается до 9,24-109 спор/г а.с.с., содержание гуминовых веществ - до 30 %.

8. Предложена технологическая схема получения биопрепаратов типа Три-ходермин на основе штамма «МГ-97/6» T.asperellum с использованием в качестве субстрата древесной коры с торфоцеолитовой смесью. Проведены технико-экономические расчеты производства биопрепарата. Показано, что при уровне рентабельности производства 57,13 %, срок окупаемости составляет 1,4 года.

9. Наработана опытная партия биопрепарата на основе короцеолитового субстрата и апробирована в полевых испытаниях при высадке картофеля сорта «Адретга» в с.Вечерница Емельяновского района Красноярского края. Показано, что внесение биопрепарата в почву увеличивает урожайность картофеля в 1,6 раза.

Список работ, опубликованных по материалам диссертации

1. Лунёва, Т.А. Привлечение отходов лесопромышленного комплекса для получения защитных биопрепаратов / Т.А. Лунёва, Е.Г. Махова // Современные проблемы математики и естествознания: матер. 8-ой всерос. науч.-практ. конф. - Нижний Новгород, 2004. - С. 22.

2. Лунёва, Т.А. Культивирование грибов рода Trichoderma на послеэкс-тракционном остатке коры лиственницы / Т.А. Лунёва, Т.В. Рязанова, H.A. Чу-прова // Химико-лесной комплекс - проблемы и решения: сб. ст. всерос. науч.-практ. конф. - Красноярск, 2004. - С. 31-34.

3. Лунёва, Т.А. Влияние вида субстрата на интенсивность спорообразования грибов рода Trichoderma / Т.А. Лунёва [и др.] // Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья: матер. 2-ой всерос. конф. -Барнаул, 2005. - Кн. 1. - С. 423-427.

4. Лунёва, Т.А. Биодеструкция коры хвойных и лиственных пород / Т.А. Лунёва [и др.] // Новые экологобезопасные технологии для устойчивого развития регионов Сибири: матер, всерос. науч.-практ. конф. - Улан-Удэ, 2005. -Т. 2.-С. 167-172.

5. Лунёва, Т.А. Целлюлоза коры лиственницы сибирской / Т.А. Лунёва [и др.] // Химико-лесной комплекс - проблемы и решения: сб. ст. всерос. науч.-практ. конф. - Красноярск, 2005. - С. 215-218.

6. Лунёва, Т.А. Применение коры лиственницы сибирской с цеолитом в качестве субстрата для культивирования грибов рода Trichoderma / Т.А. Лунёва, Т.В. Рязанова, H.A. Чупрова // Экология Южной Сибири и сопредельных территорий: тез. докл. IX междун. науч. конф. - Абакан, 2005. — Т. 2. - Вып. 9. -С. 90.

7. Лунёва, Т.А. Кора лиственницы сибирской с цеолитом и торфом как эффективный субстрат для культивирования грибов рода Trichoderma / Т.А. Лунёва [и др.] // Химия и химическая технология в XXI веке: сб. тез. VII всерос. науч.-практ. конф. - Томск, 2006. - С. 217-218.

8. Лунёва, Т.А. Влияние грибов рода Trichoderma на углеводный комплекс коры лиственницы сибирской / Т.А. Лунёва [и др.] // Изв. вузов. Химия и химическая технология. - 2006. - Т. 49. - Вып. 6. - С. 88-91.

9. Лунёва, Т.А. Культивирование грибов рода Trichoderma на коре лиственницы с цеолитом и торфом / Т.А. Лунёва Ю.С. Малинина, Е.С. Лукьянова // Химико-лесной комплекс - проблемы и решения: сб. ст. всерос. науч.-практ. конф. - Красноярск, 2006. - С. 42-45.

10. Кулакова, А А. Исследование целлюлозы коры лиственницы сибирской до и после биодеструкции грибами рода Trichoderma asperellum штамм «Мг-97/6» / A.A. Кулакова, Т.А. Лунёва // Химико-лесной комплекс - проблемы и решения: сб. ст. всерос. науч.-практ. конф. - Красноярск, 2007. - С. 22-25.

11. Лукьянова, Е.С. Биоконверсия комбинированных субстратов коры лиственницы сибирской грибом рода Trichoderma / Е.С. Лукьянова, Т.А. Лунёва // Химико-лесной комплекс - проблемы и решения: сб. ст. всерос. науч.-практ. конф. - Красноярск, 2006. - С. 25-28.

12. Седова, Н.В. Исследование диоксанлигнинов коры лиственницы сибирской до и после биодеструкции грибом рода Trichoderma / H.B. Седова, Т.А. Лунёва // Химико-лесной комплекс - проблемы и решения: сб. ст. всерос. науч.-практ. конф. - Красноярск, 2006. - С. 45-47.

13. Лунёва, Т.А. Воздействие микроскопического гриба на полисахариды и лигнин древесных пород / Т.А. Лунёва, Т.В. Рязанова, H.A. Чупрова II Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья: матер. III всерос. конф. - Барнаул, 2007. - Кн. 1.-С. 180-184.

Сдано в производство 10.10.08. Формат 60x84 1/16. Усл. печ 1,25. Изд. № 5/47. Заказ № 239. Тираж 100 экз.

Редакционно-издательский центр СибГТУ 660049, г. Красноярск, пр. Мира, 82 факс (391) 220-61-56, тел. (391) 227-69-90

Введение.

1 Аналитический обзор.

1.1 Кора хвойных и лиственных пород.

1.2 Химический (групповой) состав и свойства основных компонентов коры деревьев хвойных и лиственных пород.

1.2.1 Целлюлоза.

1.2.2 Лигнин.

1.3 Основные направления использования и переработки коры хвойных и лиственных пород.

1.4 Биопрепараты на основе грибов рода Тпскос1егта и использование их в практике защиты растений.

1.5 Разрушение лигноцеллюлозных субстратов под действием дереворазрушающих грибов.

1.5.1 Разложение целлюлозы дереворазрушающими грибами.

1.5.2 Изменение физико-химических свойств целлюлозы в ходе ферментативного гидролиза.

1.5.3 Разложение лигнина дереворазрушающими грибами.

1.5.4 Изменение состава лигнина под действием дереворазрушающих грибов.

2 Выбор объекта и методов исследования.

2.1 Выбор объекта исследования.

2.2 Подготовка сырья.

2.3 Определение степени помола сырья.

2.4 Выбор биологического агента.

2.5 Условия культивирования гриба рода ТпсИос1егта на коре древесных пород.

2.6 Оценка продуктивности спорообразования гриба рода Тпскос1егта на субстратах.

2.7 Определение убыли массы субстратов.

2.8 Определение влажности и зольных веществ.

2.9 Определение веществ, растворимых в горячей воде.

2.10 Определение содержания полисахаридов.

2.11 Определение содержания лигнина.

2.12 Определение содержания гуминовых веществ.

2.13 Определение содержания целлюлозы.

2.14 Определение средней степени полимеризации целлюлозы в железовиннонатриевом комплексе.

2.15 Определение медного числа целлюлозы.

2.16 Гидролиз целлюлозы до глюкозы.

2.17 Определение степени кристалличности целлюлозы.

2.18 Выделение диоксанлигнина.

2.19 Элементный анализ диоксанлигнина.

2.20 Определение содержания метоксильных групп.

2.21 Определение содержания общих гидроксильных групп.

2.21 Определение содержания алифатических гидроксильных групп.

2.22 Определение содержания карбоксильных групп.

2.23 Расчет фенилпропановых структурных звеньев и молекулярной массы диоксанлигнинов.

2.24 УФ - спектроскопия диоксанлигнина.

2.25 ИК-спектроскопия диоксанлигнина.

