автореферат диссертации по приборостроению, метрологии и информационно-измерительным приборам и системам, 05.11.13, диссертация на тему:Разработка методов и средств контроля состава сложных смесей органических соединений на основе диполь-полевой теории удерживания нормальной и обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии

На правах рукописи

СЫЧЕВ Сергей Николаевич

РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ И СРЕДСТВ КОНТРОЛЯ СОСТАВА

СМЕСЕЙ ОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ НА ОСНОВЕ ДИПОЛЬ-ПОЛЕВОЙ ТЕОРИИ УДЕРЖИВАНИЯ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

(Специальность - 05.11.13 «Приборы и методы контроля природной среды, веществ, материалов и изделий»)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора технических наук

г. Орел-2005 Г? ¿Г.

Работа выполнена в Орловском государственном техническом университете

Официальные оппоненты: доктор технических наук, профессор

Иванов Борис Рудольфович

доктор химических наук, профессор Шапошник Владимир Алексеевич

доктор технических наук, профессор Полянский Константин Константинович

Ведущая организация : ОАО НПО «Химавтоматика» (г. Москва)

Защита состоится «у/ » <£ 2005 г. в на заседании

диссертационного совета Д 212.182.01 при Орловском государственном техническом университете по адресу: 302000 г.Орел, Наугорское шоссе, 29.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Орловского государственного технического университета

Автореферат разослан « ^ » UC&^mQ 2005 г.

.V

Ж'

Ученый секретарь

диссертационного совета / у \ доктор технических наук, профессор

^^ Суздальцев Анатолий Иванович

2МС -Ь /776/

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Предлагаемая работа выполнена по специальности 05.11.13 «Приборы и методы контроля природной среды, веществ, материалов и изделий» и относится к части «Приборы и методы контроля веществ». Большая часть приборов и методов, применяемых для контроля веществ и называемых аналитическими, предназначена для контроля веществ путем определения (анализа) состава вещества. Основой таких методов является физическая или Физико-химическая модель взаимодействия вещества с аналитической частью прибора.

Современная высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) является одним из наиболее мощных физико-химических аналитических методов, применяемых для контроля состава сложных смесей веществ. Органическая и биоорганическая химия, фармацевтическая химия, криминалистика, пищевая промышленность, контроль за состоянием окружающей среды, медицина - далеко не полный перечень отраслей науки и техники, где применение ВЭЖХ обеспечило существенный прогресс. Тем не менее, ВЭЖХ является одним из методов, в котором состав и строение контролируемого вещества (аналита) в виде сорбционного комплекса и механизм взаимодействия аналита с сорбентом хроматографической колонки (главная аналитическая часть хроматографа) в большинстве случаев неизвестны. Отсутствие таких данных затрудняет оптимизацию процесса анализа особенно при скрининговом контроле больших массивов образцов (вина, кофе, нефтепродукты, наркотики, лекарства и т.д.), а в ряде случаев делает невозможным выполнение ряда специальных исследований, характерных для гетерогенного катализа, медицины, мембранных процессов, фармацевтической химии и т.д.

Таким образом, возникает проблема исследования механизмов взаимодействия сорбционноых комплексов контролируемых веществ с поверхностью сорбента и определения параметров этих комплексов на границе раздела фаз «сорбент — элюент».

■ Решение этой проблемы в первую очередь зависит от состояния теории метода и методологии расчета или прямого экспериментального определения параметров состава сорбционных комплексов и механизмов их взаимодействия с поверхностью сорбента. Классическая теория ВЭЖХ, представленная в работах Л. Снайдера, С. Сочевинского, Р. Скотта, Ю.С. Никитина, С.Н. Ланина и др. и базирующаяся на квазихимических равновесиях, не содержит параметров сорбционных комплексов и не позволяет использовать метод для решения указанной проблемы. При хемометрическом подходе, предложенным и хорошо описанном В.Д. Шатцем и успешно развиваемом в работах О.Б. Рудакова и В.Ф. Селеменева, основные усилия направлены в первую очередь на использование статистических методов для выявление эмпирических зависимостей, также не содержащих параметры сорбционных комплексов.

Таким образом, актуальность представленной работы в области теории ВЭЖХ связана с разработкой теории удерживания в нормально-фазовой ВЭЖХ и экспериментальных методов исследования уширения хроматографических пиков в обращенно-фазовой ВЭЖХ. позволяющих использовать метод для определения состава сорбционных комплексов на границе раздела фаз «твердое тело - жидкость».

Основой развития такой теории и экспериментальных методов исследования сорбционных комплексов может служить диполь-полевая модель межмолекулярных взаимодействий на границе раздела фаз «твердое тело - жидкость». Разработка теории удерживания и методологии исследований межмолекулярных взаимодействий в рамках модели электромагнитных взаимодействий позволяет решить не менее актуальные проблемы, связанные с разработкой и внедрением скрининговых методов контроля сложных смесей веществ. Важность этой проблемы связана с валом фальсифицированной продукции, буквально захлестнувших рынок: медицинские препараты, продукты питания, косметика, нефтепродукты и т.д. Применение методик ВЭЖХ, рассчитанных на специализированный анализ каждой смеси веществ, делает практически невозможным проверку большого количества разнородных образцов - ни одна лаборатория, даже очень мощная, не в состоянии освоить несколько тысяч разных методик. Таким образом, первой ступенью проверки большого массива образцов становится скрининговый контроль, который должен обладать определенным набором свойств: максимально возможной универсальностью по отношению к анализу различных классов соединений, быстрой и недорогой подготовкой пробы, недорогими реактивами, оптимальным сочетанием универсальности и селективности детектирования.

Таким образом, актуальность представленной работы в области применения ВЭЖХ связана с разработкой и обоснованием методов регулирования селективности и эффективности хроматографических систем. позволяющих составить универсальные элюенты, наиболее эффективные при скрининговом анализе, а также разработка на их основе конкретных методик контроля состава сложных смесей органических соединений.

Разработка теории удерживания и методологии исследований межмолекулярных взаимодействий в рамках модели электромагнитных взаимодействий позволяет решить актуальные проблемы, связанные с оптимизацией хроматографических систем при использовании экономичных микроколоночных хроматографов серии «Милихром», предъявляющих жесткие требования к разрешению хроматографической системы.

Целью диссертационной работы является совершенствование метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) как метода контроля состава сложных смесей органических соединений и расширение области применения нормально-фазовой (НФ1 и обращенно-фазовой ЮФ)

высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) при контроле форм существования соединений на границе раздела фаз.

В работе решаются следующие основные задачи:

1. Разработка теории удерживания и методологии ее использования в нормально-фазовой ВЭЖХ для определения состава сорбционных комплексов и исследования механизмов взаимодействия «сорбат -сорбент» (механизмы удерживания) в рамках диполь-полевой модели электромагнитных взаимодействий;

2. Экспериментальные исследования характера влияния модификатора в элюенте на параметры удерживания замещенных бензойных кислот и фенолов, подтверждающие правильность разработанной теории;

3. Разработка экспериментальных и теоретических методов исследования уширения хроматографических пиков в обращенно-фазовой ВЭЖХ;

4. Разработка эмпирических методов регулирования селективности и разрешающей способности хроматографических систем в нормальном и обращенно-фазовом вариантах ВЭЖХ, составление рецептур универсальных эДюентов;

5. Разработка и совершенствование аппаратуры для микроколоночной ВЭЖХ, включая исследования в области технологии изготовления эффективных хроматографических колонок.

6. Разработка, модернизация и адаптация хроматографических методик на основе методов регулирования селективности и разрешающей способности хроматографических систем в микроколоночной ВЭЖХ с применением универсальных элюентов, наиболее эффективных при проведении скринингового анализа.

Методы исследования. Теоретические исследования базируются на основных положениях теории межмолекулярных взаимодействий; в работе использутся методы моделирования, аналитические и численные методы решения систем уравнений, методы свертки информации и выделения линейно-независимых параметров явлений (метод главных компонент).

Экспериментальные исследования проведены на серийных хроматографах «Милихром», «Милихром-1» и «Милихром-2»; специально собранном исполнение хроматографа «Милихром-5», имеющее в своем составе насос высокого давления, петлевой дозатор и аналитические колонки 200x4; серийном хроматографе «Милихром-4-УФ» с колонками 64x2, 80x2, 100x2, 120x2 и системой обработки информации «ЕСНЯОМ» и «МУЛЬТИХРОМ»; исполнении хроматографа «Милихром-5-7» с флуориметрическим детектором; модернизированном варианте хроматографа «Милихром-5-3» с удлиненной фторопластовой кюветой и системой обработки «ШЫСНКОМ»; хроматографе «Милихром-5-З-М» с системой обработки «ишСНГЮМ». Экспериментальные данные обрабатывались с помощью методов математической статистики, регрессионного и мультикорреляционного анализа.

Научная новизна работы.

1. Полуэмпирическая теория удерживания и методология ее использования в нормально-фазовой ВЭЖХ для определения состава сорбционных комплексов и исследования механизмов взаимодействия «сорбат -сорбент» (механизмы удерживания) в рамках предложенной теории;

2. Механизмы удерживания замещенных кислот и фенолов на адсорб-ционно-модифицированном силикагеле в рамках моделей межмолекулярных взаимодействий и активных соударений (механизмы взаимодействия «вещество - сорбент хроматографической колонки».

3. Экспериментальные и теоретические методы исследования уширения хроматографических пиков в обращенно-фазовой ВЭЖХ, позволяющие использовать ОФ ВЭЖХ для контроля форм существования соединений на границе раздела фаз «гидрофобный сорбент - водно-солевой элюент».

4. Разработанные критерии адсорбционной модификации сорбента и методы снятия уширения хроматографических пиков, позволяющие достичь максимального разрешения при использовании экономичных микроколонок.

Практическая значимость работы.

1. Разработаны методы определения состава сорбционных комплексов на границе раздела фаз «твердое тело - жидкость».

2. Разработаны методы регулирования селективности и разрешающей способности хроматографических систем в нормальном и обращенно-фазовом вариантах ВЭЖХ и составы универсальных элюентов для скринингового контроля при использовании микроколоночных вариантов аппаратуры для ВЭЖХ.

3. Разработана технология изготовления эффективных экономичных хроматографических микроколонок для хроматографов серии «Милихром».

4. Разработано 20 методик контроля состава сложных смесей органических соединений, хроматографические системы которых составлены с применением методов регулирования селективности и эффективности хроматографических систем и с применением одного из самых главных преимуществ хроматографов серии «Милихром» - многоволнового детектирования: методики анализа наркотических и одурманивающих веществ, различных растительных экстрактов, афла- и микотоксинов, лекарственных средств, витаминов, нефтепродуктов, напитков, вин, фармпрепаратов и т.д.

Реализация работы.

1. По предложенной технологии ЗАО «Научприбор» было изготовлено не менее 50000 хроматографических колонок.

2. Разработано и внедрено в производство семейство микроколоночных хроматографов серии «Милихром». С 1986 г. (хроматограф «Милихром-1») по 2003 г. («Милихром-5») было выпущено более пяти тысяч хроматографов, которые послужили базой для развития метода ВЭЖХ в СССР и России.

3. Внедрены методики анализа фальсификации кофе, афлатоксинов и микотоксинов в Ивановской областной госторгинспекции

4. Методы определения фальсификации нефтепродуктов внедрены на предприятии «ПРНП», представляющей интересы Тюменской нефтяной компании в Орловской области.

5. Материалы диссертации использованы при чтении спецкурса «Физико-химические методы анализа пищевой продукции» на факультете легкой и пищевой промышленности Орел ГТУ.

Апробация работы. Основные материалы работы доложены на: Всесоюзной конференции молодых ученых по хроматографии (Дзержинск, 1979), 1-м Всесоюзном симпозиуме «Молекулярная жидкостная хроматография» ( Дзержинск, 1979), Всесоюзном совещании по микроколоночной жидкостной хроматографии (Орел, 1981), 2-ом Всесоюзном симпозиуме «Молекулярная жидкостная хроматография» (Звенигород, 1982), 3-ем Всесоюзном симпозиуме «Молекулярная жидкостная хроматография» (Рига, 1984, три доклада), 1-й Международной научно-практической конференции «Проблемы здорового питания» (Орел, 1998), Всероссийской конференции "Диагностика веществ, изделий и устройств" (Орел, 1999), Всероссийском симпозиумае по хроматографии и адсорбции (Москва, 1999), 3-ей Международной научно-практической ' конференции «Продовольственный рынок и проблемы здорового питания» (Орел, 2000, два доклада), Всероссийском симпозиуме по жидкостной хроматографии и электрофорезу (Москва, 2001), Международном Форуме «Аналитика и аналитики» (Воронеж, 2003, два доклада), Всероссийском симпозиуме «Хроматография и хромато-графические приборы» (Москва, 2004, два доклада), на семинаре кафедры аналитической химии МГУ им. М.В. Ломоносова (2004 г.), на Международной научно-практической конференции «Потребительский рынок: качество и безопасность товаров и услуг» (Орел, 2004, два доклада).

Публикации. Материалы диссертации изложены в 26 статьях в реферируемых журналах, 8 статьях в сборниках, 2 монографиях, тезисах 18 докладов на 15 всесоюзных, всероссийских и международных конференций, симпозиумов и совещаний, 14 наименованиях технической и технологической документации.

Вклад автора. Разработка теории удерживания в НФ ВЭЖХ, экспериментальные исследования в НФ ВЭЖХ, экспериментальные и теоретические методы исследования уширения хроматографических пиков в обращенно-фазовой ВЭЖХ и анализ результатов выполнены лично автором. Отдельные этапы работы выполнялись при участии К.С. Сычева и В.А. Гаврилиной. Разработка и испытания хроматографов серии «Милихром» осуществлялась коллективом сотрудников СКБ «Научприбор» при участии или под руководством автора.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, шести глав, поделенных на разделы, выводов, списка цитируемой

литературы и приложения. Работа содержит 302 страницы, включая 51 таблицу и 92 рисунка. Список литературы содержит 211 ссылок.

Положения, выносимые на защиту.

1. Полуэмпирическая теория удерживания и методология ее использования в нормально-фазовой ВЭЖХ для определения параметров сорбционных комплексов и исследования механизмов взаимодействия <<сорбат - сорбент» (механизмы удерживания) в рамках диполь-полевой модели электромагнитных взаимодействий;

2. Механизмы удерживания замещенных кислот и фенолов на адсорб-ционно-модифицированном силикагеле в рамках модели межмолекулярных взаимодействий и теории активных соударений (механизмы взаимодействия «вещество - сорбент хроматографической колонки».

3. Экспериментальные и теоретические методы исследования уширения хроматографических пиков в обращенно-фазовой ВЭЖХ, позволяющие использовать метод для контроля форм существования соединений на границе раздела фаз «гидрофобный сорбент - водно-солевой элюент».

4. Разработанные критерии адсорбционного модифицирования сорбента, методы регулирования селективности и разрешающей способности хроматографических систем в нормальном и обращенно-фазовом вариантах ВЭЖХ и составы универсальных элюентов для скринингового контроля при использовании микроколоночных вариантов аппаратуры для ВЭЖХ.

5. Разработанная и усовершенствованная аппаратура для микроколоночной ВЭЖХ, включая технологию изготовления эффективных хроматографических колонок.

6. 20 методик контроля состава сложных смесей органических соединений, хроматографические системы которых составлены с применением универсальных элюентов: наркотических и одурманивающих веществ, различных растительных экстрактов, афла- и микотоксинов, лекарственных средств, витаминов, нефтепродуктов, напитков, вин, фармпрепаратов и т.д.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Введение

Во введении обоснована актуальность рассматриваемой проблемы, определены цель и задачи исследований, научная новизна, практическая ценность результатов, сформулированы выносимые на защиту положения.

Глава 1. Современное состояние и анализ теории удерживания высокоэффективной жидкостной хроматографии

В первой главе проведен анализ современного состояния теории удерживания и экспериментальных данных по ассоциации органических соединений в растворах и на поверхности сорбентов. Показано, что

основные уравнения квазихимической теории Снайдера и Скотта в явном виде не содержат параметры сорбционных комплексов и не могут быть использованы для расчета или определения этих параметров. Тем не менее имеется огромный экспериментальный материал, свидетельствующий о влиянии ассоциации органических соединений в растворах на электрические и адсорбционные характеристики веществ. С учетом приведенных данных сделан вывод о целесообразности разработки теории удерживания на основе представлений о межмолекулярных взаимодействиях с учетом адсорбционной модификации сорбента и существования сорбционных комплексов в виде межмолекулярных ассоциатов.

Глава 2. Диполь-полевая теория удерживания нормально-фазовой (НФ ВЭЖХ) высокоэффективной жидкостной хроматографии

Вторая глава посвящена разработке диполь-полевой теории удерживания в нормально-фазовой ВЭЖХ и экспериментальной проверке этой теории на примере зависимостей параметров удерживания замещенных бензойных кислот и фенолов от электрических характеристик сорбционных комплексов и адсорбционно-модифицированного сорбента, а также от состава сорбционного комплекса и степени ассоциации модификатора в элюенте.

