автореферат диссертации по безопасности жизнедеятельности человека, 05.26.02, диссертация на тему:Клинико-экспериментальное обоснование применения миллиметрового излучения для профилактики и терапии лучевых поражений

На правах рукописи

РЕЗУНКОВА Ольга Петровна

КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ МИЛЛИМЕТРОВОГО ИЗЛУЧЕНИЯ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ТЕРАПИИ ЛУЧЕВЫХ ПОРАЖЕНИЙ

05.26.02 - безопасность в чрезвычайных ситуациях 03.00,01 -радиобиология

АВТОРЕФЕРАТ

4844322

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Санкт-Петербург-2011

2 1 АПР 2011

4844322

Работа выполнена в ФГУЗ «Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины имени А.М.Никифорова» МЧС России и ФГУ «Российский научный центр радиологии и хирургических технологий» МЗиСР РФ

Научные консультанты: Заслуженный врач РФ доктор медицинских наук профессор Заслуженный деятель науки РФ доктор медицинских наук профессор

Алексанин Сергей Сергеевич

Корытова Луиза Ибрагимовна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук профессор Кравцов Владислав Юрьевич

доктор медицинских наук профессор Гребенюк Александр Николаевич

доктор медицинских наук профессор Легеза Владимир Иванович

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная

медицинская академия им. И.И. Мечникова» МЗиСР РФ

Защита диссертации состоится «21» апреля 2011 г. в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 205.001.02 при Федеральном государственном учреждении здравоохранения «Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины имени A.M. Никифорова» МЧС России по адресу: Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева, д. 4/2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного учреждения здравоохранения «Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины имени A.M. Никифорова» МЧС России.

Автореферат разослан « ¿(»__TL^_2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук Е.Г.Неронова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. Научно-технический прогресс существенно увеличивает вероятность контакта человека с источниками ионизирующего и неионизирующего излучения, а также с их сочетанием в любых комбинациях как в процессе профессиональной деятельности, так и при аварийных ситуациях. В связи с этим сохраняется актуальность для обеспечения безопасности в чрезвычайных ситуациях природного, техногенного и военного характера разработки и внедрения в практическую деятельность принципиально новых средств, позволяющих сохранить жизнь и здоровье людей в экстремальных условиях, в том числе и при радиационных авариях и катастрофах [А.К. Гуськова 1997; А.Ф. Цыб и соавт., 2002; С.С. Алексанин 2008]. Кроме того сохраняется необходимость модификации клинических эффектов лучевой терапии как химическими, так и физическими способами, чтобы добиться оптимального терапевтического эффекта. Особое внимание, как правило, уделяется исследованию закономерностей и механизмов поражающего действия, ионизирующих излучений (ИИ), изучение же биологических эффектов неионизирующей радиации, например, электромагнитного излучения миллиметрового диапазона (ЭМИ КВЧ), равно как и их совместных эффектов, велось существенно менее интенсивно [Н.Д. Девятков, О.В. Бецкий, М.Б. Голант и соавт., 1981,1985, 1991,1994].

В современной радиобиологии накоплено огромное количество фактов, свидетельствующих о том, что радиорезистентность организма может изменяться под влиянием нерадиационных факторов различной природы [Ю.Г. Григорьев и соавт., 1981,2002; Е.А. Губкина и соавт., 1996; С.Д. Иванов и соавт., 2000, 2006; В.И. Шеин 2000, 2008]. При этом основой неспецифического повышения резистентности, как правило, рассматривали механизмы стресса, т. е. реакции организма на воздействие чрезвычайных раздражителей. Такой доминирующий подход к разработке данной проблемы привел к тому, что многие факторы, которые не могли быть отнесены к разряду чрезвычайных и не вызывали стресс-реакцию, долгое время не были исследованы как потенциальные модификаторы лучевого поражения организма. Это характерно и для исследований сочетанного действия электромагнитных полей малой мощности (нетеплового уровня с напряженностью менее 10 мВт/см2) и ионизирующей радиации. Тем не менее, к настоящему времени накоплено достаточно экспериментальных и клинических доказательств о существенной биологической эффективности этого фактора внешней среды [Н.Н.Лебедева и соавт., 2000, 2007; H.A. Темурьянц и соавт., 1999,2004, 2007; Н.И. Музалевская 1982; A.B. Сидякин и соавт., 1982, 1983; Л.А. Севастьянова и соавт., 1976, 1983; Л.И. Корытова и соавт., 2000, 2004]. В частности, ЭМИ КВЧ вызывают подавление процессов пере-кисного окисления мембранных липидов мышечной ткани [В.Д. Искин и соавт., 1990; Л.В. Рыжкова и соавт., 1990], нормализуют окислительно-восстановительные процессы в митохондриях [Н.Ю. Быкова и соавт., 1991], оказывают цитостатическое влияние на злокачественные клетки [Н.Д. Девятков и соавт., 1995; О.В. Глушкова, Е.Г. Новоселова, O.A. Синотова и соавт. 2002]. По-

этому в последние годы КВЧ-облучение наряду с таким широко применяемым цитостатическим воздействием, как облучение ионизирующей радиацией, стали использовать при лечении онкологических заболеваний.

Изучение действия ЭМИ КВЧ на биологические объекты началось около 40 лет тому назад сразу за освоением в радиотехнике этого диапазона частот (направленная радиосвязь, мм-радиолокация и др.), но до настоящего времени не существует ни общепринятой концепции, ни методов, адекватно отслеживающих влияние биологического действия миллиметрового излучения с первых мгновений взаимодействия с биообъектом. Это приводит к необходимости прогнозирования последствий таких контактов, что требует научно обоснованного биодозиметрического контроля.

В течение последних лет опубликовано значительное количество работ, посвященных поиску эффектов и механизмов действия ЭМИ КВЧ на биологические объекты различного уровня организации, от отдельных клеточных компонентов, изолированных клеток и микроорганизмов до высокоорганизованных организмов (животных и человека) [Е.П.Хижняк 1991; В.И.Петросян, Ю.В.Гуляев и соавт. 1995; А.Б. Гапеев, Н.К. Чемерис и соавт., 1998, 2002; С.П.Ситько 2001; Т.И. Субботина, А.А. Яшин и соавт. 1999,2002; Г.В. Жукова 2006]. В то же время параметры и характеристики излучений (частота или соответствующая ей длина волны, интенсивность, плотность потока мощности (ППМ), поляризация, наличие или отсутствие модуляции, вид модуляции и т.п.), используемые в настоящее время в медицинской практике, до последнего времени остаются во многом эмпирическими. Результаты проведенных исследований пока не позволили окончательно решить вопрос о направленном подборе резонансных частот и других характеристик излучений дня более эффективного использования в медицинской практике этого диапазона излучений. Разрыв между успешным практическим применением КВЧ-терапии, и ее недостаточным теоретическим обоснованием, неизбежно приводит к чисто эмпирическому подбору параметров излучений, тормозит дальнейшее эффективное развитие КВЧ-терапии как научно обоснованного метода современной медицины. Существенное продвижение в этом направлении, может базироваться на создании новой концепции, определяющей механизмы воздействия ЭМИ мм-диапазона на биологические процессы. Решению указанных проблем посвящена настоящая работа.

Цель исследования: клинико-экспериментальное изучение влияния электромагнитного миллиметрового излучения крайне высокой частоты (КВЧ) на течение и исходы радиационных поражений и эффективности противоопухолевой терапии.

Для реализации поставленной цели предстояло решить следующие основные задачи исследования:

1. Изучить в эксперименте влияние ЭМИ мм-диапазона (ЭМИ КВЧ) на исходы

радиационных поражений (до или после облучения ионизирующим излучением).

2. Исследовать модифицирующее действие ЭМИ КВЧ на состояние костномозгового кроветворения и показатели периферической крови облученных животных.

3. Выявить в эксперименте влияние ЭМИ КВЧ на состояние клеточных структур лимфоцитов и тимоцитов.

4. Установить модифицирующее действие ЭМИ КВЧ на состояние антиокси-дантной системы облученного организма в эксперименте и клинике.

5. Оценить противоопухолевое действие ЭМИ КВЧ в опытах на животных и клетках человека, растущих в культуре.

6. Исследовать влияние ЭМИ КВЧ на побочные эффекты лучевой терапии у онкологических больных радиологических отделений.

7. Выявить специфические показатели при профилактическом и лечебном применении ЭМИ КВЧ у онкологических больных радиологических отделений.

Решение поставленных задач позволило сформулировать следующие основные положения, выносимые на защиту:

1. Воздействие ЭМИ КВЧ на экспериментальных животных, получивших ионизирующее облучение в широком диапазоне доз, значительно улучшает исходы радиационных поражений и снижает уровень постлучевой миелодепрессии.

2. ЭМИ КВЧ при лучевом воздействии оказывает нормализующее действие на клеточные мембраны лимфоцитов и тимоцитов, укрепляет антиоксидант-ный статус облученного организма, модифицирует ДНК-синтетическую активность.

3. Использование ЭМИ КВЧ у онкологических больных способствует снижению местных острых лучевых реакций и постлучевых осложнений, а также восстановлению антиоксидантного баланса организма, что положительно отражается на продолжительности жизни наблюдаемых больных.

Научная новизна и теоретическая значимость. Впервые изучен радиопротекторный эффект КВЧ-воздействия на кроветворение при остром радиационном воздействии, который проявляется в широком диапазоне доз от 3 до 9 Гр при различных режимах облучения, для двух длин волн (/1=5,6 мм и Х=7, ] мм). Выявлено, что профилактическое и раннее терапевтическое применение мм-излучения позволяет увеличить выживаемость лабораторных животных в условиях острого рентгеновского облучения.

Показано, что 30 мин КВЧ-воздействие за 2 ч до облучения в дозах 2, 4 и 6 Гр способствует снижению выраженности постлучевых нарушений костномозгового кроветворения и увеличению пролиферативной активности гемопоэтиче-ских клеток.

Впервые показано воздействие КВЧ на ДНК-синтетические процессы. Независимо от характера влияния КВЧ на клетки мишени (ингибиция или стимуляция), установлено, что с помощью КВЧ при различных режимах облучения можно достигнуть результатов, направленных на модуляцию функциональной активности клеток-мишеней, а, в случае комбинированного воздействия с ионизирующим излучением снизить его патогенный эффект.

Теоретически обоснованы механизмы воздействия ЭМИ КВЧ-диапазона на биологические процессы, объясняющая природу первичного акта действия мм-излучений на биологические объекты. Дано объяснение острорезонансного характера частотной зависимости наблюдаемых эффектов, их стабильность и воспроизводимость.-Первичный акт действия КВЧ-излучения заключается в его воздействии на определенные молекулы в клетках организма, такие как цАМФ.

На основании результатов экспериментальных й клинических исследований показана возможность и обоснована целесообразность использования электромагнитного миллиметрового излучения (КВЧ - терапия) в качестве нового средства обеспечения защиты кроветворения (предотвращение постлучевой депрессии кроветворения, ускорение восстановления гемопоэза, а также стимулирование иммунитета и неспецифической резистентности организма) в курсах лучевой терапии у онкологических больных.

Практическая ценность.

Дано теоретическое и практическое обоснование для клинического применения КВЧ-терапии при лучевом лечении онкологических больных. Составлен алгоритм индивидуальных схем КВЧ-терапии у онкологических больных радиологических отделений. Уточнены этапы применения КВЧ-терапии в условиях онкологического стационара. Разработаны новые методики биологического тестирования действия различных электромагнитных излучений и уточнены оптимальные схемы применения КВЧ-терапии.

Разработанные методические рекомендации для клинического применения КВЧ-терапии в радиологических отделениях онкологической клинике включают в себя три компонента: зону воздействия, длительность сеанса КВЧ-терапии (кратковременные сеансы - 10-15 мин; долговременные сеансы - 30-60 мин; нарастающая экспозиция - с 10-15 до 30-60 мин) и схему лечения.

Разработанные и апробированные методики лечения позволяют, соблюдая принципы онкологического радикализма, улучшить функциональные результаты лечения и качество жизни онкологических больных.

Показано, что применение КВЧ-терапии испытуемым здоровым людям по субъективным, клиническим и лабораторным данным не приводит к ухудшению состояния их здоровья и дееспособности.

Реализация и внедрение полученных результатов.

Изданы пособия для врачей, предназначенные для радиологов и онкологов: «Показания к использованию и клиническому применению КВЧ-терапии при лучевом лечении онкологических больных» ЦНИРРИ МЗ РФ (1995); «Оценка

состояния тиолдисульфидной системы и ее коррекция при лечении онкологических больных» ЦНИРРИ МЗ РФ (2004); «Возможности КВЧ-аппаратуры для проведения поддерживающей терапии в онкологической клинике» ГОУВПО СПбГУТ (2008).

Для ветеринарных специалистов выпущены методические рекомендации «Ветеринарно-гигиенические основы применения ЭМИ КВЧ для профилактики лучевых поражений» СПбГАВМ (2004) и «Радиопротекторный эффект при применении электромагнитного излучения ММ-диапазона (КВЧ терапия)» СПбГАВМ (2005).

Изданы учебно-методические пособия для студентов, изучающих курсы радиобиологии и биофизики: «Словарь основных понятий, терминов и определений в радиобиологии» СПбГАВМ (2004); «Разделение и анализ клеток биофизическими методами в радиобиологии» СПбГАВМ (2005); «Безопасность жизнедеятельности» СПбГАВМ (2005); «Оптические методы анализа клеток в биофизике» ГОУВПО СПбГУТ, 2006; «Роль природного радиоактивного фона в управлении физиологическими процессами в живых системах» ГОУВПО СПбГУТ

(2008); «Адаптометрия - электропунктурная диагностика» ГОУВПО СПбГУТ

(2009).

Материалы экспериментальных исследований используются в лекционном материале курса лекций «Клеточная радиобиология» в Санкт-Петербургском Государственном Университете (1997-1999 гг.), «Ветеринарная радиобиология» в Санкт-Петербургской Государственной Академии ветеринарной медицины (2001-2006 гг.), «Безопасность жизнедеятельности» в Санкт-Петербургском институте Управления и права (2005-2006 гг.) и «Электромагнитные поля и излучения в биологии и медицине», «Биофизика» в Санкт-Петербургском Государственном Университете Телекоммуникаций им. проф. М.А. Бонч-Бруевича (20062010 гг.).

