автореферат диссертации по технологии, машинам и оборудованию лесозаготовок, лесного хозяйства, деревопереработки и химической переработки биомассы дерева, 05.21.03, диссертация на тему:Низкомолекулярные фенольные соединения древесной зелени ели европейской Picea abies (L. ) Karst

ВВЕДЕНИЕ.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Общие сведения о ели европейской и фенольных соединениях.

1.2. Биосинтез фенольных соединений.

1.3. Фенольные компоненты биомассы ели европейской.

1.3.1. Фенолокислоты и их производные.

1.3.2. Кумарины и ацетофеноны.

1.3.3. Лигнаны и стильбены.

1.3.4. Флавоноиды.

1.4. Функции и биологическая активность фенольных соединений.

1.5. Выделение и идентификация Л^^ЪлШъТх Соединений.

1.6. Технологические процессы переработки ДЗ.

2. МЕТОДИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ.:.

2.1. Отбор образцов частей древесной зелени.,.

2.2. Методы определения основных характеристик исходных образцов частей ДЗ ели европейской.

2.3. Определение группового состава экстрактивных веществ

2.4. Определение оптимальных условий экстракции этилацетатом.

2.5. Методы фракционирования суммарного этилацетатного экстракта и выделение индивидуальных соединений.

2.6. Химические методы анализа выделенных соединений.

2.7. Инструментальные методы анализа.

3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

3.1. Общая характеристика исходных образцов древесной зелени ели европейской.

3.2. Групповой состав экстрактивных веществ, растворимых в изопро-паноле.

3.3. Выбор оптимальных условий процесса жидкостной экстракции веществ, растворимых в этилацетате.

3.3.1. Определение зависимости выхода экстрактивных веществ в этилацетат от времени экстрагирования и температуры.

3.3.2. Определение влияния модуля процесса на коэффициент распределения экстрактивных веществ.

3.3.3. Определение зависимости выхода экстрактивныхвеществ от числа ступеней экстракции.

3.4. Состав суммарного этилацетатного экстракта хвои и побегов ели европейской.

3.4.1. Разделение суммарного этилацетатного экстракта.

3.4.2. Состав соединений этилацетатного экстракта, элюируемых с полиамида водой.

3.4.3. Состав соединений этилацетатной фракции, элюируемых с полиамида этанолом.

3.5. Возможные направления биосинтеза фенольных соединений в ДЗ ели европейской.

4. СЕЗОННАЯ ДИНАМИКА НАКОПЛЕНИЯ И РАСХОДОВАНИЯ ВЕЩЕСТВ, РАСТВОРИМЫХ В "ПОЛЯРНЫХ" ЭКСТР АГЕНТАХ.

4.1. Динамика расходования и накопления отдельных групп соединений изопропанольного экстракта.

4.2. Динамика индивидуальных соединений, переходящих в этил ацетатный экстракт.

5. БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ДЗ ЕЛИ ЕВРОПЕЙСКОЙ.

5.1. Изучение фунгицидной активности фецольных соединений.

Постоянное возобновление в процессе фотосинтеза является одним из главных преимуществ растительной биомассы перед невозобновляемыми источниками органического сырья в аспекте их будущего использования. Необходим комплексный подход к использованию растительного сырья, что делает все более значимым развитие лесобиохимического направления, целью которого является использование биологически активных веществ (БAB) древесной зелени и коры, прежде всего, хвойных растений.

В настоящее время древесная зелень сосны обыкновенной (Pinus silvestris L ), пихты сибирской (Abies sibirica) и ели европейской (Picea abies (L.) Karst) является основным сырьем для переработки в лесохимических цехах для получения Б AB. Важно исследовать пути более полной переработки древесной зелени всех этих хвойных пород, но для ели эта проблема стоит более остро.

Известно, что из древесной зелени сосны извлекается петролейным эфиром около 50% от возможных эктрактивных веществ, в свою очередь из древесной зелени пихты примерно 25%, что соответственно почти в три и в два раза выше, чем из ели. Около 80% экстрактивных веществ ели переходит в "полярные" экстрагенты, в то время как в сосне в эти экстракты переходят менее 50% соединений [1]. Все это делает переработку ДЗ ели менее конкурентноспособной по сравнению с ДЗ других хвойных пород.

С другой стороны, в последнее время проводятся исследования в растительных источниках биологически активных соединений с антирадикальными и антиоксидантными свойствами. Наименее изученными являются ароматические соединения. Растительные полифенолы и их гликозидированные формы лежат в основе лекарственных средств, используемых при профилактике различных форм атеросклероза, укрепления капилляров сосудов, при лучевых и других поражениях организма в онкологии. Одним из источников таких соединений является, в частности, древесная зелень ели европейской, которая наиболее широко распространена в европейской части России.

Развитию новых направлений переработки ДЗ с использованием полярных растворителей и расширению области применения уже получаемого при существующей технологии - экстракта хвойного натурального - препятствует малая изученость состава полярных экстрактов.

В рамках изучения экстрактивных веществ, переходящих в полярные растворители, целью данной работы являлось установление качественного и количественного состава соединений этилацетатного экстракта хвои и побегов ели европейской Picea abies (L.) Karst, а также, исследование его биологической активности. Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

- разработать схемы анализа изопропанольного экстракта частей ДЗ ели европейской;

- выделить и установить строение индивидуальных соединений этилацетатной фракции изопропанольного экстракта;

- изучить сезонную динамику накопления и расходования отдельных групп изопропанольного экстракта и индивидуальных соединений этилацетатной фракции;

- определить медико-токсикологическую характеристику и биологическую активность основных групп и индивидуальных соединений;

- предложить на основании результатов исследования ^вариант принципиальной технологической схемы переработки ДЗ ели.

