автореферат диссертации по информатике, вычислительной технике и управлению, 05.13.01, диссертация на тему:Системная диагностика эффективности лазерофореза биологически активных веществ



На правах рукописи

КРАЮХИН Артем Вячеславович

СИСТЕМНАЯ ДИАГНОСТИКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛАЗЕРОФОРЕЗА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

05.13.01 - Системный анализ, управление

и обработка информации (биологические науки) 03.00.13 - Физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Тула - 2005

Работа выполнена на кафедре внутренних болезней медицинского факультета Тульского государственного университета и в Мединцентре по обслуживанию дипломатического и корреспондентского корпуса и других представительств ГлавУпДК (г. Москва).

Научные руководители:

доктор медицинских наук доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

Вигдорчик Владимир Ильич Хадарцев Александр Агубечирович

Дедов Вячеслав Иванович Бадиков Владимир Иванович

Ведущая организация:

НИИ нормальной физиологии РАМН им. П.К. Анохина

Защита состоится 005 г. в 14 часов на заседании

диссертационного совета Д 212271.06 при Тульском государственном университете по адресу: г. Тула, ул. Болдина, д. 128.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Тульского государственного университета по адресу: 300600, г. Тула, пр-т Ленина, 92.

Автореферат разослан « // » вММЯ^Ъл 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, л доктор медицинских наук, у

профессор ^-^¿П/ А.З. Гусейнов

/¿739

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Изучение эффектов биологически активных веществ представляется актуальным в связи с кризисом лекарственной терапии, порождающей ятрогенную патологию, значительными осложнениями и формированием системных подходов к лечебно-профилактическим мероприятиям (Комаров Ф.И. и соавт., 1992; Морозов В.Н., 1999; Хадарцев A.A. и соавт., 2003; Чжан Цзянь-цзюнъ и соавт., 2000; Hubboter F., 1957).

Имеются детальные исследования системных биологических эффектов фитопрепаратов (Купеев В.Г., 1999; Валентинов Б.Г., 2005; Наумова Э.М., 2005), изучены возможности применения янтарной кислоты, в том числе при психоэмоциональном стрессе (Ивницкий Ю.Ю. и соавт., 1998; Корягин A.A., 2004). Определены возможности лазеро-фореза биологически активных веществ, лекарственных препаратов, в том числе при гестозах (Соколов В.П. и соавт., 1997; Купеев В.Г., 2000; Демушкина И.Г., 2004).

Контроль эффективности лазерофореза осуществляется комплексом лабораторных и инструментальных исследований с достаточной степенью достоверности, в т.ч. методами компьютерной термографии, газоразрядной визуализации, фрактальной нейродинамики, лазерной доплеровской флоуметрии, интегральной реографии, определением коэффициента активности синтаксических программ адаптации и др. (Короткое К.Г., 1995; Морозов В.Н. и соавт., 2002; Хадарцев A.A. и соавт., 2003; Борисова О.Н., 2004; Бехтерева ТЛ., 2004; Смирнова И.Е., 2005).

Изучен способ определения аутофлуоресценции живых объектов для выявления степени участия живого организма в биологическом окислении (Кидалов В.Н. и соавт., 2005).

Не проведен сравнительный анализ различных способов определения эффективности лазерофореза биологически активных веществ, среди них не установлено место спектрофотометрического способа диагностики аутофлуоресценции биологических объектов, а также организма человека в норме и при патологии.

Цель исследования. Осуществить комплексную системную диагностику эффективности лазерофореза биологически активных веществ на примере янтарной кислоты.

В соответствии с целью определены задачи исследования.

1. Адаптировать стандартный отечественный биоспектрофотометр к задачам определения флуоресценции живых объектов.

2. Дать оценку спектров флуоресценции живых объектов.

РОС НАЦИОНАЛЬНАЯ

3. Провести анализ технологий определения эффективности лазе-рофореза биологически активных веществ.

4. Изучить механизмы воздействия янтарной кислоты в эксперименте.

5. Определить возможности комплексной диагностики эффективности лазерофореза янтарной кислоты при стрессах, при осложненной и не осложненной беременности, при сосудистых осложнениях сахарного диабета 2 типа.

Научная новизна. Впервые осуществлена оценка спектров флуоресценции биологических объектов на модифицированном спектрофотометре.

Осуществлено сравнительное исследование имеющихся способов диагностики эффективности лазерофореза биологически активных веществ.

Впервые в эксперименте установлена синтаксическая направленность влияния янтарной кислоты на модификацию программ адаптации.

Впервые проведена системная (включая определение аутофлуо-ресценции) диагностика эффектов воздействия янтарной кислоты на организм человека в состоянии условной нормы, при психоэмоциональных стрессах, при не осложненной и осложненной гестозом беременности, при сосудистых осложнениях сахарного диабета 2 типа.

Практическая значимость исследования. Исследования аутоф-луоресценции тканей на модифицированном спектрофотометре позволяют внедрить этот метод в комплексную систему интегральной диагностики состояния биологических объектов и человека.

Факт участия янтарной кислоты в модуляции программ адаптации с получением синтаксического эффекта позволяет использовать ее соединения в практической и научной деятельности для управляющей коррекции в процессе лечения и профилактики.

Установленный комплекс системной диагностики эффективности применения биологически активных веществ позволяет использовать реальную, зависящую от имеющегося технического оснащения, технологию при практическом применении.

Способ аутофлуоресценции живых тканей может с достаточной точностью широко применяться при анализе эффективности воздействия биологически активных веществ на человеческий организм при стрессах, беременности, сосудистых осложнениях сахарного диабета 2 типа.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследований используются в работе сотрудников МСЧ №5 г. Тулы, ГУП ТО

НИИ новых медицинских технологий, г. Тула, в учебном процессе на кафедре внутренних болезней медицинского факультета Тульского государственного университета, в Мединцентре при ГлавУПДК Министерства иностранных дел РФ.

Апробация работы. Результаты исследования доложены на 8 научных форумах, из них на 5 международных и на 3 всероссийских: на III Общероссийской конференции с международным участием «Новейшие технологические решения и оборудование» (Кисловодск, 1921 апреля 2005); V Сибирском физиологическом съезде (Томск, 29-30 июня, 1 июля 2005); на научной конференции с международным участием «Технологии 2005» (Турция, 22-29 мая 2005); VII Международной конференции «Циклы» (Ставрополь, 25-27 мая 2005); на Международном симпозиуме «Функциональные нарушения тканей тела человека и восстановление функций организма» (Санкт-Петербург, 1013 июня 2005); II научной конференции «Современные медицинские технологии (диагностика, терапия, реабилитация и профилактика)» (Хорватия, Умаг, 2-9 июля 2005); III научной конференции «Приоритетные направления развития науки, технологий и техники» (Хургада, Египет, 22-29 октября 2005); I Съезде физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека» (Сочи, 19-23 сентября 2005). Работа апробирована на совместной конференции Ученого Совета ГУЛ ТО НИИ новых медицинских технологий и кафедры внутренних болезней Тульского государственного университета (2005).

Публикации. По материалам исследований опубликовано 13 печатных работ, из них 1 монография, 1 статья, 11 тезисов докладов.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на страницах, построена традиционно, состоит из введения, 3 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, содержащего источников отечественных и YS зарубежных авторов), ^ рисунков, /Я, таблиц.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Метод аутофлуоресценции на модифицированном спектрофотометре отражает состояние тканевого дыхания и позволяет изучать его у биологических объектов.

2. Технологии определения эффективности лазерофореза биологически активных веществ разнятся по степени достоверности.

3. Янтарная кислота относится к адаптогенам - синтоксинам.

4. Метод определения аутофлуоресценции живых объектов имеет определенную значимость в комплексе диагностических технологий при стрессах, беременности, сосудистых осложнениях сахарного диабета.

ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Объект исследования

При оценке спектров флуоресценции живых объектов использованы 12 медицинских пиявок, 83 крысы.

В экспериментальных исследованиях по изучению эффекта янтарной кислоты были задействованы. 96 животных - беспородных крыс (с массой тела 220-235 г.). У 46 изучено биологическое окисление при отморожении и коррекции его лазерофорезом янтарной кислоты, у 40 - коррекции не проводилось (контрольная группа).

Клинические исследования осуществлялись на базе «Мединцен-тра», клинических базах ГУП НИИ новых медицинских технологий, объединенного с научно-исследовательским центром медицинского факультета Тульского государственного университета.

Постановка диагнозов осуществлялась врачами клиник, лазеро-форез с янтарной кислотой - в присутствии лечащего врача, на все исследования получено добровольное информированное согласие.

При оценке спектров флуоресценции и оценке состояния эритроцитов обследована кровь 23 здоровых лиц (контрольная группа), больных раком желудка - 55, язвенной болезнью желудка и 12-ти перстной кишки - не осложненной - 22, осложненной кровотечением анемией -10. Всего - 110 человек.

При изучении эффекта лазерофореза янтарной кислоты всего в основной группе - 108 человек, в контрольной - 59 человек, из них беременных с нормально развивающейся беременностью - 15 (контрольная группа), с гестозами - 27 (основная группа), всего - 42 человека; с сосудистыми осложнениями сахарного диабета II типа - 55 человек (21 - контрольная группа, 34 - основная), спортсменов с психоэмоциональным стрессом - 70 (23 - контрольная группа, 47 - основная).

2. Методы исследования 2.1. Общеклинические методы

Общеклинические исследования включали: сбор анамнеза, результаты объективного обследования, применение лабораторных, инструментальных и функциональных методов диагностики (электрокардиография).

2.2. Биохимические методы

2.2.1. Окислительная и антиокислительная активность", исследовали концентрацию малонового диальдегида (МДА) в мкмоль/л, общую антиокислительную активность крови (АОА) в %.

2.2.2. Система свертывания и противосвертывания: концентрацию фибриногена в мкмоль/л, растворимого фибрина в мкмоль/л, продуктов деградации фибрина в нмоль/л, гепарина в Е/мл, антитромбина Ш в %, концентрацию а2-макроглобулина в мкмоль/л, а 1-антитрипсина в мкмоль/л.

2.2.3. Гормоны и медиаторы: Серотонин в мкмоль/л, кортизол в нмоль/л, ацетилхолин в нмоль/л, адреналин в нмоль/л, норадреналин в нмоль/л - определяли флуориометрическим методом.

