автореферат диссертации по приборостроению, метрологии и информационно-измерительным приборам и системам, 05.11.17, диссертация на тему:Разработка безэталонного элементного анализа биологических проб при токсикологических испытаниях методом лазерной масс-спектрометрии с длиной волны λ = 532 НМ

Всероссийский научно-исследовательский и испытательный институт медицинской техники МЗ РФ

Р Гб од

2 2 ДЕК 2000

На правах рукописи УДК 615.47:621.384.8

МАКЕЕВ Евгений Викторович

РАЗРАБОТКА БЕЗЭТАЛОННОГО ЭЛЕМЕНТНОГО АНАЛИЗА БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРОБ ПРИ ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИХ ИСПЫТАНИЯХ МЕТОДОМ ЛАЗЕРНОЙ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ С ДЛИНОЙ ВОЛНЫ

А = 532НМ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

Специальность 05.11.17 «Медицинские приборы и системы»

Москва, 2000 г.

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском и испытательном институте медицинской техники МЗ РФ (г.Москва)

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

кандидат технических наук, Беняев Н.Е.

доктор технических наук, профессор Спиридонов И.Н.

кандидат биологических щук, Перова Н.В.

Ведущая организация: Межотраслевой НИЦ

биомедицинских технологий

Защита состоится: в/^ч^Йасов на заседании

диссертационного совета Д 074.46.01 во ВНИИИМТ МЗ РФ по адресу: 129301 Москва ул. Касаткина, дом 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИИИМТ.

Автореферат разослан:

Ученый секретарь диссертационного совета доктор технических наук, профессор

«¿У» :

Р-иОЪ /0

В.Г.Веденков

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1 Актуальность темы. Одной из актуальных проблем настоящего времени в мире является защита населения от вредного воздействия веществ, поступающих в организм через воздух, воду, продукты питания, а также контактирующие материалы. Наряду с соединениями органического и неорганического происхождения вредное влияние на организм оказывают отдельные элементы, в основном, тяжелые металлы, превышение допустимых норм которых вызывает рост различных заболеваний [Доценко В.А. и др., 1997; Егорова ГЛ. и др., 1998; Zaleski М. Sue et. al., 1997; Gariboldi J.C. et. al., 1998 и др.]. Применяемые в медицинской практике имплантируемые материалы из-за своего длительного контакта с организмом также способны оказывать токсическое влияние. Поэтому до постановки на производство новых материалов и изделий медицинского назначения в обязательном порядке проводятся испытания с определением санитарно-химических и токсикологических показателей [Система разработки и постановки продукции на производство. Медицинские изделия, Госстандарт РФ, 1994]. Важной частью санитарно-химических испытаний является количественное исследование миграции различных микроэлементов в кровь и органы. Используемые в медицине и биологии различные методы микроэлементного анализа биологических проб: атомно-абсорбциошшй, эмиссионный,

спектрофотометрический, а также масс-спектрометрический метод с ионизацией в индуктивно связанной плазме требуют проведения трудоемких подготовительных операций, как правило предполагающих разрушение органической структуры биологической пробы пугем мокрого или сухого озоления. Количественная интерпретация результатов требует обязательного использования стандартных образцов, что в случае исследования многокомпонентных биологических объектов представляет серьезные трудности из-за отсутствия эталонов. Большинство методов позволяют проводить только

поэлементный анализ и для получения данных по всем элементам с тpeбyeмof чувствительностью необходимо сочетать несколько типов приборов. Среда существующих инструментальных методов только метод лазерной масс-спектрометр™ (ЛМС) позволяет анализировать пробу одновремешш по веек составляющим элементам, не требует специальной подготовки образцов I обладает высокими аналитическими характеристиками при анализе металлов, геологических проб и т.п. [Быковский Ю.А., 1977-2000; Рамендик Г.И. , 19832000; и др.]. При исследовании биологических проб (БП) ЛМС методом характеристики анализа ухудшаются из-за плохого поглощения биологической матрицей традиционно используемого инфракрасного излучения - основной гармоники лазера на алюмо-итгриевом гранате (АИГ) с длиной волны ^1=1064 им. Получаемые данные не всегда отвечают требованиям, предъявляемым к методу анализа при исследовании миграции микроэлементов в органы и ткаш; экспериментальных животных при токсикологических испытаниях.

Таим образом, существует объективная необходимость улучшения характеристик ЛМС анализа применительно к биологическим пробам. Эгогс можно добиться, используя более коротковолновое излучение - 2-ую гармоника лазера на АИГ с генерацией в видимой области спектра и длиной волны Х2 = 532 нм. Такая модернизация позволит использовать метод как один из инструментов для оценки вредного воздействия тех или иных препаратов и изделий медицинского назначения на организм при решении вопроса об их использовании.

1.2 Цель исследования. Разработка и внедрение высокочувствительного безэталонного элементного анализа биологических проб с помощью лазерной масс-спектрометрии и использованием излучения с длиной волны А. = 532 нм, а также изучение миграции микроэлементов из имплантируемого материала б ткани и органы экспериментальных животных.

1.3 Задачи исследования.

1. разработать установку, позволяющую проводить безэталонный элементный анализ биологических проб методом ЛМС с длинами волн

= 1064 нм и %7 = 532 нм;

2. разработать методику приготовления эталона биологической пробы с введенными элементами для лазерного масс-сиектрометрического анализа и провести проверку содержания этих элементов другими возможными инструментальными методами;

3. провести ЛМС анализ эталона БП с использованием ?„! и Х2 для оценки коэффициентов относителыгой.чувствителыгости;

4. провести ЛМС анализ БП с использованием лазерного излучения с длинами волн и Х2 для определения характеристик взаимодействия излучения с биологической пробой;

5. использовать метод ЛМС с ^ = 532 нм для изучения миграции элементов из имплшгтата во внутренние органы экспериментальных животных в течение длительного срока и исследовать перераспределите макро- и микроэлементов в этих органах;

6. применить ЛМС анализ сХ2~ 532 нм для изучения миграции элементов в органы животных при проведении токсикологических испытаний материалов и изделий медицинского назначения.

1.4 Научная новизна.

1. разработана установка, сочетающая в себе лазерный масс-спектрометр с двойной фокусировкой, лазер на АИГ с удвоенной частотой излучения и компьютерную систему обработки информации, которая позволяет проводить ЛМС анализ биологических проб с использованием излучения сХг = 532 нм;

2. проведен высокочувствительный безэталонный лазерный масс-спектрометрический анализ биологических проб с использованием

излучения с длиной волны 7,2 ~ 532 нм на масс-анализаторе с двойной фокусировкой ЭМАЛ-2;

3. разработана методика приготовления биологического эталона с введенными добавками микроэлементов для количественного анализа БП с помощью ЛМС метода;

4. показано, что при плотности мощности ц ~ 1-108+4-108 Вт/см2 точность безэталонного ЛМС анализа БП с помощью Х2 = 532 нм повышается по сравнению с традиционно используемой длиной волны А.) = 1064 в результате уменьшения в 2-8 раз количества 2-х, 3-х зарядных ионов;

5. увеличена чувствительность ЛМС анализа БП (относительная до 10"5 масс. %) благодаря использованшо лазерного излучения с длиной волны Х2 = 532 нм;

6. проанализированы параметры мишени и лазерной плазмы при безэталонном ЛМС анализе БП и использовании Х\ - 1064 нм, = 532 нм;

7. разработана методика изучения миграции микроэлементов из имплангатов в ткани и внутренние органы экспериментальных животных посредством безэталонного количественного ЛМС анализа БП с использованием лазерного излучения с 532 нм;

8. изучены пути миграции микроэлементов из имплантата, изготовленного из никеля и никелевого сплава в ткани и органы экспериментальных животных в течение срока наблюдения от 2-х недель до 9-ти Месяцев;

1.5 Практическая значимость. Разработанная методика позволяет:

1. проводить безэталонный анализ любых биологических проб с относительной чувствительностью 10'5 масс. % без специальной подготовки проб (озоление, отделение мешающих элементов и др.), что приводит к значительному сокращению времени анализа, повышению его точности;

2. исследовать миграцию микроэлементов из имплантата в ткани и внутренние органы экспериментальных животных с чувствительностью и точностью, достаточной для оценки их потенциального воздействия на организм;

Результаты работы использованы при подготовке стандарта ГОСТ Р ИСО 10993.9-99 - «Основные принципы идентификации и количественного определения потенциальных продуктов деградации» Приложение В «Некоторые методы определения концентрации металлов и других элементов в медико-биологических пробах».

1.6 Апробация работы. Материалы диссертации доложены на научно-практических конференциях «Актуальные проблемы современной хирургии» г. Нальчик (июнь, 2000 г.); «Патофизиология и современная медицина» г. Москва (13-14 октября 2000 г.)

1.7 Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных

работ.

1.8 Объем н структура работы. Диссертация изложена на 137 страницах машинописного текста (без приложений) и состоит из введения, 4-х глав,, заключения, библиографического списка использованной литературы (212 источшшов) и приложений. Текст иллюстрирован 13 рисунками и 17 таблицами.

1.9 Основные положения диссертации, выносимые па защиту.

1. методика безэталонного элементного ЛМС анализа биологических проб и определения миграции микроэлементов го имплантата в ткани и внутренние органы экспериментальных животных с использованием лазерного излучения с длиной волны Яг = 532 нм;

2. результаты изучения изменения элементного состава тканей и внутренних органов экспериментальных животных в процессе миграции в них никеля из имплантата в течение срока наблюдения от 2-х недель до 9-ти месяцев.

II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Разработка оптической системы для ионизации биологических проб излучением основной и второй гармоник лазера на алюмо-иттрисвом гранате. Для проведения анализа БП методом лазерной масс-спектрометрии был использован масс-спектрометр с двойной фокусировкой ЭМАЛ-2 и лазерным источником ионизации пробы.

Источником лазерного излучения служил лазер ЛТИ-410 на алюмо-иттриевом гранате, активируемом неодимом. Основная гармоника такого лазера традиционно используется в масс-спектрометрии. Для компенсации энергетических потерь, возникающих в результате преобразования во вторую гармонику, излучатель состоял из двух каскадов: генератора 1 и усилителя 2 (рис.1). Коэффициент усиления, обеспечиваемый оптическим усилителем составлял 2-4. Преобразование лазерного излучения с Ä.j=1064 нм (основная гармоника) в лазерное излучение с длиной волны Äf=532 нм (вторая гармошка) проводилось с помощью кристалла дищцроарсенида цезия 2 (CDA) размером 10 х 10 х 40 мм, помещенного в герметизированную капсулу с защитными стеклами 3. Кристалл вырезан так, что излучение распространяется под углом 90° к оси (так называемый 90-градусный синхронизм). Эффект получения лазерного излучения с Х2 -532 им основан на нелинейной зависимости поляризации среды преобразователя частоты под действием интенсивного лазерного излучения.

Температура нагрева кристалла была подобрана таким образом, что, пропуская

\

через него лазерное излучение с =1064 нм на выходе мы получили не только излучение с этой длиной волны, но и излучение с длиной волны Х2 =532 нм.

Излучение проходило через светофильтр СЭС-23 (на рис.1 обозначен цифрой 5), после которого оставалось только излучение с длиной волны Х2 -532 им. После кристалла преобразования под углом к излучению было установлено зеркало 4 с малым коэффициентом отражетш, позволяющее малую часть луча выводить перпендикулярно в контрольную точку для контроля энергетических параметров.

Для уменьшения погрешностей, связанных с нестабильностью излучения [Оксенойд К.Г., 1992] и расширения возможностей проведения эксперимента была проведена юстировка всей лазерной системы и вывод кристалла преобразования на максимальные энергетические параметры. Вывод проводился последовательной оптимизацией угла расположения кристалла и регулировкой его температуры - все это выполнялось с помощью соответствующих регулировочных винтов.

Энергетические измерения проводились с помощью измерителя мощности лазерного излучения ИМО-4С, позволяющего проводить замеры с 10 %-ой относительной погрешностью. Для получения стабильной и максимальной энергии на выходе была проведена оптимизация системы генератор-усилитель. Конструктивно энергия лампы накачки генератора имеет плавный диапазон, в результате чего выходная энергия менялась от 5-та до 40-ка мДж. Энергия лампы накачки усилителя менялась дискретно: 12,5; 25; 37,5 и 50 Дж. Поэтому, для нахождения оптимальных параметров был снят ряд энергетических характеристик и построено семейство кривых зависимости выходной энергии системы генератор - усилитель от энергии усилителя для различных значений энергии лампы накачки усилителя. Максимальному порогу насыщения соответствовала энергия лампы накачки усилителя 25 Дж, что и явилось оптимальным для экспериментов. При длительности импульса излучения 5-15 не была получена энергия Е(Х})=90 мДж/импульс, 14 мДж/импульс. Все

элементы были жестко закреплены, все блоки являлись съемными, что позволяло манипулировать гармониками, а также с помощью светофильтров

была возможность получать излучение двух гармоник одновременно с различными энергетическими характеристиками.

