автореферат диссертации по приборостроению, метрологии и информационно-измерительным приборам и системам, 05.11.10, диссертация на тему:Рентгеновское и пучково-плазменное оборудование для биотехнологии: применение при стерилизации, получении промышленных штаммов микроорганизмов и лекарственных препаратов

Российский научный центр «Курчатовский институт»

003056777

На правах рукописи УДК 621.3.038.6; 621.528

ЗИНОВЬЕВ Олег Анатольевич

РЕНТГЕНОВСКОЕ И ПУЧКОВО-ПЛАЗМЕННОЕ ОБОРУДОВАНИЕ ДЛЯ БИОТЕХНОЛОГИИ: ПРИМЕНЕНИЕ ПРИ СТЕРИЛИЗАЦИИ, ПОЛУЧЕНИИ ПРОМЫШЛЕННЫХ ШТАММОВ МИКРООРГАНИЗМОВ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

Специальность 05.11.10 — Приборы и методы для измерения ионизирующих излучений и рентгеновские приборы 30.00.23 — Биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора технических наук

Москва — 2007

003056777

Работа выполнена в Российском научном центре «Курчатовский институт»

Официальные оппоненты: доктор технических наук, профессор

диссертационного совета Д 520.09.04 при Российском научном це «Курчатовский институт» по адресу: 123182, г. Москва, пл. Акаде Курчатова, д. 1

С диссертацией можно познакомится в научно-технической библиотеке Российского научного центра «Курчатовский институт»

Автореферат разослан « ю » Л--* 2007 г.

Цитович Александр Павлович

доктор биологических наук, профессор Грязнева Татьяна Николаевна доктор технических наук, Карпухин Вячеслав Тимофеевич

Ведущая организация:

ОАО Институт прикладной биохимии и машиностроения

Ученый секретарь диссертационного совета, к.т.н.

Г.В. Яковлев

Актуальность проблемы

Проблема создания мобильного оборудования для биотехнологии возникла в связи с назревшими задачами стерилизации объектов в поточном производстве, а также при создании новых высокоактивных промышленных штаммов микроорганизмов-продуцентов целевых продуктов синтеза.

В настоящее время известны разные методы стерилизации : текучим паром, химические, ультрафиолетовое облучение, гамма квантовые и др. не всегда обеспечивающие решение возникающих производственных задач. Что касается селекции промышленных штаммов микроорганизмов с применением искусственного мутагенеза = ультрафиолетового излучения, гамма и СВЧ облучения, а также химических методов, то они не всегда приводят к удовлетворительным результатам. Генно-инженерные методы открывают хорошую перспективу получения высокоактивных штаммов промышленных микроорганизмов, но до настоящего времени они также не дали заметных результатов в микробиологической промышленности.

В свете изложенного ясно, что исследовательское направление на разработку новых подходов промышленной стерилизации продукции, а также отбора высокопроизводительных штаммов микроорганизмов продуцентов целевых продуктов является актуальным и своевременным.

Цели и задачи работы

Целью работы является разработка рентгеновского и пучково-плазменного оборудования для применения в боитехнологии при стерилизации, получении промышленных штаммов микроорганизмов и лекарственных препаратов.

Для достижения этих целей необходимо решить следующие задачи :

• разработать и уточнить проекты тактико-технических данных на радиационное оборудование и приборы контроля режимов пучково-плазменных разрядов в атмосфере и конденсированных веществах,

• разработать концепции воздействия быстрых электронов пучково-плазменного разряда на различные штаммы микроорганизмов в

вегетативных и споровых вариантах с целью установления радиационного порога их деструктуризации,

экспериментально апробировать модели радиационной стерилизации объектов, инвазированных стойкими микроорганизмами : медицинские объекты, почтовые отправления, объекты культурно-музейного характера

идр,

экспериментально изучить связи констант скоростей мутации клеток промышленных микроорганизмов с параметрами и режимами воздействующего на них пучково-плазменного разряда, возбуждаемого быстрыми электронами электронных ускорителей в импульсном и непрерывном режимах облучения,

разработать экспериментальные регламенты пучково-плазменной обработки культуральных сред при атмосферном давлении в асептических условиях для штаммов промышленных микроорганизмов-продуцентов антибиотиков : гентамицина, карминомицина, линкомицина, авермектина с целью повышения их биологической активности на 25 -30 %,

разработать регламенты и апробировать экспериментально облучение промышленных штаммов микроорганизмов-продуцентов бацитрацина и тилозина с целью повышения их биологической активности при получении кормовых добавок в промышленном производстве , разработать регламенты и апробировать экспериментально облучение промышленных штаммов микроорганизмов продуцентов авермектинов пучково-плазменным разрядом с целью повышения их биологической активности при получении препаратов авермектинового направления , апробировать пучково-плазменные технологии при производстве новых медицинских энтеросорбентов и способов создания их лекарственных форм, а также лекарственных препаратов на основе новых штаммов микроорганизмов-продуцентов антибиотиков.

Научная новизна.

1. Впервые разработано мобильное оборудование и приборы контроля режимов пучково-плазменных разрядов в атмосфере и конденсированных веществах.

2. Впервые разработаны методы воздействия быстрых электронов пучково-плазменного разряда на различные штаммы микроорганизмов в вегетативных и споровых вариантах с целью установления радиационного порога их деструктуризации.

3. Впервые апробированы модели радиационной стерилизации объектов, инвазированных стойкими микроорганизмами : медицинские объекты, почтовые отправления, объекты культурно-музейного характера и др.

4. Впервые экспериментально изучены связи констант скоростей мутации клеток промышленных микроорганизмов с параметрами и режимами воздействующего на них пучково-плазменного разряда, возбуждаемого быстрыми электронами электронных ускорителей в импульсном и непрерывном режимах облучения.

5. Впервые обнаружено явление корреляции констаты скорости мутаций микроорганизмов с параметрами виртуальной электронной волны де-Бройля (Ад) ускоренных электронов ППР, что позволило прояснить процесс взаимодействия быстрых электронов с клетками микроорганизмов и увеличить частоту (РМ) их мутаций. Детальное уточнение параметров Хд, коррелирующих с БМ позволило, «управляя» индуцированным мутагенезом изменять наследственные свойства промышленных штаммов микроорганизмов-продуцентов антибиотиков.

6. Впервые применены пучково-плазменные технологии при производстве новых медицинских энтеросорбентов и способы создания их лекарственных форм, а также лекарственных препаратов на основе новых штаммов микроорганизмов - продуцентов антибиотиков.

7. Впервые получены новые сведения о выживаемости микроорганизмов, и их спор , при одних и тех же поглощенных дозах облучения, но

различающиеся по мощностям доз. Новые полученные данные свидетельствуют о том, что импульсное рентгеновское (х-гамма) излучение агрессивнее воздействует на живую клетку (в режиме предлетальных доз).

Практическая ценность работы Практическая ценность работы заключается в том, что: разработанное рентгеновское и пучково-плазменное оборудование для биотехнологии использовано для получения новых, защищенных патентами РФ , штаммов микроорганизмов :

1. Штамм Actinomyces roseolus - продуцент антибиотика линкомицина ВКМП-815 .

2. Штамм Bacilluslicheniformis А-81-продуцент бацитрацина.

3. Штамм Streptomyces fradiae ВНИИСХМ-53.

4. Штамм Streptomyces avermitilis - продуценты авермектинов : Str. Avermitilis - 51 и Str. Avermitilis - 54.

5. Получен новый энтеросорбент для медицинского применения «Полифан» патент РФ 2125463 - 1998г.

6. Разработаны новые методы стерилизации почтовых отправлений больших объемов с помощью электронных ускорителей ( ранее существовал метод стерилизации единичных пакетов, листов и т. д. ).

7. На основе новых штаммов - продуцентов авермектинов в настоящее время выпускаются противопаразитарные препараты «Аверсект-2» , «Ниоцид», «Фитоверм».

Положения, выносимые на защиту

1. Рентгеновское и пучково-плазменное оборудование для селекции новых штаммов микроорганизмов - продуцентов целевых продуктов.

2. Рентгеновское и пучково-плазменное оборудование и регламенты стерилизации крупных партий почтовых отправлений пучково-плазменным разрядом , возбуждаемым электронным пучком ускорителя, в том числе : • эффект повышения резистентности импульсного облучения по-

сравнению с непрерывным, при равных средних мощностях облучения

ионизирующим излучением штаммов актимомицетов фгерЬтусез) в их вегетативных и споровых состояниях Способ стерилизации медицинского и пищевого оборудования. Патент РФ № 207 67 37.1997

3. Способы повышения биологической активнасти промышленных штаммов микроорганизмов - продуцентов антибиотиков А. С 1410529 - 1998г., патент РФ № 1824912 1991г. в том числе:

• метод малых мутаций с закалкой тормозным короткоимпульсным рентгеновским излучением

4. Способ получения промышленных штаммов микроорганизмов-продуцентов бацитрацина и тилозина - А.С 1805666 - 1991 г, патент РФ 2007457 - 1994, в том числе : патент 2057180 - 1993г

• обнаружение эффектов резонансной зависимости частоты мутаций микроорганизмов от длинны волны быстрых электронов, проходящих через кристаллы и бомбардирующих культуральную среду.

1. Способ получения промышленных штаммов микроорганизмов-продуцентов авермектинов: Патент РФ 2048520 - 1992,20074256 - 1992г.

Личное участие автора . Автором сформулированы общие концепции и основные направления исследований . Все экспериментальные материалы, представленные в диссертации , посвящение созданию оборудования и применению его в биотехнологии разработаны с участием автора : т.з. на оборудование, регламенты радиационных режимов индуцированного мутагенеза микроорганизмов , стерилизации , создание новых медицинских и с/х препаратов.

Автор считает своим приятным долгом поблагодарить всех своих соавторов за плодотворное сотрудничество.

Апробация работы Основные результаты диссертационной работы докладывались на 8 Всесоюзных, Российских и Международных научных семинарах, конференциях и симпозиумах, зарегистрированы в 10 патентах Р.Ф.

Цикл работ, выполненных Зиновьевым O.A. в соавторстве был отмечен отраслевыми премиями Производственного Объединения «Мосмедпрепараты» им. Л.Я.Карпова (1990 - 1996гг), выдвинут Научным Советом РНЦ «КИ» на премию Правительства Р.Ф. в области науки и техники (2003г). Работы составляющие основное содержание диссертации используются в НПО «Мосмедпрепараты» им. JI. Я. Карпова ( ныне АО «Ферейн» ), ТОО НПО «Фармбиомед» : ( препарат «Фитоверм» ), ООО «Агровет», ООО НПО «Экобиовет» : (препарат «Ниацид»), 00 «Бифидум» : (получение новых штаммов продуцентов антибиотиков авермектинового направления. Использованы также в Московской Государственной Академии Ветеринарной Медицины и Биотехнологии им. К.И. Скрябина при обучении студентов и создании новых экологически чистых препаратов для медицины, животноводства, растениеводства.

Материалы диссертации находят применение при производстве медицинского сорбента - «Полифана» : ( ИМГРАН ), а также при стерилизации объектов медицинского назначения : (инструмента, препаратов, сырья, одежды ). Рекомендации и эксперименты, проведенные в ходе работы предполагают применение их в планах ГО и ЧС : ( стерилизация почтовых отправлений) в РНЦ «Курчатовский институт» и в ООО «Биохиммаш» . Опубликовано в открытой печати около 150 научных работ в том числе 38 по теме диссертации, список которых приведен в конце автореферата.

Структура диссертации Диссертация изложена на 203 страницах включая 114 рисунков, 22 таблицы, а также список использованнх источников из 236 публикаций, состоит из введения (постановка задачи), 7 глав и заключения (общих выводов).

Содержание работы Во введении обоснована актуальность темы диссертации, ее практическое значение, сформулированы основные проблемы и задачи исследований. Уделено внимание предистории, современному состоянию и проблемам применения рентгеновского и пучково-плазменного оборудования для

б

биотехнологии Дана характеристика объектов исследований и наиболее

актуальных применений экспериментальных исследований.

Глава 1 посвящена разработке оборудования, приборов и методов создания

пучково-плазменных разрядов посредством портативных электронных

ускорителей и их устройству, а также биологическим аспектам стерилизации.

Разработка биотехнологического оборудования и процессов стерилизации

объектов проводилось в РНЦ «Курчатовский институт». В рамках этой части

работы были спроектированы, а затем построены (НИИ ЭФА им.

Д В.Ефремова) мобильные ускорители электронов : «Курс 1», с энергией

электронов 170 КэВ, с растровой разверткой луча (L-катод), сечением пучка в

атмосфере (100 х 120) мм2 и ускоритель УС-1 с Е=130 КэВ, плазменным

катодом с конечным сечением пучка электронов (125 х 40) мм2, (рис. 1а,б)

Основное направление исследований - вывод пучка ускоренных электронов в

атмосферу через фольгу выводных окон ускорителей и распространение

электронных пучков в атмосфере Выпускное окно является наиболее уязвимой

частью ускорителей с выходом быстрых электронов в атмосферу. Внешнее

воздушное давление на него приводит к провисанию разделительной А1-Ве

фольги (5-30-50 мкм) между ребрами поддерживающей решетки Решетка i ► служит одновременно и для охлаждения мембраны при прохождении через нее

потока электронов, поскольку она является анодом ускоряющей системы всего

ускорителя

При подаче напряжения на электроды вспомогательного разряда в камере прианодной плазмы возникает ионизированная среда (плазма), которая может генерироваться как в непрерывном , так и в импульсном режимах. Время работы и длительность паузы регулируется блоком управления. Высокое (ускоряющее) напряжение подается одновременно с подачей напряжения на электроды вспомогательного разряда При этом из камеры генерации прианодной плазмы извлекаются ионы, которые ускоряясь, бомбардируют поверхность катода, вызывая эмиссию электронов, которые затем и ускоряются до энергий, соответствующих приложенному высокому напряжению.

Электронный поток извлекается из ускорителя через выводное устройство и попадает на токоприемную пластину позволяющую измерить токовые характеристики пучка.

Ускоритель УС-1 может быть расположен на подвижной платформе ("Газель") и использоваться для стерилизации объектов с плотностью меньше плотности воды, а также для экспериментов по индуцированному мутагенезу микроорганизмов (см гл.4).

Рис. 1а Общий вид стерилизационной установки на основе ускорителя УС - 1. I. Корпус ускорителя с вакуумным насосом типа НВРД - 5Д. 2 Высоковолтный выпрямитель ускоряющего напряжения (ВВ) с фильтром. 3.Высоковольтный трансформатор ВВ (ТВО - 140/50, допускается применение ИОМ - 100/100). 4. Радиационная камера. 5. Высоковольтный кабельный ввод высокого напряжения типа КВП 7/150-3.

Рис. 1, В

Фотография выводного окна ускорителя электронов УС - 1. 1. Направление выхода электронов через площадку (125 х 40) мм выводного окна. 2. Выводное окно с заградительной фольгой (AI - Ве). Видны контуры ггоддержувающей фольгу решетки, образованные давлением воздуха внешней атмосферы. 3. Фланец крепления выводного окна конструкции. 4. Фланец крепления сменной фольги выводного окна (AI; AI - Ве и др.).

На рис.2 представлены дозно-временные характеристики пучка электронов стерилизующего ускорителя УС-1. Графики построены по среднестатистическим экспериментальным данным биологических индикаторов стерильности (Биохиммашгтроект Микробнопррм) и пленочных дозиметров (ИФХ АН Украины), гарантированная точность измерений энергии пучково-плазменного (ППР) разряда в интервале 2-25 х 10" Гй обеспечивается = 10 %.