Коэффициенты активности программ адаптации (КАСПА) рассчитывались по методике, описанной в (Морозов В.Н., 1999):

КАСПА = ^сг + ^ат-ш + А/юл + Сро»*

Сдд + Cejje- + Садд + Ссо^

где ССт - концентрация серотонина в крови (%); Аат.ш - активность антитромбина III (%); ААоа - общая антиокислительная активность плазмы; CCds+ - концентрация Т-супрессоров (%); Сад - концентрация адреналина крови (%); С^-мг - концентрация а2-макроглобулина (%); Смдд - концентрация малонового диальдегида (%); CCD4+ - концентрация Т-хелперов (%).

Лабораторная диагностика проводилась на анализаторе ФП-901 фирмы «Labsystems» (Финляндия).

2.3. Специальные инструментальные методы

2.3.1. Реография

Реографические исследования осуществлены на 6-канальном реографе «Реан-Поли» (НПКФ «Медиком МТД», г. Таганрог). В его состав входит блок пациента с набором реографических каналов и программно-методическое обеспечение. Осуществлены анализы: количественный, диаграммный, гистограммный, двухкомпонентный, спектральный.

2.3.2. Спектрофлуориметрия

Спектр естественной флуоресценции живых объектов в форме несимметричной колоколообразной кривой, на которой выделяют свечение двух участков длин волн X = 520-530 нм и Я = 455-470 нм.

Интенсивность клеточного дыхания косвенно определяли по соотношению интенсивностей свечения флавопротеидов и пиридиннук-леотидов: С= 1520-530/1465-470 нм.

В настоящей работе использовались следующие установки:

1) Комплекс на основе бинокулярного микроскопа ЛЮМАМ-Р1 с контактным эпиобъективом 10x0,30 ДТ 190 (ГОИ), освещаемым ртутной лампой ДРШ-250-3 и соответствующим блоком питания производства ЛОМО. Комплекс снабжен 2 телекамерами: ПЗС (черно-белая) и Panasonic NV-R 100 (цветная), видеомагнитофоном Panasonic Р5, видеокамерами, монитором (бытовой телевизор) и компьютером фирмы IBM с видеоплатой (framegrabber). Основным узлом комплекса является многоканальная светооптическая микроспектрофотометриче-ская установка, имеющая источники видимого света и ультрафиолетового излучения.

2) комплекс 2 на основе — волоконно-оптического флуориметра, используется для биоспектрофотометрии и оценки спектров растительных и живых биообъектов (преимущественно покровных тканей) при помощи двухканального УФ-биоспектрофотометра с кварцевым и стекловолоконным световодами.

Время измерения - 0,5 сек, аналоговый сигнал вывода информации на внешние регистрирующие устройства - от 0 до + 8В, стабильность - 2 %, воспроизводимость измерений - 2,5 % (Соловьев В.Н., Самойлов В.О., 1977; Лисовский В.А. и соавт., 1984)

Используется следующий способ исследования флуоресценции биообъектов: При съеме спектрофотометрических показателей с исследуемого биологического объекта УФ-лучи с Я = 365 нм подаются на облучаемую зону исследуемого объекта через волоконно-оптический жгут. Этими лучами в течение 0,5 сек возбуждают флуоресценцию. По стекловолоконному световоду флуоресцентное излучение светового диапазона длин волн проводится на фотоприемное устройство, где подвергается автоматической компьютерной обработке по программе регистрирующей спектр флуоресценции и выделяющей интенсивность излучения на длинах волн 460-470 нм и 520-530 нм. Это необходимо для определения активности участия в биологическом окислении (клеточном дыхании) пиридиннуклеотидов и флавопротеидов. В необходимых случаях проводится анализ расширенного спектра флуоресценции от 395 нм до 700 или 800 нм, что может давать дополнительную информацию о свечении гемопорфиринов (Якубовская З.И. и соавт., 1998; AizavaR., 1983).

2.3.3. Устройство для лазерофореза

Устройство для лазерофореза «МАГИСТР-П» предназначено для воздействия на органы модулированным излучением оптического диапазона для лазерофореза биологически активных веществ. Используется монохроматическое излучение без пространственной когерентности, длина волны - 0,89-0,92 нм, импульсная мощность МАХ - 10 Вт, частота следования МАХ - 5 кГц, применяемые виды модуляции -амплитудая, частотная, широтная (Хадарцев А.А. и соавт., 2003).

2.3.4. Янтарная кислота

Предприятием «Тульская индустрия LTD-company» изготовлены гели, содержащие янтарную кислоты с 1,5 % их содержанием.

2.3.5. Лазерная допплеровская флоуметрия

Микроциркуляцию крови исследовали с помощью отечественного прибора ЛАКК-01, производимого Hi 111 «Лазма» (длина волны лазерного излучения 0,63 мкм, мощность лазерного излучения до 0,5 мВт). Прибор разрешен к применению в медицинской практике (Протокол № 1 КЬ-мисии по клинико-диагностическим приборам и аппаратам Комитета по новой медицинской технике МЗ МП РФ от 13.01.93 г., per. номер 18/2-164-93).

3. Статистическая обработка

Обработка результатов проведенных исследований проведена с оценкой различий по методу Стьюдента (Excel 7.0), корреляционный и регрессивный анализ с помощью пакета статистических программ «Statgraphics 2.6» (Сергиенко В.И., Бондарева И.Б., 2000).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Стандартизация УФ-биоспектрометра, его модификация

1.1. Доработка спектрофотометра

Для уменьшения паразитных излучений была осуществлена постановка специальных интерференционных фильтров. В электрическую схему добавлен блок управления режимом УФ-возбуждения ау-тофлуоресценции ткани в течении 1,5 секунд с кнопкой ручного управления, доработана оптическая схема возбуждающей и регистрирующей части прибора в блоке монохроматора установлены дополнительные светопоглощающие панели.

1.2. Оценка спектров флуоресценции биологических объектов

1.2.1. Свечение биологических объектов

Живые биообъекты (поверхностные ткани живых растений и животных) давали асимметричный спектр свечения большой интенсивностью свечения. Обнаружены особенности спектров флуоресценции растительных и животных тканей. Диапазон длин волн видимого света аутофлуоресценции в данном исследовании был условно разделен на цветовые поддиапазоны: фиолетовый - 390-440 нм, синий - 440-480 нм, голубой - 480-510 нм, зеленый - 510-550 нм, желто-зеленый -550-575 нм, желтый - 575-585 нм, оранжевый - 585-620 нм, красный - 620-770 нм.

1.2.2. Исследование спектров флуоресценции медицинских пиявок

Хитиновый покров этих червей обладает низким уровнем аутофлуоресценции в ультрафиолетовых лучах в диапазоне длин волн 400800 нм. При исследовании флуоресценции центральной части тела поверхности тела голодной медицинской пиявки, интенсивность ее аутофлуоресценции оказалась на порядок ниже, чем у кожи человека.

Насасывание крови пиявками приводило к некоторому угнетению свечения поверхности тела этих животных на длинах волн 455-470 нм. Насыщение и очистка насосавшейся пиявки от крови приводила к некоторому изменению параметра «ф>.

1.2.3. Исследование спектров свечения белых беспородных крыс

Исследование спектров свечения у 83 крыс показало, что спек-трофотометрические кривые отражают не только процессы, происходящие в узких участках дыхательной цепи, где происходит окисление и восстановление ПН и ФП.

Перед исследованием флуоресценции кожи беспородных белых крыс предварительно производилось сбривание шерсти. Характер спектра таких участков имел асимметричную колоколообразную форму, с максимумом свечения в районе Я 495-515 нм.

Максимум интенсивности собственной флуоресценции в УФ-лучах кожи составил 320±8,5 е.

1.2.4. Оценка киральности различных участков тела человека

Сравнение аутофлуоресценции кожи в симметричных участках тела у здоровых людей проведено у 18 мужчин и 14 женщин среднего возраста, условно здоровых. Установлено, что интенсивность свечения

симметричных участков кожи поверхности головы, туловища, верхних и нижних конечностей идентична.

При исследовании ушной раковины интенсивность свечения симметричных участков кожи отличается на 4-6 % у одних и тех же людей, независимо от пола.

Флуоресценция кожи в симметричных участках тела у больных людей, отличия в интенсивности свечения не отличались более чем на 4-5 %, но отдельные симметричные точки тела показывали заметные отличия спектров свечения, особенно если они находились в зонах Захарьина-Геда (проекции на поверхность тела больного органа).

В сегментах тела, как на передней, так и на задней поверхности имеет место более высокий уровень аутофлуоресценции в верхней (головной) и несколько сниженный уровень флуоресценции в нижней (ножной) области сегмента. При измерении спектра флуоресценции на ушной раковине в верхней части ладьевидной чаши 1тах составила 160±2,5 е., в ее центре 1тах составила 135±3,5 е., а в центре мочки ушной раковины - 1тах составила 115±3,5 е. Учитывая, что в область мочки уха проецируется голова, а в области верхушки ушной раковины -нижняя часть тела (о чем свидетельствуют данные аурикулопунктуры (Бецкий О.В., 1998), то полученные данные подтверждают результаты измерений.

При исследовании верхней конечности интенсивность свечения 1тах в центре ладонной поверхности на сгибе запястья составила 200±7,1 е., а в центре ладони 160±7,2 е.

1.2.5. Оценка особенностей спектров аутофлуоресценции лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов

Проведена оценка особенностей спектров аутофлуоресценции лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов человека (п = 71) и беспородных белых крыс (п = 83).

Установлено, что по интенсивности аутофлуоресценции исследованные клетки можно расположить в следующем порядке (от высокой интенсивности свечения к низкой): лейкоциты крови, эритроциты, а также ряд особенностей, характерных для свечения эритроцитов, по отношению к клеткам других тканей. Учитывая, что эритроциты эво-люционно специализировались на газообменных функциях (Загряд-ский В.П., Сулимо-Самуйлло З.К., 1974), прослежены изменения конфигурации, ультраструктуры клеток.

Исследования релаксационных процессов крови здоровых лиц (п = 47) показали, что в течение суток эритроциты-дискоциты медленнее превращались в эхиноциты в препаратах типа «раздавленная капля» с доступом к ним воздуха и быстрее (эхиноцитов оказалось больше в 9 раз, Р = 0,001) в герметизированных препаратах, в которых доступ к

клеткам кислорода извне был исключен. Помещение тех же проб крови на 30 мин. в барокамеру при рСЬ = 0,25 Мпа замедляло переход дискоцитов в эхиноциты.