3 Экспериментальная часть.

3.1 Влияние предварительной обработки на химический состав лиственничной и березовой коры.

3.2 Влияние продолжительности культивирования на интенсивность спорообразования гриба рода ТпсИосИегта и химический состав древесных субстратов.

3.3 Деструкция целлюлозы древесных субстратов под действием гриба рода ТНскойегта.

3.4 Деструкция лигнина древесных субстратов грибом рода

Тг1скос1егта.

3.5 Получение биопрепарата на комбинированных субстратах.

4 Технологическая часть.

4.1 Технологическая схема производства биопрепарата на основе комбинированных субстратов.

4.2 Технико-экономические показатели производства биопрепарата

Выводы.

Россия является одной из ведущих стран мира по объему заготавливаемой древесины. При существующих способах переработки древесного сырья в целом по России полезно используется около половины, а в сибирском регионе - лишь третья часть-биомассы дерева. Большая часть отходов скапливается на территориях предприятий, представляя определенную пожарную опасность, а вымываемые атмосферными осадками кислые агенты мигрируют в почву, а далее - в грунтовые воды, создавая угрозу обширного загрязнения прилегающей к предприятиям территории. Необходимость утилизации отходов лесоперерабатывающей промышленности является одной из важнейших экологических проблем.

Утилизация отходов окорки древесины базируется в основном на применении химических и термических способов переработки. Альтернативным вариантом как с экономической, так и экологической точки зрения является их биотехнологическая переработка. Немаловажной задачей на сегодняшний день является разработка биологических методов по ограничению развития организмов, наносящих значительный ущерб в сельском и лесном хозяйствах. По распространенности заболеваний возделываемых культур в Средней Сибири и причиняемому ущербу первое место принадлежит грибным заболеваниям, инфекционное начало которых сохраняется в почве и на растительных остатках. Доминирующее положение в успешном регулировании численности популяций фитопатогенов и получении противогрибных препаратов занимают виды ТпсИос1егта, обладающие высокой антогонистической и гиперпаразитической активностью. На основе различных штаммов этих грибов в нашей стране и за рубежом созданы биопрепараты - триходермины, применяемые для борьбы с широким спектром фитопатогенов растений.

Проблема ресурсов доступного и дешевого сырья для промышленной биотехнологии остается весьма актуальной, поэтому перспективным является использование различных отходов лигноцеллюлозной природы в качестве субстрата при получении биопрепарата на основе гриба рода Тпскос1егта.

Особенность гриба разлагать наряду с целлюлозой лигниновые вещества ставит его в ряд агентов, способных трансформировать растительное сырье древесного происхождения, и позволяет в перспективе использовать эту способность для создания технологии переработки древесных отходов и получения биопрепаратов защитного действия. Управление данным процессом, его использование в промышленных масштабах возможно только при установлении механизмов воздействия микромицетов на растительный комплекс, а также влияния свойств субстрата и технологических параметров на качество биопрепарата.

Цель настоящей работы - установить влияние микробиологического воздействия на состав и свойства коры древесины хвойных и лиственных пород на примере гриба рода Тпскос1егта; разработать условия культивирования и предложить технологическую схему получения биопрепарата типа Триходермин с использованием в качестве субстрата коры лиственницы и березы.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи: установить влияние способа подготовки коры, а также продолжительности культивирования гриба рода Тпскойегта на интенсивность спорообразования и изменение химического состава субстрата;

- изучить воздействие гриба рода Тпскоёегта на целлюлозу и лигнин, входящих в состав лиственничной и березовой коры;

- осуществить подбор комбинированных субстратов с целью интенсификации процесса биоконверсии;

- разработать технологическую схему получения биопрепарата на лиственничной и березовой коре и дать экономическую оценку эффективности их производства.

Научная новизна работы. С использованием методов химического, элементного и рентгенографического анализов, УФ- и РЖ-спектроскопии получены сведения о биотрансформации целлюлозы и лигнина в составе коры лиственницы и березы под действием гриба рода Тпскойегта. Впервые получены и сопоставлены количественные характеристики лигнинов коры лиственницы и березы, рассчитаны эмпирические формулы мономерного фенилпропаноидного звена диоксанлигнинов до и после биодеструкции. Установлены факты интенсификации процесса биоконверсии. Получены новые формы биопрепаратов на основе коры лиственницы и березы. Сложившиеся в результате исследований представления о процессах деструкции грибом рода ТпсНос1егта лигнина и целлюлозы, входящих в состав коры древесных пород вносят существенный вклад в научные основы технологии конверсии лигноуглеводных материалов.

Практическая значимость работы. Предложены комбинированные растительные субстраты для твердофазной ферментации с целью получения биопрепаратов типа Триходермин. Разработана технологическая схема получения биопрепарата на основе штамма «МГ-97/6» с использованием в качестве субстрата коры лиственницы, березы и торфоцеолитовой смеси. Наработана опытная партия биопрепарата типа Триходермин с использованием комбинированного субстрата, апробированная в полевых испытаниях при высадке картофеля в Красноярском крае. Показано положительное влияние биопрепарата на увеличение урожайности картофеля.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы докладывались и обсуждались на конференциях: «Современные проблемы математики и естествознания» (Нижний Новгород, 2004); «Химико-лесной комплекс - проблемы и решения» (Красноярск, 2004 - 2006); «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2005, 2007); «Новые экологобезопасные технологии для устойчивого развития регионов Сибири» (Улан-Удэ, 2005); «Химия и химическая технология в XXI веке» (Томск, 2006).

Работа выполнена в соответствии с планом НИР ГОУ ВПО «Сибирский государственный технологический университет» по теме: «Разработка теоретических основ биоконверсии растительного сырья и получение средств защиты растений» № ГР 0199000861 (2004 - 2009 гг.).

По материалам диссертации опубликовано 13 печатных работ, в том числе статья в журнале, рекомендованном ВАК.

Выводы

1. Проведена комплексная оценка воздействия гриба рода Тпскос1егта азрегеИит, штамм «МГ-97/6»на основные компоненты древесной коры и предложена технологическая схема получения биопрепарата на комбинированных субстратах.

2. Установлено влияние предварительной обработки лиственничной коры на групповой химический состав. Показано, что гидродинамическая и химическая обработка сопровождается снижением содержания экстрактивных веществ в 1,2 и 2,7 раза и снижением степени полимеризации целлюлозы в 3 раза.

3. Выявлено, что на процесс культивирования гриба существенное влияние оказывает вид субстрата и продолжительность процесса. При оптимальной продолжительности культивирования (10 суток) максимумы выхода конидий 3,77*109 спор/г а.с.с. отмечен на лубе березовой коры, образования гуминовых веществ 16,6 % - на лиственничной коре.

4. Установлено, что деструкция целлюлозы идет путем расщепления 1,4-р-гликозидной связи между остатками П-глюкозы, что приводит к значительному снижению степени полимеризации целлюлозы древесных субстратов в 1,2-2,6 раза и увеличению ее редуцирующей способности.

5. Показано, что деструкция лигнина протекает по схеме, аналогичной деструкции лигнинов под действием базидиомицетов. Наблюдается снижение содержания метоксильных групп в 1,4-1,8 раза и увеличение общих гидроксильных групп в 1,2-1,4 раза и карбоксильных групп. Деструкция лигнина сопровождается разрывом связи Са-Ср, окислением первичного гидроксила до карбоксильной группы; снижением степени ароматичности в структурах лигнина.

6. Впервые получены и сопоставлены количественные характеристики лигнинов коры лиственницы и березы, рассчитаны эмпирические формулы мономерного фенилпропаноидного звена диоксанлигнинов до и после биодеструкции.