2.1 Модель удерживания на адсорбционно (динамически) — модифицированном силикагеле

В НФ ВЭЖХ в качестве модели поверности сорбента использована поверхность адсорбционно-модифицированного силикагеля с напряженностью электрического поля Е. Такая модель была обоснована и применена нами для расчетов напряженности электрического поля Е адсорбционно-модифицированно силикагеля при использовании элюентов «гексан - органическая кислота» (Сычев, 2000).

2.2. Вывод аналогов уравнений Снайдера и Скотта для сорбатов, имющиж собственный дипольный момент

Рассмотрим вывод аналогов уравнения Снайдера и Скотта только для сорбатов, имеющих собственный дипольный момент .

Известно, что энергия адсорбции Wa и фактор емкости К связаны соотношением:

WA = - RT- In K F, (2.1)

где R - универсальная газовая постоянная, Т - абсолютная температура, F - постоянная.

Пусть молекула сорбата имеет постоянный дипольный момент ji. Тогда мольная электрическая энергия взаимодействия «диполь - однородное электростатическое поле» WE будет равна:

We = - ((• E-Na-cos (а), (2.2)

где Na - число Авогадро, cos (а) - косинус угла между направлением дипольного момента молекулы сорбата и напряженностью Е поля сорбента.

Приравнивая уравнения (2.1) и (2.2) и полагая cos (а) = 1 получаем:

RT- In KF = ц- E-Na (2.3)

Такие зависимости часто реализуются для одноцентровых молекул сорбатов, имеющих собственный дипольный момент (рис. 2.1 )

Une Plot (MTOLY.STA 10v*16c) y=-0,92+1,083*x+eps

Рис. 2.1. График зависимости ц замещенных бензойных кислот от 1п (V"«,).

к=уК1/ут.

Пусть - дипольный момент сорбата при отсутствии полярной добавки в элюенте; У'я, - приведенный удерживаемый объем сорбата с дипольным моментом Ц; при Ср01—> 0; Уц - приведенный удеживаемый объем сорбата с дипольным моментом /I при концентрации полярной добавки в элюенте Сро1. Запишем уравнение (2.3) для У'ш и

КГ- 1п [(У'к, / Ум)*] = № ■ Е-На (2.4)

КГ- 1п [(V V Ум) *] = (I- Е-Ыл (2.5)

и вычтем из уравнения (2.4) уравнение (2.5):

ЯТ -1п (У* / Ук) = (№ - ц )• Е-Ид (2.6)

• Из уравнения (2.6) следует, что изменение величин У'к связано с изменением дипольных моментов ц сорбатов при постоянном значении Е. Дипольный момент может быть изменен как за счет образования

комплекса «сорбат - полярная добавка», так и за счет образования дополнительной лабильной сольватной оболочки молекулами полярной добавки в элюенте.

Примечание. Напряженность поля Е адсорбционно-модифицированного силикагепя рассчитана (Сычев, 2000 г.) из экспериментальных данных по формуле, аналогичной (2.6) при применении элюента «гексан - пропионовая кислота» и составляет J .5-i 0Q B/m или 0.15 B/Ä. Полученное значение близко к так называемым атомным напряженностям.

2.3 Вывод уравнений, описывающих зависимость параметров удерживания сорбатов, имеющих собственный дипольный момент, от концентрации полярной добавки

В общем случае дипольный момент сорбционного комплекса зависит от концентрации модификатора в растворе. Из литературы известны разные варианты зависимости величины А ц = (ц, - ц) от Ср0| Рассмотрим два варианта:

Д (i = А'- (Cpoi.)ain (2.7)

Д (i = А"- In (С poi.)ani, (2.8)

где А' и А" - постоянные,

m - количество структурных единиц (молекул, ассоциатов) полярной добавки, образующих комплекс с молекулой адсорбата, а - степень ассоциации молекул полярной добавки.

Зависимость (2.7) применима при изменении дипольного момента сорбата, обусловленного образованием комплексов с водородной связью «сорбат - полярная добавка в элюенте», а уравнение (2.8) - включает как комплексообразование, так и изменение дипольного момента комплексов с водородной связью «сорбат - полярная добавка в элюенте» за счет образования лабильной сольватной оболочки из молекул полярной добавки (гашение дипольного момента комплекса за счет неупругих столкновений).

В результате преобразований, на основе зависимостей (2.6) и (2.7) получаем аналог уравнения Скотта (2.9), а на основе уравнений (2.6) и (2.8) - аналог уравнения Снайдера (2.10):

1 /V'я= 1 /V'я,+[(А'• Е-Na)/(V'r,-RT)]• (С и Г , где (2.9)

а - степень ассоциации (количество молекул в ассоциате полярной добавки)

ln(V'R)=ln(V'Rl)-[(m-A"-E-NA)/ RT] • In (С (2.10)

В преобразованном виде и в предположении об образовании лабильной сольватной оболочки, приводящей к гашению дипольного момента комплекса «сорбат - полярная добавка в элюенте», уравнение (2.10) преобразуется в зависимость (2.11)

ln(V'R)=ln(V' 'ri)-Ь'-(Сро1.ат)1/2,где (2.11)

V"Ri - удерживаемый объем комплекса «сорбат - полярная добавка в элюенте» при С^ —> 0,

Ь' - коэффициент, зависящий от характера взаимодействия комплекса «сорбат - полярная добавка в элюенте» с молекулами полярной добавки.

Комбинация уравнений (2.9) и (2.11) дает возможность рассчитать величины Vm, а, m и определить причины изменения удерживаемых объемов с изменением концентрации модификатора при (а- m) > 1. При (а-т)< 1 для полярных поверхностей, как правило, не соблюдается принцип адсорбционного модифицирования и невозможно определить величину V'r, , необходимую для расчетов. 2.4 Экспериментальная проверка модели

Экспериментальная проверка полученнных уравнений произведена на массиве данных по удерживанию замещенных бензойных кислот и фенолов на колонках 200x4, заполненных силикагелем L (10 мкм) и колонках 100x2, заполненных Силасорбом-600 (5 мкм). 2.4.1 Расчет величин «ш» и «а» для случая crm = 1 (расчет состава сорбционного комплекса «замещенная бензойная кислота органическая кислота»)

Параметры удерживания замещенных бензойных кислот на адсорбционно-модифицированном органической кислотой силикагеле хорошо описываются (коэффициенты корреляции Rxy = 0.996 - 1.00) уравнением Скотта в виде (2.15) при a-m = 1:

l/V'R=l/V'Ri+[(A'-E-NA)/(V'Rl-RT)]-(Cpol) (2.15)

Из уравнения (2.15) напрямую определяются величины V'R, при условии (1/V'r, ) > 0 (критерий адсорбционного модифицирования, Сычев, 1986), которые используются при расчете величин а и m из системы уравнений типа (2.16):

lnln[(V'rr-V'R)/(V'r-V'r1)]/[(A'-E-NA)/ (V'r, RT)]= Ina + lnm + lnln(C pul)

Расчет величин m и a из экспериментальных данных для всех замещенных бензойных кислот при их элюировании раствором «гексан -органическая кислота» с поверхности силикагеля L и Силасорба - 600 при концентрациях органической кислоты в элюенте, больших 0.3 моль/дм3 дает одинаковые значения m = 0.5 ± 0.01 и a = 2.0 ± 0.05, что соответствует сорбционному комплексу «замещенная бензойная кислота - органическая кислота» в соотношении 1:1.

2.4.2 Строение сорбционного комплекса «замещенная бензойная кислота - органическая кислота»

Сопоставим величины V'r, (приведенный удерживаемый объем сорбата при Ср0|—> 0), V"r, (приведенный удерживаемый объем комплекса сорбат - полярная добавка в элюенте» при законченном комплексообразовании) и соответствующие им дипольные моменты, рассчитанные по корреляционному (Rxy = 0.998) уравнению типа (2.3) (табл.2.2).

Таблица 2.2

Величины 1п (У'ш), 1п (У"я,), экспериментальные и рассчитанные дипольные моменты ц (Б)

Кислота |Х эксп.(О) 1п(У'т) Ьп(У"к,)

Бензойная 1.78' 2.631 1.75 2.411 1.61

р- С1 2.00' 3.058 2.03 2.681 1.78

р-Вг 2.081 3.079 2.04 2.701 1.80

т- Вг 2.151 3.194 2.11 2.758 1.83

т- С1 2.20' 3.270 2.16 2.794 1.86

о-С1 2.431 3.817 2.51 3.354 2.22

о-Вг 2.50' 3.912 2.58 3.398 2.25

т- Ш2 4.021 6.075 3.98 4.700 3.09

о-СНз 1.672 2.501 1.67 2.308 1.54

т-СН3 - 2.333 1.58 2.308 1.54

р-СНз - 2.442 1.63 2.293 1.53

о- ОСН3 5.522 - - 5.734 3.76

т- ОСН3 - 3.817 2.52 3.185 2.11

р- ОСН3 ■ - - 3.141 2.09

р-Ш2 3.852 5.878 3.85 4.403 2.90

о-Ш2 - - - 6.185 4.05

Примечание. 1 - дипольные моменты измерены в диоксане в дебаях (Б); 2 - дипольные моменты измерены в бензоле.

Для всех замещенных бензойных кислот дипольные моменты, рассчитанные из величин У'^ меньше, чем дипольные моменты, рассчитанные из величин У'и , а величина 1п А = [1п (У'й,) - 1п (У"|?,)] хорошо коррелирует (Яху = 0.990) с дипольными моментами ц замещенных бензойных кислот, что соответствует модели диполь-дипольной ассоциации замещенных бензойных кислот в циклический ассоциат. Принимая во внимание, что состав комплекса, рассчитанный по уравнениям (2.9 и 2.11) одинаков, можно сделать вывод, что с ростом концентрации органической кислоты в элюенте уменьшение удерживаемых объемов замещенных бензойных кислот в первую очередь происходит за счет уменьшения дипольных моментов сорбционных комплексов

\>-н ...о=с-он

4

сн2сн3

-8 +5

О... но

\ С-СН2СН3 +8 -8

• Таким образом, величина У'ш, логарифм которой прямо пропорционален дипольному моменту сорбата, задает начальные условия для электрического взаимодействия замещенной бензойной кислоты с силикагелем, модифицированном органической кислотой. С большой долей уверенности можно предположить, что в рассматриваемом случае уменьшение удерживания замещенных бензойных кислот происходит сначала за счет уменьшения дипольных моментов кислот при образовании сорбционного комплекса с псевдоциклом «замещенная бензойная кислота - органическая кислота», а затем - за счет уменьшения дипольного момента сорбционного комплекса при неупругих столкновениях сорбционного комплекса с циклическими ассоциатами органических кислот.

2.4.3 Применение уравнений (2.9) и (2.11) для описания удерживания фенолов в НФ ВЭЖХ

Для простейшего процесса димеризации, степень ассоциации полярной добавки а равна:

а = (К^-Сро,)"2, (2.17)

где Касс - константа ассоциации (димеризации) молекул полярной добавки.

Полагая т = 1 (т.е. структурная единица ассоциата молекул полярной добавки полностью входит в комплекс «сорбат - полярная добавка»), объединяя (2.9) и (2.17) и логарифмируя, получим:

1п(У'я,-У'к)/(Ук-У'ш)=1пВ+(К|/5ас<:)-((Сро1)1<1пСро1) (2.18)

Уравнение (2.17) можно использовать для определения Касс, если определены величины У'^.

Для расчетов по уравнению 2.18 необходимо определить хотя бы >

ориентировочную величину У'я,. Эти величины были получены при аппроксимации графика на рис. 2.2 функцией (2.19) при Сро1 —* 0. В этом случае коэффициент А становится равным величине 1 А^'я.:

1/У'к=А-ехр(А'-Сро1) (2.19)

Используя величины У'^, полученные из уравнения (2.19), построим зависимость ЦУ^-УкУС^'а-Уш) от (Сры)"2- 1п(Сро0. Тангенс угла наклона этой зависимости даст величину константы ассоциации изопропанола Кшасс. Искомая зависимость хорошо выполняется, например для фенола (2.20) и п-метоксифенола (2.22).

МУш-УкЖУк-Ук,) =1.735+4.693- (Сра1.)ш-1 п(Сро1), Яху = 0.9985 (2.20)

1п(У ш-У Я)/(У к-У к,)=1.652+5.093-(Ср01 )1/2-1п(Сро1 )Дху=0.9994 (2.21)

Константа димеризации изопропанола в предположении, что две молекулы изопропанола присоединяются к молекулам фенола и метоксифенола в виде димера имеет значение 23,9.

, Согласно исходного предположения о димеризации изопропанола, необходимо рассчитать концентрацию, при которой степень ассоциации становится равной двум.

Рис. 2.2 Зависимость величин 1/У'ц от Ср01 для фенола при использовании элюента «гексан-изопропанол»

' Используя формулу (2.17) получим, что а = 2 уже при Сры= 0.167 моль/дм3. Используя формулу (2.17) получим степень ассоциации а (0.1) = 1.55 и а (0.13) = 1.76. Для концентраций 0.38, 0.5 и 0.62 моль/л степень ассоциации максимальна по заложенной модели и равна 2. Произведем проверку зависимости (2.9), полагая «т» = 1, а (0.1) = 1.55, а (0.13) = 1.76 и а = 2 для концентраций 0.38, 0.5 и 0.62 моль/дм3. Из рисунка 2.3 следует, что зависимость (2.9) выполняется отлично.

Рис. 2.3 Зависимость 1/У'ц = + В-С(т'о)р0) для фенола при

использовании элюента «гексан - изопропанол».

Исходя из обсужения результатов для фенола и п-метоксифенола, когда величина ш=1, а а изменяется от 1.56 до 2 с увеличением концентрации изопропанола в элюенте, наиболее вероятными являются комплексы с изопропанолом типа ГУ:

IV

Для м-нитрофенола наиболее вероятным является комплекс V

С^СНз

Р

р-Н....|)-Н...О-Н

дн

СНзСНз

<жо...н-о-сн

СНз СНз

2.5 Выводы к главе 2

1. Предложенная диполь-полевая теория удерживания НФ ВЭЖХ впервые позволяет получить из экспериментальных данных параметры сорбционных комплексов (состав, цикличность или нецикличность, дипольные моменты), т. е. определить формы существования анализируемых соединений на границе раздела фаз «полярный сорбент - неполярный или средне-полярный элюент».

2. Полученные уравнения позволили полностью описать и объяснить зависимости удерживаемых объемов замещенных бензойных кислот и фенолов от концентрации модификатора в элюенте, в том числе и отклонения от уравнений Снайдера и Скотта при элюировании замещенных фенолов с силикагеля элюентами «гексан - изопропанол».

3. Совместное использование диполь-полевой теории и метода главных компонент позволило описать механизмы удерживания замещенных кислот и фенолов на адсорбционно-модифицированном силикагеле.

4. Положенный в основу диполь-полевой теории принцип адсорбционного модифицирования, экспериментальные критерии которого предложены нами еще в 1988 г., получил полное подтверждение в результате как теоретических изысканий, так и при экспериментальной проверке диполь-полевой теории на примере удерживания ароматических кислот и фенолов.

Глава 3. Исследование причин уширения хроматографических пиков ионогенных соединений в ОФ ВЭЖХ

Уширение хроматографических пиков ионогенных соединений в обращенно-фазовой ВЭЖХ, с одной стороны, является эффектом, приводящим в ряде случаев к полной потере хроматографического разрешения. С другой - несет информацию о формах существования ионогенных соединений на границе раздела фаз «гидрофобный сорбент -водно-солевой элюент». Таким образом, третья глава посвящена экспериментальным и теоретическим методам исследования уширения хроматографических пиков в обращенно-фазовой ВЭЖХ на примере уширения хроматографического пика бензойной кислоты, так как это соединение обладает рядом свойств, необходимых для хорошей йостановки эксперимента: бензойная кислота хорошо растворяется в воде и органических растворителях; известно, что при ассоциации карбоновых кислот в неполярных растворителях могут реализовываться равновесия : «мономер -циклический димер», «мономер - нециклический димер», «циклический димер - нециклический димер», «нециклический димер -нециклический полиассоциат»; известно, что карбоновые кислоты в кристаллах могут образовывать полиассоциаты; в разбавленных водных растворах бензойная кислота хорошо диссоциирует с образованием бензоат-иона; бензойная кислота слабо удерживается на обращенно-фазовом сорбенте; бензойная кислота марки "хч" практически не содержит л примесей и легко перекристаллизовывается; бензойная кислота хорошо

поглощает УФ-излучение, что позволяет детектировать достаточно небольшие ее количества. Результатом эксперимента являются ч хроматограммы бензойной кислоты, полученные при использовании

разных сорбентов и элюентов (рис. 3.1):

В ходе эксперимента было установлено, что уширение пиков обусловлено взаимодействием адсорбата (бензойной кислоты) с неполярной частью поверхности адсорбента, т. е. с углеводородными цепями алкилпривитых силикагелей, а не с остаточными гидроксильными группами. Этот вывод подтверждают следующие факты:

1) ярче всего эффект уширения пика проявляется на полистирольном сорбенте. В меньшей степени эффект уширения проявляется на сорбентах Диасорб С16, Нуклеосил С18, и слабее всего - на сорбенте Диасорб С1, т.е. величина эффекта уширения пика бензойной кислоты пропорциональна доле углерода в адсорбенте и не зависит от остаточных силанольных групп;

2) бензойная кислота очень слабо элюируется с поверхности алкилпривитого силикагеля чистым ацетонитрилом, а с поверхности плохо дополнительно силанизированного ОФ адсорбента не элюируется совсем. В этом случае адсорбат взаимодействует с остаточными гидроксильными группами. При элюировании же смесью ацетонитрил - вода 95:5 (об.) бензойная кислота выходит узким пиком в начале хроматограммы. В этом случае остаточные гидроксильные группы полностью модифицируются

Рис. 3.1. Хроматографические пики бензойной кислоты. Адсорбент: Диасорб С16. Элюент: вода. Детекция: 230 нм. В пике 50,200,500, 1000 нг.