В барокамеру на 90 мин. помещали гепаринизированную кровь 14 здоровых мужчин и подвергли эти пробы воздействию сжатого кислорода. Пробы извлекали для анализа через 30,60 и 90 мин.

При воздействии в течение 90 мин. на кровь сжатого кислорода с р02 = 0,7 Мпа установлено выраженное дисгармонизирующее влияние этого режима на эритроциты. Число дискоцитов достоверно понизилось до 18 % (норма - 62 %), а число стомацитов и пойкилоцитов увеличилось, соответственно, до 68,55 % и 12,56 %. Большая часть эрит-роцитов-дискоцитов подверглась трасформации до пойкилоцитов и шизоцитов, что свидетельствует о почти полном исчерпании их трансформационного запаса.

В крови, не подвергшейся воздействию сжатого кислорода, преобладали дискотороидальные формы, планоциты, стомато- и эхиноциты начальных стадий трансформации, макроплано- и макроовалоциты, а среди дискоцитов наблюдались единичные клетки с овальными и ангулярными условно-полиморфными стомами (УПС). После полуто-рочасового воздействия на эти гепаринизированные пробы крови сжатым кислородом в квантитативной эритрограмме оставались лишь единичные дискоциты, как правило с УПС отросчато-звездчатой формы. В единичных экземплярах оказались также стомациты (преимущественно гребневидные), размеры многих макропланоцитов превышали естественные размеры эритроцитов (около 7,2 мкм) в 2-2,5 раза, отмечено появление моно- и биполярно вытянутых серпообразных клеток (как при серповидно-клеточной анемии), клеток в форме «шапки Полишинеля», астроцитов. В каждой из этих проб 10-20 % клеток различной конфигурации составляли формы с многочисленными пузырькообразными вздутиями плазмолеммы. Число клеточных теней возросло по сравнению с фюном в 3 раза и достигало в отдельных препаратах 8—10 %.

Характер свечения эритроцитов до и после воздействия повышенного давления кислорода соответствовал спектральным характеристикам, типичным для крови в обычных условиях, с той лишь разницей, что при высоких уровнях гипербарии снижался общий выход флуоресценции, который, очевидно, был обусловлен необратимой трансформацией эритроцитов в пойкилоциты.

Обсуждаемый эксперимент показал, что высокое парциальное давление кислорода способно вызывать выраженное дисгармонизирующее (вплоть до деструктуризации) непосредственное действие на эритроциты.

Связь между изменением конфигурации клеток и их аутофлуо-ресценции исследовалась при работе с кровью больных людей. Была

обследована кровь 23 практически здоровых людей (контроль) и лиц с заболеваниями раком желудка - 55 человек (1 группа), не осложненной язвенной болезнью — 22 человека (2 группа), вошли 10 человек с язвенной болезнью желудка, осложненной кровотечением и железоде-фицитной анемией (3 группа). Четвертая группа состояла из 7 человек, страдающих В|2-дефицитной анемией с сопутствующим хроническим гастритом.

У больных на последних стадиях рака желудка (1 гр.) в крови преобладали трансформированные клетки, среди которых особенно много было пойкилоцитов. Часть из них напоминали копыто (керато-циты), пятиконечные звезды или медузы (акантоциты), часть эритроцитов имели внутри отверстие и были, как бы простреляны (анулоци-ты), наблюдались клетки неправильной овальной формы, в форме свернутого листа (книзоциты), воронки, восьмерки, колпачка с помпонами («шапка Полишенеля»). У больных с анемией из-за недостаточности витамина В]2 (4 гр.) большинство эритроцитов были увеличены в размерах и уплощены, напоминая по форме монету (планоцигы).

У больных 3 гр. с недостатком железа в организме отмечались клетки малого диаметра (до 4 мкм вместо 7,2 мкм). В их квантитативной эритрограмме часто встречались анулоциты и шизоциты. У больных с неосложненной язвенной болезнью в крови оказалось несколько увеличенным число стомацитов, однако, в меньшем количестве встречались и трансформированные эритроциты из других подгрупп. Наглядные результаты (табл. 1) о дисбалансе красной крови выявлены при подсчете гематологического индекса квантитативной эритрограм-мы - индекса трансформации (ИТ = Д/ТЭ) и показателя компенсаторной трансформации (ПКТ = Ст + Эх/П + Гф).

Таблица 1

Отклонения от «золотого сечения» в показателях квантитативной эритрограммы в группе больных терапевтического профиля

Группа Эритроциты и гемоглобин ИТ ПКТ

Рак желудка (3,1-3,3)- 10,2/л НЬ 72-78 г/л 2,1±0,6 1,02±0,05

Язвенная болезнь (4,0-4,2)- 10,2/л НЬ 110-135 г/л 0,58±0,04 8,66±0,92

Язвенная болезнь с железоде-фицитной анемией (3,5-3,8)-1012/л НЬ 109-125 г/л 0,72±0,11 0,85±0,04

В12-дефицитная анемия с хроническим гастритом (3,5-4,0)-10,2/л НЬ 110-125 г/л 0,50±0,03 2,09±0,36

Практически здоровые (4,5-4,8)-10|2/л НЬ 119-135 г/л 0,58±0,05 !2,30±1,14

ИТ увеличивался параллельно усилению дисгармонии в системе крови и ухудшению состояния здоровья, а ПКТ при этом снижался.

Оценка характера аутофлуоресценции эритроцитов показала, что эритроциты здорового человека сразу после взятия пробы крови флуоресцируют слабоинтенсивным видимым светом, причем наружные части тора светятся несколько ярче, чем центральная часть клетки.

В высыхающем препарате перед моментом полного высыхания внеклеточной жидкости у отдельных эритроцитов свечение в УФ-лучах резко возрастает (интенсивность свечения клетки возрастает в 2-5 раз) за счет флуоресценции наружных частей тора, а центральные части этих клеток, в местах где обычно формируются УПС, почти полностью перестает флуоресцировать.

До 95 % клеток-дискоцитов без УПС флуоресцирют преимущественно сине-голубым светом, однако большие зоны наружных частей их тора нередко светят бело-розовым цветом. Участки свечения напоминают светящийся серп луны в темном небе. Стоматоциты-111 флуоресцируют неравномерно, преимущественно фиолетовым светом, а участки свечения синим и розовым светом заметно сужаются в размерах, принимая вид сектора или треугольника (рис. 1). Эхиноциты-1 светят' подобным образом, с тем лишь отличием, что участки розовой флуоресценции у них чаще оказываются множественными, расположенными в зонах выпячиваний клеточной оболочки (рис. 2).

Рис 1 Неравномерность аутофлуоресценции Стом-1 и Стом-Ш при возбуждении аутофлуоресценции УФ- и видимым светом. Ув. х320

Рис. 2. Неравномерность аутофлуоресценции эхиноцитов. Ув. х320

При возбуждении флуоресценции синим светом эритроциты начинают светиться в желто-зеленом диапазоне длин волн. Характер свечения у клеток различной формы имеет некоторые отличия, хотя в целом обладает общими свойствами: тор светится ярче, а центральная зона практически не излучает видимого света. При совместном облучении клеток УФ и синими лучами наблюдалось свечение как в синем, розовом, так и в желто-зеленом участках видимого спектра длин волн. Такая неравномерность свечения клеток позволила предположить, что наиболее интенсивно светятся участки клетки, наиболее близко находящиеся к источнику излучения и что возможно проведение сканирования свечения клеток фокусируя интенсивность свечения в разных плоскостях - срезах клетки. Данный способ вполне может быть назван светооптической томографией клетки.

Поверхностные слои тора клеток флуоресцировали наиболее ярко и на срезах «фигура свечения» выявлялась вначале в виде сияющего кольца с вкраплениями в виде участков более интенсивного (на 50-200 %) свечения.

Оптические «срезы» глубоких слоев клеток (срез на уровне 1,3 высоты тора) давали уже иную картину: «фигура свечения» дискоцита напоминала обручальное кольцо (рис. 3). «Срез» свечения на том же уровне эхиноцитов давал «фигуру свечения» в форме шестеренки. Более глубокие срезы, на уровне мембраны центральной зоны клетки выглядели уже не кольцом, а неким подобием сита, поскольку наблюдались участки свечения и в зоне формирования УПС, особенно, у эритроцитов, релакси-рующих из дискоцитов в другие конфигурации. При этом интенсивность свечения заметно усиливалась в подсыхающем препарате в период, когда клетка начинала терять внутриклеточную воду.

Рис 3 Свечение дискоцитов в УФ-лучах: розово-белым светом флуоресцирует тор эритроцитов, сине-фиолетовым светом флуоресцируют отдельные точечные участки клеток, из которых излучение идет в виде расходящегося пучка (а)

Интенсивность свечения эритроцитов оставалась на том же уровне, как у практически здоровых лиц, у больных с В^-дефицитной анемией с хроническими гастритами. Более высокая интенсивность свечения (выше, чем у практически здоровых на 10-15 %) отмечалась у больных с язвенной болезнью в сочетании с железодефицитной анемией, у отдельных больных язвенной болезнью без признаков анемии и практически у всех больных страдающих раком желудка с признаками выраженной анемии (гемоглобин ниже 80 г/л, эритроциты - ниже 3 млн в 1 мкл).

2. Механизмы воздействия янтарной кислоты в эксперименте

Основываясь на известных механизмах воздействия янтарной кислоты, решено изучить принадлежность ее к адаптогенам и степень участия в формировании программ адаптации. С этой целью проведены экспериментальные исследования на 98 крысах весом 180-200 грамм, которым вводили внутрибрюшинно янтарную кислоту в 1 % растворе - 2 мл, 2 раза в день в течение 1 недели. В крови, взятой из хвостовой вены, изучен ряд показателей активности ферментов и содержание метаболитов. Получены следующие результаты (табл. 2).

Был рассчитан КАСПА (рис. 1).

Анализ полученных результатов показывает, что после введения янтарной кислоты активируются антиокислительные и противосвер-тывающие системы крови, доминируют холинреактивные механизмы. Увеличение КАСПА подтверждает факт преобладания синтоксических эффектов янтарной кислоты.