индикаторов стерильности (Биохиммашпроект Микробиопром) и'пленочных дозиметров (ИФХ АН Украины), гарантированная точность измерений энергии

Рис. 2 Экспериментальные радиационные дозно-временные характеристики ускорителя электронов У С-1. А): ] = Б (Ъ); В): Д = Г(Т) при Ъ = 14мм;

С): Д = Г(г) при 1 = 10; 15; 20 с

Как видно из рис. 2 , в плоскости , находящейся на расстоянии Ъ = 14мм от выпускной (рис 1 В) фольги при плотности тока пучка свободных электронов j = 30-40 мка/см2 экспозиционная доза более Д = 30 Мрад (график А). Плотность тока ускоренных электронов в пространстве Ъ (15-60) мм убывает ( с 36 до 15) мка/см2 соответственно убывает и экспозиционная доза облучения, т.к. часть энергии электронного тока расходуется на ионизацию атмосферного воздуха. Режим квазиимпульсного облучения пленочных дозиметров представлен экспериментальными графиками С[ - С3 в виде

Представленные характеристики токового режима пучково-плазменного разряда в атмосфере и дозные характеристики легли в основу регламентов стерилизации объектов и селекции микроорганизмов — продуцентов целевых продуктов биотехнологии. Стерилизация поверхностей объектов обычно осложняется тем, что отсутствуют точные данные о токовых режимах пучково-

пучково-плазменного (ППР) разряда в интервале 2-25 х Ю4 Гй обеспечивается

± 10%.

I_г—I—С1Л-1--1-1-Ь-

. О 6 - 12 18 21 30 36 j „кА/см*

Д=т (рис 2)

плазменного (ППР) разряда при стерилизации поверхностей сложной формы : резьбовых соединений, отверстий, щелей и др.

На рис 3 представлены экспериментальные результаты проникновения ППР в различные неровности металлических поверхностей. Измерения проводились с применением пленочных дозиметров ДПЦ-2/25 в импульсном режиме облучения в атмосферном воздухе.

Из рис ЗА видно, что с увеличением тени (А), как правило, экспозиционная доза Д , регистрируемая дозиметром Б = (25x25) мм2 спадает, но остается достаточно высокой в области тени, что свидетельствует о распространении энергичных электронов и ионов ППР в эту область. Возрастание Д в области тени по-видимому происходит в результате отражения электронов от металлической стенки, отчего повышается их концентрация в районе А=6-8мм Подобное явление обнаруживалось и в случае уголка, выполненного и^ диэлектрика.

Результаты экспериментального исследования распространения ППР в узкие щели в металлах при атмосферном давлении представлены на рис ЗБ для характерных размеров б < 5мм. В этом случае доза возрастала пропорционально энергии электронов Е. Эксперименты выполнены с применением ускорителя электронов УС — 1 .

Из результатов эксперимента следует, что при составлении регламентов ППР стерилизации поверхностей необходимо обследование этих поверхностей для получения данных для коррекции электронных режимов ускорителей электронов в соответствии с методиками, представленными на рис 3. Интересные результаты были получены при исследовании физических и биологических аспектов стерилизации с помощью пучково-плазменных разрядов. По результатам таких исследований было установлено, что инактивация биослоя с учетом диффузии и гибели электронов, пересекающих границу раздела плазма-конденсированное вещество имеет критическую глубину биослоя X кр, меньше которой все клетки подавлены,

Е=130 КэВ ¡=2 А/см2 т=0,1 мкс п =100имп

Е=125 Кэ В ]=30 МА/см2 Т-15 мкс п=ЮОО имп

,<г;

Воздух Р=760 торр

8 10 12

Рис ЗА

а больше практически все жизнеспособны : Хкр =

Рис ЗБ 0,7Ш(5СМ1\Г)

1/7 К+ УК

где: N - число электронов, падающих на единичную площадку, - длина пробега электронов в биослое до потери энергии, см, - то же, до захвата, см X — до упругих столкновений.

Для воды 5СМ =10"' см"2, К=1013 см'2 при этом Хкр~6 мкм. При значении Хкр> 100 — 200 мкм стерилизация поверхностей объектов достигается пучком с энергией (100 - 200) КэВ.

Учитывая радиационные и ионизационные потери выведена инженерная формула средней глубины пробега электронов в веществе в диапазоне энергий (100 — 200) КэВ с точностью 25 % : = Ск Еэ. Значения для полиэтилена, оргстекла и воды совпадают с точностью 25 % при Е = 100 КэВ и дают величину пробега >.к = 0,1 мм, что соответствует величине Ск = 10 "7 см/эВ.

Принимая Ск = Ск бакт получаем число электронов, рожденных в клетках бактерий в единице объема и в единицу времени, равное

Q = GE: ДЕ)( 1 :СкбактЕ), где: j - плотность тока быстрых электронов А • см"2. Расчет показывает, что при j = 10'6 А • см'2 величина Q = 1.8 ■ 1018 электронов/с • см3 при этом плотность N3 электронной компоненты подтвержденная экспериментально равна: N3 = (3 • 105 j) : (Кпр - N0), где: Кпр = 10"18 см3/с - коэффициент диссоциативного прилипания, N0 - концентрация нейтральных молекул в конденсированной фазе, см'3. Приведенный расчет и эксперимент дают следующее соотношение для практического использования : t > 0.8 • 10'8/ j где: t - время, с. Из этого соотношения вытекает, что стерилизация поверхностей объектов обеспечивается при плотности тока ускоренных электронов j > 1 мкА/см2 в течение 0,001 сек.

Разработанная модель расчетной оценки позволила обосновать базу для создания оптимальных вариантов конструкции мобильного стерилизационного оборудования (установки «С - 5», «Курс - 1», «УС-1», «ОТР - 1» и др), установить регламенты поверхностной стерилизации объектов.

Глава 2 посвящена исследованию тонкой стенки (полиэтилен - 5 < 400 мкм) герметичной чашки Петри, предназначенной для ППР экспериментов с культуральной средой, включая и режим транспортировки. Для того, чтобы оценить характер радиационного поведения конверторных свойств конденсированной среды на распространение ускоренных электронов проводились исследования брикетов состоящих их 5-6 полиэтиленовых слоев толщиной 50 мкм каждый. Электроны (Е = 120 КэВ, jo=100 мкА/ см2 ) проходили через каждый из слоев брикета, теряя свою энергию в полиэтилене. Между слоями располагались пленочные дозиметры ( 5 = 0,025 мм ); при этом обеспечиватся отвод зарядов и тепла слоев. При поглощенных дозах в пределах 0-30 Мрад (0 - 30 • 104Гй ) оптическая плотность дозиметрической пленки ( на длинне волны максимального поглощения X = 515 нм )

изменялась в пределах 0,93 - 0,30, что соответствовало диапазону начальной градуировки дозиметров по эталону. При измерениях считалось, что потери энергии электронов в полиэтилене адекватны дозам электронного облучения в дозиметре. Облучение биокультур и контрольных дозиметров производилось однократными сеансами. В отдельных случаях допускалось и фракционированное облучение, в предположении, что поглощенная доза обладает свойством накопления.

Изменения оптической плотности дозиметров измерялись спектрофотометром СФ - 18, затем с помощью градуировочного графика находились значения поглощенных доз.

Результаты исследований конвертерных свойств представлены на рис.4 зона I - II. Здесь на экспериментальный график , характеризующий распространение электронов в воздухе, наложена экспериментальная кривая поглощения энергии в полиэтилене при прохождении электронов через стенку брикета (в связи с этим между точками а' а" оси абсцисс (зона II) для наглядности изменен масштаб ). Характерные колебания кривой поглощения в полиэтилене (см. точки а, б, в, г) находят объяснения в свете современных представлений. Максимум поглощения происходит в глубине полиэтиленового слоя при значениях 5 = 130 - 150 мкм. По мере замедления электронов при углублении в вещество растут ионизационные потери. Кроме того, растет число вторичных и обратно рассеянных электронов из более глубоких слоев вещества. Поэтому при малой глубине происходит увеличение поглощенной энергии. Начиная с некоторой глубины, существенным становится уменьшение числа электронов, двигающихся в первоначальном направлении, меньше и обратно рассеянных электронов, что приводит к спаду поглощенной энергии.

Рис. 4. Экспериментальный график плотности дозы электронного облучения в полиэтилене.

В третьей главе приводятся результаты короткоимпульсного облучения микроорганизмов. При экспериментальной разработке объемной стерилизации испытывались, современные импульсные рентгеновские стерилизаторы типа «Тайна - 1» , «РС - 20» (см. рис. 5) и импульсный электронный ускоритель «Факел» ЛУЭ (Е ~ 9 МэВ ) с параметрами Ер = 1.2 МэВ ; I = 10"7 с , Р = 5 Гц модернизированные для целей объемной стерилизации.

Рис.5. Рентгеновский стерилизатор «РС - 20», ускоритель электронов с плазменным прерывателем тока (ППТ). 1 - корпус ускорителя, 2 - фланец выхода рентгеновского излучения, 3 - вакуумные насосы, 4 - генератор Маркса (ГИН).

Биологические образцы устанавливались па Площадке и районе круглой фольгмрованной диафрагмы {видна на рисунке). Общая электрическая мощность установки около 60 Квт.

Но отзывам специалистов, рентгеновские стерилизующие источники подобного типа на ■ основе 3 МП ( 500 Квт) ускорителя могут быть более экономически эффективными, исходя из прямых затрат и затрат на электроэнергию, по сравнению с соответствующими радиоизотопными излучателями.

На выбор в нашем эксперименте, мощного частотно-импульсного генератора с плазменным прерывателем тока в качестве источника тормозного рентгеновского излучателя, в значительной степени повлияла перспективность промышленного применения его в биотехнологии, вплоть до замены маложивущих гамма-установок на основе изотопов.

На рис.6 представлена эквивалентная электрическая схема генератора с плазменным прерывателем тока.

¿т А А,

Рис. 6. Эквивалентная схема генератора с ППТ

Условные обозначения в схеме: Сг - первичный емкостной накопитель (ГИН); Иг - внутреннее сопротивление ГИНа; Ьг - воздушная индуктивность, образуемая ГИНом и его подводкой к изолятору; Ьв - вакуумная индуктивность - индуктивность между высоковольтным изолятором и обострителем; 11ПГ1Т — плазменный прерыватель тока - элемент с нелинейным сопротивлением ; Ьн -вакуумная индуктивность между ППТ и нагрузкой (диодом); - электронный диод.

Электрическая схема ускорителя представляет собой ЬС - контур замкнутый через ППТ, параллельно которому включен диод-нагрузка (рис.5). При замкнутой плазмой зазоре ППТ электрическая энергия СЦ20

2

емкостного накопителя - генератора импульсов напряжения (ГИНа) -преобразуется в энергию магнитного поля ЬТ20 за характерное время

2

t = T/4 ~ 10"6 с, после чего сопротивление ППТ возрастает и энергия магнитного поля реализуется в виде потоков ускоренных частиц в ППТ и шунтирующих его элементах за время t = 10'7 с. Развиваемое при этом напряжение на ППТ : KUo = (R/r) Uo, где К - коэффициент умножения напряжения, R - общее сопротивление ППТ (плазменного прерывателя тока) и параллельно включенных элементов : диода, вакуумной линии и изолятора, г-волновое сопротивление LC - контура . Заметим: применение керамики при изготовлении элементов ППТ значительно увеличило ресурс его работы по -сравнению с аналогичными конструкциями из других изолирующих материалов.

Выходной узел установки представляет собой металлический фланец, в который вваривалась фольга из нержавеющей стали, толщиной 0,8 мм и диафрагма, внутренним диаметром 450 мм. Тормозное излучение выходило наружу с минимальными потерями. Эффективная область облучения составляла параллелепипед с размерами ( 500 х 500 х 500) мм3. Поглощенная доза в центре фольги 0,1 гр/имп при пиковой мощности 1 Мр/с.

Рентгеновская стерилизационная установка PC — 20 до настоящего времени

считается уникальной по своим радиационным параметрам, механизму

» t

действия и эффективности стерилизации. Общий вид установки представлен на рис.5, а результаты биотехнологических экспериментов - на рис. 7 На рис.7 приведены графики выживаемости аттестованных микроорганизмов при рентгеновском короткоимпульсном облучении (ТКИО) и непрерывном в поле гамма-излучения (Со60). Они показывают, что эффективность стерилизации на установке PC - 20 выше в 2 - 2,5 раза, чем на установке ГУТ -200 (Со60) (Институт токсикации и стерилизации).

Рис. 7. Графики, характеризующие выживаемость микроорганизмов при непрерывном и импульсном облучении: Пунктирные линии - непрерывное облучение Еу = 1,33 МэВ, сплошные линии - импульсное облучение г = 10"7сек; Ер = 1,5 МэВ .

В процессе испытаний обнаружен эффект невзаимозамещения средней мощности экспозиционной дозы (Рр) импульсного облучения микроорганизмов

{ НВЗ ) и времени облучения (ДТ). Здесь экспериментально показано ( в рентгеновском диапазоне длины волн) что : ¿Ti Ф АТ2 т.е. ДТП х Pon Ф const. Pol Pß2

Из графиков видно, что неравенства Г'ДТ,, ■ Рср # |'"ЛТП ■ Р0 при непрерывном и импульсном облучении расходятся в величинах на несколько порядков для каждой из популяций микроорганизмов. Эффект подавления микроорганизмов может завысить от каждого из параметров ДТ и Р отдельно.

Ранее, в фотохимии подобные эффекты имели название : отклонения от закона Бунзен Рос ко. Обнаруженный эффект (НВЗ) открывает широкую перспективу для использования импульсных рентгеновских стерилизаторов в промышленности.

На рис.8 представлен один из скарификаторов, облученный тормозным коротко импульсным излучением (ТКИО) на установке «Тайна Р» дозой Д=ЮКрад а = 107 сек).

Рис. 8 Облучение скарификатора тормозным коротко импульсным излучением (ТКИО) на стерилизационной установке «Тайна Р» (PC - 20):

1) Скарификатор ипфецированный микроорганизмами Aspergillus Niger на стандартной питательной среде без облучения - контроль. Виден интенсивный прирост.

2) Скарификатор, инфицированный микроорганизмами Aspergillus Niger -облучённый.

Из эксперимента сделаны два практических вывода :

a) Существуют, видимо, режимы работы генераторов тормозного рентгеновского излучения, при которых влияние экспозиционного поля излучения на микроорганизмы ( на живую клетку) настолько велико, что стерилизация объектов происходит в течении одного импульса мощного короткоимпульсного облучения. Назовем такую мощность излучения через индекс \Укр. Доза экспозиционного облучения при этом - Д\у. Практически такие мощности экспозиционных доз в одном импульсе тормозного рентгеновского излучения (Рту) еще не получены (в литературе данных нет).

b) Существующая практика оценки предельно допустимых норм облучения тормозным рентгеновским излучением людского персонала (и облучение гамма-излучением) - так называемый критерий максимального прижизненного облучения человека (10В) -требует внимательного пересмотра. Совершенно очевидно, что при облучении мощными импульсными дозами рентгеновского облучения (и гамма-квантами) нормы должны быть уменьшены для млекопитающих организмов и человека.

Выводы а) и Ь), по - видимому, можно отнести к любому ионизирующему излучению (например, УКВ и СВЧ). Правда, создание значительных мощностей в импульсе - Р\у ограничивается свойствами атмосферного воздуха, приходящего в плазменное состояние при линейных напряжениях >30 кВ/см.

В диссертации рассмотрены возможности стерилизации почтовых отправлений пучково—плазменным разрядом. До настоящего времени в литературных источниках последних лет указывалось о невозможности стерилизации пучком электронов объектов большой толщины из-за малого проникновения пучка в бумажную продукцию (см. ДАН 2002 т 325 N 3).

В связи с этим в диссертации были исследованы конверторные свойства пучков ускоренных электронов и возможности создания пучково -

плазменных разрядов в стерилизуемых объектах. Предлагаемая технология базируется на основе изобретения - патента Р.Ф. № 207 67 37. 1994 (РНЦ «КИ») и исследовании конверторных свойств электронных пучков электронов различной энергии (0,5 - 9 МэВ) при распространении их через атмосферу и сконденсированные вещества (представлено в диссертации см. гл. 3).

