автореферат диссертации по безопасности жизнедеятельности человека, 05.26.02, диссертация на тему:Механизмы апоптоза клеток иммунной системы у участников ликвидации аварии на Чернобольской АЭС

ТБ ол !

, ц Й98

На правах рукописи

СОЛНЦЕВА Ольга Станиславовна

МЕХАНИЗМЫ АПОПТОЗА КЛЕТОК ИММУННОЙ СИСТЕМЫ У УЧАСТНИКОВ ЛИКВИДАЦИИ АВАРИИ НА ЧЕРНОБЫЛЬСКОЙ АЭС.

05.26.02 - безопасность, защита, спасение и жизнеобеспечение населения в чрезвычайных ситуациях 14.00.36 - аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 1999

Работа выполнена во Всероссийском центре экстренной и радиационной медицины МЧ< России.

Ведущая организация: 40-ой Государственный НИИ аварийно-спасательного дел;

Защита диссертации состоится "И" января 1999 г. в 11 час. на заседани диссертационного совета К - 192.01.01 во Всероссийском центре экстренной и радиационно медицины МЧС России по адресу: 194044, Санкт - Петербург, ул. Лебедева, 4/2.

С диссертацией можно ознакомиися е библиотеке Всероссийского центра экстренно и радиационной медицины МЧС России.

Автореферат разослан "__" декабря 1998 г.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Никифоров A.M., доктор медицинских наук, с.н.с. Калинина Н.М.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Кетлинский С.А.

доктор медицинских наук, с.н.с. Бубнова JI.H.

водолазных и глубоководных работ МО России.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

Рыбников В.Ю

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Отдаленные эффекты ионизирующих излучений на организм человека продолжают привлекать внимание исследователей. Значительный интерес к проблеме объясняется тем, что данные о последствиях воздействия облучения используются для оценки риска возникновения патологии у различных коитингептов лиц в условиях профессиональной деятельности, в различных аварийных ситуациях на объектах ядерной энергетики, а также при использовании ионизирующих излучений с диагностическими и лечебными целями. При возникновении радиационных аварий на людей действует комплекс факторов: ионизирующее излучение, физические, психологические, социальные и другие факторы. В то же время, по значимости для жизни и здоровья людей ведущим фактором, определяющим развитие ближайших и отдаленных медико-биологических последствий, является ионизирующее излучение в малых дозах.

Известно, что одним из наиболее значимых последствий воздействия ионизирующих излучений на организм человека является изменение состояния иммунной системы. В ряде публикаций представлены факты о том, что клетки иммунной системы наиболее радиочувствительны по сравнению с другими типами клеток (Москалев Ю. И., Стрельцова В.П., 1988). Многочисленные исследования в системе in vitro выявили, что воздействие малых доз ионизирующей радиации может индуцировать гибель лимфоцитов периферической крови по типу апоптоза (Tomei L.D., 1990; Marples В., 1993; Palayor S.T., 1993; Kirsben А., 1994). Апоитоз - это процесс организованной клеточной гибели вследствие активации Can-, Mg2+ - зависимой эндонуклеазы, которая обусловливает разрывы ДИК между нуклеосомами (в результате образуются полидезоксинуклеотидные фрагменты, величина которых кратна 180 парам пуклеотидол, что соответствует протяженности участка ДНК в пуклеосоме). Вследствие этого происходят нарушения метаболизма, фрагментация клеток с образованием "апоптотических телец"- фрагментов ядра, окруженных мембраной, которые впоследствии фагоцитируются (Ярилин А.А., 1990; Williams G.T., 1994; Istvan V., 1995; Vaux D.L., 1996)

Слово " апоитоз" впервые было предложено J.F. Kerr и соавт. (1972) для описания морфологически стереотипной последовательности событий в процессе клеточной гибели, которая включает в себя сжатие клетки, внутриядерную фрагментацию и уничтожение клеток фагоцитами.

Иммунная система в норме использует апоптотическую гибель для регуляции процесса селекции в тимусе и предотвращения появления клонов аутореактивных клеток в периферических лимфоидных органах и в циркулирующей крови (Murphy К.M. et al., 1990; Parijs L., Abbas А.К., 1996);

Нарушение процесса апоптоза приводит к серьезным нарушениям в иммунной

системе, что может проявиться в развитии аутоиммунных и лимфопролиферативных заболеваний, вторичных иммунодефицитов (Ярилин A.A., 1998; Wheeler J.A., 1995).

Как было показано в ряде работ, инициация апоптоза происходит при запуске рецепторно-опосредовашшх механизмов самоуничтожения клетки (Tanahashi Т. et al., 1994; Nagata S., Suda Т., 1995; Starling G.C. et al., 1997). Этот механизм наблюдается при связывании Fas-лиганда (FasL), фактора некроза опухолей - a (TNF- а) или фактора роста нервов - (i (NGF- ß) с их рецепторами на соответствующих клетках (Howie S.E.M., 1994). В норме экспрессия Fas - антигена на тимоцитах и FasL на тимических стромалышх клетках контролирует развитие Т - клеток путем внутритимической "негативной" и "позитивной" селекции. Под воздействием ионизирующей ркячщин стромальные клетки тимуса повреждаются, что может привести к снижению количества клеток, экспрессирующих FasL, и нарушению внутритимической селекции Т- лимфоцитов, что в последующем приведет к возникновению необратимых изменений в иммунной системе (Беляков И.М. с соавт., 1992).

В экспериментальных исследованиях показано, что воздействие ионизирующей радиации изменяет уровень синтеза медиаторов иммунитета - цитокинов (Комаровская М.Е. ссоавт., 1994; Коробко И.В. с соавт., 1996;ЖиткевичТ.И.,МурзенокП.П., 1996).

В связи с вышеизложенным была поставлена цель исследования - выявить особенности апоптоза клеток иммунной системы у лиц, подвергшихся воздействию комплекса факторов радиационной аварии, в том числе облучения в диапазоне малых доз, и определить роль цитокинов в механизме реализации этого процесса.

В связи с поставленной целью были сформулированы задачи исследования:

1. Исследовать особенности экспрессии Fas - ачтигена лимфоцитами периферической крови у ликвидаторов последствий аварии на Чернобыльской АЭС (ЛПА на ЧАЭС) с заболеваниями сердечно - сосудистой системы.

2. Определить синтез и продукцию медиаторов иммунитета - цитокинов - клетками иммунной системы в группе ЛПА на ЧАЭС.

3. Определить те же параметры у пациентов со сходной патологией, но не имевших в анамнезе воздействия факторов радиационной аварии, и у здоровых лиц.

4. Для доказательства влияния факторов аварии на ЧАЭС на изучаемые параметры сравнить данные, полученные у ЛПА на ЧАЭС, с таковыми в группе пациентов со сходной патологией и контрольной группе, а также с экспериментальными данными .

5. Исследовать корреляционные связи между параметрами цитокинового звена и апоптозом клеток иммунной системы для определения роли изучаемых медиаторов иммунитета в регуляции процессов апоптоза у ЛПА на ЧАЭС.

Научна» иовизиа. Впервые охарактеризованы особенности процессов апоптогической гибели иммунокомпетептпых клеток лиц, подвергшихся воздействию комплекса факторов

аварии на ЧАЭС (в том числе ионизирующих излучений в диапазоне малых доз). Определены изменения в цитоюшовом звене иммунитета на уровне синтеза и продукции цитокинов иммунокомпегентными клетками у ЛПА на ЧАЭС. Впервые определена роль медиаторов иммунитета - цитокинов в механизме реализации апоптоза у лиц через 10-12 лет после участия в ликвидационных работах.

Практическая значимость, Полученные результаты позволяют предложить включение определения Fas-антигена в перечень иммунологических показателей при обследовании пациентов, подвергшихся воздействию комплекса факторов аварии иа ЧАЭС (в том числе ионизирующих излучений в диапазоне малых доз) с целью выявления нарушений иммунитета для прогнозирования течения сердечно-сосудистой патологии. Выявленные изменения в цитокиновом звене иммунной системы дают возможность рекомендовать изучение цитокинового статуса этих пациентов для определения особенностей регуляции апоптотического процесса, что может явиться основанием для проведения диспансеризации и своевременного назначения терапии.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. В группе ЛПА на ЧАЭС выявлено нарушение процессов апоптоза клеток иммунной системы, сопровождающееся достоверным увеличением количества клеток, экспрессирующик маркер апоптоза - Fas-антиген, и снижением уровня Fas-лиганда, необходимого для устранения клеток, несущих Fas- антиген.

2. В группе ЛПА на ЧАЭС выявлены изменения в числе клеток спонтанно синтезирующих и продуцирующих цитокины, которые участвут в регуляции процессов апоптоза клеток иммуннрй системы, а также определены условия взаимодействия между цитокиновой и F as-системами в апоптозе клеток иммунной системы у ЛПА на ЧАЭС.

3. Закономерность событий в развитии процессов апоптоза у ЛПА на ЧАЭС и экспериментальные данные подтверждают вклад облучения в диапазоне малых доз в формирование нарушений в .иммунной системе у ликвидаторов, подвергшихся воздействию комплекса факторов радиационной аварии.

Апробация работы. Результаты исследования были доложены на заседании Санкт-Петербургского общества иммунологов (1997), обсуждались на международной конференции " Low doses of ionising radiation; biological effects and regulatory control" (Севилья, 1997), на 1-ой медико-биологической конференции молодых ученых Санкт- Петербурга (1997). Публикации. По теме диссертции опубликовано 11 научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 109 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. В диссертации приведены 14 таблиц, 9 рисунков. Список литературы

содержит 173 библиографических названия.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Для выявления количества клеток, экспрессирующих Fas-антиген (CD95+) и особенностей синтеза и продукции цитокинов у лиц, подвергшихся воздействию комплекса факторов аварии на ЧАЭС (в том числе? ионизирующих излучений в диапазоне малых доз), было проведено иммунологическое обследование 50 пациентов - участников ликвидации аварии на Чернобыльской АЭС (1 группа). К группе ликвидаторов отнесены лица, работавшие на ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС в 1986 году. В эту группу вошли мужчины в возрасте от 30 до 55 лет с клиническими проявлениями гипертонической болезни I стадии, стенокардии напряжения, вегето-сосудистой дистопии, атеросклероза аорты. Доза радиационного облучения (согласно официальным документам) составила от 5 до. 42 сГр. В качестве группы сравнения было обследовано 18 пациентов с такой же патологией, не имевших радиационного воздействия в анамнезе (И группа). В качестве контрольной группы (п=15) были обследованы здоровые лица - 15 человек (III группа). Пациенты в сравниваемых группах и доноры были идентичны по полу и возрасту. Предметом изучения явились лимфоциты периферической крови.