В первой части диссертации представлены литературные данные по изучению биосинтеза фенольных соединений, их классификации, исследованию химического состава и распространению полифенолов в различных частях дерева (хвойные породы, принадлежащие к семейству Pinaceae). Приведены методы выделения и идентификации фенольных соединений, а также некоторые данные об их биологической активности.

Кроме того, дан краткий обзор уже существующих технологий переработки

ДЗ.

Вторая часть диссертации посвящена методам, которые применяли в экспериментальной работе. Путем предварительного анализа эфирного экстракта и на основании литературных данных о его составе была разработана схема разделения этилацетатного экстракта на индивидуальные компоненты. Также были представлены их спектральные данные и некоторые физико-химические величины, полученные в ходе эксперимента. Во второй главе изложены основные характеристики приборов, используемых для извлечения и идентификации, как индивидуальных соединений, так и отдельных фракций, и условия проведения анализов.

В экспериментальной части приведены результаты исследования качественного и количественного состава фенольных соединений этил ацетатной фракции хвои и побегов ели европейской, а также результаты изучения параметров процесса экстракции изопропанольного экстракта этилацетатом. Определена динамика накопления и расходования как отдельных фракций экстрактивных веществ, так и индивидуальных соединений, изучена их биологическая активность и на этом основании предложены пути разработки принципиальной схемы использования отработанной древесной зелени.

В результате проведенных исследований примерно на 90% установлен качественный и количественный состав основных фенольных компонентов, растворимых в этилацетате. Состав фенольных соединений хвои и побегов несколько различается. Хвоя в отличие от побегов содержит гликозидированные флавоноиды и их ацилированные формы. В состав же экстрактивных веществ побегов преимущественно входят свободные флавоноиды, оксикоричные кислоты и лигнаны.

Однако есть и сходство в составе частей древесной зелени. Обращает на себя внимание, что доминирующими компонентами этилацетатной фракции как хвои, так и побегов являются гликозидированные стильбены: изоралонтин, астрингин и в меньшей степени пицеид. Их суммарное содержание колеблется в зависимости от времени года и составляет 50-70 % от этилацетатного экстракта (0.5-1.5% от сухого сырья).

Среди флавоноидных соединений преобладают две группы веществ: флаван-3-олы и флавонолы. Причем, все выделенные нами из хвои гликозиды флавонолов основаны на одном агликоне - кемпфероле.

Установлено строение соединения, неизвестного ранее в природе -ацетофенон-4-0-Р-В-(6'-ацетил)-глюкопиранозид. Впервые в побегах и хвое ели европейской нами были найдены эриодиктиол и кемпферол-3-0-р-(3"-ферулоил)-глюкопиранозид соответственно.

Определена динамика накопления и расходования как суммарных фракций, так и индивидуальных соединений. На основании данных этого исследования можно сказать, что содержание отдельных фракций и индивидуальных соединений значительно колеблется в зависимости от времени года. В частности, общее содержание веществ, переходящих в этил ацетат, в хвое достигает наибольшего значения в начале весны и осенний период. Динамика накопления соединений этилацетатного экстракта хвои практически противоположна зависимости, показанной для соединений, переходящих в диэтиловый эфир. Этот процесс может быть связан с синтезом гликозидированных форм фенольных компонентов и их транспортированием в стволовую часть дерева. В побегах, хотя и приблизительно сохраняются такие же закономерности в изменении содержания этилацетатной и диэтиловой фракции на протяжении годичного цикла, однако эти колебания незначительны. На основании наших исследований мы можем сказать, что содержание веществ, растворимых в этилацетате, в хвое ели европейской возрастает по высоте дерева, в то время, как их содержание в побегах увеличивается по высоте ствола до его середины, а ближе к вершине снижается. Изучение сезонной динамики индивидуальных соединений, входящих в состав этилацетатной фракции, показало, что суммарное содержание, например, гликозидов стильбенов достигает максимального значения зимой и составляет примерно 50% в хвое, 70% в побегах от этилацетатного экстракта, однако общий выход гликозидов стильбенов от сухого сырья наибольший осенью (1.5% для хвои и 1.3% для побегов). Содержание еще одного доминирующего компонента хвои -пицеина в течение года составляет 0.05-0.2% от сухой хвои и максимальное его количество наблюдается в конце осени начале зимы и в летний период. Всего была исследована сезонная динамика для 8 индивидуальных соединений.

Исследована биологическая активность фракции экстрактивных веществ, растворимых в этилацетате и индивидуального соединения -п-гидроксиацетофенона. Выявлено, что этилацетатная фракция и п-гидрокси-ацетофенон обладают высоким бактерицидным, фунгицидным и фунгистатическим действием, способствуют росту растений.

Автор благодарит за оказанную помощь в работе над диссертацией своего руководителя - доктора химических наук, профессора Рощина В.И.; всех сотрудников кафедры Химии древесины, физической и коллоидной химии и в первую очередь магистров Забегаеву И.В. и Григорьеву O.A., инженера Маркову Н.П., науч. сотр. Павлуцкую И.С., а также к.т.н., ст. науч. сотр. Белова Л.П., к.х.н., доцента Васильева A.B., к.т.н., доцента Юдкевича Ю.Д., сотрудников института гриппа АМН РФ, в том числе зав. лаборатории химико-терапевтических средств к.б.н. Платонова В.Г., сотрудников ВИЗРа.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

выводы

На основании результатов проведенных исследований можно сделать следующие выводы:

1. Разработаны схемы анализа экстрактивных веществ, растворимых в этилацетате, из изопропанольного экстракта ДЗ ели европейской. Изучен состав фенольных соединений, растворимых в этилацетате. Показано, что этилацетатный экстракт, в основном, состоит из фенольных соединений: флавоноидов, стильбенов, фенолокислот, производных ацетофенона и их гликозидов.