7. Осуществлен подбор комбинированных растительных субстратов для получения биопрепаратов типа Триходермин. Доказано, что введение в субстрат торфоцеолитовой смеси повышает технические характеристики биопрепарата: выход гриба-продуцента увеличивается до 9,24-109 спор/г а.с.с., содержание гуминовых веществ — до 30 %.

8. Предложена технологическая схема получения биопрепаратов типа Триходермин на основе штамма «МГ-97/6» T.asperellum с использованием в качестве субстрата древесной коры с торфоцеолитовой смесью. Проведены технико-экономические расчеты производства биопрепарата. Показано, что при уровне рентабельности производства 57,13 %, срок окупаемости составляет 1,4 года.

9. Наработана опытная партия биопрепарата на основе короцеолитового субстрата и апробирована в полевых испытаниях при высадке картофеля сорта «Адретта» в с.Вечерница Емельяновского района Красноярского края. Показано, что внесение биопрепарата в почву увеличивает урожайность картофеля в 1,6 раза.

1. Лес России. Энциклопедия / под общей редакцией А.И. Уткина и др.. М.: Большая российская энциклопедия, 1995. - 445 с.

2. Рязанова, Т. В. Химия древесины Текст. / Т. В. Рязанова, Н. А. Чупрова, Е. В. Исаева. — Красноярск: КГТА, 1996. 358 с.

3. Рязанова, Т. В. Химия и технология коры хвойных Текст. / Т. В. Рязанова, С. М. Репях. Красноярск: КГТА, 1996. - 302 с.

4. Долгодворова, С. Я. Биологические ресурсы лесов Сибири Текст. / С. Я. Долгодворова, Г. Н. Черняева. — Красноярск: Ин-т леса и древесины СО РАН, 1980.-52 с.

5. Кислицын, А. Н. Химия древесины Текст. / А. Н. Кислицын // Химия древесины. 1994. - № 3. - С. 52-56.

6. Черняева, Г. Н. Экстрактивные вещества березы Текст. / Г. Н. Черняева, С. Я. Долгодворова, С. М. Бондаренко. Красноярск: Ин-т леса и древесины СО РАН, 1986. - 73 с.

7. Шарков, В. И. О химическом составе древесной коры Текст. / В. И. Шарков, А. Л. Гирчиц, Ф. Сартания // Лесохим.пром-сть. 1939. - № 3. — С. 40-45.

8. Рубчевская, Л. П. Химический состав коры лиственницы в различные периоды годового цикла / Л. П. Рубчевская, Э. Д. Левин, Н. А. Чупрова // Изучение и использование древесной коры: тез. докл. — Красноярск, 1977.-С. 10-11.

9. Васильева, Н. А. Экстрактивные вещества коры и древесины ели и сосны / Н. А. Васильева, И. С. Гелес // Химия и использование экстрактивных веществ дерева: тез. докл. Горький, 1990. — С. 98-100.

10. Барабаш, Н. Д. О химическом составе коры Ьапх эШшса Текст. / Н. Д. Барабаш, Э. Д. Левин, И. Н. Астапкович // Химия природных соединений. 1970. - № 3. - С. 386-387.

11. Экстрактивные вещества различных пород среднетаежной подзоны Сибири. 2. Фракционирование экстрактивных веществ коры / С. Я. Долгодворова и др. // Химия и химическая технология древесины. — Красноярск: Изд. ИЛ и Д, 1975. -Вып.З. С. 125-131.

12. Долгодворова, С. Я. Экстрактивные вещества древесины и коры древесных пород среднетаежной подзоны Сибири Текст. / С. Я. Долгодворова, Л. А. Скринник, Г. Н. Черняева // Растительные ресурсы. -1976.-Т. XII.-С. 84-88.

13. Исследование химического состава водных экстрактов компонентов лиственницы сибирской / H.A. Чупрова и др. // Химия и химическая технология древесины. Красноярск, 1975. — Вып. 3. — С. 99105.

14. Запрометов, М. Н. Фенольные соединения Текст. / М. Н. Запрометов. М.: Наука, 1993.-272 с.

15. Громова, А. С. Фенолокислоты и их производные из коры некоторых видов пихты, ели и сосны Текст. / А. С. Громова, В. И. Луцкий, Н. А. Тюкавкина // Химия природн. соед. 1978.-№ 4. - С. 99-102.

16. Пашинина, Л. Т. Катехины коры Larix sibirica Текст. / Л. Т. Пашинина, Т. К. Чумбалов, 3. А. Лейман // Химия природн. соед. 1970. -№ 4. - С. 478.

17. Черняева, Г. Н. Фенолкарбоновые кислоты и мономерные флаваны коры Larix sibirica Ledeb Текст. / Г. Н. Черняева, Г. В. Пермякова // Растительные ресурсы. — 2000. -Т. 36, № 3. С. 47-51.

18. Чумбалов, Т. К. Флавонолы коры Larix sibirica Текст. / Т. К. Чумбалов, Л. Т. Пашинина // Химия природн. соедин. — 1967.- № 3. С. 216.

19. Чумбалов, Т. К. Флавоноиды коры Larix sibirica Текст. / Т. К. Чумбалов, Л. Т. Пашинина, 3. А. Лейман // Химия природн. соедин. 1970. -№ 6. - С. 763-764.

20. Фенольные соединения коры лиственницы сибирской Текст. / С. 3. Иванова [и др.] // Хвойные бореальной зоны. — 2003. — Вып. 1. С. 123-127.

21. Комплекс мономерных фенольных соединений коры лиственницы Текст. / Н. В. Иванова [и др.] // Химия растительного сырья.- 1999. № 4.-С. 5-7.

22. Лаптева, К. И. Некоторые экстрактивные фенольные вещества коры лиственницы Текст. / К. И. Лаптева, Н. А. Тюкавкина, Л. А. Остроухова // Изв. СО АН СССР, серия химия.- 1974.- Вып. 4. С. 163.

23. Похилло, Н. Д. Изотерпеноиды различных видов рода Betula Текст. / Н. Д. Похило, Н. И. Уварова // Химия природных соединений. — 1988.-№3.-С. 325-341.

24. Бромштейн, А. Л. Органический синтез / А. Л. Бромштейн, Л. В. Лобанова, Т. Б. Векслер // Лесохимия и органический синтез: тез. докл. -Сыктывкар, 1994. С. 34.

25. Экстрактивные вещества коры лиственницы Текст. / Г. Н. Черняева [и др.] //Химия древесины. 1983. - С. 99.

26. Левданский, В. А. Получение антоцианидиновых красителей из луба коры березы Betula pendula Roth Текст. / В. А. Левданский, Б. Н. Кузнецов // Химия растительного сырья. 2004. - № 3. - С. 25-28.

27. Химия древесины Текст.: / Пер.с фин. под ред. М. А. Иванова. -М.: Лесн.пром-сть, 1982. 399 с.

28. Никитин, Н. И. Химия древесины Текст. / Н. И. Никитин. — М.: АН СССР, 1951.-578 с.

29. Роговин, 3. А. Химия целлюлозы и ее спутников Текст. / 3. А. Роговин, H. Н. Шорыгина. М.: Госхимиздат, 1953. - 678 с.

30. Atalla, R. H. / R. H. Atalla // The structure of cellulose: Recent developments in Wood and agricultural residues. -N.Y., 1983. P. 59-77.

31. Степаненко, Б. H. Химия и биохимия углеводов Текст. / Б. Н. Степаненко. — М.: Высшая школа, 1978. 256 с.

32. Кленкова, Н. И. Структура и реакционная способность целлюлозы Текст. / Н. И. Кленкова. Л., 1976. - 367 с.

33. Аликин, В. П Физико-механические свойства природных целлюлозных волокон Текст. / В. П. Аликин. — М.: Лесная пром-сть, 1969. — 140 с.

