автореферат диссертации по технологии, машинам и оборудованию лесозаготовок, лесного хозяйства, деревопереработки и химической переработки биомассы дерева, 05.21.03, диссертация на тему:Флавоноиды и терпеноиды спиртового экстракта почек березы Betula pendula roth

На правах рукописи

Галашкина Наталья Геннадьевна

ФЛАВОНОИДЫ И ТЕРПЕНОИДЫ СПИРТОВОГО ЭКСТРАКТА ПОЧЕК БЕРЕЗЫ BETULA PENDULA ROTH.

05.21.03 - Технология и оборудование химической переработки биомассы дерева; химия древесины.

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Санкт-Петербург 2005

Работа выполнена в Санкт-Петербургской государственной лесотехнической академии на кафедре Химии древесины, физической и коллоидной химии.

Научные руководители:

доктор химических наук, профессор

кандидат химических наук, доцент

Рохцин В.И. Ведерников Д.Н.

Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор кандидат химических наук, доцент

Пономарев Д.А. Тамм Л.А.

Ведущая организация:

Государственное унитарное предприятие Центральный научно-исследовательский институт лесохимической промышленности

Защита состоится « 29 » марта 2005г. в 11м часов На заседании диссертационного совета Д212.220.01 при Санкт-Петербургской государственной лесотехнической академии, 194021, г. Санкт-Петербург, Институтский пер., 5.

Отзывы (в двух экземплярах с заверенными подписями) просим направлять ученому секретарю диссертационного совета.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургской государственной лесотехнической академии.

Автореферат разослан «_»_2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Калинин Н.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность темы. Проблема рационального использования древесного сырья является одной из самых важных в лесном хозяйстве. Особого внимания заслуживает комплексная переработка быстрорастущих лиственных пород. Береза особенно перспективна, так как является наиболее используемой среди лиственных пород, а также из-за своих лекарственных свойств. Однако для лиственных пород, в отличие от хвойных, не разработаны технологии переработки кроны дерева - отхода лесозаготовки. Одним из видов отходов лиственной древесины, в зависимости от времени заготовки, являются ветви с почками или листьями. При заготовке березы теряется до 1.5 кг почек и 500 кг ветвей. Почки (заготовленные в весеннее время) являются официнальным сырьем, настои, мази из которых применяются как диуретическое, желчегонное и бактерицидное средства. Однако недостаточная изученность состава экстрактивных веществ почек березы (ПБ), влияния времени заготовки на их состав сдерживает развитие технологий переработки отходов и целенаправленного их использования. Решение задач поставленных в работе, позволило бы решить часть проблем комплексного и рационального использования биомассы березы.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы являлось определение качественного и количественного состава соединений этанольного экстракта почек березы повислой (Betulapendula Roth.) и его биологической активности.

Основные задачи работы:

• разработать схему анализа этанольного экстракта почек березы повислой;

• выделить и установить строение индивидуальных соединений этанольного

• изучить сезонную динамику накопления и расходования отдельных групп и индивидуальных соединений этанольного экстракта;

• определить основные токсикометрические показатели и биологическую активность этанольного экстракта ПБ.

экстракта;

PiH. " A4

f «у.-г'леТ^А

J. W/S,**

ямС?«

Научная новизна. Показано, что преобладающими компонентами этанольного экстракта являются флавоноиды, относящиеся к четырем различным типам: флаванонам, флавонам, флаванонолам и флавонолам. В составе экстракта обнаружены соединения неизвестного ранее в ПБ типа флавоноидов -флаванонолов: 7-метиларомадендрин и аромадендрин. Определен состав неизвестной среди природных веществ группы соединений - сложных эфиров кумаровых кислот и сесквитерпеновых спиртов. Установлено строение соединений, неизвестных ранее: (1R, 5S) 10, 10-диметил-5-метилол-4 (13), 7 (14)-диметиленбициюго [б.2.0.]-декана, (1R, 3Z, 5R, 6S) 11, 11-диметил-5, 6-дигидрокси-3, 8 (15)-диенбицикло[7.2.0]-ундекан и (1R, 5R, 6S) 11,11-диметил-5, 6-дигидрокси-4 (14), 8 (15)-бисметиленбицикло [7.2.0]-ундекан. Первое соединение относится к новому типу сесквитерпеноидов. Впервые изучена динамика накопления и расходования большинства фенольных компонентов, входящих в состав этанольного экстракта ПБ. Определено, что вещества ПБ, растворимые в этаноле, обладают фунгицидной и бактерицидной активностью и относятся к веществам IV класса опасности.

Практическая иенность. Предложена схема переработки ПБ, основанная на разделении экстрактивных веществ на две части методом последовательной экстракции сначала петролейным эфиром, затем этиловым спиртом с получением двух продуктов: березовое масло и спиртовая настойка.

Апробапия работы. Основные результаты работы доложены на шести конференциях: Всероссийские конференции "Химия и технология растительных веществ" (Сыктывкар, 2000; Казань, 2002; Саратов, 2004), Sixth European Working on Lignocellulossing and Pulp (Франция, Бордо, 2000), Актуальные проблемы лесного комплекса (Брянск, 2001), The international conference on Sino-Russian economic, scientific and technical cooperation in forestry contributed paper. (Китай, Харбин, 2002) -

Работа поддержана Государственным контрактом № 13.802.1 1.03.10 Минпромнауки России 2003 г.

Публикации. По теме диссертации имеется 12 публикаций.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, шести разделов, заключения и списка литературы (124 наименования). Диссертация содержит 24 рисунка и 34 таблицы.

Положения, выносимые на защиту:

1 .Схема разделения этанольного экстракта ПБ повислой.

2.Состав фенольных, терпеноидных соединений, а также углеводов этанольного экстракта ПБ.

3.Закономерности накопления и расходования фенольных компонентов в ПБ в

зависимости от времени заготовки березы. 4.Биологическая активность и токсикометрические показатели этанольного экстракта.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1.Методы проведения эксперимента.

В качестве объекта исследования использовали ПБ повислой, собранные в конце марта в Ленинградской области в районе поселков Токсово-Осельки. Для изучения влияния времени сбора ПБ на состав экстрактивных веществ и определения токсикологических характеристик экстракта ПБ собирались с нижних ветвей берез примерно одного возраста (50 лет) и высоты (20 м), произрастающих в естественных условиях в районе поселка Рощино Ленинградской области.

Групповой состав этанольного экстракта ПБ. Экстракцию ПБ этанолом проводили в аппарате Сокслета в течение 3 ч после предварительного удаления из ПБ веществ растворимых в петролейном эфире. Экстракт (после удаления спирта) разбавляли водой и последовательно экстрагировали диэтиловым эфиром, этилацетатом и бутанолом-1. Контролировали экстракцию методом ТСХ. Затем полученные экстракты анализировали отдельно.

Выделенные диэтиловым эфиром вещества разделили на фракции методом колоночной хроматографии на силикагеле в системах петролейный эфир : диэтиловый эфир с добавкой последнего от 1 до 50%, затем петролейный эфир : ацетон (от 30 до 100 %). Состав фракций и схема анализа приведены на рис. 1.

СХЕМА РАЗДЕЛЕНИЯ ВЕЩЕСТВ, РАСТВОРИМЫХ В ДИЭТИЛОВОМ ЭФИРЕ

Вещества, растворимые в диэтиловом эфире колоночная хроматография на силикагеле

I Г

Фикция А Фракция Б Жиры

Фракция В Обработка ЫаОН ■

Перекристаллизация, щелочерастворимые препаративная ТСХ вещества

в системе I —7,4'-диметиловый

'этиловый эфир п-гидроксибевзойной кислоты

-смесь кумаратов

препаративная ТСХ в системе II "пиллоин "сакуранетжн "эрманин ~ изосакуранетин

Фракия Г

- КХв системе IV

- 7,4'-диметиловый эфир скутелляреина

- 3-метиловый эфир бетулетола

" рамназин

- акацетин

. генкванин . апигенин

нейтральные вешествя—

-препаративная ТСХ

в системе III

—7,4'-диметиловый эфир

апигенина —14-ацетокси-Р-кариофиллен ■р-ситостерин '6-гидрокси-Р-кариофиллен —бетулин

!