В лазерной системе было применено двухконтурное устройство охлаждения. Питание осуществлялось от трехфазной 4-х проводной с нулевым проводом сети переменного тока напряжением 380/220 В, частоты 50 Гц. Потребляемая мощность была не более 8 кВт. Лазерная система работала в частотном режиме 14 Гц, так как при этой частоте были достигнуты максимальные энергетические параметры. Длительность импульса излучения составляла 5 - 15 не.

Р

ЭМАЛ-2 ч-

5 4 3 2 1 6

Рис.1 Схема лазерной системы.

1-генератор лазерного излучения; 2-усилитель; 3-нелинейный кристалл преобразования во вторую гармонику СОЛ; 4-зеркало; 5-светофильтр СЭС-23; 6 - электро-опттеский затвор; К-контрольная точка; ЭМАЛ-2-излучение. поступает в камеру источника ЭМАЛ-2.

Для ввода излучения основной и второй гармоник в камеру источника ЭМАЛ-2, а также минимизации энергетических потерь была разработана оптическая система. Основными требованиями, предъявляемыми к ней, являются уменьшение потерь при аберрациях, возникающих при прохождении луча, а также минимальность энергетических потерь на оптических элементах. Для того, чтобы уменьшить потери, число оптических элементов было сведено к

мишшуму и все они были просветлены, за исключением зеркал, так как просветляются только элементы, пропускающие излучение.

Для решения поставленных задач была принята оптическая схема, изображенная на рис.2. Выбранная схема сводила к мишшуму энергетические потери, сферические и другие аберрации (хроматические аберрации отсутствуют благодаря монохроматичности и когерентности источника). При диаметре входного пучка 2-3 мм она позволяет получить диаметр пятна фокусировки менее 50 мкм.

Для избежашш быстрого износа оптических элементов (в особенности зеркал) луч лазера проходит через телескопическую систему, состоящую из линз 1 и 2. В результате диаметр пучка увеличивается с 2-3 мм до 14 мм. Далее, отражаясь от диэлектрического интерференционного зеркала 3 излучение, проходя через вакуумное окно 4 попадает на призму 5, после которой с помощью линзы 6 фокусируется на мишени М.

2

Рис.2 Оптическая схема.

1 —линза 07,/= -20; 2—линза 023,/ = 80;

3 - зеркало диэлектрическое интерференционное на 30° и 050x5;

4 — пластина — вакуумное окно 030x5;

5 - призма 16 х 16 х 16;

6 - линза 022,5 и/ = 55; а = 60";

М—мишень; Материал- кварц КУ-1

Для ввода излучения с длинами волн Л.1=1064 нм, ?^=532 нм были изготовлен диэлектрические интерференционные зеркала с коэффициентом отражения, соответственно: К/ = 1,0; К2 = 0,6. Для возможности ввода четвертой гармоники с длиной волны Я,4 = 266 нм оптическая система была изготовлена из кварца марки КУ-1.

При изготовлении лито радиусы кривизны поверхностей рассчитывались по формуле тонкой линзы:

г^тгЬ ®

где: / - фокусное расстояние; п - показатель преломления; Я]^ - радиусы кривизны поверхностей.

В результате замены элементов, пропускная способность оптической системы (отношение энергии, выходящей из оптической системы, к энергии входящей) была увеличена в 1,5 раза по сравнению с пропускной способностью стандартной оптики, применяющейся в масс-спектрометре ЭМАЛ-2. Пропускная способность была определена с помощью измерителя мощности ИМО-4С. Величина аберраций в стандартной оптической системе прибора ЭМАЛ-2 была минимизирована из-за применения сдвоенных линз. В предлагаемой оптической системе величина аберраций не увеличилась за счет минимизации количества оптических элементов.

С помощью призмы на сканирующем поворотном столике лазерное излучение обеих длин волн было направлено в камеру источника ЭМАЛ-2. При переходе с одной гармоники на другую требовалось только менять светофильтры, а в оптической системе только диэлектрическое интерференциошюе зеркало 3. Для изменения энергии лазерного излучения в экспериментах также были использованы нейтральные светофильтры.

2.2 Разработка автоматизированной системы количественного анализа масс-спектров. В масс-спектрометрии с искровым и лазерным источником ионов фотографический метод регистрации все еще остается

12

эсновным, несмотря на известные его недостатки — большие затраты времени на обработку спектров и разрыв процесса анализа. Для оперативной, точной обработки фотопластинок, а также расчета весовых концентраций элементов эыла разработана автоматизированная система для обработки масс-спектров, ^регистрированных на фотоматериале (фотопластинка, фотопленка), шределены ее оптимальные параметры, уточнена конструкция и разработаны )екомендации по использованию данной системы для расшифровки масс-шектров БП. Применение данной автоматизированной системы позволило ;ущественно сократить (в 15-20 раз) время расшифровки масс-спектров по ;равненшо с ручным методом расшифровки, повысить достоверность и точность результатов анализа.

После завершения эксперимента на масс-спектрометре и проявления [ютопластинки необходимо идентифицировать линии масс-спектра и выделить и них аналитические. Идентификацию масс-изотопов проводили по положению [инии на фотопластинке. При постоянных величинах ускоряющего напряжения I напряженности магнитного поля масс-спектрометра, радиус кривизны раектории движения ионов в магнитном анализаторе пропорционален ладратному корню из отношения массы иона к его заряду (т/г). Поэтому 1елнч1шу (т/г)х, соответствующую неизвестной линии изотопа элемента X., (аходящейся на расстоянии Ь от опорной шиши (ш/г)о вычисляли но формуле:

Где к - коэффициент, зависящий от величины ускоряющего напряжения и гапряженности магнитного поля анализатора масс-спектрометра.

Величину коэффициента к можно определить, если идентифицировать по райней мере две линии в спектре. В случае однозарядных ионов формула (2)

фшшмает в ид: л/т7 = фп^ (3)

Сканируя линии двух-трех известных элементов (желательно на краях и в центре фотопластинки) вычисляли значения коэффициентов к для каждого спектра, зарегистрированного на фотоматериале по формуле:

Г-Ь г- (4)

После этого по каждому спектру вводили элементы, концентрацию которых необходимо оценить. Программа сканирования и предварительной обработки использовала полученные значения коэффициентов к. После сканирования нужного участка фотопластинки компьютер вычислял координаты пика линии, значения коэффициента пропускания пика и фона, одновременно включая сканируемую линию в базу данных (рис.3).

Таким образом процесс повторялся по всем выбранным элементам 1 каждом из спектров, зарегистрированных на фотоматериале. В конце работа программа выводила на экран все данные о концентрациях изотопов элементов в табличном виде по каждому спектру отдельно. На этом процесс качественное обработки заканчивался.

Программа количествешой обработки использовала данные о линиях масс-спектра, полученных в результате качественной обработки фотопластинки. После ввода в компьютер значений текущей даты анализа, номера/названия фотопластинки и названия эксперимента - значения аналитических сигналов, экспозиций, коэффициентов пропускания пика и фона линии, а также значение распространенности данного изотопа по каждому элементу отдельно представлялись в табличном виде. Расчет отношения изотопов проводился по методике суммирования аналитических сигналов с использованием эмпирической зависимости Халла с поправками на ширину линий и с учетом двухзарядных ионов. Расчет весовых и процентных концентраций в компьютерной программе может осуществляться как по методу внутреннего стандарта, так и по методу баланса В связи с тем, что введение внутреннего стандарта в биологические пробы является сложной задачей, предполагающей дополнительную нробоподготовку, в данной работе использовался метод баланса, при котором концентрация определяется суммированием аналитического сигнала и расчетом баланса всех компонентов пробы, предполагая, что сумма аналитических сигналов ионных токов всех элементов составляет 100 % [Крючкова О.И. и др., 1981; Потапов М.А. и др., ЖАХ, 38, 1983] (аналитический сигнал АС-, для данного элемента представляет собой сумму интенсивностей лштй всех изотопов с учетом поправки на реальную, ширину линий и чувствительности фотоэмульсии к ионам данной массы):

¿Л С, =100% (5)

¡.1

Далее находилась доля C¡ в %, приходящаяся на аналитический сигнал /-го

АС

элемента: С, =-'—100% (6)

±АС,

1-я

где: АС/ — аналитический сигнал /-го элемента;

л

л С, - суммарный аналитический сигнал всех элементов;

«-i

п - количество элементов в пробе.

Для расчета концентраций вводились поправки на многозарядные ионы, реальную ширину линий и отклик фотоэмульсии на массы.

2.3 Разработка методики подготовки биологических эталонов для элементного анализа. Для количественных оценок возможностей метода был исследован эталонный образец. Так как задача создания идеального биологического эталона крайне сложна, была создана модель, представляющая из себя усредненную пробу печени здоровой белой беспородной крысы с введенными в нее добавками элементов. Известное содержание этих элементов также было проконтролировано методом атомной абсорбции. Печень была выбрана, так как она является органом детоксикации и кумуляции микроэлементов и химических соединений.

Из брюшной полости контрольных ингактных животных извлекалась печень. От каждого образца печени отбиралось по одной доле, которые зажимались между предметными стеклами и высушивались в термостате при температуре 37°С до постоянного веса. Для статистического усреднения бралось органы от 5-ти разных животных. После просушивания пробы были измельчены и растерты в агатовой ступке. Высушенную, измельченную и растертую пробу усредняли. В пробу добавлялось известное количество нитратов эталонных элементов, растворенных в воде, в широком диапазоне концентраций (концентрация введенных элементов находилась на уровне » 1,0 -0,001 масс. %). Эталонными элементами являлись А1, Сг, Бе, №, Си, Zn, Аэ, А§, Бп, РЬ. Спектр изучаемых элементов был выбран в широком диапазоне масс (легкие, средние, тяжелые массы), чтобы получить наиболее полную информацию о возможностях метода. После чего пробу высушили в термостате при температуре 37°С до постоянного веса. Из полученной пробы были взяты 3 навески массой т и 0,2 грамма, которые для дальнейшего анализа спрессовывали в таблетки с помощью специальной формы и пресса под давлением 5000 Па. Изучение содержания введенных элементов методом

пгомной абсорбции было проведено сразу же после ЛМС анализа полученного »талона. Эталон был измельчен и растерт в агатовой ступке. Измельченная и )астертая проба была усреднена. Величину навесок пробы измеряли на весах шалитических "Sartorius MCI". Навеска пробы (0,5000-1,500 г) была помещена в шмический стакан вместимостью 50 мл. После добавления 25 мл азотной сиелоты, разбавленной 1:1, стакан был покрыт часовым стеклом и помещен на шектроплитку (на асбест). Кипячение проводилось до полного удаления дыма. Цалее раствор обрабатывался дважды 5 мл НС1 (хл. конц.) до полного удаления дама. Затем раствор был перенесен в мерную колбу вместимостью 100 мл. покровное стекло и стенки стаканчика были тщательно обмыты горячей водой. Тромывные воды были также перенесены в мерную колбу. Раствор был )хлажден до комнатной температуры, доведен до метки дистиллированной юдой, перемешан.

Известное количество добавленных элементов в пробе было проконтролировано методом атомной абсорбции. Измерение Fe, Ni, Си, Zn проводили в режиме "поглощение" на атомно-абсорбционном спектрометре тламенного типа "Квант-АФА". Измерение Al, Сг, As, Ag, Sn, Pb проводили на етомно-абсорбционном спектрометре с электротермическим графитовым атомизатором «Квант Зееман ЭТАА-233».Для градуировки приборов применяли специальные градуировочные зависимости абсорбции от концентрации.

2.4 Влияние длины волны лазерного излучения на процессы испарения и ионизации биологических проб. Процесс образования потока йонов в результате взаимодействия лазерного импульса плотности мощности q>!08 Вт/см2 с БП протекает постадшшо: сначала происходит нагрев вещества с последующим испарением, затем ионизация получившегося факела [Реди Д., 1974]. Процессы нагрева, ионизации и рекомбинации протекают практически все время, пока длится лазерный импульс. Степень нагрева образца прямо пропорциональна количеству поглощенной энергии. Для того, чтобы увеличить

коэффициент поглощения, нужно либо изменить структуру образца, либо длину волны взаимодействующего излучения. Изменение образца приводит к внесению различных примесей. Это является нежелательным, так как вносит дополнительную погрешность в результат.

В настоящее время существует ряд работ, посвященных изучению поглощения лазерного излучения биологическими средами [Тучин В.В., МФ, 4, 1997]. Исследования коэффициентов поглощения различного рода биоматериалов показывают, что они возрастают при уменьшении длины волны взаимодействующего излучения. Так, например, коэффициент поглощения ткани легких при переходе с длины волны X = 635 нм на длину волны X = 515 нм увеличивается с 8,1 см'1 до 25,5 см"1.