На базе разработанных методических рекомендаций для врачей КВЧ-терапия внедрена в радиологическое отделение ФГУ «Российский научный центр радиологии и хирургических технологий» МЗиСР РФ с 1995 г., как поддерживающая терапия при лучевом лечении онкологических больных.

В 2009 г. за инновационный проект: «Создание реабилитационных кабинетов для гипертонических больных в Центрах здоровья при поликлиниках» была получена поощрительная грамота от правительства Санкт-Петербурга.

Апробация работы и публикация материалов исследования. По теме диссертации опубликовано 57 работ, 10 учебно-методических пособий и руководств, 39 статей, включая 14 статей в изданиях, определенных перечнем ВАК, 1 патент, 1 мед.технология, 3 монографии. Материалы диссертации доложены на многих научных совещаниях, конференциях и съездах, в том числе: научной конференции «Биологическая обратная связь в медицине и спорте» (СПб. 11.06.92); Межрегиональной научной конференции «Электромагнитное загрязнение окружающей среды» (СПб. 21-25.06.93); на 1 и 2 Межд. научно-практической конференции - Надым (29.03.93 и 28.10.95); Всеармейской науч-

ной конференции (СПб. 26-27.10.95); Межд. научной конференции «Антропогенные факторы на здоровье человека и животных» (Астрахань 28.09.93); научной конференции «Вопросы геронтологии» (Киев, сентябрь 1993); Annals of Oncology (Amsterdam 1996); III Съезде по Радиационным исследованиям (Москва 14-17.10.97); на I Межд. Конгрессе «Новые медицинские технологии» (СПб. 812.07.2001); на I, И, III и V Межд. Конгрессе «Слабые и сверхслабые поля и излучения в биологии и медицине» (СПб. 1997, 2000, 2003,2009); 8 и 9 Межд. Конгрессе по биоэлектрографии (СПб. 2004, 2005); XIV, XV, XVI и XVII Межд. Межвузовской научно-практической конференции СПбГАВМ (СПб. 2003, 2004, 2005 и 2006); I и II Межд. Конгрессе «Инфокоммуникационные технологии и радиоэлектронные системы в медицине, нейробиологии и образовании» (СПб. 1417.12.2004, 5-8.12.2006); X СПб Межд. Конференция «Региональная информати-ка-2006» (СПб. 24^-26.10.2006); III Межд. Научно-практическая Конференция «Физическая культура и здоровье студентов вузов» (СПб. 24-26.12.2006); Межд. научно-практическая конференция «МЕТРОМЕД - 2007» (СПб. 2007); 59 и 60 научно-техническая конференция проф.-преп. состава научных сотр. и аспр. СПбГУТ (СПб. 22-26.01.2007 и 23-26.01.2008); Юбил. Чтения памяти АЛ/Чижевского (СПб. 27-30.11.2007); Веер. Науч. Конф. «Современные проблемы здоровья населения и военнослужащих» (СПб. 2007); 1 Межд. Форум «БИОФИЗТЕХНОЛОГИИ» (СПб. 27-29.11.2008); 11 и 12 Межд. научно- технической конференции «Медико-экологические информационные технологии» (Курск 2008, 2009); 4 и 5 межд. научн. конф. «Донозология» (СПб. 2008, 2009); 5 веер, науч.-практ. конф. с межд. уч. «Здоровье-основа человеческого потенциала: проблемы и пути их решения» (СПб. 2010).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 326 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы по изучаемой проблеме, главы, посвященной материалам и методам, собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы и приложения. Список литературы включает 425 источника, из которых 172 зарубежных автора. Работа иллюстрирована 44 рисунками и 43 таблицами.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы п методы исследования

Биологический эксперимент. Экспериментальные исследования выполнены на 700 белых беспородных крысах-самцах, разводки вивария ФГУ «РНЦ радиологии и хирургических технологий» МЗиСР РФ, массой 100-120 г и 160±10 г и 30 крысах линии Вистар массой 200±10 г, а также на 1700 белых беспородных мышах-самцах массой 18-20 г, разводки питомника РАМН «Рапполово» (Ленинградская обл.) и на 20 мышах SHR самках массой 24-29 г. Содержание, питание, уход за животными (Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев) 06.04.73) и их выведение из эксперимента осуществляли в соответствии с требованиями «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приложение 3, 4 к приказу Минздрава СССР от 12.08.1977, № 755) и «Правилами проведения качественных клинических испытаний в Российской Федерации» (утверждены Минздравом РФ и введены в действие с 1 января 1999 г.).

Рентгеновское облучение животных проводили на аппарате РУМ-17 (СССР), напряжение - 200 кВ, сила тока - 15 мА, фильтры: Си - 0,5 мм + А1 - 1,0 мм, мощность экспозиционной дозы - 0,8-1,2 Гр/мин, кожно-фокусное расстояние 50 см, направлении облучения: спина-грудь. Животных облучали дозами 2, 4,6 и 8 Гр (крыс) и 3, 4,5,6, 7, 8 и 9 Гр (мышей). В ходе каждого облучения животных проводилась физическая дозиметрия с помощью индивидуального дозиметра ИД-11 с последующей оценкой показаний прибора на аппарате ГО-32.

КВЧ-облучение животных проводили в цилиндрической камере под рупором генератора УНТВ-02 и аппаратом «Явь-1» с длиной волны Х=5,6 и 7,1 мм (разрешенные МЗ РФ для терапевтического воздействия), работающим в режимах модулированных частотой 50 и 100 Гц соответственно с рупорным волноводом, обеспечивающим пятно засветки в несколько квадратных сантиметров, ПМ -10 мВт/см2.

Наблюдение за животными (мыши) после острого рентгеновского облучения осуществляли в течение 150 сут через день.

Оценку радиомодифицирующих свойств КВЧ-воздействия проводили биофизическими, биохимическими и гематологическими тестами. Изучение выживаемости и средней продолжительности жизни лабораторных животных проводили общепринятыми методами. По полученным результатам оценки выживаемости при дозах СД50/30 рассчитывали фактор изменения дозы и процент защиты КВЧ-воздействия.

Для анализа клеточной популяции тимоцитов и лейкоцитов использовали следующие биофизические методы: собственная ультрафиолетовая флуоресценция клеток (УФФ) и флуоресценция мембранных зондов, которую снимали на флуоресцентных спектрофотометрах MPF-2A, MPF-4 и MPF-650-40 (Hitachi, Япония); светорассеяние и мутность (спектрофотометр Spectro МОМ-203, Венг-

рия и СФ-16 ЛОМО, СССР); кондуктометрический метод (ЦМК-Í, ВНИКИ МЛТ, СССР).

ЭПР-спектры регистрировали на спектрометре РЭ-1306. Для исследования микровязкости крови крыс, после облучения КВЧ, был использован спиновой зонд с гидрофильным радикалом танол (2,2,6,6-тетраметил-4-оксипиперидин-1-оксил). Пробы крови брали из хвоста в количестве 1,5-2,0 мл, кровь отбирали в гепаринизированные пробирки. Систему тщательно перемешивали и запаивали в стеклянном капилляре с диаметром 1 мм. Время эксперимента от отбора крови до начала ЭПР-измерений - 15 мин.

Адгезию клеток проводили на хлопко-вискозной хирургической вате в туберкулиновых шприцах объемом 1мл в растворе Рингера-Кребса с добавкой 10% свежей крысиной сыворотки (или 2% бычьего сывороточного альбумина Serva, ФРГ) и в заряженной двухфазной системе с использованием концентрированных водных растворов полиэтиленгликоля (ПЭГ) (Union Carbide, США) и декстрана Т 500 (Pharmacia, Швеция) и 0,4 М фосфатного буфера. Также в работе использовали сорбцию и захват легочными макрофагами тимоцитов и аутологичное ро-зеткообразование.

Общее количество лейкоцитов определяли меланжерным методом с последующим подсчетом клеток в камере Горяева. Для исследования лейкоцитарной формулы применяли способ быстрой окраски мазков крови краской Романовского [А.Я. Альтгаузен 1964]. Степень жизнеспособности клеток контролировали по окраске клеток витальными красителями -0,1% эозином БА (Шост-кинского химкомбината, СССР) и 0,05% трипановым синим («Реахим», Чехия). Содержание клеток с пикнотическими ядрами определяли с помощью окраски клеток 0,5% акридиновым оранжевым («Реахим», Чехия) на люминесцентном микроскопе Люмам-И2 (ЛОМО, СССР). Тиолдисульфидный коэффициент (ТДК) K=(SH)/(S-S) определяли по методу Соколовского [В.В. Соколовский 1988].

Клинические исследования. Работа проводилась в клинике ФГУ «РНЦ радиологии и хирургических технологий» МЗиСР РФ под руководством з.д.н. РФ, проф., д.м.н. л.И.Корытовой. Изменение параметров жизнедеятельности, наблюдаемые у онкологических больных, рассматривались как экстраполяция нарушения функционального состояния организма лиц, оказавшихся в чрезвычайной ситуации. Отдавая отчет относительно условности такой экстраполяции, мы, тем не менее, ориентировались на ряд факторов, общих для обеих групп в первую очередь стрессорность ситуации: реальная угроза для жизни, неопределенность ситуации, изменение привычных бытовых условий, а так же - последствия физического травмирования органов и тканей, наличие интоксикации (в результате применения высокотоксичных препаратов - для онкологических больных), и, конечно, воздействие ионизирующего излучения (схемы лучевой терапии).

Больные клиники - 127 человек и практически здоровые волонтеры - 116 человек. Исследования на больных и практически здоровых волонтерах выпол-

нялись с информированного согласия испытуемых и соответствовали этическим нормам Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации 2000 г. Состояние здоровья добровольцев оценивали по данным анамнеза (отсутствие острых или обострения хронических заболеваний), субъективным показателям (отсутствию жалоб на состояние здоровья), в ходе физикального клинического (термометрия, показатели артериального давления, пульса, тоны сердца, частота дыхания и др.) и лабораторного исследования.

Общеклиническое лабораторное исследование крови онкологических больных включало определение общего количества лейкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов и ретикулоцитов, изучение лейкоцитарной формулы, оценку абсолютного и относительного содержания лимфоцитов и гранулоцитов, выявление уровня гемоглобина, гематокрита и СОЭ. С помощью тиолдисулфидного анализатора в плазме крови были изучены содержание общих, белковых, небелковых SH-rpynn, SS-групп и тиолдисульфитное соотношение.

1 группа: 85 человек, из них:

- практически здоровые волонтеры 36 человек (мужчины и женщины) в возрасте 40-70 лет: 17 мужчин в возрасте от 44 до 66 лет и 19 женщин в возрасте от 40 до 70 лет, средний возраст у доноров 57 лет,

- онкологические больные 49 человек (мужчины и женщины) в возрасте 36-71 года: 35 мужчин в возрасте от 36 до 71 лет и 14 женщин в возрасте от 59 до 68 лет, средний возраст исследуемой группы составил 60 лет, страдавшие немелко-клеточным раком легкого (HMPJ1), которые получали комбинированное лечение, включающее оперативное удаление опухоли и послеоперационную лучевую терапию (ПОЛТ).

Послеоперационную лучевую терапию проводили спустя 4-6 недя на линейном ускорителе электронов SL 20, производства компании «Philips», с граничной энергией 20 МэВ, с двух противолежащих полей, ритм облучения 2:1 (спереди: сзади), ежедневно пять раз в неделю с перерывом в два дня в конце недели, разовая очаговая доза (РОД) 1,25 Гр по 2 раза в день, с дневным интервалом 4 ч, до достижения суммарной очаговой дозы 50 Гр. Из 49 больных НМРЛ, получавших комбинированное лечение, 32 пациента дополнительно получали КВЧ-терапию, 17 пациентов получали только комбинированное лечение, специфическое для больных HMPJI. Все больные каждые 3 мес проходили клинико-рентгенологический контроль.

КВЧ-терапия проводилась весь период лечения (3 раза в неделю через день). Курс лечения состоял в среднем из 10-15 процедур. КВЧ-воздействие осуществлялось на область мечевидного отростка грудины в течение 10-15 мин, в первой половине дня. Пробы крови у пациентов забирали 7 раз за весь период лечения из локтевой вены в количестве 1 мл: при поступлении (через 3-6 недель после операции), через 5 дней после начала КВЧ-терапии, в начале ЛТ, через 5, 10 и 15 дней ЛТ, при достижении суммарной очаговой дозы 50 Гр.

2 группа: пролечено 78 больных лимфомами и солидными новообразованиями, для которых КВЧ-терапия применялась, в ходе проведения и после окончания лучевого и комбинированного лечения. В эту группу входили 43 мужчины и 35 женщин в возрасте от 24 до 70 лет с диагнозом неходжкинские лимфомы (HXJI). КВЧ-терапия проводили в процессе субтотального облучения тела крупными полями от верхней трети шеи до диафрагмы и от диафрагмы до границы верхней и средней трети бедер РОД=1,0 Гр на средний план до СОД=4-6 Гр, а также в процессе облучения через крупные поля сложной конфигурации. КВЧ-терапию также получали больные на фоне поддерживающих и лечебных курсов XT.

Неинвазивные методы контроля проводимого КВЧ-воздействия:

• анализ вариабельности сердечного ритма (ВСР) - скрининг-диагностика R-R интервала кардиоритмограммы (патент №2128004), .ритмоанализатор RA-8, подключаемый к USB порту персонального компьютера с основной программой «Cardione» (статистический, спектральный и специфический анализ) и пакетом прикладного программного обеспечения «NEXT» и Fractal 4.4, (фрактальный анализ хаосграмм);

• электропунктурная диагностика на автоматизированном комплексе: Реф-лексомастер РМ-07 (Ру МЗ РФ № 29/23041101/3560-02) и ФДСО МЕДИ-СКРИН (Ру МЗ РФ № 292/0499/98-5-4);

• метод газоразрядной визуализации (метод-ГРВ), с использованием специальных диагностических таблиц К.Г. Короткова и оригинальной установки «Crown-TV»;

• эниотрон 3 - прибор, позволяющий определять изменения величины термодинамической энтропии в БАТ человека после воздействия на него ЭМИ КВЧ малой мощности (патент № 024938).