водой и не взаимодействуют с бензойной кислотой, т. е. содержание в э'люенте всего 5 % воды приводит к полной адсорбционной модификации гидроксильных групп. Особенно ярко уширение пика проявляется при работе на подкисленных элюентах (рис. 3.2), рН которых лежит в диапазоне 5-7.

IV

m i-

Рис. 3.2. Хроматограмма бензойной кислоты, аппроксимированная гауссовыми кривыми с полуширотами, близкими к полуширине пиков, соответствующих паспортной эффективности хроматографической колонки. I - зона бензоат-иона, II - зона мономера, III - зона нециклического ассоциата, IV - зона циклического ассоциата.

Сопоставляя времена выходов аппроксимированных пиков, их спектральные отношения и смоделированные на специальной программе профили уширенных пиков при различных условиях элюирования можно

i

i i

сделать вывод о том , что зона I соответствует бензоат-иону, II - зона мономера, III - нециклического ассоциата, IV - циклического ассоциата.

Аналогичные уширения обнаружены у хроматографических пиков органических кислот, аминов и ряда полифункциональных соединений.

Выводы к главе 3.

1. Основной причиной уширения хроматографических пиков ионогенных соединений является одновременное существование на поверхности сорбента различных форм существования ионогенного соединения. Таким образом, опровергнуто одно из самых распространеных заблуждений теории ВЭЖХ об преимущественном уширении пиков в НФ ВЭЖХ на остаточных силанольных группах.

2. Показано, что каждый из неподеленных хроматографических пиков уширенного пика является откликом межмолекулярного ассоциата.

3. Основным способом снятия уширения пика является приведение сорбционного комплекса ионогенного соединения к одной форме.

Глава 4. Эмпирические методы регулирования селективности в нормально-фазовой и обращенно-фазовой ВЭЖХ

Глава четвертая посвящена эмпирическим методам регулирования селективности хроматографических систем и обсуждению универсальных элюентов. Особое внимание уделено принципу адсорбционного модифицирования в НФ ВЭЖХ (Сычев, 1988) и методам снятия уширения хроматографических пиков в ОФ ВЭЖХ (Сычев, 2000). 1 Основным недостатком НФ ВЭЖХ является низкая воспроизводимость

результатов. В свою очередь, ОФ ВЭЖХ также имеет весьма существенный недостаток: использование стандартных элюентов типа * «ацетонитрил-вода» или «метанол-вода» приводит к уширению

хроматографических пиков ионогенных соединений и потере эффективности хроматографической колонки. Такая ситуация привела к необходимости исследования причин нестабильности результатов в НФ ВЭЖХ и ОФ ВЭЖХ и на основе полученных результатов - к выработке эмпирических методов составления элюентов, использование которых позволяет компенсировать указанные выше недостатки. Руководствуясь двумя критериями - стабильностью времен удерживания сорбатов и отсутствием дополнительного уширения хроматографических пиков по сравнению с паспортными данными хроматографической колонки, предложен набор вариантов элюентов для НФ ВЭЖХ и ОФ ВЭЖХ, названных нами «универсальными».

4.1. Универсальные элюенты в НФ ВЭЖХ

При составлении универсальных элюентов в НФ ВЭЖХ использовались следующие методы:

1) адсорбционное модифицирование поверхности силикагеля;

2) использование аномальной элюирующей силы растворов спиртов;

3) использование способности хлороформа и хлористого метилена к образованию неустойчивых комплексов с я-электронными системами анализируемых веществ.

Адсорбционная модификация в НФ ВЭЖХ достигается путем добавления в элюент уксусной или пропионовой кислот, в меньшей степени - воды, диэтил-, триэтиламина или диметилформамида ( для анализа соединений, имеющих основной характер). Объемное содержание в элюенте для кислот и аминов - от 0,25% до 5%, воды - от 0,15 до 2%.

Обобщая все приведенные методы, можно сконструировать достаточно универсальные элюенты для анализа среднеполярных соединений на силикагеле: «гексан-хлороформ-изопропанол-уксусная к-та» - для кислых й нейтральных соединений: «гексан-хлороформ-изопропанол- диэтиламин - для основных соединений»; «гексан-хлороформ -изопропанол-вода» -для нейтральных и слабоосновных соединений.

Указанные компоненты могут находиться в элюенте в различных соотношениях. Пример использования универсальной системы в НФ ВЭЖХ приведен ниже.

Рис.4.1 Хроматограмма экстракта арахиса. 1 - афлатоксин В1, в пике 5 нг. Элюент «хлороформ-гексан-метанол-уксусная к-та» в соотношении 70:30:1:1. Колонка 80x2, Силасорб-600, длина волны 358 нм.

4.2. Универсальные элюенты в ОФ ВЭЖХ

Основным методом, позволяющим составлять универсальные элюенты в ОФ ВЭЖХ , является оптимизация формы и ширины хроматографического пика (снятие уширения). Основной причиной уширения хроматографических пиков в НФ ВЭЖХ является существование на поверхности адсорбента сложных равновесных систем типа молекулярный ион - молекула - молекулярный ассоциат - молекулрный полиассоциат. Каждая из этих форм ионогенного соединения имеет свое время удерживания - в результате хроматографический пик соединения уширяется и создается впечатление полной потери эффективности

хроматографической колонки . Симметричная форма хроматографических пиков и высокая эффективность разделения средне- и сильно-полярных соединений достигается несколькими способами, в зависимости от класса анализируемых соединений:

1) смещение равновесия «диссоциированная форма - молекулярная форма» адсорбата в какую-либо одну сторону достигается подкислением или слабым подщелачиванием (при применении полимерных сорбентов на основе полистирола) элюента (одновременно при подкислении адсорбционно модифицируются остаточные силанольные группы на поверхности адсорбентов С16иС18);

I I

J

S

'Vf

J I I

^ei

l^t.

! ' '-1-1-

0 000 5 ооо 10 mo 15 000 20 000 25000

г 4i№»n«M m и*г.ш юзе

ш№%шттшттшы«шттт ¡а a

Uii 1

15 000 19 xi

i шяжшыюяашме IU nam is «и

"PI

1)1(111(1 И ВЛМИИПИНЦЛш

Рис. 4.2. Пример использования универсального элюента. 1 -хроматограмма растворимого кофе, 2 - красного вина, 3 - напитка «Байкал», 4 - опиума. Хроматограф «Милихром - 5 -3», колонка 80x2 заполнена Сепароном С18.

2) увеличение времени удерживания адсорбата достигается добавлением неорганических солей в элюент ( эффект «высаливания» органических соединений на границу раздела «адсорбент - элюент» с увеличении межфазного поверхностного натяжения «элюент-адсорбат»);

3) снятие уширения достигается заменой самоассоциата «адсорбат -адсорбат» на поверхности адсорбента на ассоциат «адсорбат - компонент элюента», достигается путем использования смешанных модификаторов типа «ацетонитрил - алифатический спирт» или добавлением в элюент небольших количеств органических кислот или алифатических аминов. Наиболее универсальным элюентом в ОФ ВЭЖХ является смесь «ацетонитрил - 0.03 М КН7РО4 - диэтиламин - фосфорная кислота». Такой универсальный элюент особенно эффективен при скрининговом анализе водных, водно-спиртовых или спиртовых растительных или животных экстрактов (рис. 4.2).

• Глава 5. Разработка и внедрение аппаратуры для ВЭЖХ

Глава пятая посвящена техническим средствам достижения высокого разрешения хроматографических систем: технологии и испытаниям эффективных и экономичных микроколонок и использующему эти колонки семейству микроколоночных хроматографов серии «Милихром».

5.1. Исследования в области технологии изготовления хроматографических колонок с внутренним диаметром 2 мм

Все преимущества регулирования селективности и снятия межмолекулярного уширения хроматографических пиков не будут эффективными, если не уменьшить до минимума гидродинамическое уширение пиков, обусловленное технологией изготовления хроматографических колонок. Таким образом, большое внимание в работе уделено разработке технологии изготовления хроматографических колонок для хроматографов серии «Милихром». В процессе разработки технологии и при налаживании производства лично автором было изготовлено и протестировано более 800 хроматографических колонок, заполненных разными адсорбентами при различных условиях приготовления адсорбента и заполнения колонок. Показано, что хроматографические колонки. изготовленные по разработанной технологии, имеют удельную эффективность, соответствующую высшим мировым достижениям в этой области (табл. 5.1).

Таблица 5.1

Показатели качества хроматографических колонок

Адсорбент Диаметр Длина Общая Удель- Высо- Коэффи-

частиц колон- эффек- эффек- TaH,dp циент

адсор- ки,мм тив- тивность ассимет-

бента, ность, тт/м рии

мкм тг

1 2 3 4 5 6 7

Силасорб-600 4.9 120 12890 107000 1.90 1.19

(1983 г.)

Силасорб-600 4.8 120 8250 68750 3.03 1.17

(1990 г.)

Силасорб SPH 5.4 80 4640 58000 3.19 1.0

Сепарон SGX 5.0 64 3670 57670 4.49 1.12

Сепарон SGX 3.0 64 4460 69680 4.78 1.21

Нуклеосил Sil 5.0 64 4640 72500 2.75 1 15

Лихросорб Sil 5.0 64 3750 58590 3.41 1.25

Силасорб SPH

С18 (1990г.) 5.4 64 3870 60000 3.06 1.01

Силасорб SPH

С18 (1991г.) 5.0 64 6250 97650 2.05 1.17

Сепарон С18 5.0 64 6280 98100 2.04 1.19

Нуклеосил С18 5.0 64 6310 98600 2.03 1.15

Армсорб С18 6.0 64 3300 51560 3.23 1.22

Диасорб С16Т 5.2 64 5960 93100 2.07 1.19

5.2. Разработка и испытания хроматографов серии «Милихром»

Хроматографы серии «Милихром» включают в себя следующие модели: «Милихром», «Милихром-1», «Милихром-2», «Милихром-4» и «Милихром-5». Основными разработчиками хроматографов серии «Милихром» (кроме «Милихром - 5», ), является коллектив ученых и конструкторов СО АН СССР (г. Новосибирск). Серийные варианты этих хроматографов разрабатывались и запускались в производство на ПО «Научприбор» (г.Орел) коллективом конструкторов, технологов и рабочих ПО «Научприбор» при участии или под руководством автора. Хроматографы этой серии стали основой для развития метода ВЭЖХ в СССР и РФ.

Глава 6. Разработка и совершенствование хроматографических методик для хроматографов серии «Милихром»

Глава шестая посвящена разработке методик контроля состава объектов, представляющих сложные смеси органических соединений.

Разработка высокоэффективных колонок в совокупности с методами регулирования селективности позволили использовать экономичные микроколонки для разработки более двадцати методик контроля состава объектов, представляющих сложные смеси органических веществ (рис. 6.1).

2 000 4 000 i 000 8 000 10 ООО 12 000 13 930

т йшж 'врев

шттъшшпяътш

'lUI

¡'«"«•I

fcrfaoim ¡it

Ш

4000 6 000 < 000 ЮМ

с \om*wmzu(v*iB w «ет ж г к у

<1.'" I

EJ Е3_

г мгаммич^чС! ем а ю 2яв> 2в р «

мя^штш^шллжиышкзвшаяшаш

1~П

i МО I ООО

с -.шшми^иш ш 27 03 ак 1ь №. из

iMMMHWW ЖЯШIWSSS

Рис. 6.1. Пример использования многоволновой детекции при анализе нефтепродуктов. 1 - хроматограмма бензина АИ-92, 2 - дизельного топлива, 3 - присадки типа "Хайтек", 4 - присадка типа КНД. Хроматограф «Милихром - 5 -3», колонка 80x2 заполнена Сепароном С18.

Особый интерес представляют работы по обнаружению фальсификации нетепродуктов, по анализу присадок к моторным маслам и

анализу базовых минеральных моторных и трансмиссионных масел (рис. 6.1). Универсальные элюенты применены для контроля состава вин, безалкагольных напитков, кофе, наркотиков, лекарственных препаратов и т.д. (рис. 6.2) Так как для анализа разных классов ионогенных соединений применяется практически один и тот же универсальный элюент, время разработки хроматографических условий для скринингового контроля ионогенных соединений сократился до нескольких дней (вместо месяцев).

Рис. 6.2. Хроматограмма красного вина «Каберне». 1 - галловая кислота, 2 - сиреневая , 3 - кофейная кислота, 4 - этилгаллат, 5- п - кумаровая, 6 - феруловая кислота, 7 - дигидрокверцетин, 8 - салициловая кислота.

Выводы к главе 6

1-. Разработано 20 методик контроля состава сложных смесей органических веществ.

2. Использование универсальных элюентов резко ускоряет и упрощает процесс разработки контроля состава смесей органических веществ методом ВЭЖХ.

3. Особенно эффективными предложенные методы оказались при разработке скринингового анализа больших массивов образцов, содержащих в одной смеси разные классы соединений.

\

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ВЫВОДЫ

1. Разработана полуэмпирическая теория удерживания и методология ее использования в нормально-фазовой ВЭЖХ для определения параметров сорбционных комплексов (состав, цикличность или нецикличность, дипольные моменты') и исследования механизмов взаимодействия «сорбат

- сорбент» (механизмы удерживания) в рамках диполь-полевой модели электромагнитных взаимодействий:

При этом решены следующие задачи:

- обоснована модель адсорбционно (динамически)- модифицированной поверхности силикагеля, получены критерии и сформулирован принцип адсорбционной модификации силикагеля;

- предложена и экспериментально обоснована диполь-полевая модель удерживания в НФ ВЭЖХ на адсорбционно-модифицированной поверхности силикагеля с учетом образования межмолекулярных ассоциатов; при этом получены оригинальные уравнения, описывающие зависимость характеристик удерживания от концентрации полярной добавки в элюенте, дипольных моментов (как постоянных, так и индуцированных) сорбатов и сорбционных

■ комплексов, степени ассоциации молекул полярной добавки. Полученные уравнения позволили полностью описать и объяснить зависимости удерживаемых объемов замещенных бензойных кислот и фенолов от концентрации модификатора в элюенте, в том числе и отклонения от уравнений Снайдера и Скотта при элюировании замещенных фенолов с силикагеля элюентами «гексан - изопропанол»;

- представленная теория позволила частично решить одну из самых старых проблем НФ ВЭЖХ - проблему определения величин V ,„, без решения которой развитие любой теории ВЭЖХ выглядит не совсем корректно. Предложены два способа определения этой величины;

- при применении полученных уравнений были рассчитаны дипольные моменты замещенных бензойных кислот и их ассоциатов с пропионовой кислотой, напряженность электрического поля адсорбционно-модифицированного силикагеля, состав сорбционных комплексов монозамещенных бензойных кислот и фенолов. Показано, что основной формой существования замещенных бензойных кислот в указанных условиях является димер «бензойная кислота -алифатическая кислота», причем с ростом концентрации модификатора в элюенте нециклический ассоциат переходит в циклический, а сорбционные комплексы фенолов содержат от одной до трех молекул модификатора;

- впервые в ВЭЖХ для вьивления характера межмолекулярных взаимодействий в хроматографических системах был широко использован метод главных компонент; применение этого метода позволило обосновать общность механизмов удерживания замещенных бензойных кислот и фенолов на адсорбционно-модифицированном

силикагеле; метод главных компонент позволил объяснить способ гашения дипольных моментов сорбционных комплексов при увеличении концентрации полярной добавки в элюенте;

- исследован механизм удерживания замещенных бензойных кислот на адсорбционно-модифицированном силикагеле;

- исследован механизм удерживания замещенных фенолов на адсорбционно-модифицированном силикагеле;

2. Разработаны экспериментальные и теоретические методы исследования уширения хроматографических пиков в обращенно-фазовой ВЭЖХ. В процессе разработки решены следующие задачи:

- получены экспериментальные данные по уширению хроматографического пика бензойной кислоты: зависимость формы хроматографического пика от состава элюента, концентрации бензойной кислоты в пике и типа сорбента;

- получены спектральные отношения различных растворов бензойной кислоты; показано, что каждый из неподеленных хроматографических пиков уширенного пика является откликом межмолекулярного ассоциата, а основным способом снятия уширения пика является приведение сорбционного комплекса ионогенного соединения к одной форме;

- разработана и использована для теоретического обоснования механизма уширения компьютерная программа по моделированию процесса уширения хроматографического пика бензойной кислоты. Показано, что основной причиной уширения хроматографического пика бензойной кислоты в исследованных системах является образование самоассоциатов сорбата на гидрофобной поверхности сорбента;

- экспериментально показана апротонность модификатора -ацетонитрила - в режиме ОФ ВЭЖХ и предложен способ сравнения степени прививки обращенно-фазовых сорбентов на основе алкил-привитых силикагелей.