34. Глегг, Р. Е. Фракционирование целлюлозы Текст. / Р. Е. Глегг, Л. Дж. Ганг, Р. Дж. Бруэр // Целлюлоза и ее производные. 1974. - Т. 1. - С.382-412.

35. Аким, Э. JI. Реакционная способность и физическое состояние целлюлозы Текст. / Э. JI. Аким // Химия древесины. 1984. - № 4 - С. 3-17.

36. Роговин, 3. А. Химия целлюлозы Текст. / 3. А. Роговин. М.: Химия, 1972.-520 с.

37. Жбанков, Р. Г. Инфракрасные спектры и структура углеводов Текст. / Р. Г. Жбанков. Минск: Наука и техника, 1977. - 455 с.

38. Рейзинын, Р.Э. Структурообразование в суспензиях целлюлозных волокон Текст. / Р.Э. Рейзиныи. — Рига.: Изд. Зинатне, 1987. 208 с.

39. Фрей-Висслинг, А. Общая структура волокон. В кн.: Основные представления о волокнах, применяемых в бумажной промышленности Текст. / А Фрей-Висслинг. - М.: Гослесбумиздат, 1962. - С. 9-13.

40. Рабинович, М. Л. Теоретические основы биотехнологии древесных композитов Текст. Кн.1. Древесина и разрушающие ее грибы./ М. Л. Рабинович, А. В. Болобова, В. И. Кондращенко. М.: Наука, 2001. - 264 с.

41. Трип, В. У. Определение кристалличности целлюлозы Текст. / В. У Трип // Целлюлоза и ее производные. 1974. - Т. 1. - С. 214-235.

42. Мелех, М. В. Исследование целлюлозы коры ели методом рентгено-структурного анализа Текст. / М. В. Мелех, В. В. Петрова, И. С. Гелес // Химия древесины. 1987. - С. 52-58.

43. Синицин, А. П. Биоконверсия лигноцеллюлозных материалов Текст. / А. П. Синицин, А. В. Гусаков, В. М. Черноглазов. М.: МГУ, 1995. - 224 с.

44. Экстрактивные вещества древесины Текст. / под ред. Хиллиса. -М.: Лесная пром-сть, 1965. 504 с.

45. Химия древесины Текст. / Под ред. Луис Э. Уайз, Эдвин С. Джан.- М. Л.: Гослесбумиздат, 1959. - Т. 1 - 520 с.

46. Кретовин, В. Л. Биохимия растений Текст. / В. Л. Кретовин. -М.: Высшая школа, 1986.— 503 с.

47. Карманов, А. П. Современное состояние проблемы неоднородности природного лигнина Текст. / А. П. Карманов, В. Д. Давыдов, Б. Д. Богомолов // Химия древесины. 1982. - № 2. - С. 3-25.

48. Лигнины: Структура, свойства и реакции Текст. / Под ред. К. В. Сарканена, К. X. Людвига. М.: Лесная пром-сть, 1975. - 632 с.

49. Грушников, О. П. Достижения и проблемы химии лигнина Текст. / О. П. Грушников, В. В. Елкин. М.: Наука, 1973. - 296 с.

50. Adler, Е. Lignin chemistry past, present and future / E. Adler // Wood Sci. Technol., 1977.-Vol. 11, № 3.-P. 169-218.

51. Фенгел, Д. Древесина. Химия, ультраструктура, реакции Текст. / Д. Фенгел, Г. Вегенер. — М.: Лесная пром-сть, 1988. 512 с.

52. Богомолов, Б. Д. Химия древесины и основы химии высокомолекулярных соединений Текст. / Б. Д. Богомолов. М: Лесная пром-сть, 1973.-400 с.

53. Higuchi, T. Biosynthesis of lignin // Biosynthesis and biodégradation of wood components / Ed. by T. Higuchi. Orlando: Academic Press, Inc., 1985 6. -P. 141-161.

54. Калабин, Г. A. Количественная спектроскопия ЯМР природного органического сырья и продуктов его переработки Текст. / Г. А. Калабин, Л. В. Каницкая, Д. Ф. Кушнарев. М.: Химия, 2000.- 407 с.

55. Спектроскопия ЯМР H как метод идентификации гидроксилсодержащих фрагментов лигнина Текст. / Л. В. Каницкая [и др.] // Химия древесины. 1987. - № 6. - С. 3.

56. Количественная спектроскопия ЯМР H и С лигнинов ели, осины и лиственницы сибирской Текст. / Л. В. Каницкая [и др.] // Химия древесины.- 1992. -№4-5. С. 73.

57. Практические работы по химии древесины и целлюлозы Текст. / Оболенская А. В. [и др.]. М.: Лесная пром-сть, - 1967. - 411 с.

58. Исследование низкомолекулярного лигнина, полученного окислительной делигнификацией древесины березы и лиственницы в среде уксуснокислой кислоты Текст. / С. А. Кузнецова [и' др.] // Органическая химия. 2006.-№ 7. - С. 56-60.

59. Sjostrom, Е. Wood chemistry: fundamentals and applications / E. Sjostrom, N.Y., London, Toronto, Sydney: Acad. Press, 1981. 223 p.

60. Fergus, B. J. The location of guaiacyl and syringyl lignine in birch xylemtissue / B.J. Fergus, D. A. Goring // Holzforschung, 1970. Vol. 24, № 4. -P. 113-117/

61. Сарканен, К. В. Предшественники лигнина и их полимеризация. Лигнины / Под.ред. К. В. Сарканена, К. X. Людвига. М.: Лесная пром-сть, 1975.-С. 18-79.

62. Sakakibara, M. A. Chemistry of lignin / M. A. Sakakibara // Wood and cellulosic chemistry. Dekker, 1991. - P. 111-168.

63. Гоготов, А. Ф. Реакции лигнина с азотсодержащими реагентами: автореф. дис. докт. хим. нук: 05.21.03 / А. Ф. Гоготов. Красноярск, 1998. -40 с.

64. Выонова, Б. Б. Утилизация коры в ЦБП / Б. Б. Вьюнова, Ю. И. Черноусов // Экспресс-информация. Целлюлоза, бумага и картон. М.: ВНИИПиЭИ Леспром, 1983. - Вып. 31. - С. 12.

65. Зыков, Ф. И. Основные направления использования коры и использование механизмов для ее изменения / Ф. И. Зыков // Труды ЦНИИМОД.-М., 1966.-Вып. 20.-С. 111-114.

66. Цывин, М. М. Использование древесной коры Текст. / М. М Цывин. — М.: Лесная пром-сть, 1973. — 96 с.

67. Житков, А. В. Утилизация древесной массы Текст. / А. В. Житков. -М.: Лесная пром-сть, 1985. 135 с.

68. Монаков, В. А. Проблемы использования лиственницы / В. А. Монаков, Л. Н. Малыгин, И. А. Бернат // Управление использованием и воспроизводством лесных ресурсов в зоне БАМ: тез. докл.-.Новосибирск, 1986.-С. 45.

69. Мардер, В. М. Опыт сжигания коры на целлюлозно-бумажных комбинатах Текст. / Мардер В. М. М., 1967. - 158 с.

70. Dietz, Р. Dichte und Rindengehalt vjn industrieheiz. / P. Dietz. // Holz als Roh-und Werkstoff, 1975. Vol. 33. -P. 135-141.

71. Губич, Л. В. Направления использования мелких древесных отходов и коры хвойных / Л. В. Губич, С. С. Романова, А. И. Криворотова // Лесной и химический комплексы проблемы и решения: сб. ст. -Красноярск, 2004, - Ч. 2. - С. 265-267.

