автореферат диссертации по химической технологии, 05.17.05, диссертация на тему:Синтез и изучение свойств конъюгатов порфиринов с углеводами

РГВ од

-9 янв ?пп<?

На правах рукописи

АКСЕНОВА АННА АЛЕКСАНДРОВНА

СИНТЕЗ И ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ КОНЪЮГАТОВ ПОРФИРИНОВ С УГЛЕВОДАМИ

05.17.05 - Технология продуктов тонкого органического синтеза

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Москва - 2000

Работа выполнена на кафедре Химии и технологии тонких органических соединений Московской государственной академии тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова.

Научный руководитель: доктор химических наук,

профессор Миронов А.Ф. Официальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор Преображенская М. Н..

кандидат химических наук Чудинов A.B.

Ведущая организация: Институт биомедицинской химии РАМН

Защита состоится "¿Х^ " декабря 2000г. на заседании Диссертационного Совета Д 063.41.01 в Московской государственной академии тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова по адресу: 117571, Москва, пр. Вернадского, 86.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МИТХТ им. М.В. Ломоносова (119831, Москва, ул. М. Пироговская, 1). Автореферат разослан " ноября 2000 г.

Ученый секретарь Совета, кандидат химических наук

даа$ о „О

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одним из перспективных и быстро развивающихся методов диагностики и лечения злокачественных новообразований является фотодинамическая терапия (ФДТ) рака. Метод основан на способности некоторых соединений - фотосенсибилизаторов (ФС) - накапливаться в опухолях и при освещении светом определенной длины волны либо флуоресцировать, обозначая границы опухоли, либо инициировать серию фотохимических реакций, приводящих к разрушению раковых клеток. Современное развитие ФДТ в значительной мере связано с созданием новых ФС, имеющих улучшенные спектральные, фотохимические и биологические характеристики. Поиск ФС нового поколения требует создания модельных структур, позволяющих установить зависимость поведения в биологических условиях от особенностей химического строения сенсибилизатора. Обобщение большого экспериментального материала позволило сделать вывод о том. что наибольшее сродство к опухолям проявляют амфифильные соединения, которые легко встраиваются в плазматическую мембрану. В связи с этим водорастворимые производные порфиринов, содержащие ковалентно связанные остатки Сахаров, представляют значительный интерес для ФДТ. Введение в состав молекулы ФС моносахаридных фрагментов позволяет целенаправленно регулировать амфифильность ФС, ускорять выведение его из организма и повышать селективно« ь накопления в опухоли. Разработка новых методов синтеза позволит значительно расширить спектр амфифильных сенсибилизаторов, а направленное варьирование числа и состава углеводных фрагментов даст возможность получать сенсибилизаторы, способные избирательно воздействовать на различные ткани организма.

Представленная работа является частью фундаментальных научных исследований, проводимых на кафедре Химии и технологии тонких органических соединений МИТХТ им. М.В. Ломоносова в рамках темы 1Б-4-865 "'Синтез супрамолекулярных структур на основе порфиринов, липидов и углеводов с целью изучения жизненноважных процессов, протекающих в клетке".

Цель работы. Диссертационная работа посвящена изучению методов синтеза порфириновых структур, ковалентно связанных с различными углеводными фрагментами, для исследования зависимости их физико-химических и биологических

свойств от строения, в частности, исследования связи структура - фотодинамическая активность. В качестве исходных соединений для синтеза были выбраны производные природного хлорофилла а - феофорбид а и пирофеофорбид а, которые широко изучаются в настоящее время в качестве ФС для ФДТ рака.

Научная новизна работы. В процессе работы изучены методы введения углеводных фрагментов в структуру природных хлоринов, содержащих различные функциональные группы, позволяющие направленно изменять амфифильность получаемых соединений. Предложен удобный метод гликозилирования производных природных хлоринов полными ацетатами Сахаров в присутствии кислот Льюиса. Впервые осуществлен синтез производных феофорбида а и пирофеофорбида а. связанных с различными моносахаридными остатками О- и S- гликозидной, простой эфирной и амидной связями. Получены конъюгаты, в которых углеводные фрагменты связаны с макроциклом через серо- и кислородсодержащие спейсерные участки различной длины, что позволяет изучать их взаимодействие со специфическими рецепторами плазматической мембраны опухолевых клеток. Изучены спектральные и физико-химические свойства полученных соединений, исследовано их поведение в водных растворах. Ряд синтезированных конъюгатов передан для проведения биологических испытаний в Научно-исследовательский онкологический институт им. П. А. Герцена.

Практическая значимость работы. Разработанные методы гликозилирования производных природных хлоринов позволяют использовать их для получения гликоконъюгатов, содержащих различные моно- и олигосахаридные фрагменты, соединенные с иорфириновым макроциклом сиейсерами различной длины Совокупность свойств полученных соединений делает возможным их использование в качестве моделей при медико-биологических исследованиях по созданию нового типа фотосенсибилизаторов для ФДТ рака.

Апробация работы. Основные результаты работы были доложены на VÜI Международной конференции по спектроскопии и химии порфиринов и их аналогов (Минск, 1998), III Международном симпозиуме "Новые и традиционные растения и перспективы их использования" (г. Пущино, 1999), VI Международной конференции "Наукоемкие химические технологии" (Москва, 1999), Школе-конференции "Горизонты физико-химических технологий" (г. Пущино, 2000), IV Школе молодых ученых иран СНГ по химии порфиринов и их аналогов (г. Иваново, 2000).

Публикации. По материалам работы опубликованы 2 статьи, тезисы 5 докладов. 1 статья находится в печати.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Синтез производных феофорбида а и пирофеофорбида а, связанных с моносахаридными остатками простой эфирной связью.

2. Синтез производных пирофеофорбида а, связанных с углеводными фрагментами О-гликозидной связью.

3. Синтез 8-гликозилированных производных пирофеофорбида а.

4. Синтез производных пирофеофорбида а, связанных с аномерным центром углевода через различные спейсерные участки.

5. Изучение спектральных и физико-химических характеристик полученных соединений.

Содержание работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, обсуждения результатов, экспериментальной части и списка литературы. Работа изложена на /// страницах, включает рисунков и б таблиц. Список

литературы содержит источников.

РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

К настоящему времени синтезировано большое количество гликопорфирннов. однако какого-либо систематического исследования их фотодинамических свойств в литературе не обнаружено. Большинство из описанных гликозилированных порфиринов относятся к производным тетрафенилпорфиринов. Однако при всей значимости синтетических ФС основные перспективы создания преиараюв новою поколения связывают с производными природных хлоринов. Эти соединения обладают химической структурой, подобной эндогенным порфиринам. в связи с чем их катаболизм и выведение из организма не вызывает побочных эффектов. Кроме того, они имеют интенсивное поглощение в красной области спектра, для которой ткани более "прозрачны", и обладают низкой темновой токсичностью. Производные хлорофилла а - феофорбид а и пирофеофорбид а - в основном удовлетворяют требованиям, предъявляемым к ФС второго поколения и в настоящее время рассматриваются в качестве альтернативы порфириновым сенсибилизаторам, однако имеют ряд недостатков. К ним относятся слабая растворимость в воде и других жидкостях и кровезаменителях, пригодных для внутривенного введения, а 1акл;*

недостаточная селективность накопления в опухолях. С другой стороны, наличие в этих соединениях различных функциональных групп (винильной и карбоксильной) позволяет осуществлять их структурную модификацию в направлении требуемых свойств. Введение полярных углеводных фрагментов позволяет повысить растворимость в воде, что благоприятствует быстрому удалению сенсибилизатора из организма после терапии, а гликозидные остатки могут участвовать в процессах межклеточного узнавания, повышая тем самым селективность накопления в раковых клетках. В связи с изложенным была поставлена задача получения различных гликоконъюгатов на основе производных феофорбида а с-целью изучения влияния природы углеводных остатков и типа связи между углеводом и порфирином на физико-химические и биологические свойства соединений как возможных агентов для ФДТ рака.

1. Синтез производных феофорбида а и пирофеофорбида а, связанных с моносахаридными остатками простой эфирной связью.

Водорастворимые производные порфиринов, связанных с остатками Сахаров простой эфирной связью, достаточно устойчивы и не расщепляются под действием ферментов. Нами были получены гликопроизводные феофорбида а и пирофеофорбида а, в которых связь осуществляется по Сб-атому углевода. В качестве углеводных заместителей были выбраны производные О-глюкозы и О-галактозы.

Многочисленные модификации природных хлоринов обычно связаны с возможностью различных превращений винильной группы в пирролыюм кольце А. Для синтеза нами было использовано два метода (рис. 1):

1) присоединение бромистого водорода с образованием соответствующих а-бромэтильных производных с последующим замещением атома брома на спиртовой остаток;

2) трифторацетатный метод.

1) Гидробромированис феофорбида а (1) и пирофеофорбида а (2) проводили свежеприготовленным 40% раствором НВг в ледяной уксусной кислоте в течение 24 ч.

ын

n мн' \\

Н

ноос

(3):

(4):

"3"' н

соосн, Р*2=Н

Р,ООС

(V

(5>-(12) Н (а), СН3(6)

н °

(1). Я2= СООСН3

(2): Г?2= Н

(5-ба.б): Я= ~оТ_п . где Я^СООСНз (5); Н(6)

(7-8а,б):И= '%Т-0ЧУ0Н ■ ГДе Яг^СООСНз (7), Н(8)

—оснг

(9а,б). 1_о оас , и2=н

(10а,б): —

£он >он

Я2=Н

он

(11а,б): 13- ОН, Р*2=Н (12а):Я=ОСОСР3. Р2=Н

Рис.1. Синтез производных феофорбида а и пирофеофорбида а, связанных с углеводными фрагментами простой эфирной связью.

После удаления кислоты в вакууме получат бромиды (3) и (4). которые ввид\ их лабильности непосредственно использовали в последующих превращениях. Для увеличения селективности реакции алкилирования были взяты 1.2;3,4-ди-0-изопропилиден-а-£)-галактопираноза и 1,2,3,4-тетра-0-ацегил-/?-£>-глюкопираноза. При взаимодействии бромпроизводных (3), (4) с соответствующим углеводом происходит замещение атома брома на спиртовой остаток при шестом атоме углерода с образованием гликофеофорбида (5а) и гликопирофеофорбидов (6а) и (9а).