Фракция Д

¡-Обработка ШНСОз, ЫаОН

I— фенолокислоты

препаративная ТСХ _ в системе V

' п-гидроксибензойная к-та

анисовая к-та

фенолы — —КХ в системе VI

-рамно цитрин

"кемпферид

-7-меггиларомадендрин

— нейтральные вещества

КХв системе VII — (¡Я, 32,511, 6в) 11,11 -даметип-5,6-дигщро-— кси-3, 8 (15)- диенбицикло[7.2.0]-ундекан (III, 511, 6в) 11,11-диметил-5, 6-дигидрокси- -4 (14), 8 (15) бисмегиленбицшсло [7.2.0]-ундекан Рис. 1

4

-Обработка ИаНСОз

— фенолокислоты —

транс-кумаровая — к-та

цис-кумаровая _

к-та

фенмы

—КХв системе VIII —ФрЕф^

препаративная ТСХ — в системе IX 3,3' -диметилкверцетин -бетулетол -

- фрЕф2

препаративная ТСХ — в системе IX

изокемпферид -нарингенин изорамнетин -

- фрЕфЗ-► кемпферол

В качестве сорбентов для колоночной хроматографии использовали силикагель АСКГ (г. Воскресенск), марки Ь 5/40, а также сферой 40 (ЬС) (фирма "СЬетароГ, Чехия) - для флэш-хроматографии. Подбор элюентов осуществляли методом ТСХ. Вещества, растворимые в этилацетате

I-

фенолы

-КХв системеX

обработка NaHCOj, NaOH

фр Ли —4-сакураяегин

Гэрманин

акацетин

La

- фр Бц

.апягешга

- фр Вн

рамноцитрин "кемпферид фрГи—изокемпферид

фснолокислоты

препаративная ТСХ в системе XI

. п-гидроксибензойная к-та . транс-п-кумаровая к-та . цис-п-кумаровая к-та . феруловая к-та ванилиновая к-та

► препаративная ТСХ-в системе XIII

ФрДп

фр Ец w гликозиды кверцетина

t

аромадендрин кверцетин

нейтральные вещества

— КХ в системе ХП

"(1R, 3Z, 5R, 6S) И, 11-диметил-5,6-дигидрокси-З, 8 (15)-диен-бицюсло[7.2.0]-ундекан (1R, 5R, 6S) 11,11-диметил-5,6-дигидрокси-4 (14), 8 (15)-бисметнленбицикло[7.2.0]-ундекан

-(1R, 5R, 6S, 8R) 11,11-ДИметил-5,6,8-тригидрокснтрицикло-[7.2.1]-ундекан

Рис. 2 Схема разделения веществ, растворимых в этилацетате.

Для флэш-хроматографии на силикагеле (5/40) применяли CCU с добавкой ацетона от 1 до 20 % - IV; бензол с добавкой ацетона от 1 до 20 % - VII или от 10 до 30 % - XIII; бензол с добавкой метилцеллозольва от 1 до 10 % - VIII или от 5 до 20 % -X; на сфероне - петролейный эфир с хлороформом от 90 до 100 % - VI. Для препаративной ТСХ применяли следующие элюенты (рис. 1 и 2): бензол : диэтиловый эфир (9:1)- I; бензол : метилцеллозольв (4 : 0.2) - II; петролейный эфир : ацетон (4 : 1) - Ш; бензол : диоксан : уксусная кислота (90 : 25 : 1) - V; хлороформ : метанол : уксусная кислота (7 : 0.15 : 0.15) - IX; бензол : диоксан : уксусная кислота (90 : 25 : 2) - XI; бензол : этанол (8:2)- ХШ.

Определение сезонной динамики индивидуальных соединений проводили на жидкостном хроматографе "Waters 2690", (длина волны 255 нм и 325 нм). Строение индивидуальных соединений устанавливали с помощью спектроскопии - УФ, ЯМР Н1 и С13 (CDC13, C2D6CO, 8-шкала) и масс-спектрометрии.

2.Состав соединений этанольного экстракта

Состав веществ, растворимых в дютиловом эфире и этилацетатб.

Флавоноиды ПБ представлены соединениями, принадлежащими к четырем различным типам: флаванонам, флаванонолам, флавонам и флавонолам.

Спектры ЯМР *Н (в С206С0) выделенных соединений (1-23) имеют характерный для флавоноидов сигнал протона гидроксильной группы при С5 в области 12-13 м.д. О характере замещения кольца А можно судить по количеству сигналов в области 6.0 - 6.5 м.д. на ЯМР 'Н-спектрах: если водород при ароматического кольца не замещен на метоксильную или гидроксильную группы (5,7-тип замещения), то на спектре появлялись два дублета - сигналы протонов при С8 и С6, если водород при Сб замещен (5,6,7-тип замещения, соединения 22 и 23), то на спектре виден только сигнал протона при Cg. На замещение в кольце В указывало наличие симметричных сигналов протонов при 2',6' и 3',5' атомах углерода в области 7.0 - 8.0 м.д., соответственно (4'-тип замещения для соединений 1-17, 22, 23). В спектрах флавоноидов, кроме флавонолов (12-23), имеются сигпалы протонов кольца С. В спектрах флаванонов (1-4) - сигнал протона при С2- дублет дублетов в области 5.5 м.д. и сигналы 2-х протонов при Сз~ два дублета дублетов в области 3.2 и 2.8 м.д., соответственно. В спектрах флаванонолов (5-6) сигнал протона при Сг проявляется в виде дублета в области 5.1 м.д., а сигнал протона при Сз в виде дублета с области 4.7 м.д. Для флавонов (7-11) сигнал протона С3 наблюдается в виде синглета в области 6.6 м.д. В спектрах большинства выделенных соединений присутствовали сигналы метоксильных групп - синглеты в области 3.8-3.9 м.д.

Таблица 1

Основные массовые числа некоторых флавоноидов.

Ионы (2) (5) (9) (П) (13) (14) (15) (16) (17) (19) (20) (21) (22) (23)

М* 286 (77) 302 (20) 284 (100) 314 (100) 300 (100) 300 (100) 300 (100) 314 (100) 314 (100) 316 (100) 330 (100) 330 (65) 344 (100) 330 (100)

а 167 (100) 167 (100) 153 0 167 (20) 167 (7) - 153 (38) 167 (5.5) 153 (10) 153 (8) 167 (12) 153 (35) -

Ь 121 (6) 135 0 135 (17) 121 (39) 135 (6) 121 (78) 135 (33) 135 (25) 151 (8) 135 (Н) 151 (30) 135 (31) 135 0

й - - 271 (10) 271 (10) 257 (42) 271 (18) 271 (47) 287 (10) 301 (10) 287 (45) 301 (26) 301 (12)

I

I

Таблица 2

Флавоноиды почек березы повислой.

Флавоноид Структура я Яз 1*4

Нарингенин (1) он О н н

Сакуранетин (2) СНз н

Изосакуранетин (3) Н СНз

7,4'-диметиловый эфир на-рингенина (4) СНз СНз - - -

7-метиларомадендрин (5) ОН О СНз - - - -

Аромадендрин (6) Н - - - -

Апигенин (7) ГУ0*' ОН О Н Н н

Генкванин (8) СНз н н

Акацетин (9) Н СНз н

7,4'-диметиловый эфир апигенина (10) СНз СНз н - -

7,4'-диметиловый эфир скутелляреина (11) СНз СНз он - -

Кемпферол (12) ОН О Н Н н

Рамноцитрин (13) СНз Н н

Кемпферид (14) II СНз н

Изокемпферид (15) Н Н СНз

Пиллоин (16) СНз СНз н

Эрманин(17) Н СНз СНз

Кверцетин (18) II Н н ОН Н

Изорамнетин (19) Н Н н ОСНз Н

Рамназин (20) СНз н н ОСНз н

3,3'-диметилкверцетин (21) Н н СНз ОСНз н

3-метиловый эфир бетуле-тола (22) Н СНз СНз Н ОСНз

Бетулетол (23) Н СНз II Н ОСНз

Анализ ЯМР 1Н соединений (2, 5, 9,11, 13-17,19-23) не позволяет сделать вы-

вод о местонахождении ОСН3 и ОН групп в ароматических кольцах флавоноидов. Для установления строения был использован метод масс- спектрометрического анализа (рис. 1).

При электронном ударе молекула флавонола распадается на два основных фрагмента "а" и "Ь".

Рис. 1 Основные пути распада молекулярных ионов флавоноидов

Фрагмент "а" с массовым числом 167 или 153 указывает на присутствие в кольце А флавонола метоксила или шдроксила соответственно. Метоксильная или гидроксильная группы в кольце В устанавливается по фрагменту "Ь". Пик с массовым чилом 135 указывает на наличие в кольце В метоксильной группы, а пик с массовым числом 121 - гидроксильной. Пик с массовым числом 151 свидетельствует о присутствии в кольце В метоксильной и гидроксильной групп одновременно в положениях 3' и 4'. Помимо 7, 3', 4' положений, метоксильная группа может находиться при Сз кольца С. У флавонолов с гидроксильными группами при С3 и С5 ион "d" имеет низкую интенсивность. Наличие метоксильной группы в положении Сз приводит к резкому возрастанию интенсивности гака рассматриваемого иона. Метоксил в их структурах (15) и (17) располагается при Сз, так как в масс-спектрах соединений интенсивность иона "d" составила 42 и 47%. Высокая интенсивность пика иона "d" в масс-спектре соединения (21) также свидетельствует о наличии метоксильной группы при С3, а пик с массовым числом 151-0 расположении второго мстоксила в кольце В. В спектре флаванонола 5 присутствует фрагмент "а" с массовым числом 167, что характерно для кольца А с метоксилом у С7.