Полученные в ходе исследований данные подвергали обработке методами вариационной статистики с использованием пакета программ «Statistica 5.1» с расчетом среднего значения, ошибки средней и среднего квадратического отклонения. Для оценки значимости межгрупповых различий по критериям выживаемости пользовались точным методом Фишера. Оценку различий средних значений в экспериментах с большим количеством лабораторных животных и нормальным распределением средних величин проводили с использованием t-критерия Стьюдента. Оценку различий данных, полученных при анализе выборок малого объема, проводили непараметрическими методами с использованием критерия Вилкоксона-Манна-Уитни. Обработка результатов, представленных в относительных единицах, осуществлялась с использованием таблиц B.C. Генеса (1967), основанных на точном методе Фишера для четырехпольной таблицы. Вероятность р<0,05 и выше считали достаточной для вывода о статистической достоверности различий полученных данных.

Данные в таблицах представлены в виде X ± тх. Различия по t-критерию Стьюдента обозначены звездочкой (*), различия по критерию Вилкоксона-Манна-Уитни - решеткой (#).

Результаты экспериментальных исследований

Изучение влняние КВЧ-воздействия на исходы радиационных поражений (выживаемость облученных белых беспородных мышей-самцов при различных вариантах воздействия КВЧ)

Целью первого раздела исследования явилась экспериментальная оценка радиопротекторного эффекта КВЧ при остром радиационном воздействии. В данной работе всегда использовалась только одна схема облучения животных -это общее, внешнее, однократное облучение животных на аппарате РУМ-17 с постоянной мощностью дозы излучения. Дозы облучения от 3 Гр до 9 Гр получали изменением времени облучения. Для реализации цели были проведены экспериментальные исследования на мышах, в ходе которых изучалось влияние КВЧ на показатели выживаемости и средней продолжительности жизни облученных ЖИВОТНЫХ.

На первом этапе были проведены исследования по изучению влияния КВЧ на общую резистентность животных после различного времени воздействия. КВЧ воздействие проводилось в экспериментах на 160 белых мышах-самцах двумя длинами волн А.=7,1 и 5,6 мм, длительность воздействия - 30,60 и 120 мин, в течение 5-ти дней, в группах по 10 животных, две серии. Наблюдения проводили до 6 мес.

Таблица 1

Влияние КВЧ-воздействия на выживаемость белых беспородных мышей-самцов (п=10 в каждой группе) в зависимости от условий применения КВЧ

через 90 и 150 дней

Условия эксперимента Время КВЧ-воздействия, мин через 90 дней через 150 дней

Выживаемость, % Индекс эффекта Выживаемость, % Индекс эффекта

Биол. контроль 0 50±5 1 20+5 1

КВЧ 1 -7,1 мм 30 80±5 1,6±0,1 50±5 2,5±0,2

60 9 0±5 2,8+0,1 80+5 4±0,2

120 70±5 1,4±0,1 70±5 3,5+0,2

КВЧ X -5,6 мм 30 80±5 1,6+0,1 70+5 3,5+0,2

60 50±5 1±0,1 30+5 1,5+0,1

120 - - 20±5 1±0,1

Результаты эксперимента представлены в табл. 1. Несмотря на то, что любая экспозиция КВЧ приводила к увеличению продолжительности жизни, достоверны результаты получены при шестидесятиминутном облучении с л=7,1 мм и при тридцатиминутном с >„-5,6 мм. Шестидесятиминутное КВЧ-воздействие на длине волны ^.=7,1 мм было выбрано для расширенного радиобиологического эксперимента.

Теперь необходимо было выбрать интервал между КВЧ воздействием и ИИ. В табл. 2 представлены результаты наблюдений за выживаемостью мышей (за 30 дней) после 60 мин воздействия КВЧ (Л=7,1 мм), с последующим облучением животных рентгеновскими лучами в сублетальной дозе (5,1 Гр) с разными интервалами времени перерыва (2, 6 и 24 ч) после экспозиции КВЧ. Видно, что в группе облученных животных, не подвергавшихся КВЧ-воздействию, гибель за 30 дней составляла в среднем 49%, т. е. находилась в пределах ЛД50/зо- КВЧ воздействие модифицировало этот показатель следующим образом: рентгеновское облучение сразу после окончания воздействия КВЧ снижало уровень гибели на 25%, если облучали через 2 ч, этот эффект еще более усиливался. В то же время 6-часовой интервал между КВЧ и рентгеновским облучением сопровождался снижением выживаемости животных (до контрольного уровня) и протекторный эффект не был получен. Однако,* радиозащитный эффект возрастал, если облучали животных через 1 сут после КВЧ-воздействия. В другой модели эксперимента ра-диомодифицирующее воздействие КВЧ изучалось при локальном облучении животных в области груди (в течение 60 мин с Х.=7,1 мм и 30 мин с ¡1=5,6 мм). Результаты этого эксперимента показывают, что КВЧ-воздействие увеличивает процент выживших животных т. е. подтверждается радиозащитный эффект КВЧ, что указывает на системный характер КВЧ воздействия, статистически достоверных различий между локальным и общим КВЧ воздействием не выявлено.

Таким образом, в результате проведенных исследований было установлено, что КВЧ-воздействие за 24 ч или за 2 ч до радиационного облучения обладает выраженным радиозащитным эффектом, что позволяет рассматривать его в качестве нового профилактического средства обеспечения безопасности при чрезвычайных ситуациях радиационного характера (табл. 2).

Таблица 2

Влияние КВЧ-воздействия на выживаемость белых беспородных мышей-самцов, подвергнутых острому ИИ, от величины интервалов между воздействиями

Условия эксперимента Выживаемость через 30 сут, %

Интервал между окончанием КВЧ-воздействия и рентгеновским облучением, ч

0 2 6 24

Ложное облучение (п = 20) 95±5 - - -

КВЧ-воздействие (?1=7,1 мм; 60 мин; п = 20) 100 - - -

Ионизирующее облучение (5,1 Гр; п = 80) 55±5 50+5 45+5 45±5

Сочетанное воздействие: КВЧ и ИИ (п = 80) 70±5* 80±5* 45±5 75±5*

*- различия достоверны (р < 0,05) по сравнению с радиационным контролем

Для выявления радиозащитного эффекта КВЧ в широком диапазоне доз животных облучали на РУМ-17 в дозах 3, 4, 5, 6, 7, 8 и 9 Гр. Схема радиобиологического эксперимента: мышей (по 3 животных) облучали КВЧ (А,=7,1 мм) 60 мин, потом перерыв 120 мин и после перерыва рентгеновское облучение. Одновременно в те же экспериментальные дни контрольную партию мышей облучали только ионизирующем излучением в данном диапазоне доз. Наблюдения проводились в течение 30 дней, было проведено три серии экспериментов. Радиобиологический эксперимент показал, что по всей сетке доз применение КВЧ-воздействия ослабляет лучевое поражение, повышая выживаемость животных (табл. 3). Максимальный радиозащитный эффект наблюдался при дозах от 4 и 5 Гр (индекс эффекта 1,42 и 1,6 соответственно).

Таблица 3

Влияние КВЧ-воздействия (Х=7,1 мм; 60 мин) на 30 дневную выживаемость белых беспородных мышей-самцов, подвергнутых воздействию ИИ в различных дозах (п=20 в каждой группе)

ИИ,Гр Выживаемость, % КВЧ(60 мин)+интервал (2ч)+ИИ Выживаемость, % Индекс эффекта

3 80±5 3 90±5 1,13±0,01

4 60±5 4 85±5 1,42+0,05

5 50+5 5 80±5 1,60±0,1

6 40±5 6 55±5 1,38+0,05

Следующей задачей данного раздела было выявление лечебного действия КВЧ при радиационном поражении. Радиомодифицирующее влияние КВЧ различных экспозиций (30, 60 и 120 мин) и двух длин волн (Х=5,6 и 7,1 мм) изучалось для доз 4, 6 и 8 Гр при тех же условиях наблюдения. В данных условиях эксперимента (ИИ+КВЧ без перерыва) был получен противолучевой эффект КВЧ для Х=5,6 и 7,1 мм при экспозиции 30 и 60 мин только для дозы 4 Гр. Для доз 6 и 8 Гр такого эффекта получить не удалось. Доза 4 Гр была выбрана для дальнейшего изучения влияния КВЧ-воздействия на облученный организм животного.

Далее противолучевой эффект КВЧ (60 мин воздействия) изучали при различных интервалах его применения (30, 60, 120 и 180 мин) после действия ИИ в дозе 4 Гр. Лечебный эффект был получен для длины волны 7,1 мм при любых временных интервалах. Максимальный противолучевой эффект, был получен в интервале 60-180 мин. Для Х=5,6 мм лечебный эффект был меньше по величине чем для >.=7,1 мм, и был зарегистрирован при 30 и 180 мин интервалах между воздействиями (табл. 4).

Для определения терапевтической широты КВЧ-воздействия рассматривали время экспозиции воздействия как величину максимально переносимой дозы радиопротектора. Индекс эффекта статистически достоверно не изменялся при

экспозициях КВЧ 30 и 60 мин (для двух волн), увеличение времени воздействия КВЧ до 120 мин достоверно уменьшало его величину и нивелировало лечебный эффект от КВЧ воздействия (табл. 4).

В результате исследований, выполненных на данном этапе, было установлено, что лечебная эффективность КВЧ-воздействия, оцененная по критериям выживаемости облученных животных, проявлялась при различных вариантах сочетанного действия КВЧ и ИИ для дозы 4 Гр. Максимальный противолучевой эффект был получен в экспериментальной схеме: ИИ +1-3 ч + КВЧ (Х=7,1 мм; 60 мин), индекс эффекта - 1,5. Сенсибилизирующего действия КВЧ для дозы 4 Гр не было обнаружено.

Таблица 4

Влияние КВЧ-воздействия на 30 дневную выживаемость белых беспородных мышей-самцов, облученных в дозе 4 Гр, от условий применения КВЧ (п=10 в

каждой группе)

Условия эксперимента Экспозиция КВЧ излучения, мин Интервал между ИИ и КВЧ, мин Выживаемость, % Индекс эффекта

Радиационный контроль 0 0 60±5 1

КВЧ А.=7,1 мм 60 мин 30 +5 80±10 1,3±0,1

60 +5 80±10 1,3+0,1

120 +5 70±10 1,2±0,1

60 +30 80±5 1,33±0,05

60 +60 90±5 1,50±0,05

60 +120 90±5 1,50±0,05

60 +180 90±5 1,50±0,05

КВЧ А.=5,6 мм 60 мин 30 +5 80±10 1,3±0,1

60 +5 80+10 1,3±0,1

120 +5 60±10 1,00±0,1

60 +30 90+5 1,50±0,05

60 +60 70±5 1,17±0,05

60 +120 70±5 1,17±0,05

60 +180 90+5 1,50+0,05

Таким образом, в результате проведенных исследований было установлено, что КВЧ-воздействие до облучения и после радиационного воздействия обладает выраженным противолучевым эффектом, что позволяет рассматривать его в качестве нового лечебно-профилактического средства обеспечения безопасности при чрезвычайных ситуациях радиационного характера.

Влияние КВЧ-воздействия на состояние костномозгового кроветворения на количественный состав периферической крови облученных животных

Одними из первых экспериментов в области изучения биологической эффективности ЭМИ КВЧ были исследования влияния КВЧ на кровь и кроветворную систему млекопитающих. При однократном облучении целостного организма крыс КВЧ выявлена положительная динамика изменения клеточного состава периферической крови и стимуляция лейкопоэза, поэтому задачей данного раздела стало исследование морфологического состава крови крыс после воздействия КВЧ разными длинами волн (>.=5,6 и 7,1 мм) и при различных экспозициях воздействия (30 мин в течение 3, 5 дней). Получено постепенное улучшение состава крови к 14-м сут (наблюдается увеличение количества эритроцитов, лейкоцитов, и гемоглобина). Наблюдалось увеличение количества эритроцитов на 15%, лейкоцитов - 20% и гемоглобина - 10%.

Сочетанное применение КВЧ и рентгеновского облучения (4 Гр) крыс статистически достоверно (по отношению к радиологическому контролю) меняло морфологический состав крови облученных животных, по соотношению клеточного состава можно говорить о протекторном влиянии КВЧ: медленнее шло опустошение лейкоцитарной и эритроцитарной фракции крови (рис.1 и 2). Так, через 3 сут после облучения общее число лейкоцитов у животных, получивших КВЧ, составляло 35% от исходного уровня, что почти в 2 раза больше, чем в радиологическом контроле.

Через 5 сут уровень лейкоцитов у этих животных был на 15% выше, чем у радиологического контроля. Восстановление числа лейкоцитов до нормы у животных, защищенных предварительным КВЧ-воздействием, происходило к 14 сут эксперимента. Динамика содержания нейтрофилов и лимфоцитов в периферической крови облученных животных, получавших с профилактической целью КВЧ, практически полностью повторяла изменения, регистрировавшиеся при изучении общего числа лейкоцитов. Таким образом, наши данные подтверждают литературные об иммуномодулирующем действие ЭМИ КВЧ, которое проявляется в нормализации количественных показателей системы иммунитета.

Наиболее характерным признаком острой лучевой болезни, вызванной внешним облучением, является быстрое опустошение кроветворной ткани, особенно это характерно для максимально радиочувствительного лимфоидного ростка. Наряду с имеющимся широким спектром радиомодификаторов и гуморальных факторов, управляющих клеточной пролиферацией, в последние годы возрос интерес к биологическому действию неионизирующего излучения КВЧ-диапазона, поэтому задачей данной главы явилось установление возможности использования КВЧ-излучения в качестве радиопротекторного средства клеток костного мозга и органов, богатых лимфоидными клетками, при облучении животных.

~ после воздействия КВЧ длиной волны 5,6мм 30 минут в течение 5 дней,

после воздействия КВЧ длиной волны 7,1 мм 30 минут в течение 5 дней.

"""""после воздействия ИР в дозе 4 ГР.

■■" после воздействия сочетанного воздействия ИР в дозе 4ГР и КВЧ 5,6 мм (ЗОминут). после воздействия сочетанного воздействия ИР в дозе 4ГР и КВЧ 7,1 мм (ЗОминут).

сутки

Рис. 1. Динамика восстановления эритроцитов после действия ионизирующего излучения в дозе 4 Гр и КВЧ- воздействия (X — 7,1 мм)

сутки

Лейкоциты

" после воздействия КВЧ длиной волны 5,6мм 30 минут в течение 5 дней.

" после воздействия КВЧ длиной волны 7,1мм 30 минут в течение 5 дней.