Механизм такого эффекта объясняется включением экзогенной янтарной кислоты (по данным Ю.Ю. Ивницкого (1998) - не имеющей киральности, следовательно, соответствующей полностью эндогенному сукцинату) - в цикл Кребса. По принципу обратной связи происходит стимуляция выработки гаммаминомасляной кислоты (ГАМК), косвенно тормозящей метаболизм. Известно, что ГАМК является эндогенным адаптогеном синтоксической направленности (Наумова Э.М., 2005). Восстановление янтарной кислотой пула пиридиновых нуклеотидов обеспечивает также активацию антиокси-дантной функции глутатиона. Наличие антиоксидантного эффекта является признаком, позволяющим отнести янтарную кислоту к синтоксинам.

Исследуемые показатели после внутрибрюшинного введения раствора янтарной кислоты

Показатели Исходные После введения

показатели янтарной кислоты

Концентрация АХ в гипоталамусе, нмоль/г 8,6±0,16 11,6±1,17*

Концентрация НА в гипоталамусе, нмоль/г 0,59±0,02 0,32±0,01*

ГАМК гипоталамуса, мкг/г 410,0±13,7 670,0±15,3*

Ацетилхолин крови, нмоль/л 95,6±2,50 126,5±1,74*

Адреналин в крови, нмоль/л 1,58±0,13 1,99±0,42*

Норадреналин крови,нмоль/л 4,15±0,25 4,17±0,71*

Серотонин крови, мкмоль/л 0,39±0,02 1,24±0,02*

Кортизон, нмоль/л 58,8±3,25 42,4± 1,32*

Общие липиды, г/л 4,7±0,14 5,4±0,09*

Триглицериды, ммоль/л 0,7±0,02 0,8±0,02

Холестерин, ммоль/л 2,2±0,02 2,1 ±0,01

СЖК, ммоль/л 0,35+0,01 0,32±0,01

Глюкоза, ммоль/л 4,2±0,05 3,2±0,03

Лактат, мкмоль/л 0,92±0,02 0,81 ±0,01

Время свертывания крови, с 135,5±5,4 231,1±12,2*

Фибриноген, мкмоль/л 10,5±0,12 10,8±0,07

Растворимый фибрин, мкмоль/л 0,25±0,01 0,16±0,03*

ПДФ, нмоль/л 43,5±3,22 61,8±2,32*

Концентрация гепарина, Е/мл 0,5010,03 0,80±0,02*

Антитромбин III, % 90,5± 1,36 105,3±2,12*

Активность плазмина, мм2 11,0±0,63 25,0±0,65*

<х2-макроглобулина, мкмоль/л 3,8±0,11 2,9±0,18*

cxi -антитрипсина в, мкмоль/л 36,6± 1,45 28,4± 1,51*

Гидроперекиси, ОЕ/мл 1,31 ±0,07 0,80±0,12*

МДА, мкмоль/л 0,65±0,06 0,51 ±0,02*

АОА плазмы, % 25,5± 1,40 38,0±2,46*

Катапазы крови, мкат/л 12,0±0,57 17,0±0,92*

Иммуноглобулины G, мкмоль/л 54,0±2,01 45,2±1,34*

Иммуноглобулины А мкмоль/л 6,5±0,20 4,9±0,12*

Иммуноглобулины М, мкмоль/л 0,59±0,02 0,70±0,01*

КАСПА 1,0±0,01 1,37±0,02*

Количество животных 20 20

о

до после

Рис. 1. Коэффициент активности синтаксических программ адаптации до и после внутрибрюшинного введения янтарной кислоты

3. Аутофлуоресценция живых тканей при лазерофорезе янтарной кислоты

3.1. Изменение аутофлуоресценции покровных тканей у спортсменов с психоэмоциональным стрессом при воздействии лазерофореза янтарной кислоты

Параметр «£> (отношение интенсивности флуоресценции на длине волны 530 нм к интенсивности свечения на длине волны 455 нм) измерялся на ногтевой фаланге 3 пальца кисти у 47 спортсменов в соревновательный период (основная группа) и у 23 здоровых лиц при отсутствии стрессорных воздействий (контрольная группа).

Таблица 3

Изменение параметра «£» при воздействии лазерофореза с янтарной кислотой

Группа Фоновые значения Через 1 час после процедуры Через 3 часа после процедуры Р

Основная (п = 47) 1,23±0,021 1,03±0,014 0,45±0,014 <0,01

Контрольная (п = 23) 0,68±0,015 0,52±0,023 0,69±0,018 <0,05

Снижение показателя «£» свидетельствует о значительном влиянии лазерофореза с янтарной кислотой на биологическое окисление и о значимости спектрофотометрического метода для косвенной оценки биоокисления в тканях. Эти данные позволяют также сделать вывод о нарушении процессов биоокисления у спортсменов при стрессорных нагрузках в соревновательном периоде и о возможности коррекции их использованным способом.

Изменение спектра флуоресценции эритроцитов-дискоцитов в соревновательный период у 47 легкоатлетов (табл. 4).

Таблица 4

Изменения спектра флуоресценции эритроцитов-дискоцитов в соревновательный период у легкоатлетов (бег на среднюю дистанцию)

п = 47

Контрольные параметры Перед стартом После забега Р

Интенсивность свечения и спектр свечения дискоцитов (Д) 1,85±0,003 е.с. 2,31 ±0,004 е.с. <0,05

Интенсивность свечения стомато-цитов (СТ) 1,64±0,025 е.с. 1,37±0,001 е.с. >0,05

Интенсивность свечения эхиноци-тов (ЭХ) 1,37±0,004 е.с. 1,39±0,003 е.с. <0,05

Интенсивность свечения пойкилоцитов и шизоцитов (П) 0,68±0,024 е.с. 0,59±0,031 е.с. <0,05

Показано достоверное увеличение интенсивности и спектра свечения дискоцитов после бега. Колебания свечения стомацитов, эхино-цитов, пойкилоцитов и шизоцитов были недостоверными.

3.2. При беременности

3.2.1. Показатели центральной гемодинамики

Изучены показатели центральной гемодинамики при нормально протекающей беременности, и при гестозах до и после лазерофореза янтарной кислоты, которые приближались к нормативным показателям, что свидетельствует об участии янтарной кислоты в формировании программ адаптации (табл. 5).

Результаты свидетельствуют об улучшении показателей работы сердца, изменении типа гемодинамики в сторону эукинетйческого, улучшении работы левого желудочка, с повышением ударных показателей (УОК, У И), уменьшением сосудистого сопротивления.

Показатели центральной гемодинамики при нормальной беременности (норма), и при фетоплацентарной недостаточности до и после лазерофореза янтарной кислоты

Параметры Норма (п=15) До лечения (п=27) После лечения (п=27) Р

УО 39-52 36,47±1,18 42,27±1,23 <0,05

УИ 25,1-33,9 20,19±0,69 32,39 ±0,54 <0,05

ОСВ 155,2-209,9 118,29±4,11 158,32±5,01 <0,05

РЛЖ 40,6-54,9 43,64±1,55 53,61 ±4,13 <0,05

РИЛЖ 1,89-2,56 2,11±0,1 2,35±0,08 >0,05

ОПСС 1595-2158 3145,37±111,14 2148±76,59 <0,05

УПСС 2465-3334 4986,21±174,28 3146±128,18 <0,01

Уменьшение ОПСС и УПСС свидетельствует о благоприятном воздействии компонентов янтарной кислоты на центральную гемодинамику. Такой эффект возможен только как результат внешней модуляции программ адаптации и, как следствие, эндогенной активации синтоксических программ адаптации.

3.2.2. Показатели микроциркуляции

Изменение показателей микроциркуляции также показало приближение их к норме (табл. 6).

Таблица 6

Показатели ЛДФ при нормально протекающей беременности (норма), и при фетоплацентарной недостаточности до и после лазерофореза янтарной кислоты

Показатели Норма (п=15) До лечения (п=27) После лечения (п=27) Р

ПМ (перф. ед.) 5,41±0,29 4,37±0,29 5,43±0,12 <0,05

^¿/г(перф. ед.) 1,21±0,01 0,59±0,08 1,12±0,08 <0,05

ACF (перф. ед.) 0,19±0,02 0,12±0,04 0,18±0,10 <0,05

HKCf (ед.) 79,!8±1,14 61,17±1,83 76,29±1,09 >0,05

ИЭМ (ед.) 2,04±0,14 1,32±0,15 1,94±0,12 <0,05

ИСТ(%) 81,54±6,32 107,12±8.75 89,47±3,67 <0,05

ДПМдых. (%) 25,52±0,74 19,49±1,73 24,35±0,65 >0,05

ДПМпост. (%) 39,73±1,12 26,44±1,15 38,39±0,85 >0,05

РКК (%) 217,39±4,18 182,37±4,26 209,37±4,6 <0,01

Достоверная динамика показателей ЛДФ после коррекции программ адаптации янтарной кислотой является фактором, подтверждающим значимость изменений микроциркуляции крови, как основы патогенеза различных заболеваний и патологических состояний и также свидетельствует о коррекции программ адаптации по синтокси-ческому типу.

3.2.3. Показатели аутофлуоресценцгш

Параметр «£» (отношение интенсивности флуоресценции на длине волны 530 нм к интенсивности свечения на длине волны 455 нм) измерялся на ногтевой фаланге 3 пальца кисти у 42 женщин при нормально протекающей (15 человек - контрольная группа) и осложненной гестозом беременности (27 человек - основная группа) - табл. 7.

Таблица 7

Изменение параметра «ф> у беременных при воздействии лазерофореза с янтарной кислотой

Группа Фоновые значения Через 1 час после процедуры Через 3 часа после процедуры Р

Основная (п = 27) 1,16±0,014 0,95±0,021 0,37±0,011 <0,01

Контрольная(п =15) 0,54±0,012 0,49±0,019 0,36±0,014 >0,05

Отмечается значительное достоверное уменьшение исследуемого параметра в основной группе, связанное с уменьшением тканевой гипоксии при гестозах после воздействия янтарной кислоты. В контрольной группе при нормально протекающей беременности динамика не достоверна, но отмечается снижение параметра, объясняющееся скрытой тканевой гипоксией, что свидетельствует о значительной чувствительности метода.

Достоверное уменьшение спектра свечения и интенсивности дис-коцитов после лазерофореза янтарной кислоты свидетельствуют о регулирующем ее воздействии на процессы тканевого окисления. Интенсивность свечения и спектр эхиноцитов, стоматоцитов, пойкилоцитов и шизоцитов меняется недостоверно и не может использоваться при анализе эффективности янтарной кислоты.