2. Установлено, что в хвое содержание экстрактивных веществ, растворимых в этилацетате, возрастает от комля к вершине, в то время как их содержание в побегах увеличивается до середины ствола, а затем снижается. В побегах содержание фенольных веществ, растворимых в диэтиловом эфире и этилацетате, отличается незначительно. В хвое выход этилацетатного экстракта в 1.5 раза выше, чем в побегах.

3. Определено, что этилацетатные фракции изопропанольного экстракта хвои и побегов состоят на 50% и 70%, соответственно, из гликозидов стильбенов. Содержание астрингина и изорапонтина в хвое примерно одинаковое и составляет в зависимости от времени года по 14-25% от экстракта, в то время как в побегах преобладает изорапонтин (26-41% от экстракта). Пицеид в хвое и побегах ели находится в значительно меньших количествах (2-5% от экстракта).

4. Выявлено, что состав фенольных соединений хвои и обесхвоенных побегов различается. Хвоя содержит гликозидированные флавоноиды и их ацилированные формы. В состав же экстрактивных веществ побегов, преимущественно, входят свободные флавоноиды, оксикоричные кислоты и лигнаны.

5. Изучено влияние времени года на накопление и расходование для отдельных групп соединений изопропанольного экстракта, восьми индивидуальных соединений этилацетатного экстракта в хвое и семи - в побегах. Установлено, что наивысший выход экстрактивных веществ, переходящих в изопропанол наблюдается в конце зимы - начале весны. Выход веществ, переходящих в диэтиловый эфир и этилацетат в зимние месяцы снижается. Самое высокое содержание экстрактивных веществ, переходящих в этилацетат, достигается осенью. Максимальное содержание стильбенов в хвое и побегах достигается в осенний период, а флавоноидных соединений - в летний.

6. Установлено строение соединений, неизвестных ранее в природе -ацетофенон-4-0-Р-0-(6'-ацетил)-глк)копиранозида и кемпферол-З-О-р-(3 "-ферулоил)-глюкопиранозида. Впервые из побегов ели европейской выделен эриодиктиол, а из хвои - креозол.

7. На основании данных по составу фенольных соединений предложена возможная схема их образования в различных частях ДЗ ели европейской. В побегах ели европейской биосинтез флавоноидов преимущественно протекает с участием кофеил-КоА (3',4'-дигидроксилирование кольца В), а в хвое с участием п-кумарил-КоА (4'-гидроксилирование кольца В). В биосинтезе стильбенов как в хвое, так и в побегах доминируют соединения, синтезируемые с помощью кофеил- и феруил-коферментов А.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Ранее были изучены экстрактивные вещества изопропанольного экстракта ДЗ ели, растворимые в петролейном и диэтиловом эфирах. Вещества, экстрагируемые петролейным эфиром (ПЭ), состоят, в основном, из углеводородов, терпеноидов и алифатических соединений (смоляные и высшие жирные кислоты, высшие жирные спирты, стерины и др.)[ 1|. По существующей технологии переработки ДЗ ели извлекаются именно эти вещества.

Вещества, экстрагируемые диэтиловым эфиром из изопропанольного экстракта (после его обработки ПЭ), состоят из простых фенольных соединений: фенолокислот, фенолоспиртов, производных ацетофенона, С-метилфлавоноидов [27]. Было установлено, что содержание п-гидроксиацетофенона составляет около 40% от веществ (0.2-0.8% от массы сухого сырья), растворимых в диэтиловом экстракте.

В результате проведенного нами исследования, выявили, что этилацетатный экстракт на 50-70% (0.5-1.7% от массы сухого сырья) состоит из гликозидов сгильбенов, а также флавоноидов (в свободной форме и в виде гликозидов) и фенолокислот.

На основании результатов изучения фракций веществ, растворимых в диэтиловом эфире и этилацетате можно сказать, что полученные компоненты, в основном, состоят из фенольных соединений и их гликозидов трех типов: ацетофеноны, стильбены, флавоноиды.

Кроме того, были проведены исследования по биологической активности (п.5.) этих соединений. Показано, что п-гидроксиацетофенон и суммарная фенольная фракция этилацетатного экстракта ели европейской обладают высокой вирулицидной активностью по отношению к вирусам гриппа А и В, бактерицидным, фунгицидным и фунгистатическим действием. Также известно [153], что стильбены проявляют антираковый и антилейкемийный эффект, а также способны ингибировать некоторые специфические ферменты, что делает их привлекательными для применения в кожно-оздоровительных косметических средствах.

Высокое содержание компонентов и их высокая биологическая активность дает возможность предположить, что они могут являться потенциальным продуктами при разработке новой технологической схемы переработки древесной зелени.

Известна [18] способность фенольных соединений легко реагировать с щелочным раствором (в частности ЫаОН) с образованием фенолятов, что дает возможность использовать это свойство для извлечения фенольных соединений из отработанной древесной зелени (ДЗ после экстракции бензином). Принципиальная технологическая схема переработки отработанной ДЗ представлена на рис.6.1.

Обработку щелочным раствором древесной зелени после бензиновой экстракции проводили в роторно-пульсационном аппарате. Известно, что одним из решающих факторов, влияющих на процесс массопередачи внутри сырья и в экстрагенте во время экстракции, являются гидродинамические условия. Кроме того, в роторно-пульсационном аппарате активный гидродинамический режим и эффективная турбулизация сочетаются с одновременным механическим воздействием на частицы дисперсной фазы (деформация, резание, перетирание частиц между движущимися поверхностями). В результате, возрастает поверхность взаимодействия фаз, сокращается путь и время диффузии извлекаемых веществ из внутренних объемов частиц и, следовательно, уменьшается время экстракции и увеличивается выход экстрагируемых веществ. Это, в свою очередь, приводит к снижению затрат на электроэнергию. подкисление 20%-ной Н2804 до рН^7

Водный нейтральный раствор экстрактивных веществ

Экстракция селективными экстрагентами

Отгонка -растворителя —►

Суммарный экстракт фенольных соединений

Рис.6.1. Принципиальная схема переработки отработанной ДЗ.