Были изучены различные условия проведения этой реакции. Установлено, что реакция протекает с достаточным выходом только в присутствии основных реагентов.

связывающих выделяющийся НВг (безводный поташ или 4-диметиламинопиридш1) Однако, в них условиях возможно также протекание конкурирующей реакшм •элиминирования НВг с образованием винильной группы. Наибольший выход целевой продукта (32. 30 и 21% для соединений (5а), (6а) и (9а). соответственно) наблюдало: при медленном прикапывании раствора 4-диметиламиногшридина к смеси бромида I углевода в безводном хлороформе при небольшом нагревании (45-50°С) в течение 2 ч

После удаления защитных групп получали гликофеофорбид (7а) I гликопнрофеофорбиды (8а) и (10а). Обработкой Нг504 в .метаноле получал, соответствующие амфифильные конъюгаты (76), (86) и (105). В стандартных условия: метанолиза (5% НгБОд, 24 ч) возможно также образование метилгликозидов. В случа соединения (106) эта проблема была решена проведением метанолиза до удален и ацетильных групп и последующим дезацетилированием в условиях. сохраняюши карбоксиметильную группу (1% раствор МеОЫа в метаноле). Однако для (7а) и (8а такая последовательность стадий не давала удовлетворительных результатов в связи близостью реакционной способности изопроиилиденовой защитной группировки сложноэфирной группы. Метиловые эфиры (76) и (86) удалось получить достаточным выходом (70-80%) при сокращении времени метанолиза до 5 ч уменьшении концентрации серной кислоты до 2-3%. По данным ТСХ. ПМР- и масс спектров в этих условиях образования заметных количеств замещении метилгалактопиранозидов не происходит, однако при более длительной обработке (2 ч) их выход возрастает до 70%.

По данным 'Н-ЯМР-спектроскопии гликофеофорбид (5) гликопнрофеофорбиды (6) и (9) образуются в виде практически эквимолярных смесе двух диастереомеров. В ПМР-спектрах этих соединений сигналы л/езо-протона 5-1-расположенного наиболее близко к хиралыюму заместителю, представляют собой синглета. что говорит об образовании смеси 2 изомеров, сигналы метильной грунпь связанной с асимметричным атомом углерода феофорбида - 2 дублета с одинаково интенсивностью (2.17 и 2.14 м.д.). Конъюгаты со свободными гидроксильным группами (7), (8) и (10) представляют собой смесь а- и /}- аномеров. чт подтверждается дополнительным расщеплением сигналов ,у«о-протонов каждою I диастереомеров. а также наличием сигналов аномерных прогонов в области 4.3 мл. (; аномер) и 4.9 (аг-аномер) в виде мульгиплетов.

2) Синтез соединений (8) и (10) был осуществлен по несколько иной схеме, основанной на превращении а-гидроксиэтильной группы в трифторацетаг обработкой ангидридом трифторуксусной кислоты. который затем конденсируют с соответствующим спиртом. Необходимый для синтеза гидроксипирофеофорбид (11) получали гидролизом бромида (4). Трифторацетат (12) оказался значительно устойчивее бромида, что привело к уменьшению количества побочных продуктов и повышению выхода. Конденсацию (12) с углеводами проводили в безводном хлороформе в присутствии каталитических количеств ДМАП при 40°С в течение 24 ч. Выходы соединений (6а) и (9а) составили 56% и 38% в расчете на гидроксипирофеофорбид (11а). Несмотря на увеличение количества стадий, общий выход в расчете на пирофеофорбид а также оказался выше (25 и 36% для (6а) и (9а). соответственно). Использование этой схемы может оказаться более выгодным в связи с возможностью выделения, очистки и хранения промежуточного трифторацетата.

2. Синтез производных пирофеофорбида я, связанных с углеводными фрагментами О-гликозидной связью.

Первый шаг в этом направлении заключался в апробации некоторых методов, применяемых в химии углеводов для получения гликозидов. Наиболее широко используется мегод гликозилирования ацетобромсахарами в присутствии карбоната или оксида серебра (метод Кснигса-Кнорра). Однако условия проведения реакции (длительность процесса, присутствие окислителя) оказались непригодны при использовании в качестве агликона лабильных производных хлорина. Применение в качестве акцептора бромоводорода солей ртути (модификация Гельферича) также не приводило к желаемым продуктам. Положительные результаты удалось получить при использовании метода гликозилирования перацетатами углеводов а присутствии кислот Льюиса (рис. 2). Этот подход позволяет получать аномерио чистые аткилгликозиды в мягких условиях и с хорошими выходами. При этом используются доступные реагенты и все стадии процесса не вызывают каких-либо затруднений. В качестве исходного соединения использовали а-гидроксиэтилпирофеофорбид (11). Реакция гликозилирования проводится в среде безводного хлористого метилена при комнатной температуре. В качестве кислоты Льюиса использовались SnCU и эфират трехфтористого бора. Наличие в соединении (11а) двух реакционных центров (ОН- и

СООН-групп) обуславливает возможность образования сложноэфирной связи между двумя молекулами (11а) в условиях реакции. Чтобы исключить этот процесс, остаток пропионовой кислоты защищали метиловым эфиром (116).

Выход реакции гликозилирования и наличие побочных продуктов зависш от соотношения реагентов и времени реакции. Оптимальным ока!алось cooiношение пентаацетат /î-Д-глюкозы - гидроксипирофеофорбид - кислота Льюиса 2:1:2. Использование большего (5-10-кратного) избытка кислоты Лыоиса приводит к образованию нерастворимою комплекса с гидрокснпирофеофорбидом и сннжению выхода.

RiOOC

(13-19)

R,= H(a).CH3(6)

■(13-14а,б): R=

о О'

(15-16а,б): R= с

(17-18а,б ). R=

(1Эа,6): R=

LOR'

OR-

OR'

OR'

OHj._n S'

, где R- Ac ( 13), R'= H ( 14)

, где R'= Ac ( 15), R'= H ( 16)

. где R'= Ac ( 17), R'= H ( 18)

Рис. 2 О-и Б-гликозшированные производные пирофеофорбида а.

OR'

OR

OR'

Оптимальное время реакции составило 12-15 ч. В этом случае выход продукта (13) составил 36%. аномерная чистота 83%. Увеличение времени до 24 ч почваше! повысить полноту протекания реакции, однако при этом происходит увеличение количества а-аномера (до 30%). Еще большая продолжительность реакции приводит к частичной деструкции как продукта, так и исходных соединений, в частности, наряду с целевым продуктом отмечено образование пирофеофорбида и (2).

Выбор кислоты Льюиса не оказывает сколько-нибудь принципиальною воздействия на процесс. Однако ВРз-ОЕ12 является все же более эффективным

промотором, так как он менее подвержен гидролизу, чем SnCl4 (что приводит к появлению примеси сг-аномера).

Соединение (136) образуется в виде смеси диастереомеров в соотношении 2:3. о чем свидетельствует расщепление сигналов .иезо-протонов на 2 синглета в 1IM1'-спектре. Сигналы аномерного протона представлены двумя дублетами с соотношением интенсивностей 83:17. Первый - с химическим сдвигом 4.53 м.д. и константой спин-спинового взаимодействия Ju 8.4 Гц - соответствует /^-конфигурации аномерного центра, второй - с 5 4.91 м.д. и J1.2 2.2 Гц (а-аномер). Дезацетилирование соединения (136) каталитическими количествами метилата натрия в метаноле приводило к целевому продукту (145) в виде метилового эфира с почти количественным выходом. Галактозиды (15, 16) получали аналогично с выходом (39 %) и соотношением (1:9).

Для получения водорастворимых производных (14а, 16а) метиловые эфиры гидролизовали 5% NaOH в ТГФ в течение 24 ч. Кислотный гидролиз в данном-случае непригоден, поскольку может приводить к разрыву гликозидной связи.

3. Сннтез S-гликознлированных производных ипрофеофорбида.

Известно, что серосодержащие ФС часто проявляют высокую активность при ФДТ. Однако в литературе имеются ограниченные сведения о синтезе и свойствах S-гликозилированньгх порфиринов. Замена О-гликочидной связи на S-гликозилимо повышает гидролитическую стабильность и придает молекуле устойчивость к действию гликозидаз. Кроме того, получение тиогликозидов представляет интерес для исследования структурных и динамических свойств соединений, обеспечиваемых гликозидной связью. В связи с изложенным . нам показалось интересным синтезировать тиоаналоги соединений (13-16) с целью изучения влияния типа гликозидной связи на свойства ФС.

Для получения тиоглюкозидов (17-18) (рис. 2) исходным соединением служил бромид (4). Были рассмотрены варианты использования в качестве синтонов р-D-глюкозилмеркаптана как в виде 2.3.4.6-тетра-О-ацетилированного производного, так и в виде производного со свободными ОН-группами (в виде натриевой соли). В первом случае реакцию проводили в безводном хлороформе. Через 4 ч по данным ТСХ основным компонентом реакционной смеси был пнрофеофорбид а (2) и выход

продукта (17) не превышал 10%. Удаление защитных групп 1% раствором \leONa в МеОН приводило к соединению (18а). При использовании в качестве реагента глюкозилмеркалтида натрия (2-х кратный избыток) в безводном ДМФА реакция полностью протекает за 30-40 мин. Наряду с целевым продуктом также отмечено образование небольшого количества пирофеофорбида а. Отмечено, что на выход оказывает влияние последовательность добавления реагентов. Наибольший выход (54%) наблюдался при постепенном добавлении бромида к суспензии глюкозилмеркаптида в ДМФА. Метиловый эфир (186) получали обработкой 3% Н^О^ в метаноле в течение 8 ч с выходом 87%. По данным ПМР-спектра полученное соединение не содержит примеси а-ано^ера. Сигнал аномерного протона представлен дублетом с химическим сдвигом 4.66 м.д. и константой спин-спинового взаимодействия 9 Гц, характерной для /3-аномера. Сигналы лкуо-протонов 5-Н и 20-Н расщепляются на 2 синглета с одинаковой интенсивностью каждый, что свидетельствует об образовании эквимолярной смеси диастереомеров.