72. Петров, В. С. Технология углей из лесосечных отходов лиственницы и других хвойных пород Сибири: автореф. дис. докт. техн. наук 05.21.03 / В. С. Петров. Рига, 1987. - 48 с.

73. Шишкин, В. А. Пиролиз водоэкстрактивных веществ Текст. / В. А. Шишкин, Л. А. Думина, Л. А. Журавлева // Изв. вузов лесн. журн. 1972. -№ 1.-С. 112.

74. Мусихина, Л. Н. Исследование возможности получения поверхностно-активных веществ из коры и одубины некоторых пород деревьев: автореф. дис. канд. техн. наук 05.21.03 / Л. Н. Мусихина- Л., 1971.- 19 с.

75. Ивкина, Т. М. Оптимизация сорбции разливов нефти измельченной корой лиственницы сибирской Текст. / Т. М. Ивкина, Э. Д. Левин // Изв. вузов лесн. журн. 1984. - № 5. - С. 80-83.

76. Лученко, А. Г. Исследование превращений коры ели при ее термогидролитической обработке Текст. / А. Г. Лученко, Н. В. Авдюнова // Труды СвердлНИИЦДрев. -М.: Лесная пром-сть, 1970. Вып 5. - С. 61.

77. Фефилов, В. В. Переработка и исследование древесной коры Текст. / В. В. Фефилов // Актуальные проблемы функционирования лесопромышленных комплексов. — М.: Лесная пром-сть, 1975. — С. 105-111.

78. Оптимизация термических и биохимических методов утилизации отходов экстракционной переработки березовой коры Текст. / Б. Н. Кузнецов [и др.] // Химия в интересах устойчивого развития. — 2005. № 13. -С. 441-449.

79. Патент №3817826, США,МКИС07С 1/00, D 21 С 5/00.

80. Singh, D. D. Vapaur phase corrosion inhibitors a review / D. D. Singh, V. K. Banerjee // Anti-Corros. Meth. And Mater, 1984. - Vol. 31. - № 6. - P. 4-8.

81. Стригунова, А. А. Получение пеносорбентов с заданными свойствами на основе карбамидных свойств: автореф. дисс. . канд. техн. наук: 05.21.03 / А. А. Стригунова. Красноярск, 2001. - 20 с.

82. Иванов, Е. В.Коррозионное поведение железа в растворах таннина Текст. / Е. В. Иванов, Ю. М. Кузнецов // Защита металлов. — 1990. — Т. 26. — № 1. С. 48-53.

83. Moresky, I. F. Tannins and their utilisation in corrosion protection: a review /1. F. Moresky // Corros Australas. 1988. - T. 10. - № 5. - P. 10-12.

84. Ингибирующий эффект производных фурфурола на коррозию сплавов железа Текст. / В. П. Григорьев [и др.]; Труды Рост.ун-та. — Ростов на Дону, 1989. 13 е. - Деп. ОНИИТЭХим, г. Черкассы,- № 323 - ХП 89.

85. Никифоров, Г. Ф. К вопросу интенсификации экстрагирования таннидов из коры лиственницы Текст. / Г. Ф. Никифоров, О. Ф. Буторова // Химия и химическая технология древесины. Красноярск, 1973. — Вып. 1. — С. 90-92.

86. Любанский, Б. П. Извлечение экстрактивных веществ из древесины лиственницы органическими растворителями в поле механическихколебаний Текст. / Б. П. Любанский, В. Б. Коган // Химия и технология целлюлозы. Л., 1979. - Вып. 6. - С. 18-19.

87. Любанский, Б. П. Экстракция коры лиственницы в поле механических колебаний Текст. / Б. П. Любанский, А. А. Барам, В. Б. Коган // Химия и технология целлюлозы. — Л., 1979. Вып. 6. - С. 19-21.

88. Виноградова, Н. М. Интенсификация извлечения таннидов из дубильных материалов / Н. М. Виноградова // Физико-химические исследования продуктов химической переработки древесины: сб. ст. -Архангельск, 1972. Вып. 32. - С. 104.

89. Волков, Н. В. Интенсификация процессов извлечения таннидов из растительного сырья / Н. В. Волков // Использование древесных отходов и побочных продуктов леса. Архангельск, 1977. — С. 131 -137.

90. Рязанова, Т. В. Комплексная переработка коры хвойных пород с получением дубильных экстрактов с заданными свойствами: автореф. дисс.докт. техн. наук: 05.21.03 / Т. В. Рязанова. Красноярск, 1999. — С. 498.

91. Рязанова, Т. В. Системная технология переработки древесной коры с выделением дубителя и утилизация одубины. / Т. В. Рязанова, Э. Д. Левин, И. Н. Астапкович // Химия и использование экстрактивных веществ дерева. -Горький, 1990.-С. 106-108.

92. Барановский, С. В. Интенсификация процесса экстракции коры лиственницы сибирской: автореф. дис. . канд. техн. наук: 05.21.03 / С. В. Барановский. Красноярск, 2005. - 22 с.

93. Получение дубильных веществ, красителей и энтеросорбентов из луба березовой коры Текст. / С. А. Кузнецова [и др.] // Химия в интересах устойчивого развития. 2005. - № 13. - С. 401-409.

94. Клиническая фармакология Текст. / Ю. К. Василенко [и др.] // Эксперим. клин, фармакол. 1993. № 56. - 53 с.

95. Вгаёигу, В. I. Касгутэку / В. Т Вгаёигу ^ а1. // Касгутэку, 118, 2000.-Уо1. 6.-Р. 124-362.

96. Разработка новых методов утилизации отходов переработки древесины / Е. В. Веприкова и др. // Комплексное использование растительных ресурсов лесных экосистем: сб. ст. Красноярск, 2004. С. 8490.

97. Получение энтеросорбентов из отходов окорки березы Текст. / Е. В. Веприкова // Химия растительного сырья. 2005. - № 1. - С. 65-70.

98. Использование древесных отходов и побочных продуктов леса / под ред. А. С. Синникова. Архангельск: Изд-во Архангельский институт леса и химии, 1977. 139 с.

99. Санников, А. С. Рекомендации по использованию древесной коры в качестве тепличного грунта в лесном и сельском хозяйстве Текст. / А. С. Санников, 3. С. Калугина. Архангельск, 1984. - 12 с.

100. Коробов, В. В. Переработка низкокачественного сырья (проблемы безотходной технологии) Текст. / В. В. Коробов, Н. П. Рушнов. -М.: Экология, 1991.-288 с.

101. Эрнст, Л. К. Кормовые продукты из отходов леса Текст. / Л. К. Эрнст, 3. М. Науменко, С. И. Лодинская. М.: Лесн.пром-сть, 1982. - 168 с.

102. Чернивецкая, В. К. Киришский БХЗ. Использование гидролизного лигнина Текст. / В. К. Чернивецкая // Гидролизная пром-сть. 1987. - № 4. -С. 10.

103. Роботнова, И. Л. Хемостатное культивирование и ингибирование роста микроорганизмов Текст. / И. Л. Роботнова, И. Н. Позмогова. М.: Наука, 1979.-207 с.

104. Головлева, Л. А. Разложение лигнина грибными культурами Текст. / Л. А. Головлева, X. Г. Ганбаров, Г. К. Скрябин // Микробиология. -1982. Т. 51. - С. 543-547.

105. Токсигенная и антибиотическая активность микромицетов, выделенных из корокомпостов / 3. А. Курбацкая и др. // Микология и фитопатология. 1986. - Т. 20. - № 3. - С. 204-210.

106. Варфоломеев, JI. А. Приготовление промышленных компостов на основе твердых отходов деревообработки (химико-биологические аспекты): Обзорная информ. Текст. / J1. А Варфоломеев; ВНИИТЭИагропром. М., 1992. - 52 с.