Далее полученную смесь разделили на жидкую и твердую фазу. Водно-щелочной раствор подкислили до нейтральной среды и провели экстракцию различными растворителями (изопропанол, толуол, этилацетат). Было показано, что при экстракции толуолом достигается хорошее разделение фаз, но низкий выход экстрактивных веществ; этил ацетатом - затруднено разделение фаз и регенерация растворителя.

В настоящее время проводятся исследования с использованием целого ряда других растворителей и их смесей, подбор условий экстракции и отработка технологической схемы. При использовании растворителей с различной извлекающей способностью можно добиться избирательного выхода экстрактивных веществ, относящихся к различным классам соединений.

Таким образом, выделение из отработанной древесной зелени - отхода существующей технологии, водных растворов экстрактивных веществ

166 полярных" групп соединений, их разделение на отдельные товарные продукты может увеличить использование биологически активных веществ и биомассы дерева, существенно расширить ассортимент продукции, а, следовательно, повысить эффективность переработки древесной зелени.

1. Рощин В.И. Состав, строение и биологическая активность терпеноидов ели, сосны и пихты. Дисс. док. хим. наук. Л., 1995. 431с.

2. Бобров Е.Г. Лесообразующие хвойные СССР. Л., 1978. 188с.

3. Тюкавкина Н.А., Лаптева К.И., Медведева С.А. Фенольные экстрактивные вещества рода Larix // Химия древесины. -1973. -№13. -С. 3-17.

4. Тюкавкина Н.А., Луцкий В.И., Бородина Н.М., Громова А.С. Фенольные экстрактивные вещества рода Pinus // Химия древесины. -1973. -№14. -С. 3-18

5. Slimestad R., Hostettmann К. Characterisation of phenolic constituents from juvenile and mature needles of Norway spruce by means of high performance liquid chromatography-mass spectrometry // Phytochemical analysis. 1996. -№7. - P. 42-48.

6. Lunderstadt J. Zur ekophusiologischen Bedeutung von Phenolen in Nadeln der Fichte (Picea abies (L) Karst) // Z. Pflanzennahr. und Bodenk. 1980. - Bd. -143-№4.-S. 412-421.

7. Wellendorf H., Kaufman U. Geographic Variation of Picea sitchensis Carr // Forest Tree Jmporov. 1997. -№11,- P.21.

8. Блажей А., Шутый Л. Фенольные соединения растительного происхождения. М.:Мир, 1977. - 260с.

9. Norin Т., Winnel В. Extractives from the bark of common spruce, Picea abies (L) Karst // Acta Chem. Scand.- 1972. Vol.26.- №6,- P.2289-2296

10. Fengel D., Wegener G. Wood: ultrastructure, chemistry reaction. Berlin, 1989. -616p.

11. Маргна У.В. Взаимосвязь биосинтеза флавоноидов с первичным метаболизмом растений // Итоги науки и техники ВИНИТИ АН СССР. -М. -1990.-Том 33.-144с.

12. Осипов В.И. Гидроароматические кислоты в жинедеятельности хвойных. Новосибирск. 1979. - 88с.ló.Luckner M. Secondary metabolism in microorganism, plants and animals. -Berlin, 1984. 576c.

13. Castro M.A., Gordalisa M., Corral J.M., Feliciano A.S. The Distribution of lignanoids in the order Coniferae // Phytochemistry. 1996. - Vol.41. - №4. -P. 995-1101.18.3апрометов M.H. Основы биохимии фенольных соединений. М.: Высшая школа, 1974. 212с.

14. Gottlieb O.R. Natural Products of Woody Plants I. Evolution of Natural Products (ed. John W.Rowe). Springer-Verlag. Berlin, New York et.al., 1996. -685p.

15. Grisebach H. In: The Biochemistry of Plant Phenolics (ed. G.F. Van Sumere., P.J. Lea). Oxford Clarendon Press. 1985. - C. 185-198.

16. Громова A.C., Луцкий В.И., Тюкавкина H.A. Фенолокислоты и их производные из коры некоторых видов пихты, ели и сосны // Химия древесины. 1978а. - №4. - С. 99-102.

17. Медведева С.А., Иванова С.З., Тюкавкина H.A. Фенолокислоты и их гликозиды в хвое некоторых видов Pinaceae // Химия древесины. 1977. -№3. - С. 93-95.

18. Шибанова Г.И., Громова A.C., Кислицина Л.А., Тюкавкина H.A. Фенольные соединения внутренней и внешней коры Picea obovata // Изв. СО АН СССР, Сер. химическая. 1977. - Вып. 5. - С. 153-155.

19. Weissmann G. Untersuchung der Rindenextrakte von Picea abies (L) Karst // Holz Roh- und Werkst. 1981. - Bd. 39. - №11. - S. 457-461.

20. Медведева C.A., Тюкавкина H.A., Иванова С.З. Гликозиды фенолокислот хвои Larix sibirica // Химия природных соединений. 1971. - №6. - С.844.

21. Pan Н., Lundgren L.N. Phenolics from inner bark of Pinus sylvestris // Phytochemistry. 1996. - Vol.42. - №4. - P. 1185-1189.

22. Kraus С., Spiteller G. Phenolic compouds from Agening Shots of Picea abies // Z. Naturforsh. 1997. - №52C. - P. 308-312.