Тиогалактозиды (19а,б) получали аналогично, однако выход был несколько ниже (44%) из-за высокой гигроскопичности исходного галактозилмеркаптида и как следствие - частичного гидролиза бромида (4). В ПМР-снектре соединения (196) в области аномерных протонов наблюдается дублет с химическим сдвигом 5.05 м.д. и КССВ 10 Гц, что свидетельствует об образовании продукта с /^-конфигурацией аномерного центра. Расщепление сигналов .иезо-протонов аналогично описанному для соединения (18).

4. Синтез производных пирофеофорбида а, связанных с аномсрным центром углевода через спенсерные участки.

Многочисленные примеры биологического узнавания на клеточном уровне позволяют считать, что каждый тип клеток имеет присущую только ему архитектонику клеточной поверхности. Участие в реакциях узнавания на клеточном и молекулярном уровнях является одной из важнейших функций, выполняемых углеводами в организме,. Углеводсвязывающие белки - лектнны - способны специфически связывать определенные моносахариды, причем, как правило, белок обнаруживает специфичность по отношению к аномерной конфигурации сахара. С целью изучения возможности участия углеводных фрагментов гликопорфиринов в

процессах межклеточного узнавания и связывания с лектинами опухолевых клеток нами был получен ряд конъюгатов (21)-(30). имеющих углеводные заместители в различных положениях макроцикла. При этом углеводная и порфириновая части н этих соединениях разделены небольшими атифатическими мостиками. Интерес к такой компоновке молекулы гликопорфирина объясняется тем фактом, что наличие спейсера способствует более благоприятным условиям для связывания с различными лектинами.

Для синтеза были использованы несколько подходов. Первый заключался в создании производного пирофеофорбида. имеющего первичную спиртовую группу, связанную с макроциклом через спейсер, и последующем его гликозилировании. Для этого бромид (4) обрабатывали избытком меркаптоэтанола в безводном хлороформе в течение 1 ч, получая смесь (20а) (рис. 3) и продукта его этерификации меркаптоэтанолом по остатку пропионовой кислоты. После гидролиза сложноэфнрной группы в смеси НС1 - ацетон (1:1) и метанолиза получали соединение (206) с выходом 87 %. В дальнейшем это соединение гликозилировали по описанному выше методу пентаацетатами £)-глюкозы и О-галактозы в присутствии эфирата трехфтористого бора с образованием (216), (236).

Согласно данным ПМР-спектрометрии, продукты образуются преимущественно в виде /?-аномеров. Удаление защитных групп приводило к соответствующим амфифильным производным (226). (246). Поскольку полученные гликозиды чувствительны к действию кислот, для получения водорастворимых производных (22а) и (24а) метиловые эфиры гидролизовали 5% КаОН в ТГФ.

Другой путь основан на получении на первом этапе соответствующего углеводного производного, имеющего первичную гидроксильную группу, и его последующей конденсации с бромпроизводным пирофеофорбида (4). Таким способом был получен конъюгат (25), имеющий более длинный спейсерный участок. Исходный 2.3.4,6-тетра-0-ацетил-3-(2-гидроксиэтилтио)пропил-/^0-глюкопиранозид получали присоединением меркаптоэтанола к тетраацетату аллил-уЗ-О-глюкогшранозида Конденсация с бромидом (4) в присутствии ДМАП давала соединение (25а) с выходом 28%. Трифторацетатный метод в данном случае не давал положительных результатов вследствие постепенного гидролиза трифторацетата (12а) до гидроксипроизводного (11а) в условиях реакции, что может быть связано с наличием в исходном сахаре

Р!,ООС

(20-26) Я,= Н(а),СН3(б)

(20а,б): Я= ЭСН 2СН2ОН

ОИ'

С_0 осн2снгз—

(21-22а,б): '/оя ^ . где Ас '21)

—Г ^Н ¡22)

(23-24а,б): [?= о осн2сн2з— ГдеР{'=АС (23)

У Н (24)

ОИ'

ОН'

с_о 0(снг)3зснгсн20—

(25-26а,б): К=

, где Р - Ас ;25) Н (26)

Рис. 3. Г.гикоконъюгаты пирафеофорбида а со спейсерными участками \шжч)у углеводом и макроциклом.

нуклеофильной тиоэфирной группы.

После удаления защитных групп МеОИа/МеОН и метанолиза в присутствии ЬЬБОд получааи соответствующее амфифильное производное (266).

Сравнивая две описанные схемы, следует, по-видимому, отдать предпочтение первому пути. Это связано с возможностью на основе одного порфиршювого скелет получать серии близких по строению моделей, что особенно ценно для изучения различных физико-химических и биологических характеристик этих соединений в зависимости от строения углеводного фрагмента.

В качестве альтернативного метода синтеза подобных соединений была также изучена реакция присоединения тиосахаров к двойной связи. Для этого предварительно взаимодействием бромида (3) с алдиловым спиртом получат соответствующее аллилоксипроизводное феофорбида, содержащее активированную двойную связь. Однако обработка этого соединения тетраацетатом тиоглюкозы в течение 48 ч при повышенной температуре не приводила к образованию целевою продукта. При использовании в качестве синтона более активного /Ш-глюкозилмеркаптида натрия в среде метанол-вода (2:1) через несколько часов по данным ТСХ наблюдалось образование нового соединения, однако его выход сил

незначителен. Попытки повысить выход за счет увеличения температуры ii ii.iii времени реакции привели к разложению исходного соединения.

Модификация молекулы пирофеофорбида углеводами возможна не только по пиррольному кольцу А, но и по остатку пропионовой кислоты путем образования сложных эфиров или амидов. Функционализация с помощью сложноофирнои свжн малоэффективна вследствие того, что такие соединения m vivo подвергаются быстром) действию гидролаз. Для данной цели более выгодно образование амидной связи. Предварительно были получены углеводы, содержащие первичную аминогруппу: 2.3,4.6-тетра-0-а1;етил-уЗ-£>-глюкозиламин, и 2.3,4,6-тетра-0-ацетил-(2-аминоэтил)-/£-£>-глюкопнранозид. Амиды (27) и (29) (рис. 4) получали прямой конденсацией пирофеофорбида а с углеводами в присутствии ДЦК с выходами 55% и 62%. соответственно. Продукты охарактеризованы данными IIMP-. ИК- и масс-спектров. Оба соединения имеют /^-конфигурацию аномерного центра, что подтверждено наличием в ПМР-спектрах характерных сигналов аномерных протонов в виде дублетов с 5 4.61 м.д и Ju 9.2 Гц для (27) и 5 4.10 м.д. и J1.2 8 Гц для (29). После дезацетилирования получали соответствующие амфифильные производные (28), (30).

Рис. 4. Синтез гликоконыогатов (27)-(30) с амидной связью.

Таким образом, осуществлен синтез конъюгатов (21)-(30), которые отличаются типом гликозидной связи, длиной спейсера и положением заместителя в макроцикле, что позволяет изучать влияние структуры ФС на его взаимодействие с опухолевыми клетками.

R

(27)-(29)

5. Изучение фнзико-хнмнческнх характеристик полученных коиъюгатон.

5.1. Поведение в водных растворах.

Полученные гликофеофорбиды с незащищенными гидроксильными группами (7а, 8а, 10а, 14а, 16а, 18а, 19а, 22а, 24а и 26а) хорошо растворяются в еггир1и\. обладают растворимостью в воде до 1-3 мг/мл при рН>7.5 и практически нерастворимы в неиолярных растворителях, таких как хлороформ и хлористый метилен. Их метиловые эфиры (76, 86, 106, 146, 166, 186, 196, 226, 246, 266) и амиды (28, 30) также хорошо растворимы в спиртах и обладают ограниченной растворимостью в воде и хлороформе.

Как известно, большинство амфифильных и водорастворимых порфиринов склонны к образованию, агрегатов в водных растворах, что ведет к заметному изменению их фотофизических свойств. В общем случае формирование агрегатов вызывает уменьшение интенсивности флуоресценции и квантового выхода синглетного кислорода и. следовательно, снижение эффективности ФС.

Таблица. /

Электронные спектры поглощения гликоконъюгатов пирофеофорбида а.

JVs соед. Полоса Cope. (>.v,akc. им) Q-полоса (/.MJ1¡4. нм)

снсь ЕЮН Н20 снсь ЕЮН Н;0

6а 409.4 - - 660.8 - -

8а - 408.8 377.0 и 396.0 - 662.0 664.4

13а 411.0 - - 664.8 - -

146 410.6 406.4 364.4 и 398.0 664.4 661.0 663.2

17а 411.6 - - 665.8 - -

186 411.2 407.0 364.6 и 396.4 665.8 661.6 664.0

27 411.0 - - 666.8 - -

28 - 403.8 399.2 - 664.0 676.6

Нами были изучены процессы агрегации гликопирофеофорбидов с использованием электронных спектров поглощения (ЭСП) и спектров флуоресценции в двух растворителях - этаноле и воде. В этаноле все синтезированные конъклагы имеют типичные для производных феофорбида а ЭСП (табл.1). Формирование агрегатов при переходе к водным растворам характеризуется значительным

гипохромныч эффектом и расщеплением полосы Соре в. а также сильным тушением флуоресценции (рис. 5).

300 400 500 600 700 Длина волны, нм

ф!

620 640 660 680 700 720 Длина волны, нм

а) б)

Рис 5. Спектры поглощения (а) (с = 7мк.М') и флуоресценции (б) (X„mñ- 410 нм. с-1мкМ) соединения (185) в этаноле (А) и воде (Б)

Более летально процессы агрегации были изучены с помощью экспериментальной зависимости интенсивности флуоресценции от концентрации (рис. 6а). В качестве объекта исследования был использован гликопнрофеофорбид (18ñj.

Нами была рассчитана константа равновесия между мономером и агрегатом по описанному в литературе методу (Margalil el al, 1983). Общее уравнение дли определения константы равновесия К имеет вид:

[М„]=хК[М]4 (1)

где [М] и [Мч] - концентрации мономера и агрегата, х - число мономеров в агрегате.