Изменения спектра флуоресценции эритроцитов-дискоцитов у беременных с гестозом до и после лазерофореза янтарной кислоты

Контрольные параметры До лазерофореза янтарной кислоты После лазерофореза янтарной кислоты Р

Интенсивность свечения и спектр свечения дискоцитов (Д) 3,38±0,002 е.с. 1,69±0,001 е.с. <0,01

Интенсивность свечения стоматоци-тов (СТ) 1,42±0,004 е.с. 1,57±0,019е.с. >0,05

Интенсивность свечения эхиноцитов (ЭХ) 1,45±0,006 е.с. 1,42±0,002 е с >0.05

Интенсивность свечения пойкило-цитов и шизоцитов (П) 0,63+0,031 е.с. 0,65±0,018 е.с. >0,05

3.3. При сосудистых осложнениях сахарного диабета

Проведено комплексное обследование 55 больных сахарным диабетом 2 типа, осложненным атеросклерозом периферических артерий с явлениями сосудистой декомпенсации, но без некрозов, гангрен.

4.3.1. Показатели центральной гемодинамики

Изучены показатели центральной гемодинамики до и после лазерофореза янтарной кислоты, улучшение которых свидетельствует о регулирующем эффекте участии янтарной кислоты в формировании программ адаптации (табл. 9).

Таблица 9

Показатели центральной гемодинамики при осложненном сахарном диабете 2 типа до и после лазерофореза янтарной кислоты

Параметры Норма До лечения (п=55) После лечения (п=55) Р

УО 39-52 28,14±1,24 36,84±1,17 >0,05

УИ 25,1-33,9 15,62±0,37 24,31 ±0,28 >0,05

ОСВ 155,2-209,9 97,95±5,21 132,18±4,15 >0,05

РЛЖ 40,6-54,9 31,57±0,98 38,96±3,77 >0,05

РИЛЖ 1,89-2,56 1,32±0,47 1,78±0,04 >0,05

ОПСС 1595-2158 3876,54±92,27 2437±34,61 <0,05

УПСС 2465-3334 5327,18±142,17 4109,25±118,38 <0,05

Результаты свидетельствуют об улучшении показателей работы сердца, изменении типа гемодинамики в сторону эукинетического, улучшении работы левого желудочка, с повышением ударных показателей (УОК, УИ), уменьшением сосудистого сопротивления.

Более достоверное уменьшение ОПСС и УПСС свидетельствует о благоприятном воздействии компонентов янтарной кислоты на центральную гемодинамику. Однако, остальные показатели центральной гемодинамики, хоть и меняются в лучшую сторону, но не достоверно. Такой эффект объясняется итогом внешней модуляции программ адаптации, эндогенной активацией синтаксических программ адаптации, но сам эффект представляется менее значимым, чем в группе женщин с патологией беременности, что связано с большими морфо-функциональными изменениями при сахарном диабете.

4.3.2. Показатели микроциркуляции

Изменение показателей микроциркуляции соответственно происходили в лучшую сторону (табл. 10).

Динамика показателей ЛДФ после коррекции программ адаптации янтарной кислотой в лучшую сторону является фактором, подтверждающим значимость изменений микроциркуляции крови, как основы патогенеза различных заболеваний и патологических состояний и также свидетельствует о коррекции программ адаптации по синтаксическому типу.

Таблица 10

Показатели ЛДФ при осложненном сахарном диабете 2 типа до и после лазерофореза янтарной кислоты

Показатели Норма До лечения (п=55) После лечения (п=55) Р

ПМ (перф. ед.) 5,41 ±0,29 3,16±0,23 4,19±0,21 <0,05

ALF (перф. ед.) 1,21±0,01 0,33±0,02 0,92±0,09 <0,05

ACF (перф. ед.) 0,19±0,02 0,07±0,01 0,15±0,08 <0,05

HKCF (ед.) 79,18±1,14 51,21±1,63 71,11±0,86 >0,05

ИЭМ (ед.) 2,04±0,14 1,13±0,09 1,75±0,15 <0,05

ИСТ (%) 81,54±6,32 136,15±9,23 90,16±2,73 <0,05

ДПМдых. (%) 25,52±0,74 15,37±1,18 19,4610,84 >0,05

ДПМпост. (%) 39,73±1,12 19,26±1,13 24,49±0,65 >0,05

РКК (%) 217,3914,18 156,43±3,17 189,42+3,1 <0,01

Однако, отмечается менее достоверная динамика показателей, что сопряжено с поражением микроциркуляторного русла крови при сахарном диабете.

4.3.3. Показатели аутофлуоресценции

Параметр «£» (отношение интенсивности флуоресценции на длине волны 530 нм к интенсивности свечения на длине волны 455 нм) измерялся на ногтевой фаланге 3 пальца кисти у 55 больных сахарным диабетом 2 типа, осложненным атеросклерозом периферических артерий с явлениями сосудистой декомпенсации, но без некрозов и гангрен, разбив их на 2 группы: 34 - основная и 21 — контрольная, в которой лечения не осуществляли (табл. 11).

Таблица 11

Изменение параметра <ф> при осложненном сахарном диабете 2 типа до и после лазерофореза янтарной кислоты

Группа Фоновые значения Через 1 час после процедуры Через 3 часа после процедуры Р

Основная (п =34) 1,97+0,021 1,65±0,045 1,09±0,022 <0,05

Контрольная (п = 21) 1,98±0,031 0,93±0,132 1,69±0,043 >0,05

Отмечается достоверное уменьшение исследуемого параметра в основной группе, связанное с уменьшением тканевой гипоксии при сосудистых осложнениях сахарного диабета 2 типа после воздействия янтарной кислоты. В контрольной группе (без лазерофореза, на базисной терапии) динамика не достоверна, снижение параметра не значительное, что объясняется выраженной тканевой гипоксией.

Таблица 12

Изменения спектра флуоресценции эритроцитов-дискоцитов при осложненном сахарном диабете 2 типа до и после лазерофореза янтарной кислоты

п = 55

Контрольные параметры До лазерофореза янтарной кислоты После лазерофореза янтарной кислоты Р

Интенсивность свечения и спектр Свечения дискоцитов (Д) 4,17±0,001 е.с. 2,11 ±0,003 е.с. <0,01

Интенсивность свечения стома-тоцитов (СТ) 1,42±0,004 е.с. 1,53±0,02 е.с. >0,05

Интенсивность свечения эхино-цитов (ЭХ) 1,56±0,023 е.с. 1,58±0,013 е.с. >0,05

Интенсивность свечения пойки-лоцитов и шизоцитов (П) 0,37±0,045 е.с. 0,43±0,034 е.с. >0,05

Достоверное уменьшение спектра свечения и интенсивности дис-коцитов после лазерофореза янтарной кислоты также свидетельствуют об управляющем ее воздействии на процессы тканевого окисления. Интенсивность свечения и спектр эхиноцитов, стоматоцитов, пойки-лоцитов и шизоцитов меняется недостоверно и не может использоваться при анализе эффективности янтарной кислоты.

ВЫВОДЫ

1. Модифицированный спектрофлуометр может использоваться для изучения аутофлуоресценции биологических объектов в биологии и медицине, обеспечивая косвенную информацию о состоянии тканевого дыхания.

2. Среди различных изученных технологий выявления эффективности лазерофореза биологически активных веществ способ изучения аутофлуоресценции относится к достаточно информативным.

3. В эксперименте получены убедительные данные о синтоксиче-ском эффекте янтарной кислоты с соответствующим подтверждением в виде активации антиокислительной и антикоагулянтной активности плазмы крови, холинреактивных структур, с умеренным иммуносу-прессивным воздействием и изменением КАСПА в направлении активации синтоксических программ адаптации.

4. Синтаксическая активность янтарной кислоты обеспечивает положительную динамику лабораторных и инструментальных показателей при стрессах, осложненной и неосложненной беременности, при сосудистых осложнениях диабета 2 типа, что регистрируется комплексной технологией диагностики.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

? 1. Двухканальный УФ-биоспектрофотометр после модификации

может быть внедрен в научные биологические лаборатории и лаборатории учреждений практического здравоохранения для изучения ау-I тофлуоресценции живых тканей.

2. Полученные результаты сравнительного анализа различных технологий диагностики эффективности лазерофореза биологически активных веществ должны использоваться в научных исследованиях и в практической деятельности при организации научных и клинических исследований.

3. Экспериментальное выявление синтаксического механизма действия янтарной кислоты позволяет рекомендовать дальнейшие разработки соответствующих клинических методик врачами разных профилей.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Аутофлуоресценция натавных тканей и клеток крови и ее значение для медицинской практики' Монография (Кидапов В Н, Хадарцсв А А, Сясин Н И , Якушина Г Н ) - Тула - Саикт Петербург, 2005 - 108 с.

2 Внешнее управление в биологических и медицинских системах (Хадарцев A.A., Вигдорчик В И., Фудин H.A.) // Сб. статей МЕДКНЦЕНТРА-М„ 2005 - С. 156-161.

3. Психонейроиммунологические программы адаптации при нормально развивающейся беременности (Гусак Ю М , Карасева Ю В , Морозов В Н , Хадарцев А.А ) // Успехи современного естествознания- Тез. докл 111 Общероссийской конференции с международным участием «Новейшие технологические решения и оборудование» (Кисловодск, 19-21 апреля 2005).- М„ 2005 - № 7- С. 53-54.

4 Сочетанная электролазерная миостимуляция и лазерофорез (Серегина М Ю, Квасов Д В , Хадарцев А А , Натарова Э В ) // Бюллетень сибирской медицины - Приложение 1 • Тез докл V Сибирского физиологического съезда (Томск, 29-30 июня, 1 июля 2005).- Томск: Томский гос. мед. ун-т, 2005.- С. 153.

5 Управление симптоматикой холодовой травмы через активацию синтоксиче-ских программ адаптации (Морозов В.Н., Хапкина А.В , Карасева Ю В, Хадарцев А.А ) //Современные наукоемкие технологии'Тез докл научной конференции с международным участием «Технологии 2005» (Турция, 22-29 мая 2005).- М„ 2005.- № 4 - С. 74-75.

6. Особенности психонейроиммунологических взаимодействий в репродуктивном цикле (Карасева Ю.В., Морозов В.Н., Хадарцев A.A.) // Материалы VII Международной конференции «Циклы» (Ставрополь, 25-27 мая 2005).- Ставрополь, 2005- С. 47.