23. Ekman R. Analysis of the nonvolatile extractives in Norway spruce sapwood andheartwood // Acta. Academiae Abonensis. Ser.B. 1979. - Vol. 39. -№4. -P. 1-20

24. Pan H., Lundgren L.N. Phenolic extractives from root bark of Picea abies // Phytochemisyry. 1995. - Vol. 39. - №6. - P. 1423-1428.

25. Васильев C.H., Рощин В.И., Артемкина H.A. Фенольные экстрактивные вещества видов рода Picea A. Dietr // Растительные ресурсы. 1999. -Вып. 2.-Т 35.-С. 15-31.

26. Riberbau-Gayon P. Plant Phenolics. Edinburg. Oliver and Boyd. - 1972. -106p.

27. Reberuo P. Plant Phenolics. New York. - 1979. - 254p.

28. Savidge R.A. Coniferin, a biochemical indicator of commitment to tracheiddifferentiation in conifers // Can. J. Bot. 1989. Vol.67. - P- 2663-2668.

29. Estenbauer H., Schwarzl E., Grill D. Ubelliferone in needles of Picea abies // Z. Naturforsch. 1980. -Bd.35. - P. 682-684.

30. Иванова С.З., Медведева С.А., Тюкавкина Н.А. Ацетофеноны хвоинекоторых видов семейства Pinaceae // Химия древесины. 1978. - №1. -С. 103-108.

31. Солодкий Ф.Т., Агранат A.JI. Обзорная статья по составу хвои ели // Использование живых элементов дерева. JI. - 1969. - С 8-12.

32. Richter С.М., Wild A. Phenolic Compounds in Needles of Norway Spruce Trees in Relation to Novel Forest Decline. II. Studies on Trees from Two Sites in Western Germany // Z. Naturforsch. 1994. - Bd.49. - P. 619-627.

33. Hoque E. Norway spruce die back: isolation, biologikal activity, measurement on concentration of p-hydroxyacetophenone and its O-glucoside (picein) by gas-chromatography // Eur. J. Forest. Pathol. 1984a. - Vol. 14. - №6. - P 377382.

34. Hoque E. Norway spruce die back: isolation of p-hydroxyacetophenone from diseased shoots of Picea abies // Phytochemistry. 19846. - Vol.23. - №4. - P 923-925.

35. Estenbauer H., Grill D., Beck G. Untersuchungen uber Phenole in Nadeln von Picea abies // Phyton. 1975. - Bd. 17. -№1-2. - P. 87-99.

36. Иванова С.З., Медведева С.А., Воронов В.К., Тюкавкина Н.А. Гликозиды ацетофенонов из хвои Picea obovata // Химия природных соединений. -1976. -№1. -С. 107-108.

37. Kimland В., Norin Т. Wood extractives of Common Spruce, Picea abies (L) Karst // Svensk Paperstinding. 1972. - Arg.75. - №10. - P. 403-408.

38. Хиллис В.Э. Экстрактивные вещества древесины и их значение в целлюлозно-бумажной промышленности. М. - 1965. - 504с.

39. Леонтьева В .Г., Моденова Л. Д., Тюкавкина Н.А. Лигнаны из Abies nephrolepis и Picea ajanensis // Химия природных соединений. 1973. - №2. - С. 268-269.

40. Леонтьева В.Г., Модонова Л.Д., Тюкавкина Н.А. Лигнаны из Picea koraensis // Химия природных соединений. 1974. - №3. - С. 399-400.

41. Модонова Л.Д., Воронов И.Р., Леонтьева В.Г., Тюкавкина Н.А. Лигнановые соединения из Picea obovata // Химия природных соединений. -1972.-№1.-С. 165-170.

42. Модонова Л.Д., Тюкавкина Н.А. Лигнановые соединения древесины ели сибирской (Picea obovata) // Химия и использование лигнина. Рига. -1974. - С. 73-86.

43. Тюкавкина Н.А. Лигнановые соединения хвои некоторых видов семейства Pinaceae // Химия древесины. 1977. - №6. - С. 94-96.

44. Lungren L.N., Popoff Т., Theander О. Dilignol glucosides from needles of Picea abies // Phytochemistry. 1981. - Vol.20. - P 923-925.

45. Strack D., Heilemann J., Wray V & Dirks H. Structures and accumulation patterns of soluble and insoluble phenolics from Norway spruce needles // Phytochemistry. 1989. - Vol.28. - P. 2071-2078.

46. Slimestad R. Chemical studies of flavonoids from Norway spruce, Picea abies. Isolation, structure elucidation and seasonal changes of flavonoids and other phenolics from needles and cones. Department of Chemistry, University of Bergen. 1997. - 53p.

47. Pan H. Studies on Phenolic and Terpenoid constituents extracted from bark of Birch, Spruce and Pine in Sweden. Dr. Phil.-thesis, Uppsala. 1995.

48. Громова A.C., Луцкий В.И., Тюкавкина Н.А. Стильбены из коры некоторых видов семейства Pinaceae // Химия древесины. 1979. - №3. - С. 103-109.

49. Alcubilla М. Extraction, chromatagraphic separation and isolation of fungistatic substances from the inner bark of Norway spruce // Z. Pflanzenernar. Dung, und Bodeng. 1970. - Bd. 127. - №1. - S. 64-74.

50. Pearson W., Kriz G.S., Taylor R.J. Absolute identification of hydroxystilbenes, chemical markers in Engelmann spruce // Wood Sei. 1977. - Vol. 10. - №2. -P. 93-98.

51. Manners G.D., Swan E.P. Stilbenes in the barks of five Canadian Picea species //Phytochemistry. -1971. Vol.10. - P 607-610.