Соединения (1, 3, 5 и 6) впервые выделены из ПБ. Последние два вещества относятся к флаванонолам. Сведения об обнаружении такого типа флавоноидов в ПБ отсутствуют. Соединения (8,15, 22 и 23) впервые выделены из ПБ повислой, но ранее были обнаружены в почках других видов этого рода.

соон Гидроксикоричные кислоты представлены в этанольном экстракте

I

™ транс- (24), цис- (25) п-кумаровыми и феруловой (26) кислотами.

24 Я=Н(Е) Гидроксибензойные кислоты. Выделено 3 соединения. Ранее

25 Я=Н(г) . _

26 Я=ЮСН3 (Е) обнаруженные в ПБ - п-

он гидроксибензойная (27) и анисовая 27 Л^Н

/-,«,4 „ Г 1 28 ЯЮСНз; Я,=Н

кислота (28), ванилиновая кислота (29) впервые обнаруже- „ _

I 29 л~п; К,=ОСН3

на в ПБ.

Сесквитерпеноиды. Выделено и установлено строение 5 соединений. Соединение (30) - 6-гидрокси-З-кариофиллен и (31) - ацетат оксида 14-гидрокси-р-

он

кариофиллена были найдены ранее в составе петролейного экстракта ПБ (Д.Н. Ведерников), сравнение ТСХ и ЯМР 'Н-спектров,

Таблица 3

Данные ЯМР 13С-спсктров соединений 32,33 и спиртовой составляющей "г" кумаратов.

С соед 32 соед 33 соед 35 С соед 32 соед 33 соед 35

1 49.26 52.93 41.2 9 42.83 44.34 52.2

2 28.71 29.78 31.4 10 40.31 41.06 37.5

3 126.90 30.30 32.9 И 33.11 33.61 34.1

4 136.77 148.83 152.0 12 29.80 29.87 30.2

5 73.90 79.30 50.4 13 22.39 22.27 22.8

6 71.00 74.00 65.7 14 16.95 116.80 112.1

7 37.91 38.14 41.0 15 115.40 111.59 109.3

8 148.07 150.04 151.0

Соединения (32 и 33) выделены впервые из природных источников, строение установили на основании ЯМР 'Н и 13С-спектров, а также спектров с использованием программы DEPT. В табл. 3 приведены данные ЯМР 13С-спектров. Конфигурацию атомов углерода устанавливали сравнением с данными спектров соединения 34. Абсолютная конфигурация атомов С4, С5, Се и Се соединения 34 установлена с ис-

пользованием спектра ЫОЕвУ. Соединение 34 тождественно (ТСХ, ЯМР) с выделенным из водного экстракта ПБ (III, 5Я, бв, 8И) 11, 11-диметил-5, 6, 8-тригидрокситрицикло [7.2.1 ]-ундеканом (Карачкина Н.Л.)

Сложные эфиры ароматических кислот.

Фракция состояла из маслянистой (95%) и кристаллической частей, которые были разделены методом препаративной ТСХ в системе П. Кристаллическая часть состояла из этилового эфира п-гидроксибензойной кислоты (ЯМР, виречный синтез). По данным ЯМР 'Н-спектра маслянистой части фракции предположили, что структура молекул состоит из ароматической (сигналы протонов от б до 8 м.д.) и алифатической (от 0.9 до 5.5 м.д.) частей. После ацетилирования, фракцию разделили методом препаративной хроматографии в системе гексан : ДЭ (9 : 1) на две части с соотношением 9:1. ЯМР 'Н-спекгры полученных ацетатов различались только в кислотной составляющей. Дня выявления строения заместителей провели щелочной гидролиз. В результате были получены спирты и ароматические кислоты. Среди кислот были определены транс и цис-п-кумаровые кислоты. Спиртовые составляющие (ГЖХ) имели одинаковый набор спиртов, но с различным содержанием по фракциям. Спиртовые составляющие кумаратов разделили методом колоночной хроматографии на силикагеле. В результате разделения были получены 4 основные компонента (а, б, в, г). ЯМР-спектры и хроматографические характеристики которых совпали с выделенными ранее (Д.Н. Ведерников) 14-гидрокси- ("а") и 6-гидрокси-("б")-р-кариофилленами. ЯМР !Н-спектр "в" тождественен спектру 14-гидрокси-а-гумулена выделенного из хвои можжевельника.

Соединение "г" состояло из 15 атомов углерода. По ЯМР !Н -спектру и ОЕРТ, предположили, что выделенное соединение - циклический терпеноид. В соединении имелись два экзометилена (синглеты на 1Н каждый при 5.03, 4.92, 4.80 и 4.71 м.д.). В ЯМР 13С-спектре наблюдался сигнал углерода связанного с гидроксильной группой - 65.71 м.д., а в ЯМР 'Н-спектре два дублета дублетов с центрами 3.52 и 3.48 м.д. по 1Н каждый, что позволило предположить, наличие первичной спиртовой группы. Анализ констант спин-спинового взаимодействия показал наличие следую-

щей группировки - СН (СН2ОН)-. Наличие такого фрагмента в молекуле терпенои-да необычно и встречается редко в природных соединениях с неперестроенным скелетом структуры основного терленоида, определяющего его тип.

Из данных ЯМР 'Н-спектра определить положение спиртовой группы сложно. Для определения последовательности атомов углерода с атомами водорода были сняты спектры HXCORR, COLOC и Н'-Н1 COSY. В результате были выявлены два фрагмента: СН-СН-СН2-СН2 и СН(СН2ОН)-СН2. Оба фрагмента кольца разделены между собой атомами углерода с экзометиленовыми двойными связями. Положение -СН2ОН группы у С5 молекулы и абсолютная его конфигурация определена в совокупности использованных методов ЯМР-спектроскопий, в том числе эксперимента NOESY. На основании анализа спектральных данных выделенное соединение имело строение (1R, 5S) 10,10-диметил-5-метилол-4 (13), 7 (14)-диметиленбицикло [6.2.0.]-декана (35), данные ЯМР-спектра соединения представлены в таблице 3.

Сообщений о выделении кумаратов сесквитерпеноидов в литературе не найдено. Не сообщалось ранее и о выделении соединения "в" из ПБ, а соединение "г" -

11 ОзХ-г")

но

COOR

COOR

является новым типом сесквитерпеноидов. Образование в почках березы соединений 32, 33,34 и 35, возможно происходит из соответствующих оксидов по схеме.

chjOH

В результате разрыва эпоксидной связи соединения II, ранее выделенного из ПБ, образуется карбкатион (Ш), стабилизация которого может привести к образованию двух структур (32 и 33), а соединение 34 образуется путем атаки карбкатиона III по Си двойной связи с образованием третьего кольца и нового карбкатиона, стабилизация которого протекает путем гидроксилирования. Разрыв эпоксидной связи и связи С-С оксида кариофиллена приводит через промежуточный карбкатион, к образованию соединения 35.

Состав веществ, растворимых в бутаноле и воде.

В результате анализа экстрактов методом хроматомасс-спекгрометрии в виде ацетатов альдонитрилов (табл. 4) установили, что в обоих экстрактах основным среди идентифицированных компонентом является глюкоза.

Таблица 4

Состав соединений бутанольной вытяжки и водного остатка спиртового экстракта

березовых почек, % от фракции.

Компонент Бутанольная Водный оста- Компонент Бутанольная Водный оста-

часть ток часть ток

Глицерин 5.4 2.9 Маннит 9.5 -

Арабиноза 11.2 1.8 Инозит - 5.7

Глюкоза 20.7 54.8 Сорбит - 1.0

Галактоза - 7.2 - --

Бутанольная вытяжка отличалась от водного остатка как составом моносахаридов (отсутствие галактозы), так и составом спиртов - в бутанольной вытяжке содержался маннит, в то время как водном остатке - инозит и сорбит.

З.Динамики накопления и расходования фенольных соединений.

Динамика накопления и расходования БАВ в ПБ является не только одним из показателей интенсивности физиологических процессов в исследуемом растительном материале, но и служит ориентиром для определения путей комплексного использования растительного сырья при промышленной химической переработке.

Для изучения динамики накопления и расходования фенольных компонентов использовали почки сразу после опадания листьев (1), в период покоя (2), перед началом роста (3) и перед раскрытием (4). Выход спиртового экстракта с момента опадания листьев до момента раскрытия почек постепенно увеличивался с 30.25 до 37.90 % от массы сухого сырья.

При разделении веществ спиртового экстракта на группы соединений наибольшее количество экстрактивных веществ перешло в диэтиловый эфир 71-78% и воду 9-13%, а в этилацетат и бутанол 6-8% (рис. 2).

Доминирующими компонентами являлись флавоноиды (рис. 3). Они составляли от 30 % до 46 % этанольного экстракта почек. Флаваноны и флавонолы имели одинаковую тенденцию накопления и расходования с максимумами осенью н весной и минимумом зимой, в то время как флавоны - с максимумом осенью и минимумом весной.