7 Позно-тонические расстройства при психовегетативном синдроме (Атлас Е Е., Хадарцев А А, Чуб С Г, Блюмин Р.Б) // Тез докл. Международного симпозиума «Функциональные нарушения тканей тела человека и восстановление функций организма» (Санкт-Петербург, 10-13 июня 2005).- СПб., 2005 - С. 89-90.

8. Контроль эффективности фитолазерофореза при сосудистых осложнениях сахарного диабета 2 типа (Квасов Д В., Хадарцев A.A., Чуб С.Г) // Фундаментальные исследования Тез докл заочной электронной конференции «Диагностика и лечение наиболее распространенных заболеваний человека»,- М , 2005 - № 4,- С. 40-41

9 Устройство для сочетанной электролазерной миостимуляции (Серегина М Ю, Чуб С Г., Митрофанов И В., Натарова Э В., Блюмин Р.Б) // Фундаментальные исследования Тез докл заочной электронной конференции «Диагностика и лечение наиболее распространенных заболеваний человека».- М, 2005 - № 4 - С. 50-51

10 Математический анализ оценки эффективности восстановительных мероприятий у больных с бронхообструктивным синдромом (Каменев JI И., Наумова Е Н., Панова И.В., Хадарцев A.A.) // Фундаментальные исследования- Тез докл II научной конференции «Современные медицинские технологии (диагностика, терапия, реабилитация и профилактика)» (Хорватия, Умаг, 2-9 июля 2005).- М„ 2005 - № 6 - С. 87-88.

11. Состояние программ адаптации при нормально развивающейся беременности (Хадарцев A.A., Гусак Ю.К., Морозов В.Н.) // Тез. докл. Ill научной конференции «Приоритетные направления развития науки, технологий и техники» (Хургада, Египет, 22-29 октября 2005).- М, 2005.- С. 67-68.

12. Физиологические механизмы действия комплексного фитопрепарата (болюсы Хуато) в сочетании с лазерофорезом гиалуроновой и янтарной кислоты (Хадарцев А.А, Фудин H.A., Квасов Д В., Чуб С.Г., Валентинов Б.Г.) // Тез. докл. I Съезда физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека» (Сочи, 19-23 сентября 2005) - М, 2005 - С 34.

13 Технология диагностики степени тяжести хронического бронхита по содержанию микроэлементов (Панова И.В., Каменев Л.И., Хадарцев A.A., Блюмин Р.Б.) // Тез докл VI Общероссийской научной конференции с международным участием «Успехи современного естетствознания» (Сочи, 27-29 сентября 2005) - М, 2005 - С 121 -122

Отпечатано с готового оригинал-макета в ООО РИФ «Иифра» 300034 г. Тула, ул. Революции, д. 39 Тел./факс: (0872) 36-47-65, 30-19-77 E-mail: lidar@tula.net Заказ № 728. Тираж 100 экз.

«18346

РНБ Русский фонд

2006-4 13739

I

I

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Аутофлуоресценция биологических объектов.

Биологические и медицинские аспекты.

2. Общие понятия о системном анализе, управлении и обработки информации в биологических системах позиций динамики адаптационных механизмов.

2.1. Адаптация.

2.2. Общие понятия теории автоматического управления и регулирования.

2.3. Терминология и методы системного анализа.

3. Лазерофорез биологически активных веществ.

3.1. Физические основы лазерного излучения.

3.2. Биологические эффекты лазерного излучения.

3.3. Определение лазерофореза.

3.4. Биологически активное вещество - янтарная кислота.

3.4.1. Физиологические эффекты янтарной кислоты.

3.4.2. Системные эффекты янтарной кислоты.

ГЛАВА II. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Объект исследования.

2. Методы исследования.

2.1. Общеклинические методы.

2.2. Биохимические методы.

2.2.1. Окислительная и антиокислительная активность.

2.2.2. Система свертывания и противосвертывания.

2.2.3. Гормоны и медиаторы.

2.3. Специальные инструментальные методы.

4 2.3.1. Реография.

2.3.2. Спектрофлуориметрия.

-32.3.3. Устройство для лазерофореза.

2.3.4. Янтарная кислота.

2.3.5. Лазерная допплеровская флоуметрия.

3. Статистическая обработка.

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

1. Стандартизация работы двухканального УФ-биоспектрофотометра с кварцевым и стекловолоконным световодами.

1.1. Доработка спектрофотометра.

1.2. Оценка спектров флуоресценции биологических объектов.

1.2.1. Свечение биологических объектов.

1.2.2. Исследование спектров флуоресценции медицинских пиявок

1.2.3. Исследование спектров свечения белых беспородных крыс

1.2.4. Оценка киральности различных участков тела человека.

1.2.5. Оценка особенностей спектров аутофлуоресценции лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов.

2. Анализ технологий определения эффективности лазерофореза биологически активных веществ.

2.1. Общеклинические и инструментальные методы.

2.2. Лабораторные, биохимические методы.

2.3. Специальные инструментальные методы.

3. Механизмы воздействия янтарной кислоты в эксперименте.

4. Аутофлуоресценция живых тканей при воздействии лазерофореза янтарной кислоты.

4.1. Изменение аутофлуоресценции покровных тканей у спортсменов с психоэмоциональным стрессом при воздействии лазерофореза янтарной кислоты.

4.2. При беременности.

4.2.1. Показатели центральной гемодинамики.

4.2.2. Показатели микроциркуляции.

4.2.3. Показатели аутофлуоресценции.

-44.3. При сосудистых осложнениях сахарного диабета.

4.3.1. Показатели центральной гемодинамики.

4.3.2. Показатели микроциркуляции.

• 4.3.3. Показатели аутофлуоресценции.

Актуальность исследования. Изучение эффектов биологически активных веществ представляется актуальным в связи с кризисом лекарственной терапии, порождающей ятрогенную патологию, значительными осложнениями и формированием системных подходов к лечебно-профилактическим мероприятиям (Комаров Ф.И. и соавт., 1992; Морозов В.Н., 1999; Хадарцев А.А. и соавт., 2003; Чжан Цзяньцзюнь и соавт., 2000; Hubboter F., 1957).

Имеются детальные исследования системных биологических эффектов фитопрепаратов (Купеев В.Г., 2000; Валентинов Б.Г., 2005; Наумова Э.М., 2005), изучены возможности применения янтарной кислоты, в том числе при психоэмоциональном стрессе (Ивницкий Ю.Ю. и соавт., 1998; Корягин А.А., 2004). Определены возможности лазерофореза биологически активных веществ, лекарственных препаратов, в том числе при гестозах (Соколов В.П. и соавт., 1997; Купеев В.Г., 2000; Демушкина И.Г., 2004).

Контроль эффективности лазерофореза осуществляется комплексом лабораторных и инструментальных исследований с достаточной степенью достоверности, в т.ч. методами компьютерной термографии, газоразрядной визуализации, фрактальной нейродинамики, лазерной доплеровской флоуметрии, интегральной реографии, определением коэффициента активности синтоксических программ адаптации и др. (Короткое К.Г., 1995; Морозов В.Н. и соавт., 2002; Хадарцев А.А. и соавт., 2003; Борисова О.Н., 2004; Бехтерева T.JL, 2004; Смирнова И.Е., 2005).

Изучен способ определения аутофлуоресценции живых объектов для выявления степени участия живого организма в биологическом окислении (Кида-лов В.Н. и соавт., 2005).

Не проведен сравнительный анализ различных способов определения эффективности лазерофореза биологически активных веществ, среди них не установлено место спектрофотометрического способа диагностики аутофлуоресценции биологических объектов, а также организма человека в норме и при патологии.

Цель исследования. Осуществить комплексную системную диагностику эффективности лазерофореза биологически активных веществ на примере янтарной кислоты.

В соответствии с целью определены задачи исследования.

1. Адаптировать стандартный отечественный биоспектрофотометр к задачам определения флуоресценции живых объектов.

2. Дать оценку спектров флуоресценции живых объектов.

3. Провести анализ технологий определения эффективности лазерофореза биологически активных веществ.

4. Изучить механизмы воздействия янтарной кислоты в эксперименте.

5. Определить возможности комплексной диагностики эффективности лазерофореза янтарной кислоты при стрессах, при осложненной и не осложненной беременности, при сосудистых осложнениях сахарного диабета 2 типа.

Научная новизна. Впервые осуществлена оценка спектров флуоресценции биологических объектов на модифицированном спектрофотометре.

Осуществлено сравнительное исследование имеющихся способов диагностики эффективности лазерофореза биологически активных веществ.

Впервые в эксперименте установлена синтоксическая направленность влияния янтарной кислоты на модификацию программ адаптации.

Впервые проведена системная (включая определение аутофлуоресценции) диагностика эффектов воздействия янтарной кислоты на организм человека в состоянии условной нормы, при психоэмоциональных стрессах, при не осложненной и осложненной гестозом беременности, при сосудистых осложнениях сахарного диабета 2 типа.

Практическая значимость исследования. Исследования аутофлуоресценции тканей на модифицированном спектрофотометре позволяют внедрить этот метод в комплексную систему интегральной диагностики состояния биологических объектов и человека.

Факт участия янтарной кислоты в модуляции программ адаптации с получением синтоксического эффекта позволяет использовать ее соединения в практической и научной деятельности для управляющей коррекции в процессе лечения и профилактики.

Установленный комплекс системной диагностики эффективности применения биологически активных веществ позволяет использовать реальную, зависящую от имеющегося технического оснащения, технологию при практическом применении.

Способ аутофлуоресценции живых тканей может с достаточной точностью широко применяться при анализе эффективности воздействия биологически активных веществ на человеческий организм при стрессах, беременности, сосудистых осложнениях сахарного диабета 2 типа.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследований используются в работе сотрудников МСЧ №5 г. Тулы, ГУП ТО НИИ новых медицинских технологий, г. Тула, в учебном процессе на кафедре внутренних болезней медицинского факультета Тульского государственного университета, в Медин-центре при ГлавУПДК Министерства иностранных дел РФ.

