автореферат диссертации по электронике, 05.27.05, диссертация на тему:Применение дифракции лазерного излучателя для определения деформируемости эритроцитов в условиях гипоосмотического гемолиза

Введение.

Глава 1. Методы исследования деформируемости эритроцитов.

1.1 Состав крови.

1.2 Структура эритроцита.

1.3 Моделирование формы эритроцита.

1.4 Гемолиз и сопутствующие явления.

1.5 Методы исследования механических свойств эритроцитов.

1.6 Оптические методы контроля параметров эритроцитов.

1.7 Дифракция на объемных телах.

Выводы.

Глава 2. Осмотическая резистентность эритроцитов.

2.1 Сравнительный анализ моделей формы эритроцита.

2.2 Изменение радиуса эритроцита в гипоосмотических растворах.

2.3 Дисперсия при трансформации диск - сфера.

2.4 Влияние жесткости мембраны на кривую гипоосмотического гемолиза. оыводы.

Глава 3. Лазерная дифрактометрия гипоосмотического набухания эритроцитов.

3.1 Методика приготовления образцов крови.

3.2 Материалы исследования.

3.3 Анализ погрешностей экспериментальных исследований.

3.3.1 Расчет погрешности приготовления растворов.

3.3.2 Анализ влияния параметров лазерного излучения.

3.3.3 Анализ точности экспериментальной установки.

3.4 Исследование гипоосмотического набухания методом лазерной дифрактометрии.

3.5 Гипоосмотическое набухание эритроцитов у разных групп больных.

3.6 Скачкообразный характер набухания сферулированного эритроцита.

Выводы.

Глава 4. Дифрактометрия гипоосмотической кривой.

4.1 Модель дифракции лазерного излучения на образце эритроцитов.

4.2 Эхиноцитоз при гипоосмотическом набухании.

4.3 Влияние эхиноцитоза на контраст ДК.

Выводы.

Актуальность работы. В науке и технике измерения занимают центральное место. Изобретение лазеров расширило возможности оптических методов измерения в силу их основных преимуществ: неконтактности, высокого пространственного разрешения, высокой точности. Особенно высок интерес к применению особенно когерентно-оптических методов измерения в биологии и медицине. Среди когерентных методов наиболее перспективна лазерная дифрактометрия. Основные достоинства лазерной дифрактометрии -инвариантность, неконтактность, высокая точность (до сотых долей мкм), возможность автоматизации измерения - способствуют широкому ее применению, и в частности, для измерения геометрических размеров эритроцитов. Показатели реологии крови - вязкость, агрегация и деформируемость эритроцитов (ДЭ). Снижение ДЭ является одним из признаков ухудшения снабжения тканей кислородом. При ряде заболеваний системы крови, и в частности, множественной миеломе (ММ), нередко наблюдаются осложнения, в основе которых лежит нарушение реологических свойств крови с расстройством микроциркуляции: гипервискозный синдром, недостаточность кровообращения, острая и хроническая почечная недостаточность и другие, которые существенно ухудшают ее течение и способствуют развитию осложнений. Совершенно очевидно, что их раннее выявление и проведение своевременных лечебных мероприятий будет способствовать предупреждению и даже ликвидации осложнений, стабилизации основного патологического процесса. Так как ДЭ - один из основных параметров, определяющих реологические свойства крови, то его изучение безусловно представляется актуальным. Важно выявить причины ухудшения ДЭ при ММ и определить основные пути по их устранению.

К настоящему времени предложено много прямых и косвенных методов оценки ДЭ, недостатками которых, в одних случаях, можно считать слишком быстро протекающие процессы гемолиза (разрушение эритроцитов), что не позволяет фиксировать момент разрыва мембраны, или, в других методах, слишком большое время выдержки (порядка 24 часов) в гемолизирующих растворах. Кроме того, фиксирование момента гемолиза осуществляется визуально по изменению цвета суспензии.

В работе предложено использовать для исследования ДЭ в условиях гипоосмотического набухания метод лазерной дифрактометрии. Высокая пространственная когерентность и монохроматичность лазера как источника излучения позволяет с большой точностью проводить измерения среднего радиуса совокупности эритроцитов. Регистрация характерного размера эритроцитов осуществляется по изменению линейного размера дифракционных колец.

Содержание работы

В первой главе анализируются вопросы моделирования форм эритроцитов, оценка деформируемости эритроцитов и методы ее измерения. Проведен обзор гемолизирующих факторов и показана перспективность использования модели гемолиза при осмотическом набухании эритроцитов.