Определение количества Fas- антиген- экспрессирующих клеток (CD95+) проводили в

i

цельной крови на проточном цитометре EPICS XL (Coulter Corporation, USA) с использованием RD- конъюгированных моноклональных антител к CD95 (Coulter) по стандартной методике фирмы-производителя. В качестве контроля использовали RD-коныогированный IgM мыши.

Для определения количества клеток на стадиях синтеза и продукции цитокинов, а также субпопуляционного состава лимфоцитов, мононуклеары из • венозной гепаринизированной крови выделяли методом центрифугирования в градиенте плотности фиколл-верографина (р= 1,076-1,078).

Определение количества клеток, синтезирующих цитокины ( ИЛ-Iß, ФНО-а, ИФН-а, ИЛ-4, ИЛ-6) производили по методике Н. Summer, D. Abraham (1991). Для определения количества клеток с внутриклеточным содержанием цитокинов использовали сапониновый буфер.

Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови определяли в двухступенчатом комплемент - зависимом лимфоцитотоксическом тесте с использованием моноклональных антител фирмы "Медбиоспектр", выявляющих субпопуляции CD4+, CD8+, CD16+, CD20+ (стандартная методика NIH USA). Абсолютное число исследуемых клеток в 1

мм3 циркулирующей крови высчитывали на основании клинического анализа крови, взятого одновременно.

Для определения спонтанной продукции цитокинов мононуклеарами периферической крови 0,6 мл свежей гепаринизированной крови (20 МЕ/мл) смешивали с 2,4 мл среды Игла с добавлением 2 мМ глутамина и 80 мкг/мл гентамицина, таким образом, кровь разводили в 5 раз. В 96- луночный планшет для культивирования клеток в лунки каждого ряда вносили по 100 мкл среды Игла. Подготовленные образцы периферической крови тщательно перемешивали и вносили по 100 мкл во все лунки ряда. Культивирование проводили в СО2-инкубаторе в течение 24 часов, после чего осторожно отбирали супернатанты и исследовали на наличие цитокинов. Культивирование про: эдили без индукторов. Уровень цитокинов в супернатантах клеток, культивируемых в отсутствии индукторов, оценивали как "спонтанную продукцию цитокинов мононуклеарами периферической крови". Определение количества IL-lp и TNF-a в супернатантах проводили иммуноферментным методом с использованием комерческих тест-систем ТОО "Протеиновый контур" (С.-Петербург).

С целью изучения влияния ионизирующей радиации на развитие процесса апоптоза и выяснения роли цитокинов в осуществлении этого процесса была проведена серия экспериментов по облучению крови in vitro. Для решения поставленной задачи периферическую кровь, взятую у здоровых лиц, не подвергавшихся воздействию ни одного из факторов, входящих в комплекс факторов радиационной аварии (п=10), облучали на аппарате РУМ-17 ( 15 мА, 180 кВ, фокусное расстояние 70 см, мощность дозы 27,5 Р/мин) с использованием фильтров 0,5 см Си и 1,0 см Al; Облучение проводили в дозах 12,5; 25 и 50 сГр. Необлученный образец принимали за контроль. Было проведено 10 серий экспериментов по облучению периферической крови in vitro.

Через 4-6 часов после облучения в опытных и контрольных образцах определяли количество клеток, несущих Fas- антиген, а также количество клеток, синтезирующих следующие цитокины: IL-ф, TNF-a, IFN-a, IL-4, IL-6.

Для статистической обработки данных применяли критерий Вилкоксона-Манна-Уитни, используя статистичекую программу Stadia и Microsoft Excel -97 для компьютерной обработки данных. Для проведения корреляционного анализа была использована программа STATISTICA for Windows, Releas 5.0. (StatSoft, Inc.).

. Всего проведено 2718 исследований, изучен 21 параметр.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование особенностей экспрессии Fas- антигена . лимфоцитами периферической крови ЛПА на ЧАЭС.

Для выявления количества клеток, экспрессирующих Fas- антиген (CD95+) у лиц, подвергшихся воздействию комплекса факторов аварии на ЧАЭС (в том числе ионизирующих излучений в диапазоне малых доз),, было проведено иммунологическое обследование ликвидаторов аварии на Чернобыльской АЭС с заболеваниями сердечно -сосудистой системы (I группа), пациентов со сходной патологией, но не имевших в анамнезе воздействия факторов радиационной аварии (II группа) и здоровых лиц (III группа).

В результате исследования лимфоцитов периферической крови с помощью метода проточной цитометрии было выявлено, что количество Fas - антиген - экспрессирующих клеток в группе ЛПА достоверно выше, чем в контрольной группе ( 18,5 ± 1, 8% и 4,2 + 1,2% соответственно, р < 0,001). При изучении аналогичных параметров во II группе количество клеток, несущих Fas- антиген составило 11,3±1,6 %, что достоверно ниже, чем в группе ЛПА (18,5 ± 1,8%, р < 0,01), но достоверно выше, чем в контрольной группе (4,2 ± 1,2%, р < 0,01). Данные, демонстрирующие различия в количестве клеток, экспрессирующих Fas- антиген в сравниваемых группах, представлены на рисунке 1.

IM

III группа II группа I группа n ~ 11 п = 17 п = 42

Рис, 1. Экспрессия Fas-антигена (CD95) лимфоцитами периферической крови.

р < 0,01 (I - II группа), р < 0,001 (I - III группа)

Более значимое увеличение количества CD95+ клеток у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС с той же стадией развития патологии сердечно - сосудистой системы по сравнению со II группой позволило предположить аддитивный эффект факторов радиационной аварии.

Дня реализации процесса апоптоза клеток, несущих активационный маркер - Fas-антиген, необходимо взаимодействие этих клеток с клетками, несущими Fas-лиганд, либо с растворимой формой Fas-лиганда, находящейся в сыворотке крови в свободном состоянии. В периферической крови клетками, экспрессирующими Fas-лиганд, являются CD8+ и CD16+ лимфоциты (Tanaka М. et al., 1996). Циркуляция большого количества Fas-антиген-экспрессирующих клеток на периферии, возможно, объясняется нарушением экспрессии FasL периферическими клетками, такими как цитотоксические лимфоциты (CD8+) и натуральные киллеры (CD16+), или снижением их числа в периферической крови.

Известно, что CD4+ Т - клетки являются ко - стимуляторами для В - лимфоцитов. Результатом этого межклеточного взаимодействия является активация В - клеток с последующей пролиферацией и дифференцировкой в антителообразующие клетки -эффекторы. Таким образом, Т - хелперы участвуют в регуляции гуморального ответа. Взаимодействие сопровождается увеличением экспрессии Fas - антигена, опосредующего апоптоз, на поверхности В - клеток и Fas - лиганда на поверхности CD4+ Т - хелперов, что приводит к гибели В - лимфоцитов по типу апоптоза (Schattner Е., Friedman S.M., 1996). В связи с вышесказанным для определения особенностей развития апоптотических процессов нами было проведено изучение-субпопуляций CD4+, CD8+, CD 16+, CD20+ лимфоцитов периферической крови в сравниваемых, группах. Данные, полученные в результате проведения исследований, представлены в таблице 1.

Таблица 1.

_Показатели клеточного иммунитета в сравниваемых группах (М ± т)._

I группа II группа III группа

Лейкоциты #(х 103) 7,6 ± 0,2 7,4 ±0,6 7,2± 0,5

Лимфоциты % 28,4 ±1,2 "** 38,4 ± 2,4 34,4± 2,3

CD4% 27,5 ± 0,7 21 * 28,8 r 2,0 27,0 ± 1,4

CD4# 574,0 ±62,82)*** 695,0±51,4 ■ 594,0 ± 68,6

CD8% 22,9 ± 0,6 23,1 ±1,4 22,5 ± 1,2

CD8# 472,0 ± 49,0 " * 2) * 587,0 ± 47,3 526,0 ± 59,3

CD 16% 19,3 ±0,6 19,5 ±0,8 18,3 ±2,1

CD16# 376,0 ± 32,9 " ** 397,0 ±34,2 424,0 ±75,3

CD20% 17,8 ±0,7 17,4 ±0,4 18,0 ±1,4

CD20# 322,0 ±29,2"* 2) ** 426,0 ±28,8 418,0 ±58,2

' р < 0,05; ** р < 0,01, *** р < 0,001 ' по сравнению с группой III;2) по сравнению с группой II

Как видно из таблицы 1, в I группе наблюдается ряд особенностей в изучаемых параметрах клеточного иммунитета по сравнению с группами II и III.

Выявленные изменения изучаемых параметров клеточного иммунитета в группах I и II были разнонаправленными: в группе ликвидаторов (I) абсолютное количество CD8+, CD16+ и CD20+ лимфоцитов было достоверно ниже, чем в контрольной группе, тогда как в группе II имелась тенденция к увеличению этих показателей по сравнению со здоровыми лицами. Ряд показателей (абсолютное количество CD4+, CD8+ и CD20+ клеток) в группах I и II достоверно различались между собой (р < 0,05).

Учитывая то, что экспрессия Fas- антигена наблюдается преимущественно на CD4+ (Т) и CD20+ (В) лимфоцитах, представлялось интересным сравнить долю Fas- антиген-экспрессирующих клеток в общем количестве CD4+ и CD20+ лимфоцитов в обследуемых группах. Данные проведенных исследований представлены на рисунке 2.