номер пробы

тк—ЭА --■•-■ БЭ —X—ВО |

Рис. 2 Влияние времени года на состав этанольного экстракта.

I

19 октября

Ш13,3-даметьилкверцитин

В сакуранетин ЕЗрамназин__

__26 декабря

□ акацетин Ыэрманин

□ изорамнетин

5 марта

31 марта

■кемпферол S 7,4-диметилнарингенин ES 7,4-диметилапигенин

Ш кумаровая к-та Ишшлоин ■нарингенин ■ 7-метиларомадендрин II изокемпферид 0 генкванин В 7,4-диметилскутелляреин ЕЗапигенин_

Рис. 3. Сезонная динамика индивидуальных соединений ГШ.

4,Бнологическая активность и направления использования экстрактивных веществ ЦБ.

Определено, что спиртовый экстракт обладает сильным фунгистатическим и фунгицидным действием по отношению к дрожжеподобным грибам, нитчатому грибу Trichophyton rubrum и пггамму Cryptococcus neoformans; бактерицидной активностью в отношении Staphylococcus aureus.

На основании установленного состава спиртового экстракта и его биологической активности предложили вариант переработки ПБ, основанный на последовательной экстракции ПБ сначала петролейным эфиром, затем спиртом с получением двух продуктов - "березового масла" и спиртовой настойки. "Березовое масло" может быть использовано как добавка в косметические изделия и для профилактики гриппа А и В, а спиртовая настойка может быть испытана в качестве гепатопротек-

тора и при лечении заболеваний, где используются антиоксидантные и сосудоу-крепляющие свойства флавоноидов, а также в качестве бактерицидного и фунги-цидного средства. По токсикометрическим показателям оба экстракта относятся к IV классу опасности - вещества малоопасные по ГОСТ 12.1.007.

Основные выводы:

1.Предложена схема исследования состава экстрактивных веществ ПБ, растворимых в этаноле, основанная на их последовательном разделении на вещества растворимые в диэтиловом эфире, этилацетате, бутаноле и воде с последующей хроматографией выделенных групп соединений.

2.Показано, что основными компонентами спиртового экстракта являются флаво-ноиды, относящиеся к флаванонам, флавонам, флаванонолам и флавонолам, а также гидроксибензойпые и гидроксикоричные кислоты и сесквитерпеноиды.

3.Установлено строение соединений, в том числе неизвестных ранее: (Ш, 5Б) 10,10-диметил-5-метилол-4 (13), 7 (14)-диметиленбицикло [б.2.0.]-декана, (III, 32, 5И, 6Б) 11, 11-диметил-5, 6-дигидрокси- 3, 8 (15)-диенбицикло[7.2.0]-ундекана и (1Ы, 511, 6Б) 11,11-диметил-5, 6-дигидрокси-4 (14), 8 (15)-бисметиленбицикло [7.2.0]-ундекана, причем первое относится к новому типу сесквитерпеноидов. Впервые из растительного сырья выделены кумараты сесквитерпеновых спиртов, а из ПБ фла-ванонолы - 7-метиларомадендрин и аромадендрин, а также флавоноиды изосаку-ранетии, нарингенин и 7,4'-диметиловый эфир скутелляреина.

4.Предложена схема образования неизвестных ранее спиртов из оксида кариофил-лена с разрывом эпоксидной связи и образованием (III, 32, 511, 6Б) 11, 11-диметил-5, 6-дигидрокси- 3, 8 (15)-диенбицикло[7.2.0]-ундекана и (11*., 5Я, 6Б) 11,11-диметил-5, 6-дигидрокси-4 (14), 8 (15)-бисметиленбицикло [7.2.0]-упдекана и разрывом эпоксидной связи и связи углерод-углерод с образованием новой связи и первичного спирта.

5.Установлено, что наивысший выход экстрактивных веществ, переходящих в этанол, наблюдается в период перед раскрытием почек. Содержание практически всех компонентов этанольного экстракта значительно колеблется в зависимости от вре-

мени сбора. Максимальное содержание большинства флавоноидов в ПБ достигается осенью и весной, минимальное в зимний период.

б.Определены штаммы патогенных микроорганизмов по отношению к которым спиртовый экстракт ПБ обладает фунгицидным и бактерицидным действием, а по отношению к млекопитающим относится к IV классу опасности по ГОСТ 12.1.007.

Основное содержание диссертации изложено в следующих работах: 1 .Галашкина Н.Г., Ведерников Д.Н., Рощин В.И. Флавоноиды почек Betula pendula Roth. // Растительные ресурсы. - 2004. - вып. 1. - С. 62-68.

2.Ведерников Д.Н., Галашкина Н.Г., Рощин В.И. Групповой состав компонентов почек Betula pendula Roth. // Растительные ресурсы. - 2004. - вып. 2. - С. 83-89.

3. Галашкина Н.Г. Флавонолы почек березы повислой Betula pendula Roth. // Сб. докладов молодых ученых на ежегодной научной конференции Санкт-Петербургской лесотехнической академии: Вып. 5. СПб: СПбГЛТА, 2001.-С. 15-19. 4.Галаппсина Н.Г., Ведерников Д.Н., Рощин В.И. Кумараты сесквитерпеновых спиртов из почек березы повислой // II Всероссийская конференция "Химия и тех-

i нология растительных веществ".- Казань, 2002. - С. 37.

5. Галашкина Н.Г., Ведерников Д.Н., Рощин В.И. Динамика накопления и расходования флавонолов березы повислой в зависимости от времени сбора. // III Всероссийская конференция "Химия и технология растительных веществ".- Саратов, 2004.-С. 301-303.

6.Галашкина Н.Г., Ведерников Д.Н., Рощин В.И. Переработка почек березы // Актуальные проблемы лесного комплекса: Сб. науч. тр. / БГИТА. - Брянск: БГИТЛ, 2001.-Вып. 4.-С. 30-32.

7.Vedcrnikov D.N., Shabanova N.Y., Galashkina N.G., Migunova Y.V., Rrutov S.M., Roshchin V.I. Birch extractives and ways of their utilization // Sixth European Working on Lignocellulossing and Pulp., Sept. 3-6 2000. - Bordeaux, p. 641-643.

8.Galashkina N.G., Shabanova N.Y., Karachkina N.L., Vedemikov D.N., Roshchin V.I. The conversion of birch logging wastes and wood processing wastes. // The international conference on Sino-Russian economic, scientific and fechnical cooperation in forestry contributed paper., Harbin, 2003. - P. 38-45.

ГАЛАШКИНА НАТАЛЬЯ ГЕННАДЬЕВНА

АВТОРЕФЕРАТ

Подписано в печать с оригинал-макета 22.02.05. Формат 60x84/16. Бумага офсетная. Печать трафаретная. Уч.-изд. л. 1,0. Печ. л. 1,25. Тираж 100 экз. Заказ №42. С 1а.

Санкт-Петербургская государственная лесотехническая академия Издательско-полиграфический отдел СПбГЛТА 194021, Санкт-Петербург, Институтский пер., 3

РНБ Русский фонд

2005-4 44842

71 MAP 2085

528

Введение

1. Литературный обзор

1.1. Общие сведения о березе повислой

1.2.Фенольные компоненты биомассы березы повислой

1.2.1. Фенолокислоты и их производные 1 \

1.2.2. Флавоноиды 1Ъ

1.3.Терпеновые компоненты биомассы березы повислой

1.3.1.Сесквитерпеноиды

1.3.2. Тритерпеноиды

1.4. Биосинтез фенольных и терпеновых соединений

1.4.1. Биосинтез фенольных соединений 2 )

1.4.2. Биосинтез терпеноидных соединений

1.5. Функции и биологическая активность фенольных и терпеноидных соединений

1.6. Выделение и идентификация фенольных и терпеноидных соединений

2. Методическая часть

2.1. Отбор образцов для исследования

2.2. Методы определения основных характеристик исходных образцов березовых почек

2.3. Наработка экстрактивных веществ, растворимых в этаноле, и определение группового состава

2.4. Хроматографические методы анализа

2.4.1. Вещества, растворимые в диэтиловом эфире

2.4.2. Вещества, растворимые в этилацетате

2.4.3. Вещества, растворимые в бутаноле и воде

2.5. Химические методы анализа выделенных соединений 4 &

2.6. Инструментальные методы анализа

3.Экспериментальная часть $2.

3.1. Общая характеристика почек березы повислой 52.

3.2. Групповой состав экстрактивных веществ, растворимых в этаноле

3.3. Состав соединений спиртового экстракта, переходящих в диэтиловый эфир

3.4. Состав соединений березовых почек растворимых в этилацетате

3.5. Состав соединений бутанольной вытяжки и водного остатка спиртового экстракта березовых почек

4. Сезонная динамика накопления и расходования веществ березовых почек, растворимых в этиловом спирте

4.1. Динамика расходования и накопления отдельных групп соединений этанольного экстракта

4.2. Динамика индивидуальных соединений, переходящих в спиртовый экстракт

5. Изучение специфической активности спиртового экстракта 1.