Апробация работы. Результаты исследования доложены на 8 научных форумах, из них на 5 международных и на 3 всероссийских: на III Общероссийской конференции с международным участием «Новейшие технологические решения и оборудование» (Кисловодск, 19-21 апреля 2005); V Сибирском физиологическом съезде (Томск, 29-30 июня, 1 июля 2005); на научной конференции с международным участием «Технологии 2005» (Турция, 22-29 мая 2005); VII Международной конференции «Циклы» (Ставрополь, 25-27 мая 2005); на Международном симпозиуме «Функциональные нарушения тканей тела человека и восстановление функций организма» (Санкт-Петербург, 10-13 июня 2005); II научной конференции «Современные медицинские технологии диагностика, терапия, реабилитация и профилактика)» (Хорватия, Умаг, 2-9 июля 2005); III научной конференции «Приоритетные направления развития науки, технологий и техники» (Хургада, Египет, 22-29 октября 2005); I Съезде физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека» (Сочи, 19-23 сентября 2005). Работа апробирована на совместной конференции Ученого Совета ГУП ТО НИИ новых медицинских технологий и кафедры внутренних болезней Тульского государственного университета (2005).

Публикации. По материалам исследований опубликовано 13 печатных работ, из них 1 монография, 1 статья, 11 тезисов докладов.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Метод аутофлуоресценции на модифицированном спектрофотометре отражает состояние тканевого дыхания и позволяет изучать его у биологических объектов.

2. Технологии определения эффективности лазерофореза биологически активных веществ разнятся по степени достоверности.

3. Янтарная кислота относится к адаптогенам - синтоксинам.

4. Метод определения аутофлуоресценции живых объектов имеет определенную значимость в комплексе диагностических технологий при стрессах, беременности, сосудистых осложнениях сахарного диабета.

выводы

1. Модифицированный спектрофлуометр может использоваться для изучения аутофлуоресценции биологических объектов в биологии и медицине, обеспечивая косвенную информацию о состоянии тканевого дыхания.

2. Среди различных изученных технологий выявления эффективности лазерофореза биологически активных веществ способ изучения аутофлуоресценции относится к достаточно информативным.

3. В эксперименте получены убедительные данные о синтоксическом эффекте янтарной кислоты с соответствующим подтверждением в виде активации антиокислительной и антикоагулянтной активности плазмы крови, холинреак-тивных структур, с умеренным иммуносупрессивным воздействием и изменением КАСПА в направлении активации синтоксических программ адаптации.

4. Синтоксическая активность янтарной кислоты обеспечивает положительную динамику лабораторных и инструментальных показателей при стрессах, осложненной и неосложненной беременности, при сосудистых осложнениях диабета 2 типа, что регистрируется комплексной технологией диагностики.

-128

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Двухканальный УФ-биоспектрофотометр после модификации может быть внедрен в научные биологические лаборатории и лаборатории учреждений практического здравоохранения для изучения аутофлуоресценции живых тканей.

2. Полученные результаты сравнительного анализа различных технологий диагностики эффективности лазерофореза биологически активных веществ должны использоваться в научных исследованиях и в практической деятельности при организации научных и клинических исследований.

3. Экспериментальное выявление синтоксического механизма действия янтарной кислоты позволяет рекомендовать дальнейшие разработки соответствующих клинических методик врачами разных профилей.

-129

1. Агаджанян Н.А., Чижов А.Я. Классификация гипоксических состояний,-М.: ММП «Экспоцентр» «Крук», 1998.- 24 с.

2. Агроскин Л.С., Папаян Г.В. Цитофотометрия.-Л.: Наука, 1977.

3. Алексанин С.С., Лесничий В.В. и др. Морфо-функциональная характеристика клеток крови у людей, длительное время проживающих на радиоактивно-загрязненной местности // Отчет о НИР 8-95-в2 «Вагранка».- СПб.: Вме-дА, 1995.- 133 с.

4. Анохин П.К. Биология и нейрофизиология условного рефлекса.-М.: Медицина, 1968.-547 с.

5. Анохин П.К. Узловые вопросы теории функциональной системы.- М.: Наука, 1980.- 196 с.

6. Антонов Н.С., Стулова О.Ю., Зайцева О.Ю. Эпидемиология, факторы риска, профилактика // В кн.: Хронические обструктивные заболевания легких.-М.: ЗАО «Изд-во Бином», 1998 С. 66-81.

7. Барановский А.Ю. Способ определение деструктивно-геморрагических изменений при язвенной болезни желудка // А.с. на изобретение № 17373161986.

8. Барский И.Я., Поляков Н.И., Якубенас А.В. Контактная микроскопия.-М., 1976.- 158 с.-13011. Беклемишев В.Н. Основы сравнительной анатомии беспозвоночных-М.: Наука, 1964.-215 с.

9. Березин Ф.Б. Психическая и психофизиологичесхая адаптация человека.- JL: Наука, 1988 270 с.

10. Берстон М. Гистохимия ферментов М.: Мир, 1965 - 464 с.

11. Бехтерева T.JI. Лечебно-диагностические возможности коррекции макрогемодинамики при заболеваниях внутренних органов и у здоровых лиц: Дис. к.м.н — Тула, 2004.- 165 с.

12. Бецкий О.В. Вода и электромагнитные волны // Биомедицинская радиоэлектроника 1998-№ 2 - С. 3-6.

13. Борисов В.И., Павлов С.Е. Транскутанная лазеротерапия хронических гастритов у спортсменов // В сб. тез. первого московского международного форума «Спортивно-медицинская наука и практика на пороге XXI века».- М.: «Паруса», 2000.-С. 19-21.

14. Борисова О.Н. Диагностика эффективности немедикаментозных методов лечения в клинике внутренних болезней: Автореф. дис. . д.м.н — Тула, 2004.-44 с.

15. Бородюк Н.Р. Адаптация М.: Глобус, 1998.- 88 с.

16. Браун Г., Уолкен Дж. Жидкие кристаллы и биологические структуры.-М.: Мир, 1982 198 с.

17. Бретшнайдер Б., Курфюрст И. Охрана воздушного бассейна от загрязнений: Технология и контроль / Пер. с англ.- Л.: Химия, 1989 288 с.

18. Брилль А.Г., Брилль Г.Е., Киричук В.Ф. и др. Влияние излучения He-Ne лазера на активацию и агрегацию тромбоцитов // Бюл. эксперим. биол. и мед.- 1999.- № 7.- С. 48-50.

19. Брилль Г.Е., Панина Н.П. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на генетический аппарат клетки: Учебное пособие.- Саратов, 2000.

20. Брумберг Е.М., Барский И.Я., Папаян Г.В. Двухволновой микрофлуориметр // Оптико-механическая промышленность,- 1967 № 9 - С. 62.

21. Быховский А.И. Живые организмы и антиэнтропийный эффект информации // Вопросы философии 1975- № 9 — С. 21-28.

22. Валентинов Б.Г. Системные биологические эффекты фитопрепаратов китайской медицины: Автореф. дис. . к.б.н.-Тула, 2005 -20 с.

23. Величковский Б.Т. Молекулярные и клеточные основы экологической пульмонологии // Пульмонология.- 2000.- № 3 С. 9-18.

24. Веревкин Е.Г. и др. Информационные медико-биологические технологии / Под ред. В.А. Княжева, К.В. Судакова- М.: ГЭОТАР-Мед, 2002 280 с.

25. Владимиров Ю.А., Бурштейн Э.А. Спектры люминесценции ароматических аминокислот и белков // Биофизика I960 - Т. 5, № 4- С. 385-391.

26. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов М.: Наука, 1989 - 230 с.

27. Владимиров В.А., Измалков В.И. Катастрофы и экология— М.: ЦСИГЗ, 2000.-380 с.

28. Гичев Ю.П. Современные проблемы экологической медицины.-Новосибирск: СО РАМН, 1999.- 180 с.

29. Гладышев Г.Н. Термодинамическая теория эволюции живых существ- М.: Луч, 1996 86 с.

30. Гольдфарб Л.С., Балтрушевич А.В., Нетушил А.В. и др. Теория автоматического управления: Учебник для вузов 2-е изд., доп. и перераб — М.: Высшая школа, 1976.

31. Гурвич А.А., Еремеев В.Ф., Карабчиевский Ю.А. Энергетические основы митогенетического излучения и его регистрация на фотоэлектронных умножителях.-М., 1974- 98 с.

32. Давид Р. Введение в биофизику / Пер. с англ.- М.: Мир, 1982 200 с.

33. Демушкина И.Г. Диагностика портативным ультразвуковым доп-плеровским анализатором нарушений гемодинамики при фетоплацентарной недостаточности и коррекция ее фитопрепаратом «Болюсы Хуато»: Автореф. дис. . к.м.н — Тула, 2004.-20 с.

34. Доршакова Н.В. Качество окружающей среды и здоровье человека в условиях Карелии.- Петрозаводск: Петрозаводский ун-т, 1997.- 200 с.

35. Загрядский В.П., Сулимо-Самуйлло З.К. Газообмен при гиперкап-нии в условиях различного содержания кислорода // Космическая биология.— 1974.-№ 5 С. 61-65.

36. Заидель А.Н., Островская Г.В., Островский Ю.И. Техника и практика спектроскопии М.: Наука, 1976 - С. 333-367.

37. Зуев B.C., Ушаков И.Б., Окунев A.M. и др. Электромагнитные излучения как фактор геронтологического риска //Актуальные проблемы инте-гративной медицины Воронеж - Москва, 2001 - С. 11-19.

38. Ивницкий Ю.Ю., Головко А.И., Софронов Г.А. Янтарная кислота в системе средств метаболической коррекции функционального состояния и резистентности организма// Учебное пособие.-Санкт-Петербург: ВМА, 1998 — 82 с.

39. Илларионов В.Е. Основы лазерной терапии М., 1992 - 121 с.

40. Казначеев В.П. Современные аспекты адаптации Новосибирск: Наука, 1980.- 192 с.

41. Карнаухов В.Н. Люминесцентный спектральный анализ клетки.— М., 1978.-208 с.

42. Карташова Н.М. Системные реакции биологических динамических систем на внешние воздействия: Дис. докт. биол. наук Тула, 2005.-317 с.

43. Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Иммунология для врача- Спб.: Гиппократ, 1992.-256 с.

44. Кидалов В.Н. Красные клетки крови — эритроциты в новых информационных технологиях контроля за состоянием здоровья // В кн. «Системный анализ, управление и обработка информации в биологии и медицине». Часть И.-Тула: Изд-во ТулГУ, 2000.- С. 92-115.

45. Кидалов В.Н., Красильникова Н.А., Хадарцев А.А., Сясин Н.И., Якушина Г.Н. Ранние реакции периферического пула эритроцитов в регистрации последствий экстремальных воздействий на человека и животных // ВНМТ.- 2003.- № 3.- С. 59-61.