Особенно перспективным является использование новых методов исследования ДЭ у больных с заболеваниями системы крови, в частности при ММ, так как они сопровождаются различными осложнениями, ухудшающими общее состояние и показатели выживаемости больных.

Показано, что такие качества когерентно-оптических методов как минимальное воздействие на объект, инвариантность к смещениям образца, возможность одновременной регистрации большого количества частиц свидетельствуют об их перспективном использовании для оценки трансформируемое™ формы частиц при осуществлении внешнего воздействия.

Во второй главе приведен сравнительный анализ различных математических моделей дискоидной формы эритроцита и обосновано описание формы овалами Кассини.

В результате теоретического моделирования гипоосмотического набухания эритроцита, построена гипотоническая кривая для различных первоначальных размеров дискоцита. Определены параметры кривой, характеризующие точку сферуляции и жесткость мембраны. Показано изменение дисперсности при трансформации дискоцит - сфероцит. Проведен расчет набухания сферического эритроцита с учетом жесткости его мембраны. Преобразовали зависимость относительного радиуса сферулированного эритроцита к однопараметрической. Основной характеристикой выбран коэффициент наклона Ь.

Предложенная методика позволяет повысить достоверность оценки величины жесткости эритроцитарной мембраны в условиях эксперимента.

Проведенное теоретическое моделирование подтверждено экспериментально на эритроцитах доноров и пациентов с различными заболеваниями.

В третьей главе приведено описание экспериментальной установки, анализ влияния параметров лазерного излучения, методики эксперимента, погрешностей эксперимента и полученных результатов.

Были проведены исследования эритроцитов крови доноров, больных с множественной миеломой (ММ) и аденомой предстательной железы (АПЖ).

Корреляционный анализ жесткости эритроцитарной мембраны и показателей крови больных ММ показал высокий уровень достоверности полученных результатов. В процессе лечения больных произошло существенное улучшение реологических показателей крови. При этом при уменьшении уровня парапротеина в крови корреляционно уменьшалась и жесткость мембраны эритроцита. Высокий коэффициент корреляции получен с уровнем парапротеина в крови (р=+0,9) и уровнем общего белка (р=+0,7).

У больных с АПЖ, также как и у доноров, жесткость эритроцитарной мембраны составляла порядка 0,5ч-1,5 Н/м.

При исследовании обнаружено, что изменение радиуса эритроцитов крови имело, помимо общего теоретического хода кривой, две характерные особенности.

Четвертая глава посвящена моделированию дифрактометрии характерного размера эритроцитов в условиях гипоосмотического гемолиза. Исследовалось влияние дисперсности и изменения формы эритроцита на величину контраста ДК и погрешность измерения.

Спонтанно", прикрепившись к стеклу, эритроцит через некоторое время превращается в частицу с "шипиками" на поверхности. В силу таких особенностей эритроцитов и условий проведения экспериментальных исследований при помещении эритроцитов в камеру Горяева (изготовленную из стекла), провели расчет влияния эхиноцитоза на результаты дифрактометрии.

В зависимости от степени осмотического набухания выделили две основные стадии эхиноцитоза, которые аппроксимировали двумя моделями.

Показано, что эхиноцитоз влияет только на контраст ДК, что подтверждают данные эксперимента. Контраст зависит от отношения площадей "шипиков" и эритроцитов. Существенно уменьшает контраст ДК количество шипов. Оказывает влияние размер "шипиков": при уменьшении размера контраст постепенно увеличивается и достигает значения, присущего совокупности эритроцитов без шипов. Дисперсность по размерам "шипиков" не оказывает влияния на контраст ДК.

В заключении диссертации обобщены основные результаты работы.

Цель и задачи работы:

Цель работы: разработка способа лазерной дифрактометрии ДЭ и рассмотрение возможности его использования для диагностики реологических расстройств; оценки эффективности терапии у больных ММ; апробация его в широкой клинической практике. Поставленные задачи:

1. Рассмотреть применимость метода лазерной дифрактометрии ДЭ в процессе гипоосмотического набухания.

2. Провести математическое моделирование дифракции лазерного излучения на эхиноцитозных эритроцитах.

3. Разработать теоретическую модель набухания эритроцита в гипоосмотическом растворе и создать методику измерения жесткости эритроцитарной мембраны.