5.1. Изучение бактерицидной активности

5.2. Изучение фунгицидной активности

6. Токсикологическая оценка экстракта

6.1. Токсичность веществ при энтеральной затравке

6.2. Ингаляционная токсичность

6.3. Действие на слизистую оболочку глаза

6.4. Действие на кожу 1 $2>

6.5. Способность к кумуляции 154 Выводы 157 Заключение 160 Список использованной литературы

Проблема рационального использования древесного сырья является одной из самых важных в лесном хозяйстве. Россия располагает неисчерпаемой сырьевой базой для развития лесохимической промышленности, основными задачами которой является удовлетворение потребностей народного хозяйства и расширение ассортимента получаемой продукции. Сырьем для этой отрасли промышленности наряду с древесиной служит древесная зелень и кора. Особого внимания заслуживает вопрос вовлечения в эксплуатацию быстрорастущих лиственных пород.

Береза имеет большое промышленное значение, так как является наиболее используемой среди лиственных пород. На долю лесов с преобладанием березы приходится до 14% всей лесопокрытой территории бывшего Советского Союза [1] . Береза также перспективна из-за своих давно известных лекарственных свойств. В народной медицине используются березовые почки, листья, деготь и уголь, получаемые при сухой перегонке коры и древесины.

Для хвойных пород древесины разработаны технологии переработки древесной зелени. Для лиственных пород таких технологий нет, так как лиственные породы являются сезонным сырьем, и отходы при заготовке лиственных пород не используются в промышленности. Одним из отходов заготовки лиственной древесины в зависимости от времени рубки являются ветви с почками или листьями. На лесосеке с каждого дерева теряется до 1,5 кг березовых почек [2]. Почки являются официнальным сырьем, настои которых применяют как диуретическое, желчегонное и бактерицидное средства [3]. Спиртовой настойкой из березовых почек протирают кожу при гнойничковых заболеваниях, плохо заживающих ранах, ссадинах и пролежнях. Ее рекомендуют при различных формах экзем. Также почки применяют при лечении всех форм и разновидностей ревматизма.

Наиболее часто в народной медицине используют следующие формы применения березовых почек: масляные вытяжки, спиртовые и водные настои и отвары. Известно, что березовые почки содержат значительное количество эфирных масел, обладающих фитонцидными свойствами, а также флавоноиды [4]. Широкий спектр заболеваний, при которых применяют березовые почки, свидетельствует о проявлении целебных свойств органическими соединениями различных классов. Иногда сопутствующие вещества снижают терапевтический эффект при лечении конкретных заболеваний. Так, упомянутые настои из-за смолистых соединений оказывают раздражающее действие на почки человека [4]. Решить эту проблему помогло бы разделение экстрактивных веществ на определённые компоненты и изучение их лечебных свойств. Более глубокое и всестороннее исследование химического состава экстрактов березовых почек необходимо для разработки технологии их переработки и целенаправленного использования.

Настоящая работа стоит в ряду исследований, посвященных определению химического состава экстрактивных веществ березовых почек, растворимых в растворителях с увеличивающейся полярностью. Ранее были изучены вещества, растворимые в углеводородных растворителях. Работа посвящена исследованию состава соединений березовых почек, растворимых в этиловом спирте. Необходимо отметить, что именно спиртовую настойку березовых почек чаще всего используют в народной медицине.

Целью данной работы является изучение химического состава спиртового экстракта березовых почек и определение его биологической активности, а так же поиск путей использования отходов лесозаготовительной промышленности, в частности почек березы.

Для достижения поставленной цели необходимо решить в первую очередь следующие задачи: определить качественный и количественный состав соединений березовых почек, переходящих в этиловый спирт; изучить динамику накопления и расходования основных компонентов спиртового экстракта; исследовать биологическую активность групп веществ и индивидуальных соединений, переходящих в полярные экстрагенты.

В литературном обзоре диссертации представлены данные по исследованию химического состава и распространению фенольных соединений и терпеноидов в различных частях дерева (лиственные породы, принадлежащие к семейству ВеШ1асеаё), результаты исследований по биосинтезу фенольных и терпеновых соединений в растениях. Рассмотрены методы выделения и установления строения фенольных соединений и терпеноидов в растениях, а также некоторые данные по биологической активности природных соединений.

Вторая часть диссертации посвящена методам анализа, которые применяли в экспериментальной работе. На основании литературных данных и предварительного анализа этанольного экстракта была разработана схема исследования суммарного спиртового экстракта. Здесь же представлены спектральные данные выделенных соединений и некоторые их физико-химические показатели, полученные в ходе эксперимента. Приведены условия проведения анализов индивидуальных соединений и их смесей спектральными и хроматографическими методами.

В экспериментальной части приведены результаты исследования качественного и количественного состава соединений суммарного этанольного экстракта березовых почек. Определена динамика накопления и расходования как суммарных фракций, так и индивидуальных соединений. Приведены также результаты изучения биологической активности и некоторые токсикометрические показатели суммарного экстракта.

В результате проведенных исследований установлен качественный и количественный состав основных компонентов, растворимых в этиловом спирте.

Установлено, что значительную часть спиртового экстракта составляют флавоноиды, относящиеся к четырем различным группам: флаванонам, флаванонолам, флавонам и флавонолам. В составе экстракта установлено наличие соединений, ненайденного ранее в почках березы типа флавоноидов - флаванонолов: 7-метиларомадендрина и аромадендрина. В экстракте найдена неизвестная по литературным данным группа соединений - сложные эфиры кумаровых кислот и сесквитерпеновых спиртов. Установлено строение соединений, неизвестных ранее - (1Я, 5Б) 10, 10-диметил-5-метилол-4 (13), 7 (14)-диметиленбицикло [6.2.0.]-декана, (III, ЗZ, 511, 6Б) 11, 11-диметил-5, 6-дигидрокси- 3, 8 (15)-диенбицикло[7.2.0]-ундекана и (1Я, 5Я, 6Б) 11, 11-диметил-5, 6-дигидрокси-4 (14), 8 (15)-бисметиленбицикло [7.2.0]-ундекана, причем (III, 58) 5-метилол-4 (13), 7 (14)-диметиленбицикло [6.2.0.]-декан относится к новому типу сесквитерпеноидов.

Определена в период октябрь-март динамика накопления и расходования экстрактивных веществ, растворимых в этаноле, его отдельных фракций (веществ, растворимых в диэтиловом эфире, этилацетате, бутаноле и воде), а также индивидуальных соединений. На основании данных этого исследования можно сказать, что содержание отдельных фракций и индивидуальных соединений колеблется в зависимости от времени года.

Исследована биологическая активность суммарного этанольного экстракта. Выявлено, что она обладает высоким бактерицидным, фунгицидным и фунгистатическим действием.

Определены токсикометрические характеристики этанольного экстракта березовых почек: ЬО50 не достигнуто, вещества не кумулируются, не раздражают кожу и не обладают кожно-резорбтивным действием.

1. Литературный обзор.

ВЫВОДЫ

На основании результатов проведенных исследований можно сделать • следующие выводы:

1 .Разработана схема анализа растворимых в этиловом спирте экстрактивных веществ почек березы повислой. Изучен состав соединений этанольного экстракта. Определено, что в диэтиловый эфир переходят более 75 % экстрактивных веществ почек растворимых в этаноле. Доля веществ, растворимых в этилацетате, бутаноле и воде, в сумме значительно меньше и находятся в соотношении 2:1:3, соответственно. Показано, что этанольный экстракт состоит из фенольных соединений: флавоноидов, фенолокислот; терпеноидов, в основном, из сесквитерпеноидов, а так же из моносахаридов.

2.Установлено, что основными компонентами, переходящими в спиртовый Ф экстракт, являются флавоноиды, относящиеся к четырем типам: флаванонам, флаванонолам, флавонам и флавонолам, причем представители типа флаванонолов ранее не были обнаружены в роде Веш1а. В сумме флавоноиды составляют от 30 % до 46 % от этанольного экстракта почек березы. Выделено и установлено строение 23 флавоноидных соединений. Среди них установлено строение 8 соединений, не найденных ранее в почках березы повислой (генкванин, изокемпферид, 3,3'-диметилкверцитин, изосакуранетин, нарингенин, 7-метиларомадендрин, аромадендрин, 7,4'-диметиловый эфир скутелляреина), кроме того, 5 из них ранее не обнаружены в роде ВеШ1а.

3. Определено, что основными терпеноидами спиртового экстракта ф являются сесквитерпеноиды двух типов: производные р-кариофиллена и а-гумулена. Среди них установлено строение трех соединений (1Я, 58) 10, 10-диметил-5-метилол-4 (13), 7 (14)-диметиленбицикло [6.2.0.]декана, (Ж, ЗZ, 511, 68) 11, 11-диметил-5, 6-дигидрокси- 3, 8 (15)-диенбицикло[7.2.0]-ундекана и (1Я, 511, 68) 11, 11-диметил-5, 6-дигидрокси-4 (14), 8 (15)-бисметиленбицикло [7.2.0]-ундекана, которые не были определены ранее в растительном сырье. Соединение (1Я, 58) 10, 10-диметил-5-метилол-4 (13), 7 (14)-диметиленбицикло [6.2.0.]-декан относится к неизвестному ранее типу сесквитерпеноидов. Впервые в растительном сырье определена неизвестная группа соединений класса сложных эфиров - кумараты сесквитерпеновых спиртов.