"""после воздействия ИР в дозе 4ГР.

после воздействия сочетанного воздействия ИР в дозе 4ГР и КВЧ 5,6 мм (ЗОминут). после воздействия сочетанного воздействия ИР вдозе4ГР и КВЧ 7,1 мм (ЗОминут).

Рис. 2. Динамика изменения количества лейкоцитов в крови после действия ионизирующего излучения в дозе 4 Гр и КВЧ-воздействия (X = 7,1 мм)

В данном разделе работы использованы белые беспородные крысы. В трех сериях экспериментов животных подвергали общему однократному облучению в дозах 2, 4 и 6 Гр (п = 30 в каждой группе). Количество клеток в костном мозге и лимфоидных органах (по отношению к норме в %) определяли через 6ч- интерфазная гибель и 48 ч - максимальное опустошение (табл. 5).

Таблица 5

Количество клеток в костном мозге и лимфоидных органах (по отношению к норме) через 6 ч (интерфазная гибель) и 48 ч (максимальное опустошение) после облучения в дозах 2,4 и 6 Гр, %

Вид воздействия Время исследования, ч Костный мозг Тимус Селезенка

эритробласты Миелоидные тимоииты лимфоциды

2Гр 4Гр 6Гр 0 2Гр 4Гр 6Гр 0 2Гр 4Гр 6Гр 0 2Гр 4Гр 6Гр

ИИ 6 48 72,1 ±3,6 43,6 ±3,8 24,4 ±4,7 4,5 ±2,8 19,0 ±3,4 3,0 ±1,1 100 100 68,7 ±4,8 33,9 ±2,4 24,5 ±3,0 3,3 ±0,7 17,0 ±2,1 2,6 ±0,7 100 100 78,9 ±5,3 65,3 ±4,8 40,0 ±6,6 35,4 ±2,8 25,2± 3,7 13,3 ±1,5 100 100 77,8 ±3,4 57,3 ±3,7 49,0 ±2,0 31,9 ±2,8 34,0± 5,0 17,8 ±1,8

КВЧ 5,6 6 48 104 Ь5 103 ±3 105 ±4

КВЧ 7,1 6 48 107 ±6 106 ±5 107 ±5

КВЧ 5,6+ ИИ 6 48 52,3 ±3 4 11,4 ±1 1 10,8 ±1,1 75,1 ±3,7 39,0 ±2,2 29,4 ±3,4 8,6 ±0.8 21,1 ±1,8 84,9 ±5,5 74,4 ±4,8 42,4 ±5,4 36,4 ±з.о 29,1 ±3,7 13,8 ±1,5 84,4 ±3,7 73,8 ±3,8 66,8 ±3,3 31,7 ±2.8 36,4 ±3,3 20,2 ±1.5

КВЧ 7,1+ ИИ 6 48 53,2 ±3,2 14,1 ±1,5 10,1 ±1,1 77,3 ±3,8 39,2 ±2,2 38,9 ±2,8 7,6 ±1,5 19,4 ±2,2 3,3 ±1,1 87,2 ±5,4 72,2 ±4,8 62,4 ±4,7 39,8 ±3,4 33,8± 3,6 17,8 ±1,5 78,7 ±3,9 63,2 ±3,6 69,8 ±3,7 33,8 ±2,2 46,2± 3,4 20,4 ±2,2

(статистически достоверно р<0,05)

Рентгеновское облучение проводили на аппарате РУМ-17. За 2 ч до рентгеновского облучения, проводили КВЧ-воздействие (60 мин, К=5,6 мм и 7,1 мм) на крыс. В результате проведенных исследований установлено, что КВЧ-воздействие обладает радиопротекторной активностью в отношении клеток-предшественников гемопоэза у облученных крыс.

Результаты опытов показали, что основная убыль кроветворных клеток происходила в первые двое суток после облучения. Исключение составляет лишь изменение количества эритроидных клеток у крыс. После облучения крыс в дозах 2 и 4 Гр убыль эритроидных клеток максимальна через 24 ч. В связи с этим поражение эритроидных клеток у крыс при облучении в дозах 2 и 4 Гр изучалось в 1-е сутки. Сравнение радиочувствительности миелоидных клеток костного мозга и лимфоидных клеток селезенки и тимуса показало, что лимфоидная популяция сильно убывает при дозах 2 и 4 Гр, а дальнейшее увеличение дозы до 6 Гр количество лимфоцитов существенно не изменялось, видимо среди популяции лимфоцитов есть весьма радиочувствительная, которая погибает при меньших дозах. Максимально радиопоражаемый орган - это костный мозг (радиорезистентная популяция клеток невелика - не более 1%). Основная убыль клеточных пулов наблю-

далась в первые 6 ч (50-70%), убыль лимфоидных клеток во всех изученных органах к этому времени составляет 60-90%. Дальнейшее снижение количества клеток к 48 ч невелико. Существенных различий в радиочувствительности миелоидных клеток костного мозга и лимфоидных клеток тимуса и селезенки не обнаружено. Некоторые различия выявлены лишь в популяции высокорадиорезистентных клеток, наибольшее число которых всегда было в селезенке.

Облучение животных только ЭМИ мм-диапазона указывало на небольшую стимуляцию процесса кроветворения, выраженную в увеличении клеточности в этих органах (достоверных отличий нет). В условиях профилактического (за 2 ч до радиационного воздействия) применения КВЧ при всех изученных дозах ИИ достоверно повышало радиорезистентность животных, которая выражена и по критерию выживаемости животных, и по увеличению клеточности кроветворных органов, опустошение данной ткани наступало в более поздние сроки после облучения. Длина волны КВЧ-воздействия, при облучении животных 6 Гр, при анализе уровня поражаемое™ селезенки, тимуса и костного мозга, не являлась решающим фактором (достоверных отличий нет). При дозах 2 и 4 Гр, максимальный протекторный эффект, от предварительного воздействия КВЧ на облученных животных, наблюдался у миелоидных элементов костного мозга 1 1-16%, для тимуса и селезенки он составил 10-15% и сохранялся до 48 ч. Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о чувствительности кроветворных клеток к действию КВЧ и подтверждают сведения о влиянии излучения на иммунологические процессы.

Влияние КВЧ-воздействия на состояние клеточных структу р лимфоцитов и тимоцитов при облучении in vivo

Гибель животных при сублетальном облучении ионизирующей радиацией обусловлена главным образом поражением кроветворных тканей, приводящим к тяжелым нарушениям иммунной и ряда других защитных систем организма, поэтому нашей дальнейшей задачей явилось изучение влияния сочетанного действия ЭМИ мм-диапазона и ИИ на состояние иммунных клеток (тимоцитов и лимфоцитов) лабораторных животных (белых беспородных крыс-самцов, весом 160±10г). Под влиянием КВЧ-воздействия может сохраниться значительная часть клеточных форм системы кроветворения, которые в свою очередь необходимы для усиления радиационного иммунитета и выживания организма при развитии лучевой болезни. Следует, однако, отметить, что остается неясным конкретный механизм влияния КВЧ на эти процессы. В связи с этим выясняли, как влияет ЭМИ КВЧ на интерфазную гибель тимоцитов, полученных от интактных крыс, и от крыс, облученных рентгеновскими лучами в дозе 4 Гр.

Шестидесятиминугное КВЧ-воздействие приводило к увеличению доли пикнозов в тимоцитах крыс, но по истечении 16 ч содержание пикнозов снижалось до уровня биологического контроля (табл.6). При рентгеновском облучении (4 Гр) и при сочетанном воздействии (КВЧ+интервал 1 ч+ИИ) наблюдалось возрастание пикнозов, причем через 1 ч при сочетанном воздействии эта величина

на 28% превышала таковую в радиологическом контроле. Однако, к 16 ч эта величина уменьшалась на 30% и эта тенденция сохранялась через сутки.

Таблица 6

Влияние КВЧ-воздействия (60 мин) на количество пикнозов в тимусе крыс, подвергнутых рентгеновскому воздействию в дозе 4 Гр

Вид воздействия Кол-во пикнозов Кол-во пикнозов Кол-во пикнозов

через 1 ч после через 16 ч после через 24 после

воздействия, % воздействия, % воздействия, %

Биол. контроль 6±1,3 4,9±0,8 5,3±1,1

Ложное облучение 10±2,1* 7±1,8 5,7±1,1

КВЧ-облучение . 12±2,5* 5,0±1,4 5,4±1,1

Рентгеновского облучение 29±4,2* 26,1±3,0* 19±3,7*

Сочетанное воз-

действие: КВЧ и рентгеновское облучение (через 1 ч) 35±8,2** 17,3±2,5** 12,7±3,1**

* - р<0,05 по сравнению с биол контролем

** - р<0,05 по сравнению с радиационным контролем

Полученные результаты позволяют предположить, что клетки, подвергнутые ионизирующему облучению in situ, в результате предварительного КВЧ-облучения быстрее элиминируются из клеточной популяции, а быстрое устранение погибших клеток из облученных тканей является важной предпосылкой интенсивной регенерации этих тканей, т. е. КВЧ-воздействие ускоряет процесс разрушения поврежденных радиацией клеток.

Результаты, полученные при изучении процесса взаимодействия генетического материала тимоцитов с флуоресцентным зондом акридиновым оранжевым (АО) 'подтвердили данное предположение (табл. 7). На фоне общего повышения флуоресценции АО, обусловленного радиационным повреждением ядерного материала тимоцитов, наблюдалось еще большее усиление интенсивности флуоресценции при комбинированном действии ИР и КВЧ-воздействия. Особенно ярко это выявлялось при регистрации флуоресценции в области 650 нм, которая обусловлена взаимодействием АО с однонитевыми нуклеиновыми кислотами, количество которых существенно возрастает по мере разрушения клеток. Таким образом, КВЧ-воздействие на тимоциты крыс, подвергнутых рентгеновскому облучению, приводило не только к ускорению гибели тимоцитов, но и к усилению связывания АО с их ДНК, что, возможно, свидетельствует о деспирализа-ции последней.

Гибели клеток предшествуют изменения состояния их клеточной поверхности, поэтому далее мы изучали такие характеристики тимоцитов крыс, как степень их адгезивности, относительное содержание РОК и долю макрофагов, со-

держащих захваченные тимоциты. Падение доли жизнеспособных тимоцитов (на что указывало возрастание пикнозов - табл. 6), после ИИ сопровождалось достоверным снижением доли розеткообразующих тимоцитов (от 48% до 36%), что является признаком гибели незрелых радиочувствительных форм тимоцитов. Такой показатель, как доля адгезивных клеток имеет большой экспериментальный разброс, что, очевидно, характеризует индивидуальные колебания исследуемого параметра. Захват тимоцитов макрофагами у облученных животных не отличался от контроля, что может быть связано с интенсивным фагоцитозом погибших клеток в органе, уже осуществившемся за 24 ч постлучевого периода. В популяции клеток, при сочетанием облучении, падение доли АРОК на 10% меньше, чем это имело место при рентгеновском облучении животных, т. е. наблюдалась большая сохранность розеткообразующих структур, что может свидетельствовать о радиопротекторном эффекте КВЧ-воздействия для мембранных структур. Определенное значение имеет и модификация адгезивных свойств тимоцитов, которая обусловлена главным образом развитостью клеточной поверхности (числом микроворсинок, наличием рецепторов фибронектина и др.). При КВЧ-воздействии имеется тенденция к повышению доли адгезивных тимоцитов на фоне существенного снижения данного показателя в клетках у облученных крыс.

Таблица 7

Влияние КВЧ-воздействия (60 мин) на изменение состояния ядерного материала тимоцитов крыс, подвергнутых рентгеновскому воздействию в дозе 4 Гр (% к биол. контролю)

Вид воздействия Интенсивность флуоресценци и АО при \= 530 нм Интенсивность флуоресценци и АО при А,= 650 нм Коэффициент поляризации АО, встроившего в клетки

Ложное облучение 106±3 107±5 98±2

КВЧ-облучение 127±3 141±3 86±2

Рентгеновского облучение (анализ через 24 ч) 156±7* 182±14* 94±2*

Сочетанное воздействие: рентгеновского облучения и КВЧ (анализ через 24 ч) 167±9** 218±12** 88±6**

* - р<0,05 по сравнению с биол. контролем

** - р<0,05 по сравнению с радиационным контролем

Изменения свойств клеточной поверхности тимоцитов как после КВЧ-воздействия, так и после ИИ были обнаружены также с помощью разделения клеток двухфазной системе, сформированной на основе полиэтиленгликоля и декст-рана. Коэффициент распределения клеток в двухфазной системе при всех типах воздействия снижался: на 32% при ИИ, на 25% при КВЧ, при сочетанном действии КВЧ+ИИ на 17%. Чтобы ответить на вопрос, чем обусловлены вышеизложен-

ные изменения исследованных биофизических параметров, свидетельствующих об изменении мембранных структур, было предпринято изучение спектров собственной ультрафиолетовой флуоресценции (УФФ) тимоцитов, облученных КВЧ и ИИ животных (табл. 8). В данном исследовании наблюдалось увеличение УФФ на 15 и 27% соответственно. Эта тенденция сохранялась и усилилась при сочетанном эффекте этих двух агентов. Эти данные коррелируют с оценкой поверхностного заряда с помощью двухфазной водной полимерной системы. Полученный эффект свидетельствует о повышении поверхностного заряда клеток, что может быть обусловлено либо сильным изменением структуры клеточных мембран, либо снижением в популяции тимоцитов клеточных форм с меньшим поверхностным зарядом. Существенные субпопуляционные изменения в тимусе только при одном КВЧ воздействии мало вероятны, но очевидны при ИИ в дозе 4 Гр. Увеличение интенсивности УФФ, коэффициента поляризации УФФ с одновременным длинноволновым сдвигом УФФ и уменьшением светорассеяния может указывать на существенные конформационные перестройки клеточных мембран тимоцитов. Однонаправленность изменений большинства обсуждаемых показателей после обоих видов излучения, которое усиливается при их сочетанном действии, является слабым аргументом в пользу защитного характера действия КВЧ-облучения на тимоциты на уровне клеточных структур. Наиболее вероятным механизмом радиопротекторного действия КВЧ остается усиление элиминации поврежденных лимфоидных клеток, однако как влияет КВЧ на клеточные структуры не поврежденных ИИ лимфоидных клеток пока не ясно.