Для того, чтобы проследить зависимость поглощения биологической пробы от длины волны взаимодействующего с ней излучения, на спектрографе «СПЕКОРД М40» был прописан спектр поглощения печени крысы, напыленной на кварцевую пластинку (рис.4). Напыление проводилось в камере источника ЭМАЛ-2 путем лазерного воздействия на образец печени. Исходя из полученного спектра были рассчитаны коэффициенты поглощения для длин волн Л-1 =1064 нм и Х2 =532 нм, соответственно ÀfAi/)=4,M03 см"1; к(Лг)=6,9-Ю3 см"1. Резкое возрастание коэффициента поглощения при переходе в более коротковолновую область спектра показывает возможность улучшения характеристик метода применительно к БП при использовании лазеров с более короткой длиной волны излучения.

Для выяснения энергетических затрат при использовании разных длин волн было проведено определение порогов плазмообразоваши. Определение проходило в камере источника ионов ЭМАЛ-2. Пороговой считалась энергия, при которой в масс-спектрометре появлялся ионный ток. Исследовались два прозрачных вещества - динитрат целлюлозы и полистирол, выполненные в виде пластинок размером 20 х 20 мм и толщиной 0,5 мм, и одно непрозрачное -высушенная до постояшюго веса печень крысы (табл.1).

нм •

Рис. 4. Зависимость коэффициента поглощения печени крысы, напыленной на кварцевую пластинку от длины волны взаимодействующего с ней излучения.

Как видно из таблицы, чтобы возникла лазерная плазма, необходимо в 5 - 6 раз больше энергии излучения с A.i = 1064 нм, чем с %2 = 532 нм для всех веществ. Значительная разница в пороговых энергиях плазмообразовшшя не позволила проводить эксперимент с одинаковой энергией взаимодействующего излучения и различными длинами волн.

Таблица I

Энергия начала плазмообразовапия при взаимодействии сфокусированного лазерного излучения с веществом

(диаметр пятна фокусировки d = 50-80 мкм)

Длина волпы (нм) Энергия, необходимая для начала плазмообразовапия (мДж)

дшштрат целлюлозы полистирол иечепь крысы

Aj = 1064 нм 10,0 7,1 2,7

%г ~ 532 нм 2,0 1,4 0,5

= 266 нм 0,15 0,20 0,03

2.5 Лазериыи масс-спсктромстрическин анализ биологического эталона. ЛМС аналш биологического эталона проводился при фиксированном значении ионного тока I = 8-Ю'13 А и диаметре пятна фокусировки (I = 50 - 100 мкм, которые являются оптимальными для такого анализа с длиной волны излучения X) = 1064 нм [Арефьев И.М., Беняев Н.Е. и др., ЖАХ, 61, 1986]. Анализ с = 1064 им и Х2 - 532 нм проводился при одинаковых параметрах и выставленных в одно положение щелях масс-спектрометра. Для поддержания данного ионного тока потребовалась плотность мощности q взаимодействующего с образцом лазерного излучения, соответственно: д (А.]) = 9,5-108 Вт/см2, я (к2) = 2-108 Вт/см2. Для измерения диаметра пятна фокусировки использовалась фотобумага. Она размещалась в камере источника на месте мишени. Сфокусированный лазерный луч оставлял на фотобумаге соответствующие ожоги. Размер диаметра пятна определялся с помощью микроскопа. Максимальная экспозиция, необходимая для количественного определения всех элементов, присутствующих в биоэталоне, регистрируемая на кулонометре, входящим в состав ЭМАЛ-2 была равна Ота, = 5 НКл. Время импульса гим„ = 5+15 не, частота следования импульсов V = 14 Гц. В результате проведенных исследований были получены масс-спектры и количественные данные по содержанию элементов в эталоне (5 измерений) при длинах волн взаимодействующего излучения ?ч = 1064 ш и ^ = 532 нм. Для оценки правильности анализа были рассчитаны значения коэффициентов относительной чувствительности (КОЧ), которые показывают, на сколько различается рассчитанное содержание элементов от истинного по формуле [Феррар X., 1975]:

КОЧ(-)~-У

Г с гЬ.) /¿¿л

Чл /мс'К/-, ./ист

. у у

(7)

где (Су/Су)^ - отношение концентраций элементов X и У в основе Ъ, определенное масс-спектрометрически; (Сх/Су)ист - отношение истинных концентраций элементов X и У; С* ,СУ - концентрация элементов X и У в основе 2. Для того, чтобы оценить, не происходит ли сегрегация (отклонение

оотогшого состава получившегося иошюго пучка от состава исследуемого эбразца) на стадиях нагрева или ионизации, мы рассматривали КОЧ в ¡ависимости от удельной энергии атомизации каждого элемента (стадия нагрева - рис.5), а затем в зависимости от потенциала ионизации (стадия ионизации — оис.6). Как видно из рисунков, КОЧ отдельных микроэлементов располагаются каотичным образом и близки к единице. Отсюда можно заключить, что данные условия проведения эксперимента для длины волны Xi = 1064 нм оптимальны и три mix не происходит сегрегации ионов в зависимости от удельной энергии ггомизации и потенциала ионизации. При переходе же на Х2 = 532 нм сегрегации гакже не наблюдается. Среднее значение КОЧ для длины волны "кг ближе к ;дишще по сравнению с Xin равно, соответственно: <КОЧ> (h) ~ 0,85; <КОЧ> ?„2) = 0,91. Следовательно, при использовании лазерного излучения с к2 ~ 532 по сравнению с = 1064 нм нм, точность анализа увеличилась. Отклонение КОЧ в 1ределах Д = 5+15 % является удовлетворительным для концентраций 10°— 10'3 пасс. %.

2.6 Элемсптиый анализ биологической пробы с использованием >сиовной и второй гармоник лазера на алгомо-иттриевом гранате. Для

1учшего понимания процессов, происходящих при взаимодействии мощного 1азерного излучения с БП при смене длины волны, были исследованы сарактеристики такого взаимодействия - вынос массы вещества за выстрел, »ффекгивноеть ионизации и т.п., а также изучены масс-спектры. Для жсперимента также использовался образец сушеной печени здоровой белой беспородной крысы. Диаметр сфокусировашюго пятна на мишени составлял 80100 мкм. Вынос массы вещества определялся взвешиванием образца до и после жсперимента с помощью электронных весов фирмы «Sartorius MCI». Масс-лтектры регистрировали на фотопластинки «ILFORD Q2».

Неизменным параметром в эксперименте для обеих длил волн излучения тослужил ионный ток I, т.е. количество заряда, зафиксированног о кулонометром

. 1,5

¡а

8 у

о и

0,5

Рнс.5 Зависимость КОЧ от удельного потенциала атомизацни микроэлементов бноэталона

га

м

РЬ

А1

№

АВ

■И

к Бл Си

Сг

12 3 4

Удельный потенциал атомизацни, Эв

Ре

♦ КОЧ А|=1064 ц> о КОЧ Лг=532нм

X

Р1 О

Рнс.6 Зависимость КОЧ от потенциала ионизации микроэлементов

бноэталона

2

1,5 1

0,5 0

А1

Сг

РЬ№ —Ли--

£

2)1

л7 „ КОЧА,= 10641 0 КОЧЛ2=532Ш

-1-1 1-1 I-1-1-1-1

5,5 6 6,5 7 7,5 8 8,5 9 9,5 10

Потенциал ионизации, Эв

<КОЧ> (X,) = 0,85 <КОЧ> (Х2) = 0,91

масс-спектрометра в единицу времени. Не менялся также диаметр пятна фокусировки II и конфигурация масс-спектрометра (щели, напряжение анализаторов и т.п.) Чтобы получить наиболее полную картину процессов были проведены два исследования одного и того же вещества с различными значениями ионных токов I. Рассчитанные параметры процессов, происходящих в камере источника представлены в таблицах 2 и 3.

Таблица 2

Характеристики анализа при взаимодснсгвнн лазерного излучения с печеныо крысы и ионном токе I = 3,3-10'13 Л

Длина волны излучения к, нм 1064 532

Плотность мощности ч, Вт/см*1 5,0-Ю8 1,2-108

Регистрируемый за импульс заряд <3ЯМП, Кл 8-10"15 8-Ю'15

Вынос массы вещества за импульс Мим„, г МО"7 2-10'7

Эффективность ионизации Т1, относительные единицы 4-Ю'7 2-Ю"7

Таблица 3

Характеристики анализа при взаимодействия лазерного излучепия с печеныо крысы и иоппом токе I = 2,5-10"12 А

Длина волны излучения А., нм 1064 532

Плотность мощности ч, Вт/см'' 1,8-109 3,7-108

Регистрируемый за импульс заряд <3НМП, Кл 5,8-Ю"14 5,8-Ю"14

Вынос массы вещества за импульс Мии„, г 3,6-10"7 2,4-Ю'7

Эффективность ионизации т|, относительные единицы 7,5-10'7 1,1-Ю-6

Как видно из таблиц, для достижения одинакового ионного тока второй гармонике необходимо примерно в 5 раз меньше энергии. Это связано не только с ростом коэффициента поглощения материала мишени, но н с ростом

поглощения в самой плазме. С ростом плотности мощности (табл.9) эффективность ионизации резко возрастает с 4-10"7 до 7,5-10"7 для ?ч = 1064 нм и с 2-Ю"7 до 1,1-Ю"6 для Х2 = 532 нм. Как видно из таблицы, при большой плотности мощности излучение с Х2 = 532 нм почти в 2 раза эффективнее ионизирует пробу.

Несмотря на то, что энергетические затраты для Х2 уменьшились в 5 раз, вынос массы вещества за импульс для Х2 не сильно изменился ( с 2-10'7 г до 2,4-Ю"7 г) в отличие от увеличения выноса массы для Х\ (с МО"7 г до 3,6-10"7 г). При больших энергиях уменьшение выноса массы для по сравнению с выносом массы для Х2 приводит к увеличению абсолютной чувствительности метода в 1,5-2,0 раза. Регистрируемый за выстрел заряд <3„„от - величина, пропорциональная ионному току О,«,,, ~1, поэтому во втором эксперименте он увеличился с 8-Ю"15 Кл до 5,8-Ю"14 Кл.

Расчет концентраций показал, что отклонение в содержании элементов печени крысы при использовании = 1064 нм и Х2 = 532 нм находится в пределах погрешности прибора (ДОТ11=10-ь20 % в зависимости от концентрации). Это говорит о том, что использование Х2 = 532 нм не привело к уменьшешпо точности анализа.

Анализ масс-спектров показал, что при применении излучения с Х2 ~ 532 нм значительно (в 1,5-5 раз) уменьшилось количество многозарядных ионов за счет изменения энергетических характеристик, что благоприятно при расшифровке, идентификации и расчете масс-спектров. Увеличение точности анализа при расчете содержания элементов БП методом баланса с использованием Х2= 532 нм связано с этим фактором.Нарисунке 7 представлены фрагменты масс-спектров, полученных при ионном токе 1 = 2,5-Ю"12 А.

Рисунок 7

Масс-спектр БП (печепь) I = 2,5-10"и А, Я,1=1064 им

М/Е

Масс-спектр БП (печень) I = 2,5-10"" А, Я,2=532 им

к Относительное почернение

М/Е

2.7 Изучение миграции микроэлементов в органы экспериментальных животных ЛМС методом с использованием лазерного излучения с длиной волны %г = 532 им за иериод наблюдения от 2-х недель до 9-ти месяцев.

Анализ материалов, используемых в имплантатах показал, что одним из наиболее применяемых металлов в эндопротезировании является никель, однако незначительные концентрации этого элемента в организме могут вызывать токсическое действие. Поэтому миграция никеля из образцов чистого никеля и никелевого сплава, применяющегося в эндопротезировании была изучена в ходе длительного эксперимента на крысах.

В эксперименте использовался никель марки НП1 согласно ГОСТ 492-73 с содержанием никеля более 99,9 масс.%. Так как суммарное содержание примесных элементов в этом образце составляет менее 0,1 масс.%, то оно не определялось. Никелевый сплав, используемый в эксперименте, применяется в эндопротезах с керамическим покрытием. Приблизительный элементный состав сплава известен. Точный состав сплава был определен с помощью метода лазерной масс-спектрометрии с использованием X = 532 нм. Никель составляет основу этого сплава, примеси составляют Сг, Мо, 81, Ре, А1, Мп, Тт При проведении эксперимента также необходимо было оцешггь возможность миграции в органы животных примесей, входящих в состав. Имплантируемые образцы были выполнены в виде дисков. Толщина диска в центральной части была 1,5 мм, внешний диаметр 5 мм. Края дисков были закруглены. В качестве контроля использовались палочки овальной формы размером 3X5 мм и толщиной 1 мм, изготовленные из стекла марки ВС-3 ГОСТ 19808-86.