4. Экспериментально исследовать методом лазерной дифрактометрии эритроциты доноров и больных с множественной миеломой и аденомой предстательной железы (АПЖ) в условиях гипоосмотического набухания. Личный вклад автора: Все представленные экспериментальные исследования и теоретические расчеты проведены при личном участии автора. Научная новизна работы:

1. Впервые метод лазерной дифрактометрии ДЭ использован в условиях гипоосмотического набухания совокупности эритроцитов.

2. Предложен способ оценки жесткости эритроцитарной мембраны в условиях гипоосмотического набухания.

3. Экспериментально впервые обнаружен прерывистый механизм набухания сферулированного эритроцита, названный нами «скачком», заключающийся в резком уменьшении диаметра сферулированного эритроцита, предложена модель протекания данного процесса, показана его связь с жесткостью мембраны.

4. Экспериментально подтверждено, что одной из основных причин ухудшения деформируемости эритроцитов при ММ является высокий уровень парапротеина в крови и показана необходимость использования у таких больных в качестве корригирующего метода лечебного плазмафереза. Практическая ценность Рассмотрена возможность применения метода лазерной дифрактометрии для исследования эритроцитов крови, оценено влияние параметров лазерного излучения на точность измерения. Предложен и апробирован доступный клинической практике и достаточно информативный метод лазерной дифрактометрии для определения жесткости эритроцитарной мембраны. Применение этого метода у больных ММ уточняет диагностику гемореологических расстройств с блокадой микроциркуляторного русла и позволяет своевременно начать активную терапию. Применение лечебного плазмафереза в комплексной терапии больных ММ позволяет существенно улучшить ДЭ.

Положения и результаты, выносимые на защиту:

1. Метод лазерной дифрактометрии может быть применен для измерения среднего радиуса совокупности эритроцитов в условиях гипоосмотического набухания и построения гипотонической кривой.

2. Наличие эхиноцитоза - «шипиков» на поверхности эритроцита - не приводит к изменению положения минимумов ДК.

3. Предложена однопараметрическая модель набухания сферулированного эритроцита, где определяющим параметром является средняя жесткость эритроцитарной мембраны, и способ ее определения по гипотонической кривой.

4. Гипотоническая кривая сферулированного эритроцита имеет две особенности: пологий участок и нарушение монотонности - «скачок». Величина "скачка" и его местоположение зависят от жесткости эритроцитарной мембраны.

Апробация работы: Результаты работы обсуждались на семинарах кафедры КЭиБМО, ИТМО, СПб. Основное содержание докладывалось на VIII межд. НТ конф. "Лазеры в науке, технике, медицине", Пушкинские Горы, 1997; Российской НП конф. Оптика - ФЦП "Интеграция", ИТМО, СПб 1999; конф. "Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения", ВМА, СПб, 1999; межд. конф. молодых ученых и специалистов "Оптика-99", СПб, 1999, Российской НП конф. Оптика - ФЦП "Интеграция", ИТМО, СПб, 2000; Юбилейной НТ конф. проф.-преп. состава ИТМО, СПб, 2000.

I. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ДЕФОРМИРУЕМОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ

В последние годы, в связи с тем, что была выявлена важная роль нарушений реологических свойств крови в патогенезе целого ряда заболеваний, в частности, ишемической болезни сердца, остром инфаркте миокарда, позднем токсикозе беременности, множественной миеломе и т.д., большое развитие получают исследования реологических показателей крови. В возникающих расстройствах эритроцитам принадлежит главенствующая роль по сравнению с другими клетками крови, прежде всего в силу их многочисленности и способности изменять свою форму. Исследование агрегации, вязкости и деформируемости эритроцитов характеризует изменение реологических свойств крови и может быть использовано для уточнения диагностики ряда патологических состояний и сопровождающих их осложнений. Способность эритроцитов к деформации является важнейшим реологическим феноменом, обуславливающим возможность эритроцитов проходить через капилляры, и являющимся одним из важнейших свойств определяющих продолжительность их жизни. На основании многолетних исследований отобраны наиболее простые и доступные методы, позволяющие исследовать деформируемость эритроцитов, проведен их сравнительный анализ и предложен новый метод исследования - лазерная дифрактометрия осмотической резистентности эритроцитов.

1.1 Состав крови

Гематология - наука о крови и кроветворных органах, их строении и функциях в норме и патологии. Локализация кроветворной ткани, количественные и качественные параметры процессов кроветворения подвергаются значительным изменениям в онтогенезе человека. Костный мозг является у человека основным местом образования клеток крови.