3. Разработаны методы регулирования селективности и разрешающей способности хроматографических систем в нормальном и обращен но-фазовом вариантах ВЭЖХ, составлены рецептуры универсальных элюентов для скринингового контроля веществ. Показано, что основными методами, улучшающими селективность и разрешение хроматографических систем, являются метод адсорбционного модифицирования в НФ ВЭЖХ и использование универсального элюента типа ««ацетонитрил - 0.03 М КН2РО4 - диэтиламин - фосфорная кислота» в ОФ ВЭЖХ.

4. Разработано, модернизировано и адаптировано двадцать методик по контролю состава объектов. представляющих сложные смеси органических соединений. В том числе методики: идентификации и количественного определения опиумных алкалоидов; героина, каннабинолов, амфетаминов, бенздиазепинов, барбитуратов; определения фальсификации растворимого кофе; определения консервантов и

подсластителей в напитках; анализа экстрактов хмеля; определения разложения аскорбиновой кислоты; определения бенз(а)пирена в воздухе рабочей зоны; определения бенз(а)пирена в копченостях; определения производных фурана в электроизоляционных маслах; определения фальсификации бензина; анализа базовых минеральных масел; определения фальсификации и состояния присадок в свежих и отработанных моторных, турбинных и трансмиссионных маслах; технологические методики контроля качества некоторых производных бенздиазепинов; методики определения фальсификации и квалификации вина; определение афлатоксина В[ в продуктах питания методом НФ ВЭЖХ; дезоксиниваленола в зерне и зернопродуктах методом НФ ВЭЖХ; зеараленона в зерне и зернопродуктах методом НФ ВЭЖХ; применения многоволнового детектирования при определении витаминов А, Е, и Д в кормах, премиксах и витаминных смесях методом НФ ВЭЖХ. 5. В рамках разработки и совершенствования аппаратуры для ВЭЖХ были получены следующие результаты:

- разработана и внедрена технология изготовления высокоэффективных хроматографических колонок с внутренним диаметром 2 мм; разработаны и утверждены технические условия, инструкция по проверке и изготовлению; удельная эффективность колонок, изготовленных по предложенной технологии соответствует мировому уровню;

- разработаны, испытаны и запущены в серийное производство хроматографы «Милихром-1», «Милихром-2» «Милихром-4» и «Милихром-5»;

- разработана и утверждена соответствующая текстовая техническая документация: технические условия, руководства по эксплуатации, инструкции по поверке.

Основное содержание диссертационной работы изложено в следующих работах:

Публикации в реферируемых журналах

1. Сычев С.Н. Свертка информации при анализе веществ и объектов // Контроль. Диагностика. - 2005. - № 1. - С. 70-72.

2. Сычев С.Н. Полуэмпирическая теория удерживания в нормально-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (НФ ВЭЖХ) на адсорбционно-модифицированном силикагеле // Сорбционные и хроматографические процессы. - 2003. - Т. 3. - Вып. 4. - С. 446 - 454.

3. Сычев С.Н. Применение метода главных компонент (факторного анализа) для анализа хроматографических данных в ВЭЖХ // Сорбционные и хроматографические процессы. - 2004. - Т. 4. - Вып. 2. -С. 134- 142.

4. Сычев С.Н. Влияние ассоциации полярной добавки в элюенте на удерживание замещенных фенолов в НФ ВЭЖХ// Сорбционные и хроматографические процессы. -2004. - Т. 4. - Вып. 2.-С. 144-151.

5. Сычев С.Н., Гаврилина В.А. Определение удерживаемого объема несорбируемого компонента Ум в нормально-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (НФ ВЭЖХ) // Сорбционные и хроматографические процессы. - 2004. - Т. 4 - Вып. 1 - С. 35 - 39.

6. Сычев С.Н., Гаврилина В.А. Механизмы удерживания замещенных бензойных кислот и фенолов на адсорбционно-модифицированном силикагеле // Сорбционные и хроматографические процессы. - 2004. - Т. 4. - Вып. 4. - С. 91 - 112.

7. Сычев С.Н., Сычев К.С. Исследование неравновесного колебательного процесса удерживания бензойной кислоты на поверхности обращенно-фазового адсорбента с помощью эффекта уширения хроматографического пика в режиме обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии // Конденсированные среды и межфазные границы. - 2001. -Т. 3. -№ 1,-С. 62-67.

8. Сычев С.Н., Сычев К.С., Ланин С.Н. Оценка напряженности электростатического поля адсорбционно-модифицированного силикагеля // Ж. физ. химии. - 2000. - Т. 74. - № 3. - С. 511-513.

9. Сычев С.Н., Сычев К.С., Ланин С.Н. Выявление характера межмолекулярных взаимодействий однозамещенных алифатических соединений методом главных компонент // Вестник МГУ. Сер. 2. Химия. -2000. - Т.41. - №1,-С. 28-31.

10. Сычев С.Н., Аксенова Н.С., Криволапов С.С. Адсорбционное модифицирование в жидкостной хроматографии на силикагеле // Ж. физ. химии. - 1986. - Т. 59. - № 8. - С. 1996-1998.

11 .Сычев С.Н., ЕриловС.П., Никитин Ю.С. Применение метода главных компонент в жидкостной хроматографии замещенных бензойных кислот // Ж. физ. химии. - 1983. - Т. 57. - № 2. - С. 346 - 350.

12. Сычев С.Н., ЕриловС.П., Никитин Ю.С. Устойчивость линейно-независимых факторов, описывающих экспериментальные данные по жидкостной хроматографии монозамещеяных бензойных кислот // Ж физ. химии. - 1983. - Т. 59. - № 3. - С. 661 - 663.

13. Сычев С.Н., Никитин Ю.С., Криволапов С.С. Влияние образования внутри- и межмолекулярных связей в растворе 2-нитро-4-метил-6-формил-фенола на форму хроматографических пиков в жидкостной хроматографии на силикагеле // Ж. физ. химии. - 1983. - Т. 57. - № 3. - С. 715-717.

14. Куплетская Н.Б., Баранова Т.А., Сычев С.Н. Взаимодействие борофторида п-нитробензолдиазония с п-нитробензолдиазотатом натрия в ацетонитриле и ДМСО // Ж. орг. химии. - 1986. - Т. XXII. - С. 542-547.

15. Сычев С.Н., Сычев К.С. Универсальные элюенты в нормально-фазовой и обращенно-фазовой ВЭЖХ// Сорбционные и хроматографические процессы. - 2003. - Т 3. - Вып. 4. - С. 23 - 25.

16. Сычев К.С., Сычев С.Н. Применение универсальных пожвижных фаз в высокоэффективной жидкостной хроматографии для анализа объектов пищевой промышленности, криминалистики и фармацевтической химии

//Заводская лаборатория. Диагностика материалов. - 2003. - Т. 69. № 9. -С. 8 -11.

17. Сычев С.Н., Гаврилина В.А., Музолевская P.C., Мальцева О.И. Хроматографическая система для скринингового анализа в ОФ ВЭЖХ // Сорбционные и хроматографические процессы. - 2004. - Т. 4 - Вып. 4 -С. 91 -112.

18. Сычев С.Н., Сычев К.С. Опредение афлатоксинаВ| в продуктах питания методом НФ ВЭЖХ с применением жидкостных микроколоночных хроматографов серии «Милихром»// Заводская лаборатория. Диагностика материалов. - 2002. -Т. 68. - № 10. - С. 16 - 17.

19. Сычев С.Н., Кострубин М.М., Сычев К.С. Определение производных фурана в трансформаторных маслах // Заводская лаборатория. Диагностика материалов. - 2002. - Т. 68. - № 9. - С. 11 - 13.

20. Сычев С.Н., Гаврилина В.А., Бутырин А.Н. Разработка экспресс-методов определения фальсификации нефтепродуктов с помощью ВЭЖХ // Известия ВГУ. Серия «Химия, биология, фармация». - 2003. -№2. -С. 21 -26.

21. Сычев С.Н., Гаврилина В.А., Бутырин А.Н. Разработка экспресс методов определения фальсификации бензинов, дизельного топлива и моторных масел с помощью ВЭЖХ на микроколоночных хроматографах серии «Милихром» // Сорбционные и хроматографические процессы». -2003. - Т. 4 - Вып. 1 - С. 85 - 92.

22. Сычев С.Н., Гаврилина В.А., Юрова С.А., Сатцаева И.К., Бутырин А.Н. Технология изготовления эффективных хроматографических колонок с внутренним диаметром 2 мм для высокоэффективной жидкостной хроматографии // Аналитика и контроль. - 2003. - Т. 1. - № 3 - С. 276 -283.

23. Сычев С.Н., Гаврилина В.А., Бутырин А.Н., Юрова С.А. Разработка экспресс-метода определения фальсификации бензинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на микроколоночных хроматографах серии «Милихром». // Аналитика и контроль. 2003. - Т. 1. - № 1 _ с. 40 - 44.

24. Иванова Т.Н., Полякова Е.Д., Сычев С.Н. Биологически-активная добавка «Арфазетин» в профилактическом питании. // Хранение и переработка сельхозсырья. 1997. - № 4. - С. 22 - 23.

25. Гаврилина В.А., Корячкина С.Я., Сатцаева И.К., Сычев С.Н. Применение высокоэффективной жидкостной хроматографии для исследования хмелевых заквасок.// Хранение и переработка сельхозсырья. 2003.-№ 10.-С. 34-35.

26. Емельянов A.A., Корячкина С .Я., Сатцаева И.К., Сычев С.Н., Гаврилина В.А. Принцип нормирования хмелевого сырья в его водных растворах при приготовлении хмелевых заквасок // Известия ВУЗов. Пищевая Технология. 2004. - № 4. - С. 41 - 42.

Отдельные издания

27. Сычев С.Н. Методы совершенствования хроматографических систем и

механизмы удерживания в ВЭЖХ. - Орел: ОрелГТУ, 2000. - 212 с.

28. Сычев С.Н., Сычев К.С., Гаврилина В.А. Выскоэффективная жидкостная хроматография на микроколоночных жидкостных хроматографах серии «Милихром». - Орел: ОрелГТУ, 2002. -135 с. Наиболее важные публикации в других изданиях

29. Сычев С.Н., Гаврилина В.А., Мальцева О.И. Экспресс-анализ вина // Напитки. - 2004. - № 3. - С. 94 - 97.

30. Сычев С.Н. Методика количественного химического анализа воздуха рабочей зоны на содержание 3,4-бензпирена. - М.: ВНИИМС, 1994. - 15 с.

31. Сычев С.Н., Игнатов Д.Е., Оскотская Э.Р. Адсорбционное Модифицирование силикагеля в анализе фенолов методом ВЭЖХ //Печ. Рус. Деп. - 1996. - Т. ХП. - № 51. - С. 37 - 39.

32. Сычев С.Н., Гаврилина В.А. Определение фальсифицированных образцов растворимого кофе на рынке г. Иваново // Известия ОрелГТУ. Естественные науки. - 2003. - № 1-2. - С. 81 - 84.

33. Сычев С.Н., Гаврилина В.А., Бутырин А.Н., Юрова С.А. Обнаружение присадок в отработанных и свежих моторных маслах // Известия ОрелГТУ. Естественные науки. - 2003. — № 1-2. - С. 93 - 97.

34. Сычев С.Н. Жидкостная хроматография изомеров монозамещенных бензойных кислот на силикагеле. // Сборник «Аналитический контроль получения мономеров» - М.: НИИТЭХИМ, 1981. - С. 73 - 79.

35. Сычев С.Н., Гаврилина В.А., Мальцева О.И. Применение метода главных компонент для свертки информации при обработке многоволновых хроматограмм вина, полученных методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) // Известия ОрелГТУ. Естественные науки. - 2004. - № 3-4. - С. 138 - 143.

38. Сычев С.Н., Гаврилина В.А., Мальцева О.И., Волчков А.Н. // Применение высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с детектированием в видимой области для быстрого распознавания фальсификации красных виноградных вин Известия ОрелГТУ. Естественные науки. - 2004. - № 3-4. - С.132 - 138.

Техническая и технологическая документация

39. Сафронов О.Н., Сычев С.Н., Панкратова Н.И., Терехова Л.И., Соснина М.В. Хроматографы жидкостные микроколоночные «Милихром-1». Технические условия. ТУ25-7405.007-86. - Орел: ПО «Научприбор», 1986.

40. Сафронов О.Н., Сычев С.Н., Панкратова Н.И., Терехова Л.И., Соснина М.В. Хроматографы жидкостные микроколоночные «Милихром-2» Технические условия. ТУ25-7405.0008-88. - Орел: ПО «Научприбор»,

1988.

41. Сафронов О.Н., Сычев С.Н., Панкратова Н.И., Терехова Л.И., Соснина М.В. Хроматографы жидкостные микроколоночные «Милихром-4» Технические условия. ТУ25-7405.0008-89. - Орел: ПО «Научприбор»,

1989.

42. Сафронов О.Н., Сычев С.Н., Панкратова Н.И., Терехова Л.И., Соснина

M.B., Толкунова H.H. Хроматографы жидкостиллл/ уг «Милихром-5» Технические условия. W25-7405.(Ä^bi52ZZt «Научприбор», 1990. 1 ПП (11

43. Сафронов О.Н., Сычев С.Н., Панкратова Н.И., Те А ' ' 01 М.В. Хроматографы жидкостные микроколоно1 Инструкция по поверке. - Орел: ПО «Научприбор», 1986.

44. Сафронов О.Н., Сычев С.Н., Панкратова Н.И., Терехова Л.И., Соснина М.В. Хроматограф жидкостной микроколоночный «Милихром-2». Инструкция по поверке. - Орел: ПО «Научприбор», 1988.

45. Сафронов О.Н., Сычев С.Н., Панкратова Н.И., Терехова Л.И., Соснина М.В. Хроматографы жидкостные микроколоночные «Милихром-4». Инструкция по поверке. - Орел: ПО «Научприбор», 1990.

46. Сафронов О.Н., Сычев С.Н., Панкратова Н.И., Терехова Л.И., Соснина М-В. Хроматографы жидкостные микроколоночные «Милихром-5». Инструкция по поверке. - Орел: ПО «Научприбор», 1991.

47. Сафронов О.Н., Сычев С.Н. Колонки аналитические хроматогра-фические. Технические условия. - Орел: ПО «Научприбор», 1986.

48. Сычев С.Н. Колонки аналитические хроматографические. Инструкция по набивке и проверке. - Орел: ПО «Научприбор», ¡986.

49. Сафронов О.Н., Сычев С.Н., Панкратова Н.И., Терехова Л.И., Соснина М.В. Хроматографы жидкостные микроколоночные «Милихром-1». Руководство по эксплуатации. АПУ2.840.002РЭ. - Орел: ПО «Научприбор», 1986.

50. Сафронов О.Н., Сычев С.Н., Панкратова Н.И., Терехова Л.И., Соснина М.В. Хроматографы жидкостные микроколоночные «Милихром-2» Руководство по эксплуатации. АПУ2.840.003РЭ. - Орел: ПО «Научприбор», 1988.

51.Сафронов О.Н., Сычев С.Н., Панкратова Н.И., Терехова Л.И., Соснина М.В. Хроматографы жидкостные микроколоночные «Милихром-4» Руководство по эксплуатации. АПУ2.840.004РЭ. - Орел: ПО «Научприбор», 1989.

52.Сафронов О.Н., Сычев С.Н., Панкратова Н.И., Терехова Л.И., Соснина М.В. Хроматографы жидкостные микроколоночные ' «Милихром-5». Руководство по эксплуатации. АПУ2.840.005РЭ. - Орел: ПО «Научприбор», 1991.