Исследование проводили на самцах белых беспородных крыс с начальной массой тела 200-230 г. Использовали 2 группы но 10 животных (контроль и опыт). Животные были помечены и находились в одинаковых условиях на стандартном рационе. Образцы чистого никеля, никелевого сплава и контрольного образца имплантировались подкожно в область спины. Длительность эксперимента составляла 2 недели, 1 месяц, 4 месяца, 6 месяцев и

) месяцев. Животных умерщвляли путем декапитации. Для проведения шериого масс-спектрометрического анализа (длина волны Л. = 532 нм, q ~ 1-108+4-108 Вт/см2) образцы отбирались согласно методике.

Анализ элементного состава печени, почек, легких и капсул контрольных 1 опытных животных показал, что в органы в значительных количествах мигрировал только никель (как из НП1, так и из сплава).

Средние значения содержат«! элементов в органах контрольной группы кивотных представлены в табл.4 (кроме органогенов).

Таблгща 4

вреднее содержание элементов в органах, капсуле контрольных животных

Элемент Содержание (масс.%)

почка печень легкое капсула

Р (2,2+0,3)-10"3 (8,3±1,5)-103 (1,14±0,17)-10~2 (2,81+0,48)-103

Ыа 1,0±0,12 (3,36±0,47)-10"1 1,92±0,25 1,47+0,17

Мд (1,27±0,18)-10'1 (1,81+0,25)-10"' О.ООЮ.^-Ю"1 (1,20+0,16)-10"1

А1 (3,15+0,57)-10° (2,75±0,50)-103 (1,91±0,29)-10"г (9,85+1,67)-10 3

(4,е±0,7)-102 (5,9±0,9)-102 (1,46±0,22)-10~2 (3,95+0,59)-10"2

Р 1,46+0,19 1,02+0,13 1,5+0,2 1,35+0,16

Б (7,7±1,0)-10'1 (7,1±1,0)-10~' (8,8±1,2)-10'1 (6,69+0,93)-10"1

С1 (9,95±1,40)-10"1 (5,6+0,8)-10"< 1,08+0,15 1,14±0,13

К 1,5+0,2 1,20±0,16 3,49+0,45 2,07±0,24

Са (3,77+0,57)-102 (2,0±0,3)-10~2 (3,55±0,53)-10*2 (2,18±0,32)-10"2

Сг -5,00-10"5 (9,8+2,1)-10"5 -5,00-10"5 (1,29±0,21)-10"3

V -5,00-10'5 (1,15+0,22)-10'4 -5,00-10"5 (4,16+0,79)-104

Мп (иэ+о.гзио-4 (1,78±0,34)-10ч <5-10"5 (1,39+2,36)-103

Ре (4,07+0,61) • 10"2 (5,41±0,81)-102 (6,2+0,9)-10"2 (3,25+0,48)-10"2

Со (8,9+1,7)-10"4 (7,3±1,4)-10"4 (1,00+0,18)-10"3 (1,57±0,26)-103

N1 <5-10"5 <5-10"5 <5-10"5 < 5-10"5

гп (5,01±0,Э5 МО"4 {1,01 ±0,17)-10"3 (2,90+0,55)-10 4 (1,22+0,23)-10ч

Си (7,14+1,5)-10"5 (1,46+2,79)ЮЦ <5-10"5 (1,45+0,27)-10-4

В таблицах 5,6,7 представлены данные по миграции никеля соответственно, в почки, печень, легкие. Количество никеля, мигрирующего в капсулы отображено в каждой таблице для удобства представления характера миграции.

Таблица.

Миграция никеля в почки и капсулу в масс.% относительно контроля

Срок 2 недели 1 месяц 4 месяца 6 месяцев 9 мес.

НП1-почки НП1-капсула (3,0±0,45)10"2 (1,710,24)10"' (1,4б±0,2)10"2 (1,810,27)10"2 < 5-10"5 (8,6+1,8)10"5 < 5-Ю"3 (2,710,5)10^ < 510"5 < 5-Ю'5

Спл.-почки Спл.-капсула (1,2710,2)10'' (4,3+0,65)102 < 5-10'5 < 5-Ю*5 < 5-Ю"3 < 5-Ю'5 <5-10'5 < 5-10"5 < 5-10"5 < 5-10"5

Из данных, представлешшх в таблице 5 видно, что никель, мигрирукици в почки, выводится из них приблизительно за 2-3 месяца. То, что по истечени: 2-х недель никеля в капсуле сплава стало меньше, чем в капсуле НП1, а в почка больше, говорит о том, что основная часть никеля из сплава вышла еще д окончания 2-х недель и перешла в почки, печень и легкие (табл.6,7). Из НГ11 капсулу миграция еще продолжалась (что и видно после 1 месяца эксперимента' Исходя из данных табл.5 видно, что чистый никель оказался для почек опаснее чем сплав.

Таблица

Миграция никеля в печень и капсулу в масс. % относительно контроля

Срок 2 недели 1 месяц 4 месяца 6 месяцев 9 месяцев

НП1-печень (8,811,6)103 (4,2+0,76) Ю"3 (7,611,4)10"4 (9,212,1)10"5 (3,010,5) Ю"1

НШ-капс. (1,710,24)10"' (1,810,27)10"г (8,611,8)10'5 (2,710,51)10"" < 5-10"5

Спл.-печень (1,4310,2)102 < 5-105 <5-10'5 < 5-10"5 < 5-Ю'3

Спл.-капс. (4,310,65)10"2 < 5-Ю"5 < 5-10"5 < 5-10"5 < 5-10"5

Из данных, представлешшх в таблице 6 видно, что миграция никеля и НП1 в печень происходит за более длительный период, чем в почки и легки« Показано, что при имплантации НП1 данный микроэлемент обнаружен в печен на уровне « 0,0003 масс.% после 9-ти месяцев наблюдения. Таким образо,\ печень является «депо» для никеля. Как и в случае с почками, из сплава никел

мигрировал еще до окончания 2-х недельного срока, поэтому на этом этапе эксперимента никель в печени не обнаружен.

Таблица 7

Миграция никеля в легкие и капсулу в масс. % относительно контроля

Срок 2 недели 1 месяц 4 месяца 6 месяцев 9 мес.

НШ-легкие НП1-капсула (1,740,23)10"' (1,7+0,24)10"' (4,52±0,8)103 (1,8±0,27)10'2 <5-10"5 (8,б±1,8)105 <5-10"5 (2,7±0,5)10-4 < 5-10"5 < 5-10"5

Спл.-легкие Спл.-капсула (2,3+0,3)10-' (4,3+0,65)10"2 < 5-Ю"5 < 5-10*5 < 5-Ю"5 < 5-Ю"5 < 5-10"5 < 5-Ю"3 <5-10'5 <5-10'5

Характер миграции никеля в легкие сходен с миграцией в почки. Показано, что шжеля мигрировало в 2-8 раз больше за первые 2 недели в легкие, чем в почки, но находился он там меньшее время. Мигрировавший из НП1 никель дольше находился в почках - около 2-3 месяцев (в отличие от 1-2 в случае с легкими).

2.8 Изучение миграции микроэлемептов из эндопротезов сетчатого типа (N¡-'11) методом лазерной масс-спектрометрии при проведении токсикологических исследований. В ходе проведения токсикологических исследований методом лазерной масс-спектрометрии было изучено влияние сетчатого эндопротеза никелида титана на микроэлементный состав органов и контактирующих тканей (капсулу) экспериментальных животных.

Образцы никелида титана были выполнены в виде согнутой в кольцо проволоки. Толщина проволоки была 0,5 мм, внешний диаметр кольца составлял 6 мм. В качестве контроля использовались стеклянные палочки овальной формы размером 3X5 мм и толщиной 1 мм марки ВС-3. Никелид титана и контроль имплантировались (по общепринятой методике) подкожно в область спины, длительность эксперимента - 2 месяца. У животных определяли фоновые показатели (массу тела, данные периферической крови, поведение,

психологическую реакцию, и т.д.); измерения проводились на протяжении всего эксперимента с недельной периодичностью. Для лазерного масс-спектрометрического анализа брались образцы печени, почек, легких, кишечника, а также окружавших имплантат капсул.

Элементный состав сплава определялся ЛМС методом с использованием А.1=1064 нм. Основой данного сплава являются "Л и N1. Этот сплав в исходном состоянии «аустенит» имеет объемно-центрированную кристаллическую решетку со структурой В2 (ао =0,301 — 0,302 нм),а также обладает почти 100% -м эффектом восстановления формы в определенном температурном интервале. Из всех элементов, входящих в состав этого сплава, наибольшую опасность для организма представляют никель и хром.

В таблице 8 представлены результаты исследования капсул и органов (предел обнаружения 5-10'5 массовых %).

Из данных таблицы видно, что:

1. Все органы имеют качественно идентичный элементный состав, где основу составляют Н, С, N и О.

2. Среднюю концентрацию составляют элементы К, Р, М^, Ыа, 8, С1, Бг Причем содержашге Р, Мё, С1, Б и Б! практически одинаково во всех органах и составляет, соответственно: Р«0,5-2; Мц^О, 1-0,4; СЫ),4-1,0; 8—0,4-1,0; БЫ),02-0,2 масс. %. В кишечнике и легких больше всего калия и натрия (-1-2 масс.%). Содержание калия в печени и почках находится на уровне 0,7-1,5; а натрия 0,2-0,8 масс.%. Элементный состав капсул незначительно отличается от состава органов. ,

3. Концентрация Бе, Са, Б, А1 незначительна. Причем их содержание в органах различно. Так, железа в печени, почках и легких содержится одинаковое количество («0,02-0,04 масс.%). В кишечнике и капсулах железа меньше («0,007-0,03 масс.%). Кальция больше всего содержится в кишечнике и легких («0,05-0,07 масс.%), а фтора - наоборот, в капсулах, печени и почках («0,003-0,03 масс.%). Алюминия менее всего содержится в

ч^лсмстшьш ьиьаш иргсшиа жшшшыл

после имплантации сплава (срок 2 месяца) Таблица 8.

Сод-е масс %. Эл-т Капсула Кишечник Печень Почки Легкие

Контроль Опыт Контроль Опыт Контроль Опыт Контроль Опыт Контроль Опыт

н,с,о,ы Основа Основа Основа Основа Основа

г (3,0±0,54) 10"3 (6,5±1Д7) 10"3 (1,0±0,18) ю-3 (1,4±0,25) 10'3 (9,8±1,76) ю-3 (3,1±0,56) 10'3 (3,5Ю,63) ю-3 (1,610,29) Ю'! (1,0+0,15) 10'2 (2,8+0,42) Ю'2

№ 1,69±0,22 1,2010,15 1,18±0,15 1,3410,17 (2,6010,36) Ю-1 (2,84±0,4) 10"' (7,24±1,0) 10"' (7,83±1,1) 10"' 1,6710,22 1,9510,25

М§ (2,910,43) 10"2 (9,0±1,35) 10'2 (1,52±0,21) 10'1 (1,77±0,25) 10'1 (4,25±0,б) 10'1 (2,33±0,33) 10"1 (1,36±0,19) 10"' (1,3310,18) 10"' (1,56±0,22) 101 (1,3510,19) 10"'

А! (9,011,62) 10"3 (1,2±0,18) 10'2 (1,2±0,18) 10^ (3,3±0,59) 10"3 (1,5±0,27) 10"3 (1,1±0,16) 10'2 (6,0±1,14) 10" (5,0±0,95) 10" (1,310,19) 10'2 (1,010,15) 10'2

(1,9+0,5) 10'1 (2,3210,32) 10"' (3,28±0,46) 10й (2,010,3) Ю'2 (1,9±0,29) ю-г (3,0+0,45) ю-2 (3,4±0,51) 10'2 (7,8+1,17) 10'2 (3,310,49) 10"2 (2,6±0,39) Ю'2

Р (1,0610,15) 10"1 (1,86+0,26) Ю-' 1,73±0,22 2,19±0,28 (5,7410,8) 10"' 1,21±0,16 1,63±0,21 (0,719±1,0) 10'1 1,4410,19 1,1610,15

Э (1,3010,18) 10"' (2,12±0,3) Ю"1 1,08±0,14 1,00±0,13 (2,35±0,33) 10"' (8,89+1,24) Ю-' (4Д6±0,58) 10"' (7,73±1,1) 10"' (9,1+1,27) 10"' (5,6210,79) 10"'

• С1 (2,7±0,38) 1С'1 (5,3510,75) 10" (9,3911,31) 10"1 (8,8511,24) Ю-' (1,07±0,15) Ю-1 (4,7Ю,66) Ю-' (5,45+0,76) 10"' (9,41±1,32) 10"' (5,9010,83) 10'1 1,05+0,13

К (1,92+0,27) 10"1 (4,32±0,6) 10"' 3,19±0,41 3,14±0,41 (7,50±1,05) Ю-1 1,6910,22 1,36±0,18 1,26±0,16 3,6910,48 5,81 ±0,75