4. Определен состав веществ березовых почек, растворимых в бутаноле и воде. Показано, что основными компонентами обоих экстрактов являются моносахариды и многоатомные спирты, причем и в том и в другом экстрактах доминирующим компонентом является глюкоза.

5. Предложена схема образования неизвестных ранее спиртов из оксида кариофиллена с разрывом эпоксидной связи и образованием (1Я, ЗZ, 5Я, 68) 11, 11-диметил-5, 6-дигидрокси- 3, 8 (15)-диенбицикло[7.2.0]-ундекана и (III, 511, 68) 11, 11-диметил-5, 6-дигидрокси-4 (14), 8 (15)-бисметиленбицикло [7.2.0]-ундекана и разрывом эпоксидной связи и связи углерод-углерод с уменьшением кольца, образованием новой С-С связи и первичного спирта.

6. Изучено влияние времени года на накопление и расходование отдельных групп соединений этанольного экстракта, а также двадцати четырех индивидуальных соединений. Установлено, что наивысший выход экстрактивных веществ, переходящих в этанол, наблюдается в период перед распусканием почек, выход веществ, переходящих в диэтиловый эфир, снижается в период с осени до весны.

7.Изучена биологическая активность суммарного этанольного экстракта. Определено, что этанольный экстракт березовых почек обладает фунгицидной активностью в отношении ряда дрожжеподобных и нитчатых грибов, а также показывает бактерицидную активность в отношении Staphylococcus aureus. По токсикометрическим показателям относится к IV классу (малоопасные вещества, ГОСТ 12.1.007).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Ранее были изучены экстрактивные вещества березовых почек, растворимые в петролейном эфире. Вещества, экстрагируемые петролейным эфиром имеют сложный многокомпонентный состав. Основное содержание петролейноэфирного экстракта почек березы составляют сесквитерпеноиды кариофилланового ряда («50%), представленные в виде углеводородов, спиртов, оксидов, альдегидов и ацетатов спиртов. Помимо сесквитерпеноидов кариофиланового ряда в экстракте присутствуют сесквитерпеноиды гумуланового ряда, но в меньшем количестве [53, 55]. Некоторые из вышеперечисленных веществ обладают приятным запахом.

В результате проведенного нами исследования, выявлено, что этанольный экстракт на 30-46 % (10.7-14.0 % от массы сухого сырья) состоит из флавоноидов (в свободной форме), а также флавоноидов (в виде гликозидов), фенолокислот и терпеноидов.

На основании результатов изучения фракций веществ, растворимых в петролейном эфире и этиловом спирте, установили, что полученные экстракты имеют сложный многокомпонентный состав и значительно отличаются друг от друга по составу соединений.

Кроме того, были изучены медико-токсикологические свойства петролейноэфирного и этанольного экстрактов, установлена вирулицидная активность петолейноэфирного экстракта, а также фунгицидная и бактерицидная активности спиртового экстракта.

На основании установленного состава спиртового экстракта, и его биологической активности предлагаем вариант переработки ПБ (по ниже приведенной схеме), основанный на последовательной экстракции ПБ сначала петролейным эфиром, затем спиртом с получением двух продуктов — "березового масла" и спиртовой настойки. "Березовое масло" может быть использовано как добавка в косметические изделия и для профилактики гриппа А и В, а спиртовая настойка может быть испытана на гепатопротекторную активность при лечении заболеваний, где используются антиоксидантные свойства флавоноидов, а также в качестве бактерицидного и фунгицидного средства. По токсикометрическим показателям оба экстракта относятся к IV классу опасности — вещества малоопасные по ГОСТ 12.1.007.

Рис. 24. Схема переработки почек березы.

1. Черняева Г.Н., Долгодворова С .Я., Бондаренко С.М. Экстрактивные вещества березы. — Красноярск. — 1986. — 123с.

2. Ведерников Д.Н., Галашкина Н.Г., Рощин В.И. Групповой состав компонентов почек Betula pendula Roth. // Растительные ресурсы. — 2004. вып. 2. - С. 83-89.

3. Максютина Н.П. Растительные лекарственные средства. Киев. - 1985. — 280 с.

4. Знахарские рецепты (Лечебник доктора Куреннова П.М.). Барнаул: Алтайское книжное изд, 1990. 120 с.

5. Иванов А.Ф., Дерюгина Т.Ф., Кравченко Л.В. и др. Биология древесных растений. — Минск.: Наука и техника, 1975. — 264 с.

6. Никитин A.A., Панкова И.А. Анатомический атлас полезных и некоторых ядовитых растений. — Л.: Наука, 1982. 768 с.

7. Мутовина М.Г. Бондарева Т.А., Захаренко В.Н. Исследования в области переработки всей биомассы деревьев лиственных пород. 3. Сравнительные сульфатные варки ствола, ветвей, корней, коры березы и осины // Химия древесины. 1983. - № 2. - с. 41-47.

8. Изучить состав терпеноидов и кислот из древесной зелени и выдать рекомендации по их использованию. Определить состав кислот и нейтральных терпеноидов из побегов и листьев березы: Отчет о НИР / ЛТА; № ГР 01860062643 Л. - 1989. - 34 с.

9. Жеребов Л.П., Хибарный А.Ф. Об боразовании лигнина лиственныхпород. // Сб. тр. ЦНИЛХИМ. Л.Гос.думиздат: 1952 г. |Вып. XI - С. 8389.

10. Родионова A.C. Лесная ботаника. -М.: Лесная промышленность, 1980. -248 с.

11. П.Васильев А.Е., Воронин Н.С. и др. Ботаника: Морфология и анатомия растений. — М.: Просвещение, 1988. 480 с.

12. Кислицын А.Н. Экстрактивные вещества бересты: выделение, состав, применение. Обзор. // Химия древесины. 1994. - № 3. — С. 3-28.

13. Wollenweber Е. Flavonoids from Alnus crispa, Alnus japónica, Alnus koehnei and Alnus sinuata II Phytochemistry. 1974. - vol. 13. № 10. - P. 2318-2319.

14. Хворост О.П., Сербии А.Г., Комиссаренко Н.Ф. Химический состав, лекарственное и хозяйственное значение видов Alnus Mill. S. L. И Растительные ресурсы. 1984. - Т. XX. Вып. 3. - С. 430-443.

15. Похило Н.Д., Изопреноиды различных видов рода Betula И Химия природных соединений. — 1988. № 3. - С. 325-341.

16. Gross G.G. Phenolic acids. In The Biochemistry of Plants / ed. by P.K. Stumpf and E.E. Conn. 1981. - vol. 7. - P. 301 -316.

17. Theander O. and Lundgren L.N. Monoaryl natural products. In Natural Products of Woody Plants I / ed. by J.W. Rowe 1989. - chap. 7.1 .-Springer-Verlag.-Berlin.-Germany - P. 335.

18. Кононенко Г.П. Изучение химической природы ростингибирующего комплекса почек березы бородавчатой. Автореф. дис. .канд. хим. наук. -М. 1976.- 16 с.

19. Карачкина H.JL, Ведерников Д.Н., Рощин В.И. Галловая кислота почек березы Betula péndula Roth. // Актуальные проблемы лесного комплекса. Сб. науч. тр. / БГИТА. Брянск : БГИТА, 2001. - Вып. 4. - С. 9-10.

20. Mendez J., Gesto М., Vazquez A., Vieitez Е. Growth substances isolated from woody cutting of Alnus glutinosa Medic, and Fraximus exelsior L. // Phytochemistry. 1968. - vol. 7. № 4. - P. 575-579.

21. Fushino H., Satoh Т., Nobutoshi T. Chemical evaluation of Betula species in Japan. III. Constituents of Betula maximowicziana // Chem. Pharm. Bull. -1996.-vol. 44.№9.-P. 1748-1753.

22. Fuchino H., Saton T. and Tanaka N. Chemical evolution of Betula species in Japan. I. Constituents of Betula ermanii II Chem. Pharm. Bull. 1995. — vol. 43. № 11.- P. 1937-1942.

23. Запрометов M.H. Основы биохимии фенольных соединений. М.: Высшая школа, 1974.-212с.

24. Harborne J.B. Introduction to ecological biochemistry. London. 1989—356 p.

25. Harborne J.B. In Natural Products. Essex. Longman Scientific & Technical. / eds. Mann J. at. al. 1993. - P. 361-388.

26. H. Smith In Phytochrome. / eds. K. Mitrakos and W. Shropshire Academic Press. New York. 1972. - P. 433.

27. Ягодин В.И., ВыродовВ.А. Технология древесной зелени. 1996-92 с.