Группа сравнения

165 ,.„ 127

Л ПА на ЧАЭС

731

994

Контрольная группа

970

D Fss" антиген-экспрессирующие клетки ■ CD4+ и С020+лимфоциты

Рис.2 Доля Fas-антиген - экспрессируклцих клеток в общем количестве CD4+ и CD20+ лимфоцитов.

В группе здоровых лиц доля CD95+ клеток составляет 1: 24 общего количества CD4+ и CD20+ лимфоцитов, тогда как в группе II это соотношение составляет 1: 8, а в группе ЛПА на ЧАЭС (I группа) каждый пятый лимфоцит с дифференцировочным антигеном CD4+ или

CD20+ несет Fas-антиген.

Таким образом, в периферической крови лиц, подвергшихся воздействию комплекса факторов радиационной аварии (КФРА), выявляется повышенное число лимфоцитов, экспрессирующих Fas-антиген и готовых связаться с FasL. С другой стороны, количество клеток, экспрессирующих Fas - лиганд (CD8+, CD16+) в группе I самое низкое из всех сравниваемых групп. Это несоответствие, по - видимому, обусловливает замедленное развитие апоптоза у пациентов данной группы.

Выявленные диссоциации в системе Fas - FasL у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС позволяют предположить, что клетки, несущие маркер апоптоза CD95+ и являющиеся потенциально аутореактивными не подвергаются апоптозу, а циркулируют в периферической крови, что позволяет отнести ликвидаторов аварии на ЧАЭС к пациентам группы риска по возникновению онкологически ; и аутоиммунных заболеваний.

Изучение синтеза и продукции цитокинов клетками иммунной системы в группе ЛПА на ЧАЭС.

Одной из важных функций иммунокомпетентных клеток является способность вырабатывать медиаторы иммунного ответа - цитокины - факторы, активирующие пролиферацию и дифференцировку клеток организма (Кетлинский С. А., Калинина Н. М., 1998).

Рядом исследователей показано, что воздействие ионизирующей радиации изменяет уровень синтеза иммунокомпетентными клетками медиаторов межклеточного взаимодействия - цитокинов (Комаровская М.Е. с соавт., 1994; Коробко И.В. с соавт., 1996; Житкевич Т.И., Мурзенок П.П., 1996). Цитокины представлены несколькими семействами различных регуляторов, из которых нами были изучены интерлейкины (1L - ip, IL - 4, IL - 6); фактор некроза опухоли (TNF- а); интерферон (IFN - а).

Были проведены исследования различных этапов синтеза и продукции цитокинов клетками иммунной системы, позволяющие определить характер изменений в цитокиновом звене иммунитета в ранее описанных группах и выяснить степень влияния КФРА на клетки иммунной системы в I группе (ЛПА на ЧАЭС).

Изучение особенностей синтеза и продукции интерлейкина -1(3 (IL-1 f?1. При изучении синтеза и продукции IL-ip мононуклеарами периферической крови у пациентов обследуемых групп были выявлены особенности синтеза этого цитокина по сравнению с группой здоровых лиц. Данные представлены в таблице 2.

Таблица 2.

Число клеток (%), синтезирующих 1Ь-1Р, и уровень спонтанной продукции цитокина _(пг/мл) в сравниваемых группах (М ± т)._

I группа II группа III группа

п = 42 п= 14 п= 11

IL-ip *

внутриклеточная 6,27 ± 1,04 "** 10,50 ± 1,28 3) *** 1,47 ±0,33

форма (количество

клеток, %)

IL-ip спонтанная продукция (пг/мл) 1000 ±295 "* 1080 ± 136 3)* 516 ± 287

* р <0,05; **р <0,01; *** р <0,001

" по сравнению с группой III;21 по сравнению с группой II;3' по сравнению с группой III.

Как видно из таблицы 2, в группе ликвидаторов (I группа) наблюдается увеличение количества клеток, спонтанно синтезирующих IL-ip по сравнению с контрольной группой (III группа). У пациентов II группы число клеток, синтезирующих'данный цитокин, значительно выше, чем в контрольной группе и-у ликвидаторов. Также было выявлено, что уровень спонтанной продукции IL-ip у ликвидаторов увеличен по сравнению со здоровыми людьми, в группе II также выявлено увеличение уровня спонтанной продукции данного цитокина по сравнению с группой здоровых лиц.

Таким образом, у лиц, подвергшихся воздействию ионизирующей радиации в результате аварии на ЧАЭС, уровень синтеза IL-1 [} снижен по сравнению с группой лиц с той же патологией, но не имевших в анамнезе воздействия КФРА, что позволяет предположить различные механизмы формирования сердечно-сосудистой патологии у пациентов сравниваемых групп.

Известно, что IL-ip вовлечен в апоптоз клеток, начиная с момента секреции ICE (interleukin - converting ensime). Выраженная экспрессия ICE заканчивается апоптозом Т клеток (Mundy N.A. etal., 1995). Далее ICE освобождает биоактивный IL-ip из про-IL-ip, а IL-ip опосредует апоптотический сигнал через IL-ipRII (Vaux D.L. et al., 1994). Таким образом, исходя из полученных данных, можно предположить, что в группе ЛПА на ЧАЭС и в группе лиц, имеющих сходную с ликвидаторами патологию, но не подвергавшихся воздействию факторов аварии (группа II) экспрессия ICE более выражена, чем в контрольной группе. По данным литературы известно, что существует два рецептора IL-ip: IL-ip RI и IL-lp RII (Rodiguez C. et al., 1996). Связывание данного цитокина с IL-lp RI типа сопровождается увеличением числа клеток, выживающих после сублетального облучения.

Другой рецептор IL-ip - IL-1¡5 RII, предотвращая связывание этого цитокина с IL-ipRI, блокирует активность IL-lp. Связывание IL-ip с IL-ip RII сопровождается апоптозом клеток. Исходя из этого, можно предположить, что в группах I и II связывание IL-ip с его рецепторами идет по-разному: в группе I высокий уровень синтеза данного цитокина сопровождается связыванием его с рецептором II типа, что обеспечивает наличие большого количества CD95+ клеток. В группе II происходит связывание IL-lp с IL-lp RI, что способствует пролиферации клеток и обеспечивает относительно низкий уровень клеток, экспрессирующих Fas- антиген. 1

Изучение особенностей синтеза и продукции фактора некроза опухоли- а (TNF-аЛ. В результате изучения синтеза и продукции клетками крови TNF-a выявлены изменения на различных стадиях синтеза данного цитокига в группе ликвидаторов по сравнению с группами II и III. Данные представлены в табли. ,е 3.

Таблица 3.

Число клеток (%), синтезирующих TNF-a, и уровень спонтанной продукции цитокина

(пг/мл) у пациентов различных групп (М ± т)..

I группа п = 42 II группа п= 14 III группа п= 11

•ШР-а внутриклеточная форма (количество клеток, %) 8,9 ±1,1 "*** Щ 4,4+0,3 3'*** 1,6 ±0,5

ТОТ-а поверхностная форма (количество клеток, %) 7,4 + 0,6"** я**. 4,8 ± 0,7 4,3 ±1,1

ЮТ-а спонтанная продукция (пг/мл) 386,0 ± 85,7 "* 126,0 + 66,3 105,0 ±59,3

* р < 0,05; ** р < 0,01; *** р < 0,001;

'' по сравнению с группой III;2) по сравнению с группой II;3' по сравнению с группой III.

Как' видно из таблицы 3, в группе ликвидаторов (I) отмечается достоверное увеличение количества клеток с внутриклеточной и поверхностной формами ЮТ-а. Уровень спонтанной продукции Т№-а в группе I также был достоверно выше, чем в группе доноров (III) и пациентов II группы. При этом в группе II наблюдалось увеличение количества клеток, синтезирующих Т№-а, по сравнению с группой здоровых доноров, но количество клеток с поверхностной формой данного цитокина не отличалось от такового в контрольной группе. Более выраженные нарушения, выявленные в группе ЛПА на ЧАЭС, подтверждают данные литературы о том, что облучение в малых дозах значительно

усиливает продукцию ТОТ-о. (Комаровская М. Е. с соавт., 1995), который способствует усилению развития апонтотических процессов в иммунокомпетентных клетках (Ярилин А.А.,1998; УагРа1отееу Е.Е.а а1., 1996). Показано, что ФИО -а индуцирует экспрессию ИЛ-1р Я II на поверхности клеток (Ог1апс1о в. Ы а1., 1997); Можно предположить, что у ЛПА на ЧАЭС взаимодействие между 11,-1 и ТОР идет по пути блокирования связывания 11,-1 с 1Ь-1р11 I, а высокий уровень Т№-а индуцирует усиление экспрессии 11,-1 р ИII на поверхности клеток, что снижает уровень выживания клеток и опосредует апоптотический процесс. Таким образом, наблюдаемое увеличение уровня экспрессии Раз-антигена в группе ликвидаторов аварии на Чернобыльской АЭС, возможно, связано с увеличением продукции цитокина, опосредующего апоптоз - ЮТ-а. При этом наблюдается синергичное действие обоих цитокинов - 11,-1(3 и ЮТ-а - в опосредовании апоптотических процессов у ликвидаторов, а отсутствие повышения продукции ЮТ-а у лиц Н-ой группы объясняет более низкий уровень количества С095+ клеток в данной группе по сравнению с ЛПА. Кроме того, усиление синтеза ТЫИ-а способствует формированию сердечно-сосудистой патологии у пациентов I и II групп. Известно, что ЮТ-а вызывает изменения эндотелиальных клеток, что, за счет активации адгезионных молекул, приводит к множественной сосудистой патологии. Также ЮТ-сс влияет на процессы коагуляции, способствующие тромбозу (Калинина Н.М., 1996). Исходя из этих данных, можно предположить, что в группе ЛПА на ЧАЭС процесс развития сердечно-сосудистой патологии более выражен за счет усиленного синтеза данного цитокина.