По теме диссертации опубликованы тезисы 18 докладов на 15 всесоюзных, всероссийских и международных конференциях, симпозиумах и совещаниях.

ЛР ИД № 00670 от 05.01.2000 г. Подписано в печать «17» Ol 2005 г. Усл. печ. л. 2. Тираж 120 экз. Заказ №/4-3

Отпечатано на полиграфической базе ОрелГТУ 302020 г. Орел, Наугорское шоссе, 29

Введение.

1. Глава 1. Современное состояние и анализ теории удерживания высокоэффективной жидкостной хроматографии.

1.1. Сравнительный анализ уравнений Снайдера-Сочевинского и Скотта- Кучеры.

1.1.1. Анализ уравнения Снайдера.

1.1.2. Анализ уравнения Скотта-Кучеры.

1.2. Межмолекулярные взаимодействия в растворах и при адсорбции.

1.2.1. Молекулярная ассоциация и дипольные моменты органических кислот.

1.2.2. Молекулярная ассоциация и дипольные моменты фенолов.

1.2.3. Межмолекулярные взаимодействия «полярная добавка в элюенте-поверхность силикагеля». Адсорбция органических кислот из растворов на силикагеле.

1.3. Общие представления о роли гидрофобности в ОФ ВЭЖХ.

1.3.1.Формы существования ионогенных соединений на границе раздела фаз «водно-солевой раствор — не полярная поверхность».

1.4. Разрешение хроматографической системы, теория удерживания и эффективность хроматографических колонок.

2. Глава 2. Полуэмпирическая диполь-полевая теория удерживания.

2.1. Вывод уравнений, описывающих зависимость удерживаемых объемов от концентрации полярной добавки в НФ ВЭЖХ.

2.1.1. Вывод уравнений, описывающих зависимость удерживаемых объемов от дипольных моментов молекул сорбата.

2.2. Применение модели диполь-полевого взаимодействия для расчета электрических характеристик адсорбционно-модифицированного силикагеля и молекул сорбатов.

2.3. Проблема определения удерживаемого объема несорбируемого компонента Ум.

2.4. Применение метода главных компонент (факторного анализа) для анализа хроматографических данных ВЭЖХ.

2.4.1.Выделение фактора электростатического взаимодействия.

2.4.2. Выделение фактора дисперсионного взаимодействия молекул, имеющих углеводородный радикал и неуглеводородный заместитель.

2.4.3. Факторный анализ коэффициентов уравнения Снайдера.

2.5. Сольватация замещенных фенолов в НФ ВЭЖХ.

2.6. Механизм удерживания замещенных бензойных кислот и фенолов на адсорбционно-модифицированном силикагеле.

2.6.1. Механизм удерживания замещенных бензойных кислот в хроматографии на адсорбционно-модифицированном силикагеле.

2.6.2. Удерживание бензойных кислот на силикагеле при концентрациях алифатических кислот в элюенте менее 1% по объему.

2.6.3. Механизм удерживания замещенных фенолов на силикагеле.

2.6.4. Уширение хроматографических пиков фенолов при разрыве внутримолекулярных водородных связей.

2.6.5. Связь удерживания с параметрами полярного модификатора и полярного сорбата.

2.7. Выводы к главе 2.

3. Глава 3. Механизм уширения хроматографических пиков в обращенно-фазовой ВЭЖХ.

3.1. Экспериментальное подтверждение апротонности ацетонитрила по отношению к бензойной кислоте.

3.2. Экспериментальная часть.

3.3. Уширение пика и формы существования бензойной кислоты на поверхности обращенно-фазового адсорбента.

3.4. Оценка метода аппроксимации.

3.5. Выводы к главе 3.

4. Глава 4. Эмпирические методы регулирования селективности в нормально-фазовой и обращенно-фазовой ВЭЖХ.

4.1. Основные эмпирические правила регулирования селективности в хроматографии на силикагеле.

4.2. Разработка и совершенствование хроматографических систем в обращенно-фазовом варианте ВЭЖХ.

4.3. Выводы к главе 4.

5. Глава 5. Разработка и внедрение аппаратуры для высокоэффективной жидкостной хроматографии.

5.1. Исследования в области технологии изготовления эффективных хроматографических колонок с внутренним диаметром 2 мм.

5.1.1. Характеристика адсорбентов для ВЭЖХ и подготовка адсорбентов для заполнения колонок.

5.1.2.Подготовка деталей колонки.

5.1.3. Заполнение колонок адсорбентом.

5.1.4.Определение эффективности хроматографических колонок.

5.1.5. Зависимость удельной и общей эффективности хроматографических колонок от длины колонок.

5.1.6. Испытание колонок на надежность. Консервация колонок.

5.1.7. Используемая база данных.

5.2. Разработка и испытания хроматографов серии «Милихром».

5.3. Выводы к главе 5.

6. Глава 6. Разработка и совершенствование хроматографических методик для хроматографов серии «Милихром».

6.1 .Применение универсального элюента состава «ацетонитрил-О.ОЗМ КН2РО4- диэтиламин (ДЕА) - фосфорная кислота» для анализа различных объектов в режиме ОФ ВЭЖХ.

6.1.1.Хроматографический анализ наркотических и одурманивающих веществ.

6.1.1.1 .Применение универсального элюента для подтверждения идентичности образцов опиума и героина.

6.1.1.2. Применение универсального элюента для хроматографирования амфетаминов и гашиша.

6.1.2.Применение универсального элюента : «ацетонитрил-О.ОЗМ КН2РО4-диэтиламин (ДЕА) - фосфорная кислота» для определения фальсификации кофе.

6.1.3. Применение универсального элюента : «ацетонитрил-О.ОЗМ КН2Р04 - диэтиламин (ДЕА) — фосфорная кислота» для анализа экстрактов хмеля.

6.1.4. Применение универсального элюента для анализа подсластителей и консервантов в напитках.

6.1.5.Применение универсального элюента «ацетонитрил-однозамещенный фосфат калия-ДЭА-фосфорная кислота» для исследования процесса разложения аскорбиновой кислоты.

6.2.Применение стандартного элюента «ацетонитрил — вода» в режиме ОФ

ВЭЖХ.

6.2.1 .Хроматографический анализ бенз(а)пирена.

6.2.1.1. Методика количественного анализа атмосферного воздуха и воздуха рабочей зоны на содержание бенз(а)пирена методом ВЭЖХ с использованием хроматографа «Милихром-5-7» с флуориметрическим детектором.

6.2.1.2. Определение бенз(а)пирена в копчёностях методом ВЭЖХ с флуориметрической и УФ- детекцией.

6.2.2. Определение содержания производных фурана в электроизоляционных маслах методом ОФ ВЭЖХ.

6.3 Примеры применения комбинации ОФ ВЭЖХ и НФ ВЭЖХ для исследования различных объектов.

6.3.1. Экспресс-методы определения фальсификации бензинов, дизельного топлива и моторных масел.

6.3.1.1. Определение фальсификации бензина.

6.3.1.2. Применение метода нормально-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (НФ ВЭЖХ) для сравнительного анализа базовых моторных масел.

6.3.1.3. Анализ присадок в моторных, турбинных и трансмиссионных маслах.

6.3.1.4. Обнаружение присадок в отработанных и свежих моторных маслах.

6.3.2. Применение ВЭЖХ в органическом синтезе лекарств на примере анализа некоторых производных бенздиазепинов.

6.3.3. Экспресс-анализ вина.

6.3.3.1. Получение хроматограмм вина на двухнасосном варианте хроматографа «Милихром-5-ЗМ».

6.4. Применение универсальных элюентов в НФ ВЭЖХ.

6.4.1. Определение афлатоксина В] в продуктах питания методом НФ ВЭЖХ.

6.4.2. Определение дезоксиниваленола в зерне и зернопродуктах методом НФ ВЭЖХ.

6.4.3. Определение зеараленона в зерне и зернопродуктах методом НФ ВЭЖХ.

6.5. Применение многоволнового детектирования при определении витаминов А, Е, и Д

6.6.Выводы к главе 6.

Актуальность проблемы. Предлагаемая работа выполнена по специальности 05.11.13 «Приборы и методы контроля природной среды, веществ, материалов и изделий» и относится к части «Приборы и методы контроля веществ». Большая часть приборов и методов, применяемых для контроля веществ и называемых аналитическими, предназначена для контроля веществ путем определения (анализа) состава вещества. Основой таких методов является физическая или физико-химическая модель взаимодействия вещества с аналитической частью прибора.

Современная высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) является одним из наиболее мощных физико-химических аналитических методов, применяемых для контроля состава сложных смесей веществ. Органическая и биоорганическая химия, фармхимия, криминалистика, пищевая промышленность, контроль за состоянием окружающей среды, медицина - далеко не полный перечень отраслей науки и техники, где применение ВЭЖХ обеспечило существенный прогресс. Тем не менее, ВЭЖХ является одним из методов, в котором состав и строение контролируемого вещества (аналита) в виде сорбционного комплекса и механизм взаимодействия аналита с сорбентом хроматографической колонки (главная аналитическая часть хроматографа) в большинстве случаев неизвестны. Отсутствие таких данных затрудняет оптимизацию процесса анализа, особенно при скрининговом контроле больших массивов образцов (вина, кофе, нефтепродукты, наркотики, лекарства и т.д.), а в ряде случаев делает невозможным выполнение ряда специальных исследований, характерных для гетерогенного катализа, медицины, мембранных процессов, фармацевтической химии и т.д.

Таким образом, возникает проблема исследования механизмов взаимодействия сорбционноых комплексов контролируемых веществ с поверхностью сорбента и определения параметров этих комплексов на границе раздела фаз «сорбент — элюент».

Решение этой проблемы в первую очередь зависит от состояния теории метода и методологии расчета или прямого экспериментального определения параметров состава сорбционных комплексов и механизмов их взаимодействия с поверхностью сорбента. Классическая теория ВЭЖХ, базирующаяся на квазихимических равновесиях, не содержит параметров сорбционных комплексов и не позволяет использовать метод для решения указанной проблемы. При хемометрическом подходе основные усилия направлены в первую очередь на использование статистических методов для выявление эмпирических зависимостей, также не содержащих параметры сорбционных комплексов.

Таким образом, актуальность представленной работы в области теории ВЭЖХ связана с разработкой теории удерживания в нормально-фазовой ВЭЖХ и экспериментальных методов исследования уширения хроматографических пиков в обращенно-фазовой ВЭЖХ, позволяющих использовать метод для определения состава сорбционных комплексов на границе раздела фаз «твердое тело — жидкость».

Основой развития такой теории и экспериментальных методов исследования сорбционных комплексов может служить диполь-полевая модель межмолекулярных взаимодействий на границе раздела фаз «твердое тело - жидкость». Разработка теории удерживания и методологии исследований межмолекулярных взаимодействий в рамках модели электромагнитных взаимодействий позволяет решить не менее актуальные проблемы, связанные с разработкой и внедрением скрининговых методов контроля сложных смесей веществ. Важность этой проблемы связана с валом фальсифицированной продукции, буквально захлестнувших рынок: медицинские препараты, продукты питания, Косметика, нефтепродукты и т.д. Применение методик ВЭЖХ, рассчитанных на специализированный анализ каждой смеси веществ делает практически невозможным проверку большого количества разнородных образцов — ни одна лаборатория, даже очень мощная, не в состоянии освоить несколько тысяч разных методик. Таким образом, первой ступенью проверки большого массива образцов становится скрининговый контроль, который должен обладать определенным набором свойств: максимально возможной универсальностью по отношению к анализу различных классов соединений, быстрой и недорогой подготовкой пробы, недорогими реактивами, оптимальным сочетанием универсальности и селективности детектирования.

Таким образом, актуальность представленной работы в области применения ВЭЖХ связана с разработкой и обоснованием методов регулирования селективности и эффективности хроматограф ических систем, позволяющих составить универсальные элюенты, наиболее эффективные при скрининговом анализе, а также разработка на их основе конкретных методик контроля состава сложных смесей органических соединений.

Разработка теории удерживания и методологии исследований межмолекулярных взаимодействий в рамках модели электромагнитных взаимодействий позволяет решить актуальные проблемы, связанные с оптимизацией хроматографических систем при использовании экономичных микроколоночных хроматографов серии «Милихром», предъявляющих жесткие требования к разрешению хроматографической системы.

Целью диссертационной работы является совершенствование метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) как метода контроля состава сложных смесей органических соединений и расширение области применения нормально-фазовой ГНФ) и обращенно-фазовой (ОФ) высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) при контроле форм существования соединений на границе раздела фаз.

В работе решаются следующие основные задачи:

1.Разработка теории удерживания и методологии ее использования в нормально-фазовой ВЭЖХ для определения состава сорбционных комплексов и исследования механизмов взаимодействия «сорбат -сорбент» (механизмы удерживания) в рамках диполь-полевой модели электромагнитных взаимодействий;

2. Экспериментальные исследования характера влияния модификатора в элюенте на параметры удерживания замещенных бензойных кислот и фенолов, подтверждающие правильность разработанной теории;

3. Разработка экспериментальных и теоретических методов исследования уширения хроматографических пиков в обращенно-фазовой ВЭЖХ;

4.Разработка эмпирических методов регулирования селективности и разрешающей способности хроматографических систем в нормальном и обращенно-фазовом вариантах ВЭЖХ, составление рецептур универсальных элюентов;

5. Разработка и совершенствование аппаратуры для микроколоночной ВЭЖХ, включая исследования в области технологии изготовления эффективных хроматографических колонок.

6. Разработка, модернизация и адаптация хроматографических методик на основе методов регулирования селективности и разрешающей способности хроматографических систем в микроколоночной ВЭЖХ с применением универсальных элюентов, наиболее эффективных при проведении скринингового анализа.

Научная новизна работы.

1 .Полуэмпирическая теория удерживания и методология ее использования в нормально-фазовой ВЭЖХ для определения состава сорбционных комплексов и исследования механизмов взаимодействия «сорбат -сорбент» (механизмы удерживания) в рамках диполь-полевой модели электромагнитных взаимодействий;

2.Механизмы удерживания замещенных кислот и фенолов на адсорбционно-модифицированном силикагеле в рамках модели межмолекулярных взаимодействий и теории активных соударений (механизмы взаимодействия «вещество - сорбент хроматографической колонки».

3. Экспериментальные и теоретические методы исследования уширения хроматографических пиков в обращенно-фазовой ВЭЖХ, позволяющие использовать метод для контроля форм существования соединений на границе раздела фаз «гидрофобный сорбент — водно-солевой элюент».

4. Критерии адсорбционной модификации сорбента и методы снятия уширения хроматографических пиков, позволяющие достичь максимального разрешения при использовании экономичных микроколонок.

Практическая значимость работы. 1 .Разработаны методы определения состава сорбционных комплексов на границе раздела фаз «твердое тело — жидкость». »

2.Разработаны методы регулирования селективности и разрешающей способности хроматографических систем в нормальном и обращенно-фазовом вариантах ВЭЖХ и составы универсальных элюентов для скринингового контроля при использовании микроколоночных вариантов аппаратуры для ВЭЖХ.

3. Разработана технология изготовления эффективных экономичных хроматографических микроколонок для хроматографов серии «Милихром».

4. Разработано 20 методик контроля состава сложных смесей органических соединений, хроматографические системы которых составлены с применением методов регулирования селективности и эффективности хроматографических систем и с применением одного из самых главных преимуществ хроматографов серии «Милихром» -многоволнового детектирования: методики анализа наркотических и одурманивающих веществ, различных растительных экстрактов, афла- и микотоксинов, лекарственных средств, витаминов, нефтепродуктов, напитков, вин, фармпрепаратов и т.д. Реализация рабрты.

1. По предложенной технологии ЗАО «Научприбор» было изготовлено не менее 50000 хроматографических колонок.

2. Разработано и внедрено в производство семейство микроколоночных хроматографов серии «Милихром». С 1986 г. (хроматограф «Милихром-1-») по 2003 г. («Милихром-5») было выпущено более пяти тысяч хроматографов, которые послужили базой для развития метода ВЭЖХ в СССР и России.

3. Внедрены методики анализа фальсификации кофе, афлатоксинов и микотоксинов в Ивановской областной госторгинспекции

4. Методы определения фальсификации нефтепродуктов внедрены на предприятии «ПРНП», представляющей интересы Тюменской нефтяной компании в Орловской области.

5.Материалы диссертации использованы при чтении спецкурса «Физико-химические методы анализа пищевой продукции» на факультете легкой и пищевой промышленности Орел ГТУ.

Положения, выносимые на защиту.

1 .Полуэмпирическая теория удерживания и методология ее использования в нормально-фазовой ВЭЖХ для определения параметров сорбционных комплексов и исследования механизмов взаимодействия «сорбат -сорбент» (механизмы удерживания) в рамках диполь-полевой модели электромагнитных взаимодействий;

2.Механизмы удерживания замещенных кислот и фенолов на адсорбционно-модифицированном силикагеле в рамках модели межмолекулярных взаимодействий и теории активных соударений (механизмы взаимодействия «вещество - сорбент хроматографической колонки».