107. ОСТ 56-56-83 Компосты из коры. Технические условия. 1983. -№ 145. - 12 с.

108. Беловежец, JI. А. Микробиологические и экологические аспекты переработки вторичного лигноцеллюлозного сырья: автореф. дис. канд. биол. наук: 03.00.16 / J1. А. Беловежец. — Иркутск, 2007. — 20 с.

109. Заика, Н. А. Изучение биологии и скрининг штаммов грибов рода Trichoderma для получения биопестицидов на растительных субстратах: автореф. дис. канд. биол. наук: 03.00.16 / Н. А. Заика. — Красноярск, 2005. -20 с.

110. Махова, Е.Г. Культивирование грибов рода Trichoderma на лигно-углеводных субстратах: дис. канд. техн. наук: 03.00.23: защищена 25.05.03 / Е. Г. Махова. Красноярск, 2003. - 135 с.

111. Ким, Н. Ю. Безотходная переработка одубины коры хвойных пород: автореф. дис. .канд. техн. наук: 05.21.03 / Н. Ю. Ким. Красноярск, 2001.-24 с.

112. Громовых, Т. И. Фитопатогенные микромицеты сеянцев хвойных в Средней Сибири: видовой состав, экология, биологический контроль: автореф. дис. докт. биол. наук: /Т. И. Громовых. М., 2002. -37 с.

113. Громовых, Т. И. Биологический контроль болезней сеянцев хвойных в лесных питомниках Средней Сибири: Монография Текст. / Т. И. Громовых, Ю. А. Литовка, О. Н. Андреева. Красноярск: СибГТУ, 2005. -264 с.

114. Якименко, Е. Е. Микромицеты почв лесных питомников Текст. / Е. Е. Якименко // Микология и фитопатология.-1992. -Т. 26. Вып. 6. -С. 480-485.

115. Эффективность действия Trichoderma asperellum G. Samuels штамм МГ-97 на развитие фузариоза на сеянцах Larix sibirica L. Текст. / Т. И. Громовых [и др.] // Микология и фитопатология. 2002.-Т. 36. - Вып. 4. -С. 70-75.

116. Тарунина, Т. А. Влияние Trichoderma lignorum Tode ex Harz на Fusarium oxysporum Schlecht, и F.culmorum (W.G.Sm.) Sacc. в стерильной почве Текст. / Т. А. Тарунина // Микология и фитопатология. 1982. -Т. 16. -Вып. 6.-С. 536-538.

117. Крутов, В.И. Грибные болезни молодняков хвойных пород Текст. / В. И. Крутов. М., 1994. - 41 с.

118. Попкова, К. В. Общая фитопатология Текст. / К. В. Попкова. -М.: Агропромиздат, 1989. 399 с.

119. Якименко, Е. Е. Инфекционное полегание сеянцев хвойных в лесных питомниках Красноярского края Текст. / Е. Е. Якименко, И. Д. Гродницкая // Микология и фитопатология. — 1996. Т. 30. - Вып. 2. - С. 5660.

120. Лихачев, А. Н. Патогенность видов и штаммов рода Botrytis, выделенных с различных растений-хозяев Текст. / А. Н. Лихачев // Микология и фитопатология. 2000. - Т. 5. - Вып. 34. - С. 60.

121. Якименко, Е. Е. Микромицеты почв лесных питомников и их роль в патогенезе хвойных: автореф. дис. канд. биол. наук: / Е. Е. Якименко. -Красноярск, 1994.-25 с.

122. Коре, H. H. Prevalence and incidence of the root-inhabiting fungi, Fusarium, Cilindrocarpon and Pythium, on container-grown Doglas-fir and spruce seedlings in British-Columbia / H. H. Коре, P. E. Axelrood // New forest, 1996. -Vol. 12, № 1. P. 55-67.

123. Аспите, А. Ф. Использование триходермина для защиты растений от фитопатогенных микромицетов Текст. / А. Ф. Аспите, Ю. Э. Швинка, С. В. Стрикаускас // Вестник с.-х. науки. — 1981. № 9. - С. 114-118.

124. Прудникова, С. В. Эколого-биологическая роль грибов Trichoderma в различных биоценозах Средней Сибири: автореф. дис.канд. биол. наук. / С. В. Прудникова. Красноярск, 2000. - 19 с.

125. Сейкетов, Г. Ш. Влияние триходермина на некоторых представителей микрофлоры ризосферы растений Текст. / Г. Ш. Сейкетов, П. А. Кишиневский. А-Ата: Наука, 1970. - С. 222-227.

126. Viterbo, А. / О. Ramot, L. Chemin // Antonie Van Leeuwenhoek, 2002. Vol. 81. № 1. - p. 549-556.

127. Ghisalberti, E. L. Antifungal antibioties prodused by Trichoderma spp. / E. L. Ghisalberti, K. Sivasithamparam // Soil Biol, and Biochem. 1991. -Vol. 23, № 11. - P. 1011-1020.

128. Michrina, J. Antibiosis as a possible mechanisms of action of Trichoderma harzianum aginst Fusarium culmorum / J. Michrina, A. Michalikovai, T. Rohacik// Ochr. Rostl. 1995. - Vol. 31, № 3. - P. 177-184.

129. Сейкетов, Г. Ш. Грибы рода триходерма и их использование в практике Текст. / Г. Ш. Сейкетов. Алма-ата: Наука, 1982. - 248 с.

130. Кривич, Н. Я. Гриб Trichoderma lignorum и его роль в увеличении плодородия почвы и повышении количества сельскохозяйственных культур

131. Текст. / Н. Я. Кривич, Н. И. Каиивец, 3. А. Клуген // Микология и фитопатология. 1981.-Т. 15. - Вып. 23а. - С. 117-121.

132. Кривощекова, Т. Г. Эффективность триходермина Текст. / Т. Г. Кривощекова, В. С. Мищенко // Защита растений. 1990. - № 11. - С. 22.

133. Гринько, Н. Н. Видовой состав возбудителей корневой гнили .огурца в защищенном грунте Текст. / Н. Н. Гринько // Вестник Российской академии с.-х. наук. — 2002. № 5. — С. 54-57.

134. Твердюков, А. П. Триходермин Текст. / А. П. Твердюков, П. В. Никонов, Н. П. Ющенко // Защита растений. 1993. - № 6.- С. 40.

135. Московец, С. Н. Значение гриба Trichoderma koningii Oudem. вборьбе с болезнями сельскохозяйственных растений / С. Н. Московец, Л. А. Сергеев // Изучение и применение антибиотиков в растениеводстве: сб. ст. — Ереван, 1961.-С. 133-139.

136. Бокова, Ю. В. Лабораторная и полевая оценка грибов рода Trichoderma против Botritis cinerea / Ю. В. Бокова // Актуальные вопросы агроэкологии в интегрированных системах защиты растений: сб. ст. Пенза, 1999.-С. 29-31.

137. Симочкина, В. И. Использование гриба триходермы в борьбе с корневой гнилью огурцов в закрытом грунте / В. И. Симочкина, А. К. Успанов, Н. Е. Бекмаханова // Изв. АН КазССР.- Алма-Ата, 1988. -Ks 15. С. 149.

138. Гринько, Н. Н. Применение триходермина в овощеводстве защищенного грунта / Н. Н. Гринько. Минск: БелНИИНТИ, 1992. — 59 с.

139. Скрининг штаммов Trichoderma, активных против возбудителей заболеваний капусты Текст. / Н. Г. Захарова [и др.] // Вестник Российской академии с.-х. наук. 2002. - № 3. - С. 38-40.

140. Ousley, М. A. The Effects of Addition of Trichoderma Inocula on Flowering and Shoot Growth of Bedding Plants / M. A. Ousley, J. M. Lynch, J. M. Whipps // Scientia Horticulturae. 1994. - Vol. 59, № 2. - P. 147-155.