Экспериментально доказано, что электронные пучки с энергией электронов Е = 9 МэВ в режиме импульсной (t = 1 мкс) приводят к достаточно высокой степени стерилизации объемной продукции. Инициируемый пучково -плазменный разряд в сканденсированном веществе (5 - 6) 5, где : 5 = 128 листов бумаги А-4 толщиной 1,5 мм каждый производит объемную стерилизацию продукции. Экспериментальное апробирование стерилизации указанных объектов производилось также на гамма установках (Еу = 1,33 МэВ) и рентгеновском стерилизаторе PC - 20, Ер = 1 МэВ, t = 10"7с, PR„ = 100 Мр/с.Стерилизация объекта и использованием ускорителя электронов, Е = 9 МэВ, t = 0,1 мс, со сканирующим пучком электронов, занимает 30 минут, при одновременной обработке 12 объектов. Прочностные свойства бумаги во всех экспериментах не снижались ниже допустимых. В экспериментах использовались споры и вегетативные формы микроорганизмов (Вас. thuringiensis, Вас. subtilis и др.). В качестве детекторов: дозиметрические цветовые пленки, дибутилфталатныедетекторы (ДБФ), разработанные в ходе настоящей работы эксперименты по стерилизации промышленных вариантов почтовых отправлений производились в соответствии с программой антибиотерроризма. Количество спор сублимациозно высушенной тест-культуры Вас. Thuringiensis - имитатора возбудителя сибирской язвы -Bac.antracis, составляло 2 • 108 в каждом из 10 полиэтиленовых пакетов размером 150 х 150 мм2. Поскольку противодействие биотерроризму имеет своей задачей обеспечить безопасность людей, то для организации процесса стерилизации использовались принципы безопасности, заложенные в правилах GMP ЕС.

На рис. 9 представлен общий вид опытного карусельного конвейера с коробками объемом 200 х 200 х 600 мм3 , в котором находились: бумага и направлялся сканирующий в горизонтальной плоскости пучок ускоренных электронов. Возникающая ионизация атмосферного воздуха и сконденсированных веществ в стерилизуемом объекте приводит к образованию «холодных» электронов пучково-плазменного разряда и к гибели живых клеток опытных микроорганизмов.

Результаты эксперимента представлены в виде графика (см рис. 10) зависимости выживания спор от глубины расположения тест-систем, с учетом рассчитанного времени облучения - 30 мин. Как видно на рис. 16, кривая выживаемости спор не имеет монотонного (класического) вида, как это имеет место при гамма-облучении микроорганизмов. Волнообразный характер графика поглощения энергии пучково-плазменного разряда в толще бумаги, а также относительной величины выживаемости в зависимости от глубины расположения тест-систем Ва6с/В0 = Я[ВЭКС) обусловлен обратной реакцией ионизации в толще бумажного материала. По мере замедления электронов при углублении в вещество стерилизуемого объекта растут ионизационные потери. Кроме того, растет число вторичных электронов и обратно рассеянных электронов из более глубоких слоев вещества. Поэтому при малой глубине происходит увеличение поглощенной энергии. Начиная с некоторой глубины, существенным становится уменьшение числа электронов, двигающихся в первоначальном направлении. Меньше становится и обратно рассеянных электронов, что приводит к спаду поглощенной энергии в более глубоких слоях вещества. Перечисленные процессы приводят к образованию максимума на кривой поглощения. Спад на переднем и заднем участке максимума объясняется процессами отражения и рассеяния электронов на границе раздела вещества - воздух. Аналогичная картина поглощенных доз наблюдается в толще полиэтиленовой пленки. Из графика видно, что после прохождения толщи бумаги в направлении вектора скорости энергичных электронов поглощенная доза электронного облучения снижается до минимального

значения соответствующего заданной величине стерилизации (В3пС/В„ = 3,3 • 10^). В слоях (3-4) 5 отмечается наибольший эффект подавления роста спор. В этих слоях поглощенные дозы максимальны. Таким образом, при 30 минутном облучении с энергией 9МэВ заданный критерий стерилизации (33" 10"6) обеспечивается вплоть до толщины слоя бумаги (3-4) 6. Эксперименты показали, что увеличение заданной глубины стерилизации (толщина слоя) бумаги можно обеспечить за счет увеличения : 1) мощности экспозиционной дозы, 2) энергии пучка электронов > 9 МэВ, 3) времени облучения Т > 30 мин.

Рис. 9 Карусельный конвейер установки «Факел».

Стрелками обозначено направление потока ускоренных электронов, перпендикулярное плоскости карусельного конвейера, нагруженного коробками с книжной продукцией. Сканирующий луч (Р=150 Гц, а ~ 10°, Ь=сопзг.) облучает коробки с торца превращений конвейера со скоростью п~2-5 об./мин. Г - частота сканирования, а - угол отклонения, Ь - высота центра конвейера и осевой линии пучка электронов.

Рис. 10 Ва5С - абсолютное значение выживаемости спор модельной культуры

Озал - заданное значение экспозиционной дозы Мрад

Бцзб - величина поглощённой дозы избыточная

5 - толщина пачки бумаги (128 листов)

В0 - выживаемость биоспор без облесения 1/г

Э - вектор направления потока электронов

Глава 4 диссертации посвящается вопросам применения ускорителей пучков электронов для селекции штаммов микроорганизмов. Проблема получения высокоактивных штаммов промышленных микроорганизмов продуцентов антибиотиков и других биологически активных веществ - одна из острых проблем промышленного микробиосинтеза. Методы генной инженерии дают некоторые возможности теоретического осмысления процессов получения высокоактивных штаммов продуцентов, но, до настоящего времени не нашли должного распространения. Большинство штаммов, по крайней мере в Р.Ф., получены методами традиционной селекции. С течением времени биологическая активность промышленных штаммов снижается при спонтанной мутации расщепления и снижается при изменении внешних физических, химических и др. условий. Как повысить биологическую активность промышленных штаммов или получить новые, более продуктивные? При возбуждении индуцированного мутагенеза в штаммах микроорганизмов Асг.гозео1из обнаружена корреляция величины длины волны де-Бройля со скоростью индуцированных мутаций микроорганизмов. На расстояниях Х„ > X (X = 5 - 2 мм) корреляция М = £ (ах) отсутствовала. Отсюда следовало, что процесс корреляции развивается в дифракционных зонах быстрых электронов пучково-плазменного разряда. Каждая из «электронных нитей» при попадании на поверхность создает дифракционную картину, т.е. динамический процесс превращается в статический на выходной поверхности ( и вблизи фольги). Имея в виду, что длина волны де-Бройля электрона : Хя = И , и v = Еэ , где : Е, v-

ти Ь

энергия и скорость электронов, ш - масса электрона, V - частота, Ь -постоянная Планка. Сгущение и разрежение плотности влетевших в культуральную жидкость электронов схематически представлено на рис. 11, откуда видно, что плотность электорнов на поверхности и в толще среды имеет максимумы с зарядом q = q1, и минимумы - д = 0. Совокупность точечных зарядов и их распределение, заданные периодичностью волны де-Бройля создают электрические поля «Е» в жидкости способные совершать работу по

перемещению нуклеотидов, молекулярных цепей химических элементов и др. с силой Б = Кс^г2 ■ (г: г),

где: г - расстояние между зарядами, ql, q2 - плотность

точечных зарядов в пучностях волн де-Бройля, г / г - радиус-вектор имеющий направление радиуса вектора г . Следовательно, вектор направлен

Ч

перпендикулярно образующим, через районы равной плотности «q» электронов в стоячих волнах де-Бройля. Экспериментально подтверждена зависимость: М = Г (Е , Хд , X , а , Р), где : а и Р угловые ориентации поверхностей культуральных сред. Показано также, что с приближением величины Хд к характерным размерам биологических клеток скорость индуцированного мутагенеза их возрастает. Естественно предположить, что совпадение пространственных структур клеток с пространственными гармониками Хд может приводить к пространственному кросинговеру в наследственных (и др.) цепях клеток. Кроме того, «матрица» из силовых электронных полей, совершая работу по перемещению среды, может разрушать клетки, подобно тому, как делает вирус, управляя ферментами-разрушителями. Не исключено, что в этом случае затрагиваются основные компоненты регуляторных механизмов переключателей: ДНК, РНК полимеразы репрессоров, белков Сго. Анализ ДНК - белковых взаимодействий, регуляция активности генов и взаимодействий аминокислот с парами основании и т.д. не входили в круг технологических задач т.к. являются вопросами молекулярной биологии.

Процесс формирования электронной пространственной матрицы зоны IV и действующие электромагнитные силы в дифракционной зоне представлены на рис. 11. В качестве эмиттера служит плазменный катод (зона I). Кристаллическая каналирующая структура - алюминиево-бериллиевая фольга приблизительно 100 мкм (зона И).

Рис. 11 А-Б - зоны формирования электронных пучков в ускорительном промежутке (вакуум). В- Д - дифракционные зоны формирования свободных ускоренных электронов.

I - зона излучения, II - формирования и ускорения электронов в кристалле.

II - зона формирования электродинамических сил и зарядов.

III - вид в плане структуры электронной «матрицы» в культуральной среде. Новый высокоактивный продуцент антибиотика бацитрацина получен из

штамма микроорганизмов Bacillus Licheniformis (штамм А - 81) методом малых мутаций и вариаций виртуальной волны де-Бройля на установках Kypcl, ОТР1, ОТР2 (Еэ = 400 КэВ). Последовательным изменением режима ППР достигались сдвиги биологической активности Д А|_з в сторону плюс вариантов (см. рис.12). Интегральный скрининг всех промежуточных штаммов показал, что биологическая активность нового штамма микроорганизмов Bacillus Licheniformis - продуцента бацитрацина повысилась, с 620 ед/мл до 970 ед/мл.

А ЮОО

500

0

Номера изолятов Рис.12. Моноварианты, полученные в результате облучения (ППР) и скрининга штаммов продуцентов бацитрацина (Bacillus Licheniformis - шт. А-81).

1 - контроль, 2 - варианты с активностью более 40 % по сравнению с контролем (620 ед/мл), 3 - 4 - варианты с активностью более 20 - 50 % соответственно. Разброс по активности характеризуется вертикальными линиями.

Ключевым методом селекции микроорганизмов, в этом вопросе, является адресный мутагенез. Основным индуктором мутагенеза выбран пучково-плазменный разряд, возбуждаемый электронными ускорителями, представленными в 1 - 2 главах.

Повышение биологической активности промышленного штамма микроорганизмов Actinomyces roseolus (шт 7-219 ВКПМ S-815) - продуцента антибиотика линкомицина осуществлялось на установке «С — 5» и «УС - 1». Поисковые эксперименты начинались с анализа кривой выживаемости (см. рис 13), установления характерных точек и хода значений «В». После этого составлялся регламент облучения, как правило для нескольких десятков

ступеней обработки, т.к. не все ступени давали приемлемый результат, например см. рис. 14.

4Ш

В°у6

ускоритель электронов УС-1-

50-

в с

ПхЮ2 -3?крад

о

I

3

Рис.13 Выживаемость микроорганизмов Асг.КоэеоЬз под воздействием ППР, Е= 110 КэВ, j = А/см2, 1=0,8 мкс, г = 2 мм (УС-1). 1. эксперимент 2. параболическое приближение 3. линейное приближение А. В. С.-точки ~ 100% подавления культуры. Д - характерные точки изгиба кривой выживаемости штамма микроорганизмов (характеристика выживаемости имеет классический вид), п = 74 Крад за импульс.

После облучения (1-й пассаж.): Е = 100 КэВ, ^ = 60 мкА/см2, Бэ к 20 Мрад культуральную облученную среду (споры) из полиэтиленового пакета рассевали в чашки Петри (в асептических условиях) на агаровую среду № 6 и помещали в термостат, Т = 27°С на 10 суток. Выросшие колонии (не менее 100) пересевали в пробирки на косой агар - среда № 6 и инкубировали их в термостате при той же температуре в течении 7 суток.

Для проверки активности монокультур производили засев с косяка посевной колбы содержащей 50 мл посевной среды состава г/л.воды : калий сернокислый - 1,5 ; кукурузный экстракт - 20,0 ; мел - 5,0 ; натрий хлористый - 3,0 ; сахароза - 15,0 ; соевая мука - 5,0 ; РН - 6,5 - 6,7. посевную культуру 30

выращивали 48 часов при 27° ± Io С на качалке (200 оборотов в минуту). Выросшей культурой засевали ( в количестве 5 % по объему) 40 мл ферментационной среды (в качалочных колбах) следующего состава, г/л воды : калий сернокислый - 1,5 ; кукурузный экстракт - 20,0 ; мел - 8,0 ; сахар сырец - 81,5 ; соевая мука - 45,0 ; цинк сернокислый - 0,2 ; масло подсолнечное -25,0, РН - 6,6 - 6,7 (доводили до стерилизации 40 % раствором едкого натра). Биосинтез вели при 27 ± 1°С на качалке 168 часов. Определение активности производили биологическим методом и отбирали варианты с активностью не менее 4000 мкг/мл. Биологическая активность контроля (пакет-2) оставалась на уровне 3500 мкг/мл.

Полученный промежуточный штамм подвергался облучению в режиме 2-го пассажа : Е = 180 КэВ, jn = 2 А/см2 при t = 10"7 с, с паузами 1,5 с до дозы облучения 0,1 Мрад. После аналогичной биотехнологической процедуры рассева и выделения монокультуры установлено, что средняя биологическая активность возросла с 4000 мкг/мл до 4550 мкг/мл.

3 (пассаж). Полученную в пассаже 2 культуру со средней биологической активностью 4550 мкг/мл использовали для приготовления суспензии спор в воде. Наливали 0,3 мл суспензии в предварительно стерилизованную полиэтиленовую камеру с размерами 30x30x0,1 мм с толщиной полиэтиленовой .стенки менее 40 мкм и заваривали горячим роликом. Устанавливали камеру в пучково-плазменный реактор перед выпускным окном электронного ускорителя так, чтобы до плоскости выпускной диафрагмы было расстояние 50 мм. Устанавливали угол падения электронного пучка 80°. Облучали камеру с суспензией в режиме: энергия электронов 250 КэВ, плотность тока электронов 5 А/см2, длительность импульсов - 0,1 мкс, пауза - 6 с. При этом дозу облучения устанавливали 0,5*10"3 Мрад. Переворачивали камеру вокруг горизонтальной оси на 180°-и облучали ее со стороны другой стенки в том же режиме с дозой облучения 10° Мрад. После облучения производили рассев спор, выделение монокультур и определяли их активности, как указано в пассаже 1. Выбирали

высокоактивные варианты. Биологическая активность культуральной жидкости составляла 4600 - 5000 мкг/мл.

100 ( моноизоляты ) Режим облучения :

Actroseolus Е=110 КэВ ,

Количество % j,=20 мкА/см*.

моновариантое j2=5 A/cm1.

с активностью Ап-к t=0,1 с

75

25

А?/ / I / х '

— ^ /-----4 ^ -

«у

9 л ^ | \

\ ! \

/ \ \ -I I

103мкг/мл

Рис.14, характеристика изменчивости культуры штамма Act.roseolus в условиях облучения ППР: Е=110КэВ в атмосфере. 1-3 варианты моноизолятов после комбинированных облучений импульсами п электронов с различной плотностью ji = 20 мкА/см2 и J2 = 5А/см2 t = 0,1 с. Дальнейший биосинтез показал, что активность культуральной жидкости составляет 4500 -4700 мкг/мл. Использование нового штамма позволило увеличить съем готового продукта более, чем на 25 % . В полупроизводственных условиях активность нового штамма Actinomyces roseolus N7.219 (ВКНМ - 9 - 815) составляет 2800 - 3050 мкг/мл (известный штамм - 2304 - 2560 мкг/мл). Использование нового штамма обеспечило годовую экономическую эффективность > 100000 рублей в производственном объединении «Мосмедпрепараты» им. Л.Я. Карпова при выпуске линкомицина гидрохлорида моногидрата.