3. Экспериментальные и теоретические методы исследования уширения t хроматографических пиков в обращенно-фазовой ВЭЖХ, позволяющие использовать метод для контроля форм существования соединений на границе раздела фаз «гидрофобный сорбент - водно-солевой элюент».

4.Методы регулирования селективности и разрешающей способности хроматографических систем в нормальном и обращенно-фазовом вариантах ВЭЖХ и составы универсальных элюентов для скринингового контроля при использовании микроколоночных вариантов аппаратуры для ВЭЖХ.

5. Разработка и совершенствование аппаратуры для микроколоночной ВЭЖХ, включая исследования в области технологии изготовления эффективных хроматографических колонок.

6. 20 методик контроля состава сложных смесей органических соединений, хроматографические системы которых составлены с применением методов регулирования селективности и эффективности хроматографических систем и с применением одного из самых главных преимуществ хроматографов серии «Милихром» - многоволнового детектирования: методики анализа наркотических и одурманивающих веществ, различных растительных экстрактов, афла- и микотоксинов, лекарственных средств, витаминов, нефтепродуктов, напитков, вин, фармпрепаратов и т.д.

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ВЫВОДЫ

1 .Разработана полуэмпирическая теория удерживания и методология ее использования в нормально-фазовой ВЭЖХ для определения параметров сорбционных комплексов (состав, цикличность или нецикличность, дипольные моменты) и исследования механизмов взаимодействия «сорбат

- сорбент» (механизмы удерживания) в рамках диполь-полевой модели электромагнитных взаимодействий.

При этом решены следующие задачи:

- обоснована модель адсорбционно (динамически)- модифицированной поверхности силикагеля, получены критерии и сформулирован принцип адсорбционной модификации силикагеля;

- предложена и экспериментально обоснована диполь-полевая модель удерживания в НФ ВЭЖХ на адсорбционно-модифицированной поверхности силикагеля с учетом образования межмолекулярных ассоциатов; при этом получены оригинальные уравнения, описывающие зависимость характеристик удерживания от концентрации полярной добавки в элюенте, дипольных моментов (как постоянных, так и индуцированных) сорбатов и сорбционных комплексов, степени ассоциации молекул полярной добавки. Полученные уравнения позволили полностью описать и объяснить зависимости удерживаемых объемов замещенных бензойных кислот и фенолов от концентрации модификатора в элюенте, в том числе и отклонения от уравнений Снайдера и Скотта при элюировании ' замещенных фенолов с силикагеля элюентами «гексан - изопропанол»;

- представленная теория позволила частично решить одну из самых старых проблем НФ ВЭЖХ - проблему определения величин V т, без решения которой развитие любой теории ВЭЖХ выглядит не совсем корректно. Предложены два способа определения этой величины;

- при применении полученных уравнений были рассчитаны дипольные моменты замещенных бензойных кислот и их ассоциатов с пропионовой кислотой, напряженность электрического поля адсорбционно-модифицированного силикагеля, состав сорбционных комплексов монозамещенных бензойных кислот и фенолов. Показано, что основной формой существования замещенных бензойных кислот в указанных условиях является димер «бензойная кислота -алифатическая кислота», причем с ростом концентрации модификатора в элюенте нециклический ассоциат переходит в циклический, а сорбционные комплексы фенолов содержат от одной до трех молекул ' модификатора;

- впервые в ВЭЖХ для выявления характера межмолекулярных взаимодействий в хроматографических системах был широко использован метод главных компонент; применение этого метода позволило обосновать общность механизмов удерживания замещенных бензойных кислот и фенолов на адсорбционно-модифицированном силикагеле; метод главных компонент позволил объяснить способ гашения дипольных моментов сорбционных комплексов при увеличении концентрации полярной добавки в элюенте; исследован механизм удерживания замещенных бензойных кислот на адсорбционно-модифицированном силикагеле; исследован механизм удерживания замещенных фенолов на адсорбционно-модифицированном силикагеле; 2. Разработаны экспериментальные и теоретические методы исследования уширения хроматографических пиков в обращенно-фазовой ВЭЖХ. В процессе разработки решены следующие задачи:

- получены экспериментальные данные по уширению хроматографического пика бензойной кислоты: зависимость формы хроматографического пика от состава элюента, концентрации бензойной кислоты в пике и типа сорбента; получены спектральные отношения различных растворов бензойной кислоты; показано, что каждый из неподеленных хроматографических пиков уширенного пика является откликом межмолекулярного ассоциата, а основным способом снятия уширения пика является приведение сорбционного комплекса ионогенного соединения к одной форме;

- разработана и использована для теоретического обоснования механизма уширения компьютерная программа по моделированию процесса уширения хроматографического пика бензойной кислоты. Показано, что основной причиной уширения хроматографического пика бензойной кислоты в исследованных системах является образование самоассоциатов сорбата на гидрофобной поверхности сорбента;

- экспериментально показана апротонность модификатора -* ацетонитрила - в режиме ОФ ВЭЖХ и предложен способ сравнения степени прививки обращенно-фазовых сорбентов на основе алкил-привитых силикагелей.

3. Разработаны методы регулирования селективности и разрешающей способности хроматографических систем в нормальном и обращенно-фазовом вариантах ВЭЖХ, составлены рецептуры универсальных элюентов. Показано, что основными методами, улучшающими селективность и разрешение хроматографических систем, являются метод адсорбционного модифицирования в НФ ВЭЖХ и использование универсального элюента типа ««ацетонитрил - 0.03 М КН2РО4 -диэтиламин - фосфорная кислота» в ОФ ВЭЖХ.

4. Разработано, модернизировано и адаптировано двадцать методик по контролю состава объектов, представляющих сложные смеси органических соединений. В том числе методики: идентификации и количественного определения опиумных алкалоидов; героина, каннабинолов, амфетаминов, бенздиазепинов, барбитуратов; определения фальсификации растворимого кофе; определения консервантов и подсластителей в напитках; анализа экстрактов хмеля; определения разложения аскорбиновой кислоты; определения бенз(а)пирена в воздухе рабочей зоны; определения бенз(а)пирена в копченостях; определения производных фурана в электроизоляционных маслах; определения фальсификации бензина; анализа базовых минеральных масел; определения фальсификации и состояния присадок в свежих и отработанных моторных, турбинных и трансмиссионных маслах; « технологические методики контроля качества некоторых производных бенздиазепинов; методики определения фальсификации и квалификации вина; определение афлатоксина Bt в продуктах питания методом НФ ВЭЖХ; дезоксиниваленола в зерне и зернопродуктах методом НФ ВЭЖХ; зеараленона в зерне и зернопродуктах методом НФ ВЭЖХ; применения многоволнового детектирования при определении витаминов А, Е, и Д в кормах, премиксах и витаминных смесях методом НФ ВЭЖХ. 5. В рамках разработки и совершенствование аппаратуры ВЭЖХ была выполнена следущая работа и получены результаты:

- разработана и внедрена технология изготовления высокоэффективных хроматографических колонок с внутренним диаметром 2 мм; разработаны и утверждены технические условия, инструкция по проверке и изготовлению; удельная эффективность колонок, изготовленных по предложенной технологии соответствует мировому уровню;

- разработаны, испытаны и запущены в серийное производство хроматографы «Милихром-1», «Милихром-2» «Милихром-4» и «Милихром-5»;

- разработана и утверждена соответствующая текстовая техническая документация: технические условия, руководства по эксплуатации, инструкции по поверке.

1. Сычев С.Н., Аксенова Н.С., Криволапов С.С. Адсорбционное модифицирование в жидкостной хроматографии на силикагеле // Ж. физ. химии. - 1986. - Т. 59. - № 8. - С. 1996 - 1998.

2. Snyder L.R. Principles of adsorption chromatography. New York: Dekker, 1968. - 413 p.

3. Snyder L.R., Poppe H. Mechanism of solute retention in liquid-solid chromatography and the role of the mobile phase in affecting separation. Competiion versus "sorption"// J.Chromatogr. 1980. - V. 184. - N 4. -P. 363 -413.

4. Scott R.P.W. The role of molecular interactions in chromatography// J.Chromatogr. 1976. - V. 122. - N 1. - P. 35 - 53.

5. Scott R.P.W. The silica gel surface and its interactions with solvent and • solute in liquid chromatography// J.Chromatogr.Sci. 1980. - V.18. - N 7.-P. 297 -306.

6. Scott R.P.W., Kucera P. Solute interactions with the mobile and stationary phases in liquid-solid chromatography// J.Chromatogr. 1975. - V. 112. -N 1.-P. 425 -442.

7. Scott R.P.W., Kucera P. Solute-solvent interactions on the surface of silica gel.// J.Chromatogr. 1978. - V.l49. - N 1. - P. 93 - 110.

8. Scott R.P.W.,Kucera P. Solute-solvent interactions on the surface of silicagel.// J.Chromatogr. 1979. - V. 171. - N 1. - P. 37 - 48.

9. С.Н.Ланин. Адсорбционные модели удерживания в жидкостной хроматографии // Сборник «100 лет хроматографии». М.: Наука, 2003. -739 с.

10. Шатц В.Д.,Сахартова О.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография. — Рига: Зинатне, 1988. — 388 с.

11. Б.Рудаков. Растворитель как средство управления процессом в жидкостной хроматографии. Воронеж: ВГУ, 2003. - 299 с.

12. Сычев С.Н. Сравнительный анализ уравнений Снайдера-Сочевинского, Скотта-Кучеры и промежуточного уравнения lg Vr^ д! n*b/*VCII0.1. // Тезисы Всероссийского симпозиума по химии поверхности, адсорбции и хроматографии. - Москва: ИФХ РАН, 1999. - С. 122.

13. Степанов Н.Ф., Ерлыкина М.Е., Филиппов Г.Г. Методы линейной алгебры в физической химии. М.:МГУ, 1976. - 360 с.

14. Jaffe Н.Н. Reexamination of the Hammett equation//Chem.Rev. 1953. -V.53.-N2.-P.191 -254.

15. Дейл 3., Мацек К., Янак Я. Жидкостная хроматография. М.: Мир, 1978. -T.I.- 544 с.

16. Энгельгардт X. Жидкостная хроматография при высоких давлениях. -М.: Мир, 1980.-245 с.

17. Хефтман Э. Хроматография: практическое приложение метода. М.: Мир, 1986.-T.I.-366 с.

18. Хеншен А. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии. М.: Мир, 1988. - 687 с.2,2.Г.И.Епифанов. Физика твердого тела. -М.: Высшая школа, 1977.- 288 с.

19. Ландау Л.Д., Лифшиц Е.М. Электродинамика сплошных сред. М.: . Физматгиз, 1959. - 502 с.

20. Е.М.Лифшиц, Л.Д.Питаевский. Статистическая физика. Теория конденсированного состояния. М.:, Физматлит, 1968. — 494 с.

21. Сычев С.Н., Сычев К.С., Ланин С.Н. Оценка напряженности электростатического поля адсорбционно-модифицированного силикагеля // Ж.физ. химии. 2000. - Т.74. - № 3. - С.511- 513.

22. Сычев С.Н., Сычев К.С., Ланин С.Н. Выявление характера . межмолекулярных взаимодействий однозамещенных алифатическихсоединений методом главных компонент // Вестник МГУ. Серия 2. . Химия. 2000. - Т.41. — № 1. -С.28 - 31.

23. Пиментелл Д., Мак-Клеллан О. Водородная связь. М.: Мир, 1964. -462 с.

24. Терентьев В.Н. Термодинамика водородной связи. Саратов: Изд-во Саратовского ун-та, 1973. - 257 с.

25. Степанов Н.Ф. Водородная связь: как ее понимать // Соросовский образовательный журнал. 2001. - Т.7. - № 2. - С.28 - 33.

26. Сычев С.Н. Жидкостная хроматография изомеров монозамещенных бензойных кислот на силикагеле // Сборник "Аналитический контроль получения мономеров" М.: НИИТЭХИМ, 1981. - С. 73 - 78.

27. Сычев С.Н., Игнатов Д.Е., Оскотская Э.Р. Адсорбционное модифицирование силикагеля в анализе фенолов методом ВЭЖХ // Печ.Рус.Деп. T.XII. - № 51. - С. 96 - 99.

28. Шахпаронов М.И. Введение в современную теорию растворов. М.: Высшая школа, 1976. — 296 с.

29. Пиментелл Д., Мак-Клеллан О. Водородная связь. М.: Мир, 1964. -462 с.i

30. Левшин Л.В., Салецкий A.M. Оптические методы исследования молекулярных систем. М.: МГУ, 1994.-257 с.

31. Calchin E.F. The assosiation of carboxylic acids// Quart Rews. 1953. - V.7. -N 3. -P.255.

32. Луцкий A.K., Солонько B.H. Водородная связь и скорость ■ распространения ультразвука в жидкости. II. Одноосновные карбоновыекислоты жирного ряда // Ж.физ.химии. 1965. - Т.39. - № 3. - С.783 -• 787.

33. Waldstein P., Blatz L.A. Low frequency Raman spectra and molecular association in liquid formic and acetic asids // J.phys.chem. 1967. -V.71. -N7 - P. 2271 -2276.

34. Тер-Асатурова Н.И., Гиндин Л.И., Каретников Г.С., Лыгина И.А. Некоторые вопросы спектроскопии водородной связи и комплексообразования // Сборник «Вопросы молекулярной спектроскопии» Новосибирск: Наука, 1974. - С.273 - 279.

35. Пальм В.А. Таблицы констант скорости и равновесия гетеролити-ческих органических реакций. М.: ВНИТИ, 1979. - 656 с.

36. Giolotto L., Lanis G. Rilassamento nucleare e a associazi on molecolare // Nuovo cimento. 1956. - V.4. - N 2. - P. 1036 - 1040.

37. Ito M. Ultraviolett adsorption study of the molecular association of fenols //

38. J.Molec. Spectrosc. 1960. - V.4. - N2. - P.125 - 143. 44.Tomas L.H. Viscosity and molecular assosiation. Part 5. The association-model and hydrogen-bond enthalpies // J.Chem. Soc. - 1963. - N 6. -P. 1995 - 2002.

39. Zung-Nan Z., Sherill C.D., Tucker E.E. Solute activety on the self-assosiation of phenols in cyclohexan and carbon tetracloride //J.Phys.Chem.- 1978.- V.82. -N17. -P.1897- 1901.

40. Vanduborgh N.F., Armstrong N.R., Spall W.D. A cryoscopic study of the asso-ciations of phenolic compounds in benzene // J.Phys.Chem. 1970. -V.74. - N8.- P. 1734 - 1738.

41. Bellamy L.J., Williams R.L. Solvent effects on the infrared spectra of hindered phenols // Proc.Roy.Soc. 1960. - V.254. - N 1276. - P.119 -128.

42. Banerjie S.B., Kastha G.S. Influence of solvents on hydrogen bonding in ortho- and paranitrophenol // Indian J.Phys. 1962. - V.36. - N 3. -P.163 - 167.

43. Tokydge Т., Okamoto K. Associations of Phenol in Dioxane // J.Chem. Soc. Japan Pure Chem. Sec. 1967. - V.88. - N 7. -P.707-710.

44. Васянина Л.К., Богачев Ю.С., Шапетько Н.Н. Изучение ассоциации фенола в ряде электронодонорных растворителей методом ПМР // Ж.общей химии. 1971.-Т.41. - № 11. - С.2523 - 2525.

45. Dale A.J., Gramstad Т. Studies of hydrogen bonding //Spectrochim Acta.- 1972. V.28A. - N4. - P.639 - 650.

46. Singh S., Rao C.N.R. Steric Effects on Hydrogen Bonding // J.Amer.Chem. Soc. 1966. - V.88.- N10. - P.2142-2144.

47. Siedel H., Ritter C., Fruwert J. Uber die Substituentenabhangigkeit der Donatorund Akzeptoreigenschaften der Hydroxylgruppe in parasubstituerten Phenolen und Phenol-Anisol-Komplexen//Spectrochim Acta. 1976.1. V.32A N 4. - P.705-708.

48. Geiseler G., FruwertJ., Siedel H. Uber das Assoziations-verhalten der isomeren Butanole und ihrer Mischumgen in n-Heptan.// Spectrochim.Acta.- 1971. V.27A - N9. - P.1893 - 1897.

49. Abello L., Pannetier G. Contribution a l'etude de la liaison Hydrogene N-H.N// Bull. Soc. chim. France. 1967. - N 10. - P.3752 - 3755.

50. Битман Г.Л., Карасев Ю.З., Эляшберг M.E. Исследование межмолекулярной ассоциации гидроперекиси третичного бутила с производными бензола методом ИК-спектроскопии // Ж.общей.химии.- 1974. Т.44. - N 6. - С.1361 - 1365.