28. Böhm В.А. In The Flavonoids, Advances in research since 1980. London. Chapman & Hall. / ed. Harborne J.B. 1988. - P. 329-388.

29. Кононенко Г.Н., Поправко С.А., Вульфсон H.C. Флавоноидные агликоны почек березы бородавчатой {Betula Verrucosa) II Биоорганическая химия. 1975. - Т. 1. №4. - С. 506-511.

30. Wollenweber Е., Egger К. Flavonoid aglicone in Knospen-Exkret von Betula ermani // Z.Pfanzenphysiol. 1971. - Bd. 65s. - P.427-431.

31. Wollenweber E. Flavonoidmuster im Knospenexkret der Betulaceen // Biochemica. Systematics and Ecology. 1975. - vol. 3. — P. 47-52.

32. Ossipov V., Nurmi K., Loponen J. et. al. HPLC separation and identification of phenolic compounds from leaves of Betula pubescens and Betula pendula. II Journal of chromatography. 1996. - P. 59-68.

33. Böhm B.A. In The Flavonoids. London. Chapman & Hall. / eds. Harborne J.B. et. al. 1975. -P. 594.

34. Запрометов M.H. Фенольные соединения растений и их биогенез // Итоги науки и техники ВИНИТИ АН СССР. Биологическая химия. 1988. — Том27.-С. 1-188.

35. Поправко С.А., Кононенко Г.П., Тихомирова В.И., Вульфсон Н.С. Вторичные метаболиты березы. IV. Идентификация группы флавоноидных агликонов в почках березы бородавчатой (Betula verrucosa). II Биоорганическая химия. 1979. - Т. 5. № 11. — С. 1662-1667.

36. Wollenweber Е. New flavonoids from Betula Nigra. // Phytochemistry. -1977.-V. 16.-P. 295.

37. Wollenweber E. and Mann K. Flavonoids aglycones fron the bud exudetes of three Betulaceae И Z. Naturforschung С. 1991- vol. 46. № 5-6. - P. 495497.

38. Pawlowska L. Flavonoids in the leaves of Polish species of the genus Betula L.

39. V. The taxonomic position on the basis of flavonoids composition. // Acta Societies botanicorum poloniae. 1982.-vol. 51. № 3-4. - P. 413-421.

40. Ossipov V., Nurmi K., Loponen J. et. al. HPLC separation and identification of flavonoids from White birch Betula pubescens leaves. // Biochemical Systematics and Ecology . 1995. -vol. 23. № 3. - P. 213-222.

41. Hörhammer L., Vorndran E., Wagner H. Zur kenntnis der Flavonglykoside aus Betulaceen. //Archiv der Pharmazia. 1956. - 289/61 Bd. - P. 317-323.

42. Elbanowska A. Kaczmarek F. Badanie zawartoci zwiazkow flawonoidowich oraz dzialnia diuretycznego lisci brzozy {Betula verrucosa Ehrh.) w zaleanosci od ich fazy rozwojowej. // Herba Polonica. 1963. - R. 11 .-№ 1-2. - p. 47-56.

43. Hörhammer L., Wagner H., Luck R. Isoliezung eines myricetin-3-digalaktosides aus Betula verrucosa and Betula pubescens. // Archiv der Pharmazia. 1957.-290/62 Bd. -P.338-341.

44. Haslam E. In The Flavonoids. / eds. Harborne J.B. et. al. London. Chapman & Hall.-1975.-P. 505-560.

45. Treibs W. Beweis der Identität der Betulenolsäure mit der Homo-caryophyllensäure (II. Mitteil. Über die Betulenole) // Berichte der deutschen Chemischen Gesellschaft. 1938. - 7IB. № 3. - P. 613-620.

46. Holub M., Herout V., Horäk M., & Sorm F. On terpenes. CIV.* The Constitution of betulenols from oil from the buds of white birch (Betula alba L.) // Collect. Czech. Chem. Communications. 1959. - vol. 24 - P. 3730 -3738.

47. Вершняк B.M., Степень P.A. Содержание и состав эфирного масла в различных органах Betula pendula Roth, из Центральной Якутии // Раст. ресурсы. 1992. - Вып. 3. - С. 86-93.

48. Hiltunen R., Väisänen L. Identification of the main compounds in the bud oil of the bud oil of birch (B. pubescens Ehrh.) by gas chromatography mass spectrometry and chemical reactions // Acta Pharm. — 1983. vol. 92 - P. 137 —143.

49. Чернобровкина Н.П., Степанов A.A. Состав эфирных масел хвои ели, сосны, почек березы и листьев багульника. В кн.: Липидный обмен древесных растений в условиях севера. — Петрозаводск. 1983. - С. 128.

50. Колесникова Р.Д., Дерпожин Р.И., Попов В.К., Лоновских Ю.А. О составе эфирного масла из почек различных форм березы бородавчатой. В кн.: Генетические основы и методы селекции растений, -Воронеж. — 1979. -С. 278.

51. Vedernikov D.N., Shabanova N.Y., Galashkina N.G., Migunova Y.V., Krutov S.M., Roshchin V.l. Birch extractives and ways of their utilization // Sixth

52. European Working on Lignocellulossing and Pulp., France. Sept. 3-6 2000. -p. 641-643.

53. Vedernikov D., Shabanova N., Kosheleva E., Roshchin V. Birch buds and outer bark petroleum extract new compounds. //11 International symposium on wood and pulping chemistry. Nice, France. June 11-14 2001. — p. 95-97.

54. Vedernikov D.N., Roschin V.I. Sesquiterpenes from Betula Pendula Roth. Buds. // International Conference on Natural Product and Physiologically Active Substances. Russia, Novosibirsk, Nov. 30-Dec. 6 1998. - P. 45.

55. Похило Н.Д., Денисенко B.A., Новиков B.JI. и Уварова Н.И. 14-Оксикариофиллен-4,5-оксид новый сесквитерпен из Betula pubescens. II Химия природных соединений. - 1983. - № 4. - С. 598-603.

56. Demirci F., Demirci В., Baser К.Н.С. and Guven К. The composition and antifugal biossay of the essential oils of different Betula species growing in Turkey. // Химия природных соединений. 2000. - № 2. - P. 126-130.

57. Demirci F., Baser K.H.C., Demirci В., and Hamann M.T. New caryophyllen derivatives from Betula letwinowii. I I J. Nat. Prod. — 2000. — vol. 63. № 7. — P. 902-904.

58. Уварова Н.И., Малиновская Г.В. и др. Тритерпеноиды из листьев Betula costata II Химия природных соединений. 1976. - № 5. - С. 757-762.

59. Uvarova N.I., Malinovskaya G.V. et. al. Some new triterpenoids from leaves Betula costata Trautv. // Tetrahedron Letters. 1976. - № 50. - P. 4617-4620.

60. Похило Н.Д., Малиновская Г.В. и др. Тритерпеноиды из листьев сибирских видов берез Betula папа и В. exilis II Химия природных соединений. 1985. - № 3. - С. 352-356.

61. Малиновская Г.В. и др. Тритерпеноиды дальневосточных берез // Химия природных соединений. 1981. - № 3. - С. 323-329.

62. Ikekawa N., Ohta A. et.al. Two new triterpenes from Betula platyphylla H Phytochemistry. 1972. - vol. 11. - P. 3037-3040.

63. Habiyaremie I., Stevanovic-Janezic T. et.al. Pentacyclic triterpenes of yellow birch bark from Quebec. // Sixth European Working on Lignocellulossing and Pulp France, Sept. 3-6. 2000. P. 355-357.

64. Блажей А., Шутый Л. Фенольные соединения растительного происхождения. М.: Мир, 1977. -240с.

65. Маргна У.В. Взаимосвязь биосинтеза флавоноидов с первичным метаболизмом растений // Итоги науки и техники ВИНИТИ АН СССР. -М.-1990.-Том 33.-144с.

66. Luckner М. Secondary metabolism in microorganism, plants and animals. -Berlin, 1984.-576c.

67. Grisebach H. In: The Biochemistry of Plant Phenolics (ed. G.F. Van Sumere., P.J. Lea). Oxford Clarendon Press. 1985. - C. 185-198.

68. Черняева Г.Н., Долгодворова С.Я., Степень P.A. Утилизация древесной биомассы. Красноярск. - 1987. - 166 с.

69. Middleton Jr., Kandaswami С. In The Flavonoids, Advances in research since 1986. / ed. Harbome J.B. London. Chapman & Hall. 1994. - P. 619-652.

70. Smith D.A., Banks S.W. In Plant Flavonoids in Biology and Medicine: Biochemical, Pharmacological and Structure-Activity Relationships. / eds. Cody V. et.al. New York. Alan R. Liss. 1986. - P. 113-124.

71. Gabor M. (eds. Vane J.R., Ferreira S.H.) Handbook of Experimental Pharmacology: Anti-Inflammatory Drugs. Springer-Verlag. New York. 1979.ti -P. 698-739.