Таблица 8

Влияние КВЧ-воздействия (60 мин) на изменение биофизических характеристик тимоцитов крыс, подвергнутых рентгеновскому воздействию в дозе 4 Гр

Вид воздействия Интенсивность УФФ Х.=335 нм Отношение ин-тенсивностей при 320/360 нм Коэффициент поляризации УФФ

Биол. контроль 100±1 100±8 100±6

КВЧ-облучение 115±4 87±13 109±7

Рентгеновского облучение (анализ через 24 ч) 127±5 100±7 109±3

Сочетанное воздействие: КВЧ и рентгеновское облучение (анализ через 24 ч) 140±10* 99±6 114±5*

* - р<0,05 по сравнению с радиационным контролем

Также были проанализированы параметры светорассеяния лимфоидных клеток: интенсивность светорассеяния (190) и величина мутности (т). Параметры светорассеяния чувствительны к изменениям клеточных характеристик, происходящих при облучении (клеточный размер, гетерогенность популяции и внутренней структуры клеток и др.), а их измерения занимают немного времени. Поэтому применение метода светорассеяния для целей биологической индикации

лучевого поражения представляется перспективным. Кроме того, чувствительность метода достаточна чтобы в динамике (при разных дозах облучения и разных временах регистрации пострадиационных эффектов) фиксировать протекторный эффект КВЧ.

В качестве объекта исследования в работе использовались лимфоциты крови и тимуса лабораторных животных (крысы). Оптическая плотность О (мутность т=2,3 Э/Ь) клеточной суспензии (оптическую плотность измеряли вне полосы поглощения) измеряли на спектрофотометре при длине волны ?*=500 нм, с использованием экранов, снижающих величину апертуры угла регистрации. Интенсивность света, рассеянного суспензией клеток под углом 90° к направлению падающего пучка света (Ьо), измеряли на флуоресцентных спектрофотометрах в кюветах для светорассеивающих образцов.

Объектами исследования в работе явились лимфоциты периферической крови и лимфоциты тимуса (тимоциты). Большая часть лимфоидных клеток гибнет в течение первых суток после облучения. Кроме этих общих свойств существуют некоторые отличительные особенности этих популяций, заставляющие рассматривать их отдельно при изложении и обсуждении полученных результатов: тимоциты исходно представляют более гетерогенную по размерам и морфологии популяции, чем лимфоциты, что может отражаться на значении параметров светорассеяния.

На рис. 3 представлены изменения параметров светорассеяния лимфоцитов: мутность (т/1М)о/к и интенсивность светорассеяния - (190/М)о/к от дозы (дозы 1, 2, 3,4, 5,6, 7 и 8 Гр) через сутки после облучения животных. Оба параметра возрастают линейно при увеличении доз от 0 до 4 Гр, далее намечается выход на плато.

Параметры светорассеяния лимфоцитов крови

3 -------

2,5-----

012345678

Рис. 3. Зависимость мутности-(т/Ы)о/к и интенсивности светорассеяния (Ьх/ЬОо/к лимфоцитов крыс от дозы через сутки после рентгеновского облучения. По оси абсцисс - лоза облучения в Гр, по оси ординат - значения параметров (т/>!)о/к и (19оЛЧ)о/к в относительных единицах

На рис. 4 представлены изменения параметров светорассеяния тимоцитов: мутность (тПЯ)о/к и интенсивность светорассеяния - (19о/Ы)о/к для тимоцитов в интервале доз 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 и 8 Гр через сутки после облучения. Зависимость параметра (хЛМ)о/к от дозы, как и в случае лимфоцитов имеет вид кривой насыщения. Параметр (Г90/ТЧ?)о/к возрастает прямо пропорционально дозе в отличие от (т/Ы)о/к.

Параметры светорассеяния лимфоцитов тимуса

Рис. 4. Зависимость мутности-(т/Ы)о/к и интенсивности светорассеяния (Ьа/ЬОо/к тимоцитов крыс от дозы через сутки после рентгеновского облучения.

По оси абсцисс - доза облучения в Гр, по оси ординат - значения параметров (т/Ы)о/к и (19о/Ы)о/к в относительных единицах

После облучения в дозе 2 Гр наибольшее значение (х/Т\т)о/к и (19с/Ы)о/к наблюдалось через сутки после облучения; в дальнейшем оба параметра уменьшаются до контрольных значений к 5 суткам после облучения. При дозе 4 Гр (т/Ы)о/к и (19г/М)о/к также достигают наибольших значений через сутки после облучения, к контролю эти показатели приближаются на 10-е сутки после облучения (т. е. скорость восстановления зависит от дозы) в отличие от лимфоцитов, для которых восстановление до контрольных значений наблюдается на 15-е сутки после облучения в дозе 2 и 4 Гр.

Оба показателя (тЛ^)о/к и (190/Ы)о/к, во всех исследованных случаях изменяются однонаправлено: линейно возрастают при увеличении дозы облучения в интервале примерно от 0 до 4 Гр и далее наблюдается выход на плато (кроме (Ьо/Гф/к тимоцитов). Вид кривой насыщения характерен для зависимостей доза-эффект, описывающих многие радиобиологические процессы, в частности для некоторых биохимических реакций в тимоцитах, изменения которых так же достигают насыщения при определенной дозе излучения. В то же время следует отметить большее отличие от контроля параметров светорассеяния и более значительный линейный участок в зависимости от дозы излучения, чем для биохимических тестов, что может иметь значение для использования этих показателей в

целях биодозиметрии. Такое сравнительно раннее достоверное увеличение показателей светорассеяния по сравнение с контролем важно при возможном использовании этого теста для ранней диагностики лучевого поражения.

Изменение параметров светорассеяния при различных воздействиях может быть связано с изменениями следующих величин: клеточных размеров, формы, показателя преломления клеток, с изменением клеточной морфологии (размера и формы ядра, митохондрий, клеточных включений), с изменением гетерогенности клеточной суспензии. При внешнем воздействии одно или многие из этих характеристик могут меняться незаметно, но в сумме могут вызвать значительное изменение параметров светорассеяния суспензии (степень этих изменений зависит от угла измерения), которые будут нарастать от дозы и времени воздействия.

Собственные экспериментальные данные свидетельствуют о том, что средний размер и показатель преломления клеток в суспензии практически не меняется. Однако, морфологически облученные клетки отличаются от контрольных. Для тимоцитов показано, что они исходно состоят из субпопуляций, отличающихся по размеру, внутренней структуре, и в то же время, по радиочувствительности. После облучения соотношение между этими субпопуляциями изменяется, увеличивается гетерогенность популяции по размерам за счет появления в суспензии осколков и ядер разрушенных клеток. Таким образом, морфологические изменения и увеличение популяционной гетерогенности лимфоидных леток, вызывают изменение параметров светорассеяния, (причем для 190 большее, чем для т), а восстановление параметров светорассеяния до контрольных значения, отражает восстановительные процессы, происходящие на популяционном и клеточном уровне.

В результате исследований, выполненных на следующем этапе, было установлено, что параметры светорассеяния (т и Iлимфоцитов и тимоцитов после КВЧ воздействия и при длине волны 5,6 мм и при длине волны 7,1 мм, незначительно изменяются только в первые сутки, далее данные достоверно от контроля не отличаются.

Экспериментальные данные светорассеяния (т и 1%) лимфоцитов и тимоцитов в условиях профилактического (за 2 ч до радиационного воздействия) применения КВЧ-излучения представлены в табл. 9 и 10.

Таблица 9

Влияние КВЧ воздействия 5,6 мм или 7,1 мм (30 мин) на параметры светорассеяния (т/Ы)0/к и (1<х/^0о/к лимфоцитов крыс, подвергнутых облучению ИИ в дозе 4 Гр (перерыв между воздействиями 2 ч)

Сроки исследования, сутки (т/К)»/« 5,6 мм + 4 Гр (тЛМи 7,1 мм + 4 Гр (ЬоЛМ)о/к 5,6 мм + 4 Гр 7,1 мм + 4 Гр

1 1,61±0,10 1,58±0,Ю 2,20±0,15 2,08±0,12

4 1,48±0,10 1,47±0,10 2,00±0,15 1,92±0,12

7 1,33±0,10 1,36±0,08 1,78±0,12 1,68±0,10

10 1,20±0,08 1,22±0,08 1,52±0Д0 1,39±ОДО

14 1,08±0,08 1,06±0,08 1,20±0,08 1,12±0,10

Таблица 10

Влияние КВЧ воздействия 5,6 мм или 7,1 мм (30 мин) на параметры светорассеяния (т/Т^)о/к и (^/Ы)^, тимоцитов крыс, подвергнутых облучению ИИ в дозе 4 Гр (перерыв между воздействиями 2 ч)

Сроки иссле- (т/Хи (хЯЧи (ЬоЛчи

дования, сутки 5,6 мм + 4 Гр 7,1 мм + 4 Гр 5,6 мм + 4 Гр 7,1 мм + 4 Гр

1 1,28±0,10 1,52±0,10 1,58±0,12 2,00±0,12

4 1,08±0,04 1,22±0,Ю 1,28±0,06 1,67±0,12

7 1,06±0,04 1,08±0,04 1,14±0,08 1,20±0,10

10 1,02±0,02 1,02±0,02 1,10±0,06 1,08±0,08

14 1,02±0,02 1,00±0,02 1,04±0,04 1,02±0,04

Анализ'данных параметров светорассеяния табл. 9 и 10 подтверждает радиопротекторный эффект КВЧ. Параметры светорассеяния лимфоцитов и тимоцитов облученных животных при сочетанном действии КВЧ и ИР (при Х=5,6 мм и ^=7,1 мм), восстанавливаются до контрольных значений раньше, чем у просто облученных животных при той же дозе радиации.

Влияние КВЧ и лучевого воздействия на процессы свободно-радикального окисления

В патогенезе развитием процесса неспецифического стресса, коим является КВЧ-воздействие решающую роль играют активация свободнорадикального окисления, нарастающий оксидантный дефицит и нейроэндокринная и иммунная дисрегуляция. Поэтому нашей дальнейшей задачей была оценка количества свободных радикалов (методом ЭПР) в тимусе - важнейшем органе лимфопоэза (табл. 11).

Таблица 11

Влияние КВЧ-воздействия на количество биохимически активных веществ

в тимусе крыс

Условия эксперимента МТГ ТР ЖСБ СР

Ложное облучение (анализ через 3 ч) 22±3 116±6 66±3 32±1

КВЧ-облучения (60 мин) (анализ через 3 ч) 23±4 113±5 35±3* 36±2*

Ложное облучение (анализ через 24 ч) 22±3 89±3 68±2 26±1

КВЧ-облучения (60 мин) (анализ через 24 ч) 26±2 85±3 64±4 29±2*

ТГ - метгемоглобин, ТР - трансферин, ЖСБ - железосодержащие белки, СР - свободные радикалы ♦-различия достоверно (р<0,05) по сравнению с контролем

Экспериментальные данные показали, что при КВЧ-облучении в ткани тимуса животных наблюдались достоверные изменения в количестве свободных радикалов на 13% через 3 ч и на 11% через сутки. Эти данные подтвердили количественный подсчет погибших тимоцитов у облученных животных (табл. 6).

Для получения возможности исследования неспецифической резистентности организма человека и животных разрабатывались различные методы. Поскольку, по нашим данным, оценка состояния АОС по величине тиолдисульфид-ного соотношения (ТДС), представляется значительно более предпочтительной, так как позволяет в динамике получать функциональную характеристику важнейшего звена общего биохимического механизма, дезорганизация которого ведет к неспецифическому клеточному повреждению, то в качестве меры антиок-сидантного действия было исследовано измерение уровня сульфгидрильных (SH) и дисульфидных'(8-8) групп и их соотношение (R=SH/S-S) в крови, которое отражает главным образом процессы окисления белков. Особый интерес представляет тот факт, что иммуномодулирующий эффект ЭМИ КВЧ проявляется при различной локализации воздействия, поэтому мы исследовали АОС организма при различной локализации воздействия КВЧ: голова, грудь и область крестца. Наиболее выраженный эффект действия наблюдался на область грудины, максимальные изменения исследуемых показателей - при времени воздействия 30 и 60 мин.

Далее был проведен радиобиологический эксперимент. Исследования проводились на белых беспородных крысах-самцах массой 150-180 г. В трех сериях экспериментов животных облучили дозами 2,4,6 и 8 Гр. Забор крови для анализа проводили из десны через 3, 24 и 48 ч, а так же через 30 дней после воздействия ИИ. Через 3 ч после лучевого воздействия тиолдисульфидный коэффициент падает, что говорит о снижении у всех экспериментальных животных уровня восстановительных эквивалентов. Дозовая зависимость через 3 ч после воздействия может быть описано практически линейным уравнением. По данным работы, этот метод можно использовать в биодозиметрии в ранние сроки после облучения, тем более, что его чувствительность позволяет работать с неинвазивными пробами. Тиолдисульфидное состояние через 24 и 48 ч после облучения во всех группах обследованных животных, кроме получивших 8 Гр, находится на некотором устойчивом плато. У группы животных, облученных дозой 8 Гр, наблюдается сдвиг тиолдисульфидного состояния в сторону окисления.

Через 30 сут после радиационного воздействия у выживших животных (доза 2 Гр. - 10шт., 4 Гр. - 6шт.; 6 Гр. - 1шт., 8 Гр. - 0) наблюдается восстановление тиолдисульфидного состояния: у животных 1 группы происходит практически полная нормализация исследуемых параметров, а для животных 2 группы имеется выраженное нарастание тиолдисульфидного коэффициента за счет снижения в крови окисленных тиолов (табл. 12).

В табл. 12 представлены суммарные данные (грех серий экспериментов). Посчитаны X*, Sx, Z для коэффициента достоверности 0,95%, по формулам:

X* = £xi/n, Sx = (xmax - xmin), Z = R'(xmax - xmin).