Са (4,7±0,7) Ю'2 (3,5+0,52) 10'2 (7,011,05) 1С2 (7,1+1,1) ю-2 (1,4±0,21) 10"2 (1,1±0,16) Ю-2 (1,02±0,14) ю-' (1,310,19) 10'2 (5,5±0,82) Ю-2 (5,310,8) ю-2

Сг (3,78Ю,72) 10" (4,42±0,84) го" (7,85±1,65) 10"3 < 5-10'3 (8,77±1,84) Ю'! < 5-Ю'3 < 5-Ю5 < 5-Ю"3 <5-10"3 (1,0710,21) 10"

V (5,75±1,09) 10" (3,08±0,58) 10" < 5-го5 < 5-10-3 (8,3711,76) Ю-' (6,62±1,39) 10"3 < 5-Ю'3 (7,08±1,49) 10'3 < 5-10° < 5-10*3

Мп (6,0211,14) 10" (6,7311,28) 10" < 5-Ю"3 (7,63±1,6) 10"5 (1,13±0,21) 10" (7,88±1,65) 10'5 (9,35±1,96) 10'3 < 5-10'5 (9,61+2,02) 10"3 <5-10'3

Ре (7,3611,25) 10'3 (1,03 ±0,15) Ю'г (2,69±0,40) 10"2 (6,9811,17) 10"3 (1,710,25) 10* (3.2±0,48) тг (5,2+0,78) ю-2 (3,2±0,48) 10"2 (4,710,7) 10"2 (4,010,6) 10"2

Со (2,7610,52) 10" (5,39±1,02) 10" (4,36±0,83) 10" (4,20±0,80) 10" (8,36±1,59) 10" (7,39±1,40) 10" (1,0б±0,18) 10"3 (6,4511,23) 10" (4,9310,94) 10" (2,31Ю,44) 10"

№ < 5-10"5 < 5-10"3 < 5-Ю'3 < 5-Ю*3 <5-10"3 < 5-Ю"3 < 5-Ю'3 < 5-Ю'3 < 5-Ю'3 < 510'

га. (5,39±1,13) 10'3 < 5-Ю'5 (9,5612,00) 10"3 <5-10" (5,03±0,96) 10" (7,51±1,43) 10" (3,00±0,57) 10" (4,9810,95) 10" < 5-10'3 (7,5511,58) 10"3

Си <5-Ш-5 < 5-Ю"3 (9,83+2,06) 10"! (6,3211,33) 10"3 (3,98±0,76) 10" (3,4510,66) 10" (1,49±0,28) 10" (9,22±1,94) 10'3 (2,3710,45) 10" < 5-Ю*3

почках («0,0005-0,0006 масс.%), в остальных органах на уровне 0,001-0,01 масс.%.

4. Концентрация микроэлементов Сг, V, Мп,Со, N1, Zn, Си в органах находится на уровне от 0,00005 до 0,001 масс.%. Причем содержание Сг, V, Мл в капсуле значительно выше (~ 10"4 масс.%), чем в органах (~ 10'5 масс.%), содержание Zn и Си больше в органах, чем в капсуле. Содержание никеля находится на уровне следов < 5-10"5 масс.%.

5. Элементный состав органов опытных и контрольных животных идентичен, небольшое различие обусловлено только приборной погрешностью, а также возможной вариацией элементов в самих органах животных.

Таким образом, миграция элементов из имплантанта в капсулу и органы исследуемых животных не обнаружена на уровне 5-Ю'5 масс.%. Это согласуется с результатами изучения животных санитарио-химическими, морфологическими, гематологическими и другими методами исследования, где также не было отмечено существенных отличий между опытными и контрольными группами.

III. ВЫВОДЫ

1. Разработана методика безэталонного микроэлементного анализа биологических проб методом лазерной масс-спектрометрии с относительной чувствительностью 10'5 масс. %.

2. Разработана оптическая система для ионизации микроэлементов в биологических пробах с помощью лазера на алюмо-игтриевом гранате с длиной волны = 1064 пм и Х2 = 532 нм, диаметром пятна фокусировки 50 мкм и пропускной способностью 20 % и 40 % (соответственно, для Х2 и ?ч).

3. Разработана автоматизированная система микроденситометрирования для количествешюго и качественного анализа масс-спектров, позволяющая

сократить время расшифровки и повысить воспроизводимость и точность анализа.

4. Разработана методика приготовления биологических эталонов. Было показано, что при использовании лазера с длиной волны Х2 = 532 им, плотностью мощности излучения q = 1-Ю8 + 4-108 Вт/см2 улучшается точность количественного анализа за счет уменьшения в несколько раз в масс-спектрограммах двух- трех- зарядных ионов по сравнению с использованием лазера с длиной волны Я] = 1064 им.

5. Показано, что уменьшение плотности мощности лазерного излучения до q = 1-Ю8 Вт/см2 при Я.2 = 532 нм по сравнению с q = 2-Ю9 Вт/см2 для основной гармоники с = 1064 нм не уменьшает ионного тока и уменьшает вынос массы вещества за импульс. Рост эффективности ионизации при увеличении энергии излучения происходит за счет поглощения в самой плазме.

6. Исследованы пути миграции элементов га имплантатов, изготовленных из никеля и его сплава в капсулу и органы экспериментальных животных в течение срока от 2-х недель до 9-ти месяцев. При этом мигрирующий в органы никель быстрее всего выводится из почек и легких, а наиболее медленно из печени. Эти результаты согласуется с дашшми, полученными в результате токсикологических исследований.

7. Проведены исследования миграции микроэлементов из эндопротезов никелида титана в органы экспериментальных животных при токсикологических испытаниях. Миграция элементов, входящих в состав Ть № эндопротеза (№, Сг, Со, V) в органы и капсулы обнаружена не была. Эти данные согласуются с результатами морфологических, гематологических, биохимических методов исследования.

Работы, опубликованные по теме диссертации.

1. Б.И.Леонов, Н.Е.Беняев, Е.В.Макеев, В.Г.Лаппо. Лазерный масс-спектрометрический анализ медико-биологических проб с использование?, основной и второй гармоники лазера на ашомо-иттриевом гранате/ Медицинская техника - Москва - № 1 — 1999 - С.22-25.

2. Б.И.Леонов, Н.Е.Беняев, Е.В.Макеев, В.Г.Лаппо. Определение миграции элементов из эндопротезов сетчатого типа (№-'П) методом лазерной масс спектрометрии// Медицинская техника - 1999 - № 3 - С. 3-4.

3. Ю.И.Чергештов, А.А.Авагян, И.В.Матвейчук, Н.Е.Беняев, Е.В.Макеев Э.В.Макеева. Критер1Ш выбора и перспективы применения био- 1 синтетических трансплантатов (имплантатов) в челюстно-лицевой хирургии В кн.: Тез. докл. Респ. научно-практ. конференции - Нальчик - 2000 - 4.11 -С.83-85.

4. Е.В.Макеев, Н.Е.Беняев, А.А.Авагян, Ю.И.Чергештов, Ю.И.Денисов Никольский, И.В.Матвейчук, Э.В.Макеева. Применение метода лазерно! масс-спектрометрии для анализа элементного состава костной ткани и е синтетических аналогов// Сборник бномедицииских технологий - 2000 -Вып. 14,- С. 14-25.

5. Ю.И.Денисов-Никольский, И.В.Матвейчук, Э.В.Макеева, 10.И. Чергештос А.А.Авагян, Н.Е.Беняев, Е.В.Макеев. Принципы создшшя имплантациошш материалов с позиций современной биотехнологии// Сб. Патофизиология : современная медицина, мат-лы научно-практ. конференции. Москва - 2000 С.84-85.

Подп. в печать 30.10.00. Заказ № 297. Тираж 60 экз. Формат 60x84/16. Объем 2,5 п.л.

Москва. ВНИИИМ

Введение

Глава I. Методы микроэлементного анализа биологических проб и их применение при токсикологических исследованиях.

1.1 Спектрофотометрический метод

1.2 Атомно-абсорбционная спектрофотометрия

1.3 Эмиссионный спектральный анализ

1.4 Нейтронно-активационный метод анализа

1.5 Рентгеновская флуоресцентная спектроскопия

1.6 Масс-спектрометрический метод с искровым источником ионов

1.7 ИСП масс-спектрометрия

1.8 Масс-спектрометрический метод с лазерным возбуждением пробы

Глава П. Разработка экспериментальной установки для микроэлементного анализа биологических проб с лазерным источником ионов

2.1 Принципиальная схема работы энерго-масс анализатора лазерного с двойной фокусировкой

2.2 Разработка оптической системы для ионизации биологических проб излучением основной и второй гармоник лазера на алюмо-иттриевом гранате

2.3 Разработка автоматизированной системы количественного анализа масс-спектров

2.4 Выводы

Глава III. Исследование возможности безэталонного анализа биологических проб методом лазерной масс-спектрометрии с использованием первой и второй гармоник лазерного излучения на АИГ

3.1 Разработка методики подготовки биологических эталонов для элементного анализа

3.2 Влияние длины волны лазерного излучения на процессы испарения и ионизации биологических проб

3.3 Получение достоверных количественных данных в результате ЛМС анализа биологических проб

3.4 Лазерный масс-спектрометрический анализ биологического эталона

3.5 Выводы

Глава IV. Микроэлементный анализ биологических проб ЛМС методом при проведении токсикологических исследований имплантатов и других изделий медицинского назначения

4.1 Изделия медицинского назначения, контактирующие с организмом

4.2 Современные материалы, применяющиеся в имплантатах

4.3 Проведение токсикологических исследований различных материалов и изучение миграции микроэлементов в биологические ткани методом лазерной масс-спектрометрии

4.4 Элементный анализ биологической пробы с использованием основной и второй гармоник лазера на алюмоитгриевом гранате

4.5 Изучение миграции микроэлементов в органы экспериментальных животных JIMC методом с использованием лазерного излучения с длиной волны %i = 532 нм за период наблюдения от 2-х недель до 9-ти месяцев ЮЗ

4.6 Определение миграции микроэлементов из эндопротезов сетчатого типа (Ni-Ti) методом лазерной масс-спектрометрии при проведении токсикологических исследований

Развитие современной цивилизации остро ставит перед человечеством проблемы сохранения окружающей среды. В результате загрязнения почвы [1], воды [2] и атмосферы [3] в человеческий организм поступает огромное число вредных веществ через воздух, воду и продукты питания [4]. Наряду с соединениями органического и неорганического происхождения вредное воздействие на организм оказывают отдельные элементы, тяжелые металлы [5] такие, как свинец [6], кадмий [7], ванадий [8] а также йод [9], фтор [10], ртуть [11] и др.

Превышение допустимых норм содержания тех или иных микроэлементов в продуктах питания, воде, воздухе, а также различных предметах, контактирующих с человеком способно вызвать рост различных заболеваний [12].

Применяемые в медицине имплантируемые материалы из-за своего длительного контакта с организмом также способны оказывать вредное воздействие. Область применения имплантатов чрезвычайно широка -стоматология, ортопедия, сердечно-сосудистая, торакальная и пластическая хирургия, офтальмология. Прогресс в создании новых имплантатов стал возможен благодаря появлению обширной гаммы материалов с более совершенными свойствами. Уже нашли достаточно широкое применение силикон, тефлон, поликарбонаты, композиционные материалы, титан и специальные сорта нержавеющей стали, различные сплавы на никелевой и кобальтовой основе [13].

До начала 60-х годов полагали, что контакт имплантируемых материалов с организмом человека не представляет никакой опасности. Однако, в дальнейшем, опытами на животных было показано, что при контакте имплантатов с тканью могут возникать злокачественные новообразования - фибросаркомы, хондросаркомы и т.п. В литературе появились сообщения об опухолях, в той или иной степени связанных с наличием инородного тела в организме [14,15,16].

Па основе анализа литературных данных можно сделать вывод о высокой канцерогенности целого ряда металлов, прежде всего, никеля и хрома, мигрирующих из имплантата в организм человека. Причем миграция происходит не только в близлежащую область непосредственного контакта с имплантатом. В опытах на животных обнаружено накопление канцерогенных веществ в различных органах -печени, почках, легких и т.п. В зависимости от исследуемого материала, а также, условий проведения эксперимента эти металлы ведут себя по разному. Они могут накапливаться в различных органах, перераспределяться, приводить к образованию различного рода злокачественных образований, а также, постепенно выводиться из организма.

При решении вопроса о потенциальной опасности предлагаемых к применению в медицине материалов учитываются накопленные в токсикологии знания свойств элементов и химических соединений, их предельно допустимые концентрации в организме. Для постановки материалов и изделий медицинского назначения на производство они в обязательном порядке проходят испытания с определением санитарно-химических и токсикологических показателей [17]. Программа испытаний включает в себя имплантацию исследуемого материала экспериментальным животным и дальнейшее исследование состояния органов и обменных процессов в организме с помощью физиологических, биохимических, гематологических, гисто-химических и морфологических методов исследования [18]. Важной частью испытаний является количественное исследование миграции различных микроэлементов в органы и кровь.