.Использование пучковоплазменного разряда для создания высокоактивных штаммов продуцентов охарактеризовано - специалистами П.О. «М о см е дп репар аты» им. Л.Я. Карпова как новое направление селекции продуцентов антибиотиков заслуживающее дальнейшего развития и стимулирования (акт в приложении к диссертации). Линкомицин выпускают (рис. !5) в виде желатиновых капсул для применения per ой и в лекарственной форме для внутривенного введения.

Рис. 1 5 Линкомицин гидрохлорид моногидрат в виде порожка в капсулах per os , а так же в лекарственной форме для внутремышечного и внутривенного введения.

Глава пятая посвящена разработке новых высокоактивных штаммов микроорганизмов - продуцентов авермектинов, обладающих противопаразитарными свойствами. На данном этапе для возбуждения Г1ПР использовались ускорители электронов УС - 1 (Е s 200 КэВ), PC - 20, С - 5 (Е ~ 150 КэВ). Регламент облучения и биотехнологические процедуры выполнялись согласно описания к патенту Р.Ф. 207 4256 МКС С 12 N 13/00 опубл. бюл, № 6 27.02.97г. В результате комбинированных облучений уже после 10 моноспоровых рассевов (рис. 16 - 17) продуктивность отобранных клонов превысила среднюю величину исходного штамма в 2,58 (вариант 97) и 2,63 (вариант 58) раза.

Вариант зв Ввр1ганлг97

Лгера/ш/сез еиег/гт/ИШ йКМАегзот Вариант •темный ~

ВириактНВ

Вфиянт2(Ю

вариант 21 Вариант 77 /а^иймтИ Да^иант 03

¿{ггИвтисгз и/еглгШЧ* ВНКЯСХН ВО

(угаВ'арата/хмммазВам/е амгтШШТЗВ)

Вариант 33 Вариам/тг уаг

¿¿риа/гт У в Вф.—......—

вараа/гт'/ЗГ Вариант 4 зз ВариамтЗЛ Вариант3*7 | # ВарЬлятПЗВ

¡¡ггя/отусп атг/ттШЬ Вммгхмзг ♦

елжВаратв/>ма! мп/а»из ЗШр^еет *гег*г((2(й В^СХНП

/врий

Рис. 16 Типовая схема отбора активных вариантов продуцентов авермектина. Стрелками указаны направления скрининга культуральных жидкостей.

(ТКИО) - начало облучения короткими импульсами тормозного излучения: Рр~ 100 мр/с, I = 10"7с, Ер = 1 МэВ, I = 0,25 с, В = 0,4 - 0,5 кГй/час.

Уже после десяти моноспоровых рассевов (рис 16 - 17) продуктивность отобранных клонов превысила среднюю величину исходного штамма в 2,58 (вариант 97) и 2,63 (вариант 58) раза.

Полученные штаммы зарегистрированы во Всероссийском институте сельскохозяйственной микробиологии как Б. ауеггшиНБ ВНИИСХМ 51 (вариант 58) и Б. ауеппШНз ВНИИСХМ 52 (вариант 97). Схема их получения представлена на рис. 13. Воздействия импульсным тормозным рентгеновским

излучением ( ТКИО ) Бр = 2 - 100 • 103 и «холодными» электронами (ПНР) Е = 200 КэВ, j = 5,0 А/см2 , I = 0,5 • 10"7 с (Б я 1 Мрад) получены штаммы продуцентов с выходом авермектинов с превышением на 55-400 % по сравнению с контролем. На рис. 16 показана одна из типичных схем отбора активных вариантов продуцентов. Разработка регламентов и технологий генетики продуцентов с применением ТКИО и ППР заняло около 10 лет.

:500

£

-л 400

н

о

о

Д 300

и

н

£ 200

ч

о

С ю

а

а

2 3

Рис.17 Продуктивность штаммов Б. ауегтШНз ВНИИСХМ 50 ( 1 ), Б. ауелшйНэ ВНИИСХМ 51 и Б. ауегтШПз ВНИИСХМ 52. за 100% принято среднее значение продуктивности исходного варианта (Б. ауегтШНв ВНИИСХМ 50) в каждом моноспоровом рассеве а - первый монорассев, б - десятый монорассев.

Культурально-морфологические характеристики полученных штаммов . Шт. Б. ауегткШБ ВНИИСХМ 51 при посеве на 2 %-ном ГКА дает однородную популяцию. Основной вариант представлен колониями диаметром 10 - 12 мм со светло-серым воздушным и темно-каштановым субстратным мицелием. Край колонии неровный с белым ободком, поверхность складчатая, в центре колонии возвышение в виде горошинки, иногда с кратером. К десятому дню роста на поверхности колонии образуются белые бархатистые включения. В популяции всегда имеется 2 - 3 % светло-серых колоний с бежевой обратной

стороной. Шт. S. avermitilis ВНИИСХМ 52 на 2 % -ном ГКА также дает однородную популяцию. Колонии основного варианта имеют в диаметре не более 5-77 мм, темно-серовато-коричневый воздушный и каштановый субстратный мицелий. В центре колонии большой (занимает 2/3 поверхности) кратер, по периферии складки. Край колонии ровный с воскообразной каймой. В популяции может встречаться не более 1 % белых аспорогенных колоний.

В зависимости от сорта картофеля оба штамма могут выделять (или не выделять) в среду темно-каштановый пигмент. Оба штамма образуют меланоидные пигменты.

В главе 6 приведены экологически чистые препараты, произведенные на основе новых штаммов микроорганизмов продуцентов авермектинов.

1. «Фитоверм» - для борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками. Пестицид препаративной формы 0,2 % эмульсии зарегистрирован государственной комиссией по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками за № 948357 от 25.12.94г., удостоверение Р.Ф. № 0898. Выпускается ТОО НПО «Фармбиомед», Россия.

2. Стрептовермин — средство против колорадского жука на картофеле, паутинного клеща, всех видов тли в открытом и закрытом грунтах. Действующим веществом препарата является комплекс авермектинов из группы макрациклических лактонов биогенного происхождения из продуктов жизнедеятельности Str. Avermitiiis. Нормы расхода стрептовермина в Центральном и Центрально - Черноземном районах России : в концентрации 1 мл/л не более 0,3 л/га. Произволитель ТОО НПО «Фармбиомед», Россия.

3. «Ниацид» - противопаразитный препарат широкого спектра действия. Ниацид эффективен при профилактике и лечении паразитозов, вызываемых нематодами пищеварительного тракта, легких и слезных протоков, а также иксодовыми клещами, оводами, вшами и блохами. Препарат вводят подкожно при гельминтозах и энтомозах однократно,

при саркоптозах с лечебной целью двукратно с интервалом 8-10 дней. Доза для крупного рогатого скота 1 мл/50 кг живого веса, место введения - область предплечья. Доза для свиней 1 мл/33 кг живой массы, место введения - за ухом. Производитель ООО «Агровет», ООО НПО «Экобиовет»

4. «Авертин» («Абиктин») — производитель ООО «Агровет-сервис»

5. «Аверсект 2» - для лечения псороптозов животных. Производитель ТОО НПО «Фармбиомед».

Глава 7 «Полифан» - медицинский энтеросорбент. Технология производства медицинского энтеросорбента «Полифан» воспроизведена ОАО «Стимедсорб» по заказу ЗАО «Леке», Россия, на основе изобретения -патент Р.Ф. №2125463 1999 (ИМГРАН), в котором известный способ получения энтеросорбента из гидролизного лигнина был модернизирован введением в технологию обработку лигнина гамма излучения, Е = 1,33 МэВ, Бп = 1,5 Мрад и сканирующих электронов (пучково-плазменный разряд) Е = (4 - 9) МэВ, Бэ= 100 Крад.

Сопоставление известного и нового способов приготовления лекарственной формы энтеросорбента представлены в таблице 1.

Из таблицы 1 видны существенные положительные сдвиги величин многих параметров лекарственной формы энтеросорбента «Полифан» по сравнению с прототипом - «Полифепаном».

Например, сорбционная способность повышалась в среднем на 45 % (по метиленовому синему) и существенно понижалась обсемененность бактериями и, кроме того, увеличилось гарантированное время хранения препарата. Результаты реализации нового способа получения энтеросорбента и нового способа приготовления его лекарственной формы, в сравнении с результатами, полученными при реализации аналогичных известных способов (см. табл. 1) свидетельствуют о том, что изобретение позволило решить указанную техническую задачу.

Табл. 1

Параметры сравнения Прототип По изобретению

Характеристика качества

Подлинность соответствует соответствует

Вещества, растворимые в воде 0,75 % 0,29 %

Сульфаты железа 0,02 % 0,02 %

Железа 0,03 % 0,03 %

Потеря в массе при высушивании 60-70% 60-65%

Сульфатная зола • 1,1-0,8% 0,7-0,5%

Тяжелые металлы отсутствуют отсутствуют

Измельченность 0,8 % 0,8 %

Сорбционная способность по метиленовому 51-56 мг/г 70 - 85 мг/г

синему

рН 6,5 5,5

Бактериальная обсемененность до 105 кол/г менее 10 кол/г

бактериями (после 6 месяцев хранения)

Обсемененность грибами (после 6 месяцев до 103 кол/г менее 10 кол/г

хранения)

Характеристика процесса

Длительность цикла (час) 13 6

Расход воды (м3/т) 25 13

Углекислый газ (м3/т) 40 22

Уксусная кислота, кон-ция 10 %(кг/т) 30 13

Основные выводы

1. Впервые создано мобильное рентгеновское и пучково-плазменное оборудование для биотехнологии: стерилизации, получения промышленных штаммов микроорганизмов - продуцентов целевых продуктов медицинского и сельскохозяйственного назначения.

2. Разработаны методики и регламенты использования пучково-плазменного и рентгеновского оборудования в микробиологической промышленности для селекции промышленных штаммов.

3. Разработаны регламенты и методы для использования пучково-плазменного оборудования для стерилизации поверхностей объектов.

4. Получены новые штаммы микроорганизмов продуцентов антибиотоков линкомицина, бацитрацина, тилозина, превосходящие известные производственные штаммы по продуктивности более чем на 30 %.

5. Получены высокопродуктивные штаммы продуценты авермектинов, шт. 51 и 52 , на основе которых в настоящее время выпускаются противопаразитарные препараты «Фитоверм», «Ниацид», «Авертин», «Аверсект 2».

6. Разработаны и предложены новые высокоэффективные способы стерилизации:

• способ стерилизации медицинского, пищевого и др. оборудования тормозным коротко-импульсным излучением (изобретение)

• технология промышленной пучково-плазменной (ППР) стерилизации почтовых отправлений (по тематике: карантин, антибиотерроризм и др.)

• радиационно - технологический способ получения медицинского энтеросорбента «Полифан» (изобретение)

7. Теоретически обоснованы и экспериментально подтверждены новые эффекты воздействия пучково-плазменного разряда, отдельных пучков электронов, импульсного тормозного рентгеновского излучения на живые клетки:

• эффект «невзаимозамещения» мощности дозы облучения и времени (эффект НВЗ, изобретение)

• эффект корреляции длины волны де-Бройля электронов со скоростью мутаций микроорганизмов

• метод последовательных мутаций штаммов микроорганизмов при индуцированном адресном мутагенезе с помощью ППР с последующей

закалкой тормозным рентгеновским излучением. 8. Впервые показано, что частотно - импульсный режим пучково -плазменного облучения микроорганизмов имеет большую маневренность при выборе регламентов облучения ( при стерилизации, мутагенезе), т.к. сравнительно легко регламентируется доза облучения, изменением количества импульсов воздействия и их длительности ( в сравнении с использованием, например СО60 для тех же технологий)

Основные материалы диссертации опубликованы в работах:

1. ПАТ. 2074256 Россия. МПК A 61L2/08. Способ получения штаммов стрептомицетов - продуцентов авермектина / О.А. Зиновьев, В.А. Дриняев, Л.Г. Землякова, М.Н. Мирзаев, Д.Д. Масленников, Ю.Н. Елисеев ( Россия ) - № 5065424113; заявлено 10.06.92; опубл.27.02.97.; бюл.№6.Приоритет 10.06.92 (Россия).

2. ПАТ. 2007457 Россия. МПК C12N15/01. Способ получения штамма микроорганизма - продуцента бацитрацина / О.А. Зиновьев, Л.Г. Землякова, А.В. Галь, Е.И. Баранчиков, В.Н. Ковалёв, В.И. Боброва, А.А. Чупин ( Россия ) - № 4910650/13; заявлено 15.02.91.; .опубл. 15.02.94.; бюл. №3. Приоритет 15.02.91 (Россия).

3. Zinoviev О.А. Electron accelerator in selection of producents of antibiotics. Abstract for the XIII International Conference on the Application of Accelerators in Research in Industry. November 6 - 12, 1994 Denton, Texas, USA See sess in number EH 12, PC 13.P82.P111

4. Dolgachev G.I., Zakatov L.P., Zinoviev O.A. and Yuzbashev Y.G. sterilizing with pulsed X-Ray radiation at RS-20 Repetitive

Generator. Abstract for the XIII I Abstract for the Conference On The Application of Accelerators in Research in Industry. November 6,7,8 and 1994, University of North Texas, Denton, Texas, USA. Poster Peper PD41 P122.

5. Zinoviev O.A., Dolgachev G.I., Zakatov L.P., Yuzbashev Y.G. Sterilizing with pulsed X - Ray radiation at RS - 20 Repetitive Generator. Abstract for the I at International Symposium Beam Technologies (ВТ '95),

February 28 - March 4, 1995, Laboratory of Particle Physics of JINR in cooperation with National Program "High Temperature Superconductivity". Dubna, Russia, program of symposium. Session 1. Peper R7, P. 11, P. 14

6. Зиновьев O.A. Волна Де Бройля и частота мутаций при индуцированном мутагенезе микроорганизмов // Журнал Электродинамика и техника СВЧ, КВЧ и оптических частот - 2004 -ТОМ 12-ВЫП 3-4(40) - С 45-56

7. Зиновьев О.А. , Найденов А. Я. Стерилизация бумажных поверхностей пучково-плазменным разрядом // Журнал - Технология чистоты 2002 - № 1, с 25-28

8. А.С. 1410529, СССР, МПК С12Р19/64 //(12Р19/64 - C12R1=04). Штамм актиномицета — Actinomyces roseolus - продуцент линкомицина / Н.Г. Мисюрева, Т.Г. Борисова, Н.Е. Коваленко, О.А.Зиновьев, Е.И. Баранчиков, Н.В. Русанова, З.М. Трусова, Т.А. Володина, Е.В. Пименова (СССР) - 4182425/28 - 13. Заявлено 20.01.87; опубл. 30.03.88; бюл.№26

9. О.А. Зиновьев, Н.В. Русанова, Н.Г. Мисюрева, Е.И. Баранчиков Пучково-плазменный метод повышения биологической активности штамма продуцента антибиотика линкомицина // Труды ИАЭ им. И.В. Курчатова- 1989-Т1, с. 10-11

10. О.А. Зиновьев, Е.И. Баранчиков, Г.П. Максимов. К вопросу о распространении ускоренных электронов в связи с техническимприменением // Тез. докл. научн. конф. Омск, 1988г., изд. Машпром, 1988г. с 15

11. О.А.Зиновьев, Н.Г. Мисюрева, В.Е. Дудецкий, В.Г. Аверин,

Г.С. Беленький. Способ получения высокоактивных штаммов актиномицетов продуцентов линкомицина. // там же.