Изучение особенностей синтеза интерферона - а (ШЫ- а). При исследовании синтеза И^К- а, как и при изучении ТОТ-а и 11,-1 р, в группе ликвидаторов наблюдалось достоверное увеличение количества клеток, синтезирующих ¡РЫ-а и клеток, экслрессирующих данный цитокин на поверхности. Подобные изменения наблюдались и в группе лиц с сердечнососудистой патологией (таблица 4).

Таблица 4.

Число клеток (%), синтезирующих 1РЫ -а у пациентов различных групп (М±т).

I группа п = 43 II группа п= 14 III группа п=11

ШМ-а внутриклеточная форма (количество клеток, %) 3,2 ±0,5* 3,5 ± 0,6* 1,7 ±0,4

№N-0 поверхностная форма (количество клеток, %) 5,3 ±0,5** 5,1 ± 0,5 ** 3,1 ±0,9

*р < 0,05; **р < 0,01 по сравнению с группой III

Увеличение числа клеток, синтезирующих 1РМ-а, в группах пациентов с сердечнососудистой патологией (как ликвидаторов, так и лиц, не подвергавшихся воздействию КФРА) позволяет предположить участие данного цитокина в формировании патологии у пациентов описанных групп, а также его роль в реализации процессов апоптоза. Это предположение подтверждают данные литературы о том, что ШИ-а способствует усилению синтеза рецепторов ЮТ-а { Кетлинский с соавт., 1992).

Изучение особенностей синтеза интерлейкина - 4 (1Ь-4). В результате проведенных нами исследований отмечались изменения синтеза 11.-4 в группе ликвидаторов. Данные представлены в таблице 5.

Таблица 5.

Число клеток (%), синтезирующих IL-4, у пациентов различных групп (М ± т).

I группа п = 40 11 группа п= 14 III группа п=11

1Ь - 4 внутриклеточная форма (количество клеток, %) 18,30 ±1,93"** *** 3,28 ± 0,98 6,91 ± 1,62

11,-4 поверхностная форма (количество клеток, %) 1,62 ±0,19 1,30 ±0,20 1,43 ±0,18

** р < 0,01; *** р < 0,001;11 по сравнению с группой III;21 по сравнению с группой II

Как видно из таблицы в группе ликвидаторов было отмечено достоверное увеличение синтеза IL - 4 по сравнению с группами II и III (р< 0,001; р< 0,01 соответственно). IL - 4 способствует переключению иммунного ответа с ТН1 клона на ТН2 и в ряде случаев опосредует возникновение различных1 аллергических заболеваний (Hargreaves R.G. et al., 1997). Однако увеличения количества клеток с поверхностной формой данного цитокина в сравниваемых группах обнаружено не было. У пациентов II группы значимых изменений количества клеток с внутриклеточной и поверхностной формами IL - 4, по сравнению с группой здоровых доноров, не выявлено. В связи с выявленными изменениями в синтезе IL-4 у обследованных нами пациентов с сердечно-сосудистой патологией можно предположить, что пациенты I группы являются группой риска по возникновению у них аллергических заболеваний. Известно, что IL-4 способствует усилению пролиферации миоцитов (Natarajan R. et al., 1997). Тот факт, что при исследовании клеток с поверхностной формой данного цитокина их увеличения обнаружено не было, можно отнести к числу компенсаторных механизмов, уменьшающих риск развития сердечно- сосудистой патологии у обследованных лиц.

Изучение особенностей синтеза интерлейкияа- 6 01,-6'). Нами были проанализированы особенности синтеза 1Ь-6 у пациентов различных групп. Данные представлены в таблице 6.

Таблица 6.

Число клеток (%), синтезирующих IL-6, у пациентов различных групп (М ± т).

I группа п = 43 И группа п= 14 III группа п = 11

1Ь-6 внутриклеточная форма (количество клеток, %) 13,10 ± 1,21 2,08 + 0,62 1)2) 11,20 ± 1,62

11,-6 поверхностная форма (количество клеток, %) 1,40 + 0,17 2,89 ± 0,49 1,59 + 0,39

*** р < 0,001;1)2) по сравнению с группами I и III, соответственно.

При изучении синтеза и продукции IL-6 у ликвидаторов не отмечалось достоверных изменений в сравнении с контрольной группой. Однако, во II группе наблюдалось значительное снижение числа клеток с внутриклеточной формой данного цитокина по сравнению с I и III группами. Снижение количества клеток, синтезирующих IL-б в группе II, может быть объяснено компенсаторной реакцией иммунной системы, ингибирующей действие IL-6, который, как известно, способствует снижению сократительной способности миокарда. Очевидно, в группе ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС данный механизм не задействован. Возможно, снижение количества клеток, синтезирующих IL-4 и IL-6, компенсирует усиление синтеза IL-ip, который также способствует снижению сократительной способности миоцитов (Natarajan R. et al., 1997).

Таким образом, в результате проведенных исследований было выявлено, что под воздействием комплекса факторов аварии на ЧАЭС, в том числе ионизирующей радиации, происходит изменение количества клеток, спонтанно синтезирующих и продуцирующих некоторые цитокины.

Роль нарушений в цнтокиновом звене иммунитета в регуляции процессов апоптоза.

Проанализировав полученные данные в группе ЛПА на ЧАЭС, можно утверждать, что отдаленные последствия воздействия факторов радиационной аварии играют определенную роль в нарушениях функций клеток иммунной системы, что выражается значительным увеличением количества клеток, несущих на поверхности маркер апоптоза - Fas - антиген, и

силением синтеза и продукции цитокинов лимфоцитами периферической крови этих [ациентов по сравнению с аналогичными показателями у лиц контрольной группы. Одной из адач исследования явилось определение характера связи между нарушениями процессов .поптоза и изменениями в синтезе и продукции цитокинов. Для этого нами были изучены :орреляционные связи между этими показателями.

При анализе связи между количеством клеток, несущих на поверхности Fas- антиген,' i количеством клеток, находящихся на стадиях синтеза и продукции цитокинов, оценивали только достоверную корреляционную связь (р< 0,05). Была выявлена прямая умеренная сорреляционная зависимость между количеством CD95+ клеток и количеством клеток, :интезирующих TNF - а (г = 0,42), между количеством CD95+ клеток и количеством клеток ; поверхностной формой TNF - а (г = 0,32). Та' же наблюдалась, у меренная корреляционная ;вязь между уровнем экспрессии Fas- антигена и спонтанной продукцией IL-lß (г = 0,55). Учитывая, что в контрольной группе максимальное значение показателя CD95+ составило 15%, нам представилось целесообразным разделить группу ЛПА на две подгруппы: 1- ая юдгруппа - с количеством CD95+ клеток < 15%, что соответствует спонтанному уровню экспрессии Fas- антигена, и 2-ая подгруппа - с количеством CD95+ клеток >15%. В результате анализа вьивлено, что в 1-ой подгруппе значения коэффициентов корреляции увеличились между количеством CD95+ клеток и количеством клеток, синтезирующих TNF ■ а (с г = 0,42 до г = 0,49), между количеством CD95+ клеток и количеством клеток с поверхностной формой TNF - а (с г = 0,32 до г = 0,66). Наблюдаемая умеренная корреляционная связь между уровнем экспрессии Fas- антигена и спонтанной продукцией IL-lß (г = 0,55) стала высокой (г = 0,73). При этом, во второй подгруппе достоверных (р< 0,05) корреляционных связей между вышеописанными показателями не наблюдалось.

Таким образом, можно предположить, что при появлении в циркуляции "порогового" числа клеток, несущих Fas- антиген (в нашем" исследовании более 15%), регуляторная роль цитокинов в осуществлении процесса апоптоза становится минимальной. В этом случае процесс апоптоза развивается по Fas- пути и зависит только от уровня экспрессии Fas-лиганда периферическими клетками.

С другой стороны, при условии, когда количество CD95+ клеток не превышает 15%, развитие апоптотического процесса находится под влиянием таких цитокинов, как TNF- а и IL- lß, которые действуют синергично. Подтверждением синергичности их действия является выявленная прямая взаимосвязь между количеством клеток, синтезирующих IL-lß и TNF-a (г = 0,60), а также между количеством клеток с поверхностной формой TNF-а и IL-lß (г = 0,78). При этом количество клеток, несущих на поверхности TNF-a, зависит от количества циркулирующего IL-lß (г = 0,55).

В ходе математической обработки результатов исследования была выявлена прямая

корреляционная связь между количеством клеток, синтезирующих IL-lß и IFN-a (г = 0,78), а также между количеством клеток с поверхностной формой TNF-a и IFN-a (г = 0,50). Выявленные корреляционные связи позволяют предположить опосредованнре влияние'IFN-a на развитие апоптотического процесса у данной группы пациентов через взаимодействие с TNF-a и IL-lß.

Для доказательства того, что полученные данные о взаимосвязи между процессами апоптоза и нарушениями в цитокиновой сети являются результатом действия КФРА, группа лиц с заболеваниями сердечно- сосудистой системы, не имевшими контакта с факторами радиационной аварии (группа II), бьща разделена на две подгруппы по аналогичному принципу. В этих подгруппах был проведен корреляционный анализ.

В результате проведенного корреляционного анализа В первой подгруппе была выявлена достоверная прямая высокая корреляционная связь между уровнем экспрессии Fas-антигена и спонтанной продукцией IL-lß (г = 0,74): Во второй подгруппе наблюдалась достоверная прямая высокая корреляционная связь между уровнем экспрессии Fas- антигена и количеством клеток, синтезирующих TNF - а (г = 0,93), a также между количеством CD95+ клеток и количеством клеток с поверхностной формой TNF - а (г = 0,94). При сравнении данных, полученных в группе ЛПА, с данными группы II, были выявлены сходные механизмы реализации апоптоза в первой подгруппе ЛПА (количество CD95+ клеток <15%) и во второй подгруппе лиц с сердечно-сосудистой патологией - не ликвидаторов (количество CD95+ клеток >15%). Это наблюдение позволяет говорить о включении TNF - а-сигнального пути цитокиновой регуляции на самом раннем этапе процессов апоптоза у ЛПА на ЧАЭС (ввиду неэфективности Fas-FasL элиминации клеток из-за снижения FasL-несущих клеток). У лиц с сердечно-сосудистой патологией (не ликвидаторов), ввиду эффективности Fas-FasL системы, подключение TNF - а- сигнального пути происходит по достижении определенного уровня экспрессии Fas- антигена.