Используемые в медицине и биологии различные методы микроэлементного анализа биологических проб: атомно-абсорбционный, эмиссионный, спектрофотометрический, а также масс-спектрометрический метод с ионизацией в индуктивно связанной плазме (далее- ИСП) требуют проведения трудоемких подготовительных операций, как правило предполагающих разрушение органической структуры биологической пробы путем мокрого или сухого озоления. Из-за возможных потерь и загрязнений в ходе подготовки проб нельзя получить полные данные о составе материала [19].

Количественная интерпретация результатов требует обязательного использования стандартных образцов, что в случае исследования многокомпонентных биологических объектов представляет серьезные трудности из-за отсутствия эталонов.

Указанные методы позволяют проводить только поэлементный анализ и для получения данных по всем элементам с требуемой чувствительностью необходимо сочетать несколько типов приборов.

Среди существующих инструментальных методов только эмиссионный спектральный и масс-спектральный позволяют определять широкий круг элементов одновременно. Эмиссионный спектральный метод обеспечивает в основном чувствительность анализа 10"5 г, что для современных исследований является недостаточным.

Высокочувствительный современный метод ИСП масс-спектрометрии позволяет получить количественные данные по всему составу образца (кроме органогенов), но для этого необходимо вводить эталоны для каждого элемента.

Метод лазерной масс-спектрометрии (далее-ЛМС) обладает высокими аналитическими характеристиками и абсолютной чувствительностью - 10"12 г. Кроме того, метод позволяет анализировать пробу одновременно по всем составляющим элементам и не требует специальной подготовки образцов [20, 21, 225.

Если для металлов, диэлектриков, геологических образцов и т.п. методика микроэлементного анализа вещества с помощью лазерной масс-спектрометрии разработана достаточно хорошо, что освещается в многочисленных публикациях как в нашей стране, так и за рубежом [21,23,24], то при анализе биологических проб (далее-БП) исследователи сталкиваются с трудностями. В работе [25] показано, что абсолютный и относительный пределы обнаружения при лазерном масс-спектрометрическом анализе проб органического происхождения составили, соответственно: 1 абсолютная чувствительность ~ 6-10" г;

•у относительная чувствительность ~ 10" масс.%.

Однако на практике чувствительность при анализе БП ЛМС методом далека от теоретической. В частности, при проведении безэталонного количественного анализа биологических проб [26] были достигнуты

Л А пределы обнаружения 10" - 10 массовых %. Этой чувствительности оказалось недостаточно для исследования миграции микроэлементов в органы животных, так как количество мигрирующего вещества обычно находится ниже этого предела.

Для увеличения чувствительности можно использовать более коротковолновое излучение - 2-ую гармоника лазера на алюмо-иттриевом фанате, активируемом неодимом (АИГ) с генерацией в видимой области спектра и длиной волны X = 532 нм [27]. Это позволит повысить чувствительность метода применимо к биологическим пробам и использовать его как один из инструментов для оценки потенциального воздействия тех или иных препаратов и изделий медицинского назначения на организм при решении вопроса об их использовании.

Целью настоящей работы является разработка высокочувствительного безэталонного элементного анализа биологических проб с помощью лазерной масс-спектрометрии и использованием излучения с длиной волны X = 532 нм, а также изучение миграции микроэлементов из имплантируемого материала в ткани и органы экспериментальных животных.

Научная новизна работы. В работе впервые:

- разработана установка, сочетающая в себе лазерный масс-спектрометр с двойной фокусировкой, лазер на алюмоиттриевом гранате с удвоенной частотой излучения и компьютерную систему обработки информации, которая позволяет проводить ЛМС анализ биологических проб с использованием излучения с %2 — 532 нм;

- проведен высокочувствительный безэталонный лазерный масс-епектрометрический анализ биологических проб с использованием излучения с длиной волны Х2 = 532 нм на масс-анализаторе с двойной фокусировкой ЭМАЛ-2;

- разработана методика приготовления биологического эталона с введенными добавками микроэлементов для количественного анализа БП с помощью ЛМС метода;

8 8 /

- показано, что при плотности мощности М0ч-4-10 Вт/см" точность безэталонного ЛМС анализа БП с помощью Ал = 532 нм повышается по сравнению с традиционно используемой длиной волны Х\ = 1064 в результате уменьшения в 2-8 раз количества 2-х, 3-х зарядных ионов;

- увеличена чувствительность ЛМС анализа БП (относительная до 10° масс. %) благодаря использованию лазерного излучения с длиной волны %2 ~ 532 нм;

- проанализированы параметры мишени и лазерной плазмы при безэталонном ЛМС анализе БП и использовании А,1 = 1064 нм, Х2 — 532 нм;

- разработана методика изучения миграции микроэлементов из имплантатов в ткани и внутренние органы экспериментальных животных посредством безэталонного количественного ЛМС анализа БП с использованием лазерного излучения с Х2 = 532 нм;

- с помощью разработанной методики изучены пути миграции микроэлементов из имплантата, изготовленного из никеля и никелевого сплава в ткани и органы экспериментальных животных в течение срока наблюдения от 2-х недель до 9-ти месяцев;

Практическая значимость работы состоит в том, что разработанный метод позволяет:

- проводить безэталонный анализ любых БП с относительной чувствительностью 10~5 масс. % без специальной подготовки проб (озоление, отделение мешающих элементов и др.), что приводит к значительному сокращению времени анализа, повышению его точности;

- исследовать миграцию микроэлементов из имплантата в ткани и внутренние органы экспериментальных животных с чувствительностью и точностью, достаточной для оценки их вредного воздействия на организм;

Результаты работы использованы при подготовке стандарта ГОСТ Р ИСО 10993.9-99 «Основные принципы идентификации и количественного определения потенциальных продуктов деградации» Приложение В

Некоторые методы определения концентрации металлов и других элементов в медико-биологических пробах».

По результатам работы также написан ряд научных статей.

Основные положения, которые выносятся на защиту

- методика безэталонного элементного ЛМС анализа биологических проб и определения миграции микроэлементов из имплантата в ткани и внутренние органы экспериментальных животных с использованием лазерного излучения с длиной волны %2 = 532 нм;

- результаты изучения изменения элементного состава тканей и внутренних органов экспериментальных животных в процессе миграции в них никеля из имплантата в течение срока наблюдения от 2-х недель до 9-ти месяцев.

Основные результаты работы:

1. Разработана методика безэталонного микроэлементного анализа биологических проб методом лазерной масс-спектрометрии с относительной чувствительностью 10~5 масс. %.

2. Разработана оптическая система для ионизации микроэлементов в биологических пробах с помощью лазера на аллюмоиттриевом гранате с длиной волны Х[ = 1064 нм и Х2 = 532 нм, диаметром пятна фокусировки 50 мкм и пропускной способностью 20 % и 40 % (соответственно, для Х2 и

3. Разработана автоматизированная система микроденситометрирования для количественного и качественного анализа масс-спектров, позволяющая сократить время расшифровки и повысить воспроизводимость и точность анализа.

4. Разработана методика приготовления биологических эталонов. Было показано, что при использовании лазера с длиной волны Х2 = 532 нм, плотностью мощности излучения q = МО8 * 4-Ю8 Вт/см2 улучшается точность количественного анализа за счет уменьшения в несколько раз в масс-спектрограммах двух- трех- зарядных ионов по сравнению с использованием лазера с длиной волны Х\ = 1064 нм.

5. Показано, что уменьшение плотности мощности лазерного излучения до ч = МО8 Вт/см2 при Х2 = 532 нм по сравнению с я = 2-109 Вт/см2 для основной гармоники с Х\ = 1064 нм не снижает ионного тока и уменьшает вынос массы вещества за импульс. Рост эффективности ионизации при увеличении энергии излучения происходит за счет поглощения в самой плазме.

6. С помощью разработанной методики ЛМС анализа биологических проб исследованы пути миграции элементов из имплантатов, изготовленных из никеля и его сплава в капсулу и органы экспериментальных животных в течение срока от 2-х недель до 9-ти месяцев. При этом мигрирующий в органы никель быстрее всего выводится из почек и легких, а наиболее медленно из печени. Эти результаты согласуется с данными, полученными в результате токсикологических исследований. 7. Проведены исследования миграции микроэлементов из эндопротезов никелида титана в органы экспериментальных животных при токсикологических испытаниях. Миграции элементов, входящих в состав Тл-№ эндопротеза (№, Сг, Со, V) в органы и капсулы обнаружено не было. Эти данные согласуются с результатами морфологических, гематологических, биохимических методов исследования.

В заключение автор выражает глубокую благодарность и признательность к.т.н. Н.Е.Беняеву за научное руководство и поддержку в работе, а также помощь в создании экспериментальной установки и проведении исследований. Также автор выражает глубокую благодарность к.м.н., заведующему лабораторией токсикологических испытаний

B.Г.Лаппо и к.м.н. вед.н.сотруднику Н.М. Перовой, за помощь, связанную с проведением экспериментов, в том числе с животными; ценные замечания по медико-токсикологическим аспектом работы, к.х.н.

C.Я.Ланиной, к.х.н. Л.В.Ивановой, Э.В.Игошиной, а также всем сотрудникам отдела 34 ВНИЕИМТ за доброжелательное отношение и поддержку. Автор благодарит В.Т.Тимошина и д.ф-м.н. С.М.Сильнова (МИФИ) за помощь при подготовке диссертации.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

1. Матвеев Ю.М., Прохоров А.Н. Проблемы экологического нормирования содержания химических соединений в почвах различных типов// Тез. докл. Между нар. Конф. «Пробл. Антропог. Почвообраз.», Москва , 16-21 июня, 1997. Т.З -М. - 1997 - С. 156-158.

2. Bruner М.А., Rao М., Dumont J.N., Hull М, Jones Т., Bantle J.A. Ground and surface water developmental toxicity at a municipal landfill: Description and weatlier-related variation// Ecotoxicol. and Environ. Safety 1998 - 39, N3- P. 215-226.

3. Онищенко Г. Как обеспечить безопасность пищевых продуктов в новых рыночных условиях?// Медицинский курьер № 3 (4) - 1997 - С.7.

4. Зуй М.Ф., Овчинникова С.А,, Ищенко В.Б., Набиванец Б.И., Сухан В.В. Сорбционно-фотометрическое определение суммы тяжелых металлов в природных водах// Укр. хим. ж. 64, 5-6 - 1998 - С.40-44.

5. Егорова Г.Л., Худолей В.В, Свинец в окружающей среде: опасность для здоровья детей и ее предупреждение (программа образовательного курса для студентов медицинских и биологических вузов)// Экол. Безопас. Жизнь 1998 - № 6 - С. 112-116.

6. Zaleski М. Sue, Cohen Michael В, Reproducibility assessment of PAPNET review: Abstr. 45th Aomi. Sci. Meet. Arner. Soc. Cytopathol., Boston, Mass. Nov. 4-8, 1997// Acta cytol. 1997 - 41 N5 - P. 1573.

7. Mochizuki Mariko, Ueda Fukiko, Hondo Ryo. Vanadium contents in organs of wild birds: Abstr. Int. Soc, Trace Elem. Res. Hum (ISTERH) 5th Int.

8. Conf., Lyon, Sept. 26-30, 1998// J. Trace Elem. Exp. Med. 1998 - 11 № 4 -P.431.

9. Moon Soojae, Kim Jungyeon. Iodine content of human milk and dietary iodine intake of Korean iactating mothers// Int. J. Food Sci. And Nutr. -1999 50 №3-P. 165-171.

10. Вильяме Д. Ф., Роуф Р. Имплантаты в хирургии. Пер. с англ. М., Медицина, 1978.

11. DalinkaМ.К. et all./ZRadiology. 1969. - Vol. 93 - P. 914.

12. Dupe V.E., Fisher D./;. Cancer. 1972. - Vol. 30 - P.1260.

13. Tayton K.L, Evings iV./v€ancer. 1980. - Vol. 45. - P.413.

14. Система разработки и постановки продукции на производство. Медицинские изделия. Госстандарт России. - Москва, 1994.

15. Сборник руководящих методических материалов по токсиколого-гигиештчесим исследованиям полимерных материалов и изделий на их основе медицинского назначения. Москва, ВНИИИМТ, 1987.

16. Rowe J., Steinness E. Determination of elements in coal fly ash by thermal and epithermal neutronactivation analysis/7. Talanta 1977 - V. 24 - P.433-439.

17. Арефьев И.M., Беняев Н.Е., Комлева A.A., Борисенкова Р.В., Луценко Л. А., Гвоздева Л Л. Методические рекомендации по применению энергомасс-анализатора лазерного ЭМАЛ-2. -М., ВНИИИМТ, 1985.

18. Быковский Ю.А., Неволим В.Н. Лазерная масс-спектрометрия. М., Эн ер гоатомиздат, 1985.