Таблица 12

Влияние ИИ на состояние тиолдисульфидного равновесия в гемолизатах крови крыс (различные сроки наблюдения)

Время после облучения

доза 3 ч | 24 ч 48 ч

X* 8* г X* я* | г X* 3, г

Биол. контроль БН мМ/мл 14, 38 0,42 1,17 14,25 0,42 1,17 13,88 0,56 1,56

ББ мМ/мл 4,44 0,63 1,75 4,88 0,28 0,78 4,81 0,35 0,98

ЗН/БЗ 2,93 0,2 1,76 2,95 0,22 0,62 2,93 0,25 0,7

2 Гр БН мМ/мл 14,17 0,63 2,01 1*1,5 1,47 4,69 11 0,84 2,68

ББ мМ/мл 5,75 0,21 0,67 6,17 0,32 1,01 7 0,42 1,34

ЗН/БЭ 2,43 0,17 0,54 1,87 0,29 0,94 1,57 0,21 0,67

4 Гр БН мМ/мл 12,67 0,21 0,67 11,67 0,42 1,34 10,5 0,42 1,34

ББ мМ/мл 6,42 0,53 1,68 7,58 0,95 3,02 7,62 0,11 0,34

БН^ 2 0,17 0,54 1,53 0,17 0,54 1,4 0,13 0,4

6 Гр БН мМ/мл 11,67 0,42 1,34 10,67 0,42 1,34 11,67 0,42 1,34

ББ мМ/мл 7,33 0,63 2,01 10 0,63 2,01 11,67 0,42 1,34

ЗН/БЗ 1,6 0,08 0,27 1,03 0,08 0,27 9,63 1,22 3,89

8 Гр БН мМ/мл 12,5 0,88 3,81 10,33 0,42 1,34 9,33 0,42 1,34

БЗ мМ/мл 10,25 0,44 1,91 11 0,42 1,34 12,33 0,63 2,01

БН/Бв 1,2 0,18 1,91 0,92 ) 0,06 0,17 0,76 0,07 0,23

Результаты исследований показывают, что по мере увеличения дозы облучения концентрация тиоловых групп в крови облученных животных прогрессивно снижается, тогда как концентрация дисульфидных групп нарастает, что находит свое отражение в уменьшении величины тиолдисульфидного отношения таких процессов и явлений как ритмы клеточного деления, интенсивность ведущих звеньев метаболизма, фагоцитов и механизмы иммунитета, барьерная функция биологических мембран, метаболизм ксенобиотиков, различные звенья патогенеза лучевой болезни и онкологических заболеваний, защитная мощность антиок-сидантной системы и непосредственно связанной с нею состоянием неспецифн-ческой резистентности организма человека и животных.

На рис. 5 представлены соответствующие зависимости для тиол-дисульфидного коэффициента Я. Зависимость Я от дозы, полученная при анализе крови, взятой через 3 ч после воздействия, носит практически линейный характер, что дает возможность надежно прогнозировать повреждающий эффект ионизирующего излучения.

Тиолдисульфидный коэффициент

0 2 4 6 8

Рис. 5. Значение тиолдисульфидного коэффициента в гемолизате крови крыс при различных дозах облучения

Зависимости, полученные при более отдаленных сроках после облучения (24 и 48 ч), носят более сложный характер и отражают более глубокие, в том числе морфологические изменения в организме, отличаются от предыдущей (имеют немонотонный характер, изломы и максимумы). Тем не менее, следует отметить, что до 4 Гр дозозависимый эффект коэффициента Я сохраняется.

Через 30 дней после радиационного воздействия у выживших животных (100%, получивших дозу 2 Гр; 60% - 4 Гр; 10% - 6 Гр; из получивших дозу 8 Гр выживших не осталось) тиолдисульфидный коэффициент Я существенно восстановился (в 1-ой группе - практически до исходного состояния, а для животных 2 и 3 групп имеется выраженное нарастание тиолдисульфидного коэффициента, в первую очередь, за счет снижения в крови окисленных тиолов).

На рис. 6 представлены экспериментальные данные тиолдисульфидного соотношения после сочетанного воздействия КВЧ (60 мин) и через 2 ч ИИ (4 Гр). Экспериментальные данные временной зависимости для дозы рентгеновского облучения 4 Гр подтвердили радиопротекторный эффект КВЧ, выявленный ранее. Величина тиолдисульфидного коэффициента после сочетанного воздействия КВЧ и ионизирующей радиации через 3, 24 и 48 ч возрастала на 15, 18 и 14% со-

ответственно. Величина тиолдисульфидного коэффициента контрольной группы после воздействия КВЧ через 3, 24 и 48 ч увеличена на 5, 10 и 9% соответственно.

Рис 6. Величина тиолдисульфидного коэффициента после сочетанного воздействия КВЧ (60 мин) и ионизирующей радиации (4 Гр через 2 ч) через 3, 24 и 48 часов

Применение метода тиолдисульфидного анализа в радиобиологическом эксперименте дает количественную надежность диагностики и возможность прогнозирования степени эффекта радиобиологического поражения в ранние сроки. Достаточно стабильные результаты ТДС позволяют сформулировать границы критерия тиолдисульфидного равновесия, характеризующего степень лучевой болезни и выявить протекторный эффект КВЧ.

Таким образом, результаты радиобиологического исследования после сочетанного действия КВЧ и ИИ позволяют сделать следующие выводы;

♦ наибольший радиозащитный эффект КВЧ-излучение оказывает при воздействии за 1-3 или 24 ч до ионизирующего облучения;

♦ локальное длительное КВЧ-воздействие повышает радиорезистентность лабораторных животных также как и общее облучение животного, что свидетельствует о системном характера данного вида воздействия;

♦ при КВЧ-воздействии в тканях тимуса крыс увеличивается количество свободных радикалов, которые могут играть значительную роль в естественной радиорезистентности животных и в процессе разрушения погибающих (радиочувствительных) тимоцитов;

♦ при КВЧ-воздействии наблюдается радиопротекторный эффект для клеточных мембран радиорезистентной фракции тимоцитов у облученных животных;

♦ КВЧ-воздействие повышает антиоксидантный статус облученного организма.

Влияние КВЧ воздействия на рост солидной опухоли Эрлиха у мышей

Исследование проводилось на мышах самках в возрасте 2,5-3 месяцев с массой тела 24-29 г. Опухоль Эрлиха была перевита внутримышечно в правое бедро введением 0,2 мл 10%-ной взвеси клеток асцитной опухоли Эрлиха в стерильном физиологическом растворе. В исследовании было две группы животных по 10 мышей в каждой. Мыши I группы после перевивки опухоли не подвергались никаким терапевтическим воздействиям. Мыши II группы, начиная через 48 ч после перевивки опухоли, ежедневно один раз в день в течение 60 мин подвергались КВЧ-воздействию Я=5,6 мм в течение 7 дней. С 5 дня после перевивки у всех мышей производилось измерение размеров опухоли с определением её объема по формуле: а-в2/2, где а - наибольший размер опухоли в мм, а в - перпендикулярный ему размер. Измерения опухолей производились ежедневно до 20 дня после перевивки (дня начала гибели мышей от опухоли). Регистрировались: количество потребляемого животными корма и выпитой воды, изменения массы тела животных и сроки их гибели. Противоопухолевая активность оценивалась: по проценту торможения роста опухоли (ТРО%), индексу роста опухоли и по выживаемости мышей. Ежедневные КВЧ-воздействия не отразились на общем состоянии мышей, их поведении, потреблении корма и воды. В группе мышей, подвергавшихся КВЧ-воздействиям, отмечалось умеренное торможение роста опухоли по сравнению с контролем, достигшее максимум 53% по отношению к контролю на 7 день после перевивки опухоли (рис. 7 и 8).

Рис. 7. Изменение среднего объема опухоли (мм3) после 5 дня перевивания опухоли

Индекс роста опухоли (ИРО) в группе мышей, подвергавшихся КВЧ-воздействию, составил 0,73. Это означает, что площадь под кинетической кривой роста опухоли у мышей этой группы составила 73% по отношению к контролю, однако эта разница не является статистически достоверной.

120% 100% 80% 60% 40% 20% 0%

Влияние КВЧ воздействий на динамику выживаемости мышей с солидной опухолью Эрлиха

□ контроль - ЕЗ КВЧ воздействие

Рис 8. Выживание мышей после перевивания опухоли

Результаты проведенных исследований показали, что 60 мин КВЧ воздействие Х=5,6 мм оказало умеренное задерживающее влияние на рост солидной формы опухоли Эрлиха. Торможение роста опухоли достигало максимум 54% и являлось статистически достоверным. Наблюдавшаяся задержка роста опухоли не отразилась на продолжительности жизни животных в группе, как по средней продолжительность жизни (СПЖ), так и по медиане продолжительности жизни мышей в контрольной и подопытной группах (статистически значимых различий не имелось), а лишь отдалила сроки массовой гибели. Полученные результаты позволяют предполагать, что КВЧ воздействие способно оказать умеренное ин-гибирующее влияние на опухолевый рост.

Влияние КВЧ и лучевого воздействия на клетки человека, растущие в культуре

На культурах нормальных фибробластов человека, растущих in vitro, изучали эффекты раздельного и комбинированного воздействия излучений в миллиметровом и рентгеновском диапазоне длин волн. Эффекты воздействия оценивали по индексу метки - проценту клеточных ядер, включивших ЗН-тимидин, что отражает уровень ДНК-синтетической активности в клетках культуры. Было показано, что после воздействия ИИ в дозе 5 Гр на фибробласты человека, растущие in vitro, в течение I2 ч после облучения происходит достоверная активация ДНК-синтетической активности, которая, затем, резко снижается к концу первых суток (рис. 9). При раздельном воздействии КВЧ в течение 5, 15 мин (КВЧ-5 и КВЧ-15), через 12 ч после облучения синтез ДНК в облученных культурах достоверно не отличался от уровня ДНК-синтетической активности в интактных клетках.

Воздействие КВЧ в течение 30 мин (КВЧ-30) приводило к существенным колебаниям в ДНК-синтетической активности на протяжении 3 суток, к концу которых уровень синтеза ДНК в облученных культурах достигал значений в интактных клетках. При комбинированном воздействии (ИИ+КВЧ-5 и ИИ+КВЧ-15) выявлены достоверные отличия в ДНК-синтетической активности облучен-

ных клеток, по сравнению с таковой при раздельном облучении и в интактных клетках.

отношение индексов метки

1.6-t

1 2 3

Рис. 9. ДНК-синтетическая активность в фибробластах человека, растущих in vitro, после раздельного и комбинированного облучения клеточных культур рентгеновскими лучами - ИИ, КВЧ в течение 5 мин - КВЧ (5), КВЧ в течение 15 мин - КВЧ (15), рентгеновскими лучами и КВЧ: ИИ + КВЧ (5) и ИИ + КВЧ (15)

По оси абсцисс - сроки после облучения: 1 - б ч; 2 - 12 ч; 3 - 24 ч. По оси ординат - относительные единицы, характеризующие отношения индексов метки (ИМ) в облученных культурах к значению ИМ в интактных клетках.

отношение индексов метки

Рис. 10. ДНК-синтетическая активность в фибробластах человека, растущих in vitro, после раздельного и комбинированного облучения клеточных культур рентгеновскими лучами - ИР, КВЧ в течение 30 мин - КВЧ (30), рентгеновскими лучами и КВЧ - ИИ + КВЧ (30), КВЧ и рентгеновскими лучами- КВЧ (30)+ ИИ

По оси абсцисс - сроки после облучения: 1 -12 ч; 2 - 24 ч; 3 - 48 ч; 4 - 72 ч. По оси ординат-относительные единицы, характеризующие отношения индексов метки (ИМ) в облученных культурах к значению ИМ в интактных клетках.

Комбинированное облучение ИИ+КВЧ-30 и КВЧ-30+ИИ приводило к резкому снижению уровня синтеза ДНК в облученных культурах через 24 ч после воздействия (рис. 10), который оставался низким на протяжении 3 дней и был, сопоставим с уровнем синтеза ДНК после раздельного облучения ИИ. Было выявлено, что при комбинированном облучении ИИ+КВЧ-5 и ИИ+КВЧ-15, через сутки после облучения синтез ДНК в клеточных культурах был ниже, чем в ин-тактных культурах, но выше, чем при раздельном облучением ИИ в 3 и 2,5 раза, соответственно.

Полученные нами результаты подтверждают возможность модуляции функционального состояния клеточных систем облучением КВЧ, а также демонстрируют протекторный эффект малых экспозицией КВЧ на клеточные культуры при комбинированном воздействии с рентгеновским облучением.

Результаты клинических исследований

Обоснование возможности применения КВЧ-терапии при лечении онкологических больных

Применение полей сложной конфигурации, а также системное лучевое воздействие (субтотальное и тотальное) при лечении больных злокачественными лимфомами (неходжкинские лимфомы), неоперабельных больных раком легкого, больных раком молочной железы и раком простаты с множественными костными метастазами, сопровождающимися сильным болевым синдромом, нередко ведет к миелодепрессии, снижению количества нейтрофилов, лимфоцитов, тромбоцитов и эритроцитов в периферической крови.

Известные стимуляторы кроветворения - гормоны коры надпочечников (преднизолон, преднизон и др.), карбонат лития, колониестимулирующие факторы либо небезразличны для организма в связи с вредными побочными эффектами, либо весьма дорогостоящи.

В нашей работе для стимуляции костномозгового кроветворения у онкологических больных, которым проводили комплексное химиолучевое лечение или радикальное облучение через крупные поля сложной конфигурации размером 40x40 см или системное тотальное или субтотальное облучение, применяли КВЧ-терапию. Лечение методом КВЧ безболезненно и вызывает приятные ощущения успокоения и расслабленности, участвует в механизмах антистрессорного действия. Поэтому данный метод был выбран в качестве поддерживающей терапии. Гемостимуляция КВЧ может быть использована как самостоятельный метод, однако возможна комбинация с фармакологическими препаратами При со-четанном воздействии наблюдается синергизм и взаимное мягкое усиление стимулирующего действия на костный мозг с уменьшением времени, необходимого для нормализации периферической крови.

ММ-терапия применялась также и для борьбы с местными острыми лучевыми реакциями и постлучевыми осложнениями. Зоны влажного эпидермита,

индурации подкожной клетчатки, лимфостаза, длительно незаживающих свищей, трофических язв подвергались лечению с КВЧ с длиной волны К=5,6 и 7,1 мм. Длительность и общее время лечения острых лучевых реакций и постлучевых осложнений соответствовало условиям гемостимулирующей терапии. В результате применения ММ-воздействия у 60% больных было отмечено улучшение показателей периферической крови после 6-8 сеансов. При этом существенно возрастало число лейкоцитов (преимущественно за счет нейтрофилов) и тромбоцитов. Уменьшение или ликвидация отека и боли наступала в зависимости от глубины и площади распространения поражения к 5-7 сеансу облучения.