К форменным элементам периферической крови относятся эритроциты, тромбоциты, гранулоциты, лимфоциты, плазматические клетки и моноциты, а также единичные так называемые ДНКсинтезирующие клетки (Табл. 1). Количество крови у взрослого человека составляет в среднем 4,5-^-5 литров. Давление, температура, осмотическое давление, содержание белков, глюкозы, ионов натрия, кальция, калия, хлора, фосфора, водорода в крови относительно постоянны [1-3]. В нормальных физиологических условиях неизменно поддерживается постоянство морфологического и химического состава, а также ее физико-химических свойств (гомеостаз). Плазма крови по объему составляет 55-^60% (форменные элементы 40-й 5%). Это желтоватая полупрозрачная жидкость. В ее состав входят: вода (90ч-92%), минеральные и органические вещества (8-И0%). Больше всего в плазме ионов натрия и хлора, поэтому при больших кровопотерях для поддержания работы сердца больному в вену вводят изотонический раствор, содержащий 0,85% хлористого натрия.

Кровь для поддержания регулярного процесса обмена веществ выполняет многочисленные и разнообразные функции [1-3]:

• Транспортную (для питательных веществ, кислорода, продуктов обмена веществ, медикаментов, промежуточных продуктов и т. д.);

• Переноса информации (перенос гормонов и ферментов к месту воздействия, транспортировка активизирующих и тормозящих веществ);

• Защитную (при помощи лейкоцитов от возбудителей болезней, инородных белков и других инородных тел);

• Поддержания постоянной температуры тела (за счет изменения при необходимости кровоснабжения кожного покрова и варьировании теплоотдачи);

• Самозащиты при помощи системы свертывания (для предотвращения при повреждениях большой потери крови и длительных кровотечений);

• Сохранения постоянства внутренней среды и "внутреннего порядка" в организме за счет регулирования водного и электролитного баланса [2].

Таблица 1.

Форменные элементы крови [1].

Форменные элементы Диаметр, мкм Количество в 1 л крови

Эритроциты 7-9 4-Ю12 - 5-1012

Нейтрофилы палочкоядерные 8-13 0,04-Ю9-0,3-Ю9

Нейтрофилы сегментоядерные 8-13 2-109-5,5-109

Эозинофилы 10-14 0,02-109 - 0,3 109

Базофилы 8-10 0-65-106

Лимфоциты 7-14 1,2-109 - 3-109

Моноциты 12-20 0,09-109 - 0,6-109

Тромбоциты 2-4 180-Ю9-320-109

Эритроциты - форменные элементы крови, основное содержимое которых составляет гемоглобин. Им принадлежит главенствующая роль по сравнению с другими клетками, прежде всего вследствие их многочисленности и способности изменять свою форму и образовывать агрегаты. Эритроциты обладают антигенными свойствами, участвуют в гемостазе, но их основная роль состоит в снабжении тканей организма кислородом и участии в транспорте углекислоты. Эритроциты, благодаря высокой чувствительности к изменениям, происходящим в организме, представляют собой удобный объект для оценки физиологического состояния организма.

Выводы

Известно, что при прикреплении к стеклу эритроцит покрывается «шипиками», размер которых может превышать 1 мкм, а количество составляет до 20-30 штук. В силу того, что экспериментальное исследование проводилось в камере Горяева, изготовленной из стекла, проверили, какую ошибку в измерение среднего радиуса совокупности эритроцитов это вносит.

Провели моделирование эхиноцитов в дискоидном и сферулированном состоянии, предложили рассматривать формирование ДК как сумму интенсивностей от двух совокупностей апертур: круглых, размер которых определяется размером самого эритроцита, и совокупности такой формы и размера, которые соответствуют «шипикам».

Получили, что наличие «шипиков» не влияет на размер первого дифракционного кольца и приводит только к изменению контраста ДК. Показано, что определяющим фактором, приводящим к снижению контраста, является отношение статистических весов «шипиков» и эритроцитов. При уменьшении этого параметра контраст стремится в величине, характерной для ill дифракции на совокупности эритроцитов с определенной дисперсией по размерам без «шипиков».

Показано, что в силу того, что пространственный период ДК от «шипиков» много больше пространственного периода ДК основного отверстия, можно свести сумму распределений интенсивности к более простой картине. А именно, на фоне дифракционного распределения, соответствующего основному отверстию, появляется постамент, соответствующий «шипикам», который поднимает ДК на величину, пропорциональную отношению статистических весов «шипиков» и самих эритроцитов. При этом контраст ДК определяется с точностью не менее 1,5 %.