72. Cody V., Middleton E., Harborne J.B., Beretz A. In Plant Flavonoids in Biology and Medicine: Biochemical Pharmacological and Structure-Activity Relationships. New York. Alan R. Liss. 1988. - P. 356.

73. Reberuo P. Plant Phenolics. New York. - 1979. - 254 p.

74. Ведерников Д.Н., Рощин В.И., Кошкин A.B. Экстрактивные веществаберезы и направления их использования. // Всероссийская конференция "Химия и технология растительных веществ".-Сыктывкар, 2000. — С. 35.

75. Markham K.R. In: The Flavonoids. Isolation techniques for flavonoides. / ed. Harborne J.B. London. 1975. - P. 743.

76. Harbome J.B. Methods in Plant Biochemistry. Plant Phenolic. London. Acad. Press.- 1989.-Vol. l.-P. 1-28.

77. Геккелер К., Экштайн X. Аналитические и препаративные лабораторные методы. М.: Химия. 1994. - 409 с.

78. Markham K.R. In Methods in Plant Biochemistry. Plant Phenolic. Flavones, Flavonols and their Glycosides Vol. 1. / ed. J.B. Harborne Academic Press.1989.-P. 197-237.

79. Прохазка Ж. Фенолы и ароматические кислоты // Хроматография на бумаге. М.: Иностр. Лит., 1962. - С. 329.

80. Георгиевский В.П., Комиссаренко Н.Ф., Дмитрук С.Е. Биологически активные вещества лекарственных растений. — Новосибирск: Наука, Сиб. Отд-ние, 1990.-333 с.

81. Marbry T.J., Markham K.R., Thomas M.B. The Systematic Identification of Flavonoids. New York. 1970. - 345p.

82. Тюкавкина H.A., Горохова В.Г., Погодаева H.H., Бабкин B.A. Жидкостная хроматография растительных фенольных соединений. 1. Обращенно-фазовая хроматография моно- и дизамещенных флавонов // Химия древесины. 1979. - №2. - С. 100-104.

83. Горохова В.Г., Тюкавкина H.A., Бабкин В.А., Колесник Ю.А. Жидкостная хроматография растительных фенольных соединений. 3. Обращенно-фазовая хроматография фенолокислот // Химия древесины. 1979. - №4. -С. 76-80.

84. Markham K.R., Marbry T.J. In: The Flavonoids. Ultraviolet-visible and Magnetic Resonance spectroscopi of Flavonoids / eds. Harborne J.B. et.al. New York London. - 1975. - P. 45

85. Клышев JI.K., Бандюкова B.A., Алюкина JI.C. Флавоноиды растений.

86. Алма-Ата.: Наука, 1978. 205 с.

87. Markham K.R. Techniques of flavonoid identification. London. Acad. Press. — 1982.-P. 113.

88. Казицина JI.A., Куплетская H.A. Применение УФ-, ИК-, ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии. М.: Химия. — 1980 238 с.

89. Вайсбергер А. Установление структуры органических соединений физическими и химическими методами. М.: Химия, 1967-Том. 1.-514 с.

90. Эмсли Дж., Финей Дж., Сатклиф Л. Спектроскопия ЯМР высокого разрешения. М.: Мир, 1969. Том. 2. - 452 с.

91. Batterham Т.J., Highet R.J. Nuclear magnetic resonance spektra of flavonoids // Aust. J. Chem. 1964. - Vol. 17. - P. 428-439.

92. Оболенская А.В., Ельницкая З.П., Леонович А.А. Лабораторные работы по химии древесины и целлюлозы: Учебное пособие для ВУЗов. — М.: "Экология". 1991. - с. 72-73

93. Емельянова И.З. Химико-технический контроль гидролизных производств. 2-е изд., перераб. - М. - 1976. - 368 с.

94. Лурье. Хроматографические материалы. М.: Химия, 1978. 438 с.

95. Органикум. Приктикум по органической химии. В двух томах т. II / перевод с немецкого В.М. Потапова, C.B. Понамарева, М., Изд-во Мир. -1979.-442 с.

96. Микельсон А.Э., Шарапова Т.Е., Домбург Г.Э. Газохроматографическое определение углеводов древесины в виде ацетоальдонитрилов // Химия древесины. 1980. - № 2. - С. 94-99.

97. Рощин В.И. Состав, строение и биологическая активность терпеноидов ели, сосны и пихты. Дисс.док. хим. наук. СПб, 1995. 431 с.

98. Ibrahim R. and Barron D. In Methods in Plant Biochemistry. Plant Phenolic. Phenylpropanoids Vol. 1. / ed. J.B. Harborne Academic Press, 1989. — P. 75112.

99. Артемкина H.А. Низкомолекулярные фенольные соединения древесной зелени ели европейской Picea abies (L.) Karst. Дисс.канд. хим. наук. СПб, 2001. 177 с.

100. Barrero A.F., Molina J., Oltra J.E., Altarejos J., Barragan A., Lara A., Segura M. Stereochemistry of 14-hydroxy-P-caryophyllene and related compounds // Tetrahedron. 1995.-v.51. № 13.-P. 3813-3822.

101. Clericuzio M., Toma L. and Vidari G. Isolation of new caryophyllane ester from Lactarius suhumbonatus: conformational analysis and absolute configuration. // Eur. J. Org. Chem. 1999. - P. 2059-2065.

102. Barrero A.F., Oltra J.I., Altarejos J., Barragan A., Lara A. Minor components in the essential oil of Juniperus oxycedrus L. Wood // Flavour and fragrance journal. 1993.-vol. 8.-P. 185-189

103. Ткачев А.В, Гатилов Ю.В., Багрянская И.Ю. Реакции меркурирования кариофилленов. // Ж. Орг. Химии. 1985. - т. 21. — вып. 3. - с. 541-556

104. Терпеиоиды хвойных растений. / Под Ред. Семенова A.A., Пентеговой В.А., Дубовенко Ж.В. и др. Наука, Новосибирск. - 1987. - 97 с.

105. Галашкина Н.Г., Ведерников Д.Н., Рощин В.И. Динамика накопления и расходования флавонолов березы повислой в зависимости от времени сбора. // III Всероссийская конференция "Химия и технология растительных веществ".- Саратов, 2004. С. 301-303.

106. Поправко С.А., Соколов И.В., Торгов И.В. Новые природные триглицериды // Химия природных соединений 1982- №2.- С. 169-173.

107. Поправко С.А., Кононенко Г.П., Родионов Б.В. Изучение масс-спектрометрического поведения природных флавоноидных агликонов и продуктов их исчерпывающего метилирования и тридейтерометилирования // Биоорганическая химия. — 1980. — Т. 6. № 2.- С. 267-279.

108. Поправко С.А., Гуревич А.И., Колосов М.Н. Флавоноидные компоненты прополиса. // Химия природных соединений. 1969. — № 6. — С. 476-482.

109. Поправко С.А., Кононенко Г.П., Соколова С.А., Сизой М.Н., Вульфсон И.С. Вторичные метаболиты березы III. Идентификация ингибиторов роста в почках Betula verrucosa II Биоорганическая химия. — 1979. Т. 5. № 5. - С. 735-744.

110. Степанова Т.А., Шейченко В.И., Смирнова Л.П., Глызин В.И. Флаваноны Tanacetum sibiricum. II Химия природных соединений. — 1981.- № 6. С. 721-728.

111. Wollenweber Е., Lebreton Ph. Le bétulétol (dihydroxy-5,7-diméthoxy-4',6 flavonol) at le méthyl 3 bétulétol, nouveaux composes naturels, extracts de Betula ermanii Cham. // Chem.Biochimie. - 1971. - V. 53. - P. 935-938.

112. Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография: В 2 т.: Т.1. Пер.с англ. Д.Н. Соколова и М.И. Яновского. М.: Мир, 1981. - 616 с.

113. Hurabielle М., Eberie J., Paris М. Flavonoids of Artemisia campestris, ssp. glutinosa II Planta medica. 1982. - v. 46. - P. 124-125.

114. Harborne J.B., Mabry T.J. The Flavonoids. 1975. -1197p.

115. Yoshida Т., Nobuchara J., Uchida M., Ocuda T. Buddledin А, В and C, Piscicidal sesquiterpenes from Buddleja davidi Franch. // Tetrahedron. — 1996. -p. 7961-7972.

116. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование: Семейства Magnoliaceae Limoniaceae. —JI. — 1984. - 460с.

117. Карачкина Н.Г., Ведерников Д.Н., Рощин В.И. 1,9,10-тригидроксикариолан из почек Betula pendula Roth. II II Всероссийская конференция "Химия и технология растительных веществ".— Казань, 2002.-С. 36.

118. Ведерников Д.Н., Рощин В.И. Эфирорастворимые вещества березовых почек. III Всероссийское совещание "Лесохимия и органический синтез". Тез. Доклад, Сыктывкар, 28 сент.-2 окт. 1998. С. 34.