Полученные наблюдения, ввиду малочисленности пациентов каждой из подгрупп (nl= 9; п2= 5), не позволяют окончательно подтвердить механизм процессов апоптоза во II группе, но зависимость апоптотических процессов от синтеза и продукции цитокинов, а также подключение TNF- сигнального пути на первом этапе реализации апоптоза в группе ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС не вызывает сомнений.

В результате проведенных в эксперименте исследований in vitro было выявлено увеличение количества клеток, экспрессирующих Fas-антиген, после облучения в каждой из указанных доз, что сопровождалось увеличением количества клеток с поверхностной формой TNF-a. Данные представлены в таблице 7.

Таблица 7.

Количества клеток, экспрессирующих Раз-антиген, и клеток с поверхностной формой _ ТИР-а до и посте облучения (%) (М+т)._■_

Контрольная проба Облучение в дозе 12,5 сГр Облучение в дозе 25 сГр Облучение в дозе 50 сГр

Количестаокгаггок, экспрессирующих Fas-ялжш(%) 4,17±1,20 31,40±6,79*** 18,0±3,18*** ■ 22,014,37***

Количество клеток с иовфхносшой формой rNF-cc-(%) 4,30±1,10 ¡ 7,78±1,47* б,97±2,01* б,75±1,25*

*р<0,05; *** р<0,001 (по сравнению с контрольной пробой)

Выявленная достоверная высокая корреляционная связь между количеством CD95+ клеток и количеством клеток с поверхностной формой TNF-a (в контрольных образцах коэффициент корреляции составил 0,56; при облучении в дозе 12,5 сГр - г= 0,85; при эблучении в дозе 25 сГр - г=0,75) подтверждает предположение об участии TNF-« в процессе шоптоза лимфоцитов периферической крови после облучения. Таким образом, при эблучении лимфоцитов малыми дозами ионизирующей радиации наблюдается увеличение количества клеток, экспрессирующих на поверхности маркеры апоптоза - Fas-антиген и FNF-a. Это наблюдение дает возможность предположить, что в результате повреждающего зоздействия ионизирующей радиации происходит активация двух сигнальных путей шоптоза - Fas и TNF. Не вызывает сомнения тот факт, что изменения, индуцированные облучением in vivo, носят более глубокий характер, и экстраполяция эффектов, выявленных з системе in vitro, на организм в целом неправомочна. Тем не менее, полученные нами в жсперименте данные могут быть полезными для оценки событий, происходящих в *ммунной системе пациентов, подвергшихся воздействию облучения в малых дозах в зезультате аварии на Чернобыльской АЭС и для доказательства влияния ионизирующей эадиации на организм этих пациентов.

Выявленные особенности апоптоза клеток иммунной системы и роли в этом процессе медиаторов межклеточного взаимодействия - цитокинов - способствуют пониманию гзменений, происходящих в иммунной системе лиц, подвергшихся воздействию комплекса факторов радиационной аварии, а также позволяют прогнозировать возникновение и <арактер течения патологических процессов у этих пациентов.

ВЫВОДЫ

1. В группе участников ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС выявлено нарушение процессов апоптоза клеток иммунной системы, сопровождающееся достоверным увеличением количества клеток, экспрессирующих маркер апоптоза - Fas-антиген - по сравнению с группой здоровых лиц.

2. У участников ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС отмечаются нарушения в системе Fas- антиген - Fas- лиганд, проявляющиеся в снижении абсолютного количества CD8+ и CD 16+ лимфоцитов, экспрессирующих Fas- лиганд, необходимый для устранения клеток, несущих Fas- антиген.

3. У участников ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС выявлено увеличение количества клеток спонтанно синтезирующих и продуцирующих цитокины (IL-lß, IL-4, TNF- a, IFN- а).

4. У лиц с сердечно- сосудистой патологией, не подвергавшихся воздействию комплекса факторов аварии та ЧАЭС, в том числе облучению в диапазоне малых доз, элиминация клеток идет по Fas-пути, а при достижении определенного уровня экспрессии Fas-антигена, происходит подключение TNF - а- сигнального пути.

5. В группе участников ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС цитокиновая регуляция процесса апоптоза осуществляется путем включения TNF- а-сигаального пути, что подтверждается прямой корреляционной связью между количеством клеток, экспрессирующих Fas- антиген и синтезирующих TNF- a, a также между количеством клеток, экспрессирующих Fas- антиген и лимфоцитов с поверхностной формой TNF-а. .

6. Выявленное в эксперименте in vitro увеличение количества клеток, экспрессирующих Fas- антиген, включение TNF-a •> сигнального пути в качестве дополнительного механизма реализации апоптоза подтверждает вклад воздействия малых доз ионизирующей радиации в механизмы апоптоза клеток иммунной системы у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС.

Практические рекомендации

1. Определение экспрессии Fas - антигена и изучение параметров клеточного иммунитета у пациентов, подвергшихся воздействию комплекса факторов аварии на ЧАЭС (в том числе ионизирующих излучений в диапазоне малых доз) должно быть включено в мониторинг обследования этих пациентов. Данные о характере развития апоптоза позволят терапевтам прогнозировать течение соматической патологии.

2. Участие цитокинов в регуляции апоптотического процесса позволяет рекомендовать включение исследования IL-lß, IL-4, IL-6, TNF-a, IFN-a в мониторинг ликвидаторов аварии на ЧАЭС в качестве критерия оценки тяжести течения сердечно-сосудистой патологии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Особенности клеточного и цитокинового звеньев иммунитета у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС// Радиоактивные отходы. Хранение, транспортировка, переработка Влияние на человека и окружающую среду: Материалы 'международной конференции. - Санкт- Петербург, 1996. - С. 27 (в соавт. с Н.М. Калининой и др.).

2. Методологические подходы к изучению иммунитета с различными видами патологии// Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения: Материалы конференции. - Санкт-Петербург, 1997. - С. 25 (в соавт. с Н.М. Калининой и др.).

3. Изменение экспрессии маркеров апоптоза и особенности продукции цитокинов у ЛПА на ЧАЭС и в условиях эксперимента// Факторы гуморального и клеточного иммунитета при различ ных физиологи ческих и патоло гических состояниях: Материалы 13 Российской конференции. - Челябинск, 1997. - С.46 (в соавт. с A.M. Никифоровым и др.).

4. Изменение уровня экспрессии FAS - антигена при воздействии ионизирующих излучений в малых дозах// Радиобиология, радиоэкология, радиационная безопасность: Материалы 3 съезда по радиационным исследованиям. - Москва, 1997. - С.42-43(в соавт. с A.M. Никифоровым и др.).

5. Изменение синтеза и продукции цитокинов в результате воздействия ионизирующей радиации в малых дозах// Радиобиология, радиоэкология, радиационная безопасность: Материалы 3 съезда по радиационным исследованиям. - Москва, 1997. - С.2б-27(в соавт. с Н.М. Калиннной и др.).

6. Изменение уровня экспрессии FAS - антигена, синтеза и продукции цитокинов в результате воздействия ионизирующей радиации в малых дозах// Материалы 1-ой медико-биологической конферен ции молодых ученых. - Санкт- Петербург, 1997. -С.76 (в соавт. с Н.М. Калининой и др.).

7. Changing of expression level of Fas antigen (CD95), cytokines syntesis and production after irradiation in low doses// International conference " Low doses of ionising radiation: biological effects and regulatory control". - Seville, 1997. - P. 376-379 (в соавт. с Н.М. Калининой и др.).

8. Fas-antigen (CD95), cytokines syntesis and production after irradiation in low doses//2-nd intemati onal conference: Long term health consequences of the Chernobyl disaster". - Kiev, 1998. -C.247 (в соавт. с Н.М. Калининой и др.).

9. Изменение количества апоптотических клеток, синтеза и продукции цитокинов в результате воздействия малых доз ионизирующих излучений// Военно-морской медицинский журнал, -1998, № 3. - С.31-34 (в соавт. с A.M. Никифоровым и др.).

10. Molecular approaches to retrospective dosimetry. Flow cytometry study of apoptosis// International Conference on Biodosimetry and 5th Inter-national Sympo-sium on ESR Dosimetry and Applications. - Obninsk, 1998. - P.41 (в соавт. с Н.М. Калининой и др.).

11. Изменение количественных характеристик цитокиновой сети у лиц, подвергшихся воздействию ионизирующей радиации в малых дозах// International Conference "AIDS, Cancer and Related Problems". - St-Petersburg, 1998. - P.56 (в соавт. с Н.М. Калининой и ДР-)-

ВЫВОДЫ

1. В группе участников ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС выявлено нарушение процессов апоптоза клеток иммунной системы, сопровождающееся достоверным увеличением количества клеток, экспрессирующих маркер апоптоза - Fas- антиген, по сравнению с группой здоровых лиц.

2. У участников ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС отмечаются нарушения в системе Fas- антиген - Fas- лиганд, проявляющиеся в снижении абсолютного количества CD8+- и CD16+-лимфоцитов, экспрессирующих Fas- лиганд, необходимый для устранения клеток, несущих Fas- антиген.

3. У участников ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС выявлено увеличение количества клеток спонтанно синтезирующих и продуцирующих цитокины (IL-lp, IL-4, TNF- a, IFN- а).

4. У лиц с сердечно- сосудистой патологией, не подвергавшихся воздействию комплекса факторов аварии на ЧАЭС, в том числе аварийному облучению в диапазоне малых доз, элиминация клеток идет по Fas-пути, а при достижении определенного уровня экспрессии Fas-антигена, происходит подключение TNF - а- сигнального пути.