52. Громова A.C., Луцкий В.И., Тюкавкина H.A. Оксистильбены внутренней и внешней коры Picea ajanensis // Химия природных соединений. 1975. -№1. - С. 83-84.

53. Громова A.C., Луцкий В.И., Тюкавкина H.A. Стильбены ритидома Pinus sibirica и Picea koraensis // Химия природных соединений. 1977. - №2. - С. 275-276.

54. Dittrich Р., Kandier О. Die influss des Jahrenszeit auf Bildung and Umsatz von Phenolkorpern un der Fichte (Picea abies (L) Karst) // Ber. Deutsch bot. Geseltschaft. -1971. Bd. 84. - №7-8. - S. 465-472.

55. Slimestadt R. Amount of flavonols and stilbenoids during needle develoment of Picea abies; variations between provenances // Skand. J. of Forest Researtsch. 1997. -№3. - P. 325-330.

56. Harborne J.B. Introduction to ecological biochemistry. London. 1989. - 356p.

57. Harborne J.B. (eds. Mann J. et. al.) In Natural Products. Essex. Longman Scientific & Technical. 1993. - 361-388p.

58. Bohm B.A. (ed. Harborne J.B.) In The Flavonoids, Advances in research since 1980. London. Chapman & Hall. 1988. - 329-388p.

59. Theander O. Hydrophilic extractives from the needles of Scots pine and Norway spruce // Svensk Papperstidning. 1982. - P 64-68.

60. Иванова С.З,. Тюкавкина H.A., Медведева С.А., Горохова В.Г., Зеленина Н.Д. Флавоноиды хвои некоторых видов Picea // Химия древесины. 1979. -№1. - С. 104-108.

61. Böhm B.A. (eds. Harborne J.B. et. al.) In The Flavonoids. London. Chapman & Hall. 1975. - 594p.

62. Slimestadt R., Andersen M., Francis G.W. Ampelopsin 7-glucoside and other dihydroflavonol 7-glucosides from needles of Picea abies // Phytochemistry. -1994. -Vol.35.-P 550-552.

63. Иванова C.3., Медведева С.А., Луцкий В. И., Тюкавкина H.A. Флавоноиды хвои Picea ajanensis // Химия природных соединений. — 1975. №6. - С. 802-804.

64. Haslam Е. (eds. Harborne J.B. et. al.) In The Flavonoids. London. Chapman & Hall. 1975. - 505-560p.

65. Kicinski H.G., Kettrup A. Analysis of phenolic compounds in spruce needle extracts using an UV-VIS-diode array detector // Fresenius Z. Anal. Chem. -1987. -327. P. 535-538.

66. Литвинова В.И., Ивонис И.Ю., Кялина П.В., Хохлин Б.В. Изменение содержания (+)-катехина в хвое ели и сосны под воздействием некоторых факторов // IV Всесоюзный симпозиум по фенольным соединениям. Ташкент. 1982. - С. 51-52.

67. Литвинова В.И., Ивонис И.Ю., Кялина П.В., Хохлин Б.В. Сезонная динамика (+)-катехина в хвое видов Picea и Pinus // Растительные ресурсы. 1983. Т. 19. - Вып.2. - С. 224-228.

68. Strack D., Wray V. (ed. Harborne J.B.) In The Flavonoids, Advances in research since 1986. London. Chapman & Hall. 1994. - l-22p.

69. Andersen O.M. Anihocyanins from reproductive structures in Pinaceae // Biochem. Syst. Ecol. Vol. 20. - P. 145-148.

70. Williams C.A., Harborne J.B. (ed. Harborne J.B.) In The Flavonoids, Advances in research since 1986. London. Chapman & Hall. 1994. - 337-385p.

71. Wollenberg E. (ed. Harborne J.B.) In The Flavonoids, Advances in research since 1986. London. Chapman & Hall. 1994. - 259-335p.

72. Медведева C.A., Тюкавкина H.A., Иванова С.З. Флавоноидные соединения хвои пихты сибирской и белокорой // Изв. СО АН СССР, сер. химическая. 1974. -Вып. 5. - С. 111.

73. Медведева С.А., Иванова С.З., Тюкавкина Н.А. и др. Силпин С-ме-тилированный флавоноид из Pinus silvestris // Химия природных соединений. - 1975. - №5. - С. 650-653.

74. Slimestadt R., Andersen М., Francis G.W., Marston A., Hostettmann К. Syringetin 3-0-(6"-acetyl)-p-glucopyranoside and other flavonols from needles of Norway spruce, Picea abies // Phytochemistry. 1995. - Vol.40. - P 15371542.

75. Фрагина А. И. Содержание рутина в хвое сосны и ели // Использование живых элементов дерева. Рига. - 1973. - С. 28-31.

76. Иванова С.З., Запесочная Г.Г. и др. О строении ди-п-кумароил-изокверцетина из хвои Pinus sylvestris // Химия природных соединений. -1980. -№2. -С. 254-255.

77. Иванова С.З., Запесочная Г.Г. и др. О-ацилированный флавоноидный гликозид хвои Picea koraiensis // Химия природных соединений. 1978. -№2. -С. 200-204.

78. Запесочная Г.Г., Иванова С.З., Медведева С.А., Тюкавкина H.A. О-ацилированные флавоноидные гликозиды хвои Pinus sylvestris // Химия природных соединений. 1978. - №2. - С. 193-196.

79. Wild A., Tietz S. Physiologische und cytomorphologische Untersuchungen an ungeschadigten und geschadigten Fichten im Nordschwarzwald (Freudenstadt) // Kernforschungszentrum Karlsruhe. KfK-PEF. 1991. -Bd. 1. -№80. - S. 93107.