Учитывая, что в разбавленных растворах порфиринов доминирующим процессом является димеризапия (т. е. х=2). уравнение (1) можно преобразовать R следующее:

Рис. 6. а) Зависимость интенсивности флуоресценции от концентрации соедина/ш (186) в воде, б) прямая для определения Ко.

С-[М]=2КДГМ]2 (2

где С- общая концентрация порфирина, Кд-константа димеризации.

Поскольку в водных растворах флуоресценция агрегатов незначительна и е) можно пренебречь, интенсивность флуоресценции 1ф., прямо пропорциональи концентрации мономера:

[М]=к1ф, (•

где к - коэффициент пропорциональности.

Уравнение (3) соответствует прямолинейному участку кривой 1^,=Г(С) области концентраций 0.001-0.008мкМ (рис.66), из чего следует, что при С<0.008 мк.' соединение (186) в растворе находится преимущественно в виде мономеров.

С учетом (3) окончательное уравнение имеет вид:

С/1фл=к+2к2Кд1фл (•

Константа димеризации Кд была найдена графически с использование зависимости С/1ф.,=ЩфЛ) (рис. 66) и составила (7.8±0.89)х106 М"1, что близко I

значению к величине Кд некоторых водорастворимых производных пирофеофорбида (Fabiano et al, 1997).

Полученные данные позволяют оценивать соотношение мономеров и димеров в водных растворах и представляют интерес для изучения роли агрегатов в ФДТ.

5.2. Устойчивость к гидролизу

Гидролитическая стабильность является важным фактором, определяющим эффективность сенсибилизаторов в биологических системах. Нами проведено изучение сравнительной устойчивости полученных гликозилированных производных к кислотному гидролизу. В качестве объектов исследования были выбраны соединения (14а), (18а) и (28).

Гидролиз проводили в растворах HCl. Контроль за реакцией осуществляли с помощью ТСХ. В 30% HCl О-гликозиды (14а) и (28) полностью гидролизуются в течение 3.5 ч при 40°С, причем для соединения (28) в этих условиях наблюдается также частичный разрыв амидной связи и образование пирофеофорбида а. Для полного гидролиза тиоглюкозида (18а) необходима обработка HCl (конц.) при той же температуре в течение 24 - 27 ч.

Гликоконъюгаты с простой эфирной связью (5)-(10) устойчивы в этих условиях. Разрыв связи между углеводом и порфирином происходит в более жестких условиях. Так, при обработке 40% НВг/АсОН в течение 10 ч с высокими выходами образуются соответствующие бромиды (3) и (4).

Таким образом, использование более стабильных конъюгатов с простой эфирной и S-гликозидной связями позволит повысить их эффективность irt vivo. С другой стороны, модификация порфиринов углеводами с помощью более чувствительной к гидролизу О-гликозидной связи может являться частью "динамического" подхода к конструированию ФС, когда разрыв связи происходит на определенном этапе метаболического пути.

ВЫВОДЫ

1. Изучены возможности введения различных углеводных фрагментов в молекулу феофорбида а и пирофеофорбида а по пиррольному кольцу А и по остатку пропионовой кислоты. Осуществлен синтез ряда не описанных ранее водорастворимых производных феофорбида а, ковалентно связанных с остатками D-глюкозы и D-галактозы гликозидной, простой эфирной и амидной связями.

2. Разработан метод гликозилирования гидроксипроизводных пирофеофорбида а полными ацетатами Сахаров в присутствии кислот Льюиса.

3. Осуществлен синтез S-гликозилированных производных пирофеофорбида а, обладающих повышенной устойчивостью к гидролизу.

4. Предложены и реализованы методы синтеза гликоконъюгатов пирофеофорбида а со спейсерными участками различной длины между углеводной и порфириновой частями молекулы.

5. Изучены спектральные и физико-химические свойства синтезированнх производных, исследованы их агрегационные свойства в водных растворах .

Основные результаты диссертации опубликованы в следующих работах:

1. Аксенова А. А., Себякин Ю. Л., Миронов А.Ф. Синтез галактоииранозилзамещенных производных феофорбида. // Биоорган, химия. - 2000. -Т. 26. - №2. - С. 126-129.

2. Миронов А.Ф., Себякин Ю.Л., Аксенова A.A. Синтез гликозилированных производных феофорбида. // Ученые записки МИТХТ. - 2000. - Вып. 1. - С. 14-19.

3. Mironov А. F.. Aksenova A. A., Sebyakin Yu. L. Synthesis of a new water-soluble pheophorbide derivative. // Abstracts of VHIth International Conference on Spectroscopy and Chemistry of Porphyrins and their Analogs. Minsk, Belarus, 1998. p. 165.

4. Аксенова А. А., Себякин Ю. Л., Миронов А.Ф. Синтез новых галактопиранозилпорфиринов. // Тез. Ill Международного симпозиума "Новые и традиционные растения и перспективы их использования", Пущино. 1999, с. 241-244.

5. Аксенова А. А., Себякин Ю. Л., Миронов А.Ф. Разработка методов синтеза гликозилированных производных пирофеофорбида. // Тез. VI Международной конференции "Наукоемкие химические технологии". Москва. 1999. с. 197.

6. Аксенова А. А., Себякин Ю. Л., Миронов А.Ф. Синтез амфифильных производных пирофеофорбида, содержащих остатки глюкозы. // Тез. Школы-конференции "Горизонты физико-химической биологии", Пущино, 2000, с. 73-74.

7. Аксенова А. А., Себякин Ю. Л., Миронов А.Ф. Синтез новых водорастворимых производных пирофеофорбида для фотодинамической терапии рака. // Тез. IV Школы-конференции молодых ученых стран СНГ по химии порфиринов и родственных соединений, Иваново, 2000, с. 39.

8. Аксенова А. А., Себякин Ю. Л., Миронов А.Ф. Синтез и изучение свойств О- и 5-гликозилированных производных пирофеофорбида а. // Биоорг. химия, 2001, т. 27, №1, с. 71-77 (в печати).

ЛР№ 020816 от 20.09.93. Подписано в печать 20. //, ¿'¿Формат 60x90/16. Отпечатано на ризографе. Тираж 80 экз. Заказ № ¿? / 3 Издательско-полиграфический центр МИТХТ 117571 Москва, пр. Вернадского, 86.

ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ СОКРАЩЕНИЯ л

I. ВВЕДЕНИЕ

И. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР "Конъюгаты порфиринов с биомолекулами"

1. Гликоконъюгаты порфиринов

1.1. Методы синтеза гликопорфиринов

1.2. Свойства гликопорфиринов. Влияние структуры на характеристики соединений как потенциальных агентов для ФДТ

2. Синтез и свойства порфирин-нуклеозидов

3. Синтез и свойства липопорфиринов

4. Конъюгаты порфиринов с аминокислотами и пептидами 39 Заключение

III. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Введение

1. Синтез производных феофорбида а и пирофеофорбида а, связанных с моносахаридными остатками простой эфирной связью

2. Синтез производных пирофеофорбида а, связанных с углеводными фрагментами О-гликозидной связью

3. Синтез S-гликозилированных производных пирофеофорбида а

4. Синтез производных пирофеофорбида а, связанных с аномерным центром углевода через спейсерные участки

5.Синтез производных пирофеофорбида а, связанных с углеводом амидной связью

6. Изучение физико-химических характеристик полученных гликоконъюгатов

6.1. Поведение в водных растворах

ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

ТФП - тетрафенилпорфирин ФС - фотосенсибилизатор ФДТ - фотодинамическая терапия ДДХ - 2,3-дихлор-5,6-дицианбензохинон ЭСП - электронные спектры поглощения ЦЦ - цикло декстрин

ЛПНП - липопротеины низкой плотности I II - гематопорфирин ПГО - производное гематопорфирина ДЦК - дициклогексилкарбодиимид ДМАП - 4-диметиламинопиридин

Одним из перспективных и быстро развивающихся методов диагностки и лечения злокачественных новообразований является фотодинамическая терапия (ФДТ) рака. Метод основан на способности некоторых соединений - фотосенсибилизаторов (ФС) -преимущественно накапливаться в опухолях и при освещении светом определенной длины волны либо флуоресцировать, обозначая границы опухоли, либо инициировать серию фотохимических реакций, приводящих к разрушению раковых клеток. Современное развитие ФДТ в значительной мере связано с созданием новых ФС, имеющих улучшенные спектральные, фотохимические и биологические характеристики. Поиск ФС нового поколения требует создания модельных структур, позволяющих установить зависимость поведения в биологических условиях от особенностей химического строения сенсибилизатора. Обобщение большого экспериментального материала позволило сделать вывод о том, что наибольшее сродство к опухолям проявляют амфифильные соединения, которые легко встраиваются в плазматическую мембрану. Водорастворимые производные порфиринов, содержащие ковалентно связанные остатки Сахаров, представляют значительный интерес для ФДТ. Введение в состав молекулы ФС моносахаридных фрагментов позволяет целенаправленно регулировать амфифильность ФС, ускорять выведение его из организма и повышать селективность накопления в опухоли. Разработка новых методов синтеза позволит значительно расширить спектр амфифильных сенсибилизаторов, а направленное варьирование числа и состава углеводных фрагментов даст возможность получать сенсибилизаторы, способные избирательно воздействовать на различные ткани организма.

Данная диссертационная работа посвящена изучению методов синтеза порфириновых структур, ковалентно связанных с различными углеводными фрагментами. В качестве исходных соединений для синтеза были выбраны производные природного хлорофилла а - феофорбид а и пирофеофорбид а, которые широко изучаются в настоящее время в качестве ФС для ФДТ рака.

Представленная работа является частью фундаментальных научных исследований, проводимых на кафедре Химии и технологии тонких органических соединений МИТХТ 6 им. М.В. Ломоносова в рамках темы 1Б-4-865 "Синтез супрамолекулярных структур на основе порфиринов, липидов и углеводов с целью изучения жизненноважных процессов, протекающих в клетке".