46. Кидалов В.Н., Хадарцев А.А., Сясин Н.И., Якушина Г.Н., Краюхин А.В. Аутофлуоресценция нативных тканей и клеток крови и ее значение для медицинской практики: Монография,-Тула Санкт Петербург, 2005.- 108 с.

47. Комаров Ф.И. Диагностика и лечение внутренних болезней: Руководство для врачей М.: Медицина, 1992.- Т. 3.- 526 с.

48. Конев С.В. Электронно-возбужденные состояния биополимеров-Минск, 1965 186 с.

49. Коротков К.Г. Эффект Кирлиан СПб.: Изд-во «Ольга», 1995.- 215с.

50. Котельников В.П., Морозов В.Н. Нейрогуморальные механизмы адаптации к криотравме // Вестник РАМН, 1992 № 11-12 - С. 51-57.

51. Кузнецова Т.Н., Павлов С.Е., Афонякин И.В. Лазеры в предсорев-новательной подготовке пловцов-спринтеров // В сб. тез. первого московского международного форума «Спортивно-медицинская наука и практика на пороге XXI века».-М.: «Паруса», 2000 С. 79-81.

52. Кулаков Ю.В. Диагностика и лечение магнитотропных заболеваний легких // Новые Санкт-Петербургские врачебные ведомости 1999 - № I.- С. 56-58.

53. Купеев В.Г. Фитолазерофорез в терапии заболеваний внутренних органов: Автореф. дис. к.м.н.-Тула, 2000.-30 с.

54. Купеев В.Г. Диагностические и лечебно-восстановительные технологии при сочетанной патологии позвоночника, внутренних органов и систем: Автореф. дис. . д.м.н.-Тула, 2003.-38 с.

55. Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии- М.: Мир, 1986.-250 с.

56. Ленниджер А. Основы биохимии / Пер. с англ.- М.: Мир, 1985 Т. 2.-731с.

57. Лисовский В.А., Щедрунов В.В., Барский И .Я., Папаян Г.В., Самойлов

58. B.О. и др. Люминесцентный анализ в гастроэнтерологии.-Л.: Наука, 1984 236 с.

59. Луцик Т.К. Исследование промежуточных продуктов импульсного радиолиза флавоноидов: Дис. . канд. биол. наук.-Кишинев, 1986 176 с.

60. Мак Мюррей У. Обмен веществ у человека.- М: Мир, 1980 370 с.

61. Малахова М.Я. Методы биохимической регистрации эндогенной нтоксикации // Эфферентная терапия 1995- № 1.- С. 61-64. (

62. Морозов В.Н. Системные механизмы адаптации при криовоздействии и способы их коррекции: Автореф. дис. .докт. мед. наук-Тула, 1999.-45 с.

63. Муромцев В.А., Кидалов В.Н. Медицина в 21 веке. От древнейших традиций до высоких технологий-СПб.: ИНТАН, 1998 131 с.

64. Наумова Э.М. Системные управляющие эффекты экзогенных адап-тогенов: Автореф. дис. . д.б.н.-Тула, 2005.-44 с.

65. Попов А.В. О соотношении резистентности и реактивности в эволюции защитно-приспособительных реакций // Поведение и мозг.— Л.: Наука, 1981.-С. 101-121.

66. Путов Н.В., Федосеев Г.Б. Руководство по пульмонологии- Л.: Медицина, 1984.-С. 20-326.

67. Рогаткин ДА., Моисеева Л.Г., Барыбин В.Ф., Черный В.В. Современные методы лазерной клинической биоспектрофотометри. Введение в биофотометрию. Используемые методики и аппаратное оснащение. Часть 1.-М.: Изд-во ВИНИТИ, 1997.-55 с.

68. Самойлов В.О. Элементы квантовой биофизики. СПб : СПбГТУ, 2001.- 43 с.

69. Сиротинин Н.Н. Эволюция резистентности и реактивности организма- М.: Медицина, 1981- 236 с.

70. Скулачев В.П. Соотношение окисления и фосфорилирования в дыхательной цепи — М.: Изд-во АН СССР, 1962.-215 с.

71. Смирнова И.Е. Микрогемодинамические показатели лазерной доп-плеровской флоуметрии в ранней диагностике заболеваний внутренних органов: Автореф. дис. . к.м.н.-Тула, 2005.-25 с.

72. Соловьев В.Н., Самойлов В.О. Исследование люминесценции пи-ридиннуклеотидов и флавопротеидов в зоне рецепторного эпителия языка лягушки // Физиол. журн. СССР.- 1977.-Т. 63, № 10.- С. 1476-1478.

73. Стандарты (протоколы) диагностики и лечения больных с неспецифическими заболеваниями легких. Приложение к Приказу МЗ РФ № 300 от 09.10.1998.-40 с.

74. Суббота А.Г. и др. Золотое сечение в медицине.- СПб.: Стойлеспе-чать, 1996 168 с.

75. Судаков К.В. Системные механизмы эмоционального стресса.- М.: Медицина, 1981.-232 с.

76. Судаков К.В. Информационные свойства функциональных систем // ВНМТ.- 1998.- T.V, № 1.- С. 4-12.

77. Судаков К.В. Кибернетические свойства функциональных систем // ВНМТ.- 1998.-Т. V, № 1.-С.12-19.

78. Судаков К.В. Некоторые аспекты диагностики и профилактики дисфункций, порождаемых психоэмоциональным стрессом // Материалы научного симпозиума «Проблемы Севера, настоящее и будущее».- М.: Фонд им. МДО. Лермонтова, 2000 С. 22-23.

79. Судаков К.В. Динамические стереотипы или информационные отпечатки действительности.- М., 2002.

80. Угарова Н.Н., Бровков Л.Ю. Взаимосвязь структуры белковой глобулы и спектров биолюминесценции люциферазы светляков // Известия Академии наук. Серия Химическая.- 2001 С. 1670-1679.

81. Филёв Л.В., Енохин С.Ф., Захаров И.И. и др. Цитоспектрофотомет-рическое исследование гемоглобина в эритроцитах человека // Цитология-1989.- Т. 31, № 4.- С. 465—468.

82. Хадарцев А.А. Комплексные немедикаментозные способы лечения заболеваний органов дыхания в пульмонологическом стационаре: Дисс. . д.м.н.-Тула, 1991.

83. Хадарцев А.А. Теоретические основы взаимодействия физических полей с биологическими объектами. Часть 1 // ВНМТ.- 1996- Т. 3, № 1- С. 6-9.

84. Хадарцев А.А., Купеев В.Г., Зилов В.Г., Дедов В.И., Троицкая Е.А. Фитолазерофорез в лечении заболеваний внутренних органов. Учебное пособие- Тула: Тульский полиграфист, 2001 26 с.

85. Хадарцев А.А., Купеев В.Г., Морозов В.Н., Тутаева Е.С. Диагностические и лечебно-восстановительные технологии при сочетанной патологии внутренних органов и систем: Монография / Под ред. А.А.Хадарцева.- Тула: Тульский полиграфист, 2003- 172 с.

86. Хадарцев А.А., Зилов В.Г., Еськов В.М., Кидалов В.Н., Карташова Н.М., Наумова Э.М. Теория и практика восстановительной медицины: Монография.- Тула, 2004 Т. I.- 248 с.

87. Черногрядская Н.А., Розанов Ю.М., Богданова М.С., Боровиков Ю.С. Ультрафиолетовая флуоресценция клетки- JL: Наука, 1978.-215 с.

88. Чжан Цзяньцзюнь, Се Эрлун, Дун Вэйфэн и др. Развитие посттравматического оттека мозга // Сяндай фукан (Современная восстановительная медицина).- 2000.- № 4(2).- С. 246-247.

89. Шевелкин А.В. Установка для прижизненной флуоресцентной микроскопии с системой компьютерного анализа изображения // Вестник новых медицинских технологий.- 2003 Т. X, № 4 - С. 65-66.

90. Щеглов В.Н. Системный анализ и моделирование в медицине с помощью метода алгебраических моделей конструктивной (интуиционистской) логики // В кн.: Афромеев В. И. и др. Мат. методы совр. биомедицины и экологии.- Тула: НИИ НМТ, 1997.-С. 149-157.

91. Щербаковский З.С. Фотометрические характеристики элементов оптических систем и их измерение: Учебное пособие (ЛИТМО).- JL, 1990.-90 с.

92. Эткинс П. Порядок и беспорядок в природе / Пер. с англ.- М., 1987.-218 с.

93. Якубовская З.И., Казачкина Н.И., Карманова Т.А. и др. Скрининг и медико-биологическое изучение отечественных фотосенсибилизаторов // Российский химич. журн 1998.- Т. 13, № 5- С. 17-23.

94. Яшин А.А. Основы системного моделирования информационных процессов в живом веществе и совершенствование крайневысокочастотной терапии (теоретико-экспериментальное): Дис. докт. биол. наук-Тула, 2001- 525 с.

95. Aizava R. Endoscjpic detection of Hematoporphirin derivative fluorescein tumors // Lasers and Hematoporphirin derivative in Cancer.Tokio. 1983.- P.21-24.

96. Bohinski R.S. Современные воззрения в биохимии.- М.: Мир, 1987 — 544 с.

97. Chance В., Williams G.R. The respiratory chain and oxidative phosphorylation //Adv. Enzymol.- 1956.-Vol. 17-P. 65-134.

98. Chance В., Thorell B. Fluorescence measurements of mitochondria pyridine nucleotide in aerobiosis and anaerobiosis-Nature- 1959-Vol. 184, № 4691-P. 931.

99. Chance В., Schoener B. Fluorometric studies of flavin component of the respiratory chain // In Flavin and flavoproteins- Amsterdam New York, 1966- P. 510-528.

100. Chandrasekhar S. Liquid Crystals // Cambridge Univ. Press.- London and New York, 1977.-P. 165.

101. Hubboter F. Chinesisch Tibetische Pharmakologic und Reseptur. Aufl. 6. Ulm-Donau, 1957 - 304 s.

102. Karu T.I. Photobiology of low power laser therapy // Chur, L.: Harwood Acad. Publ- 1989.- P. 185.

103. Petty H.R., Worth R.G., Kindzelskii A.L. Imaging Sustained Dissipative Patterns in the Metabolism of Individual Living Cells // Physical Review Letters-2000.-Vol. 84.- P. 2754-2757.

104. Tomasbarberan F.A., Blazquez F.F.M.A., Garciaviguera C., Tomaslor-ente F. HPLC of honey flavonoids // Journal of Chrom 1993- Vol. 634 - P. 41^6.