5. В группе участников ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС цитокиновая регуляция процесса апоптоза осуществляется путем включения TNF- а- сигнального пути, что подтверждается прямой корреляционной связью между . количеством клеток, экспрессирующих Fas- антиген и количеством клеток, синтезирующих TNF- а, а также между количеством Fas + клеток и количеством клеток с поверхностной формой TNF- ос.

89

6. Увеличение количества клеток, экспрессирующих Fas-антиген, а также включение TNF- а- сигнального пути в качестве дополнительного механизма для реализации апоптоза в эксперименте in vitro подтверждает повреждающее воздействие ионизирующей радиации в диапазоне малых доз.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Определение экспрессии Fas-антигена и изучение параметров клеточного иммунитета у пациентов, подвергшихся воздействию комплекса факторов аварии на ЧАЭС (в том числе ионизирующих излучений в диапазоне малых доз) должно быть включено в мониторинг обследования этих пациентов. Данные о характере развития апоптоза позволят терапевтам прогнозировать течение соматической патологии.

2. Участие цитокинов в регуляции апоптотического процесса позволяет рекомендовать включение исследования IL-lp, IL-4, IL-6, TNF-a, IFN-a в мониторинг ликвидаторов аварии на ЧАЭС в качестве критерия оценки тяжести течения сердечно-сосудистой патологии.

1. Барышников А.Ю., Заботина Т.Н., Седяхина Н.П., и соавт. Коэкспрессия антигена CD34 ранних гемопоэтических предшественников и антигена FAS/ АРО-1 (CD95), опосредующего апоптоз// Эксперим. онкол. 1994. -Т.16. - С.343-347.

2. Глузман Д.Ф., Симонэ M.-JL, Мутэ А., Пинчук Л.Б. Лейкозы, индуцированные излучением// Эксперим. онкол. 1994. - Т.26. - С.83-95.

3. Житкевич Т.Н., Мурзенок П.П. Функциональное состояние иммунокомпетентных клеток у животных в разные сроки после хронического облучения и тепла//Радиац. биол. Радиоэкол. 1996. - Т.36. -С. 338-343.

4. Калинина Н.М. Роль цитокинов в иммунопатогенезе и клинических проявлениях ВИЧ- инфекции. Автореф. дисс. .докт. мед. наук. СПб. -1995.- 19с.

5. Кетлинский С.А., Симбирцев А.С., ВоробьевА.А.Эндогенные иммуномодуляторы. СПб.: Медицина, 1992. - 350с.

6. Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Иммунология для врача. СПб.: Гиппократ, 1998. - 155с.

7. Комаровская М.Е., Дрык С.И., Кривенко С.И., Карканица Я.В. Влияние рентгеновского облучения на продукцию ИЛ-6 и ФНО-а мононуклеарами периферической крови//Радиобиология. 1992. - Т.ЗЗ. - С.88-91.

8. Ланг Н.Р. Стимуляция лимфоцитов. М.: Медицина, 1976. - 288с.

9. Москалев Ю. И., Стрельцова В. Н. Отдаленные последствия радиационного поражения. Неопухолевые формы// Итоги науки и техники. Радиац. Биол, - Т.6. - М., 1987. - 214с.

10. Москалева Е.Ю., Федоров Н.А., Кизенко О.А., Караулов А.В. Повреждения ДНК лимфоцитов и иммунодефицитные состояния//Вестник РАМН. 1993. - №4. - С. 12-17.

11. Никонова М.Ф., Буланова Е.Г., Станислав M.JI. и соавт. Различная готовность к развитию апоптоза активированных Т- лимфоцитов в норме и при системной красной волчанке//Иммунология. 1997. - №4. - С.21-24.

12. Н.Новожилова А.П., Плужников Н.Н., Новиков B.C. Механизмы клеточной смерти : проблемы и перспективы// Программированная клеточная гибель. Под ред. В. С. Новикова. СПб.: Наука, 1996. - С.9-29.

13. Певницкий JI.A. Программированная гибель клеток и апоптоз: значение для развития и функционирования иммунной системы//Вестник РАМН. -1996. №6. - С.43-51.

14. Программированная клеточная гибель. Под ред. B.C. Новикова. СПб.: Наука, 1996. - 276с.

15. Радиация и иммунитет человека. Под ред. С.В. Комиссаренко и К.П. Зак. -Киев, 1994. 195с.

16. Семилетова Т.В. Иммунный статус Т- лимфоцитов селезенки крыс после хронического облучения малыми дозами//Гор. научн. конф. мол. ученых,1. Пущино, 1996.-С.81.

17. Ярилин А.А. Действие ионизирующей радиации на лимфоциты (повреждающий и активирующий эффекты)// Иммунология. 1988. - №5. -С.5-12.

18. Ярилин А.А., Мирошниченко И.В., Шичкин В.П. Иммунологические функции тимуса//Итоги науки и техники. Серия "Иммунология". 1990. -Т.23. - 260с.

19. Ярилин А. А. Иммунологические нарушения у пострадавших от последствий Чернобыльской аварии и анализ их природы//Последствия Чернобыльской катастрофы: Здоровье человека. Центр Экологической политики России. М., 1996. - С.68-95.

20. Ярилин А. А. Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном организме//Патол. физиол. экспер. терапия. 1998. - №2. - С.38-48.

21. Abend М., Rheen A., Gilberts К.- P. et al. Correlation of micronucleus and apoptosis assay with reproductive cell death//Int. J. Radiat. Biol. 1995. -Vol.67. - P.315-326.

22. Adachi J. IL-2 rescues in vitro lymphocyte apoptosis in patients with HIV infection: Correlation with its ability to block culture induced down-modulation of Bcl-2//J. Immunol. 1996. - Vol.157. - P.4184-4193.

23. Akbar A.N., Salmon M. Cellular environments and apoptosis: tissue microenvironments control activated T cell death//Immunol. Today. - 1997. -Vol.18. -P.72-76.

24. Alderson M.R., Tough T.W., Davis S.T. et al. Fas ligand mediates activation-induced cell death in human T- lymphocytes//J. Experim. Med. 1995. -Vol.181. -P.71-77.

25. Alnemri E.S., Fernandes T.F., Haldar S. et al. Invlovement of BCL-2 in glucocorticoid- induced apoptosis of human pre- B- leucemias//Cancer Res.1992. -Vol.52. -P.491-495.

26. Ameisen J.C. Programmed cell death ( apoptosis) and AIDS// AIDS Res. Hum. Retroviruses. 1994. - Vol.10, Suppl.l. - P.S3-5.

27. Aragane J., Kulms D., Metze D. et al. Ultraviolet light induces apoptosis via direct activation of CD95 (Fas/Apo-1) and independently of its ligand CD95L// J. Cell Biol. 1998. - Vol.140. - P.171-182.

28. Armant M., Delespess G., Sarfati M. IL-2 and IL-7, but not IL-12 protectnatural killers cells from death by apoptosis and up- regulate bcl-2 expression//Immunol. 1995. - Vol.85. - P.331-337.

29. Barr P.J., Tomey L.D. Apoptosis and its role in human disease//Biotech. -1994. Vol.12.-P.487-493.

30. Bellgrau D., Gold D., Selawry H. et al. A role for CD95 ligand in preventing graft rejection//Nature. 1995. - Vol.377. - P.630-635.

31. Blaise D., Olive D., Hoppa A.M. et al. Hematologic and immunologic effect of the systemic administration of recombinant IL-2 after autologus bone marrow transplantation//Blood. 1990. - Vol.76. - P. 1092-1097.

32. Boyum A. Separation of leukocytes from blood and bone morrow//Scand. S. Clin. Lab. Investig. 1968. - V.21. - Suppl.97. - P. 19

33. Bracey T.S., Miller J.C., Preece A., Paraskeva C. Gamma- radiation- induced apoptosis in human colorectal adenoma and carcinoma cell lines can occur in the absence of wild type p53//Oncogene. 1995. - Vol.10. - Р.2391/

34. Chaouchi N., Wallon C., Taieb J. et al. Interferon-alpha-mediated prevention of in vitro apoptosis of chronic lymphocytic leucemia В cells: role of bcl-2 and c-myc// Clin. Imunol. Imunopath. 1994. - Vol.73. - P. 197-204.

35. Chauhan D., Kharbanda S., Ogata A. et al. Interleukin- 6 inhibits Fas-induced apoptosis and stress activated protein kinase activation in multiple myeloma cells//Blood. - 1997. - Vol.89. - P.227-234.

36. Clerici M., Sarin A., Coffman R.L., Wynn T.A. Type 1/type 2 cytokine modulation of T cell programmed cell death as a model for human immunodeficiency virus pathogenesis//PNAS (USA). - 1994.- №25 .-P. 1181111815.

37. Cleveland J.L., Ihle J.N. Contenders in FASL/TNF death signaling//Cell. -1995.-Vol.81.-P.479-482.

38. Cohen J.J. Programmed cell death in the immune system//Adv. Immunol, -1991.-Vol.50.-P.55-85.

39. Cotter F.E. Annotation: the role of BCL-2 gene in lymphoma// Br. J. Haemat. 1990.-Vol.75.-P.449-453.

40. Critchfield J.M., Zuniga-Pflucker J.C., Leonardo M.J. Parameters controlling the programmed death of mature mouse T lymphocytes in high-dose suppresion//Cell immunol. 1995. - Vol.160. - 71-78.

41. Cui J.F., Zhou P.K., Woolford L.B. et al. Apoptosis in bone marrow cells of mice with different p53 genotypes after y- rays irradiation in vitro//J. Enviroment. Pathol. Toxicol. Oncol. 1995. - Vol.14. - P.159-165.

42. Darzynkiewicz Z., Bruno S., Bino G. et al. Features of apoptotic cells measured by flow cytometry//Cytometry. 1992. - Vol.13. - P.795-808.

43. Delneste J., Jeannin P., Sebille E. et al. Thiols prevent Fas (CD95)- mediated Tcell apoptosis by down- regulating membrane Fas expression//Eur. J. Immunol. 1996. Vol.26. - P.2981-2988.