I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

КОНЪЮГАТЫ ПОРФИРИНОВ С БИОМОЛЕКУЛАМИ

Порфирины обладают уникальной структурой и занимают особое место среди биологически активных соединений, принимая участие в фундаментальных процессах жизнедеятельности. В последние годы особый интерес проявляется к сложным моделям, в состав которых помимо порфиринов входят и другие биологически активные соединения. Порфирины, ковалентно связанные с углеводами, липидами, аминокислотами, широко исследуются как потенциальные модели для изучения процессов переноса кислорода, транспорта кислорода, региоседективного катализа. К тому же подобные структуры обладают рядом свойств, позволяющих использовать их в качестве эффективных сенсибилизаторов для фотодинамической терапии рака, а также противовирусных препаратов направленного действия.

При синтезе порфириновых фотосенсибилизаторов обыкновенно преследуют цель увеличения специфичности их взаимодействия с опухолевой тканью, клеткой или субклеточными структурами. В качестве таких ФС несомненный интерес представляют порфиринил-гликозиды, порфиринил-нуклеозиды, порфирины, содержащие остатки аминокислот и олигопептидов, а также других биомолекул.

V. ВЫВОДЫ

1. Изучены возможности введения различных углеводных фрагментов в молекулу феофорбида а и пирофеофорбида а по пиррольному кольцу А и по остатку пропионовой кислоты. Осуществлен синтез ряда не описанных ранее водорастворимых производных феофорбида а, ковалентно связанных с остатками 2)-гдюкозы и 2)-галактозы гликозидной, простой эфирной и амидной связями.

2. Разработан метод гликозилирования гидроксипроизводных пирофеофорбида а полными ацетатами Сахаров в присутствии кислот Льюиса.

3. Осуществлен синтез S-гликозилированных производных пирофеофорбида а, обладающих повышенной устойчивостью к гидролизу.

4. Предложены и реализованы методы синтеза гликоконъюгатов пирофеофорбида а со спейсерными участками различной длины между углеводной и порфириновой частями молекулы.

5. Изучены спектральные и физико-химические свойства синтезированнх производных, исследованы их агрегационные свойства в водных растворах.

Заключение.

44 оказаться ценным для изучения тонких механизмов функционирования сложноорганизованных биологических систем и решения различных задач биохимии, химической технологии и медицины. Одной из важных областей использования конъюгатов порфиринов с биомолекулами является фотодинамическая терапия рака. В связи с постоянно растущим интересом к проблемам ФДТ возникает необходимость изучения молекулярных и мембранных механизмов фотодинамического эффекта таких конъюгатов, исследования взаимосвязи между структурой фотосенсибилизаторов и их специфической активностью.

Ш. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Введение

К настоящему времени синтезировано большое количество гликопорфиринов, однако какого-либо систематического исследования их фотодинамических свойств в литературе не обнаружено. Большинство из описанных гликозилированных порфиринов относится к производным тетрафенилпорфиринов [1-8]. При всей значимости синтетических ФС основные перспективы создания препаратов нового поколения связывают с производными природных хлоринов [108-111]. Эти соединения обладают химической структурой, подобной эндогенным порфиринам, в связи с чем их катаболизм и выведение из организма не вызывают побочных эффектов. Кроме того, они имеют интенсивное поглощение в красной области спектра, для которой ткани более "прозрачны", и обладают низкой темновой токсичностью. Особого внимания заслуживают производные хлорофилла а - феофорбид а и пирофеофорбид о, которые в основном удовлетворяют требованиям, предъявляемым к ФС второго поколения и в настоящее время рассматриваются в качестве альтернативы порфириновым сенсибилизаторам. Производные феофорбида а и пирофеофорбида а являются достаточно устойчивыми соединениями, интенсивно поглощают в области 650-700 нм, имеют удовлетворительные фотофизические параметры (квантовый выход триплетного состояния, квантовый выход синглетного кислорода), хорошо накапливаются в опухолях и вызывают незначительную сенсибилизацию кожи [92, 112-116].

Ограниченное использование данных соединений для ФДТ связано с рядом обстоятельств, включая низкую растворимость в воде и других кровезаменителях, пригодных для внутривенного введения, а также недостаточную селективность накопления в опухолях. С другой стороны, наличие в этих соединениях различных функциональных групп (винильной и карбоксильной) позволяет осуществлять их направленную структурную модификацию в направлении требуемых свойств. Введение полярных углеводных фрагментов позволяет повысить растворимость в воде, что благоприятствует быстрому удалению сенсибилизатора из организма после терапии, а гликозидные остатки могут участвовать в процессах межклеточного узнавания [27, 117118], повышая селективность накопления в раковых клетках. В связи с изложенным была поставлена задача получения различных гликоконъюгатов на основе производных феофорбида а и пирофеофорбида а с целью изучения влияния природы углеводных остатков и типа связи между углеводом и порфирином на физико-химические и биологические свойства соединений как возможных агентов для ФДТ рака.

1. Синтез производных феофорбида а и пирофеофорбида а, связанных с моносахаридными остатками простой эфирной связью.

На первом этапе работы нами были получены гликоконъюгаты феофорбида а и пирофеофорбида а, в которых связь осуществляется по Сб-атому углевода. Преимущество простой эфирной связи в данных соединениях заключается в ее устойчивости к действию ферментов при использовании in vivo [23]. В качестве углеводных заместителей были выбраны производные £>-глюкозы и D-галактозы.

Исходный хлорофилл а выделяли из микроводоросли Spirulina platensis, которая в отличие от большинства зеленых растений продуцирует лишь один тип хлорофилла, что существенно облегчает выделение и очистку пигмента. Феофорбид а (1) получали в соответствии с описанной методикой [119]. Декарбоксилированием последнего в кипящем пиридине [120] в присутствии фторида лития был получен пирофеофорбид а (2).

Многочисленные модификации природных хлоринов обычно связаны с возможностью различных превращений винильной группы в пиррольном кольце А [121]. Для синтеза конъюгатов с простой эфирной связью нами было использовано два метода:

1) присоединение бромистого водорода с образованием соответствующих абромэтильных производных с последующим замещением атома брома на спиртовой остаток [122] (рис. 1);

2) трифторацетатный метод [119, 123] (рис. 2).

Для увеличения селективности реакции и повышения растворимости реагентов в органических растворителях, пригодных для проведения реакции, нами были использованы 1,2;3,4-ди-0-изопропилиден-а-£>-галактопираноза и 1,2,3,4-тетра-<9-ацетил-/?-£>-глюкопираноза, имеющие одну свободную гидроксильную группу.

1) Гидробромирование феофорбида а (1) и пирофеофорбида а (2) проводили свежеприготовленным 40% раствором НВг в уксусной кислоте в течение 24 ч. После удаления кислоты в вакууме получали бромиды (3), (4), которые ввиду их лабильности непосредственно использовали в последующих превращениях. При взаимодействии бромпроизводных (3) и (4) с 1,2;3,4-ди-0-изопропилиден-«-1)-галактопиранозой и 1,2,3,4-тетра-0-ацетил-/?-2)-глюкопиранозой происходит замещение атома брома на спиртовой остаток при Сб-атоме углевода с образованием гликофеофорбида (5а) и гликопирофеофорбидов (6а) и (9а) (рис. 1).

Были изучены различные условия проведения этой реакции. Установлено, что реакция протекает с достаточным выходом только в присутствии основных реагентов, связывающих выделяющийся НВг (безводный поташ или 4-диметиламинопиридин). Однако в этих условиях возможно также протекание конкурирующей реакции элиминирования НВг с образованием винильной группы. Наибольший выход целевого продукта (32, 30 и 21% для соединений (5а), (6а) и (9а), соответственно) получен при медленном прикапывании раствора 4-диметиламинопиридина к смеси бромида с 20-кратным избытком углевода в безводном хлороформе при небольшом нагревании (45-50°С) в течение 2 ч. Образующиеся в качестве побочных продуктов феофорбид а и пирофеофорбид а могут быть выделены из реакционной массы и повторно введены в реакцию.

3): R2= COOCH3

4): R2= H

HOOC

5a): R2=COOCH3 (6a): R2=H

Riooc

7a,6): R2=COOCH3, R3=H (8a,6): R2=H, R3=H (116): R2=COOCH3, R3=CH3 (126): R2=H, R3-CH3 V m

HOOC

1): R2= COOCH3

2): R2= H

OA с

RiOOC

9a,6) iv

Ri=H (a) —R]=CH3 (6) он

Riooc

10a,6) Ri=H (a), CH3 (6)

R,=H(a)-»» R,=CH3(6) смесь изомеров

Рис. 1. Схема синтеза гликозилированных производных феофорбида а пирофеофорбида а (5а,б)-(10а,б).

Реагенты: i) НВг/АсОН; Щ 1,2;3,4-ди-0-изопропилиден-а-/)-галактопираноза; 1,2,3,4-тетра-(9-ацетил-79-/)-глюкопираноза; п>) Me0H/H2S04; v) CF3COOH-H2O; MeONa/MeOH.

Строение продуктов было подтверждено данными ПМР-спектроскопии и масс-спектрометрии. В спектрах ПМР (5а), (6а) и (9а) (табл. 2) наблюдается исчезновение сигналов в области 6.2 и 7.9 м. д., характерных для винильной группы, и появляются мультиплет в области 5.9-6.05 м.д. и дублет в области 2.1 м.д., характерные для протонов СНз-СН-О-группы. Сигналы л/езо-протонов 5-Н, расположенных наиболее близко к хиральному центру, представляют собой 2 синглета с одинаковой интенсивностью, что указывает на образование эквимольной смеси диастереомеров [23, 123]. Кроме того, наблюдается расщепление сигналов лгезопротонов 20-Н и протонов метальной группы, связанной с асимметричным атомом углерода (СНз-СН-О). Характер сигналов, относящихся к углеводной части молекулы, по сравнению с таковым для исходных углеводов практически не менялся.

Спектры ПМР гликопроизводных феофорбида (5а), (76) аналогичны спектрам гликопроизводных пирофеофорбида (6а), (86), за исключением сигнала протонов 132-Н: Для феофорбидов он представляет синглет в области 6.2 м.д., для пирофеофорбидов -дублет дублетов в области 5.2 м.д.