19. Buiiingame A.L.A., Dell D.H. Rüssel mass spectrometry// Aiial.Chem. -1982 V.52 -N 5 - P.363-410.

20. Козырев ЮЛ., Шарков Б.Ю. Введение в физику лазерной плазмы. М., МИФИ, 1980.

21. Оксенойд КГ. Автореферат диссертации на соискание ученой степени к.ф-м. наук. М., МИФИ, 1992.

22. Комлева A.A. Исследование и разработка методов лазерного масс-спектрометрического анализа для задач гигиены. Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва, ФНЦ МФ РФ им.Эрисмана - 1985.

23. Новые методы спектрального анализа // Под ред. С.В.Лонцих -Новосибирск: Наука 1983 - С. 195.

24. Митченков В.Т., Мянник Н.Э., Ней Ю.К., Сергеева Ж. В. Влияние нитратов и нитритов на токсичность и накопление свинца и кадмия в организме крыс .//Токсикологический вестник. 1996. - № 6. - С.23-26.

25. Методы определения микроэлементов в природных объектах// Под ред. А.И.Бусева М.: Наука - 1976 - С. 197.

26. Спектроскопические методы определения следов элементов// Под ред. Дж. Вайнфорднера М,: Мир - 1979 - С. 494.

27. Проблемы аналитической химии. Современные методы анализа микрообъектов и тонких пленок// Под ред. И. П. Ал им ар и на, Б.Д.Луфт -М.: Наука 1977 - С.306.

28. Найдина В.П., Терещенко А.Т. Спектральный метод определения микроэлементов в растворах биологических проб.//Космическая биология и медицина. 1972 - Т.6 - №5 - С.73-76.

29. Rao S.S., Borah К. Spectrophotometric determination of serum iron with 2-mtroso-l-naphtol-4-sulphomc acid// Indian J. Med. Ree. 1982 - N5 -P.619-623.

30. Гончарова А.Г., Ульянов А.Д. Определение содержания хрома в биологических объектах методом спектрального анализа. В кн.: Современные методы исследования в кинетике и эксперименте.

31. Чекотило В.М., Тороктин М.Д. Спектрографическое определение некоторых микроэлементов в биологических средах// Лабораторное дело 1970 - № 5 - С.284-286.

32. Брицке М.Э. Атом ио-абсорбционны й спектрохимический анализ М. Химия - 1982-С.224.

33. Dittrich К. Atomabsorptionsspectrometrie Berlin: Acad.-Vevl. - 1982 -S.225.41 .Loon T.C. Analytical atomic absorption spectroscopy: selected method -New York Acad. Press - 1980 - P.337.

34. Суворкина Т.К., Хайина Л.И. Определение концентраци микроэлементов в биологических образцах методом беспламенной атомно-абсорбционной спектрофотометрии. В кн.: Лабораторная диагностика Таллинн - 1983 - С.65.

35. Но г lick G. Atomic absorption, atomic fluorescence and flame spectrometry// Anal. Chem. 1982 - V.54-N 5 - P.276-293.

36. Мжелъская Т.Н., Борисова ТВ. Беспламенный атомно-абсорбционный анализ микроэлементов в биологических объектах// Лабораторное дело 1977 - Ш 10 - С.596-599.

37. Peters Н.Т., Kohler Н. Beterkungen zur direkten Flanmen-AAS-Bastimmung der spurelemente Cadmium, Cobalt and Clirom in biologishen Materials// Z. Bl. Pharm. 1982 - V. 121 - N 2 - S. 129-130.

38. Freeh W., Cedergren A., Cederberg G., Wessman T. Evalution of some critical factors affecting determination fo aluminium in blood, plasma, serum by electrothermal atomic absorption spectroscopy// Clin. Chem. 1982 -V.28-N 11-P. 2259-2263.

39. Fullay R.I., Lehann H.P. Flameless atomic absorption spectrophotometry of selenium in whole blood// Clin. Chem. 1982 - V.28 - N 7 - P 1448-1450.

40. Therele B.L.Tr, Drosche T.M., Dziuk I.W. Analysis for lead in undiluted whole blood by tantalum spectrophotometry// Clin. Chem. 1978 - V.24 -N 7 - P.1182-1185.

41. Favier A., Ruffieux D., Alcarai A., Maljournal B. Flameless atomic absorption assay of serum manganese// Clin. Chim. Acta 1982 - V. 124 -N2-P.239-244.

42. Osier O. Pre I Iw its W. A methodological comparison of hydride and carbon furnace atomic absorption spectroscope for the determination of selenium in serum// Clin. Chim. Acta 1982 - V.124 - N 3 - P. 277-291.

43. Stevens M.D., Mackenzie W.F., Anand V.D. A simplified method for determination of zinc in whole blood, plasma and erythrocytes by atomic absorption spectrophotometry// Biochem. Med. 1977 - V. 18 - N 2 -P.158-1Ö3.

44. Whitehouse R.C., Prasad A.S., Rabbani P.I., Cossak Z.T. Zine in plasma, neutrophils, lumphocytes and erythrocytes as determined by flameless atomic absorption spectrophotometry// Clin. Chem. — 1982 V.28 - N 3 -P.475-480.

45. Laung F.Y. Henderson A.R. Improved determination of aliminium, serum and urine with use of stabilized temperature platform furnace// CI im. Chem. 1982 - V.28 - N 10 - P. 2139-2143.

46. Stroop St.D., Helinek G., Green HL. More sensitive feameless atomic absorption analysis of vanadium in tissue and serum// Clin. Chem. 1982 -V.l - N 1 -P.79-82.

47. Завгородний В.И. Усовершенствованный метод экстракции микроэлементов// Врачебное дело 1973 - № 6 - С.125-126.

48. Т.Терек, Й.Ммка, Э.Гегуш. Эмиссионный спектральный анализ М. Мир- 1982-С.464.

49. Ohls К., Sommer P. Direct Analyse fester Proben mit der inductiv gekoppelten plasma Emissionsspektrometne bei honer Leistung. Fresenius ZU Anal. Chem. - 1979 -Bd.296 - S.241-246.

50. Бргщке М.Э. Атомно-абсорбционный спектрометрический анализ М.: Химия - 1982-С.224.

51. Карташев Е.Р., Штанъ A.C. Нейтронные методы непрерывного анализа состава вещества М. Атомиздат - 1978 - С. 159.

52. Кузнецов Р. А. Активационный анализ. Москва- Атом из дат - 1974 -С.343.

53. Harding-Barlow /., Rosan R.C. Application of the laser microprobe to the analysis of biological materials. In: Microprobe Analysis. (Ed. C.A.Anderson), John Wiley New York - 1973 - Chap. 14 - P.477-487.

54. Versieck Т., Hoste Т., Barbier F. Determination of molibdenum in human serum by neutron activation analysis Clin. Chim. Acta - 1978 - V.87 - N 1 -P. 135-140.

55. Алиев А. И., Дрынкин В.И., Лейпунская Д. И., Касаткин В.И. Ядернофизические константы для нейтронно-активационного анализа -М.: Атомиздат 1969 - С.326.

56. П.Шахманов В. А., Буравков С. В. Применение метода рентгеноспектрального локального микроанализа в биологии и медицине// Архив анатомии, гистологии и эмбриологии 1983 - Т 84 -В 4- С 95-107.

57. Burlingame A.L.A., Dell D.H. Russel mass spectrometry// Anal. Chem -1982 -V.52-N 5-P363-410.

58. Сысоев А.А., Чупахин M.C. Введение в масс-спектрометрию М.: Атомиздат - 1977 - С 302.

59. Tausen Т. А. Т., Witmen A. W. Spark source mass spectrometry in the research laboratories of an electronics industry// Z. Anal. Chem. 1981 - B.309 - N 4 - P. 262-266.

60. Ramendic G.I. A new model of vacuum discharge and the development of spark source mass spectrometry. In: Advances in mass spectrometry (Ed: Quavle A.) London - Heuden - 8 Son - 1980 - V.8A- P.408-413.

61. Карпов Ю.А., Алшшрин И.П. Новый этап в аналитической химии высокой чистоты// Ж-л Аналит. Химии 1979 - Т.34 - № 7 - С. 14021410.

62. Beske H.E., Hurlle A., Tochum K.P. Principles of spark source mass spectrometry// Z. Anal. Chem. 1981 - B.309 - S.258-262.

63. Ahearn A.T. Mass Spectrographic analysis of insulators using a vacuum spark positive ion sourse// Appl. Phys. 1961 - V.32 - P. 1195-1197.

64. Verbueken A., Mich ie Is E., Van Grieken R. Total analysis of plant material and biological tissue by spark source mass spectrometry//' Z. Anal. Chem. -B. 309 N 4 - 1981 - P.300-305.

65. Wolstenholme W.A. Analysis of dried blood plasma by spark source mass spectrometry// Nature 1964 - V.203 - P. 1284-1285.

66. Chastagner P. The determination of trace elemental impurities in organic materials by spark source mass spectrometry// Appl. Spectr. V.19 - N 1 -1965 - P.33-36.

67. Evans C.A., Morrison G.H. Trace element survey analysis of biological materials by spark source mass spectrometry// Anal. Chem. 1968 - V.40 -N 6 - P.869-875.

68. Крючкова О.И. Разработка масс-спектрометрического метода анализа растворов неорганических веществ.: Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук М., 1973 - С. 148.

69. Locke Т., Boase D.R., Smalldon K.W. The quantitative multielement analysis of human liver tissue by spark source mass spectrometry// Anal. Chem Acta 1979 - V.104 - P.233-244.

70. Vos L., Van Grieken R. Spark source mass spectrometry for trace analysis of diverse biological matrixes// Int J.M.S. Ion Phys. 1983 - V.47 - P.303-306.

71. Honig RE. Laser induced emission of electrons and positive ions form metals and semiconductors. Appl. Phys. Lett. - 1963 - vol.3 - P.8

72. Немчинов И.В. Стационарный режим движения нагреваемых излучением паров вещества при наличии бокового растекания//Прикл. матем. и механ. 1967 - Т.31 - №2 - С.300.

73. Аниышов С. И. и др. Действие излучения большой мощности на металлы. Ленингр., Наука, Лен и игр. Отд. - 1970 - С. 274.

74. Бойко В.А., Крохин О.Н., Склизков Г.В. Исследование параметров и динамики лазерной плазмы при острой фокусировке излучения на твердую мишень/Яр. Физ. Ин-та АН СССР 1974 - Т.52 - С 186-228.

75. Bernal E.G., Levine L.P., Ready J.F. Time-of-flight mass spectrometer for investigation laser with solids/'/Rev. Sci. Instrum. 1966 - vol.37 ----- P938-941.

76. Newbury D.E., Simons D.llSIMS-IV Proc.4ül Int. Conf. Berlin. 1984. P. 101.

77. Ruckman T.C., Davey A.R., Clarke N.S. LIMA: a novel laser induced ion mass analyser. London 1984 - P.33 (AMRE Report / Great Britain Atomic energy authority. Atomic Weapons research establishment, 2/84).

78. WechsungR, Hillenkamp F., Kaufmann R., Nitsche R., Unsolt E., Vogt H. Laser Microprobe Mass Analyzer LAM MA// Microscópica Acta 1978 -Suppl.2 P.281-284.

79. Kaufmann R. Hillenkamp F., Nitsche R., Schuremmn N., Wechsimg R. The laser microprobe mass analyser (LAMMA): Biomedical applications// Microscopica Acta Suppl. 2 - 1978 - P.297-300.

80. Surkyn P., Adams F. Laser microprobe mass analysis of glass mieroparticles// J. Trace and Microprobe Techniques V.l - N1 - 1981 -P.79-114.

81. Hillenkamp F., Unsold E., Kaufmann R., Nitsche R. Laser microprobe mass analysis of organic materials Nature (London) - 256- 1975 - P.119-123.

82. Kaufmann R., Hillenkamp F., Nitsche R., Schuremann N., Unsold. E. Biomedical application of laser microprobe analysis// J. Microscop. Biol. Cell. 1975 - V.22 - P.389-395.

83. Kaufmann R., Hillenkamp F., Wechsung R. Laser microprobe mass analysis// ESN- European Spectroscopy News 20 (1978) - P. 41-43.

84. Kaufmann R., Hillenkamp F., Wechsung R. The Laser microprobe Mass Analyser (LAMMA): A new instrument for biomedical microprobe analysis// Med. Progr. Technol. 6 ( 1979) - P. 109-114.

85. Hillenkamp F. Laser desorption techniques of nonvolative organic substances// Int. J.M.S.I. Phys. 1982 - V.45 - p.305-313.

86. Deynover Eric, Van Grienen Reue, Adams F., Natush D.F.S. Laser microprobe mass spectrometry. Basic principles and perfomance characteristics/./ Anal. Chem. 1982 - V.54 - P.26-28.

87. Surkyn P., Adams F. Laser microprobe mass analysis of glass rnicroparticles/7 J. Trace and Microprobe Techniques V. 1 - N 1 - 1981 -P. 79-114.