112

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

1. На основании проведенного обзора литературы сделан вывод о перспективности использования метода осмотического набухания эритроцитов для определения деформируемости эритроцитов. Исследование деформируемости эритроцитов в процессе лечения особенно важно у больных множественной миеломой, которая сопровождается развитием гипервискозного синдрома, хронической почечной недостаточностью, недостаточностью кровообращения, в патогенезе которых немаловажная роль принадлежит гемореологическим расстройствам. Возникновение указанных осложнений ухудшает течение основного заболевания и затрудняет проведение адекватной химиотерапии. Способом фиксирования осмотического набухания совокупности эритроцитов выбрана лазерная дифрактометрия, отвечающая предъявляемым требованиям: простота, инвариантность к смещениям образца, высокая точность и возможность регистрации одновременно среднего радиуса большого количества эритроцитов.

2. Проведен анализ форм для моделирования дискоидного состояния эритроцитов и выбрано как оптимальное уравнение овалов Кассини. Построена зависимость относительного радиуса эритроцита от концентрации соли в растворе с учетом жесткости эритроцитарной мембраны, определены точка сферуляции и относительное изменение радиуса на момент сферуляции.

3. Показано, что определяющим параметром набухания сферулированного эритроцита является жесткость его мембраны. С учетом, экспериментально полученным данных, разработана методика определения жесткости эритроцитарной мембраны.

4. Разработана методика приготовления образцов крови для экспериментального исследования гипоосмотического набухания совокупности эритроцитов.

5. Проведен сравнительный анализ гипоосмотического набухания у доноров, больных с множественной миеломой (ММ) и аденомой предстательной железы (АПЖ). Доказано, что у больных ММ точка сферуляции смещена в сторону меньшей концентрации соли и в процессе эффективного лечения стремится к нормальной.

6. По предложенной методике определены значения жесткости эритроцитарной мембраны для каждого образца крови. Показано, что у больных парапротеинемическими вариантами ММ жесткость эритроцитарной мембраны значительно повышена, а у больных с миеломой Бене-Джонса, АПЖ и доноров жесткость колебалась в пределах нормальных значений. Доказано, что деформируемость эритроцитов при ММ в первую очередь определяется уровнем патологического белка в крови больных. Для больных парапротеинемическими вариантами ММ получена высокая корреляционная зависимость между жесткостью мембраны и уровнем парапротеина в крови (р=+0,9); жесткостью и уровнем общего белка в крови (р=+0,7).

7. Обнаружено, что в процессе гипоосмотического набухания сферулированного эритроцита наблюдаются две особенности. Во-первых, при достижении избыточного давления внутри эритроцита 0,6+1,4 атм скорость роста радиуса эритроцита становится практически нулевой и у доноров, и у больных с ММ и АПЖ. Вероятно, на этом участке эритроцит демонстрирует устойчивость системы при растяжении его мембраны под действием осмотического давления, которое могло бы привести к разрыву. Во-вторых, у больных ММ при концентрации 0,45+0,35 % NaCl при величине избыточного давления 1,4+2,0 атм радиус скачкообразно уменьшается на величину 0,01+0,06 с последующим восстановлением размера.

114

8. Выявлена корреляционная связь между жесткостью эритроцитарной мембраны и относительной величиной "скачка" (р = +0,9).

9. Проведено моделирование эхиноцитозного состояния эритроцитов с целью выявления его влияния на погрешность измерения диаметра минимума дифракционной картины в эксперименте. Показано, что наличие "шипиков" не влияет на положение минимумов ДК, а приводит только к уменьшению контраста. Контраст зависит от статистического веса "шипиков" по отношению к общему статистическому весу самих эритроцитов и при уменьшении веса "шипиков" стремится к контрасту ДК на совокупности эритроцитов без "шипиков".

10. Разработанный метод лазерной дифрактометрии эритроцитов позволяет судить о деформируемости эритроцитов. Метод прост, доступен и высокоинформативен.

11. При проведении больным ММ лечебного ПА наблюдается выведение низкомолекулярных продуктов распада парапротеина, что ведет к разблокированию функциональной способности эритроцитов и оказывает положительное воздействие на их деформируемость. Использование дифрактометрии эритроцитов в условиях гипоосмотического гемолиза при ММ может быть дополнительным признаком оценки эффективности лечения.

ПРИЛ ОЖЕНИЕ № 1 Экспериментальные результаты

Больной ММ № 1 после лечения: гипотоническая кривая и преобразованная для определения жесткости эритроцитарной мембраны

Больной ММ № 2 до лечения: гипотоническая кривая и преобразованная для определения жесткости эритроцитарной мембраны

1 ,12-]R/RCC)>

1,08

1,04.