44. Dewey W.C., Ling C.C., Meyn R.E. Radiation-induced apoptosis: relevance to radiotherapy//Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 1995. - Vol.33. - P.781-788.

45. Dlzhanskiy A., Basch R.S. Flow cytometric determination of apoptosis in geterogeneous cell population//! Immunol. Meth. 1995. - Vol.180. - P. 131140.

46. Dowling P., Shang G., Raval S. et al. Involvement of the CD95 (Apo-l/Fas) receptor/ligand system in multiple sclerosis brain//J. Exper. Med. 1996. -Vol. 184. - P. 1513-1519.

47. Eastgate J., Moeb J., Nick H. et al. A role of manganese superoxide dismutase in radioprotection of hematopoietic stem cells by IL-1//Blood. 1993. - Vol.81. - P.639-646.

48. Fernandes A.T., Litwack G., Alnemri E.S. Mch2, a new members of the apoptotic Cell-3/ICE cystein protease gene family//Cancer Res. 1995. -Vol.55. - P.2737-2742.

49. Fernandes A.T., Litwack G., Alnemri E.S. CPP 32, a novel human apoptotic protein with homology to C. elegans cell death protein ced-3 and mammalian interleukin -ip- converting enzyme//J. Biol. Chemist. 1995. - Vol.269.1. Р.30761-30764.

50. Feucheu С., Diu A., Chan A. et al. A novel human protease similar to the IL-1(3- converting enzyme induces apoptosis in transfected cells//EMBO. 1995. -Vol.14.-P.1914-1922.

51. French L.E., Wilson A., Hahne M. et al. Fas ligand expression is restricted to non limphoid timic components in situ//J. Immunol. 1997. - Vol.158. -P.2196-2203.

52. Haimovitz- Friedman A., Kan C.C., Ehliter D. et al. Ionising radiation acts on cellular membranes to generate ceramide and initiate apoptosis//J. Experim. Med. 1994. - Vol.180. - P.525-535.

53. Hargreaves R.G., Borthwick N.J., Mantani M.S.G., Piccolella E. Dissociation of T cell anergy from apoptosis by blocade of Fas/ Apo-1 (CD95) signaling//J. Immunol. 1997. - Vol.158. - P.3099-3107.

54. Hart P.H., Vitti G.F., Burgess D.R. et al. Potential antiinflammatory effects of interleukin 4: supression of human monocyte tumor necrosis factor a, interleukin 1, and prostaglandin E2//Proc. Natl Acad. Sci. USA 1989. - Vol.86. - P.3803-3807.

55. He X., Zhong W., Goronzy J.J., Weyand C.M. Induction of В cell apoptosis by THO, but not TH2, CD4+ cells//J. Clin. Invest. 1995. - Vol.95. - P.564-570.

56. Hengartner M.O., Horvitz H.R. C. elegans cell survival gene ced-9 encodes a functional homolog of the mammalian proto-oncogene bcl-2// Cell. 1994. -Vol.76. - P.665-676.

57. Hietanen Т., Kellokumpu- lehtinen P., Pitkanen M. Action of recombinant interferons and IL-2 in modulating radiation effect on viability and cytotoxicity of large grannular lymphocytes//Int. J. Rad. Biol. 1995. - Vol.67. - P.l 19-126.

58. Hiromatsu K., Aoki Y.,Makino M. et al. Increased Fas antigen expression in murine retrovirus induced immunodeficiency syndrome, MOIDS//Eur. J. Immunol. 1994. - Vol.24. - P.2446-2451.

59. Hockenbery D., Nunez G., Milliman G. et al. Bcl-2 is an inner mitochondrial membrane proteine that blocks programmed cell deaths/Nature. 1990. -Vol.348. - P.334-336.

60. Howie S.E.M., Harrison D.J., Wyllie A.H. Lymphocyte apoptosis -mechanisms and implication in disease//Immunol. Rev. 1994. - Vol. 142. -P.141- 148.

61. Inazawa J., Itoh N., Abe Т., Nagata S. Assignment of the human Fas antigen gene (Fas) to 10q24.1//Genomics. 1992. - Vol.14. - P.821-822.

62. Itoh N., Hirohata S. The role of IL-10 human В cell activation, proliferation, and differentiation//.!. Immunol. 1995. - Vol.154. - P.4341-4350.

63. Itoh N., Yonehara S., Ishii A. The polypeptide encoded by the cDNA for human cell surfase antigen Fas can mediate apoptosis// Cell. 1991. - Vol.66. -P.233-238.

64. Jacobson M.D., Weil M., Raff M.C. Programmed cell death in animal development// Cell. 1997. - Vol.88. - P.347-354.

65. Jamali M., Trott K.-R. Persistent increase in the rates of apoptosis and dicentric chromosomes in surviving V79 cells after X-irradiation//Int. J. Radiat. Biol. 1996. - Vol.70. - P.705-709.

66. Jason J., Larned J. Singl- cell cytokine profiles in normal humans: comparison of flow cytometric reagents and stimulation protocols// J. Immunol. Meth. -1997.-Vol.207.-P. 13-22.

67. Jewett A., Cavalcanti M., Bonavida B. Povital role of endogenous TNF-a in the induction of functional inactivation and apoptosis in NK cells//J. Immunol. -1997. Vol.159. - N.10. - P.4815-4822.

68. Joiner M.C. Evidence of induced radioresistence from survival and other end points: an introduction// Rad. Res. 1994. - Vol.138. - Nlsuppl. - P.5-8.

69. Kamcjo R., Havada H., Matsugama Т., Bolsand M. Reguriment for transcription factor IRF- 1 in NO synthase induction in macrophages//Science. -1994. Vol.263. - P.1612- 1615.

70. Kerr J.F.R., Wyllie A.N., Curil A.R. Apoptosis: A basic biological phenomen with wide ranging implication in tissue kinetics//Brit. J. Cane. -1972.- Vol.26. -P.239-257.

71. Kerr J.F.R., Winterford C.M., Harmon B.V. Apoptosis. Its significance in cancer and cancer therapy// Cancer. 1994. - Vol.73. - N.3. - P.2013-2022.

72. Kirsben A.S . Molecular, cellular and genetic basis of radiosensitivity at low doses: a case of inducible repair// Rad. Res. 1994. - Vol.l38.suppl. - P.l-4.

73. Krammer P.H., Behramann I., Daniel P. et al. Regulation of apoptosis in the immune system//Curr. Opin. Immunol. 1994. - Vol.6. - P.279-289.

74. Kroemer G., Zamzami N., Susin A.A. Mitochondrial control of apoptosis//Immunol. Today. 1997. - Vol. 18. - P.44-51.

75. Krouwels F.H., Nocker R. E. Т., Snoek M. et al. Immunocytochemical and flow cytofluorimetric detection of intrcellular IL-4, IL-5 and IFN- у : application using blood and airway- derived cells//J. Immunol. Meth. 1997. -Vol.203.-P.89-101.

76. Kruman I.I., Matylevich N.P., Beletsky I.P. et al. Apoptosis of murine BW5147 thymoma cells induced by dexamethasone and y- irradiation//J. Cell. Physiol. 1991. - Vol.148. - P.267-273.

77. Kusunoki Y., Akiyama M. Age- related alteration in the composition of immunocompetent blood cells in atomic bomb servivors//Int. J Radiat. Biol. -1988.-Vol.53. -P.189-198.

78. Lacronigue V., Mignon A. Fabre M. et al. Bcl-2 protects from lethal hepatic apoptosis induced by an anti-Fas antibody in mice// Nature Med. 1996. -Vol.2. - P.80-86.

79. Lenardo M.J. Fas and the art of lymphocyte maintenance//!. Exper. Med. -1996.-Vol.183.-P.721-724.

80. Lennon S.V., Martin .J., Cotter T.G. Dose- dependent induction of apoptosis in human tumor cell lines by widly diverging stimuli//Cell Prolif. 1991. - Vol.24. - P.203-214.

81. Lichter P., Walczak H., Weitz S. et al. The human Apo-1 (APT) antigen maps to 10q23, a region that is syntenic with mouse chromosome 19//Genomics. -1992. Vol.14.-P.179-180.

82. Lin R.H., Hwang Y.W., Yang B.C., Lin Ch.Sh. TNF-receptor-2 triggered apoptosis is associated with the down- regulation of Bcl-xL on activated T cells and can be prevented by CD28 costimulation//J. Immunol. 1997. - Vol.158. -P.546-552.

83. Ling C.C., Guo M., Chen Ch.H., Deleohery T. Radiation-induced apoptosis: effect of cell age and doe fractionation// Cancer Res. 1995. - Vol.55. - P.5207-5212. v.

84. Liu J.J., Mason D.Y., Jonson G.D. et al. Germinal center cells express bcl-2 protein after activation by signals which prevent their entry into apoptosis//Eur.

85. J. Immunol. 1991 - Vol.21. - P. 1905-1910.

86. Los M., Van de Craen M., Penning L.C. et al. Reuierement of an ICE/ CED 3 protease for Fas/Apo- 1 - mediated apoptosis//Nature. - 1995. - Vol.375. - P.81-83.

87. Lu L., Osmond D.G. Apoptosis during В lymphopoiesis in mouse bone marrow//J. Immunol. 1997. - Vol.158. - P.5136-5145.

88. Lynch D. H., Ramsdell F., Alderson R. Fas and FasL in the homeostatic Regulation of immune responses//Immunol. 1995. - Vol.16. - P.569-574.

89. Maciejewski J., Selleri C., Anderson S., Neal J.S. Fas-antigen expression on CD34 human marrow cells is induced by IFN-y and TNF-a and potentiales cytokine- mediated hematopoietic supression in vitro//Blood. 1995. - Vol.85. -P.3183-3190.

90. Malaise E.P.,Lambin P., Joiner M.C. Radiosensititvity of human cell lines to small doses//Rad. Res. 1994. - Vol.138. - suppl. - P.25-27.

91. Marpels В., Joiner M.C. The response of Chinese hamster V79 cells to low radiation doses: evidence of the whole cell population/ZRadiat. Res. 1993. -Vol.133.-P.41-51.