12. ПАТ. 1824912 (Россия) МПК С12 N15/01 Способ получения штаммов - -стрептомицетов - продуцентов антибиотика - линкомицина / В.Д. Русанов, Н.В. Русанова, О.А. Зиновьев, Е.Е. Баранчиков, В.Я.Шарков,

Н.Г. Мисюрева, Т.Г. Борисова (Россия) № 4759902/13, заявлено 16.11.89, опубл. 1995, бюл.№2, с 392, приоритет 16.11.89 (Россия)

13. Zinoviev О.А., Gal A.V. , Kovalev V.N. The Beam - plazma Method for Increasing Activiti of Bacitracin Producers // International Conference Dedicated To The Memory Of Academician Alexander A. Bayev. May 20 -22, 1996, Moscow "Biotechnology" Abstracts For The XIV International Conference ICSU-96,p 141, p 325.

14. Dolgachev G.I., Zakatov L.P., Zinoviev O.A., Yuzbashev Y.G.Sterilization On Repetitive Generator RS — 20 By Pulse Bremsstrahlung Radiation Plenary Session Cobiotech - Russian Academy of Sciences // abstract там же, pl43, p327.

15. Zinoviev O.A., Gal A.V. and Kovalev V.N. Electron Accelerator In Selection Of Producers Of Antibiotic Bacitracyn Producer // abstract for the XIV International Conference On The Application Of Accelerators In Research In Industry. November 6,7,8 and 9, 1996, University of North Texas, Denton, Texas, USA. Poster Peper PD34A p.139-140

16. О. А. Зиновьев, В.Д.Русанов, Е.И. Баранчиков, Р.Г.Фурсова,

И.Н. Хвощевская, О.Н., Давыдова, В.Я. Шарков. Способ получения высокоактивных моноспор — продуцентов гентамицина. //тез. докл. научн. конф. по применению лазеров, Сб. VIНПК Машпром 1989 с 10

17. В.А. Дриняев, О.А. Зиновьев, М.В. Ивкин, Л.Г. Землякова,

В.Н. Ковалев. Пучково-плазменный разряд в селекции продуцентов антибиотика бацитрацина. // там же, с 20

18. Н.С. Лобанов, О.А. Зиновьев. Новые детекторы гамма - и рентгеновского излучений. // Журнал Приборы и техника эксперимента -2002-№4, с 59-62

19. О.А. Зиновьев. К вопросу о методе исследования электромагнитных волн//Журнал Экспериментальной и теоретической физики- 1967- т52, вып. 5, с 1134-1136

20. Barinov N.Y., Dolgachev G.I., Maslennicov D.D., Netishinski M.S.,

Ushacov A.G., Zacatov L.P., Zinoviev O.A. Medical equipment Sterilization using Superhien dose Rate X - Ray Irradiation // Abstract for the XII Internitional conference On High Power Particle Beams june 7-12, 1998 Haifa; Israel Beams-98, til, p 977.

21.Косинова Т. А., Зиновьев O.A., Рахимбабаев Я.Р., Тресвятский, Малогабаритная установка для получения озона. // докл. на II Всеросийской Конференции Озон: получение, применение. 30 января - 1 февраля 1991 - Москва, МГУ им. М.В. Ломоносова. Сб. тезисов докл. с 35 -36

22. Дриняев В.А., Стерлина Т.С., Березкина Н.Е., Мосин В.А., Кругляк Е.В., Тер - Симонян В.Г., Зиновьев O.A., Юркив В.А. Авермектины: получение индуцированных мутантных штаммов Streptomyces avermitilis и их свойства//журнал Биотехнология 1994-№4, - с 17-20

23. Зиновьев O.A., Дриняев В.А., Березкина Н.Г., Кругляк Е.В., Мосин В.А., Юркив В.А. Селекция штаммов - продуцентов Streptomyces avermitilis ВМК АС - 1301. Получение естественного мутанта // журнал Биотехнология - 1994 - № 2 - с 16 — 18.

24. Дриняев В.А., Березкина Н.Д., Зиновьев O.A., Стерлина Т.С., , Мосин В.А., Кругляк Е.В., Тер — Симонян В.Г., Юркив В.А. Получение и свойства . новых штаммов Str. Avermitilis - продуцентов авермектинов // журнал Биотехнология -1994- № 3 - с 15-16.

25. Дриняев В.А., Березкина Н.Е., Стерлина Т.С., Мосин В.А., Зиновьев O.A., Кругляк Е.В., Тер - Симонян В.Г., Юркив В.А.Получение и свойства новых высокоактивных штаммов Str. Avermitilis -продуцентов авермектинов // журнал Биотехнология - 1994-№8 - с 10-11

26. ПАТ. 2076737 Россия МПК A61L2/08 Способ стерилизации медицинского и пищевого оборудования / Г.И. Долгачев, O.A. Зиновьев, Л.П. Закатов, В.Г. Юзбашев (Россия) -№ 940069/14;

Заявлено 25.02.94 опубл. 10.04.97 Бюл.№10 - 110с = и.л.

Приоритет 25.02.94 (Россия)

27. Zinoviev О.А., Driniaev V.A. Electron Accelerator in Selection of producents of Antibiotics // abstract for the 1st Jntern. Symposium Beat Technolocies (ВТ '95), Februery 28, march 4, 1995, Laboratory of Particle Rhysios of JINR in cooperation with National Program "High Temperature Superconductivity". Dubna, Russia, program of symposium. Poster session 1 poster Peper S/5 p 3, p 8

28. ПАТ. 2125463 Россия - МПК A61K35/78, 9/14. Способ получения энтеросорбента / JI.B. Неумывалкин, В.З. Тарантул, О.А. Зиновьев С.Л.Шеронин, Р.В. Козин, А.В. Диковский (Россия) ... №98104393/14; Заявлено 10.03.98. опубл. 27.01.99. Бюл. №3-422 С.И.Л.

29.Чернетский А. В. и др. Аппаратура и методы плазменных

исследований / А.В. Чернетский, О.А. Зиновьев, О.В. Козлов, под ред. В.Д. Русанова. М.: Атомиздат, 1965г.-353с

30. Мирзаев М.Н., Кулица Л.М., Зиновьев О.А. Становление и современное состояние промышленного производства препаратов авермектинового ряда в России. // Журнал Ветеринарная Медицина 2006 № 1 с 10-14

31. А.С. 1805666, СССР МПК С12 № 15/01 Штамм Bacillus Licheniformis - продуцент бацитрацина / Зиновьев О.А., Ковалев Н.В., Галь А.В., Землякова Л.Г., Баранчиков Е.И., Боброва В.И., Чупин А.А. (СССР) - 4911888 / 18 - 13 Заявлено 15.02.91 опубл. 15.02.93 Бюл. № 12 с-134

32. Дубинина Т.П., Зиновьев О.А., Лобанов Н.С., Найденов А.Я. Пижов Г.Я., Скобкин B.C. Инновационные перспективы радиационных технологий. // Ж. Электродинамика и техника СВЧ и КВЧ и оптических частот - 2004 т XII, в 3 - 4 (40), с 23 - 32

33. Зиновьев О.А., Скобкин B.C., Лобанов Н.С., Чугунов O.K.,

Пижов Г.Я., Найденов А.Я., Дубинина Т.П. Радиационная

стерилизация почтовых отправлений. // Ж. Атомная Энергия - 2006 - т 100, вып. №1 с 63-68

34. ПАТ. 2048520 Россия, МПК 6С12Р1 / 06 // (6С12Р1-96. C12R 1:465) Штамм Streptomyces avermitilis - 51 - продуцент авермектинов. / В.А. Дриняев, O.A. Зиновьев, П.Г. Землякова, М.Н. Мирзаев, В.А. Мосин, Ю.П. Архапчев, В.А. Юркив (Россия) - № 5046899/13 Заявл. 10.06.92. опубл. 20.11.96. Бюл. №32

35. ПАТ. 2057180 Россия, МПК 6С12Р/06//(C12P1/06C12R 1:54).

Штамм Streptomyces fradiae - продуцент тилозина ВНИИ СХМ-53. / В.А. Дриняев (RU), Н.Е. Березкина (RU), Е.Б. Кругляк (RU), O.A. Зиновьев (RU), В.А. Мосин (RU), Б.Р. Штейман (UA), В.П. Высоцкий (UA), В.А. Юркив (RU). № 93057663/13

36. ПАТ (фармбиомед) Россия. МПК A61L2/08. Штамм Streptomyces avermitilis - продуцент авермектинов ВНИИ СХМ-54 / O.A. Зиновьев, Н. Е. Березкина, , В. А. Дриняев, В. А. Юркив, В. Г. Лисавенко,

В. А. Мосин, Е. Б. Кругляк (Россия) - №5046988/113. Заявл. 10.06.92 - не публ. - приоритет 15.02.93.

37. ПАТ. 2070799 Россия. МПК 01 № 63/00. Препарат для борьбы с комплексом вредителей растений «ФИТОВЕРМ» / В.А. Мосин, В.Н. Чижов, Е.Б. Кругляк, И.П. Крюкова, В.Р. Сергеев, В.А. Дриняев, В. А. Юркив, В. Т. Лисавенко, O.A. Зиновьев (Россия) -№ 093047557/13. Заявл. 08:10.1996, опубл. На CD-ROM MRFD 1997. Приоритет 08.10.1996.

38. Неумывакин Л. В., Зиновьев О. А., Зимина М. С., Хромов И. С., Петренко В.В., Пижов Г.Я. Эффект деконтаминации энтеросорбента под воздействием ускоренных электронов // Химико -фармацевтический журнал 2006 т. 40, №4 с 109 111

Подписано в печать 06.02 2007. Формат 60x90/16 Печать офсетная. Усл. печ. л. 3,0 Тираж 80 экз. Заказ 9.

Отпечатано в РНЦ «Курчатовский институт» 123182, Москва, пл. Академика Курчатова, д. 1

Список сокращений.

Введение .—.—.

1. Область применение радиационно-биологичееких технологий.

2. Инновации в области стерилизации (радуризации)—.

3. Инновации в области повышения биологической активности промышленных штаммов микроорганизмов-продуцентов антибиотиков.

4. Основные биотехнологические и генно-инженерные кампании США

5. Разработка радиационно-биологичееких технологий в РНЦ

Курчатовский институт».

6. Актуальность проблемы РБТ.

7. Цели и задачи диссертационной работы.

Глава 1. Оборудование, приборы и методы создания пучковоплазменных разрядов.—.

1.1. Общие требования к оборудованию для целей стерилизации и селекции микроорганизмов.

1.2. Расчет инактивации биослоя микроорганизмов.

1.3.*Устройство для создания пучково-плазменного разряда в атмосфере. Установка С-5 .-------.

1.4; Исследование воздействия электронов на микроорганизмы

1.5. Изучение изменчивости культур штаммов-продуцентов тилозина (фрадизинО).

1.6. Ускоритель электронов «Курс» для индуцированного мута ■ ; ■ ~ генеза микроорганизмов и стерилизационных технологии.:.;

1.7. Биотехнологическая установка на базе ускорителя электронов УС-1.7?

1.8. Рентгеновский стерилизатор РС-20 - ускоритель электронов с плазменным прерывателем тока.«(.

1.9. Невзаимозаместимость мощности экспозиционной дозы облучения штаммов микроорганизмов и времени .облучения. ЭффектНВЗ.*.

Глава 2. Исследование тонкой стенки чашки Петри в режиме пучково-плазменного разряда (ППР).

2.1. Новые детекторы радиационных излучений при использовании ППР в биотехнологии.

2.2 Изучение прохояедения электронного пучка через полиэтиленовую стенку чашки Петри.

2.3. Поисковые исследования стерилизационного процесса при ППР облучении микроорганизмов.:

Глава 3. Стерилизация объектов пучково-плазменным разрядом.

3.1. Вопросы мониторинга обеспечения стерильности штаммов микроорганизмов при радиационном воздействии ППР.

3.2. Способ стерилизации медицинского и пищевого оборудования.

3.3. Инновационная технология промышленной стерилизации почтовых отправлений (ГУТ-200М, ЛУЭ «Факел».

3.4. Экспериментальное исследование воздействия быстрых электронов на бумагу.

Глава 4. Селекция микроорганизмов-штаммов продуцентов целевых продуктов.

4.1. Обзор предположительных механизмов воздействия ионизирующих излучений на продуценты антибиотиков.

173, 173.

4.2. Инновационные способы повышения биологической активности продуцентов антибиотиков. Метод малых мутаций.—.

4.3. Экспериментальное обнаружение корреляции виртуальной длины волны де-Бройля электронов с частотой индуцированных мутаций микроорганизмов.

4.4. Инновационные способы синтеза биологически активных веществ

4.5. Продуцент антибиотика линкомицина

4.6. Новый штамм Actinomyces roseolus 7-219 ВКПМ S-815. Технология его получения.

4.7. Высокоактивный продуцент бацитрацина и способ его получения .—.—.

Глава 5. Селекция продуцентов продуктов для ветеринарной медицины и растениеводства.

5.1. Высокоактивные продуценты авермектинов и способы их получения..

5.2. Получение промышленных штаммов авермектинов: S.Avermetilis. ВКПМ СХМ-50, ВНИИ СХМ-51, внии схм-52.;.:?.9.

Глава 6. Производство препаратов сельскохозяйственного i назначения.

6.1. Препарат для борьбы с комплексом вредителей растений «Фитоверм»

6.2. Реализация результатов научных исследований, выполненных в ходе диссертационной работы

Глава 7. Новый медицинский энтеросорбент«Полифан»

7.1. Способ получения энтеросорбента «Полифан» изобретение).i.

218 '

Список сокращений биологическая активность штаммов микроорганизмов, .(мкг/мл) препарат для профилактики и лечения псороптозов.у животных т.РНК-синтетаза, прикрепляющая определенную аминокислоту к т/РНК аденозиитрифосфорная кислота. Носитель энергии боковые напряжения (механические) белково-витаминный концентратшряжения) высоковольтный (выпрямитель) высоковольтный трансформатор единица поглощенной дозы. 1 гр = 100 рад. генератор импульсного напряжения дезоксирибонуклеиновая кислота дозиметр пленочный (целлофановый) двойные разрывы в клетках единица измерения доз ионизирующего излучения ионизирующее излучение " ~ индуцированный мутагенез микроорганизмов информационная рибонуклеиновая кислота ускоритель электронов килоэлектронвольт - ■ ■ 3 I киловольт (10 В) килорад(10 рад) - единица поглощенной дозы короткоимпульсное излучение линейная потеря энергии внезапные, скачкообразные изменения структуры гена (генные, хромосомные) импульс (тока, напряжения)

Метод по вы ш.ениябиологической активности, (мкг/мл.) микроампер (10 6 А) мощность поглощаемой дозы мегаэлектронвольт (106 эВ) микрометр (Ю-6 м) невзаимозамещения (принцип) облучаемый материал одиночные разрывы относительная биологическая эффективность осциллограф ' поглощенная доза пучковоплазменный разряд единица поглощенной дозы. 1 рад = 62419 • 10 эВ/г = 100эрг/г ретикулоэндотелиальная система радиационно-биологические технологии v рибонуклеиновая кислота восстановление средства защиты растений система питания, управления \ ( поиск среди многих колоний клеток тех немногих, которые имеют в своем составе векторы с нужными генами. Иногда, просто поиск изменившейся в нужном направлении клетки. дозиметрический датчик тормозное коротко-импульсно.рентгеновское облучение ускоритель стерилизационный управление, блокировка, сигнализация (электронных систем) кормовой препарат, на основе тилозина.

В число важнейших направлений развития промышленной технологии третьего тысячелетия нашей эры специалисты по научно-техническим прогнозам и эксперты в области научной политики наравне с робототехникой, информатикой, освоением Мирового океана включают биотехнологию. Интерес к будущему биотехнологии, к её перспективам огромен.

В понятие «биотехнология», прежде всего включают комплекс производственных процессов, основанных на использовании биокатализаторов, а также микроорганизмов и различных биологических систем (культур растительных и животных тканей и клеток, протопластов и т.д.) [1] При этом есть одно существенное отлйчие биотехнологий от традиционной микробиологической и бродильной промышленности - она возникла на основе использова-' ния микроорганизмов и биосистем с запрограммированными свойствами на На основе биотехнологических схем могут быть созданы разнообразные установки с малой энергетической емкостью. Возможно использование во-, зобновляемого сырья, и сырья с низким содержанием Технологически необходимых компонентов. На основе биотехнологических схем могут создаваться разнообразные энергетические установки — от получения биогаза до имитации процесса фотосинтеза. Например, моторное топливо может производиться биотехнологическим путем.