141. Громовых, Т. И. Trichoderma harzianum Rifai aggr. как фактор повышения устойчивости томатов к возбудителям корневой гнили Текст. / Т. И. Громовых [и др.] // Микология и фитопатология.- 1998. Т. 32. - Вып. 2. - С. 73-78.

142. Якименко, Е. Е. Влияние грибов рода Trichoderma на почвенные микромицеты, вызывающие инфекционное полегание сеянцев хвойных в лесных питомниках Сибири Текст. / Е. Е. Якименко, И. Д. Гродницкая // Микробиология. 2000. - Т. 69. - № 6. - С. 850-854.

143. Гринько, Н. Н. Экологически безопасная система Текст. / Н. Н. Гринько, В. С. Тарасенко, Т. В. Стрижак // Защита и карантин растений. -1996. -№ 1. С. 42-43.

144. Алимова, Ф. К. Местные штаммы Trichoderma — антагонисты возбудителей заболеваний Cucumis Sativus Текст. / Ф. К. Алимова, Н. Г. Захарова, Деп ВИНИТИ 19906 03.05.99, № 2685-В90.

145. Новые аборигенные штаммы грибов рода Trichoderma, распространенные на территории Средней Сибири Текст. / Т. И. Громовых [и др.] // Микология и фитопатология. 2001 .- Т. 35. - Вып. 1. - С. 56-61.

146. Papavizas, G. С. Trichoderma and Gliocladium: biology, ecology and potential for biocontrol / G. С Papavizas // Ann. Rev. Phytopathology. -1985. -Vol. 23. P. 23-54.

147. Lewis, J. A. Biocontrol of Cotton Damping-Off Caused by Rhizoctonia- Solani in the Field with Formulations of Trichoderma-spp. and Gliocladium-Virens / J. A. Lewis, G. C. Papavizas // Crop Prot. 1991. -Vol. 10, № 5. - P. 396-402.

148. Новый грибной . биопрепарат Триходемин-4 для борьбы с болезнями растений / Н. С. Федоринчик и др. / Спб.: Нев., 1998. - 120 с.

149. Гришкова, Л. А. Микофлора компостов из коры ели обыкновенной и ели аянской / Л. А. Гришкова, Н. П. Степина // Микология и фитопатология. 1981. - Т. 15. - № 6. - С. 544.

150. Гринько, Н. Н. Биотехнологические аспекты культивирования штамма Trichoderma harzianum Rifai ВКМ F-2477 Д Текст. / Н. Н. Гринько // Вестник Российской академии с.-х. наук. 2004. - № 1. - С. 56-60.

151. Садыкова, В. С. Изменчивость Trichoderma asperellum и отбор штаммов для создания биопрепаратов на гидролизном лигнине: автореф. дис. канд. биол. наук: / В. С. Садыкова. -М., 2003. 20 с.

152. Patent 5422107 USA, MKU6 A 01N 63/00, A 01N 1/00. Trichoderma harzianum SK-55 fungus, fungicide containing it, and method of manufacture of the same and its use / Kubota T. (USA). Inc. № 172273; № 4-359484; Hokkaido Green Kosan 23.12.1993.

153. Elad, Y. Trichoderma harzianum T-39 integrated with fungicides: Improved biocontrol of grey mould / Y. Elad, D. Shteinberg, A. Niv // Brighton Crop Prot. Conf.: Pests and Diseases, Brighton, 1994. Vol. 3. - P. 1109-1114.

154. Ricard, J. L. Commercialization of a Trichoderma-based mycofungicide some problems and solutions / J. L. Ricard // Biocontrol News and Information, 1981.- Vol. 2.- P. 95-98.

155. Lumsden, R. D. Biological control of damping-off caused by Pythium ultimum and Rhizoctonia solani in soilless mix / R. D. Lumsden, J. C. Locke // Phytopathology, 1989.- Vol. 79.- P. 361-366.

156. Титова, Ю. А. Вешенка и Триходермин на одном субстрате / Ю. А. Титова, J1. Б. Хлопунова, Д. В. Коршунов // Современная микология в России: тез. докл. М., 2002. - С. 288.

157. Вляиние грибов рода Trichoderma на состав одубины коры хвойных пород Текст. / Т. В. Рязанова [и др.] // Вестник СибГТУ. 2000. -№ 1. - С. 99-103.

158. Геллер, И. Т. Рост и развитие гриба Trichoderma harzianum на гранулированных питательных средах / И. Т. Геллер, И. Б. Беркутова, A. JT. Переверзева // Биотехнология микроорганизмов в сельском хозяйстве. М., 1989.-С. 115-122.

159. Рипачек, В. И. Биология дереворазрушающих грибов Текст. / В. И. Рипачек. М.: Лесная пром-сть, 1967.- 276 с.

160. Рабинович, М. Л. Прогресс в изучении целлюлолитических ферментов и механизм биодеградации высокоупорядоченных форм целлюлозы Текст. / М. Л. Рабинович, М. С. Мельник // Усп. биол. химии. -2000. Т. 40. - С. 205-266.

161. Кураков, А. В. Микромицеты продуценты термостабильных целлюлаз Текст. / А. В. Кураков, А. В. Болобова // Прикладная биохимия и микробиология. - 1999.-Т. 35.- №3.- С. 332-341.

162. Mandels, M. The production of cellulases / M. Mandels, J. Weber // Adv. Chem. Ser. 1969. - P. 391-413.

163. Свистова, И. Д. Состав целлюлолитического комплекса некоторых микромицетов / И. Д. Свистова, Е. Н. Бабьева // Микология и фитопатология- 1986. Т. 20, Вып. 2.- С. 120-123.

164. Лобанок, А. Г. Синтез целлюлолитических ферментов грибом Trichoderma lignorum / А. Г. Лобанок, Ж. И. Павловская, А. М. Ивличева //

165. Микроорганизмы продуценты биологически активных веществ. - Минск: Наука и техника, 1973. - С. 102-108.

166. Билай, В. И. Трансформация целлюлозы грибами Текст. / В. И. Билай, Т. И. Билай, Е. Г. Мусич. Киев: Наукова думка, 1982. —296 с.

167. Микробные ферменты и биотехнология Текст. / под ред. В. М. Фогати. М.: Агропромиздат, 1986. - 318 с.

168. Клесов, А. А. Ферментативное превращение целлюлозы Текст. / А. А. Клесов // Итоги науки и техники. Сер. Биотехнология. 1983. - Т. 1 -С. 63-150.

169. Бабицкая, В. Г. Прикладная биохимия и микробиология / В.Г. Бабицкая // Ферментативная деградация лигнина, содержащегося в растительных субстратах, мицелиальными грибами. 1994. — Т. 30. — Вып. 6.-С. 827-835.

170. Степанова, Н. Т.Основы экологии дереворазрушающих грибов Текст. / Н. Т. Степанова, В. А. Мухин. М.: МИИТ, 1997. - 100 с.

171. Ахметова, 3. Р. Лигнолитические, ксиланолитические и целлюлолитические ферменты некоторых базидиальных грибов и их взаимосвязь в разложении лигноцеллюлозы: автореф. дис. докт. биол. наук / 3. Р. Ахметова. Ташкент, 1999. - 42 с.

172. Головлева, Л. А. Биодеградация лигнина Текст. / Л. А. Головлева А. А. Леонтьевский // Успехи микробиологии. 1990. - № 24. - С. 128-155.

173. Борисова, В. Н. Влияние некоторых субстратов пероксидазного окисления на пероксидазную активность грибов, выделенных с элементов лесной подстилки Текст. / В. Н. Борисова, Л. М. Двойное // Микология и фитопатология. 1972. -Т. 6. - Вып. 2. - С. 152-154.