80. Middleton Jr., Kandaswami C. (ed. Harborne J.B.) In The Flavonoids, Advances in research since 1986. London. Chapman & Hall. 1994. - 619-652p.

81. Smith D.A., Banks S.W. (eds. Cody V. et.al.) In Plant Flavonoids in Biology and Medicine: Biochemikal, Pharmacological and Strukture-Aktivity Relationships. New York. Alan R. Liss. 1986. - 113-124p.

82. Gabor M. (eds. Vane J.R., Ferreira S.H.) Handbook of Experimental Pharmacology: Anti-Inflammatory Drugs. Springer-Verlag. New York. -1979. -698-739p.

83. Cody V., Middleton E., Harborne J.B., Beretz A. (eds.) In Plant Flavonoids in Biology and Medicine: Biochemikal Pharmacological and Strukture-Aktivity Relationships. New York. Alan R. Liss. 1988.

84. Shiratori S., Nagumo S., Inoue T. et.al. Studies on the constituents of Acereae plants. XII. Two new diarylheptanoid glycosides from Aser triflorum // Chem. Pharm. Bull. 1994. - Vol.42. - №4. - P. 960-962.

85. Hara Y. Antioxidative action of tea polyphenols: Part I // Application Note/Bioanalytical and Diagnostic Techniques. 1994. - 47-48p.

86. Wagner G.J. (eds. Creasy L.L., Hrazdina G.) In Cellular and Subxellular Localization in Plant Metabolism. Recent Advance in Phytochemistry. New York. Plenum Press. 1982. - Vol. 16. - P. 1-45.

87. Beyer U.V., Tesche M., Heller W., Sandenrian H. Fungistatische Wirksamkeit phenohscher Inchaltstoffen der Fichte, Picea abies (L.) Karst und Einfluß von S02 // Forstw. Cbl. -1993. -№112. S. 251-256.

88. Bors W., Heller W., Michel C., Saran M. Radical chemistry of flavonoid antioxidants // Antioxidants in Therapy and Preventive Medicine. 1990. - 165-170p.

89. Jovanovic S., Steenken S., Hara Y., Simic M.G. Reduction potentials of flavonoid and model phenoxyl radicals. Which ring in flavonoids is responsible for antioxidant activity? // JCS Pekin II. 1996. - №11. - p. 2497.

90. Wagner H. Phenolic compounds in plants of pharmaceutical interest // Biochemistry of plant phenolics. New York London. - 1979. - Vol.12. - P. 589-616.

91. Marbry T.J., Markham K.R., Thomas M.B. The Systematic Identification of Flavonoids. New York. 1970. - 345p.

92. Markham K.R. (ed. Harborne J.B.). In: The Flavonoids. Isolation techniques for flavonoides. London. 1975. - 743p.

93. Harborne J.B. Methods in Plant Biochemistry. Plant Phenolic. London. Acad. Press. 1989. - Vol. 1. - P. 1-28.

94. Геккелер К., Экштайн X. Аналитические и препаративные лабораторные методы. М., Химия. 1994. - 409с.

95. Markham K.R. (ed. Harborne J.B.). In Methods in Plant Biochemistry. Plant Phenolic. Flavones, Flavonols and their Glycosides. London. Acad. Press. -1989,-Vol.1. 197-236p.

96. Wagner H., Bladt S., Zgainski E.M. In Plant Drug Analysis. Springer Verlag. Berlin. 1984. - 163-165p.

97. Markham K.R. Techniques of flavonoid identification. London. Acad. Press. 1982.- 113p.

98. Тюкавкина H.A., Горохова В.Г., Погодаева H.H., Бабкин В.А. Жидкостная хроматография растительных фенольных соединений. 1. Обращенно-фазовая хроматография моно- и дизамещенных флавонов // Химия древесины. 1979. - №2. - С. 100-104.

99. Горохова В.Г., Тюкавкина H.A., Бабкин В.А., Колесник Ю.А. Жидкостная хроматография растительных фенольных соединений. 3. Обращенно-фазовая хроматография фенолокислот // Химия древесины. -1979. №4. - С. 76-80.

100. Markham K.R., Marbry T.J. (eds. Harborne J.B. et.al.) In: The Flavonoids. Ultra violet-visible and Magnetic Resonance spectroscopi of Flavonoids. New York London. - 1975. - 45p.

101. Клышев JI.K., Бандюкова В.А., Алюкина Л.С. Флавоноиды растений. Алма-Ата., Наука. 1978. - 205с.

102. Казицина Л.А., Куплетская H.A. Применение УФ-, ИК-, ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии. М., Химия. 1980, - 238с.

103. Вайсбергер А. Установление структуры органических соединений физическими и химическими методами. М., Химия. -1967. Том. 1. - 514с.

104. Эмсли Дж., Финей Дж., Сатклиф JI. Спектроскопия ЯМР высокого разрешения. М., Мир. 1969. - Том.2. - 452с.

105. Batterham T.J., Highet R.J. Nuclear magnetic resonance spektra of flavonoids // Aust. J. Chem. 1964. - Vol. 17. - P. 428-439.

106. Томчук Р.И., Томчук Г.И. Древесная зелень и ее использование в народном хозяйстве. М. - 1973. - 360с.

107. Вахрушев А.Н., Медников Ф.А., Ушакова Е.В. Переработка древесной зелени // ВНИИПИЭИлеспром (Обзор.). Лесохимия и подсочка. 1978. -Вып.2. - 28с.

108. Ягодин В.И., Антонов В.И. Кормовая мука продукт комплексной переработки древесной зелени // Биологически активные вещества в сельском хозяйстве. - 1988. - 28с.

109. Репях С.М. Исследование механизма трансформации продуктов фотосинтеза, разработка системной технологии биологически активных веществ и кормовых продуктов // СибТИ. Красноярск. 1988. - 112с.