В электронных спектрах поглощения соединений (5а), (6а) и (9а) наблюдается небольшой гипсохромный сдвиг (на 4-7 нм) по сравнению с ЭСП исходных соединений. Спектры поглощения соединений представлены в табл. 6

Изопропилиденовые защитные группы в соединениях (5а) и (6а) удаляли ТФК-НгО (7:1) в течение 30 мин [24], дезацетилирование (9а) проводили 1% раствором метилата натрия в метаноле [124] с образованием соединений (7а), (8а) и (10а) с выходами, близкими к количественным. Для изучения влияния степени амфифильности гликоконъюгатов на проникновение и накопление фотосенсибилизаторов в злокачественных тканях эти соединения этерифицировали по остаткам пропионовой кислоты метанолом в присутствии серной кислоты. Однако в стандартных условиях метанолиза [120] (5-7% раствор серной кислоты в метаноле, 24 ч) возможно протекание

1. К. Driaf, R. Granet, P. Krausz, M. Kaouadji, F. Tomasson et. al. Synthesis of glycosylated cationic porphyrins as potential agents in photodynamic therapy. // Can. J. Chem, - 1996. - V. 74. - P. 1550-1563

2. P. Maillard, J.-L. Guerquin, M. Momenteau. Glycoconjugated tetrapyrrolic macrocycles. // J. Am. Chem. Soc. 1989. - V. 111. - P. 9125-9127.

3. P. Maillard, J.-L. Guerquin, C. Huel, M. Momenteau. Glycoconjugated porphyrins. 2. Synthesis of Sterically constrained polyglycosylated compounds derived from porphyrins. // J. Org. Chem. 1993,- V. 58 - P. 2774-2780.

4. P. Maillard, J.-L. Guerquin, M. Momenteau. Catalytic properties of iron and manganese glycosylated porphyris. // Tetrahedron Lett. 1991. - У.37. - P. 4901-4904.

5. P. Maillard, S. Vilain, C. Huel, M. Momenteau. Efficient preparation of the aaaa-atropoisomer of meso-tetrakis2-(2,3,4,6-tetraacetyl-0-P-glycosyl)phenyl.porphyrin //J. Org. Chem. 1994. - V. 59. - P. 2887-2890.

6. K. Kohata, Y. Yamaguchi, H. Higashio, T. Odashima, H. Ishii. Synthesis and chromogenic properties of a new water-soluble glycosylated porphyrines. // Chem. Lett. -1992. P. 489-492.

7. Y. Mikata, Y. Onchi, K. Tabata, S.-I. Ogura, I. Okura, H. Ono, S. Yano. Sugar-dependent photocytotoxic property of tetra- and octa-glycoconjugated tetraphenylporphyrins. // Tetrahedron Lett. 1998. - V. 39. - P. 4505-4508.

8. Y. Mikata, Y. Onchi, M. Shibata, T. Kakuchi, H. Ono, S.-I. Ogura, I. Okura, S. Yano. Synthesis and photototoxic property of tetra- and octa-glyeoconjugated tetraphenylchlorins. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998. - V. 8. - P. 3543-3548.

9. K. Driaf, P. Krausz, B. Verneuil, M. Spiro, J.-C. Blais, G. Bolbach. Glycosylated cationic porphyrins as potential agents in cancer therapy. // Tetrahedron Lett. 1993. - У. 34. - P. 1027-1030.

10. Y. Sol, P. Branland, R. Granet, C. Kaldapa, B. Yerneuil, P. Krausz. Nitroglycosylated meso-arylporphyrins as photoinhibitors of gram positive bacteria. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998. - V. 8. - P. 3007-3010.

11. O. Gaud, R. Granet, M. Kaouadji, P. Krausz, J. Blais, B. Bolbach. Synthese et analyse structurale de nouvelles meso-aryl porphyrines glycosylees en vue de e'application en phototheraphy des cancers. // Can. J. Chem. 1996. - V. 74. - P. 481-489.

12. M. Cornia, C. Yalenty, S. Capacchi, P. Gozzini. Synthesis, characterisation and conformation studies of lipophilic, amphiphilic and water-soluble C-glycoconjugated porphyrins. // Tetrahedron. 1998. -V. 54. - P. 8091-8106.

13. M. Cornia, G. Casiraghi, S. Binacchi, F. Zanardi, G. Rassu. facile entry to 5,10,15,20-tetra-C-glycosylporphyrins. // J. Org. Chem. 1994. - V. 59. - P. 1226-1230.

14. N. Ono, M. Bougauchi, K. Maruyama. Water-soluble porphyrins with four sugar molecules. // Tetrahedron Lett. 1992. - V. 33. - P. 1629-1632.

15. А.Ф. Миронов, Г.М. Исаева, В.И. Швец, Р.П.Евстигнеева, А.Н. Степанов, А.А. Перов, С.Е. Куприянов. О гликозилировании оксиалкилзамещенных порфиринов. // Биоорган, химия. 1978. - №10. - С. 1410-1413.

16. A. Bourhim, S. Czernecki, P. Krausz. Glycosylated hematoporphyrins: a new approach in cancer phototherapy. // Carbohydr. Res. 1990. - V. 9. - P. 761-765.

17. G. Fulling, D. Schroder, B. Franck. Water-soluble porphyrin diglycosides with photosensitizing properties.//Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1992. -V. 28.-P. 1519-1521.

18. P. Maillard, С. Негу, M. Momenteau. Synthesis, characterisation and phototoxicity of a glycoconjugated meso-monoarylbenzochlorin. // Tetrahedron Lett. 1997. - V. 38. - P. 3731-3734.

19. H. Li, L. Chuchajowski. Ribofuranosides N-substituted with meso-porphyrin as nucleoside-like compounds. // Tetrahedron Lett. 1994. - V. 35. - P. 1629-1630.

20. I. Silvain, R. Benhaddon, V. Carre, S. Gottas, H. Driguez, R. Granet, M. Guilloton, P. Krausz. Synthesis and biological evaluation of thioglycosylated meso-aryl porphyrins. // J. Porph. and Phthal. 1999. - V. 3. - P. 1-4.

21. H. Hombrecker, S. Ohm, D. Koll. Synthesis of galactopyranosyl substituted porphyrins. // Tetrahedron. 1996. - Y. 52. - P. 5441 -5448.

22. J.-H. Fuhrhop, C. Demoulin, C. Boettcher, J. Koning, U. Siggel. Chiral micellar porphyrins fibers with 2-aminoglycosamide head groups. // J. Am. Chem. Soc. 1992. - V. 114.-P. 4159-4165.

23. З.И. Жилина, Ю.В. Ишков. Синтез димерных порфиринов. // Успехи химии порфиринов. 1999. - Т.2. - С. 7-26.

24. W.-H. Chen, J.-M. Yan, Y. Tagashira, M. Yamaguchi, К. Fujita. Cage molecules with multiple recognition cavities: quadruply cyclodextrin-linked cofacial porphyrins. // Tetrahedron Lett. 1999. - V. 40. - P. 891-894.

25. Y. Kuroda, M. Ito, T. Sera, H. Ogoshi. Controlled electron transfer between cyclodextrin-sandwiched porphyrinand quinones. // J. Am. Chem. Soc. 1993. - У. 115. -P.-7003-7004.

26. Y. Kuroda, T. Sera, H. Ogoshi. Regioselectivities and stereoselectivities of singlet oxygen generated by cyclodextrin sandwiched porphirin sensitisation. Lipoxygenase-like activity. // J. Am. Chem. Soc. 1991. - Y. 113. - P. 2793-2794.

27. Y. Kuroda, T. Hiroshige, T. Sera, Y. Shiroiwa, H. Tanaka, H. Ogoshi. Cyclodextrin-sandwiched porphyrin. // J. Am. Chem. Soc. 1989. - V. Ill. - P. 1912-1913.

28. E. Davoust, R. Granet, P. Krausz, Y. Carre, M. Guilloton. Synthesis of glycosyl strapped porphyrins. // Tetrahedron Lett. 1999. -V. 40. - P. 2513-2516.

29. C. Shell, H. Hombrecker. Synthesis and investigation of glycosylated mono- and diarylporphyrins for photodynamic therapy. //Bioorg. Med. Chem. Lett. 1999,- V. 7. - P. 1857-1865.

30. V. Sol, J.-C. Blais, G. Bolbach, V. Carre, R. Granet, M. Guilloton. Toward glycosylated peptidic porphyrin: a new strategy for PDT? // Tetrahedron Lett. 1997. - V. 38. - P. 6391 -6394.

31. M. Momenteau, D. Oulmi, P. Maillard, A. Croisy. Photodynamic therapy of cancer II. In vitro photobiological activity of a new series of photosensitizers. The glycoconjugated porphyrins. IISPIE Proc. 1994. - V. 2325. - P. 13-23.

32. У. Krai, J. Sessler, H. Furuta. Synthetic sapphyrin-cytosine conjugates: carriers for selective nucleotide transport at neutral pH. // J. Am. Chem. Soc. 1992.- V. 114. - P. 8704-8705.

33. X. Jiang, R. Pandey, K. Smith. Nucleoside adducts of vinylporphyrins and vinylchlorins. //J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1. 1996. -V. 13. - P. 1607-1615.

34. X. Jiang, R. Pandey, K. Smith. Synthesis of nucleoside adducts of porphyrins and chlorophyll derivatives. // Tetrahedron Lett. 1995. - У. 36. - P. 365-368.

35. D. Praseuth, A. Gaudemer, J.-B. Verlhac, I. Kraljic, I. SissoefF, E. Guille. Photocleavage of DNA in the presence of synthetic water-soluble porphyrins. // Photochem Photobiol. — 1986.-V. 44.-P. 717-724.

36. P. Kus, G. Knerr, L. Czuchajowski. First representatives of porphyrinylnucleosides. // Tetrahedron Lett. 1990. -V. 31. - P. 5133-5136.

37. L. Czuchajowski, J. Habdas, H. Niedbala, V. Wandrecar. Porphyrin-uridines as the first water-soluble porphyrin-nucleosides. // Tetrahedron Lett. 1991. - V. 32. - P. 7511-7514.