1,00

До лечения L После лечения

0,8 0,7 0,6 0,5 NaCi, %

1,081,061,041,021,00-1

Я^сф I

Ьдо лечения 2,1 Н/м Ьпосле-1,1 Н/М

Г I

4,5 4,0 3,5 3,0 2,5 вхр2(С)

Больной ММ № 3 до и после лечения: гипотоническая кривая и преобразованная для определения жесткости эритроцитарной мембраны

1,12

1,08

1,04

1,00

0,7 0,6 0,5 NaCl %

Больной ММ № 4 после лечения

Жесткость эритроцитарной мембраны в норме, «скачок» не наблюдается

Гипоосмотическая кривая донора крови

1. Х.Левтов В.А. Реология крови, М., Медицина, 1982.

2. Ковалев Н.Е., Шевчук Л.Д., Щуренко О. И. Биология, М., Высшая школа, 1986.

3. Волькеиштейн М.В. Биофизика, М., Наука, 1981.

4. Быкова И. А. Морфологические особенности эритроцитов периферической крови в норме и патологии/ Гематология и трансфузиология, 1991, №6, с.28.

5. BessisM. Living blood cells and their ultrastructure, Berlin, New York, 1973.

6. Файнштейн Ф.Э. Болезни системы крови, Ташкент, Медицина, 1987.

7. Черницкий Е.А, Воробей А.В. Структура и функция эритроцитарных мембран, Минск, Наука и техника, 1981.

8. Бейер В. А. Краткое пособие по гематологии. Л., Мед., 1967.

9. Руководство по клинической лабораторной диагностике под ред. Меньшикова В.В., М., Медицина, 1982.

10. Быкова И.А. Морфологические особенности эритроцитов периферической крови в норме и патологии (световая микроскопия)/ Гематология и трансфузиология, 1993, №4, с. 7.

11. Козинец Г. К, Ряполова И. В. и др. Морфологическая характеристика эритроцитов периферической крови здоровых людей (сканирующая электронная микроскопия)/ Проблемы гематологии и переливания крови, 1977, №7, с.19-21.

12. A.Ponder Е. Hemolisis and Related Phenomena. New York. Crune and Stratton, 1971.

13. Шевченко Л.С., Кобялко В.О., Орлов С.И. Транспорт Са2+ в нейтрофштах и эритроцитах человека в гипотонической и гипертонической среде/ Биологические мембраны, 1995, №3, с. 254.

14. Атауллаханов Ф.И., Кияткин А.Б., Витвицкий В.М. Регуляция объема эритроцитов человека. Роль калиевых каналов, активируемых кальцием/ Биологические мембраны, 1993, №5, с. 519.

15. Фещенко М.С., Зварт Е.И., Шахпаронов М.И., Модяков Н.Н. Антигенные свойства

16. Сторожок С.А., Соловьев С.В. Структурные и функциональные особенности цитоскелета мембраны эритроцита/ Вопросы медицинской химии, 1992, №2, с. 14.

17. Захарова Н.Б., Хвостова Н.В. Значение повреждения белкового и липидного состава эритроцитарных мембран в развитии снижения текучих свойств крови при экстремальных состояниях/ Вопросы медицинской химии, 1991, №1, с. 53.

18. Авраамова, Смолина. Метаболические аспекты старения эритроцитов/ Гематология и трансфузиология, 1991, №5, с. 84.

19. Ъ2.Игнатьев В.В., Кидалов В.Н. Реакция эритроцитов движущейся крови млекопитающих на действие постоянных и импульсных электромагнитных полей низкочастотного диапазона/ Физиологический журнал им. Сеченова, 1995, №12, с. 115.

20. ЪЪ.Гасс Г.В., .Марголис Л.Б., Чермомордик Л.В. Локальные деформации мембран эритроцитов в переменном электрическом поле/ Биологические мембраны, 1990, №6, с. 647.

21. ЪАЛукашев Е.А. К построению математической модели образования форм эритроцита как автоволнового процесса/ Биофизика, 1991, №1, с.78.

22. Лукаигев Е.А. Асимптотическое решение модели форм эритроцита как автоволнового процесса/ Биофизика, 1991, №1, с. 83.36Martino R. Experientia, 1978, 34, №4, с. 466.37 .Бранков Г. Биомеханика, Москва, 1987.