Само развитие биотехнологии рождает новые проблемы, требующие дальнейших исследований и разработок. Биотехнология привнесла в область промышленного производства принципиально новую задачу: Речь идет о стерильности и асептики, которые необходимо соблюдать при осуществлении любого биотехнологического процесса. На рис.1 (стрЮ) представлена

На основе биотехнологических схем могут быть созданы разнообразные установки с малой энергетической емкостью. Возможно использование возобновляемого сырья, и сырья с низким содержанием технологически необходимых компонентов. На основе биотехнологических схем могут создаваться разнообразные энергетические установки - от получения биогаза до имитации процесса фотосинтеза. Например, моторное топливо может производиться биотехнологическим путем.

Само развитие биотехнологии рождает новые проблемы, требующие дальнейших исследований и разработок. Биотехнология привнесла в область промышленного производства принципиально новую задачу. Речь идет о стерильности и асептики, которые необходимо соблюдать при осуществлении любого биотехнологического процесса. Ш рис.1 (стрЛО)представлена схема перспективных направлений биотехнологии в снабжении человечества пищей [1].

Нет ни одного процесса, указанного на схеме рис.1, где бы не использовались радиационные методы в технологиях: радиационная стерилизация, радуризация ионизирующим излучением. В настоящее время весь арсенал пучково-плазменных технологий используется в селекции новых промышленных штаммов - продуцентов лекарственных и др. препаратов, стерилизации продукции микробиологических и д.р. производств, а также сырья, медицинской продукции, пищевой. Стерилизация оборудования в медицине, в космической промышленности наиболее эффективно производится рентгеновскими и гамма установками. Методы стерилизации пучково-плазменным разрядом (ППР) в атмосфере успешно апробированы в транспортно-почтовом деле, при стерилизации музейных ценностей, оборудования микробиологических лабораторий и т.п.

В последнее время стали создаваться генераторы мощного тормозного рентгеновского излучения, способные создавать мощности экспозиционных доз (в больших объёмах) до 1,0 МГр/с Как оказалось, при высоких мощностях экспозиционных доз (КИИ) стерилизация (радуризация) идет в десятки раз эффективнее, особенно при сравнительно низких энергиях Р-квантов

0,3-2 МэВ) [2-3], что снижает значительно и удельные материальные затраты

Пучково-плазменный разряд, инициируемый электронами с энергией

100-300 КэВ в атмосфере,оказался достаточно хорошим мутагеном в селекции штаммов-продуцентов антибиотиков [4-6]. Электронные пучки в этом случае достаточно хорошо создаются с помощью ускорителей электронов

7]. ,

Рассматривая взаимодействие биотехнологии и экологии (см. рис. 2, стр.12) можно наблюдать прямую связь радиационных методов со многими отрослями деятельностиj в частности например, в делах снижения потерь сельскохозяйственной продукции при обработке и хранении, обезвреживания отбросов, противодействия био-терроризмуиспользующему биологическое оружие и др. [8-12]. ;

К настоящему времени в вопросах стерилизации (и радуризации) медицинской и др. продукции устанавливаются международные нормы, правила, уточняются требования к валидации, вводятся единые стандарты, термины и определения, оценки риска на контроль и мониторинг чистого помещения или чистой зоны и др. [13].

Сегодня биотехнология стремительно выдвигается на передний край научно-технического прогресса. Биотехнология была признана одним из пяти приоритетных направлений в комплексной программе научно-технического ' прогресса стран-членов СЭВ (КПНТП) 1986-1990 гг. Сегодня характер обслуживания новых промышленных производств в биотехнологии особо приблизился к характеру труда ученого. Таким образом, культура науки, перемещаясь в область технологии, становится важным элементом научно-технического потенциала [14-16].

Биотехнология опирается, с одной стороны5на древнейшие традиции бродильных и микробиологических производств, с другой - на результаты новейших открытий в области физико-химической биологии, и вообще к структуре науки. История науки здесь смыкается с информационным обеспечением науки: мониторинг науки может быть успешным только в сочетании с историческим анализом эволюции структурных срезов наук

Итак, переходим к краткому обзору радиобиологических работ последнего пятидесятилетия.

12

Рис.2 Взаимодействие биотехнологии и экологии [1].

Выводы

Диссертационная работа обобщает в себе результаты работы диссертанта в смежных разнопрофильных межведомственных научных, коллективах, интегрирует накопленный научный потенциал и опыт использования йх для достижения запланированных целей в биотехнологии

В работе конкретно решены нижеследующие вопросы, являющиеся актуальными до настоящего времени:

1. Предложены инновационные методы получения новых производственных высокоактивных штаммов микроорганизмов -продуцентов антибиотиков общемедицинского, ветеринарного и сельскохозяйственного применения (линкомицин, бацитрацин, авермектин и * др.) [см. 4.5Н5.2^изобретения].

2. Разработаны технологии получения препаратов медицинского, ветеринарного и сельскохозяйственного назначения на основе новых произведенных штаммов микроорганизмов [см. 5.1-7-1 изобретения].

3. Получены новые штаммы микроорганизмов - продуцентов антибиотиков медицинского, медико-ветеринарного и сельскохозяйственного применения с биологической активностью, превышающей известные производственные (мировые) штаммы более, чем на 30% по биологической активности [см. 4.4-5.2,изобретения].

4. Получены новые, экологически чистые препараты медицинского, медико-ветеринарного и сельскохозяйственного назначения, производящиеся в настоящее время промышленными государственными предприятиями и фирмами. Препараты успешно используются на практике [ см. 67.1 изобретения].

5. Разработаны и предложены инновационные биотехнологии для медицинской, пищевой и других отраслей хозяйства: а) способ стерилизации медицинского, пищевого и др. оборудования тормозным коротко-импульсным излучением (изобретение); б) технология промышленной стерилизации почтовых отправлений (по тематике: карантин «антибиотерроризм» и др.); в) радиационно-технологический способ получения медицинского энтеросорбента «Полифан» [см. 3.1-3.4,изобретение].

6. Предложены и апробированы инновационные методы и оборудование для стерилизации объектов медицинского и общетехнического применения с использованием пучково-плазменного процесса, возбуждаемого в атмосфере ускорителем электронов [см. 1.1: ^ 1.8 ]t

7. Модернизировано и передано в промышленность оборудование, регламенты его использования и методы биологической диагностики и ► * радиационного контроля (на основе нового детектора из эпоксидных смол) при экспериментальном и производственном использовании пучково-плазменных методов в биотехнологии микроорганизмов [см. 1.6 — 1-8 ] ,„

8. Найдены объяснения, предположительно , механизмов воздействия, ионизирующих излучений на микроорганизмы, связанных с повышением •* * биологической активности штаммов микроорганизмов - продуцентов антибиотиков при индуцированном ^(пучково-плазменным разрядом,) мутагенезе (эксперименты) [ см. 4.2~4.3 ]

9. Представлены (в виде описаний к патентам, с участием автора диссертации) конкретные методы, технологии, лабораторные эксперименты, иллюстрирующие свершение мутагенных процессов в штаммах различных промышленных микроорганизмов под влиянием электронов пучково-плазменного разряда и др. физических воздействий, [[см. 4.6 -5,2 ] »

10. Открытие (экспериментально) новых эффектов воздействия пучково-плазменного разряда, отдельных пучков, импульсного тормозного рентгеновского излучения на живую ткань объектов: эффект «невзаимозамещения» мощности дозы облучения и времени («эффект НВЗ») см. 1.9,43 |, эффект корреляции длины волны де-Бройля электронов с ■■ частотой мутаций микроорганизмов [jcm.4.3 ] , эффект задержки репараций штаммов микроорганизмов при комбинированном их облучении [см. 4.1-43]. Эффект метода последовательных малых мутаций штаммов

U . U . '2. микроорганизмов при индуцированном адресном мутагенезе [км.'4-2 J »

11. Результат использования исследований настоящей работы: 17 новых промышленных штаммов микроорганизмов - продуцентов антибиотиков, 6 препаратов медицинского и других применений, [см. 4.6 5.2 J. .

12. Предложены, модернизированы и апробированы автором новые генераторы ионизирующих излучений, пучково-плазменных разрядов в атмосфере, уникальных высокоэнергичных и высоковольтных устройств для целей биотехнологии: стерилизации, радуризации мутагенеза, бластеризации и др. [см. 1:.1 ].

13. Экспериментально показано, что частотно-импульсный режим пучково-плазменного облучения микроорганизмов имеет большую маневренность при выборе регламентов облучения (стерилизация, мутагенез), т.к. сравнительно легко регламентируется доза облучения к изменением количества импульсов излучения и их длительности (в сравнении с использованием СО60 для тех же биотехнологий) [ см. 1.4 —1.5 ]

14. Переход к частотно-импульсному режиму в отдельных случаях является единственно возможным, т.к. позволяет обеспечить «щадящие» дозы для материалов стерилизуемых объектов и остается бактерицидным для микроорганизмов [см. 3.1—3.4 ]

15. Оборудование и методы биотехнологии, разработанные и представленные в настоящей работе, позволяют получать систематически новые продуценты антибиотиков, антибиотики нового поколения и различные экологически чистые препараты для медицины, животноводства и растениеводства.

16. Выходы из экспериментов, теоретические разработки, лабораторные регламенты технологий получения новых штаммов

239 микроорганизмов - продуцентов антибиотиков, полученных в настоящей работе, рекомендованы биотехнологическим предприятиям, производящим микробиологическую продукцию для медицинских, медико-ветеринарных и сельскохозяйственных целей; использовались в течение ряда лет, и в настоящее время [см. 7.1.—7.2 .]

17. Детальные материалы биотехнологических и инженерных разработок, касающихся настоящей диссертации, сосредоточены в 12 научно-технических отчетах РНЦ «Курчатовский институт», материалах института Проблем Водородной Энергетики и Плазменных технологий РНЦ «КИ», за 1978-2004 гг., а также в ООО «Биохиммашпроект», НПО «Ферейн» и НПО «Фармбиомед».

18. Материалы разработки конструкций, технические задания, схемы и др. физических установок, модернизированные автором для биотехнологии, сосредоточены в 4-х научно-технических отчетах НИИ ЭФА им. Д.В. Ефремова, Института Ядерного Синтеза РНЦ «КИ» (отделений прикладной физики плазмы) 1990-1996 гг.

19. Патенты РФ, заявленные автором на методы получения * высокоактивных штаммов микроорганизмов — продуцентов антибиотиков и полученные в период 1985-2000 гг., являются собственностью РНЦ «Курчатовский институт».

Кроме, собственно, биотехнологической продукции, рекомендовано мобильное оборудование для проведения биотехнологических работ по селекции новых штаммов промышленных продуцентов антибиотиков. Ускорители электронов для осуществления пучково-плазменных разрядов в атмосфере «Курс-1», «УС-1» переданы на биотехнологические производства. Переданы также описания методик для стерилизации объектов методом ППР и методические рекомендации по селекции микроорганизмов.

Методы малых мутаций, предложенные и апробиро -ванные в настоящей работе, обнаруженный эффект невзаимозаместимости времени облучения и мощности экспозиционных доз при облучении микроорганизмов, а также экспериментальное обнаружение корреляции длин волн де Бройля с частотой мутаций живых клеток явились основой для решения поставленных промышленностью задач. Научно-технические решения, изложенные в работе, являются ответом на актуальные запросы развивающейся биотехнологической промышленности. Темы, затрагиваемые в диссертации, неоднократно планировались непосредственно специалистами биопроизводств, возникающих на базе полученных экспериментальных результатов, изложенных в # диссертации.

Автор искренне благодарен. сотрудникам и коллективам, участвовавшим в творческом процессе проводимых им исследований.

Достижения, указанные в выводах к настоящей диссертации были бы невозможными без направляющего гения биотехнологической и физико-технической общественности ряда предприятий: Института Проблем Водородной Энергетики и Плазменных Технологий (РНЦ «КИ»), А.О, ныне «Ферейн», * .

ОАО «Биохиммаш», государственного НИИ «Электрофизической аппаратуры» им. Д.В.Ефремова и др. Всем им автор приносит искреннюю благодарность.

К.Т.Н. Зиновьев О.А.

240 Заключение

Инновационное радиационное физическое оборудование, разработанное в ходе выполнения настоящей работы: мобильные ускорители электронов с выходом электронного пучка в атмосферу, рентгеновские стерилизаторы, а также использование ( модернизация ) имеющихся в наличии радиофизических установок РНЦ«КИ», в частности ИПВЭиПТ, ИЯС, ИРМ РНТ, позволили автору спланировать и провести уникальные эксперименты по применению пучково-плазменного разряда в биотехнологии, направленные на производство экологически чистых препаратов для медицины, животноводства, растениеводства. » ■

Изобретение новых высокоактивных штаммов продуцентов антибиотиков — линкомицина, бацитрацина, авермектина и др., произошедшее в ходе экспериментальных био -технологических экспериментов, позволили создать инно -вационные высокоэффективные регламенты для промышленного производства лечебных биопрепаратов,, превосходящих по своим свойствам зарубежные аналоги. ( В конце 2000 года инновационные технологии нашли применение во вновь органюованных предприятиях: ОО «Бифидум», ООО «Фармбиомед», ОО «Биовет», а также АО «Ферейн» (линкомицин), ИМГ РАН (полифан) и др. Становлению и совершенствованию состояния промышленного производства . препаратов, например, авермектинового ряда в России в значительной степени было обусловлено результатами исследований и изобретений в области пучковоплазменной технологии.

1. Попова Т.Е. Развитие биотехнологии в СССР / под ред. и предисл. А.Н. Шанина, М., Наука, 1988, 200 с.

2. Пат. 2074256 Россия МПК A61L2/08 Способ получения штаммов стрептомицетов — продуцентов авермектина / О.А. Зиновьев, В.А.

3. Дриняев, Л.Г. Землякова, М.Н. Мирзаев, Д.Д. Масленников, Ю.Н. Елисеев (Россия) №5065424/13; Заявлено 10.06.92; Опубл. 27.02.97. Бюл. №6. Приоритет 10.06.92 (Россия) - 5с: И.Л.

4. Зиновьев О.А., Дриняев В.А., Березкина Н.Г., Кругляк Е.В., Моеин В .А., Юркив В. А. Селекция штаммов продуцентов Streptomyces avermitilis ВМК АС-1301. Получение естественного мутанта / Ж Биотехнология - 1994 - №2 — с16 — 18

5. Дриняев В .А., Березкина Н.Е., Зиновьев О.А., Стерлина Т.С., Мосин В.А., Кругляк Е.В., Тер-Симонян В.Г., Юркив В.А. Получение и свойства новых штаммов Str. Avermitilis — продуцентов авермектинов

6. Ж . Биотехнология 1994 - №3 - с 1.5-16

7. Zinoviev О.А., Driniaev. V.A. Electron asselerator in Selection of produsers of antibiotics / Abstracts For The IV International Conference On The Alectron Small Technologys Varna, 1994.

8. Зиновьев О. А., Найденов А .Я. Стерилизация бумажных поверхностей пучково-плазменным разрядом / Ж» Технология чистоты 2002№1 — с25-28. .

9. Зиновьев О.А., Скобкин B.C., Лобанов Н.С., Пижов Г.Я., Найденов А.Л. Инновационные перспективы радиационных технологий /

10. Воробьев А.В., Боев Б.В., Бондаренко В.М., Гинцбург АЛ. Классификация микроорганизмов, пригодных для биотерроризма /

11. Ж. Микробиология-2002-№3-с 30-34

12. ГОСТ. Р. ИСО Ш 37-200Q. Стерилизация медицинской продукции. . Требования к валидации. и текущему контролю / Радиационная , стерилизация М; Изд-во стандартов. Утв. Госстандарт России — 2005■ -71с.