88. Feigl P., Schneler B., Hillenkamp R. Lamma 1000 A new instrument for bulk microprobe mass analysis by pulsed laser irradiation// Int. J.M.S.I. Phys.- 1983 -V.47-P.15-18.

89. Heinen H.J., Meier S., Vogt H, Wechsimg R. LAMMA-1000, a new laser microprobe mass analyser for bulk samples// Int. J.M.S.I.Pliys. 1983 -V.47 - P. 19-22.

90. V. Bokelmann, B. Spengier, R. Kaufmann, "Dynamical parameters of ion ejection and ion formation in matrix-assisted laser desorption/ionization'7/Europ. Mass Spectrom. 1995 - N1 - P. 81-93.

91. Rechmann P., Tourmann J.L., Kaufmann R. Laser Microprobe Mass Spectrometry (LAMMS) in dental science: Basic principles, instrumentation and application.Proc. Lasers in Orthopedic, Dental and Veterinary Medicine// SPIE 1991 - Vol. 1424 - P.106-115.

92. Hinz KP, Kaufmann R, Spengier B . Laser-induced mass analysis of single particles in the airborne state// Anal. Chem. 1994 - V. 66 - P. 2071-2076.

93. Tourmann JL, Kaufmann R Biopersistence of the mineral matter of coal mine dusts in silicotic human lungs: is there a preferential release of iron?// Environ Health Perspect 102:(Suppl.5) 1994 - P.265-268.

94. Rechmann, P., Tourmann, J.L., Kaufmann, R. Laser microprobe mass spectrometric (LAMMS) analysis of amalgam tattoos of the human oral mucosa.Innov // Technol. Biol. Med. 1990 - Vol. 11 - N Special 1 - P. 5160

95. Eloy J.F. Application of laser ion source to the analysis of solids using mass spectrometry In: A.Cornu (Ed.) Press University of Grenoble, France - 1975 - Chap.9 - P.381.

96. Бусыгин A.M., Улъмасбаев Б.Ш. Лазерный источник ионов к масс-спектрометру МИ-1309/7Приборы и техника эксперимента 1978 -Вып.1 - С. 164-167.

97. Dumas J.L. Etude de la photoionisation des gibles meatallique en vue d'application a la spectrometrie de masse//Thesis University of Grenoble, France, December 1970 - P. 141.

98. Захаров В.П., Протас И.М., Чу гаев В.Н. Масс-спектрометрическое исследование плазмы, возникающей при распылении ферритов излучением ОКГ//Журн. техн. Физ. 1971 - Т.41 - С. 1296-1298.

99. Быковский Ю.А. и др. Высокопроизводительный лазерный источник ионов с плазменной фокусировкой для масс-спектрального анализа твердых тел/УПриборы и техника эксперимента 1977 - Вып.2 - С. 163166.

100. Брюханов А.С., Борискин АЛ., Смиян О.Д. Кружков А.Г. Аналитические возможности лазерного энергомасс-анализатора

101. ЭМАЛ-2 при исследовании твердых веществ. В кн: Тезисы докладов 3-й Всесоюзной научно-технической конференции по масс-спектрометрии -Л., АН СССР 1981 - С.ЗЗ.

102. Зайдель А.Н. Ошибки измерений физических величин. Ленинград -Наука - 1974 г.

103. Рябинович С.Е. Погрешности измерений. Ленинград - Энергия -1978 г.

104. И.Б.Пейсахсон, Т.А.Черевко. Влияние хроматических аберраций на концентрацию энергии в изображении осевой точки. Опт.-мех. Пром-сть 1986 - № 11 - С.33-35.

105. Боря Макс, Вольф Эмиль. Основы оптики. Москва, Наука - 1973 г.

106. Рамендик Г.И.ПЖурн. аналит. Химии 1983 - Т.38 - №11 - С.2036.

107. Бойцов A.A.//Ж. прикладной спектроскопии 1982 - Т.37 - №1 - С.5.

108. Захаров Ю.Н., Басков B.C., Палладии М.Н.ПЗаводск. лаборатория -1983 Т.39 - №8 - С.964.

109. Beynon J.H., Jones D.O., Cooks R.G.//Anal & Chem 1985 - V.47 - N 11- P.1734.

110. Rademacher /,., Berke H.E., Holzbrecher Я, Maeckelburg D./Tnt. J. Mass Spectrom. Ion. Phys 1986 - V.20 - P.333.143. bouter G.I., Buijserd A.NJ/Ы. J. Mass Spectrom. Ion. Phys 1983 -V.50-N3-P.245.

111. Ramendik G., Makulov N., Savlnova E. Et al./fki: 7th Chehoslovak spektroscopie confirence and VIII-th CANAS 1984 - V.l - P.77.

112. Рамендик Е.И., Хромое AJO.//Журнал аналит. химии 1988 - Т.26 -№15 - С.224.

113. Е.Б.Бабский, А.А.Зубков, Е.И.Косицкий, Б.И.Ходоров. Физиология человека Москва, Изд-во «Медицина» - 1966.

114. Ермаченко Л.А. Атомно-абсорбционный анализ в санитарно-гигиенических исследованиях. Москва - 1997 - С.61.

115. РедиДж. Действие мощного лазерного излучения. М., Мир, 1974.

116. В.В.Тучин. Оптика биотканей: основы лазерной диагностики и дозиметрии// Медицинская Физика ~1997 № 4 - С.64-75.

117. Раыендик /'.//. Манзон Б.М. и Тюрин ДА. Квазиравновесная модель образования ионов в искровой и лазерной масс-спектромет}эи и/Журнал Аналитической Химии Том XLIV - Вып.6 - 1989.

118. Раыендик Г.И. Роль конкуренции и взаимного дополнения трех способов ионизации в развитии масс-спектрометрических методов анализа твердых тел. В кн.: 3-я Всесоюзная научно-техническая конференция по масс-епектрометрии Л.: Изд-во АН СССР - 1981 -С.13.

119. Раыендик Г.К, Манзон Б.М., Тюрин ДАЛЖурн. Аналит. Химии -1989 т.44 - №6 - С.996.

120. Чупахин М.С., Крючкова О.И., Раыендик Г.И. Аналитические возможности искровой масс-спектрометри и М.: Атомиздат - 1972 -С. 224

121. Масс-спектрометрический метод определения следов: Пер. с англ ./Под ред. М.С.Чупахина. М.: Мир 1975 - С.453.

122. Быковский Ю.А., Журавлев Г.И., Белоусов В.И. и ф.//Физика плазмы. 1978. - Т.4 - №2 - С.323.

123. Файнберг B.C., Раыендик Г.И. О возможности описания с помощью квазиравновесной модели относительного выхода вторичных ионов в масс-спектрометрии.//Журнал Аналит. Химии 1991 - Т.46 - Вып. 2 -С.241-252.

124. Williams P. HAppl. Suit. Sei. 1982. V. 13. №1-2- Р.241.

125. Blaise G., Nourtier A. //Surt. Sei. 1979. V. 90. №2. P.495.

126. Yu M. L, Lang N. D. //Nucí. Inst. And Meth. Phys. Res. 1986. V. 14. № 4-6 P.403.

127. Yu M. L., Mann К. II Phys. Rev. Lett. 1986. V. 57 № 12. P. 1476.

128. Shroeer J.M., Rhodin T.N., Bradlv R.C. //Sort. Sci. 1973 - №3 - P.571.

129. SigmundP. //Phys. Rev. 1969- V. 184 - №2-R383.

130. Черепки В. Т. Ионный зонд. Киев - Наук.думка - 1981 - С. 238.

131. Andersen С.А., HintorneJ.R. //Anal. Chem. V.45 - № 8 - P. 1421.

132. Литовченко В.Г. //Вторичная ионная и ионно-фотонная эмиссия. Харьков, ХГУ 1980 - С. 17.

133. Venkcitasiibramanicm V.S., Swaminanthan S., Rajagopalan P.Т. et al. //Int. J. Mass Spectrom. And Ion Phys. 1977 - V.24 - № 2 - P.207.

134. Vos L. Van Grieken R. //Int. J. Mass Spectrom. And Ion Proc. -1983/1984 V.55 - № 3 - P.233.

135. Vos L, Van Grieken R. //Fr. Z. Anal. Chem. 1985 - B.321 - № 1 - S.32.

136. FloyJ.E. HI. Phys. 1984 - Y.45 - № 2 - P.265.

137. Okutany Т., Shitmzy R. //Swurt. Sci. 1979 - V.88 - № 2-3 - P.51L.

138. MacDonald R.J. //Surf. Sci. 1978- V.75 - №1 - P.155L.

139. ArlmghausH., Bispinck //. //Surt. Sci. 1983 - V.134 - №3 -P.567.

140. Haas U., Wieser P., Wurster R. //Fr. Z. Anal. Chem. 1981 - B.308 - № 3-S.270.

141. Surkin P., Adams F. //J. Trase Microprobe Techn. 1982 - V.l - № 1 -P.79.

142. Beusen KM., Surkin P., Gijbels R., Adams F. //Spectrochim. Acta 1983- V.38 B. № 5 - 6 - P.843.

143. Adams F. //Phylos. Trans. Roy. Soc. (London) 1982 - V. 305 - № 1491 -P.509.

144. Beusen KM., Surkin P., Gijbels R., Adams F. //Spectrochim. Acta, 1983 -V. 38B-№5-6-P.843.

145. Рамеидик Г.И., Крючкова О.И, Держиев В.И. и др. //Докл. АН СССР- 1979 Т.245 - № 5 - С. 1166.

146. Мчедлидзе Т.Р., Крючкова О.И, Рамеидик Г.И. //Получение и анализ чистых веществ. Горький: Изд-во ГГУ 1984 - С.42.

147. Рамендик Г.И., Тюрин Д.А., Крючкова О.К, Черноглазова Г.И. /УЖурн. Аналит. Химии 1985 - Т.40 - № 7 - С. 1210.

148. Ramendik G.I., Manzon В.М., Tyurin LIA. et ¿//.//Talanta 1987 - V. 34 -№1-P. 61.

149. Оксенойд К.Г., Рамендик Т.Н., Сильное СМ., Сотниченко Е.А. Кинетика образования ионов при лазерном масс-спектрометрическом анализе//Журн. Аналит. Химии 1990 - Том 45 - Вып.5 - Стр. 858 -871.

150. Сильное С.М. Лазерная плазма на поздних стадиях разлета. Дисс. на соискание доктора ф.-м. н. М.: МИФИ 1988.

151. Оксенойд К.Г., Рамендик Г.И., Сотниченко Е.А., Андрианова E.H., Пятахин В. И. Методика количественного элементного анализа порошкообразных геологических проб на лазерном масс-спектрометре//Журн. аналит. химии 1990 - Том 45 - Вып.6 - Стр.1197- 1203.

152. Крючкова О.И., Тройская С.И., Хромов А.Ю. В кн.: Третья Всес. Конф. по м асс-с пе к тро м етр и и. Тез. Докл. Л. 1981 - С. 17.

153. Потапов М.А., Чупахин U.C., Этингер А.Г., Фалин В.А./ГК. Аналит. Химии -1983 Т.38 - №4 - С.592.

154. Крючкова О.И., Тройская С.И., Хромов А.Ю. Влияние основы на аналитические характеристики искровой масс-спектрометрии. В кн.: 3-я Всесоюзная научно-техническая конференция по масс-спектрометрии- Л., Изд-во АН СССР 1981 - С.17.

155. Феррар X. Соответствие масс-спектра составу твердого образца. В кн.: А.Ахерна. Масс-спектрометрический метод определения следов -Пер. с англ. Под ред. М.С.Чупахина М. Мир - 1975 - С.453.

156. Налимов В. В. Применение математической статистики при анализе вещества М.: Физматгиз - 1960 - С.431.190. ISO 5832-1-97.

157. Ulepeno K.M. Результаты спектрального определения металлов в тканях человека, граничащих с эндопротезом К.М.Сиваша.//Медицинская техника 1998 - №1 - С.40-42.192. ISO 5832-4-96.193. ISO 5832-12-96.194. ISO 5832 3 - 96.195. ISO/DIS 13782-95.

158. Dinger R., Rohr К. Weber H./iLaser and Part Beams. 1986. - 4 - № 2 -P.239.

159. Грушко Я.M. Вредные неорганические соединения в промышленных сточных водах. Ленинград, Химия, 1979.204. ГОСТ 19808-86.

160. Б.И.Леонов, Н.Е.Беняев, Е.В.Макеев, В.Г.Лаппо. Определение миграции элементов из эндопротезов сетчатого типа (Ni-Ti) методом лазерной масс-спектрометрии// Медицинская техника 1999 ■ № 3 -С.3-4.

161. Моет L., Jak и bows ki N. Double-Focusing Mass Spectrometers in ICP-MS// Analytical News & Features April 1 - 1998.