23. J(айруллина А.Я. Диагностика крови методами оптики рассеивающих сред. Препринт № 391, Институт физики АН БССР, Минск, 1985, с. 55.

24. Саркисян Г.П., Дубинин В.А. Теоретические аспекты дифрактоэритрометрии. Красноярск, 1984.

25. Ивенс ИСкейлак Р. Механика и термодинамика биологических мембран. М., Мир, 1982, с. 304.

26. A3.Чижевский A.JI. Структурный анализ движущейся крови, М., Изд-во АН СССР, 1959.

27. ААЛолев А.В., Бездетная JT.H., Ахтямов С.Н. Темновой и фотосенсибилизированный гемолиз эритроцитов в присутствии дитранола/ Биофизика, 1992, №1, с.94.

28. Слобожанина Е.И., Федорович И.Е. Изменение состояния мембранных белков эритроцитов в процессе хранения консервированной крови/ Биофизика, 1991, №4, с. 621.

29. Балаховский С.Д. Методы химического анализа крови, М., Медгиз, 1953.

30. Козинец Г.И. Интерпретация анализов крови и мочи, М., Медгиз, 1974.

31. Никифорова О. Определение гемоглобина. Реакция оседания эритроцитов. Осмотическая резистентность эритроцитов.

32. Биохимическое исследование крови как метод диагностики заболеваний под ред. Кондратенко Т.Я.,

33. Бондарев Л. С., Зайцев И. А. Влияние некоторых воздействий на осмотическую стойкость эритроцитов/ Лабораторное дело, 1990, №7. С. 29.

34. Козинец Г.И., Сарычева Т.Г. Оценка деформабельности эритроцитов методом фильтрации/ Лабораторное дело, 1990, №11, с. 15.70 .Шиляев P.P., Шибаев С.В. Метод определения деформируемости эритроцитов/Лабораторное дело, 1991, №6, с. 32.

35. Атауллаханов Ф.И., Витвицкий В.М. Анализ геометрических параметров и механических свойств эритроцитов методом фильтрации через мембран-ядерные фильтры. 1.Математическая модель/ Биофизика, 1994, №4, с. 672.

36. Сароянц С.В. Использование сплава пермолат для изучения эритроцитов в сканирующем электронном микроскопе/ Лабораторное дело, 1992, №7-8, с. 19.

37. Тарпыков В.А., Бессмелъцев С. С. Использование дифрактометрии мазков крови для диагностики реологических расстройств и оценки течения заболеваний системы крови/ Клиническая лабораторная диагностика, 1997, №4, с. 8.

38. Bayer R., Wolf G. Analysys of erythrocyte flexibility by means of laser diffraction: rigidification due to defined shearing. In. Optical methods of biomedical diagnostics and therapy, Proceedings SPIE, 1992, Vol. 1981, pp. 26-37.

39. Козлов Ю.Г. Лазерная дифрактометрия биологических структур. М., Сб. научных трудов, 1984, с. 81-112

40. Bayer R., Wolf G. Analysys of erythrocyte flexibility by means of laser diffraction. SPIE, 1992, Vol. 1981, pp. 26.93 .Bessis M., Mohandas N. Diffractometric method for the measurement of cellular deformability, Blood Cells, I, 307, 1975/

41. Allard C., Mohandas N., Bessis M. Red cell deformability changes in hemolytic anemias estimated by diffractometric methods (ektacytometry), Blood Cells, 1977, 3, 209-221.

42. Nemtsev I. Z. Diffractometric control in erythrocyte, SPIE, 1994, Vol. 2136, pp. 119-126.

43. Белов Н.Н. Расчет оптических полей в частице по теории Ми без ограничения на значения параметра дифракции и комплексного показателя преломления вещества частицы/ Оптика атмосферы, 1991, т. 4, № 3, с. 321323.

44. Ван де Хюлст. Рассеяние света малыми частицами М., 1961.101 .Бореи К. Поглощение и рассеяние света малыми частицами. М., 1986.

45. Ю2.Лопатин В.К, Сидько Ф.Я. Введение в оптику взвесей клеток. -Новосибирск, 1988.103 .Фарафонов В. Г. Рассеяние света сфероидальными частицами в квазистатическом приближении/ Оптика и спектроскопия, 1994, т. 77, вып. 3 ., с. 455-458.

46. Фарафонов В.Г. Оптические свойства сильно вытянутых и сплюснутых сфероидальных частиц/ Оптика и спектроскопия, 1990, т. 69, вып. 4., с. 866872.