174. Горленко, М. В. Онтогенез грибов рода Тпс1юс1егта Гг. в различных условиях культивирования Текст. / М. В. Горленко, М. Б. Шарова, Е. Н. Воронкова // Микология и фитопатология. 1982. -Т. 16. Вып. 4.-С. 305-311.

175. Головлева, JI. А. Биохимия разложения лигнина микроорганизмами Текст. / Л. А. Головлева, О. В. Мальцева // Проблемы биоконверсии растительного сырья. М.: Наука, 1986. - 295 с.

176. Решетникова, И. А. Деструкция лигнина ксилотрофными макромицетами. Накопление селена и фракционирование его изотопов микроорганизмами Текст. / И. А. Решетникова. М.: 1997 — 197 с.

177. Higuchi, T. Degradative pathways of lignin model compounds // In: Biosynhesis and biodégradation of wood components. Ed Higuchi T. Academic Press, San Diego, Calif., 1985. P. 20.

178. Higuchi, T. Lignin biochemistry: biosynhesis and biodégradation / T. Higuchi // Wood Sci. Yechnol, 1990. Vol. 24. - P. 79-93.

179. Crawford, R. L. Lignin Biodégradation and Transphormation / R. L. Crawford // Wiley-Intersciance, New York, 1981. P. 23-63.

180. Umezawa, T. Cleavages of aromatic ring and side Chain of a (-0-4) lignin substructure model trimer by lignin peroxidase / T. Umezawa, T. Higuchi // 3Mokuzai Gakkaishi. 1988. - Vol. 34.-№ 11. - P. 929-933.

181. Reid, I. D. Demethylation of the lignin model dimmer l-(3,4-dimethoxyphenyl)-2-(o-methoxyphenoxy)-propan-l, -diol by white rot fungus Phlebia tremellosa /1. D. Reid //Can.J.Bot.-1992. Vol. 70. - № 3. - P. 453-460.

182. Медведева, С. А. Пути деструкции фенольных соединений и лигнина грибами белой гнили / С. А. Медведева, В. А. Бабкин // Превращение древесины при энзиматическом и микробиологическом воздействиях: тез.докл. Рига, 1988. - С. 85-92.

183. Исследование энзиматически разрушенной древесины Текст. / М. Я. Екабсоне [и др.] // Химия древесины. 1978. - № 2. - С. 61-64.

184. Медведева, С. А. Превращение ароматической компоненты древесины в процессе биоделигнификации: автореф. дис.докт. хим. наук: 02.00.03 / С. А. Медведева. Иркутск, 1995. - 40 с.

185. Шуберт, В. Д. Биохимия лигнина Текст. / В.Д. Шуберт. М.: Лесная промышленность, 1968. — 136 с.

186. Клесов, А. А. Ферментативный катализ: в 2 т. Т. 2 Текст. / А. А. Клесов. М., 1984. - 216 с.

187. A.c. 1694748' СССР. Гидродинамический способ размола волокнистых материалов / Ю. Д. Алашкевич и др.. Бюл. № 44 — 2 с.

188. A.c. 717135 СССР МКл2 С 14 СЗ/00. Способ получения дубильного экстракта из коры лиственницы / Э. Д. Левин, И. И. Астапкович, Т. В. Рязанова (СССР). № 2578904/28-12; заявл. 08.12.77; опубл. 25.02.80, Бюл. № 7 - 2 с.

189. Лабораторный практикум по целлюлозно-бумажному производств Текст. /С. Ф. Примаков [и др.]. М.: Лесная пром-сть, 1980. - 168 с.

190. Тюльпанова, В. А. Биологические и цитологические особенности мицелиальных грибов в различных биотехнологических системах Текст. / В. А. Тюльпанова, В. Г. Тюльпанов. Красноярск: Изда-во КГУ, 1987. -30 с.

191. Егоров, Н. С. Практикум по микробиологии Текст. / Н.С. Егоров.- М.: Высш. шк, 1976. 273 с.

192. Василевский, В. И. Основные технологические приемы получения гуминовых препаратов / В. И. Василевский, И. Д. Комисаров // Научн. труды Тюменского с.-х. ин-та. Тюмень, 1971. - Т. 14. - С. 34-37.

193. Аналитический контроль производства искусственных волокон Текст.: Справоч. пособие /под ред. А. К. Диброва, В. С. Матвеева — М.: Химия, 1986.-336 с.

194. Закис, Г.Ф. Методы определения функциональных групп лигнина Текст. / Г. Ф. Закис, Л. Н. Можейко, Г. М. Телышева. Рига: Зиматнэ, 1975.- 176 с

195. Пен, P. 3. Статистические методы моделирования и оптимизации процессов целлюлозно-бумажной промышленности Текст. / Р. 3. Пен. -Красноярск: КГТУ, 1982. 192 с.

196. Бамбалов, Н. Н. Выделение и свойства препаратов лигнина из гумифицированных материалов Текст. / Н. Н. Бамбалов // Химия почв. -2001.-№ 5-С. 549-556.

197. Кононов, Г. Н. Химия древесины и ее основных компонентов Текст.: учеб. пособие для студентов вузов / Г. Н. Кононов. — М.: МГУЛ, 1999.-247 с.

198. Михайлова, Е. И. Повышение эффективности производства дубильных экстрактов из коры лиственницы / Е. И. Михайлова, Т. В. Рязанова, Н. А. Чупрова // Проблемы химического комплекса: сб. тр. — Красноярск, 1995. С. 104.

199. Плешков, Б. П. Практикум по биохимии растений Текст. / Б. П. Плешков. М.: Агропромиздат, 1985. — 255 с.

200. Любарский, Л. В. Дереворазрушающие грибы Дальнего Востока Текст. / Л. В. Любарский, Л. Н. Васильева. Новосибирск: Наука, 1975.165 с.

201. Технология биоконверсии растительного сырья Текст.: Ч. 2. / П. В. Миронов [и др.].- Красноярск: СибГТУ, 2002. 150 с.

202. Саловарова, В. П. Эколого-биотехнологические основы конверсии растительных субстратов Текст. / В. П. Саловарова, Ю. П. Козлов. М.: Изд-во РГУ дружба народов, 2001. - 331 с.

203. Базарнова, Н. Г. Методы исследования древесины и ее производных / Е. В. Карпова, И. Б. Катраков; под ред. Н. Г. Базарновой. Барнаул: Изд-во Алт. Ун-та, 2002. - 160 с.

204. Сысоева, JT.H. Применение продуктов переработки торфа в качестве индукторов защиты растений от грибных инфекций Текст. / JI. Н.Сысоева, Т.И. Бурмистрова, Н.М. Трунова // Химия растительного сырья. -2008. -№ 1.-С. 123-126.

205. Раковский, В. Е. Химия и генезис торфа Текст. / В. Е. Раковский, Л. В. Пигулевская. М., 1975. - 232 с.

206. Шурубикова, А. А. Влияние природных цеолитов на Saccharomyces cerevisiae: автореф. дис. . канд. биол. наук: 03.00.23 / А. А. Шурубикова. Улан-Удэ, 2004. - 24 с.

207. Тюльпанова, В. А. Биологические и цитологические особенности мицелиальных грибов в различных биотехнологических системах Текст. / В. А. Тюльпанова, В. Г. Тюльпанов. — Красноярск: Изд-во КГУ, 1987. 30 с.

208. Матвеева, Р. Н. Особенности выращивания посадочного материала и лесных культур хвойных пород в Восточной Сибири Текст.: монография / Р. Н. Матвеева, О. Ф. Буторова. Красноярск: КГТА, 1996. -200 с.