92. Martinez- Lorenzo M. J., Alava M.A., Anel A. et al. Release of performed Fas ligand in soluble form is the major factor for activation induced death of Jurkat T cells// Immunol. 1996. - Vol.89. - P.511-517.

93. Mathieu C., Jozan S., Mazars P. et al. Density- dependent induction of apoptosis by transforming growth factor- beta 1 in a human ovarian carcinoma cell line//Exp. Cell Res. 1995. - Vol.216. - P.13-20.

94. Matinez- Valder H., Guret C., Bouteiller O. et al. Human germinal center В cells express the apoptosis-inducing genes Fas, c- myc, p53 and Bax, but not the survival gene bcl-2//J. Experim. Med. 1996. - Vol.183. - P.971-977.

95. Matsue H., Kobayashi H., Hosokawa T. et al. Keratinocytes constitutivelyexpress the Fas antigen that mediates apoptosis in IFN gamma-treated cultured keratinocytes//Arch. Dermatol. Res. 1995. - Vol.287. - P.315-320.

96. McConkey D.J., Hartzell P., Chow S.C. et al. Interleukin-1 inhibits T cell receptor-mediated apoptosis in immature thymocytes/Л. Biol. Chemist. 1990. -Vol.265.-P.3009-3011.

97. Memon S.A., Petrark D., Moreno M.B., Zacharchuk CH.M. A simple assay for examining the effect of transiently expressed genes on programmed cell death//J. Immunol. Meth. 1995. - Vol.180. - P.15-24.

98. Mentz F., Mossalayi M.D., Onaaz F., Debre P. Involvement of cAMP in CD3 T cells receptor complex and CD2- mediated apoptosis of human thymocytes//Europ. J. Immunol. 1995. - Vol.25. - P. 1789-1801.

99. Miggley C.A., Owens В., Briscoe C.B. et al. Coupling between y-irradiation, p53 induction and the apoptotic response depends upon cell type in vivo//J. Cell Science, 1995. - Vol.108. - P.1843-1848.

100. Minn A.J., Velez P., Schendel S.L. et al. Bsl-xL forms an ion channel in synthetic lipid membranes//Nature. 1997. - Vol.385. - P.353-357.

101. Morrissey P.J., Conlon P., Braddy S. et al. Administration of IL-7 to mice with cyclophosphamide- induced lymphopenia accelerates lymphocyte repopulation//J. Immunol. 1991. - Vol.146. - P. 1547-1552.

102. Mundy N.A., Villancourt J.P., Ali A. et al. Molecular cloning and pro-apoptotic activity of ICE rel II and ICE.rel III, members of the ICE/Ced3 family of cysteine proteases// J. Biol. Chemist. 1992. - Vol.270. - P.15870-15876.

103. Murphy K.M., Heiberger A.B., Loh D.Y. Induction by antigen of intrathymic apoptosis of CD4+CD8+ TCR thymocytes in vivo// Science. 1990. - Vol.250. -P. 1720-1724.

104. Nagafuji K. Functional expression of Fas antigen (CD95) on hematopoetic progenitor cells//Blood. 1995. - Vol.86. - P.883-889.

105. Nagata S. Apoptosis regulated by a death factor and its receptor: Fas ligand and Fas//Adv. Immunol. 1994. - Vol.57. - P.281-287.

106. Nagata S. Apoptosis-mediating Fas antigen and its natural mutation//Gold Spring Harbor. 1994. - P.313-326.

107. Nagata S., Suda T. Fas and Fas ligand: lpz and gld mutations//Immunol. Today. 1995. - Vol.16. - P.39-42.

108. Ni R., Tomita J., Matsuda К et al. Fas-antigen-mediated apoptosis in primary cultured mouse hepatocytes//Esp. Cell Res. 1994. - Vol.215. - P.332-337.

109. Novelli F., Elios M.M, Bernabei P. et al. Expression and role in apoptosis of the a- and (3- chains of the IFN- у receptor on human Thl and Th2 clones/Л. Immunol. 1997. - P.206-213.

110. Nunez G., Merino R., Grillot D., Gonsalez-Garica M. Bcl-2 and Bcl-x: regulatory switches for lymphoid death and survival// Immunol. Today. 1994. - Vol.15.-P.582-586.

111. Obrg H.-H., Sanzenbacher R., Lenge- Jaben B. et al. Ligation of cell surface CD4 inhibits activation- induced death of human T lymphocytes at the level of Fas ligand expression// J. Immunol. 1997. - Vol.159. - P.5742-5749.

112. Ogasavara J.R., Watanabe- Fakunaga M., Matsyzawa Т.К. Lethal effect of the anti- Fas antibody in mice// Nature. 1993. - Vol.364. - P.806-809.

113. Oliveri G., Bodycote J.,Wolff S. Adaptive response of human lymphocytes to low concentrations of radioactive thymidine// Science. 1984. - Vol.223. - P. 594-597.

114. Orlando S., Matteneci C., Fadbon E. TNF-a, unlike other pro- and anti-inflummatory cytokines, induce rapid release of the IL-1 type II blecoy receptor in human myelomonocytic cells//J. immunol. 1997. - Vol.158. - P.3861-3868.

115. Palayoor S.T., Humm J.L., Atcher R.W. et al. G2M arrest and apoptosis in murine T lymphoma cells following exposure to 212 Bi alpha particleirradiation//Nucl. Med. Biol. 1993. - Vol.20. - P.795-805.

116. Parijs L., Abbas A.K. Role of Fas- mediated cell death in the regulation of immune responses//Curr. Opin. Immunol. 1996. - Vol.8. - P.355-360.

117. Podack E.R. Execution and suicide: cytotoxic lymphocytes enforce draconian laws through separate molecular pathways//Curr. Opin. Immunol. 1995. -Vol.7.-P. 11-16.

118. Rana R., Vitale M., Mozzotti G. et al. Radiosensivity of human natural killer cells: binding and cytotoxic activities of natural killer cell subsets//Rad. Res. -1990.-Vol.124.-P.96-102.

119. Renauld J.Ch., Vink A., Louahed J., Snick J.V. Interleukin -9 is a major anti-apoptotic factor for thymic lymphomas//Blood. 1995. - Vol.85. - P.1300-1305.

120. Rodriguez C., Lacasse C., Hoang T. Interleukin-ip supresses apoptosis in CD34 positive bone marrow cells through activation of the type I IL-1 receptor//J. Cell. Physiol. 1996. - Vol.166. - P.387-395.

121. Roth P.A., Mikulka W.R., Smith С U. et al. A novel marker for the measurement of apoptotic cells// Cytometry. 1996. - Suppl.8. - P.44-51.

122. Sarin A., Conan-Cibotti M., HenkartP.A. Cytotoxic effect of TNF and lymphotoxin on T lymphoblasts// J. Immunol. 1995. - Vol.155. - P.3716-3722.

123. Savill J.S., Dransfield I., Hogg N., Hasiett C. Vitronectin receptor-mediated phagocytosis of cells undergoing apoptosis//Nature. 1990. -Vol.343.-P.170-173.

124. Savill J.S., Wyllie A.H., Henson J. et al. Macrophage phagocytosis of agingneutrophils in inflammation. Programmed cell death in the neutrophil leads to its recognition by macrophages//!. Clin. Invest. 1989. - Vol.83. - P.865-875.

125. Schattener E., Friedman S.M. Fas expression and apoptosis in human В cells//Immunol. Res. 1996. - Vol.15. - P.246-257.

126. Schindler R., Mancila J., Endres S. et al. Correlations and interactions in the production of interleukin-6 (IL-6), IL-1, and tumor necrosis factor (TNF) in human blood mononuclear cells: IL-6 suppresses IL-1 and TNF//Blood 1990. -Vol.75. - P.40-47.

127. Seki H., Iwai K., Kanegane H., et al. Differential protective action of cytokines on radiation-induced apoptosis of peripheral lymphocyte subpopulations// Cell.Immunol. 1995. - Vol.163. - P.30-36.

128. Selleri C., Sato Т., Anderson S. et al. Interferon-y and tumor necrosis factor a supress both early and late stage of hematopoiesis and induce programmed cell death//J. Cell. Physiol. 1995. - Vol.165. - P.538-544.

129. Sellins K.S., Cohen J.J. Gene induction by y-irradiation leads to DNA fragmentation in lymphocytes//J. immunol. 1987. - Vol.139. - P.3199-3206

130. Sen S. Programmed cell death: concept, mechanism and control//Biol. Rev. -1992.-Vol.67.-P.287-311.

131. Sentman Ch. L., Shuiter J.R., Hockenbery D. et al. Bcl-2 inhibits multiple forms of apoptosis not negative selectipn in lymphocytes//Cell. 1991. -Vol.67. - P.879-888.

132. Shi J., Wang R., Sharma A. et al. Dissotiation of cytokine signals for proliferation and apoptosis// J. Immunol. 1997. - Vol.159. - P.5318-5328.

133. Sovrenson C.M., Barry M.A., Eastman A. Analysis of events associated with cell cycle arrest at G2 phase and cell death induced by cisplatin//J. Nation. Cancer Inst. 1990. - Vol.82. - P.749-755.

134. Starling G.G., Bajorath J., Eniswiler J., Ledbetter J.A. Identification of amino108death and apoptosis// Int. J. Radiat. Biol. 1995. - Vol.67. - P.677-685.

135. Yasutomo K., Maeda K., Hisaeda H., Good R.A. The Fas-deficient SCID mouse exhibits the development of T cells in the thymus// J. Immunol. 1997. -Vol.158.-P.4729-4733.

136. Zhang L., Wang C., Radvanyi L.G., Miller R.G. Early detection of apoptosis in defined lymphocyte populations in vivo//Blood. 1993. - Vol.81. - P.3091-3096.

137. Zheng L., Fisher G., Miller R.E. et al. Induction of apoptosis in mature T cells by tumor necrosis factor//Nature. 1995. - Vol.377. - P.348-351.