47. Фарафонов В.Г. Рассеяние электромагнитного излучения двухслойными сфероидами/ Оптика и спектроскопия, 1994, т. 76, вып. 1., с. 87-91.

48. Фарафонов В.Г./ Дифференциальные уравнения, 1983, т. 19, №10, с. 1765.

49. Рысаков В.М., Стонь М. Рассеяние света взвесью монодисперсных прозрачных сфер. 1. Теория применение разложения Котельникова-Шеннона для анализа процесса рассеяния на сфере/ Оптика и спектроскопия, 1995, т. 79, вып. 4, с. 650-655.

50. Рысаков В.М., Стонь М. Рассеяние света взвесью частиц. 3. Рассеяние света гауссовым эллипсоидом/ Оптика и спектроскопия, 1997, т. 82, вып. 1, с. 7785.

51. Рысаков В.М., Стонь М. Рассеяние света взвесью частиц. 5. Особенности процесса рассеяния света на эллипсоиде и частицах сложной формы/ Оптика и спектроскопия, 1997, т. 83, вып. 5, с. 805-807.

52. Перельман А.Я. Дифракция на сферически симметричных неоднородных рассеивателях/ Оптика и спектроскопия, 1995, т. 78, вып. 5, с. 822-831.

53. I.Золотарев В. М, Морозов В. Н., Смирнова Е. В. Оптические постоянные природных и технических сред. Справочник. JL: Химия, 1984, с.216.

54. Бессмелъцев С.С., Федорова З.Д. Реологические свойства эритроцитов и система гемостаза у больных истинной полицитемией/ Гематология и трансфузиология, 1989, № 11, с. 29-33.

55. Дуткевич И.Г., Шапкин А.Г. и др. Нарушение реологических свойств крови и микроциркуляции у хирургических больных/ Вестник хирургии, 1984, № 12, с. 97-99.

56. Бессмелъцев С.С., Казадзе Ю.Л. Изменение электрокоагулографических показателей и деформируемости эритроцитов у больных множественной миеломой на фоне различных программ полихимиотерапии/ Клиническая медицина, 1991, № 11, с. 69-73.

57. Критерии прогноза течения и эффективности лечения множественной миеломы, СПб, 1999, пособие для врачей, с. 44.

58. Митрофанов А.С., Тарлыков В.А. Применение лазеров в машиностроении, СПб, 1988.123 .Прикладные телевизионные установки, Паспорт на видеокамеру КТП-40.

59. По теме диссертации опубликованы следующие работы:

60. Скворцова Ю.А., Тарлыков А.В., Тарлыков В.А. Дифрактометрия трансформации эритроцитов/ Тез. докл. Российской НП конф. Оптика -ФЦП "Интеграция", СПб ИТМО, 1999. С. 19.

61. Лендяев А.В., Скворцова Ю.А., Тарлыков В.А. Лазерная дифрактометрия эритроцитов/ Тез. докл. Международной конф. молодых ученых и специалистов "Оптика-99" СПб, 1999. С. 13.

62. Скворцова Ю.А., Лендяев А.В., Тарлыков В.А. Особенности гипоосмотического набухания сферулированного эритроцита/ Тез. докл. Российской НП конф. Оптика ФЦП "Интеграция", СПб ИТМО, 2000. С. 19-20.

63. Скворцова Ю.А., Баженова К.Г., Тарлыков В.А. Моделирование дискоидной формы эритроцита/ Тез. докл. Российской НП конф. Оптика ФЦП "Интеграция", СПб ИТМО, 2000. С. 20.

64. Скворцова Ю.А., Тарлыков В.А., Магурин В.Г. Исследование влияния эхиноцитоза на Фурье-спектр/ Тез. докл. юбилейной НТ конф. профессорско-преподавательской состава, СПб ИТМО, 2000. С. 63.

65. Скворцова Ю.А., Тарлыков В.А. Изменение дисперсии по размерам при осмотическом набухании эритроцитов/ Сборник научных трудов молодых ученых и специалистов, СПб ИТМО, 2000. С. 64-65.

66. Бессмельцев С.С., Скворцова Ю.А., Тарлыков В.А. Исследование жесткости мембраны эритроцитов больных с множественной миеломой (метод лазерной дифрактометрии)/ Эфферентная терапия, 2000. Т. 6. № 1. С. 37-42.

67. Бессмельцев С.С., Лендяев А.В., Скворцова Ю.А., Тарлыков В.А. Лазерная дифрактометрия оптических и механических свойств эритроцитов/ Оптический журнал, 2000. № 4. С. 47-51.