51. Богачев Ю.С., Васянина Л.К., Шапетько Н.Н. Изучение влияния заместителей на ассоциацию фенолов в бензоле //Укр.хим.ж. 1975. -T.41.-N8. - С.836 - 839.

52. Рыбаченко В.И., Кириченко А.И., Егоров В.А. Исследование самоассоциации методом ЯМР // Изв.АН СССР. Сер.хим. 1978. - № 5. - С.1021 - 1028.

53. Skinner J.F., Fuoss R.M. Dipol assosiations // J. Phys. Chem. 1964. - V.68. -Nil. - P.3406 - 3409.

54. Грязев Н.Н. Влияние ассоциации органических кислот на адсорбцию из неполярных растворителей // Докл. АНСССР. 1958. - Т. 118. -№. — С. 121- 124.

55. Зелизный A.M., Литковец Е.А., Грущак В.Т. Изучение характеристик адсорбции н-жирных кислот силикагелем из растворов в неполярных растворителях // Укр.хим.ж. 1975. - Т.41. - N 6.1. С.589 592.

56. Horvath Cs., MelanderW. Liquid chromatography with hydrocarbonceous bonded phases; theory and practice of re versed-phase chromatography // J.Chromatogr.Sci. 1977. - V. 15. - N 9. - P. 393 - 404.

57. Horvath Cs., Melander W., Molnar J. Solvophobic interactions inliquid chromatography with nonpolar stationary phases // J.Chromatogr. -1976. V. 125.-N l.-P. 129- 156.

58. Horvath Cs., Melander W., MolnarJ. Liquid chromatography of ionogenic substances with nonpolar stationary phases// Anal.Chem. 1977. - V. 49.- No l.-P. 17-28.

59. Hansch C., Leo A. Sabstituent constants for correlation analysis in chemistry and biology 11 New York: Wiley, 1979. 352 p.

60. Cambridge Soft Chemical Drawing, Chemical Databases, Enterpriese Solutions, Desktop Software, Consulting Services: http://www.cambrigesoft. com.

61. Ярив А. Квантовая электроника и нелинейная оптика. -М.: Советское радио., 1973.-447 с.

62. Ландау Л.Д., Лифшиц Е.М. Электродинамика сплошных сред. М. : Физматгиз, 1959. - 502 с.

63. Е.М. Лифшиц, Л.Д.Питаевский. Статистическая физика. Теория конденсированного состояния. — Москва : Физматлит, 2003. 494 с.

64. Фейнман Р., Лейтон Р., Сэндс М. Фейнмановские лекции по физике. -М.: Мир, 1976. Т. 8 - 9. - 524 с.

65. Рид Р., Праусниц Дж., Шервуд Т. Свойства газов и жидкостей. Л.: Химия, 1982.-592 с.

66. Варгафтик Н.Б. Справочник по теплофизическим свойствам газов и жидкостей. М.: Физматгиз, 1963. - 708 с.

67. Ageer A.N., Kiselev A.V., Yashin Ya.I. Regularities in the retention of isomeric aromatic hydrocarbons in liquid chromatography // J.Chromatogr.-1981.- V. 14. N 11. - P. 638 -640.

68. Muracami F. Retention behaviour of benzene derivatives in bonded ' reversed-phase columns// J.Chromatogr. 1979. - V. 178. - N 2. - P. 393-399.

69. Schabron J.F., Hurtubise R.J., Silver H.F. Separation of hydroaromatic and polycyclic aromatics and determination of tetralin and naphtalene in coal-derived solvents // Anal.Chem. 1977. - V. 49. - N 14. - P. 2253 - 2260.

70. Smith R.M. Reversed-phase liquid chromatography of isomeric alkylbenzenes // J.Chromatogr. 1981. - V. 209. - N 1. - P. 1- 6.

71. Hall L.H., Kier L.B., Murray W.J. Molecular connectivity // J. Pharmaceutical Sci. 1975. - V. 64. - N 12. - P. 1974 - 1977.

72. Коренман Я.И. Экстракция фенолов. Воронеж: Изд-во ВГУ, 1974. -230 с.

73. Иогансен А.В. Интенсивности в инфракрасных спектрах и• межмолекулярные взаимодействия в жидкостях // Сборник "Прикладная спектроскопия" Минск: институт физики АН БССР,• 1974.-С. 166- 194.

74. Сергеев Н.М. Спектроскопия ЯМР. М.: Изд-во Московского ун-та, 1983.-354 с.8'6.Киселев A.B., Лыгин В.И. Инфракрасные спектры поверхностных соединений и адсорбированных веществ. М.: Наука, 1972. - 459 с.

75. Киселев А.В., Пошкус Д.П., Яшин Я.И. Молекулярные основы адсорбционной хроматографии. М.: Химия, 1986. - 269 с.

76. Киселев А.В., Яшин Я.И. Адсорбционная газовая и жидкостная хроматография. М.: Химия, 1986. - 269 с.

77. Луговик Б.А. Жидкостная" хроматография под высоким давлением. -Томск: Изд-во Томского университета, 1978. 142 с.

78. Перри С., Амос Р., Брюер П. Практическое руководство по жид' костной хроматографии. М.: Мир, 1974. - 260 с.

79. Киркленд Дж. Современное состояние жидкостной хроматографии. -- М.: Мир, 1974.-325 с.

80. Рудаков О.Б., Селеменев В.Ф. Физико-химические системы сорбат -сорбент элюент в жидкостной хроматографии. - Воронеж: ВГУ, 2003. - 300 с.

81. Рудаков О.Б., Полянский К.К., Сливкин А.И. Практические аспекты жидкостной хроматографии углеводов // Сборник «Теория и практика сорбционных процессов» Воронеж: ВГУ, 1999. -№25. - С. 201-208.

82. Андерсон А.А. Жидкостная хроматография аминосоединений. Рига: Зинатне, 1984.-295 с.

83. Сакодынский К.И., Бражников В.В., Волков С.А., Зельвенский В.Ю., Ганкина B.C., Шатц В.Д. Аналитическая хроматография. М.: Химия, 1993.- 464 с.

84. Kurganov A. Effect of Solute Association on the Apperent Adsorption Isotherm. A Model of the Separation of Non-Racemic Mixstures of Enantiomers in Achiral Chromatographic Systems // Chromatographia. -1996. V.43.-N2-P. 17-24.

85. Герасимова Я.И. Курс физической химии. М.: Химия, 1964. - 624 с.

86. Даванков В.А. Хроматография. Основные понятия. Терминология //Сборник научно-нормативной терминологии М: РАН, 1997. -Выпуск 114 -48 с.

87. Осипов О.А., Минкин В.И., Гарновский А.Д. Справочник по дипольным моментам. М.: Высшая школа, 1971. - 416 с.

88. Райтачак Г. Молекулярные взаимодействия. М.: Мир, 1984. - 598 с.

89. Добычина Д.П. Физическая и коллоидная химия. М.: Просвещение, 1986. -458 с.

90. Сычев С.Н.,Ерилов С.П., Никитин Ю.С. Применение метода главных компонент в жидкостной хроматографии замещенных бензойных кислот // Ж.физ. химии. 1983. - Т.59. - № 2. - С. 346 - 350.

91. С.Н.Сычев. Методы совершенствования хроматографических систем и механизмы удерживания в ВЭЖХ. Орел: ОрелГТУ, 2000. - 212 с.

92. Сычев С.Н., Гаврилина В.А. Определение удерживаемого объема несорбируемого компонента VM в нормально-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (НФ ВЭЖХ) // Сорбционные и хроматографические процессы», 2004. Т.4 - Вып. 1 -С.35 - 39.

93. Сычев С.Н. Применение метода главных компонент (факторного анализа) для анализа хроматографических данных в ВЭЖХ // Сорбционные и хроматографические процессы. 2004. - Т.4 - Вып.2• -С. 134- 142.

94. Лоули Д., Максвелл А. Факторный анализ как статистический метод. М.: Мир, 1967. - 144 с.

95. Иберла К. Факторный анализ. М.: Статистика, 1980.-398 с.

96. Сычев С.Н. Факторный анализ констант Гаммета Тафта. -Дипломная работа - М.; МГУ, 1978. - 37 с.

97. Nieawdorp G.H.E. An Improved Procedure for The Description of Sabstituent Effects on Equilibrium and Rate Constants, based on Factor

98. Analysis of the whole Body of Appropriate Data. //J.Chem.Soc. 1979. - N 5-P. 537-540.

99. Сычев C.H., Ерилов С.П., Никитин Ю.С. Устойчивость линейно-независимых факторов, описывающих экспериментальные данные по жидкостной хроматографии монозамещенных бензойных кислот // Ж. физ. химии. 1983.-Т. 59.-№ З.-С. 661 - 663.

100. Сычев С.Н., Сычев К.С., Гаврилина В.А. Выскоэффективная жидкостная хроматография на микроколоночных жидкостных хроматографах серии «Милихром». Орел: ОрелГТУ, 2002. - 135 с.

101. Пальм В.А. Основы количественной теории органических реакций. -Л.: Химия, 1977.-359 с.

102. Katritzky A.R., Tomson R.D. The Mesomeric and Inductive Effects// Chem. Educ. 1971. - V. 48. - N 7. - P. 427 - 431.

103. Сычев C.H., Сычев K.C., Ланин C.H. Выявление характера межмолекулярных взаимодействий однозамещенных алифатических соединений методом главных компонент // Вестник МГУ. Сер.2. Химия.- 2000. -Т.41. № 1.- С. 28-31.

104. Павлов Б.А., Терентьев А.П. Курс органической химии. М.: Химия, 1960.-572 с.

105. Физер А., Физер М. Органическая химия. М.: Химия, 1969. - 688 с.

106. J.Chromatogr. A. — 2003. — V.987. — P. 67 75.

107. Сычев C.H. Влияние ассоциации полярной добавки в элюенте на удерживание замещенных фенолов в НФ ВЭЖХ // Сорбционные и хроматографические процессы». 2004. - Т.4 - Вып.2 - С.144-151.

108. Сычев С.Н. Применение ВЭЖХ для изучения комплексов сводородной связью типа «полярный адсорбат — полярная добавка в элюенте» // Тезисы Всесоюзного совещания по микроколоноч -ной жидкостной хроматографии. Орел, 1981.-С.19.

109. Сычев С.Н., Гаврилина В.А. Механизмы удерживания замещенных бензойных кислот и фенолов на адсорбционно модифицированном силикагеле У/ Сорбционные и хроматографические процессы. - 2004. -Т.4 - Вып.4 - С.91 - 112.

110. Герасимова Я.И. Курс физической химии. М.: Химия, 1964. - 624 с.

111. Куплетская Н.Б., Баранова Т.А., Сычев С.Н. Взаимодействие борофторида п-нитробензолдиазония с п-нитробензолдиазотатом натрия в ацетонитриле и ДМСО // Ж.орг.химии. 1986. - T.XXII. -С.542-547.

112. Сычёв С.Н., Сычёв К.С. Исследование уширения пика бензойнойIкислоты в обращённо-фазовой ВЭЖХ // Тезисы докладов на Всероссийском симпозиуме по химии поверхности, адсорбции и хроматографии. М.: РАН., 1999.-С. 123.

113. Кольцова Э.М., Гордеев JI.C. Методы синергетики в химии и химической технологии. М.: Химия, 1999. - 253 с.

114. Автоматизированная система обработки информации хроматографической. Руководство оператора. Орел: ЗАО «Научприбор», 1999.- 38 с.

115. Stout R.W., DeStefano J.J., Snyder L.R. High Performance Liquid Chromatographic Column Efficiency as a Function of Particle Composition and Geometry, and Capacity Factor // J. Chromatogr. 1983. - V.282. -P.263 - 265.

116. Stadalius M.A., Gold H.S., and Snyder L.R. Optimisation Model for the Gradient Elution Separation of Peptide Mixtures by Reversed-Phase HPLC. Verification of Retention Relationships// J. Chromatogr. 1984. - V.296. -P.31 -37.

117. Snyder L.R., Dolan J.W., and Rigney M.P. Fast Method Development for Reversed-Phase HPLC. The Use of Computer Simulations// LC and GC: Magazine of Liquid and Gas Chromatography. 1986. - №4. - P.921-927.

118. Snyder L.R.and Antle P.E. Selecting Column Conditions for Reversed-Phase HPLC Separation.il. Column Configurations and Column Evaluation // LC Magazine. 1985. - №3. p.98 - 103.

119. ГЗЗ. Snyder L.R. and Dolan J.W. HPLC Computer Simulation. Optimizing Column Conditions // Am.Lab. 1986. -V. 18. - №8. - p.37 - 44.

120. Snyder L.R.and Quarry M.A. Computer Simulation in HPLC Method Development. Reducing the Error of Predicted Retention Times // J. Liq. Chromatogr.- 1987. V.10. - P. 1789 - 1793.

121. Stadalius M.A.,Ghrist B.F.D.,and Snyder L.R. Predicting Bandwidth in the HPLC Separation of Large Biomolecules. A General Model for the Four Common HPLC Methods // J. Chromatogr. 1987. - V.387. - P.21- 23.

122. Ghrist B.F.D., Snyder L.R.Desighn of Optimized High-Performance Liquid Chromatographic Gradients for the Separation of Either Small or Large Molecules. III. An Overall Strategy and Its Application to Several

123. Examples// J. Chromatogr. 1988. - V.459 - P.43 - 49.

124. Dolan J.W., Lommen D.C., and Snyder L.R. DryLab Computer Simulation for HPLC Method Development.il.Gradient Elution // J. Chromatogr. 1989. - V.485. -P.91 - 99.

125. Lancmair E.P., Wegscheider W., Gfeller J.C., Diordjevic N.M., Schreiber B. Computer-Aided Optimization of High Performance Liquid Chromatography in the Pharmaseutical Industry // J. Chromatogr. 1989. -V.485.-P.183- 191.

126. Dolan J.W., Snyder L.R. Integration of Computer-Aided Method Development Techniques in LC // J. Chromatogr.Sci. 1990. - V.28. -P.379 - 483.

127. LC Resourses Inc.: Innovative resourses for chromatography (HPLC and LC-MS).

128. Сычев С.Н., Сычев К.С. Универсальные элюенты в нормально-фазовой и обращенно-фазовой ВЭЖХ // Тезисы доклада на Международном Форуме «Аналитика и аналитики». Воронеж: ВГУ, 2003.- С. 172.

129. Сычев С.Н., Сычев К.С. Универсальные элюенты в нормально-фазовой и обращенно-фазовой ВЭЖХ // Известия ОрелГТУ. Естественные науки. 2003. — № 1 - 2. - С.98 - 103.

130. Аксенова Н.С., Криволапое С.С. Использование жидкостной хроматографии в анализе продуктов синтеза 5(6)-амино-2(п-аминофенил)-бензимидазола // Сборник "Аналитический контроль получения мономеров" М.: НИИТЭХИМ, 1981. - С. 69-72.

131. Иванова Т.Н., Полякова Е.Д., Сычев С.Н. Биологически-активная добавка "Арфазетин" в профилактическом питании //Хранение и переработка с/х сырья. 1997. - № 4. - С.22 - 23.

132. Емельянов А.А. Корячкина С.Я Сатцаева И.К., Сычев С.Н., Гаврилина В.А. Принцип нормирования хмелевого сырья в его водных растворах при приготовлении хмелевых заквасок// Известия ВУЗов. Пищевая технология. 2004. - № 4. - С.41 - 42.

133. Сычев С.Н. Совершенствование теории нормально-фазовой ( НФ ВЭЖХ) и обращенно-фазовой (ОФ ВЭЖХ) высокоэффективной жидкостной хроматографии // Контроль. Диагностика. 2005. - № 2.

134. Сычев С.Н., Сычев К.С. Универсальные элюенты в нормально-фазовой и обращенно-фазовой ВЭЖХ// Сорбционные и хроматографические процессы. 2003. - Т 3. — Вып. 4. - С.23 - 25.

135. Г52. Сычев К.С., Сычев С.Н.Универсальные элюенты в обращенно-фазовой ВЭЖХ //Заводская лаборатория. Диагностика материалов.2003.-Т.69.-№ 10.-С.16-17.

136. Сычев С.Н., Гаврилина В.А., Музолевская Р.С., Мальцева О.И. Хроматографическая система для скринингового анализа в ОФ ВЭЖХ // Сорбционные и хроматографические процессы. 2004. - Т.4 - Вып.41. С.91 - 112.

137. Сафронов О.Н., Сычев С.Н. Колонки аналитические хроматографические. Технические условия. Орел: ПО «Научприбор», 1986.

138. Г56. Сычев С.Н. Колонки аналитические хроматографические. Инструкция по набивке и проверке. Орел: ПО «Научприбор», 1986.

139. Г57. Стыскин Е.Л., Ициксон Л.Б., Брауда Е.В. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография. М.: Химия, 1986. -288 с.