13. Сазыкин Ю.О. Антибиотики как биохимические реагенты. Итоги науки и техники, сер. Биологическая химия. М., Наука 1984 - т20

14. Atom For Peace. Scientific and Technical Exhibition. Atom On The Fields and Farms / Advertisement of The IV International On The Peaceful uses of Atomic Energy. 1971 Geneva p41-43

15. Производство антибиотиков: сб. / под ред. С.М. Навашина, Медицина — 1970 —310с

16. Тимофеев-Ресовский Н.В., Лучник/ Н.В. Цитологические и биофизические основы радиостимуляции растений. Труды Института биологии Уральского филиала АН СССР — 1960, вып. 13, с5244 . .

17. Тимофеев-Ресовский Н.В. Биологическая интерпретация явления радиостимуляции растений. / Журнал Биофизика 1956 - т1 — №7. с 61

18. Тимофеев-Ресовский Н.В. и др. Применение принципа попадания в радиобиологии / Н.В. Тимофеев-Ресовский, В.И. Иванов, В.И. Корегодин М.: Атомиздат, 1968. - 228с

19. Кузин А.М, Основы радиационной биологии Москва: Наука, 1964, 404: сил:

20. Кузин A.M. Молекулярная радиобиология клеточного ядра Москва: Атомиздат, 1973 -222с, с ил.

21. Бак 3., Александер П. Основы радиобиологии / пер.с англ. Москва: Иностранная Литература, 1963 500с: с ил.

22. Теракулов Я.Х.(ред.) Радиационные эффекты в биологических средах и организмах и методы их исследования: сб.ст. под ред. Я.Х. Теракулова; ИЯФ; Ташкент: Наука, 1964

23. Ли Д.Е. Действие радиации на живые клетки. Пер. с английского, М, Госатомиздат, 1964-120(3 , '

24. А.С.322907, СССР, МПК A61L1/00 Способ лучевой стерилизации медицинских изделий и препаратов / М.А. Туманян, З.Г. Перпшна, Д.А. Каушанский, Т.В. Голосова, Я.Н. Рашбам. СССР. №1480384/13-16. Заявл. 05.10.70(21). Опубл. 25.08.77. Бюл. №3

25. Научные основы дезинфекции и стерилизаций / Сб.науч.трудов / ВНИИ профилактической токсикологии и дезинфекции. Минздрав СССР Москва ВНИИ ПТ и Д 1991 - 95с.

26. Addy Т.О., Ph. D. Low Temperature Plasma: A New Sterilization Technology for Hospital Application // Proceeding of the International-245:

27. Canada, 1989. Sterilization of Medical Products, vol V p322-326 31.Rakitskaya E.A., Samoilenko I.I., Pavlov Ye.P., Ramkova N.V., Zykova

28. S.V., Saribekian V.V. Radioresistance of Microorganisms. Theoritical and Practical Aspects Sterilization of Medical Products. Printed in Canada. 1989 vol. V p297-307

29. Tumanian M.A., Kauchansky p.A. Sterilization by ionizing radiation //

30. Зб.Григанова Н.В., Бубнов В.Д. Радиационное обеззараживание пушного сырья при стрижутцем лишае: Сб.науч.трудов (ВНИИВС) Москва, 1980, cll-114246

31. Бубнов В.Д., Григанова Н.В. Радиационное обеззараживание пушного сырья при сибирской язве. / Достижения и перспективы борьбы с сибирской язвой-М.: Колос, 1978-с 173-174

32. Каушанский Д.А., Березина Н.М. Эффективность предпосевного облучения семян. Москва: Россельхозиздат, 1975 305с

33. Березина Н.М. Результаты исследований и внедрения приема предпосевного гамма-облучения семян в СССР и НРБ. Москва. Энергоатомиздат, 1983 250с

34. Радиационная обработка пищевых продуктов. Тез.докл. // Москва. Атомиздат 1968 - 49с.

35. Каушанский Д.А., Кузин A.M. Радиационно-биологическая технология. Москва. Энергоатомиздат. 1984, ell.

36. Ветров B.C., Высоцкая Н.А., Дмитриев А.М. Радиационная обработка отходов для сельскохозяйственного использования. Москва. Энергоатомиздат. 1984 150с.

37. Ковальская Л.П. Технологические аспекты радиационной обработки продуктов питания / Международный симпозиум по радиационной обработке пищевых и с/х продуктов: тез.докл. София, 1974 - т.1, С441-461.

38. Перспективы промышленного применения лучевой обработки пищевых продуктов // Бюл. МАГАТЭ 1981 - т.23 №1 - с48-52

39. Albert Sasson Biotechnologies: Challenges and Promises 2nd Edition Unesco 1985 / Сассон Альбер Биотехнология: Свершения и надежды;247пер. с англ. / с предисл. и доп. Д.Б.Н. проф. В.Г. Дебабова М., Мир, 1987 -404с

40. Богданов А. А., Медников Б.М. Власть над геном. Москва. Просвещение. 1989 301с

41. Петренко В.В., Тонапетян С.Г. Физические основы воздействия электронов и их тормозного излучения на биологические объекты. // Биологическое действие излучений высоких энергий. Москва: Атомиздат 1977 cl-19.

42. Пелевина И.И. и др. Выживаемость облученных клеток млекопитающих и репарация ДНК / И.И. Пелевина, А.С. Саенко, В.Я. Готлиб, Б.И. Сызынис Москва: Энергоатомиздат, 1985 - 118с

43. Савинский А.К. Взаимодействие электронов с тканеэквивалентными средами (справочник)-Москва: Энергоатомиздат. 1984 108с

44. Бетфорд Дж.С., Гриттс Г.Г. (USA) Определение выживаемости при малых дозах и пределы разрешения метода клонирования одиночных клеток // Труды Шестой Греевской конференции Лондон 16-21 сентября 1974. пер.с англ. 1980 -М: Медицина, 1980, с42-47

45. Холл Э.Дж. Биологические проблемы оценки выживаемости при малых дозах. Там же: с22-33

46. Чедвик К.Г., Линхаутс Г.П. Влияние асинхронности клеточной популяции на начальный наклон кривой «Доза-эффект» (Ассоциация Евроатом Италия) там же: с60-66.

47. Радиационная биология: репарация и репликация ДНК в облученных клетках / Сб.под.ред. И.В. Филипповича 1990 т9 — 217с248

48. Абрамян Е.А., Гапонов В.А. Сильноточный ускоритель на основе трансформатора // Ж. Атомная Энергия 1966 - №5 — с385-392

49. Будкер Г.И. Ускорители заряженных частиц ИЯФ СО АН СССР (Новосибирск) для народного хозяйства // 2-е Всесоюзное совещание по применению ускорителей заряженных частиц в народном хозяйстве: тез.докл. Ленинград НИИ ЭФА, Октябрь 1975 - т1 - с48-75

50. Глухих В .А., Свиньин М.П. Современное состояние и перспективы развития высоковольтных ускорительных электронов // там же т1 -С76-86

51. Дмитриева Н.М. и др. Вопросы унификации высоковольтных ускорительных элементов//там же т1- с142-15761 .Hard-Rock IEEE Trans. Nucl. Sci. 1975 vol. NS-22 №3 p 1798-1801

52. A.C. 523461 СССР МПК H01F5/06 Высоковольтный трансформатор / B.B. Акулов, М.П. Свиньин (СССР) 1341692/26-25(22). Заявлено 05.07.69; опубл. 25.04.76. Бюл.№28

53. Абрамян Е.А. Промышленные ускорители' электронов — Москва. Энергоатомиздат. 1986 — 249с, с ил.

54. Мурин Б.П., Бацких Г.И. Ускоритель электронов для промышленности.// Второе Всесоюзное Совещание по применению ускорителей заряженных частиц в народном хозяйстве: тез.докл. Ленинград, Октябрь 1975 т1 Л: НИИ ЭФА, 1976 - с265-270

55. Пат. Германии №455933К121Е37/02 Н94959 УШ/21Е: 12.10.2326,01,28

56. А.С. СССР 742926 МПК H05G1/10 H01J35/02 Рентгеновский генератор / В.Ф. Романовский, B.C. Панасюк, Б.М. Степанов, A.M. Овчаров, Ю.А. Акимов (СССР) 2568767/18-25(22) Заявлено 09.01.78. Опубл. 15.07.80. Бюл.№26 '

57. Вальднер О.А. Разработка в МИФИ серийных линейных ускорителей электронов: Сб.ст. Ускорители, под.ред. Г.А. Тягунова; ВЗ Москва: Госатомиздат, 1962 с5-17249

58. Быков А.П. Линейный ускоритель электронов серии электроника ЭЛУ5-1-5 // Всесоюзное Совещание по применению ускорителей в народном хозяйстве и медицине. Тез.докл. Всесоюзного Совещания. Ленинград, Февраль 1971 — с40-45

59. Комар Е.Г. Применение ускорителей заряженных частиц в народном хозяйстве и медицине // Всесоюзное Совещание по применению ускорителей электронов в народном хозяйстве и медицине. Тез.докл. Совещания Ленинград, Февраль 1971 с75-81

60. Горбунов В.И. Опыт исследования малогабаритного бетатрона ПМБ-6 для контроля качества сварных соединений // Всесоюзное Совещание по применению ускорителей электронов в народном хозяйстве и медицине. Тез.докл. Совещания, Ленинград, Февраль 1971 с90-98

61. Цукерман В.А. Развитие импульсной рентгенотехники в СССР. Ленинград. Машиностроение 1980 В24 с22-23

62. Гречушников А.И., Серебренников B.C. Предпосевное облучениесемян/Сб.докл. изд. АН СССР- Москва 1962-с95

63. Кардашов А.В. Консервирование рыбы и рыбопродуктов ионизирующей радиацией // Первая Всесоюзная Конференция по прикладной радиобиологии. Тез.докл. Кишинев 1981 Штиинца 1981

64. Rollins W. New England j. Med 1902 №146 p36

65. Kellerer А.М. (Обобщенная теория дуального действия) // J. Radiation Res, 1978 v75p471-489

66. Новые направления биотехнологии / Сб.статей Всесоюзной Конференции (1988; Пущино) 300с

67. Каушанский Д.А., Березина Н.М. Эффективность предпосевного облучения семян. Москва: Россельхозиздат 1975-255с.

68. Крзлов Ю.П., Сергеев Г.Б. Спектры электронного парамагнитного резонанса облученных и обработанных мономером зародышей семян пшеницы. // Ж. Радиобиология 1963 тЩ В1 с 130-132

69. Кузин A.M., Костин И.Г., Шершунова Л.Н., Зуборева Л.А. Об использовании ионизирующей радиации в птицеводстве. // Ж. Радиобиология, 1963, тЗ, №111, с311-317

70. Хакимов П.А. Перспективы использования РБТ в птицеводстве в УзССР / В кн. 1 Конф. По прикладной радиобиологии. Кишинев: Штиинца, 1981, с22

71. Молекулярная и прикладная биофизика с/к растений и применение новейших физико-технических методов в сельском хозяйстве (тезисы докладов II Всесоюзного симпозиума) Кишинев, КСХИ, 1977251

72. Григанова Н.В. Применение ионизирующих излучений для обеззараживания пушно-мехового сырья. Санитария и гигиена. Содержание животных. Москва изд Колос 1981 - с121-124

73. Березина Н.М., Шибря Т.П., Дрожжина В.В., Риза-Заде P.P., Тарасова А.Д. Влияние предпосадочного облучения клубней у-лучами СО60 на урожай и содержание витамина С в картофеле // Ж. Радиобиология 1963 тШ В1 C139-143.

74. Сторм Э., Исраэль X., Сечения взаимодействия гамма-излучения /для энергий 0,001-100 МЭВ и элементов с 1 по 100/. Справочник. Пер. с англ. Москва: Атомиздат, 1973-253с

75. Тальрозе B.JI. Проблемы радиационной стерилизации // Журнал Химия высоких энергий 1983 т17 - №3 — с30-35

76. Бычковская И.Б. Проблема отдаленной радиационной гибели клеток -М.: Энергоатомиздат, 1986 159с91.3агуляев А.К. Биоповреждения и защита от них. Москва: изд. Наука 1978-252с

77. Мясник М.Н. и др. Фотобиологические аспекты радиационного поражения клеток / М.Н. Мясник, В.Г. Скворцов, В.А. Соколов — Москва Энергоатомиздат 1985 380с

78. Савинский А.К. Взаимодействие электронов с ткане-эквивалентными средами. Москва. Энергоатомиздат 1985 112с

79. А.С. 1096280 СССР. МПК A61L2/08 Способ определения повреждения микроорганизмов / В.М. Фомиченков, В.А. Чугунов, А.К. Ажермачев, П.В. Бабаева (СССР) 3480628/28-13; Заявлено 05.08.82; Опубл. 20.08.80, Бюл.№21

80. Хансон К.П., Комар В.Е. Молекулярные механизмы радиационной гибели клеток. Москва: Энергоатомиздат 1985-210с

81. Пономарев А.П., Мищенко В.А. Электронная микроскопия вирусов и некоторых условно-патогенных микроорганизмов. Владимир 2005. изд. Фолиант - 149с252,

82. Стрельцова В.Н., Москалев Ю.И. Отдаленные последствия радиационного поражения. Бластомогенное действие / Сб. под ред. И.В. Филипповича-1985-т5 181с

83. Нуждин Н.И., Самохвалова Н.С., Дозорцева Р.Л., Петрова Л.Е., Шекшеев Э.М. Влияние фактора времени на выход хромосомных мутаций и свободных радикалов в сухих семенах ячменя, облученных у-лучами СО60 // Ж. Радиобиология 1976 - tXVI - В1 - с545-549

84. Комар В.Е., Седова Б.М. Влияние общего рентгеновского облучения на нуклеотидный состав и способность к молекулярной гибридизации фракций ядерной РНК регенерирующей печени крысы. / Ж. Радиобиология — 1973 — т1 №3 - сЗ-7

85. ЮО.Уманский С.Р. Влияние облучения на состав и РНК в раннем эмбриогенезе вьюна // Ж. Радиобиология — 1968 — tVIII ВЗ - с347-353

86. Ю1.Хансон К.П., Шутко А.Н., Петрова Л.Д. Влияние ионизирующей радиации на некоторые регуляторные свойства ЛИЗИЛ-.РНК -синтетазы из печени крыс // Ж. Радиобиология — 1972 тХП — В5 — С654-657

87. Ибрагимов А.П., Рахманов Н.А. Изучение изменений количественных соотношений белковых фракций рибосом хлопчатника в норме и при у-облучении // Ж. Радиобиология 1974 - tXIV - В1 - с 147-149

88. ЮЗ.ХидвечиЭ. Biochem-146, 357-360. Венгрия 1975

89. Ямада, Охияма Int. S. Rad, Biol. 14,7,169, 1968

90. Кузин A.M. Молекулярная радиобиология клеточного ядра. Москва. Атомиздат, 1973-208с

91. Зиновьев О.А., Русанова Н.В., Мисюрева Н.Г., Баранчиков Е.И. Пучково-плазменный метод повышения биологической активности штамма продуцента антибиотика линкомицина // Труды Института Атомной Энергии им. И.В. Курчатова-1989, вып. 1, т1, с30-32

92. Пат. 1824912 Россия, МПК C12N15/01. Способ получения штамма актиномицета продуцента линкомицина / О.А. Зиновьев, Н.Г.253

93. Мисюрева, В.Д. Русанов, Е.И. Баранчиков, Т.Г. Борисова, Н.В. Русанова, В.Я. Шарков (Россия) №4759902/13. Заявлено 16.11.89; опубликовано 3.06.1991, Бюл. №2, с392

94. Найденов А.Я. Биологические индикаторы стерилизации^тов: отчет о

95. Ж. Технология чистоты №2. 2000г. с 5-6 Курчатова;