38. L. Czuchajowski, A. Palka, M. Morre, V. Wandrecar. Porphyrin-nucleosides containing fluorinated nucleobases. // Tetrahedron Lett. 1993. - V. 34. - P. 5409-5412.

39. M. Hisatome., N. Maruyama, T. Furutera , T. Ishikawa. Porphyrins Coupled with Nucleoside Bases. Synthesis and Characterization of Adenine- and Thymine-Porphyrin Derivatives. II Chem. Lett. 1990, - У. 12. - P. 2251-2254.

40. M. Hisatome, N. Maruyama, К. Ikeda, К. Yamakawa. Porphyrins coupled with nucleoside bases. Synthesis and some properties of guanine, cytosine and adenine-thymine derivatives. // Heterocycles 1993. - Y. 36. - P. 441-444.

41. C. Drain, R. Fischer, E. Nolen. Self-assembly of a bisporphyrin supramolecular cage induced by molecular recognition between complementary hydrogen bonding sites. // J.Chem.Soc.Chem.Commun. 1993. - V. 3 - P. 243-245.

42. Т. LeDoan, D. Praseuth, L. Perroauault, M. Chasignol. Sequence-targeted photochemical modifications of nucleic acids by complementary oligonucleotides covalently linked to porphyrins. // Bioconjugate Chem. 1990. - Y. 1. - P. 108.

43. M. Pitie, C. Casas, C. Lacey, G. Pratviel. Selective cleavage of a 35-mer single-stranded DNA containing the initiation codon of the TAT gene of HIV-1 by a tailored cationic manganese porphyrin. // Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1993. -V. 32. - P. 557.

44. A. Boutorine, D. Brault, M. Tacasugi. Chlorin-oligonucleotide conjugates: synthesis, properties and red light-induced photochemicalsequence-specific DNA cleavage in duplexes and triplexes. // J. Am. Chem. Soc. 1996. - V. 118. - P. 9469-9476.

45. H. Thuongi, C. Helene. Sequence-specific recognition and modification of double-helical DNA by oligonucleotides. // Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1993. - V. 32. - P. 666.

46. L. Mastruzzo, A. Woizard, D. Ma, E. Rizzarelly, T. LeDoan. Targeted photochemical modification of HIV-derived oligoribonucleotides by antisence oligodeoxynucleotides linked to porphyrins. // Photochem. Photobiol. 1994,- V. 60. - P. 316-322.

47. J. Sessler, P. Sansom, V. Krai, D. O'Connor, B. Iverson. Sapphyrin-oligonucleotide conjugates. Sequence-specific DNA photomodifying agents with increased binding affinity. // J. Am. Chem. Soc. 1996. - Y. 118. - P. 12322-12330.

48. M. Darren, G. Shaun, J. Sessler, P. Sansom, S. Springs, Y. Ohya. Energy transfer assemblies composed of expanded porphyrin-oligonucleotide conjugates. // Tetrahedron Lett. 1997. - V. 38. - P. 5759-5761.

49. A. Harriman, Y. Kubo, J. Sessler. Molecular recognition via base pairing: photoinduced electron transfer in hydrogen-bonded zinc porphyrin -benzoquinone conjugates. // J. Am. Chem. Soc. 1992. - V. 114. - P. 388-391.

50. J. Groves, R. Neuman. Membrane-spanning steroidal metalloporphyrins as site-selective catalysts in synthetic vesicles. // J. Am. Chem. Soc. 1987. - V. 109. - P. 5045-5047.

51. J. Groves, R. Neuman. Regioselective oxidation catalysts in synthetic phospholipid vesicles. Membrane-spanning steroidal metalloporphyrins. // J. Am. Chem. Soc. 1989. -V. 111.-P. 2900-2909.

52. J. Groves, J. Fate, J. Lahiri. Directed multy-heme self-assembly and electron transfer in a model membrane. // J. Am. Chem. Soc. 1994. - V. 116. - P. 5477-5478.

53. M. Nango, A. Mizusana, T. Miyake, J. Yoshinaga. Transmembrane electron transfer catalysed by phospholipid-linked manganese porphyrins. // J/ Am. Chem. Soc. 1990. - V. 112.-P. 1640-1642.

54. E. Hasegawa, Н. Nishide, Е. Tsuchida. Synthesis of a negatively-charged porphyrinatoiron (II) having a phosphoserine group an oxygenation in phospholipid bilayer. // Chem. Lett. 1990. - У. 1. - P. 123-126.

55. E. Tsuchida, E. Hasegawa, T. Komatsu. Synthesis and characterisation of membrane-spanning porphyrinatoiron(II). // Chem. Lett. 1990. V. 1. - P. 389-392.

56. T. Komatsu, K. Nakao, H. Nishide, E. Tsuchida. Octopus-porphyrins: their assembly and oxygen-binding in aqueous medium. // J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1993. - P. 728-730.

57. E. Tsuchida, T. Komatsu, K. Arai, K. Yamada, H. Nishide, C. Bottcher, J.-H. Fuhrhop. Monolayered octopus-porphyrin vesicle: microstructure and oxygen-binding in aqueous medium. // J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1995. - P. 1063-1064.

58. E. Hasegawa, H. Nishide, E. Tsushida. Synthesis and negatively-charged porphyrinatoiron(II) having a phosphoserine group an oxygenation in phospholipid bilayer. // Chem Lett. 1990. - V. 1. - P. 123-126.

59. M. Berenbaum, R. Bonnett, P. Scourides. In vivo biological activity of the components of haematoporphyrin derivative. // Br J Cancer. 1982. - V. 45. - P. 571-81.

60. P. Furmanski, C. Longley. Metalloporphyrin enhancement of magnetic resonance imaging of human tumor xenografts in nude mice. // Cancer Res. 1988. - У. 48. - P. 46044610.

61. H. Hombrecker, S. Ohm. An efficient synthesis of tetraaryl porphyrins substituted with ester groups bearing long alkyl chains. II Tetrahedron. 1993. - V. 49. - P. 2447-2456.

62. D. James, N. Swamy, N. Paz, R. Hanson, R. Ray. Synthesis and estrogen receptor binding affinity of a porphyrin-estradiol conjugate for targeted photodynamic therapy of cancer. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 1999. - V. 9. - P. 2379-2384.

63. J. Bats, G. Haake, A. Meier, F. Montforts. Synthesis of Oxochlorins from the Red Blood Pigment Heme and Their Transformation into Potentially Biologically Active Chlorin Derivatives. // Liebigs Ann. Chem. 1995. - Y. 9. - P. 1617-1632.

64. E. Sternberg, D. Dolphin, C. Brucker. Porphyrin-based photosensitizers for use photodynamic therapy. // Tetrahedron. 1998. - V. 54. - P. 4151-4202.

65. R. Bonar-Law, J. Sanders. Synthesis, binding properties and self-functionalisation of a steroid-capped porphyrin. // J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1991. - №5. - P. 574.

66. C. Verchere-Beaur; M. Perree-Fauvet; E. Tarnaud; G. Anneheim-Herbelin; N. Bone; A. Gaudemer. New Amino Acid Porphyrin Derivatives. Part II: DNA Binding Studies // Tetrahedron. 1996. - V. 52. - P. 13589-13604.

67. T. Karpishin, T. Vanelly, K. Glover. Copper-driven assembly of a helical-peptide-strapped zinc porphyrin. // J. Am. Chem. Soc. 1997. - V. 119. - P. 9063-9064.

68. M. Ushiyama, F. Arisaka, F. Yamamura. Construction of a multiple porphyrin system using a de novo designed peptide porphyrin and hemin. // Chem. Lett. 1999. - №2. - 3. 127-128.

69. G. Geier, T. Sasaki. The design, synthesis and characterisation of a porphyrin-peptide conjugate. // Tetrahedron Lett. 1997. - У. 38. - P. 3821-3824.

70. J. Collman, B. Boitret, L. Fu, J. Galanter, A. Straumanis, M. Rapta. The chloroacetamido group as a new linker for the synthesis of hemoprotein analogues. // J. Org. Chem. 1997. - V. 62. - P. 2308-2309.

71. К. Maruyama, К. Nomura, Н. Tamiaki. Synthesis and properties of porphyrins linked with p-turn oligopeptide. // Peptide Chem. 1990. - P. 323-328.

72. H. Tamiaki, K. Nomura, K. Maruyama. Energy transfer in P-turned peptide-bridged porphyrin-dimers. //Bull. Chem. Soc. Jpn. 1993,- V. 66. - P. 3062-3068.

73. P. П. Евстигнеева, A.A. Грибков, В.З. Пащенко, Б.Н. Корватовский. Синтез и фотофизические свойства триады метиловый эфир L-тирозина мезопорфирин II -производное хинона. // Биоорган, химия. - 1998. - Т. 24. - С. 682-687.

74. О.Н. Понаморева, В.Д. Румянцева, А.Ф. Миронов, А. В. Чудинов. Синтез фосфоресцентных металлопорфиринов с изотиоцианатной группой. // Биоорган, химия. 1995. - Т. 21. - С. 296-300.

75. S. Matthews, С. Pouton, М. Threadgill. Monofunctional electrophilic and nucleophilic derivatives of meso-tetraphenylporphyrin for attachment to peptides. // J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1995. - P. 1809-1811,

76. M. Hamblin, E. Neuman. Photosensitizer targeting in photodynamic therapy. 1. Conjugates of hematoporphyrin with albumin and transferrin. // J. Photochem. Photobiol.- 1994. Y. 26. - P. 45-56.

77. G. Karagianis, J. Reiss, P. Scourides. Preparation and characterization of porphyrin с analogues as agents for photodynamic therapy // Aust. J. Chem. 1993. - V. 46. - P. 17551762

78. R. Bonnett. New photosensitizers for the photodynamic therapy of tumors. // Proc. SPIE.- 1994.-V. 2078.-P. 74-90.

79. J. Hoober, T. Sery, N. Yamamoto. Photodynamic sensitizers chlorophyll: purpurin 18 and chlorin p6. И Photochem. Photobiol. 1998,- V. 48. -P. 579-582.