110. Славянский А.К., Медников Ф.А. Технология лесохимических производств. М. - 1970. - 292с.

111. Выродов В.И., Ягодин В.И. Технология древесной зелени. Л. -1996. -116с.

112. Ягодин В.И. Основы химии и технологии переработки древесной зелени. ЛГУ, 1981.-254с.

113. Антонов В.И. Технология совмещенной водно-бензиновой экстракции еловой древесной зелени. Автореф. дисс. канд. техн. наук. Л. - 1983. -16с.

114. Оболенская A.B., Ельницкая З.П., Леонович A.A. Лабораторные работы по химии древесины и целлюлозы. М.: Экология, 1991. 316с.

115. Микельсон А.Э., Шарапова Т.Е., Домбург Г.Э. Газохроматографи-ческое определение углеводов древесины в виде ацетоальдононитрилов // Химия древесины. 1980. - №2. - С. 94-99.

116. Касаткин А.Г. Основные процессы и аппараты химической технологии. М. 1971. -380с.

117. Максютина Н.П., Комиссаренко Н.Ф., Прокопенко А.П. и др. (под. ред. Максютиной). Растительные лекарственные средства. Киев.: Здоров'я, 1985. -280с.

118. Лурье. Хроматографические материалы. М.: Химия, 1978. 438с.

119. Мальковский H.H. О содержании каротина в хвое разных частей кроны // Лесной журнал. 1976. - №2. - С. 19-32.

120. Рощин В.И., Баранова P.A. и др. Состав экстрактивных веществ хвои и побегов ели европейской // Химия древесины. 1983. - №4. - С. 56-61.

121. Пенсар Г., Липонкоски Л., Ханнус К. Химический состав экстрактивных веществ древесной зелени ели и сосны // Комплексное использование отходов лесозаготовок. Хельсинки. 1972. - С. 69-85.

122. Рощин В.И., Колодынская Л.А., Баранова P.A., Соловьев В.А. Экстрактивные вещества ели, сосны и пихты // Тез. докл. Всес.конф. Экстрактивные вещества древесных растений. Красноярск-Новосибирск. -1986. С.98-100.

123. Безденежных Г.М., Ладинская С. И., Медников Ф.А. и др. Батарейный способ экстракции хвойной лапки изопропиловым спиртом // Лесохимия и подсочка. 1972. С. 12.

124. Ладинская С.И., Глухова Т.В., Медников Ф.А. Экстракция хвои изопропиловым спиртом // Химия и химическая технология древесины. Межвуз. Сб.науч.труд. 1975. -Разд.!. - Вып.З. - С. 3-11.

125. Трейбал Р. Жидкостная экстракция. М.: Химия, 1966. 724с.

126. Медведева С.А., Тюкавкина H.A., Иванова С.З. Фенольные экстрактивные соединения хвои лиственницы сибирской // Химия древесины. 1974. - №15. - С. 144-152.

127. Азаров В.И., Буров A.B., Оболенская A.B. Химия древесины и синтетических полимеров. С-Петербург.: СПбЛТА, 1999. 623с.

128. Чащин A.M., Глухарева М.И. Производство ацетатных растворителей в лесохимической промышленности. М.: Лесная промышленность, 1984. -239с.

129. Ионин Б.И., Ершов Б.А. ЯМР-спектроскопия в органической химии. Л.: Химия, 1967.-326с.

130. Новицкая Ю.Е. Особенности физиолого-биохимических процессов в хвое и побегах ели в условиях Севера. Л., 1971.

131. Лукнер М. Вторичный метаболизм у микроорганизмов, растений и животных. М.: Мир, 1979. 517с.

132. Hall L.D. The Conformations of cyclic compounds in Solution. I. Shikimic asid//J. Org. Chem. 1964. Vol.29. - C. 297-299.

133. Jungblut P., Schnitzler J-P und andere. Die Strukturen UV-B-induzierter Sonnenschutzpigmente der Riefer (Pinus sylvestris L.) // Angew. Chem. 1995. Vol.34. - C. 376-378.

134. Запесочная Г.Г. Изучение структуры и стереохимии флавоноидных 0-арабинозидов и -ксилозидов с помощью ПМР-спектроскопии // Химия природных соединений. 1979. -№1. - С. 21-34.

135. Pelter A., Ward R.S. General methodes for the assignment of stereochemistry to 2,6-diaryl-3,7-dioxabicyclo 3,3,0.-octane lignans // Tetrahedron. 1976. Vol.32. - P. 2783-2788.177

136. Калабин Г.А., Кушнарев Д.Ф., Тюкавкина Н.А. и др. Спектры ПМР природных стильбеновых соединений // Химия природных соединений. -1976,-№1.-С. 3-10.

137. Telvini М., Braun J. and Fieser G. The protective function of the epidermal layer of rye seedlings against ultraviolet В radiation // Photochemistry and Photobiology. - 1991. - Vol.53. - P. 329-333.

138. Solhaug K.A. Stilbene glucosides in bark and needles from Picea species /7 Scand. J. For. Res. 1990 - Vol.5. - P. 59-67.

139. Mannila E. Biologically active stilbene derivatives from Picea abies bark by isolation and modification. Helsinki. Annaces Academiae Scietiaruin Fennkae, series A. II Chemica. 1993. - 41p.

140. Estenbauer H., Grill D. Spectrophotomelr i с determination of picein and p-hydroxyacetophenone in needles of Picea abies with 2,4-di n i t ropheny 1 hy drosine // Anal. Chem. 1974. - Vol.46. - №6. - P. 789-791.

141. Солодкая Г.Ф. Разработка основ технологии получения феофитина из хвои. Автореф. дисс. . канд. техн. наук. Л. 1973. - 22с.