У больных, при лечении которых КВЧ-воздействие не использовалось на фоне лучевой или химиолучевой терапии, количество лейкоцитов снижалось менее 3,0* 103 кл в 1мм3 крови у 32%, а менее 3,5х 103 в 1мм3 - у 52%. В группе больных, которым в лечебный комплекс включали КВЧ-воздействие снижение количества лейкоцитов ниже З,0х103 кл в 1мм3 периферической крови отмечено лишь у 6,5% пациентов, а менее З,5*103 в 1мм3 - у 23,6%.

Анализ данных по оценке лейкоцитарного резерва в тканях организма показал, что у всех больных, получавших курс лучевой терапии в послеоперационном периоде с поддерживающей КВЧ-терапией, количество лейкоцитов в периферической крови было больше 4500 кл в I мл в 49%, а в контрольной группе в 18% случаев. Токсические проявления (тошнота, рвота, головная боль, расстройство кишечника и т.д.) у больных, получавших ЛТ с КВЧ, или отсутствовали, или были не столь выражены, как в контрольной группе.

В результате применения ММ-воздействия у 60% больных было отмечено улучшение показателей периферической крови после 5-7 сеансов.

Для проведения мониторинга конкретного пациента и получения количественной информации о динамики изменения патологических процессов в организме и об эффективности схемы проводимого лечения был выбран набор неин-вазивных диагностический комплексов и ряд методов медико-психологического тестирования (авторские компьютеризированные программы), выбранных ранее. Неинвазивные методы контроля проводимого КВЧ-воздействия: электропунктурная диагностика: «Медискрин», «Рефлексомастер»; анализ ВСР (стандартные параметры);

эниотрон 3 - прибор, позволяющий измерять величину термодинамической энтропии в БАТ;

метод газоразрядной визуализации (метод-ГРВ) «Crown-TV». Все выбранные методы обследования оказались эффективными для решения этой задачи, но максимально удобным в экспериментально-лабораторных условиях оказался аппаратно-программный комплекс кардиоанализатор «Маркиз Э-01» и компьютеризированный комплекс «Медискрин». Данные методики позволяли получать количественную информацию об изменении в организме пациента в течении 5-10 мин, что было удобно при КВЧ-тестах.

С целью большей объективизации клинического эффекта КВЧ-терапии мы использовали ряд методов медико-психологического тестирования (авторские компьютеризированные программы): оперативную самооценку САН, определение уровня тревожности и тестирование по Айзенку (тест EPI). Результаты оперативной самооценки самочувствия, активности, настроения показали, что категории «самочувствие» и «активность» чувствительны к КВЧ тесту и коррелируют с параметрами ВСР. Статистически достоверных изменений по категории «настроение» не выявлено. В соответствии с результатами тестирования уровня тревожности волонтеры были разделены на три группы: с высоким уровнем тревожности (45 и более баллов), со средним уровнем тревожности (от 31 до 45 баллов) и с низким уровнем тревожности (30 баллов и менее). Результаты исследования показали, что после КВЧ-терапии происходит достоверное снижение уровня реактивной и личностной тревожности, в основном за счет волонтеров с высокими значениями. При анализе уровня тревожности исключались волонтеры, которые получили больше 5 баллов по шкале «лжи».

По результатам этого раздела были выбранные программы индивидуальной КВЧ-терапии для онкологического больного: частота, время воздействия и продолжительность между сеансами КВЧ-терапии, что помогало врачу при контроле за эффективностью схемы лечения.

Применение КВЧ-терапии в онкологической клинике

Онкологические заболевания, а также современные агрессивные методы лечения, являются типичными индукторами окислительного стресса, поставщиками свободных радикалов и ингибиторами эндогенных антиоксидантных систем. Поэтому мы изучали изменения антиокислительного статуса крови больных не-мелкоклеточного рака легкого во время проведения комбинированного лечения, сочетающего радикальную операцию и послеоперационную лучевую терапию (такое лечение представляет собой сочетание ряда сильнейщих стрессорных факторов), проводимую с одновременным использованием КВЧ-терапии. В настоящее время получены данные, позволяющие утверждать, что в основе терапевтического действия ЭМИ миллиметрового диапазона лежит не только его способность лимитировать развитие стресс-реакции, но и активация тиолди-сульфидного обмена, поэтому КВЧ-терапия и была предложена, как комплиментарная терапия при системном лечении HMPJ1.

Из 49 больных HMPJI, получавших комбинированное лечение, включающее оперативное лечение и ПОЛТ, 32 пациента дополнительно получали КВЧ-терапию. 17 пациентов получали только комбинированное лечение специфическое для больных НМРЛ. Все больные каждые 3 месяца проходили клинико-рентгенологический контроль.

Средняя продолжительность жизни наблюдаемых больных составила 28,04±1,8 месяцев, средний период до начала прогрессирования процесса и рецидива опухоли 28,4 ±0,6 месяцев, в 3 месяца выживаемость 98,9%, в 6 месяцев 95,5%, в 12 месяцев - 89,2 %, в 18 месяцев - 83,0%, в 24 месяца - 75,5%. Средняя

продолжительность жизни больных контрольной группы хирургического лечения 21,8±0,76 месяцев (р<0,05), фактическая выживаемость в 3 месяца 89,8%, в 6 месяцев 79,2%, в 12 месяцев 68,1%, в 18 месяцев 58,2%, в 24 месяца 52,7%.

В плазме крови были изучены содержание общих, белковых, небелковых БН-групп, ББ-групп и тиолдисульфитное соотношение (Л). Контрольную группу составили 8 пациентов НМРЛ, получавших комбинированное лечение без дополнительной КВЧ терапии. Было установлено, что у больных НМРЛ неспецифическая резистентность организма по показателям ТДК находится в состоянии глубокого угнетения (табл. 13). У больных НМРЛ, получающих комбинированное лечение на фоне КВЧ-терапии тиолдисульфидное соотношение имеет тенденцию к восстановлению, что свидетельствует о восстановлении системы анти-оксидатной защиты (табл. 14).

Таблица 13

Изменение содержания -БН-, -Б-Б- групп и Я (мМ/л) в крови больных НМРЛ

и практически здоровых волонтеров

Показатели тиол: дисульфидной системы Практически здоровые волонтеры (п=24) Больные НМРЛ (п=49)

-БН- 8,48±0,09 7,19±0,11*

3,26±0,05 5,21 ±0,07*

2,6±0,07 1,4±0,08*

* - статистически достоверно р<0,05

Изученные интенсивности свободнорадикального окисления в крови пациентов в разные фазы адаптации к воздействию лучевой терапии, установили значительные расхождения показателей у двух сравниваемых групп больных, подвергавшихся ПОЛТ. У больных, получивших КВЧ-терапию на фоне ПОЛТ значение Я превышает таковые у контрольной группы. У больных, не получавших КВЧ-терапию состояние Я смещено в сторону усиления реакций окисления. После применения КВЧ-терапии, в организме больного происходят существенные изменения в сторону нормализации антиоксидантной системы (табл. 14).

Таблица14

Изменение значения коэффициента Я в крови больных НМРЛ, после проведенного оперативного лечения, в процессе получения ПОЛТ

Терапия К Сроки наблюдения

При поступлении Через 5 дней Начало ПОЛТ 15 дней ПОЛТ При достижении СОД

Без КВЧ С КВЧ Без КВЧ С КВЧ Белк. 1,46*0,11 1,44±0,Ю 1,32*0,09 1,59*0,09 1,19*0,09

Белк. 1,32*0,09 1,66±0,Ю 1,84*0,11 2,33*0,12 2,25*0,10*

Н\б 1,49±0,12 1,51*0,09 1,48*0,07 1,40*0,09 1,35*0,07

Н\б 1,19*0,09 1,66*0,09 1,96*0,09 2,04*0,09 2,02*0,09"

Без КВЧ Сумм 1,46*0,07 1,45*0,08 1,34*0,08 1,57*0,08 1,22*0,08

С КВЧ Сумм 1,30*0,09 1,66*0,09 1,85*0,09 2,23*0,09 2,22*0,09*

* - статистически достоверно р<0,05

По результатам данного раздела работы сделаны следующие выводы: снижение концентрации БН-групп, повышение концентрации -Б-Б-групп в крови больных, оперированных по поводу НМРЛ, и как следствие уменьшение величины II, позволяют верифицировать развитие у них окислительного стресса, снижение защитной мощности антиоксидантной системы и, следовательно, снижение неспецифической резистентности организма. В процессе проведения ПОЛТ окислительный сдвиг И. остается на первоначальном уровне или незначительно изменяется, тогда, как одновременное с лучевым воздействием применение КВЧ-терапии приводило к постепенному увеличению концентрации -БН-групп, уменьшению содержания -Б-Б- групп, возрастанию Я, в конечном итоге, к нормализации окислительно-восстановительного состояния тиолдисульфидного звена антиоксидантной системы больных.

Общее результирующее заключение о внедрении КВЧ-терапии в онкологическую клинику выглядит так: общие физиологические свойства действия электромагнитным излучением миллиметрового диапазона (КВЧ-терапия) по защите кроветворной, клеточной и иммунобиологической систем позволяют этот вид воздействия использовать как радиопротектор при облучении организма ионизирующей радиацией и использовать его при чрезвычайной ситуации.

Практические рекомендации

> Для проведения мониторинга конкретного пациента и получения количественной информации о динамике изменения патологических процессов в организме и об эффективности схемы проводимого лечения рекомендуется использовать не только общеклинические анализы, но и анализ тиолдисульфидного равновесия (5Н)/(8-8).

> КВЧ-терапию целесообразно включать в схемы комплексного противоопухолевого лечения лекарственными препаратами и лучевой терапии, с целью повышения защитных свойств организма (обеспечение стабильности лейкоцитарной формулы, стимуляции иммунной системы) или улучшения переносимости химиопрепаратов, уменьшения выраженности токсических проявлений (тошнота, рвота, расстройства функции кишечника и др.), а также в качестве противовоспалительного и анальгизирующего средства.

ВЫВОДЫ

1. Под влиянием ЭМИ КВЧ (к=5,6 мм и А.=7,1 мм) средняя продолжительность жизни мышей увеличилась на 50-60%, что свидетельствует о благоприятном действии указанного фактора на общую резистентность организма облученного животного.

2. ЭМИ КВЧ (Х=7,1 мм) обладает выраженным радиозащитным действием, повышая выживаемость мышей, облученных в дозе СД50/30, на 45% (через 30 сут). В случае лечебного применения КВЧ выживаемость облученных животных увеличивается на 35%.

3. ЭМИ КВЧ способствует более быстрому восстановлению гемопоэза у облученных крыс. Максимальный протекторный эффект воздействия ЭМИ КВЧ (Л=5,6 и 7,1 мм при 60 мин) на облученных экспериментальных животных (при дозах 2 и 4 Гр) на 25% выше от исходных цифр по миеловдному ростку костного мозга и на 15% по количеству лимфоцитов в тимусе и селезенке (к 48 часам).

4. ЭМИ КВЧ (^=7,1 мм) обладает радиопротекторным эффектом на клеточные мембраны радиорезистентной фракции тимоцитов и лимфоцитов и ускоряет процесс разрушения поврежденных облучением радиочувствительной популяции лимфоидных клеток.

5. Под действием ЭМИ КВЧ (^=7,1 мм), у облученных крыс, нормализуется коэффициент тиолдисульфидного равновесия (SHJ/(S-S) в среднем на 15%, что свидетельствует о положительном влиянии фактора на проявление постлучевого оксидативного стресса.

6. ЭМИ КВЧ (Х=5,6 мм при 60 мин) тормозит рост развития солидной формы опухоли Эрлиха у мышей в среднем на 50% (к 10 дню после прививки).

7. Воздействие ЭМИ КВЧ (Х=5,6 мм при 30 мин) приводит к существенным колебаниям (до 50%) в ДНК-синтетической активности культуры нормальных фибробластов человека, растущих in vitro. Протекторный эффект получен для малых экспозиций КВЧ (15 мин).

8. КВЧ-терапия (А.=5,6 мм и Х=7,1 мм) у 76,5% онкологических больных, получавших облучение через крупные поля сложной конфигурации (40x40 см), препятствует снижению лейкоцитов периферической крови ниже ЗхЮ4 в I мм3.

9. Двухлетняя выживаемость больных раком легкого, получавших комплексное (хирургическое + лучевую + КВЧ терапию) составила 75,5% против 52,7% в контроле (р<0,05).

10. КВЧ-терапия обладает радиопротекторным действием при лучевой терапии: повышает неспецифическую резистентность организма, увеличивает продолжительность жизни облученных пациентов, снижает выраженность нежелательных побочных эффектов лечения.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

Статьи в изданиях по перечню ВАК:

1. Резункова, О.П. Изменения размеров тимоцитов во времени [Текст] / А.Ю. Сунгуров, О.П. Резункова // Цитология. - 1986. - Т. 28, № 7. - С. 758-761.

2. Rezunkova, O.P. Changes biophysical characteristics of rat Thymocytes with age / A.U. Sungurov, O.P. Rezunkova, T.M. Sharlaeva // Thymus. - 1988. - V. 12, № 2. -P. 265-267.

3. Rezunkova, O.P. Biophysical properties of the surface of thymocyte subpopulation / A.U. Sungurov, O.P. Rezunkova, A.M. Reshikov //. Thymus. - 1990. - V. 15, № 4.-P. 257-259.

4. Резункова, О.П. Комбинированное воздействие миллиметровых волн и ионизирующего излучения на культуры клеток [Текст] / Н.К. Белишева, А.Г. Ре-зунков // Вестник СПбГУ. сер.4. - 1994, вып. 1, № 4. - С. 129.

5. Резункова, О.П. О физическом механизме воздействия электромагнитных излучений малой интенсивности на живые организмы [Текст] / А.П. Жуковский, О.П. Резункова // М.: Наука, Биофизика. - 1994. - С. 750.

6. Резункова, О.П. Влияние лучевого воздействия на окисление белков крови крыс [Текст] / В.А. Дадали, О.П. Резункова, Г.А. Баскович, И.Н. Макарова, А.Г. Резунков, Л.Н. Галль // Научное приборостроение ИАП РАН. - СПб.: 1995. - Т. 78, № 5. - С. 484-487.

7. Резункова, О.П. Влияние магнитных полей на образование спиральных молекулярных структур [Текст] / А.Г. Сыромятников // Научное приборостроение ИАП РАН.-СПб.: 1998.-Т. 7, № 1-2, прил. 1.-С.21.