140. Особенности эксплуатации ВЭЖХ колонок. Методическое пособие. М.: Аквилон, 2002. - 37 с.

141. Martin A.J.P., Synge R.L.M. A new form of chomatography employing two liquid phases. 1. A theory of chromatography. 2. Application to the microdeters-mintion of the higher monoamino acids in proteins // Biochem. J. 1941. - V. 35. - P. 1358 - 1368.

142. Любезников О.А., Костылев И.Г. Установка для заполнения аналитических высокоэффективных хроматографических колонок ГЗК-01// Тезисы 3-го Всесоюзного симпозиума «Молекулярная жидкостная хроматография». Рига: ИФХ АН СССР, 1984. - С. 197.

143. Сафронов О.Н., Сычев .С.Н., Панкратова Н.И., Терехова Л.И., Соснина М.В. Хроматографы жидкостные микроколоночные «Милихром-4» Технические условия. ТУ25-7405.0008-89. Орел: ПО«Научприбор», 1989.

144. Сафронов О.Н., Сычев С.Н., Панкратова Н.И., Терехова Л.И., Соснина М.В., Толкунова Н.Н. Хроматографы жидкостные микроколоночные «Милихром-5». Технические условия ТУ25-7405.0008-90. Орел: ПО «Научприбор», 1990.

145. Сычев С.Н., Сычев К.С., Гаврилина В.А. Выскоэффективная жидкостная хроматография на микро колоночных жидкостных хроматографах серии «Милихром». Орел: ОрелГТУ, 2002. - 135 с.

146. Барам Г.И., Болванов Ю.А., Грачев М.А. и др. Микроколоночная жидкостная хроматография с многоволновой детекцией. Микроколоночный жидкостной хроматограф «Обь-4». Новосибирск:- ИЯФ СО АН СССР, 1983. -38 с.

147. Сафронов О.Н., Панкратова Н.И., Терехова Л.И. Хроматограф микроколоночный жидкостной «Милихром». Технические условия ТУ25-7405.0008-83. Орел: ПО «Научприбор», 1983.

148. Анализаторы газов и жидкостей хроматографические. ГОСТ 26703-85. М.: Госкомитет СССР по стандартам, 1985. - 12 с.

149. Сафронов О.Н., Сычев С.Н., Панкратова Н.И., Терехова Л.И.,Соснина М.В. Хроматографы жидкостные микроколоночные «Милихром-1». Инструкция по поверке. Орел: ПО «Научприбор», 1986.

150. Сафронов О.Н., Сычев С.Н., Панкратова Н.И., Терехова Л.И., Соснина М.В. Хроматограф жидкостной микроколоночный «Милихром-2». Инструкция по поверке. Орел: ПО «Научприбор»,1988.

151. Сафронов О.Н., Сычев С.Н., Панкратова Н.И., Терехова Л.И.,Соснина М.В. Хроматографы жидкостные микроколоночные «Милихром-4». Инструкция по поверке. — Орел: ПО «Научприбор»,1990.

152. Сафронов О.Н., Сычев С.Н., Панкратова Н.И., Терехова Л.И.,Соснина М.В. Хроматографы жидкостные микроколоночные «Милихром-5». Инструкция по поверке. Орел: ПО «Научприбор»,1991.

153. Иванов Н.Н., Прасов М.Т., Сафронов О.Н., Сычев С.Н. Микроколоночный жидкостной хроматограф «Милихром». Тезисы 3-го Всесоюзного симпозиума «Молекулярная жидкостная хроматография» - Рига: ИФХ АН СССР, 1984. - С. 114.

154. Вейссерик Ю.А., Кальюранд Э.Т. Дозаторы пробы для жидкостной хроматографии по принципу капиллярной дозировки // Тезисы 3-го Всесоюзного симпозиума «Молекулярная жидкостная хроматография». Рига: ИФХ АН СССР, 1984. - С.206.

155. Болванов Ю.А. Блок управления микропроцессорный. Техническое описание. Орел: ПО «Научприбор», 1988.

156. Любезников О.А., Бялый А.Л., Коротков О.Н. и др. Опыт эксплуатации хроматографа ХЖ 1306 // Тезисы 3-го Всесоюзногосимпозиума «Молекулярная жидкостная хроматография» Рига: ИФХ АН СССР, 1984.-С.202.

157. Брытов И.А., Воронцов A.M. и др. Жидкостные хроматографы «Охта» // Тезисы 4-го Всесоюзного симпозиума «Молекулярная жидкостная хроматография» — Алма-Ата: ИФХ АН СССР, 1987.1. С.168.

158. Гилинский М.А., Кумарев В.П. Аппаратура для микроколоночной ВЭЖХ с электрохимической детекцией // Тезисы 3-го Всесоюзного симпозиума «Молекулярная жидкостная хроматография» Рига: 1984. ИФХ АН СССР, -С.203.

159. Камаев А.В. Применение жидкостной хроматографии при исследовании объектов криминалистической экспертизы.

160. Методические рекомендации. М.: МВД РФ, 1994. - 20 с.

161. Еремин С.К., Изотов Б.Н., Веселовская Н.Б. Анализ наркотических средств. М.: Мысль, 1993. - 250 с.

162. Методические рекомендации по анализу наркотических веществ. Пособие для национальных лабораторий. ВОЗ ООН, 1986. - 164 с.

163. Сычев С.Н., Гаврилина В.А. Определение фальсифицированных образцов растворимого кофе на рынке г.Иваново // Известия ОрелГТУ. Естественные науки. 2003. - № 1- 2. - С.81 - 84.

164. Сычев С.Н. Зурикашвили З.В., Бувин. Сравнительный анализ образцов кофе и коньяков методом ВЭЖХ // Сборник «Качество жизни населения, деловая активность и конкурентноспособность российскихпредприятий» Орел: ОрелГТУ, 1998. - С. 186 - 188.

165. Методические указания по определению сахарина, аспартама, кофеина и бензоата натрия в безалкагольных напитках методом ВЭЖХ. М.: Госстандарт РФ, 1996. - 14 с.

166. Сатцаева И.К., Гаврилина В.А, Корячкина С.Я., Сычев С.Н. Применение ВЭЖХ для исследования ' хмелевых заквасок, используемых для изготовления хлеба // Хранение и переработка сельхозсырья, 2003. № 10. - С. 34 - 35.

167. Г90. Ежов. И.С. Хмель и его использование.' Киев: Урожай, 1990 - 336 с.

168. Миттер М. Изменения химических характеристик хмеля Теттнангер в процессе приготовления пива // Мир пива, 1995. № 1. - С.27 - 38.

169. Сычев С.Н. Методика количественного химического анализа воздуха рабочей зоны на содержание 3,4-бензпирена. М.: ВНИИМС, 1994. -15 с.

170. Сычев С.Н., Гаврилина В.А., Бутырин А.Н. Разработка экспресс-методов определения фальсификации бензинов, дизельного топлива и моторных масел с помощью ВЭЖХ // Сорбционные и хроматографические процессы» -2003. -Т.З. Вып.5. - С.35 - 39.

171. Сычев С.Н., Гаврилина В.А., Бутырин А.Н., Юрова С.А. Обнаружение присадок в отработанных и свежих моторных маслах // Известия ОрелГТУ. Естественные науки. 2003. - № 1-2 - С.93 - 97.

172. Школьников В.М., Кузнецов Н.А. Масла, вырабатываемые предпрятиями Миннефтехимпрома СССР. Каталог-справочник. М.: Химия, 1986.-344 с.

173. Золоторевская И.А., Илькова Э.Л., Киселева В.А. Ассортимент и рецептурный состав горюче-смазочных материалов для автотранспорта. М.: Химия, 1982. - 378 с.

174. Бутрименко Г.Г., Галяшин В.Н., Золоторевская И.А., Карлин И.П. Комплексное криминалистическое исследование моторных масел для автотранспортных средств. М.: МВД СССР, 1989. - 69 с.

175. Сычев С.Н., Гаврилина В.А., Мальцева О.И. Экспресс-анализ вина // Напитки. 2004. - № 3 - С. 94 - 97.

176. Сычев С.Н., Сычев К.С. Опредение афлатоксина Bt в продуктах питания методом НФ ВЭЖХ с применением жидкостных микроколоночных хроматографов серии «Милихром» //Заводская лаборатория. Диагностика материалов. 2002. - Т.68. - № 10. - С. 16 -17.

177. Методические указания по обнаружению, идентификации и определению содержания дезоксиниваленола (вомитоксина) и зеараленона в зерне и зернопродуктах. М.: Минздрав СССР, 1990.13 с.

178. Скурихин В.Н., Шабаев С.В. Методы анализа витаминов А, Е, Д и каротина в кормах, биологических объектах и продуктах животноводства. М.; Химия, 1996. - 115 с.

179. Оценка качества кормов, органов, тканей, яиц и мяса птицы. Методическое руководство для зоотехнических лабораторий. — Сергиев Посад: ВНИИТИП, 1998. 115 с.списокконструкторских документов, разработанных при участии или под руководством Сычева С.Н.

180. Хроматографы жидкостные микроколоночные "Милихром-1". Технические условия.ТУ25-7405.007-86 Орел: ПО "Научприбор", 1986. - 38 с.

181. Хроматографы жидкостные микроколоночные "Милихром-1". Инструкция по поверке.АПУ2.840.002Д10 Орел: ПО "Научприбор", 1986. - 38 с.

182. Хроматограф жидкостной микроколоночный "Милихром-1". Руководство по эксплуатации.АПУ2.840.002РЭ -Орел: ПО "Научприбор", 1986. 36 с.

183. Хроматограф жидкостной микроколоночный "Милихром-2". Технические условия.ТУ25-7405.0008-88 Орел: ПО "Научприбор", 1988. - 36 с.

184. Хроматограф жидкостной микроколоночный "Милихром-2". Инструкция по поверке.АПУ2.840.003Д10- Орел: ПО "Научприбор", 1988. 36 с.

185. Хроматограф жидкостной микроколоночный "Милихром-2". Руководство по эксплуатации.АПУ2.840,ООЗРЭ-Орел: ПО "Научприбор", 1988.-36 с.

186. Хроматографы жидкостные микроколоночные "Милихром-4". Технические условия.ТУ25-7405.009-89 Орел: ПО "Научприбор", 1990. - 39 с.

187. Хроматограф жидкостной микроколоночный "Милихром-4". Инструкция по поверке.АПУ2.840.004Д 10. Орел: ПО "Научприбор", 1990. - 36 с.

188. Хроматограф жидкостной микроколоночный "Милихром-4". Руководство по эксплуатации.АПУ2.840.004РЭ-Орел: ПО "Научприбор", 1990.-36 с.

189. Хроматограф жидкостной микроколоночный "Милихром-5". Технические условия.ТУ25-7405.0010-90. Орел: ПО "Научприбор", 1991. - 36 с.

190. Хроматограф жидкостной микроколоночный "Милихром-5". Инструкция по поверке.АПУ2.840.005Д 10. Орел: ПО "Научприбор", 1991. - 36 с.

191. Хроматограф жидкостной микроколоночный "Милихром-5". Руководство по эксплуатации.АПУ2.840.005РЭ.-Орел: ПО "Научприбор", 1991.-36 с.

192. Колонки аналитические хроматографические . Технические условия. ТУ25-7405.003-86. Орел: ПО «Научприбор», 1986. - 34 с.1. СПРАВКА

193. Справка выдана для предоставления в ВАК Российской Федерации.• Таблицы величин lg а монозамещенных бензойных кислот

194. Адсорбент силикагель Силасорб 600

195. Элюент гексан-уксусная к-та (99:1) Элюент гексан-уксусная к-та (97:3)

196. Зам. 0- м- п- Зам. о- м- п

197. Н- пО.ОО 0.00 0.00 Н- 0.00 0.00 0.00

198. СН3- -0.1543 -0.0685 -0.0343 СН3- -0.1312 -0.0778 -0.057

199. С1- 0.3145 0.0770 0.0748 С1- 0.3060 0.0366 0.020

200. Вг- 0.3401 0.0846 0.0671 Вг- 0.3198 0.0366 0.020

201. ОСН3- 1.1477 0.2497 0.2615 ОСН3 ■ 1.0993 0.2639 0.2971no2- 1.4284 ~ 0.8855 0.8021 no2- 1.4053 0.8611 0.7996

202. Элюент гексан-уксусная к-та (95:5) Элюент гексан-уксусная к-та (93:7)

203. Зам. 0- м- п- Зам. 0- м- п

204. Н- 0.00 0.00 0.00 Н- 0.00 0.00 0.00

205. СН3- -0.1746 -0.0996 -0.0742 СН3- -0.2336 -0.1624 -0.1487

206. С1- 0.3111 0.0265 0.00 С1- 0.2723 -0.0716 -0.0969

207. Вг- 0.3179 0.0265 0.0132 Вг- 0.2723 -0.0716 -0.0969

208. ОСНз- 1.0917 0.2709 0.3162 ОСНз ■ 1.0652 0.2273 0.2760no2- 1.4143 0.8680 0.8025 n02- 1.3863 0.8345 0.7694

209. Элюент гексан- пропионовая к-та Элюент гексан-пропионовая к-та99:1) (97:3)

210. Зам. 0- м- п- Зам. о- м- п

211. Н- 0.00 0.00 0.00 Н- 0.00 0.00 0.00

212. СНз- -0.098 -0.0191 -0.0017 СНз- -0.0778 -0.0339 -0.0114

213. С1- 0.3770 0.0976 0.0906 С1- 0.3566 0.0958 0.0755

214. Вг- 0.4203 0.1133 0.1065 Вг- 0.3807 0.0976 0.0867

215. ОСНз- 1.330 0.3177 0.3369 ОСНз ■ 1.0652 0.2273 0.2760no2- 1.5769 0.9966 0.9002 no2- 1.4627 0.8556 0.7807

216. Элюент гексан-пропионовая к-та Элюент гексан-пропионовая к-та95:5) (93:7)

217. Зам. о- м- п- Зам. о- м- п

218. Н- 0.00 0.00 0.00 Н- 0.00 0.00 0.00

219. СН3- -0.1135 -0.0595 -0.0467 СН3- -0.0778 -0.0339 -0.0114

220. С1- 0.2940 0.0614 0.0434 С1- 0.3566 0.0958 0.0755

221. Вг- 0.3179 0.0730 0.0584 Вг- 0.3807 0.0976 0.0867

222. ОСНз-J 1.2531 0.2519 0.2891 ОСН3 • 1.0652 0.2273 0.2760no2- 1.3459 0.7696 0.6872 no2- 1.3189 0.7690 0.6852

223. Элюент гексан-пропионовая к-та Элюент гексан-изомасляная к-та90:10) (99:1)

224. Зам. 0- м- п- Зам. 0- м- п

225. Н- 0.00 0.00 0.00 Н- 0.00 0.00 0.00

226. СНз- -0.1062 -0.0315 0.00 СНз- -0.1273 •0.0545 -0.0339

227. С1- 0.2949 0.0406 0.0406 С1- 0.4216 0.0719 0.0607

228. Вг- 0.3247 0.0569 0.0569 Вг- 0.4672 0.0855 0.0817

229. ОСНз- 1.2151 0.2579 0.3160 ОСНз ■ 1.4523 0.3694 0.3831no2- 1.2942 0.7564 0.6753 no2- 1.7519 0.9956 0.9240

230. Элюент гексан-изомасляная к-та Элюент гексан-изомасляная к-та97:3) (95:5)

231. Зам. 0- м- п- Зам. 0- м- п

232. Н- 0.00 0.00 0.00 Н- 0.00 0.00 0.00сн3- -0.1180 -0.0434 -0.0367 сн3- -0.098 -0.0685 -0.0410

233. С1- 0.4229 0.0860 0.1058 С1- 0.5743 0.1439 0.1149

234. Вг- 0.4695 0.1222 0.1058 Вг- 0.6383 0.1544 0.1335

235. ОСН31 1.5868 0.4109 0.4191 ОСНз ■ 1.4000 0.2785 0.2986no2- 1.9018 1.0216 0.9189 no2- 1.9698 1.0230 0.9498

236. Элюент гексан-изомасляная к-та Элюент гексан-изомасляная к-та93:7) (90:10)

237. Зам. 0- м- п- Зам. 0- м- п

238. Н- 0.00 0.00 0.00 Н- 0.00 0.00 0.00

239. СНз- -0.1203 -0.066 -0.0531 СН3- -0.098 -0.0685 -0.0410

240. С1- 0.4771 0.2230 0.0996 С1- 0.5743 0.1439 0.1149

241. Вг- 0.5392 0.1332 0.1284 Вг- 0.6383 0.1544 0.1335och3-J 1.4335 0.3177 0.3257 ОСН3 • 1.4000 0.2785 0.2986no2- 2.0162 1.0410 0.9592 no2- 2.1565 1.0697 0.9707