80. A. Dagan, S. Gatt, S. Cerbu-Karabat, J. Maziere, R. Santus, E. Engelhardt, K. Ych. Uptake by cells and photosensitizing effectivenus of novel pheophorbide derivatives in vitro. // Int. J. Cancer. 1995,- V. 63. - P. 831-839.

81. W. Roberts, F. Shian, J. Nelson, K. Smith, M. Berns. In vitro characterisation of mono-aspartyl chlorin e6 and diaspartyl chlorin e6 for photodynamic therapy. // J. Natl. Cancer Inst. 1998. - V. 80. - P. 330-336.

82. D. Kessel. Determinants of photosensitisation bymono-L-aspartyl chlorin еб. II Photochem. Photobiol. 1989. - V. 49. - P. 447-452.

83. W. Roberts, M. Berns. In vitro photosensitisation. I. Cellular uptake and subcellular localisation of mono-L-aspartyl chlorin e6., chloroaluminium sulfonated phthalocyanine and Photofrin II. // Laser Surg. Med. 1989. - V. 9. - P. 90-101.

84. K. Aizawa, T. Okunaka. H. Kawabe, Y. Yasunaka. Localisation of mono-L-aspartyl chlorin e5.(Npee) in mouse tissue. // Photochem. Photobilo. 1997. -V. 66. - P. 336-345.

85. C. Gomer, A. Ferriano. Tissue distribution and photosensitizing properties of mono-L-aspartyl chlorin e6. in mouse tumor model. I I Cancer Res. 1990. - V. 50. - P. 3985-3990.

86. C. Gomi, T. Nizhizura, O. Ushiroda, N. Ushida, H. Takahashi, S. Sumi. The structures of mono-L-aspartyl chlorin e6. and its related compounds. // Heterocycles. 1998. - V. 48. - P. 2231-2243.

87. J. Silberstein, A. Bromberg, A. Frantz, V. Rosenbach-Belkin. Light-dependent oxygen consuption in BChl-serine-treated melanoma tumors. // Photochem. Photobiol. 1997. -V. 65.-P. 1012.

88. J. Lee, N. Jagerovic, K. Smith. Use of the chlorophyll derivative, pururin-18, for synthesis of sensitizers for use in photodynamic therapy. // J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1. 1993,- P. 2369-2377.

89. R. Pandey, F. Shiau, A. Sumlin. Structure/activity relationship among photosensitizers related to pheophorbides and bacteriopheophorbides. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 1994. -Y.4.-P. 1263-1267.

90. A. Kozyrev, G. Zheng, C. Zhu. Synthesis of stable baeteriochlorophyll-a derivatives as potential photosensitizers for photodynamic therapy. // Tetrahedron Lett. 1996. - V. 37. -P. 6431-6434.

91. T. Ando, Y. Suzuki, R. Geka, K. Irie, K. Koshimizu, T. Takemura, S. Nakajima, I. Sakata. New water-soluble pyropheophorbide a derivatives as possible agents for photodynamic therapy of cancer. I I Tetrahedron Lett. V. 32. - P. 5107-5110.

92. K. Smith, S. Lee, F. Shiau et al. Photodynamic therapy and biomedical lasers. / Ed. P. Spinelli, M. Dal Fante, M. Marchesini. London, 1992. Elsevier GB.

93. N. Soukos, M. Hamblin, T. Hasan. The effect of charge on cellular uptake and phototoxicity of polylysine chlorin e6 conjugates. // Photochem. Photobiol. 1997. - V. 65. - P. 723-729.

94. T. Zoladek, N. Nhi, J. Jagiello, A. Graszyk, J. Rytka. Diamino acid derivatives of porphyrins penetrate into yeast cells, induce photodamage, but have no mutagenic effect. // Photochem. Photobiol. 1997 - V. 66. - P. 253-259.

95. Bonnett R. Chemical Aspects of Photodynamic Therapy. /Gordon and Breach Science Publishers. 2000. - 305 P.

96. T.J. Dougherty. Photosensitizers: therapy and detection of malignant tumors. // Photochem. Photobiol. 1987. -V. 45. - P. 879-889.

97. A.F. Mironov, A.N. Kozyrev, A.S. Brandis. Sensitizers of second generation for photodynamic therapy of cancer based on chlorophyll and bacteriochlorophyll derivatives. // Proc. SPIE. 1992. - V. 1992. - P. 204-208.

98. B. Roeder. Photosensitizing properties of phorbides. // J. Photochem. Photobiol. 1990. -V. 5.-P. 519-521.

99. K. Iwai, I. Ido, R. Iwata. Localizing efficiency of 48V. vanadyl-pheophorbide iv tumor as a new tumor imaging agent. // Nuclear Med. Biol. 1989. - У. 16. - P. 783-789.

100. M. Aprahamian, S. Evrard, P. Keller, M. Tsuji. Distribution of pheophorbide a in normal tissues and in experimental pancreatic cancer in rats. // Anti-Cancer Drug. 1993. -V.8.-P. 101-114.

101. B. Roeder, H. Wabnitz. Time resolved fluorescence spectroscopy of hematoporphyrin, pheophorbide a and chlorin e6 in ethanol and aqueous solution. I I J. Photochem. Photobiol. B: Biol. 1987. -V. 1. - P. 103-113.

102. S. Nakajima, H. Hayashi, Y. Omote, Y. Yamasaki, S. Hirate, T. Maeda, J. Kubo. The tumor-localizing properties of porphyrin derivatives. // J. Photochem. Photobiol. В.: Biol. -1990.-V. 7.-P. 189-198.

103. C. Kieda, M. Monsigny. Involvent of membrane sugar receptors and membrane glycoconjugates in the adhesion of 3LL cell subpopulation to cultured pulmonary cells. // Invasion Metastasis. 1986. - V. 6. - P. 347-366.

104. A.S. Brandis, A. N. Kozyrev, A.F Mironov. Synthesis and study of chlorin and porphyrin dimers with ether lineage. II Tetrahedron. 1992. - V. 48. - P. 6485-6494.

105. Порфирины: структура, свойства, синтез. / Ред. Н. С. Ениколопян. М.: Наука. -1985.-С. 175-194.

106. К. М. Smith. Protoporphyrin-IX: some useful substituent manipulations. // Heterocycles.- 1987.-V. 26.-P. 1947-1963.

107. R. Pandey, A. Sumlin el al. Alkyl ether analogs of chlorophyll a derivatives. Part. I. Synthesis, photophysical properties and photodynamic efficacy. // Photochem. Photobiol. -1996.-V. 64.-P. 194-204.

108. E. Г. Левинсон, А.Ф. Миронов. Синтез модельных порфирин-хлориновых димеров с простой эфирной связью. // Биоорган, химия. 1995. - Т. 21. - С. 230-234.

109. Методы химии углеводов. / Ред. Н. К. Кочетков. М.: Мир. 1967.

110. Р. П. Евстигнеева, А.В. Любешкин, М.В. Аникин, Ю.Л. Себякин, М.С. Бархударян, А.В. Турина, Е.В. Казакова. Новый подход к синтезу 1,2-транс-гликозил-диглицеридов. // Доклады РАН. 1993. - Т. 330. - С. 210-213.

111. Химия углеводов / Н.К. Кочетков, А.Ф. Бочков, Б.А. Дмитриев, А.И. Усов, О.С. Чижов, В.Н. Шибаев. М.: Мир, 1967. С. 223.

112. М. Cerny, J. Vrcos, J. Stanek. Uber die Darstellung von acylierten Derivaten der Glucopyranosylmercaptanen. // Coll. Czesh. Chem. Commun. 1959. - V. 24. - P. 64-69.

113. M. Cerny, J. Pacak. Darstellung von 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-p-D-glucopyranosylmercaptan und von natrium- und gold-P-D-glucopyranosylmercaptid. // Coll. Czesh. Chem. Commun. 1961. - V. 26. - P. 2084-2086.

114. M. Cerny, J. Stanek, J. Pacak. 2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-p-D-galactopyranosylmercaptan und dessen Anwendung zur Synthese von p-D-Thiogalactosiden. // Monatschefte Chemie. 1963. - V. 94.-P. 290-294.

115. D. Hoekstra, N. Duzgunes. Lectin-carbohydrate interactions in model and biological membrane systems. II Subcell. Biol. 1989. - V. 14. - P. 229-278.

116. В.Н. Дворкин, Г. Я. Видершайн. Изучение некоторых факторов, влияющих на взаимодействие углеводсодержащих липосом с галактозоспецифическим лектином. // Биохимия. 1984. - Т. 49. - С. 1862-1866.

117. Р.В. van Seeventer, J.A. van Dorst, J.E. Siemerink, J.P. Kamerlink, J.F. Vliegenthart. Thiol addition to protected allyl glycosides: an improved method for the preparation of spacer-arm glycosides. // Carbohydr. Res. 1997. - V. 300. - P. 369-373.1.l

118. Защитные группы в органической химии. / Ред. Дж. МакОми. М.: Мир. 1976.

119. Методы исследования углеводов. / Ред. А.Я. Хорлин. М.: Мир. 1975. - С. 312.

120. В. Helferich, A. Mitrowsky. Uber N-Glykosyde. // Chem. Ber. 1952. - У. 85. - P. 1 -8.

121. A.Y. Chernyak, G.V. Sharma, L.O. Kononov, P.R. Krighna, A.V. Levinsky. 2-Azidoethyl glycosides: potentially useful for the neoglycoconjugates. // Carbohydr. Res. -1993.-V. 223.-P. 303-309.

122. J. Dahmen, T. Frejd, G. Magnusson, G. Noori. Preparation and applications of 2-bromoetyl glycosydes: synthesis of spacer-arm glycosydes and agglutination inhibitors. // Carbohydr. Res. 1982. -V. 111. -C1-C4.

123. A.S. Fabiano, D. Allouche, Y.-H. Sanejouand, N. Paillous. Synthesis of a new cationic pyropheophorbide derivative and studies of its aggregation process in aqueous solution. // Photochem. Photobiol. 1997. - V. 66. - P. 336-345.

124. R. Margalit, N. Shaklai, S. Cohen. Fluorimetric studies on the dimerisation equilibrium of protoporphyrin IX and its haemato derivative. // Biochem. J. 1983. - V. 209. - P. 547-552.