96. ПО.Месяц Г.А., Котов Ю.А., Шпак В.Г., Соковнин С.Ю. Использование сильноточных электронных пучков для стерилизации / Урал-наука, экология Екатеринбург. 1999. с 241-255

97. Зиновьев О.А., Мисюрева Н.Г.-, Дудецкий В.Е., Аверин В.Г., Беленький Г.С. Способ получения высокоактивных штаммов актиномицетов продуцентов линкомицина, там же cl 5-16

98. Дриняев В.А., Зиновьев О.А., Ивкин М.В., Землякова Л.Г., Ковалев В.Н. Пучково-плазменный разряд в селекции продуцентов антибиотика.бацитрацина, там же с20

99. Norman С., Marshall Е. Boom and Bust in Biotechnology. Southern Biotech, a Tampa Company that went public last August is in financial and legal trouble; Shakeout in the biotechnology industry may be hastened Science. 216 N 4550, 1076 1082 (1982)

100. Березин И.В. и др. Иммобилизованные ферменты / И.В. Березин, Н.Л. Клячко, А.В. Левашов, КН. Мартенек, В.В. Можаев, ЮЛ. Хмельницкий. Сб. под ред. Н.С. Егорова и В.Д. Самуилова. Москва: изд. Высшая школа 1987 tVII 154с

101. Березин Н.В. Иммобилизованные ферменты и клетки. // Ж. Биотехнология-1985 №2 - cl 13-116

102. Method in Ensymology/Jmmobilizet Enzymes/Edby К. Mosbch. — New York, Academic Press. 1976, Vol. 44, p 999

103. Newmark P. Nature, 283 N 5743,123-124 (1980)

104. Gregory G. Nature, 296 N 5858,384(1982)

105. Зиновьев О.А. Свойства бромосеребряных эмульсий облученных радиоволнами // Журнал научной и прикладной фотографии и кинематографии. АН СССР 1968 - Т 13- №5 - с353-354

106. Дебабов В.Г., Лившиц В. А. Современные методы создания промышленных штаммов микроорганизмов: учебное издание. Москва: Высшая школа, 1988 кн.2 -206с: с илл.255 ■

107. Современные проблемы радиационной генетики: Сб. работ под ред. Д.К. Дубининой. Москва. Агомиздат 1969 180с

108. Козлов В.Ф. Справочник по радиационной безопасности, Москва. Атомиздат 1978-250с

109. Ермаков Г.М., Мартюгов Г.М. //Ж. Приборы и техника эксперимента 1982 №5 -с124

110. Чернетский А.В. и др. Аппаратура и методы плазменных исследований / А.В. Чернетский, О.А. Зиновьев, О.В. Козлов, под ред. В,Д, Русанова. М.: Атомиздат, 1965г. 353с

111. Найденов А .Я. Биологические индикаторы стерилизации // Журнал Технология чистоты 2000г., №2, с15

112. Орловский В.Й., Ковалев B.H., Матвеев В.Е. Фармазин (Фрадизин 50). Научный отчет о НИР (препринт) НПО Биотехнология МММП СССР М., 1988-4.2-150с

113. Велихов Е.П., Глухих В.А. Импульсные источники энергии для термоядерных реакторов. Сб. статей. М., Госэнергоатомиздат. 1987г. 125с.

114. Генералова В.В., Гурский М.Н. Дозиметрий в радиационных технологиях -Москва: Стандарты- 1981г. 150с256

115. Зиновьев О.А. К вопросу о методе исследования электромагнитных волн // Журнал Экспериментальной и теоретической физики 1967 - Т 52. вып. 5 с. 1134-1136

116. Cleland M.R. and PAGEAU G.M. // Nacl. Jnst. And Mech. in Phis. Res. B24/25 (1987) 967-972

117. Долгачев Г.И., Закатов Л.П., Нитипшнский М.С., Ушаков А.Г. Особенности плазменных прерывателей тока применяемых в мощных частотно-импульсных генераторах // Журнал Физика плазмы — 1998. Т24 — №2 — с.1078-1087

118. Мишустин Е.Н., Емцев В.Т. Микробиология. М., Агропромиздат, 1987г., 368с

119. Лобанов Н.С., Зиновьев О.А. Новые детекторы гамма- и рентгеновского излучений. // Ж. Приборы и техника эксперимента -2002 №4 - с59-62

120. Гочалиев Г.З. Технологическая дозиметрия. Москва: Энергоатомиздат, 1984-48с251

121. Nclaughlin W.L. «Radiat. Phis. Chem.» 1977 v9 №1-3 pl47

122. Методические материалы по дозиметрии на радиационно-технологических установках с ускорителями электронов. Москва: СЭВ, 1980 -120с

123. Комочков М.М., Лебедев В.Н. Практическое руководство по радиационной безопасности на ускорителях заряженных частиц. Москва Энергоатомиздат 1986 - 168с: илл.

124. Золотухин В .Г. и др. Тканевые дозы в теле человека / В.Г. Золотухин, И.Б. Кеприм-Маркус, О.П. Кочетков. Атомиздат, 1979 92с

125. Девятайкин Е.В. и др. Дозиметрический и радиометрический контроль, организация и контроль / Е.В. Девятайкин, И.В. Левин, Ф.К. Лавочкин. Москва. Атомиздат, 1978- 105с

126. Order of Lenin I.V. Kurchatov Institut of Atomic Energy. SSSR. Moskva. AtomenergoExport. 1980, p.52.

127. Das S.K., Kamynsky М. In. Radiat Effect Solid Sorface, 1968 v30 №10 p2005-200815;1. Primak W. J Appl, Phys, 1963 v34 №12 p3630-3634

128. Wolfen W.G. J. Nacl. Materials, 1980 v93-94 part В pi080-1081258

129. Штромбах Я.И., Платонов П. А., Лобанов Н.С., Чугунов O.K., Александров В.П., Зиновьев О.А. Эпоксидные компаунды для иммобилизации радиоактивных отходов.//Журнал «Атомная энергия» 2005-Т.98. Вып. 5, с349

130. Evans J.H. J. Nacl. Materials. 1977 v68 №2 pl29-140

131. Erents S.K., McCraken G.M. Rad. Eff. 1973 vl8 №3-4 pl91

132. Асалханов Ю.И., Довдоков Д.Д., Пронькинов И.Т. Установка для исследования адсорбционных процессов на поверхности твердых тел методами элипсометрии и масс-спектрометрии // ПТЭ. 1985 №5 с146.

133. Evans J.H. J. Nacl. Materials, 1976 v61 pi-7

134. SgmundP. Phys Rev. 1969 vl84 №2 p382-416

135. Алиханян С.И., Акифеев А.П., Чернин Л.С. Общая генетика. Москва, Высшая шкЬла, 1985 C273-302.

136. Саенко А.С., Сынзыныс Б.И., Готлиб В .Я., Трофимова С.В., Пелевина И.И./ Радиобиология 1981,21, 1,26-37.

137. Ц 67. Ратахин Н.А. Разработки и исследование источников мощныхнаносекундных потоков заряженных частиц и рентгеновского излучения /Диссертация в виде научного доклада на соискание уч. степ, доктора физ-мат. наук. Томск 2000 - 56с.

138. Пикаев А.К. Современная радиационная химия. Твердое тело и полимеры. Прикладные аспекты Москва; Наука. 1987. 250с.

139. Кудряшов Ю.Б. Радиационная биофизика (ионизирующие излучения) под ред. Мазурика В.К. и Калошина М.Ф. Москва,изд. Физматлит, 2004, 448с.

140. В.Д., Титов А.В., Измерение микроволнового спектра излучения плаз-мы.//Ж.Т.Ф. 1971 тХЫ №10 с2233-2235. ; "" "

141. Biochimie, 1981, 63, 6, 555-559

142. Гриб А.А. Концепции современного естествознания Москва -Бином, Лаб. Знаний. - 2003г. - 120с176'. Lett Aleksander. Radiat Res, 1970, 44, 3, 771

143. Ермолаева. Н.В. и др. Дееспособность ДНК и распад клеток. //Биохимия 1970, 35, 4,641.

144. Chanson К.Р. и др. Radiat Res, 1981, 85, 3, 544260

145. Хансон К.П., Комар В.Е. Молекулярные механизмы радиационной гибели клеток. М.: Энергоатомиздат. 1985 - 150с.: ил.

146. Under Е. Strahlenther, 1980, 156, 1,46-50

147. Дертингер Г., Юнг X. Молекулярная радиобиология. Действиеионизирующих излучений на элементарные биологические объекты.

148. Пер. с англ. Москва, Атомиздат, 1973 248с. с черт. ■ 182. Ганасси Е.Э. Радиационное повреждение и репарация хромосом. Москва, Наука, 1976, 180с

149. Хуг О., Келлерер А. Стохастическая радиобиология Москва, Атомиздат, 1969г., 251с.

150. Календо Г.С. Ранние реакции клеток на ионизирующее излучение и их роль в защите и сенсибилизации. Москва, Энергоиздат, 1982г., 280с

151. Adv. Cancer. Res. 1982, 37, 159-232

152. Мюнтцинг А. Генетика. Москва, Мир 1967г., 350с

153. Am. J. Cancer. 1936, 26, 581.

154. Малиновский О.В. Восстановление клеток от сублетальных повреждений при фракционировании дозы облучения // Изв. АН СССР. Сер. Биол. 1971 №2 с221-231.

155. Knippers R. Molekulare Genetik G Ticme Verb. Stuttgart, 1982

156. СтенгГ. Молекулярная генетика. Москва, Мир, 1974, с176 .

157. Латарже, Лахассань. Радиобиология. Пер. с англ., М., Иностранная литература, 1955, с120, Барон, с249.

158. Br. J, Radiol 1966, 39, 321-331

159. Зиновьев О.А. • Волны Де-Бройля и частота мутаций микроорганизмов // Журнал Электродинамика и техника СВЧ, КВЧ и оптических частот -2005 T.XII вып.3(40)

160. Сивухин Д.В. Атомная и ядерная физика, волны Де-Бройля и их интерпретация. Москва, изд. МФТИ 2002 т.V 350с

161. Генис Д.Е. Медицинская паразитология. Москва, Медицина, 1985303с .207ч Чурбанова И.Н. Микробиология. Москва, Высшая школа, 1987, с17-35

162. Стенли У., Веленс 3. Вирусы и природа жизни. Пер. с англ. М., Иностранная литература, 1963 239с

163. Берги ЕМ. Руководство по определению бактерий. Москва, Высшая школа, 1974,210с

164. Отзыв ПО «Мосмедпрепараты» им. Л Л. Карпова Минмедбиопрома СССР на работу по селекции продуцентов антибиотиков, проведенную в ИАЭ им. И.В. Курчатова в 1986-1989гт. Исх. 11/59 от 24.11.89г. (см. в тексте настоящей диссертации).

165. Федотов А.Е. Развитие техники чистых помещений и стандарты ИСО /Сб. Доклады на XI 1-й Международной конференции АСИНКОМ. Москва 30-31 мая 2002-сЗ-Ю.212; Делоне Н.Б. Квантовая физика.

166. Москва, Физматлит 2004. 87с

167. Пат. 2125463 Россия МПК А61К35/78, 9/14 Способ получения энтеросорбента / Л.В. Неумывакин, В.З. Тарантул, О.А. Зиновьев, С.Л. Шеронин, Р.В. Козин, А.В. Диковский (Россия) - №98104393/14; заявлено 10.03.98. Опубл. 27.01.99. Бюл. №3 - 422 е.: юл.

168. Пат. 2026078. Россия. МПК 61К35/78 Энтеросорбент и способ его получения / Л.С. Ефимова, Н.А. Беляков, Т.А. Бойко, А.Г.

169. Мирошниченко, А.В. Соломенников (Россия) 5025978/14 заявлено. .- • '.:.,:.•;:.■, . . .• . ,. .2712.91; Опубл. 20.11.95, Бюл. №1'

170. Фарманализ контрольно-аналитической лаборатории препарата «Полифан», нормативный документ ВФС 42-3030-98, регистрационноеудостоверение 98/27915 (см. в тексте работы). ' 219 • Rakitskaya G.A., Samoilenko I.I., Pavlov I.P., et al/ Radioresistace of

171. Microorganiams: Theoretical and Practical Aspects. Sterilization of Medical

172. Products. v.V, 1989, pp297-307. "

173. Кудряшов Ю.Б. Радиационная биофизика (ионизирующие излучения) под ред. Мазурика В.К. и Калошина М.Ф. Москва, изд. Физматлит, 2004, 448с.ты. // ip. шестой 1 реевскои конференции (Лондон, 16-21 сентября1974г.). Перевод с англ. М., Медицина, 1980. с42-47

174. Дриняев В. А., Стерлина Т.С., Березкина Н.Е., Мосин В А:, Кругляк

175. Е.Б., Есипов С.Е., Кобрин М.Б., Юркив В.А. Авермектины: естественная изменчивость штамма, продуцента Streptomycesavermitilis ВКМ АС 1301 И Журнал Биотехнология 1993№11-12 с21-25

176. Дриняев В.А., Березкина Н.Е., Стерлина Т.С., Мосин В.А., Зиновьев

177. О.А., Кругляк Е.Б., Тер-Симонян В.Г., Юркив В.А. Получение и свойства новых' высокоактивных штаммов Str. Avermitilisпродуцентов авермектинов//Журнал Биотехнология. 1994. №8. с10-11

178. Удостоверение РФ №0898 Государственной комиссии по химическимсредствам борьбы с вредителями, болезнями растений, сорняками: «Фитоверм» препаративной формы. Зарегистрирован за №948357 от 25.12.1994г. (см. в тексте диссертации). 1 ■

179. Буторина М.В., Воробьев П.В., Дмитриева А.П. / Сб. Инженерная экология и экологический менеджмент под ред. Иванова Н И., Федина И.М. Москва, изд. Лотос, 2003г.

180. Протасов В.Ф., Матвеев А.С. Экология. Москва, Финансы и

181. Неумывакин Л.В., Зиновьев О.А., Зимина М.С., Хромов И.С., Петренко В.В., Пижов Г.Я. Деконтаминация лекарственных препаратов из растительного сырья с помощью современных методов обработки. // Химико-фармацевтический журнал 2006 №1 сЮ-15

182. Зиновьев О.А., Скобкин B.C., Лобанов Н.С., Чугунов O.K., Пижов Г.Я., Найденов А.Я., Дубинина Т.П. Радиационная ст^илизация почтовых отправлений. // Ж. Атомная Энергия -2006 -т100, вып.4

183. Мирзаев М.Н., Кулица Л.М., Зиновьев О.А. Становление и современное состояние промышленного производства препаратов авермектинового ряда в ^России. // Журнал Ветеринарная Медицина 2006 №1 el 0-14

184. William С. Campbell. Ivermectin and Abamectin. Springervering. New York. Berlin. Heidelberg, London. Paris. Tokyo, 1989, pl73-229

185. Буторина M.B., Воробьев П.В.,

186. Дмитриева А.П. / Сб. Инженерная экология и экологический менеджмент под ред. Иванова Н.И., Федина И.М. Москва, изд. Лотос, 2003г.

187. Протасов В.Ф., Матвеев А.С. Экология. Москва, Финансы и статистика, 2001, 210с266

188. Маяастерста» иеднивнскоА и мнсроФмяогвчссжаЯ лроииалемкп СССР (Минмедбиопром СССР) ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ПРОИЗВОДСТВЕННОЕ ОБЪЕДИНЕНИЕ «МОСМЕДПРЕПАРАТЫ» им. JI. Я. КАРПОВА

189. ПРЕДПРИЯТИЕ КОММУНИСТИЧЕСКОГО ТРУДА

190. Р. сч. Jfc 367901. Спец. ссуд, счет № 92377501 ■ Красмогьардейскоы отд. Промстройбанка г. Москвн Телекс 417651 «Фтор». Код ж. Д. 20700l4 H.*i> М111. От1. На Л.от