8. Резункова, О.П. Влияние электромагнитного излучения КВЧ диапазона на ан-тиоксидантную систему крови [Текст] / О.П. Резункова, C.B. Башук, Г.А. Баскович // Научное приборостроение ИАП РАН. - СПб.: 1998. - Т. 7, № 1-2, прил. 1.-С. 34.

9. Резункова, О.П. Информационная экология [Текст] / О.П. Резункова, H.H. Лавренко // Телекоммуникация, 2006. - № 8. - С. 46-43.

10. Резункова, О.П. Методология действия полей малых интенсивностей на биологические объекты [Текст] / О.П. Резункова, В.Г. Козлов, H.H. Лавренко // Телекоммуникация, 2007. -№ 6. - С. 44-48.

11. Резункова, О.П. Изучение КВЧ-воздействия на показатели вегетативной активности при солнечном затмении [Текст] / О.П. Резункова, В.В. Закурдаев, А.Г. Резунков // СПб.: Вестник Российской Военно Медицинской Академии, 2007.-№4.-С. 80-81.

12. Резункова, О.П. Метод регистрации энергетических и информационных затрат левого и правого полушария головного мозга человека при различных нагрузках [Текст] / А.К. Александров, О.П. Резункова, Г.Н. Дульнев, В.О. Матыцин, А.Г. Резунков, В.О. Седельников, М.В. Туманов, И.И. Турковский, B.C. Фомин, В.Н. Цыган, A.B. Чащин // Научно-технический вестник СПбГУ ИТМО. СПб.: СПбГУ ИТМО, 2007. - Вып. 35. - С. 44-47.

13. Резункова, О.П. Биофизический механизм воздействия миллиметрового излучения на биологические процессы [Текст] / О.П. Резункова // Научно-технический вестник СПбГУ ИТМО. СПб.: СПбГУ ИТМО, 2007. - Вып. 35. -С. 48-51.

14. Резункова, О.П. Влияние КВЧ-терапии на энергоинформационные процессы / О.П. Резункова, Г.Н. Дульнев [Текст] // Научно-технический вестник СПбГУ ИТМО. СПб.: СПбГУ ИТМО, 2007. - Выпуск 35. - С. 60-65.

Монографии

15. Резункова, О.П. КВЧ, радиация, онкология - теоретические и экспериментальные вопросы / О.П. Резункова, Л.И. Корытова [Текст] // СПб.: Общество «Знание», 2010.-124с.

16. Резункова, О.П. Методологические вопросы современной акупунктурной диагностики / О.П. Резункова [Текст] // СПб.: Общество «Знание», 2010. - 190 с.

17. Резункова, О.П. Противолучевые эффекты низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона. / О.П. Резункова [Текст] // СПб.: Общество «Знание», 2010. - 121 с.

Патент

18. Резункова, О.П. Способ определения показаний к проведению лучевой и хи-мотерапии [Текст] / О.П. Резункова, Л.И. Корытова, А.Г. Резунков, О.Н. Симонова // № 210121617/14; заявл. 31.05.2010.

Медицинская технология

19. Резункова, О.П. Способ определения показаний к проведению лучевой терапии [Текст] / Л.И. Корытова, О.П. Резункова, А.Г. Резунков, О.Н. Симонова // РНЦ «РХТ Росмедтехнологий»МЗиСР РФ, 2010.

Методические пособия и руководства

20. Резункова, О.П. Показания к использованию и клиническому применению КВЧ-терапии при лучевом лечении онкологических больных: Пособие для врачей [Текст] / Л.И. Корытова, О.П. Резункова, С.Д. Иванов // ЦНИРРИ МЗ РФ - СПб.: Изд-во Лицей, 1995.- 11с.

21. Резункова, О.П. Оценка состояния тиолдисульфидной системы и ее коррекция при лечении онкологических больных: Пособие для врачей [Текст] / Л.И. Корытова, О.П. Резункова, Е.Ю. Бусина // ЦНИРРИ МЗ РФ - СПб.: Изд-во Лицей, 2004. - 16 с.

22. Резункова, О.П. Ветеринарно-гигиенические основы применения ЭМИ КВЧ для профилактики лучевых поражений: Методические рекомендации [Текст] / О.П. Резункова // СПб.: СПбГАВМ, 2004. - 35с.

23. Резункова, О.П. Радиопротекторный эффект при применении электромагнитного излучения MM-диапазона (КВЧ терапия): Учебно-методические рекомендации [Текст] / О.П. Резункова// СПб.: СПбГАВМ, 2005. - 30 с.

24. Резункова, О.П. Разделение и анализ клеток биофизическими методами в радиобиологии: Учебно-методические рекомендации [Текст] / О.П. Резункова // СПб.: СПбГАВМ, 2005. - 28 с.

25. Резункова, О.П. Оптические методы анализа клеток в биофизике: Учебное пособие [Текст] / О.П. Резункова // С.-Петерб. гос. ун-т телекоммуникаций им. A.M. Бонч-Бруевича - СПб.: Изд-во ГОУВПО СПбГУТ, 2006. 47 с.

26. Резункова, О.П. Разделение и анализ клеток биофизическими методами: Учебное пособие [Текст] / О.П. Резункова // С.-Петерб. гос. ун-т телекоммуникаций им. A.M. Бонч-Бруевича - СПб.: Изд-во ГОУВПО СПбГУТ, 2006.79 с.

27. Резункова, О.П. Роль природного радиоактивного фона в управлении физиологическими процессами в живых системах: Учебное пособие [Текст] / О.П. Резункова, Е.З. Гак // С.-Петерб. гос. ун-т телекоммуникаций им. A.M. Бонч-Бруевича СПб.: Изд-во ГОУВПО СПбГУТ. 2008.34 с.

28. Резункова, О.П. Возможности КВЧ-аппаратуры для проведения поддерживающей терапии в онкологической клинике: Учебное пособие [Текст] / О.П. Резункова, Л.И. Корытова, О.В. Корытов // С.-Петерб. гос. ун-т телекоммуникаций им. A.M. Бонч-Бруевича - СПб.: Изд-во ГОУВПО СПбГУТ, 2008.22 с.

29. Резункова, О.П. Медицинские приборы, аппараты, системы и комплексы: Учебное пособие / О.П. Резункова, В.В. Закурдаев [Текст] // С.-Петерб. гос. ун-т телекоммуникаций им. A.M. Бонч-Бруевича - СПб.: Изд-во ГОУВПО СПбГУТ. 2009. 72 с.

Статьи в журналах, сборниках трудов, тезисы докладов

30. Резункова, О.П. УФ-флуоресценция церулоплазмина человека. Поляризационные и спектральные характеристики [Текст] / К.К. Туроверов, К.А. Машков, О.П. Резункова, И.М. Кузнецова, О.П. Борисова, А.С.Яковлев // Органич. Химия. - 1982. - Т. 8, № 9. - С. 1165-1172.

31. Rezunkova, O.P. Biophysical characteristics of thymocytes following irradiation. / O.P. Rezunkova, G.Y. Dybyr, A.K. Derne, A.U. Sungurov // Studia Biophysica. -1989.-V. 128, № 3.- P.199-205.

32. Резункова, О.П. О биохимическом механизме воздействия миллиметрового излучения на биологические процессы [Текст] / А.П. Жуковский, О.П. Резункова, C.B. Сорвин, О.В. Добролеж, М.А. Жуковский // М.: Миллиметровые волны в биологии и медицине. - 1993. -№ 2. - С. 36-42.

33. Резункова, О.П. Изучение модифицирующего влияния предварительного воздействия микроволн на выживаемость при лучевой болезни [Текст] / О.П. Резункова, А.Г. Резунков // М.: Миллиметровые волны в биологии и медицине. - 1993.-№2.-С. 59-62.

34. Резункова, О.П. О биофизическом механизме излучений на биологические процессы [Текст] / А.П. Жуковский, О.П. Резункова, C.B. Сорвин, О.В. Доб-

ролеж, M.А. Жуковский // M.: Миллиметровые волны в биологии и медицине. - 1995,-№5.-С. 64-65.

35. Rezunkova, O.P. Perspectives of the EMF-Exposure in Oncology / L.I. Korytova, O.P. Rezunkova, S.D. Ivanov // Annals of Oncology, Amsterdam, 1996. - V. 7. - Suppl. 5. -P. 139-140.

36. Резункова, О.П. Возможности КВЧ терапии в курсах химио-лучевого лечения / Л.И. Корытова, О.П. Резункова [Текст] // М.: Мат. докл. на III Съезде по Радиационным исследованиям. -1997. - С. 282-283.

37. Резункова, О.П. Тиолдисульфидная антиоксидантная система организма и он-копрактика / Л.И. Корытова, О.П. Резункова, Е.Ю. Бусина [Текст] // СПб.: Вестник РАМТН. -2003. -№ 7. - С.161-167.

38. Резункова, О.П. Тиолдисульфидный статус крови больных раком легкого, при комбинированном методе лечения [Текст] / Л.И. Корытова, О.П. Резункова, Е.Ю. Бусина // СПб.: Вестник Балт. Педаг. Академии. - 2003. - вып. 51. - С. 129-134.

39. Резункова, О.П. Радиация, КВЧ воздействие и кроветворение / О.П. Резункова, А.Г. Резунков // М.: Миллиметровые волны в биологии и медицине. -2003,-№2.-С. 60-63.

40. Резункова, О.П. Онкология, КВЧ и тиолдисульфидная антиоксидантная система организма / Л.И. Корытова, О.П. Резункова, Е.Ю. Бусина [Текст] // М.: Миллиметровые волны в биологии и медицине. - 2004. - № 1. - С. 40-47.

41. Резункова, О.П. Раздельное и комбинированное воздействия излучений миллиметрового и рентгеновского диапазона на клетки человека, растущие в культуре [Текст] / Н.К. Белишева, О.П. Резункова // М.: Миллиметровые волны в биологии и медицине. - 2004. - № 1. - С. 18-25.

42. Резункова, О.П. Информативность параметров светорассеяния лимфоидных клеток облученных животных [Текст] / О.П. Резункова // М.: Миллиметровые волны в биологии и медицине. - 2004. - № 3. - С. 40-48.

43. Резункова, О.П. Изменение параметров светорассеяния лимфоидных клеток при облучении животных / О.П. Резункова, А.И. Курило, // Межд. Вестник ветеринарии. - СПб.: 2004. - № 2. - С. 93-95.

44. Резункова, О.П. Изучение влияния КВЧ и ионизирующей радиации на организм животных [Текст] / О.П. Резункова// Межд. Вестник ветеринарии. -СПб.: 2004.-№2.-С. 96-99.

45. Резункова О.П. Динамика изменения радиопоражения животных в ходе реакций на однократное применение КВЧ воздействия до и после общего облучения ионизирующей радиации [Текст] / О.П. Резункова // М.: Миллиметровые волны в биологии и медицине. - 2005. - № 4. - С. 60-67.

46. Резункова, О.П. Применение КВЧ воздействия до общего облучения ионизирующей радиацией [Текст] / О.П. Резункова // Вестник ассоциации врачей ветеринарной медицины. - СПб.: 2005.-№ 1.-С. 38-42.

47. Резункова, О.П. Сравнение исследования динамики изменения радиопоражения животных в ходе реакций на однократное применение КВЧ и ионизирующей

радиации [Текст] / О.П. Резункова // Межд. Вестник ветеринарии. - СПб.: 2005. -№ 1.-С. 107-109.

48. Резункова, О.П. Вариабельность кардиоритма - диагностический параметр состояния сердечно-сосудистой системы [Текст] / О.П. Резункова // СПб.: Труды Всерос. научных чтений «Будущее сильной России - в высоких технологиях», 5-7.03.07. - С. 185-190.

49. Резункова О.П. Медицинская синергетика [Текст] / Г.Н. Дульнев, О.П. Резункова // Миллиметровые волны в биологии и медицине. - М.: 2006. - № 2 - С. 57-62.

50. Резункова, О.П. КВЧ-терапия - энергоинформационный процесс [Текст] / О.П. Резункова, Г.Н. Дульнев // Новые медицинские технологии новое медицинское оборудование, М.: Изд. Дом ПАНОРАМА. 2007. -№ 8. - С. 21-25.

51. Резункова, О.П. Объективизация воздействия сотового телефона на организм человека / О.П. Резункова, В.В. Закурдаев, H.A. Загустина /[Текст] / СПб.: Вестник Российской Военно Медицинской Академии, 2007. -№ 4. - С. 23.

52. Резункова, О.П. Оценка влияние солнечного затмения на функциональное состояние организма человека [Текст] / О.П. Резункова, А.Г. Резунков, H.A. Загустина // Гигиена и санитария, М.: 2008. - № 6. - С.45-46.

53. Резункова, О.П. КВЧ-реабилитация пострадавших от чернобыльской аварии [Текст] / О.П. Резункова, Л.И. Корытова, В.Н. Покровский // СПб, Труды 1 Межд. Форума «БИОФИЗТЕХНОЛОГИИ», 27-29.11.2008. - С. 73-76.

54. Резункова, О.П. Теоретические основы медицинской синергетики [Текст] / О.П. Резункова, Г.Н. Дульнев // Восточноевропейский журнал общественного здоровья, Киев: 2009. - № 3-4. - С. 51-56.

55. Резункова, О.П. Системная адаптометрия человека - современная версия метода электропунктурной диагностики [Текст] / О.П. Резункова, В.В. Закурдаев, Вл.В. Закурдаев, А.Г. Резунков // Восточноевропейский журнал общественного здоровья, Киев: 2009. -№3-4. - С. 164-169.

56. Резункова, О.П. КВЧ-терапии при комбинированном лечении у онкологических больных [Текст] / О.П. Резункова, Л.И. Корытова // Восточноевропейский журнал общественного здоровья, Киев: 2010. - № 1. - С. 164-165.

57. Резункова, О.П. О медико-биологических эффектах природного радиоактивного фона [Текст] / О.П. Резункова, Е.З. Гак // Научный вестник национального мед. ун-та им. А.А.Богомольцева, Киев: 2010. -№ 2-3. - С. 33-37.

Подписано в печать 21.01.2011 Формат 60x84/16

Объем 2 п.л. Тираж 100 экз. Заказ №

Типография «АНТ-Принт» 190005, Санкт-Петербург, Измайловский пр.29